CN107831313A

CN107831313A - 立显蛋白电泳预制胶片剂的制备及应用

Info

Publication number: CN107831313A
Application number: CN201710958867.1A
Authority: CN
Inventors: 陈华云; 刘淑园; 邓利琼; 张天海
Original assignee: GUANGZHOU HESHI BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: GUANGZHOU HESHI BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2017-10-16
Filing date: 2017-10-16
Publication date: 2018-03-23

Abstract

本发明公开了一种立显蛋白电泳预制胶片剂制备及应用，包括显色液和预制胶片剂，所述显色液包括异硫氰酸基团（—NCS）和含有异硫氰酸基团（—NCS）的色素，所述预制胶片剂包括分离胶片和浓缩胶片，所述分离胶片包括一定浓度的双丙烯酰胺溶液、SDS、Tris、海藻糖，所述浓缩胶片包括一定浓度的双丙烯酰胺溶液、SDS、Tris、海藻糖。运用本发明的蛋白电泳过程中无需计算繁琐的试剂用量且可避免接触有毒试剂（丙烯酰胺）；分离胶注板后不需用水压胶及无需等凝胶即可注入浓缩胶，极大缩短了配胶的时间；显色液可以和大部分蛋白电泳凝胶配套使用；预制凝胶也可以和常规的染色脱色液配套使用；无需染色，脱色繁琐的实验步骤，跑完胶即可在紫外光源下看到条带。

Description

立显蛋白电泳预制胶片剂的制备及应用

技术领域

本发明涉及蛋白质电泳领域，特别涉及一种蛋白质电泳分析用的立显蛋白电泳预制胶片剂的制备及应用。

背景技术

聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条区带。SDS是一种阴离子表面活性剂，能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。因此，各种蛋白质SDS复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响。这种电泳方法称为SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(简称SDS—PAGE)。由于SDS PAGE可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以忽略不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度。但是目前的SDS PAGE有以下弊端：现在常用的染色方法如考马斯亮蓝染色法、银染法等，需要配制凝胶，而且需要在蛋白质的凝胶电泳结束之后对凝胶进行固定、染色、脱色等繁琐处理才能观察，耗时长，不可能快速知晓实验结果，也不便于在实验过程中观察结果。且固定、染色、脱色需要大量试剂（尤其是有机溶剂）浸泡凝胶，使用量很大，增加了对环境的污染。对于以上情况，现有的改进方法有：1) 使用微波炉加热以加快反应速度；2) 调整染色液配方以提高染色效率；3）预制胶等。但是以上的方法都没有从本质上改变凝胶电泳实验中蛋白质配胶、染色步骤繁琐、污染严重等问题，而且染色仍然必须在电泳结束后才能进行。所以，需要一种同时具备快速配制及无需染色的蛋白电泳凝胶。

发明内容

本发明的目的是提供一种立显蛋白电泳预制胶片剂的制备及应用，能够解决现有技术配胶、染色步骤繁琐、污染严重等问题。

为实现上述目的，本发明提供了一种蛋白质电泳分析用的显色液，包括异硫氰酸基团（—NCS）和含有异硫氰酸基团（—NCS）的色素，其特征在于：其在蛋白质电泳分析中的操作方法为：所述显色液与待测蛋白混匀，70-100℃下反应，形成有色蛋白质样品液，从而实现对蛋白质的显色，从而无需染色，脱色繁琐的实验步骤。

更优选的，所述显色液在蛋白质电泳分析中的操作方法为：所述显色液与待测蛋白以1：1比例混匀，85℃下反应，加热10min，形成有色蛋白质样品液。

优选的，所述显色液为一种碱性液体。

优选的，所述显色液在蛋白质电泳分析中可与常规蛋白电泳凝胶配套使用。

本发明还提供了一种蛋白质电泳分析用的预制胶片剂，包括分离胶片和浓缩胶片。

优选的，所述分离胶片包括6%-15%双丙烯酰胺溶液、1%-10%SDS、1.0-1.5M Tris、3%-10%海藻糖。

更优选的，所述分离胶片是由8%双丙烯酰胺溶液、10%SDS、1.5M Tris（pH8.8）、6%海藻糖混合压片而成。

优选的，所述浓缩胶片包括1%-5%双丙烯酰胺溶液、1%-10%SDS、0.5-1.0M Tris、3%-10%海藻糖。

更优选的，所述浓缩胶片是由5%双丙烯酰胺溶液、10%SDS、1.0M Tris（pH6.8）、6%海藻糖混合压片而成。

优选的，所述预制胶片剂在蛋白质电泳分析中的操作方法为：将分离胶片、浓缩胶片分别溶于灭菌纯水，振荡至完全溶解；向分离胶液中加入一定浓度的APS、TEMED，混匀后注胶；紧接着向浓缩胶液中加入一定浓度的APS、TEMED，混匀后注胶，插上合适的梳子。

更优选的，所述预制胶片剂在蛋白质电泳分析中的操作方法为：

①将分离胶片溶于6ml灭菌纯水，振荡至完全溶解；

②将浓缩胶片溶于4ml灭菌纯水，振荡至完全溶解；

③向分离胶液中加入10ul 10% APS、2ul TEMED，混匀后注胶；

④紧接着向浓缩胶液中加入4ul 10% APS、1ul TEMED，混匀后注胶，插上合适的梳子。

因此，无需计算繁琐的试剂用量且可避免接触有毒试剂（丙烯酰胺）。

优选的，预制胶片剂在蛋白质电泳分析中可与常规的染色脱色液配套使用。

优选的，所述预制胶片剂的形状不限，片剂由不透光的材质真空包装。

本发明最后提供了一种立显蛋白电泳预制胶片剂，包括如上所述的显色液及预制胶片剂。

优选的，立显蛋白电泳预制胶片剂在蛋白质电泳分析中可与市面上所有电泳缓冲系统兼容。

更优选的，立显蛋白电泳预制胶片剂在蛋白质电泳分析中可与市面上所有电泳缓冲系统兼容（包括：Tris-Gly-SDS、Tris-MOPE、Tris-MES、Tris-HEPES、Tris-Tricine等）。

本发明的有益效果在于：

①无需计算繁琐的试剂用量且可避免接触有毒试剂（丙烯酰胺）。

②分离胶注板后不需用水压胶及无需等凝胶即可注入浓缩胶，极大缩短了配胶的时间。

③兼容性好：适用于市面上所有电泳缓冲系统（包括：Tris-Gly-SDS、Tris-MOPE、Tris-MES、Tris-HEPES、Tris-Tricine等）；显色液可以和大部分蛋白电泳凝胶配套使用；预制凝胶也可以和常规的染色脱色液配套使用。

④无需染色，脱色繁琐的实验步骤，跑完胶即可在紫外光源下看到条带。

附图说明

图1是本发明中预制胶片剂的其中两种形态；

图2是使用本发明进行电泳的蛋白质凝胶电泳完成后的该凝胶上的蛋白质电泳条带图，其中，泳道2、3 为对于同一蛋白质样品使用本发明的泳道，泳道3的浓度是泳道2的浓度的2倍；泳道1作为对照，是未使用本发明中染色液显色的泳道。该图为电泳后使用凝胶成像仪在紫外光源下实拍的照片，荧光亮度与蛋白质物质的量成正比。

图3是本发明中的显色液与常规SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳配套使用的结果与实施例1的结果对比图；

图4是本发明中的预制胶片与常规染色脱色液配套使用的结果与实施例1的结果对比图；

图5是本发明与常规SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳比较。

具体实施方式

本发明提供了一种立显蛋白电泳预制胶片剂的制备及应用，所述立显蛋白电泳预制胶片剂包括显色液与预制胶片剂，所述显色液为一种包括异硫氰酸基团（—NCS）和含有异硫氰酸基团（—NCS）的色素的碱性液体；所述预制胶片剂包括分离胶片与浓缩胶片。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明：

实施例1 立显蛋白电泳预制胶片剂在蛋白电泳分析中的具体操作步骤

1.将电泳板装好，待用；

2.样本处理：显色液和待测蛋白以1：1比例混匀，85℃下反应，加热10min，形成有色蛋白质样品液；

3.将分离胶片溶于6ml灭菌纯水，振荡至完全溶解；

4.紧接着将浓缩胶片溶于4ml灭菌纯水，振荡至完全溶解；

5.向步骤3中的分离胶液中加入10ul 10% APS、2ul TEMED，混匀后注胶；

6.向步骤4中的浓缩胶液中加入4ul 10% APS、1ul TEMED，混匀后注胶；

7.插上合适的梳子；

8.放置大约30min至胶完全凝结后，点样（步骤2处理完毕后的有色蛋白质样品液）；

9.电泳：180V，40min即可跑完；

10.跑完后将胶取出放在电泳凝胶成像仪中拍照观察，得到图2。

注：电泳缓冲系统为：Tris-Gly-SDS电泳缓冲系统。

实施例2 本发明与常规SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳比较，如图5

实施例3 本发明中的显色液与常规SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳配套使用

步骤为：

1.将电泳板装好，待用；

2.样本处理：显色液和待测蛋白A以1：1比例混匀，85℃下反应，加热10min，形成有色蛋白质样品液；

3.分离胶配制注胶后，用水压胶，并室温放置约30min（至完全凝固）；

4.浓缩胶配制注胶后，插上合适的梳子，并室温放置约30min（至完全凝固）；

5.点样（步骤2处理完毕后的有色蛋白质样品液），跑胶；

6.跑完胶后将胶取出放在电泳凝胶成像仪中拍照观察结果，如图3，其中泳道1为本实施例的结果；泳道2为本发明实施例1的结果，泳道1与泳道2使用相同的蛋白样本。

因此，本发明中的显色液可与常规SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳配套使用。

实施例4 本发明中的预制胶片与常规染色脱色液配套使用

步骤为：

1.将电泳板装好，待用；

2.样本处理：上样bufffer和待测蛋白B以1：1比例混匀，85℃加热10min；

3.将分离胶片溶于6ml灭菌纯水，振荡至完全溶解；

4.紧接着将浓缩胶片溶于4ml灭菌纯水，振荡至完全溶解；

7.插上合适的梳子；

8.放置大约30min至胶完全凝结后，点样（步骤2处理完毕后的蛋白质样品液）；

9.电泳（可根据实际情况改变电泳条件）；

7.使用常规染色脱色液对凝胶进行染色、脱色等步骤；

8.肉眼观察结果，如图4，泳道1为本实施例的结果，泳道2为实施例1的结果，泳道1与泳道2使用相同的蛋白样本。

因此，本发明中的预制胶片可与常规染色脱色液配套使用。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种蛋白质电泳分析用的显色液，包括异硫氰酸基团（—NCS）和含有异硫氰酸基团（—NCS）的色素，其特征在于：其在蛋白质电泳分析中的操作方法为：所述显色液与待测蛋白混匀，70-100℃下反应，形成有色蛋白质样品液。

2.如权利要求1所述的显色液在蛋白质电泳分析中与常规蛋白电泳凝胶兼容配套的应用。

3.一种蛋白质电泳分析用的预制胶片剂，其特征在于：包括分离胶片和浓缩胶片。

4. 如权利要求3所述的预制胶片剂，其特征在于：所述分离胶片包括6%-15%双丙烯酰胺溶液、1%-10%SDS、1.0-1.5M Tris、3%-10%海藻糖。

5. 如权利要求3所述的预制胶片剂，其特征在于：所述浓缩胶片包括1%-5%双丙烯酰胺溶液、1%-10%SDS、0.5-1.0M Tris、3%-10%海藻糖。

6.如权利要求3所述的预制胶片剂，其特征在于：其在蛋白质电泳分析中的操作方法为：将分离胶片、浓缩胶片分别溶于灭菌纯水，振荡至完全溶解；向分离胶液中加入一定浓度的APS、TEMED，混匀后注胶；紧接着向浓缩胶液中加入一定浓度的APS、TEMED，混匀后注胶，插上合适的梳子。

7.如权利要求3所述的预制胶片剂在蛋白质电泳分析中与常规的染色脱色液兼容配套的应用。

8.一种立显蛋白电泳预制胶片剂，其特征在于：包括如权利要求1所述的显色液及如权利要求3所述的预制胶片剂。

9.如权利要求8所述的立显蛋白电泳预制胶片剂在蛋白质电泳分析中与市面上所有电泳缓冲系统兼容的应用。