CN107827904A - 一种青蒿素的纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及青蒿生产技术领域，具体涉及一种青蒿素的纯化方法。本发明纯化方法包括以下步骤：S1.青蒿提取液经过柱分离纯化后，得到柱洗脱液；S2.取柱洗脱液在40‑85℃下进行浓缩，浓缩后的体积是浓缩前的1/10‑1/20，静置结晶后取出粗品烘干，备用；S3.往粗品中加入醇，溶解，静置结晶，过滤，取结晶体，得青蒿素。本发明提供的一种青蒿素纯化方法，能有效的将杂质B的含量降低，控制杂质B的含量低于0.2％。

Description

一种青蒿素的纯化方法

【技术领域】

本发明涉及青蒿生产技术领域，具体涉及一种青蒿素的纯化方法。

【背景技术】

青蒿素是从复合花序植物黄花蒿茎叶中提取的有过氧基团的倍半萜内酯药物，由中国药学家屠呦呦在1971年发现，具有低毒、高效、速效的特点。青蒿素是继乙氨嘧啶、氯喹、伯喹之后最有效的抗疟特效药，尤其是对于脑型疟疾和抗氯喹疟疾，具有速效和低毒的特点，曾被世界卫生组织称做是“世界上唯一有效的疟疾治疗药物”。抗疟疾作用机理主要在于在治疗疟疾的过程通过青蒿素活化产生自由基，自由基与疟原蛋白结合，作用于疟原虫的膜系结构，使其泡膜、核膜以及质膜均遭到破坏，线粒体肿胀，内外膜脱落，从而对疟原虫的细胞结构及其功能造成破坏。

根据世卫组织的统计数据，自2000年起，撒哈拉以南非洲地区约2.4亿人口受益于青蒿素联合疗法，约150万人因该疗法避免了疟疾导致的死亡。因此，很多非洲民众尊称其为“东方神药”。此外青篙素在其他疾病的治疗中也显示出诱人的前景。如抗血吸虫、调节或抑制体液的免疫功能、提高淋巴细胞的转化率，利胆，祛痰，镇咳，平喘等。

目前世界上抗疟疾用青蒿素相关制剂，绝大部分为注射剂。由于注射剂直接注入人体内或血液中，如果药物中的杂质含量超标，极易引起过敏或其他病变甚至导致死亡，所以目前国际上和我国不断加大对注射剂中有关杂质的限量，中间体中杂质的要求也不断提高，其他药物的中对杂质要求也不断提高。杂质B在青蒿素提取液中间体中被列为杂质，因此对青蒿素提取过程中控制杂质B的量，是青蒿素提取技术的重中之重。

中国抗疟药青蒿素，是由一年生草本植物青蒿的干品叶子，使用石油醚、乙酸乙酯、酒精等作为溶媒提取所得。杂质B的来源主要由提取过程中带入和操作过程中控制不当，其他成分不稳定发生转化而来，杂质B表现为在用高效液相色谱检测过程中，在青蒿素前的一个杂峰，成分有待进一步确认，虽然从峰面积上看不大，但是由于成分未知，对于主要用作注射剂的青蒿素来说会带来严重的不良反应。如不能很好的将杂质B和青蒿素分离，那么就会降低青蒿素的纯度，带来严重安全隐患。目前现有市售或出口的青蒿素产品中杂质B的含量，采用面积归一法，杂质B的含量为0.5-0.9％。

【发明内容】

本发明的发明目的在于：针对上述背景技术中的问题，提供一种青蒿素的纯化方法，本发明方法能有效的将杂质B的含量降低，控制杂质B的含量低于0.2％。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种青蒿素的纯化方法，包括以下步骤：

S1.青蒿提取液经过柱分离纯化后，得到柱洗脱液，所述柱洗脱液中杂质B的含量≥0.5％，备用；

S2.取柱洗脱液进行浓缩，所述浓缩的温度为40-85℃，浓缩后的体积是浓缩前的1/10-1/20，得浓缩液，静置结晶，取出晶体烘干，得粗品备用；

S3.往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置结晶，过滤，取结晶体，得青蒿素，所述青蒿素中杂质B的含量低于0.2％。优化的，所述柱洗脱液中杂质B的含量为0.5-1.5％。

更优化的，所述浓缩的温度为60-70℃。

进一步优化的，所述青蒿素中杂质B的含量低于0.15％。

更进一步优化的，S3中结晶方法具体为：往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，往待结晶液中加入醇，静置，得到晶体I和滤液I；取滤液I继续浓缩，往里加醇，然后用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置，得晶体II和滤液II；滤液按上述方法进行浓缩如果结晶的次数为1-3次；合并每次得到的晶体。

再更进一步优化的，结晶的温度控制在25-48℃。

再更进一步优化的，步骤S3中所述醇选自乙醇，所述乙醇的质量分数为80-95％，所述乙醇的用量体积为粗品质量的5-15倍。

一种上述一种青蒿素的纯化方法的应用，适合在企业大生产中应用。

综上所述，由于采用了上述技术方案，本发明的有益效果是：

青蒿素是热不稳定物质，由于青蒿素制备成抗疟疾药品的剂型大部分是以注射剂为主，而目前国内和国际上都对中药注射剂提出了更高要求，对杂质的检查标准不断提高，这就要求做为注射剂的原料药的纯度不断提高。在实验室中可以使用各种化学制剂如甲醇、丙酮等化学试剂对物质进行纯化可以得到较纯的物质，而在生产中，想要除低某杂质的含量，如工业生产中找到杂质B产生的关系因素并且通过最经济、安全、可行的方法进行控制非常不易。因为生产中对试剂种类、生产安全、生产时间成本、收率以及经济效益等密切相关。本发明通过不断研究、探索，找到了杂质B产生的关键因素，在传统纯化完成后杂质B仍较高，通过控制好浓缩时的条件，如温度、体积、结晶操作，可以有效的将杂质B的含量降低至0.2％以下，降低3倍左右，进一步降低了青蒿素中杂质B的含量。

杂质B是一类目前研究较少的一类成分，目前对这类成分研究较少，进行质谱分析等核磁谱分析后，确定含其中一个9-异青蒿素，其他成分有待进一步确定。本发明首次对这类成分的产生、纯化进行了研究，并且通过严格的工艺操作降低了这类物质的产生；该工艺未引入其他试剂和较多步骤，经济、环保、可行，且目前在各项报道中未见对此类物质进行研究。由于公司是目前青蒿素产量占世界1/4，成果应用后产生的良好的经济效益和社会效益。

本发明实施例1-5中杂质B的含量均小于0.2％，而用传统方法制备得到的青蒿素中，经检测杂质B的含量为0.5-1.5％之间，本次抽检的对照样品1的杂质B含量为0.938％；对照样品2与试验样品5，在纯化过程中，因为温度提高，致使浓缩过程中成分稳定下降，致使杂质B的含量显著上升至0.676％，上升近6倍；对照样品3与与试验样品5，在纯化过程中，主要区别为纯化后的体积不同，杂质B的含量也不同，这在生产中得到多次验证，浓缩的最终体积太大如最终浓缩后体积大于1/10浓缩前体积，则结晶过程中杂质B含量增加，而小于1/20以后，则结晶效果不理想，收率低，同时其他杂质含量高；对比样品4中杂质B成分含量上升，在实际生产过程中，结晶温度变化也会对杂质B的产生有影响，与结晶时温度不同，过滤及结晶产生的速率有关，温度高结晶形成不完全，而结晶温度过低产生速度快，杂质易被包裹，难以去除。

本发明方法是综合各工艺环节达到有效控制杂质B含量的目的，在很长一段时间，筛选关键因素不完全，都难以达到有效控制杂质B的目的；而筛选关键因素太多，有些是非关键因素，控制后影响不大，相反造成了生产的效率降低，成本增加。

【附图说明】

图1实施例5和对照样品1高效液相对比图；

附图中，A-实施例5高效液相图，B-对照样品1高效液相图，1-杂质B，2-青蒿素。

【具体实施方式】

下面结合实施例对本发明作进一步说明。

实施例1

一种青蒿素的纯化方法，包括以下步骤：

S1.青蒿提取液经过柱分离纯化后，得到柱洗脱液，所述柱洗脱液中杂质B的含量在0.5-1.5％之间，备用；

S2.取柱洗脱液进行浓缩，所述浓缩的温度为40℃，浓缩后的体积是浓缩前的1/10，得浓缩液，静置结晶，取出晶体烘干，得粗品备用；

S3.往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置结晶，过滤，取结晶体，得青蒿素，所述青蒿素中杂质B的含量低于0.2％。

所述步骤S3中结晶的的方法为：往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，往待结晶液中加入醇，静置，得到晶体I和滤液I；取晶体即得。用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，往待结晶液中加入醇，静置，得到晶体I和滤液I；将得到的晶体，用水溶解，进行重结晶。结晶的温度控制在25℃。

其中，醇选自乙醇，所述乙醇的质量分数为80％，所述乙醇的用量为浓缩液的15倍。

实施例2

一种青蒿素的纯化方法，包括以下步骤：

S1.青蒿提取液经过柱分离纯化后，得到柱洗脱液，所述柱洗脱液中杂质B的含量0.6-1.4％之间，备用；

S2.取柱洗脱液进行浓缩，所述浓缩的温度为85℃，浓缩后的体积是浓缩前的1/20，得浓缩液，静置结晶，取出晶体烘干，得粗品备用；

S3.往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置结晶，过滤，取结晶体，得青蒿素，所述青蒿素中杂质B的含量低于0.2％。

S3中结晶方法具体为：往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，往待结晶液中加入醇，静置，得到晶体I和滤液I；取滤液I继续浓缩，往里加醇，然后用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置，得晶体II和滤液II；合并每次得到的晶体即得。结晶的温度控制在48℃。

其中，醇选自乙醇，所述乙醇的质量分数为95％，所述乙醇的用量为浓缩液的5倍。

实施例3

一种青蒿素的纯化方法，包括以下步骤：

S1.青蒿提取液经过柱分离纯化后，得到柱洗脱液，所述柱洗脱液中杂质B的含量0.6-1.3％之间，备用；

S2.取柱洗脱液进行浓缩，所述浓缩的温度为60℃，浓缩后的体积是浓缩前的1/14，得浓缩液，静置结晶，取出晶体烘干，得粗品备用；

S3.往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置结晶，过滤，取结晶体，得青蒿素，所述青蒿素中杂质B的含量低于0.2％。所述步骤S3中结晶的方法为：往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，往待结晶液中加入醇，静置，得到晶体I和滤液I；取滤液I继续浓缩，往里加醇，然后用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置，得晶体II和滤液II；取滤液II继续浓缩，然后用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，往里加醇，静置，得晶体III和滤液III；合并每次得到的晶体，用醇溶解，进行重结晶。结晶的温度控制在30℃。

其中，醇选自乙醇，所述乙醇的质量分数为85％，所述乙醇的用量为浓缩液的12倍。

实施例4

一种青蒿素的纯化方法，包括以下步骤：

S1.青蒿提取液经过柱分离纯化后，得到柱洗脱液，所述柱洗脱液中杂质B的含量0.7-1.3％，备用；

S2.取柱洗脱液进行浓缩，所述浓缩的温度为70℃，浓缩后的体积是浓缩前的1/18，得浓缩液，静置结晶，取出晶体烘干，得粗品备用；

S3.往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置结晶，过滤，取结晶体，得青蒿素，所述青蒿素中杂质B的含量低于0.2％。

所述步骤S3中结晶的方法为：用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，往待结晶液中加入醇，静置，得到晶体I和滤液I；合并每次得到的晶体，用水溶解，进行重结晶。结晶的温度控制在38℃。

其中，醇选自乙醇，所述乙醇的质量分数为90％，所述乙醇的用量为浓缩液的7倍。

实施例5

一种青蒿素的纯化方法，包括以下步骤：

S1.青蒿提取液经过柱分离纯化后，得到柱洗脱液，所述柱洗脱液中杂质B的含量0.7-1.5％，备用；

S2.取柱洗脱液进行浓缩，所述浓缩的温度为64℃，浓缩后的体积是浓缩前的1/15，得浓缩液，静置结晶，取出晶体烘干，得粗品备用；

S3.往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置结晶，过滤，取结晶体，得青蒿素，所述青蒿素中杂质B的含量低于0.2％。

所述步骤S3中结晶的方法为：往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，往待结晶液中加入醇，静置，得到晶体I和滤液I；取滤液I继续浓缩，往里加醇，溶解，然后用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置，得晶体II和滤液II；合并每次得到的晶体，用醇溶解，进行重结晶。结晶的温度控制在34℃。

其中，醇选自乙醇，所述乙醇的质量分数为87％，所述乙醇的用量为浓缩液的10倍。

实施例6

一种实施例1-5青蒿素的纯化方法的应用，适合在企业大生产中应用。

实施例7实施效果对比

采用高效液相法对各样品进行检测，按照面积归一法计算青蒿素中杂质B的含量。

1.样品制备：取样品50mg左右，精密称定，置10ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，0.45μm滤膜过滤即可。

2.供试样品：取按实施例1-5的方法制备得到的青蒿素样品为试验样品1-5。取市售青蒿素中间产品为对照样品1；按实施例5的方法进行制备，将S2中浓缩的温度改为90℃，回收溶剂至浓缩前的1/15，其他方法与实施例5同，得对照样品2；按实施例5的方法进行制备，将S2中浓缩的温度改为70℃，回收溶剂至浓缩前的1/3，其他方法与实施例5同，得对照样品3；按实施例5的方法进行制备，将结晶操作的温度改为25℃，其他方法与实施例5同，得对照样品4；

3.样品检测条件：

色谱柱：十八烷基硅烷健合硅胶为填充剂；

柱温：30℃；

波长：216nm；

流动相：乙腈：水＝50：50；

流速：1.0ml/min；

进样体积：20μl；

运行时间：25min

4.计算方法：对杂质B采用面积归一化法计算杂质B的含量。

表1各样品中杂质B的含量统计

	杂质B保留时间	杂质B含量％
			试验样品1	12.762	0.193％
试验样品2	12.774	0.187％
			试验样品3	12.825	0.141％
试验样品4	12.696	0.162％
			试验样品5	12.721	0.119％
对照样品1	12.856	0.938％
			对照样品2	12.815	0.676％
对照样品3	12.847	0.728％
			对照样品4	12.698	0.895％

从表中，可以看出，本发明实施例1-5中杂质B的含量均小于0.2％，而用传统方法制备得到的青蒿素中，经检测杂质B的含量为0.5-1.5％之间，本次抽检的对照样品1的杂质B含量为0.938％；对照样品2与试验样品5，在纯化过程中，因为温度提高，致使浓缩过程中成分稳定下降，致使杂质B的含量显著上升至0.676％，上升近6倍；对照样品3与与试验样品5，在纯化过程中，主要区别为纯化后的体积不同，杂质B的含量也不同，这在生产中得到多次验证，浓缩的最终体积太大如最终浓缩后体积大于1/10浓缩前体积，则结晶过程中杂质B含量增加，而小于1/20以后，则结晶效果不理想，收率低，同时其他杂质含量高；对比样品4中杂质B成分含量上升，在实际生产过程中，结晶温度变化也会对杂质B的产生有影响，与结晶时温度不同，过滤及结晶产生的速率有关，温度高结晶形成不完全，而结晶温度过低产生速度快，杂质易被包裹，难以去除。

上述说明是针对本发明较佳可行实施例的详细说明，但实施例并非用以限定本发明的专利申请范围，凡本发明所提示的技术精神下所完成的同等变化或修饰变更，均应属于本发明所涵盖专利范围。

Claims (8)

1.一种青蒿素的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1.青蒿提取液经过柱分离纯化后，得到柱洗脱液，所述柱洗脱液中杂质B的含量≥0.5％，备用；

S2.取柱洗脱液进行浓缩，所述浓缩的温度为40-85℃，浓缩后的体积是浓缩前的1/10-1/20，得浓缩液，静置结晶，取出晶体烘干，得粗品备用；

S3.往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置结晶，过滤，取结晶体，得青蒿素，所述青蒿素中杂质B的含量低于0.2％。

2.根据权利要求1所述的一种青蒿素的纯化方法，其特征在于，所述柱洗脱液中杂质B的含量为0.5-1.5％。

3.根据权利要求1所述的一种青蒿素的纯化方法，其特征在于，所述浓缩的温度为60-70℃。

4.根据权利要求1所述的一种青蒿素的纯化方法，其特征在于，所述青蒿素中杂质B的含量低于0.15％。

5.根据权利要求1所述的一种青蒿素的纯化方法，其特征在于，S3中结晶方法具体为：往粗品中加入醇，溶解，用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，往待结晶液中加入醇，静置，得到晶体I和滤液I；取滤液I继续浓缩，往里加醇，然后用硅藻土和微孔滤膜依次进行过滤，静置，得晶体II和滤液II；滤液按上述方法进行浓缩如果结晶的次数为1-3次；合并每次得到的晶体。

6.根据权利要求1所述的一种青蒿素的纯化方法，其特征在于，结晶的温度控制在25-48℃。

7.根据权利要求1或5所述的一种青蒿素的纯化方法，其特征在于，步骤S3中所述醇选自乙醇，所述乙醇的质量分数为80-95％，所述乙醇的用量体积为粗品质量的5-15倍。

8.一种权利要求1-5任一项所述一种青蒿素的纯化方法的应用，其特征在于，适合在企业大生产中应用。