CN107811262A - 一种生物活性烧烤调味料的制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及调味品领域，具体涉及一种生物活性烧烤调味料的制备方法和应用。本发明的目的是针对烧烤料制备过程中易氧化，丧失营养以及风味物质，同时针对烧烤食物本身对人体胃肠道、视力等造成的伤害等问题，提供一种包含有甘草、土茯苓、大茴香、香叶、大青叶、亚麻籽油、蜗牛蛋白粉、珍珠层蛋白冻干粉、珍珠层液、贝壳粉、麦芽糊精等的生物活性烧烤调味料，不仅在烧烤后保有烧烤调味料原有的风味，同时可以有效改善烧烤食物的风味，具备耐高温的特性，保护营养物质不被流失；同时以其具备的抗氧化的功效，可有效缓解食物烧烤所带来的对身体健康的损害，同时有效缓解因食用烧烤食物给人体胃肠道带来的损伤以及对青少年视力带来的损害。

Description

一种生物活性烧烤调味料的制备方法和应用
技术领域
本发明涉及调味品领域，具体涉及一种生物活性烧烤调味料的制备方法和应用。
背景技术
调味品工业是食品工业的重要组成部分，与人民生活紧密相关。俗话说“民以食为天，食以味为先”，美食离不开美味。资料显示，国外从五十年代就开始复合调味料的研究，到了七十年代则成为争相开发的课题，近年来又有了很大的发展，且应用很普遍，质量也高，市场中复合调味料的份额已占80％以上。而我国复合调味料的年增长率虽高达20％，但就总量来说，还远远不能满足需求。就品种来说，还集中在辣味等少数风味上。复合调味料在国内还处于强力开发阶段。
而对于烧烤调料而言，风味是食品的最重要的食用品质之一，风味的好坏影响产品最终的品质。现在市面上已有各种不同风味的烧烤调味产品，如奥尔良烧烤调味料、味神烧烤调味料等。但为满足消费者对不同风味的需求，还需要开发出更多新风味的烧烤调味料。当然，随着人们生活水平的提高，在要求美味的基础上更多消费者要求调味产品使用的方便和安全。
目前已经公开的涉及烧烤调味料的方法众多。例如申请公布号为CN 103494154A的发明专利，公开了“一种牛肉味烧烤调味料及其制备方法”，本发明公开了一种牛肉味烧烤调味料，是由下述重量份的原料制成：鲜牛肉20-30、木瓜10-20、蓝莓15-20、薄荷10-15、金银花10-15、绿茶8-10、姜笋6-8、香辛料粉4-5、香菜粉2-3、胡椒粉20-24、食盐15-18、麦冬1-2、北风草2-3、玉蝴蝶2-3、金雀根1-2、山楂1-2、枸杞子2-4、芒果核1-2；该发明制作工艺简单，原料来源广泛，成本低廉，制得的成品具有浓郁的牛肉风味和水果清香，质地细腻，香辣爽口，营养均衡全面，在制作烧烤食品时能够极大的提香，去除异味，有效促进食欲，更有良好的健脾养胃功效。
公布号为CN 102038168 A的发明专利，申请公开了“一种烧烤调味料”，其中，调味料由下列重量份的主要原料制成：30-40份黑胡椒粉，3-4份陈皮粉，1-2份番茄粉，1-2份干姜粉，1-2份茴香粉，1-2份糖和1-2份食盐；先将黑胡椒、陈皮、干姜和茴香研磨成粉，番茄烘干后碎成粉，再加入糖和食盐混合均匀。该发明制备的烧烤调味料调制的烧烤口味清香，色泽新鲜，口感较好。
公布号为CN 103181537 A的发明专利，申请公开了“烧烤调味料及其制备方法”，其中，该烧烤调味料包括以下重量份含量的组份：食盐5-15重量份、辣椒10-20重量份、孜然10-25重量份、酵母抽提物10-20重量份、状味精2-8重量份、细砂糖2-8重量份、花椒1-5重量份。该发明烧烤调味料，不仅具有特殊的烧烤风味，口感醇厚丰富，回味绵长，也因酵母抽提物的加入而营养丰富。另外，该调味料用于烧烤时，可直接添加，减少了使用各种调味料混合调配的时间，降低了烧烤的劳动强度，使用方便。
显然，以上公开的发明专利解决的是提高调料中的风味，以及改善调料对烧烤食物的风味调节，但往往存在以下问题：
传统复合调味料生产工艺单一，采用常温油炸或简单复配技术，使复合调味料的呈味物质核心体暴露于空气中，受光、热、氧气影响较大，存在产品风味损失多、容易变质、贮存期较短、能耗大和生产效率低等问题。
另一方面，对于烧烤食物，其调料本身在烧烤过程中，易氧化；同时在食用烧烤食物的过程中，食物同时也可能在氧化的过程中损失营养，同时影响食物的风味。
在营养健康方面，人们如果经常食用烧烤食品，有诱发胃溃疡等胃病的危险。烧烤食物中存在一种致癌物质——亚硝胺。亚硝胺的产生源于肉串烤制前的腌制环节，如果腌制时间过长，就容易产生亚硝胺，从而对胃肠道产生更大的危害。此外，烧烤食品也会影响青少年视力，据近年美国一项权威研究结果显示，食用过多的烧煮熏烤太过的肉食将受到寄生虫等疾病的威胁，甚至严重影响青少年的视力，造成眼睛近视。
因此，传统复合调味料的营养成分损失大、污染大、能耗大、低效率和色、香、味不尽人意，应用局限性较大。
发明内容
本发明的目的是针对烧烤料制备过程中易氧化，丧失营养以及风味物质，同时针对烧烤食物本身对人体胃肠道、视力等造成的伤害等问题，提供一种包含有甘草土茯苓、大茴香、香叶、大青叶、亚麻籽油、蜗牛蛋白粉、珍珠层蛋白冻干粉、珍珠层液、贝壳粉、麦芽糊精等的生物活性烧烤调味料，不仅在烧烤后保有烧烤调味料原有的风味，同时可以有效改善烧烤食物的风味，具备耐高温的特性，保护营养物质不被流失；同时以其具备的抗氧化的功效，可有效缓解食物烧烤所带来的对身体健康的损害，同时有效缓解因食用烧烤食物给人体胃肠道带来的损伤以及对青少年视力带来的损害。
为了实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：
一种生物活性烧烤调味料的制备方法，步骤如下：
(1)将花椒、陈皮、甘草、土茯苓按照比例混合，加入混合物质量0.4-1.5倍的水，打浆20-40min，加热蒸煮40-55℃，15-30min，过滤，得到滤液A；
(2)将大茴香、香叶、大青叶以及菠菜按照比例混合，加入混合物质量0.4-1倍的水，进行研磨粉碎后，得到研磨浆液，将研磨浆液置于微波装置中，300-400W，微波处理10-25秒；之后将微波处理后的研磨浆液置于超声波装置中，在超声波300W-500W的功率下处理0.5-3min；之后将超声处理后的研磨浆液倾注于平板内，置于红外光下照射70-120秒，红外光源功率为10-20W；采用板框压滤，得到滤液，之后用离心3000-4000rpm，取上清液，得到滤液B；
(3)将滤液A以及滤液B混合，得到混合液A；向混合液A中添加酵母菌以及乳酸菌，混合均匀，在25-30℃，搅拌转速80-120rpm条件下发酵6-12h，发酵结束后，离心转速6000-8000rpm，离心10-15min，取上清液，得到混合发酵液；
(4)将蜗牛蛋白粉、珍珠层蛋白冻干粉、白砂糖、食盐、亚麻籽油、贝壳粉按照重量份数比混合，并加入该混合物质量0.2-0.4倍的水，并调节pH 4-6，得到混合液B，将混合发酵液与混合液B混合，搅拌转速400-700rpm，搅拌10-30min，之后调节转速700-900rpm，滴加弱碱性溶液滴加至体系溶液中，调节pH7-8，并继续搅拌20-50min，静置，得到乳化液A；
(5)将乳化液A滴加到珍珠层液中，滴加速度为1-10滴/秒，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为500-800rpm，搅拌20-30min，得到乳化液B；
将麦芽糖糊精按照重量份数比加入到乳化液B中，，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为600-800rpm，搅拌20-30min，得到乳化液C；之后将所述乳化液C进行高压匀浆处理，在40-55℃，20-30MPa压力下均质，均质时间0.5-1h，得到均质液；
(6)将上述均质液利用离心式雾化器，离心式雾化器转数为8000-10000rpm，将雾化后的均质液送入干燥机中进行干燥，干燥机的进风温度为160-180℃，出风温度为50-80℃，制得的微胶囊粒径为110-200μm。
进一步地，所述生物活性烧烤调味料，主要由以下重量份数的原料制备：白砂糖2-8份、食盐5-15份、花椒0.5-5份、陈皮1-5份、甘草5-10份、土茯苓5-15份、大茴香2-5份、香叶2-5份、大青叶2-5份、亚麻籽油1-5份、菠菜2-8份、蜗牛蛋白粉20-40份、珍珠层蛋白冻干粉5-20份、珍珠层液5-20份、贝壳粉1-4份、麦芽糊精4-8份。
优选地，所述生物活性烧烤调味料，主要由以下重量份数的原料制备：白砂糖4-6份、食盐6-8份、花椒1-4份、陈皮2-4份、甘草6-8份、土茯苓8-12份、大茴香3-4份、香叶3-4份、大青叶3-4份、亚麻籽油2-4份、菠菜4-6份、蜗牛蛋白粉25-35份、珍珠层蛋白冻干粉8-16份、珍珠层液8-15份、贝壳粉2-3份、麦芽糊精6-7份。
更优选地，所述生物活性烧烤调味料，主要由以下重量份数的原料制备：白砂糖5份、食盐6.5-7份、花椒2-3份、陈皮3份、甘草7份、土茯苓10份、大茴香3.5份、香叶3.5份、大青叶4份、亚麻籽油3.5份、菠菜5份、蜗牛蛋白粉25-30份、珍珠层蛋白冻干粉11份、珍珠层液10-12份、阿拉伯胶5份、贝壳粉2.5-3份、麦芽糊精6份。进一步地，所述步骤(3)中的弱碱性溶液为食品级碳酸钠或碳酸氢钠溶液。
进一步地，所述步骤(3)中的弱碱性溶液为食品级碳酸钠或碳酸氢钠溶液的浓度为0.4-0.8mol/L。
进一步地，所述步骤(3)中，酵母菌的接种量为1.0×108-3.0×109CFU/L混合液A，所述乳酸菌的接种量为1.5×108-3.5×109CFU/L混合液A。所述酵母菌为可食用酵母菌，所述乳酸菌为可食用乳酸菌。
进一步地，所述步骤(4)中的乳化液B与珍珠层液的体积比为10-20:5-10。
进一步地，所述蜗牛蛋白粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)蜗牛饲料液的制备：将陈皮、金银花、甘草、小茴香、布楂叶、大茴香、罗勒、仙草、枸杞与水按重量比混合，100℃蒸煮10-30min，打浆后，冷却至室温后与红糖、蜂蜜按重量比混合、均质；向其中加入酵母菌，10-15℃低温发酵3-6h，转速150-180rpm，发酵结束后，得到蜗牛饲料液；所述蜗牛饲料液的重量份数组成为：陈皮1-5份，金银花1-5份、甘草1-5份、小茴香5-15份、布楂叶1-5份、大茴香0.1-3份、罗勒0.1-2份、仙草1-10份、枸杞5-10份、红糖10-30份、蜂蜜1-10份、水30-80份；
(2)选择体重为45-55克，月龄为3.5月-5.5月的蜗牛，将蜗牛饲料液饲喂蜗牛，每天饲喂量为蜗牛体重的7％-15％，并于温度15～30℃，空气湿度50％～90％，连续饲喂20-50d；
(3)喂养后，并将蜗牛转移至温度为5-10℃，密闭的饲养装置中，向装置中冲入氮气同时打开排气阀，通气50-80s后，关闭氮气和排气阀，之后向密闭装置中冲入氧气同时开启排气阀，通气15-25s后关闭氧气和排气阀，密闭饲养10-30min后；向装置中冲入氮气同时打开排气阀，通气60-100s后，关闭氮气和排气阀，之后向密闭装置中冲入氧气同时开启排气阀，通气5-15s后关闭氧气和排气阀，密闭饲养5-10min后，迅速置于-4～-20℃冷冻，机械去壳后，破碎，研磨成匀浆，得到一次匀浆；
将所述一次匀浆进行超声，200-600W下处理20-50min；一次匀浆使用超声波破碎仪的处理方式是：超声波处理6-10s、间歇6-10s，再超声波处理6-10s、间歇6-10s，持续按上述超声波处理时间、间歇时间操作，当超声波处理时间和间歇时间之和达到20-50min时，即完成处理，得到二次匀浆；将二次匀浆置于-18～-22℃冷冻10-30min，破碎，研磨，得到蜗牛蛋白粉。
进一步地，所述饲养装置为间歇性低氧环境的实验装置，具体为发明专利“提供间歇性低氧环境的动物实验装置”，公开号为CN101491477A，唯一不同的是，在该装置中加入温度控制装置，可设置该装置的温度并恒温固定在所需温度。
进一步地，所述珍珠层蛋白冻干粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)将经处理后的珍珠层进行机械粉碎，过100-200目筛，得到珍珠层粉末；向珍珠层粉末中加入质量体积比10％-50％的醋酸溶液，搅拌至珍珠层粉末全部溶解,过滤，得到滤液，并用蒸馏水洗涤沉淀，将洗涤液转入滤液，最终获得珍珠层清液；
(2)将珍珠层清液以15-25mL/min流速经蠕动泵泵送高压脉冲电场处理室，电场强度20-40k V/cm，脉冲数10-20个；
(3)发酵-微波提取：调节珍珠层清液pH至5.0-6.5，向珍珠层清液中加入酵母菌以及乳酸菌，混合均匀，80-120rpm，20-28℃发酵6-10h，发酵结束后，6000-8000rpm离心10-15min，去上清，将上清液置于微波辐射下，磁力搅拌，在微波功率200W-300W条件下，提取5-10min；
(4)将上清液经过冷冻干燥至珍珠层蛋白冻干粉。
进一步地，所述珍珠层蛋白冻干粉的制备步骤(1)中的醋酸浓度为0.5-2mol·L-1；
优选地，所述珍珠层蛋白冻干粉的制备步骤(1)中的珍珠层为育珠蚌珍珠层或翡翠贻贝珍珠层中的一种或两种混合；
进一步地，所述珍珠层蛋白冻干粉的制备步骤(3)中，酵母菌的接种量为1.0×108-4.0×109CFU/L珍珠层清液，所述乳酸菌的接种量为1.5×108-4.5×109CFU/L珍珠层清液。
所述酵母菌为可食用酵母菌，所述乳酸菌为可食用乳酸菌。
进一步地，所述珍珠层液的制备方法，包括如下步骤：
(1)将珍珠层进行切边处理，将经处理后的珍珠层进行机械粉碎，使粉碎后颗粒的平均直径不大于1-2cm；
(2)将珍珠层颗粒在以15-25mL/min流速经蠕动泵泵送高压脉冲电场处理室，电场强度15-30k V/cm，脉冲数10-15个，之后将珍珠层颗粒置入微波装置，在200W-300W条件下，处理2-8min；
(3)将经过处理后的珍珠层颗粒置入提取提纯设备，进行自燃式连续式干馏炭化，温度控制在550-650℃；然后进行两级冷凝，并将两级冷凝所得的液体在混合罐中混合后静置；将混合液于50-60℃、真空度0.1-0.15Mpa以上的条件下进行一级蒸馏，至馏出体积为原液体积的80-90％，进行冷凝，其中，在馏出体积为原液体积的80-90％时可再加入新的混合液，继续按照上述步骤进行蒸馏和冷凝，最终得到珍珠层液。
优选地，所述珍珠层为育珠蚌珍珠层或翡翠贻贝珍珠层中的一种或两种混合；
进一步地，所述贝壳粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)将贝壳进行初步粉碎、清洗后，之后将粉碎贝壳置于干燥箱中，70-90℃，烘干0.5-2.5h；将粉碎贝壳继续粉碎2-8min，并过50-100目筛，得到贝壳粗粉；
(2)向乳酸菌液体培养基中接入乳酸菌，28-35℃静置培养4-8h，得到乳酸菌发酵液；
(3)将贝壳粗粉与乳酸菌发酵液按照质量比1-5:20-100混合，继续静置发酵4-8h，之后8000-10000rpm离心5-10min，取上清，之后将上清液进行微波处理，功率150-200W，处理20-40min；反应结束后，冷却在室温，真空抽滤两次。残渣烘干后称重。滤液置于50-65℃烘箱内，烘干，研磨，即得贝壳粉。优选地，所述贝壳为鲍贝壳、文蛤壳、红螺壳、生蚝壳、海螺壳中的一种或多种组合。
本发明的另一目的是提供上述利用生物活性烧烤调味料制备方法制备的生物活性烧烤调味料的应用。
进一步地，将所述生物活性烧烤调味料以及番茄酱、豆瓣酱按照重量份数5-10:1-2:0.5-2混合后涂布于羊肉表面，放置烤箱内，160-190℃进行高温烧烤，烤制10-15min。
有益效果：
1、本发明提供的生物活性烧烤调味料的制备方法，采用以花椒、陈皮、甘草、土茯苓、大茴香、香叶、大青叶以及菠菜为原料，通过微生物发酵，不仅增加物质风味，更有效将将物料分解为更容易被人体吸收的氨基酸等物质，同时采用蜗牛蛋白粉、珍珠层蛋白冻干粉与贝壳粉中的钙进行交联的方式合成具有交联结构的活性蛋白多肽，不仅为调味料提供增强营养、增强钙吸收、抗氧化等功能性作用，而且增强了调味料的耐高温的特性，进而有效保护其营养物质不被流失以及其抗氧化等功效；进一步，将珍珠层液与活性蛋白多肽通过高速搅拌充分混合，使珍珠层液均匀分布在活性蛋白多肽的表面，不仅可以发挥珍珠层液功效，而且更进一步地增强了活性蛋白多肽的致密性；最后，将麦芽糊精包覆吸附了珍珠层液的活性蛋白多肽，从而得到具有抗氧化、耐高温、在烧烤后保有烧烤调味料原有的风味、有效改善烧烤食物的风味、保护营养物质不被流失、有效缓解食物烧烤所带来的对身体健康的损害、有效缓解因食用烧烤食物给人体胃肠道带来的损伤以及对青少年视力带来的一种生物活性烧烤调味料。
2、显著的抗氧化活性：本发明的生物活性烧烤调味料具备显著的抗氧化活性，在生物活性烧烤调味料的抗氧化性能测试中，可以看出，本发明的生物活性烧烤调味料对羟自由基的清除能力显著，且随着其浓度的增加而增大，当浓度为16mg/mL时，对羟自由基清除率可达到88.65％；即使经过180℃，15min的高温烧烤处理后，其抗氧化性仍然保持在71.75％，仍然具备较强的抗氧化特性。生物活性烧烤调味料对超氧阴离子(O2-)的清除作用实验中可以看出，本发明实施例中的生物活性烧烤调味料对超氧阴离子(O2-)具有较高的清除率，当浓度为16mg/mL时，对超氧阴离子的清除率高达89.56％，即使经过180℃，15min的高温烧烤处理后，其抗氧化或性仍然保持在69.72％。
3、显著的抗溃疡特性：本发明的生物活性烧烤调味料对于胃肠道具有显著的抗溃疡的特性。由抗溃疡实验中可以看出，市售的普通烧烤调味料基本无改善胃溃疡的作用，而本发明的实验组和实验对照组均有抗胃溃疡的效果；实验组抗胃溃疡效果多优于实验对照组。本发明的烧烤调味料更有利于发挥其抗溃疡的疗效。
4、有效改善食物风味：本发明的烧烤制作的生物活性烧烤调味料在肉香味、鲜度、留香时间上都优于市场上的同类产品，特别是针对羊肉易产生膻味的肉类，可以在保持肉类鲜味的基础上，很好地中和羊肉膻味的效果，使用本发明产品在烧烤前可以不对肉制品进行腌制或者减少腌制时间。本发明的用于烧烤制作的调味料营养丰富，口感鲜美，肉香味明显、醇厚。本发明产品在烧烤前腌制和烧烤时添加，能减少烹饪的时间和劳动强度，增强烧烤的鲜美口感和醇厚风味，是其回味绵长。而且，上述用于烧烤制作的调味料在室温下可存放一年之久，随用随取，使用方便快捷。
5、通过测试，发现利用本发明制备的珍珠层蛋白冻干粉的粉体粒度降低，粉体均匀度提高，而水分和碳酸钙量变化并不明显；通过测定差角和压缩度发现，二者的流动性无明显差别而通过对大鼠急性胃黏膜损伤影响的药效学试验发现，用本发明制备的珍珠层蛋白冻干粉也可以明显增强珍珠层粉抗溃疡的药效。
6、本发明通过在蜗牛饲养过程中，前期对其进行特殊复合饲料的喂养，后期对其进行的低温、短时缺氧处理，经研磨匀浆配合超声处理得到的蜗牛蛋白粉具有显著的抗氧化特性。在超氧化歧化酶的测定实验中，本发明的生物活性烧烤调味料具有显著的超氧化歧化酶活性，其超氧化歧化酶的酶活性平均可达1090U/mL，即使经过高温处理后，其超氧化歧化酶的酶活性仍然可达到892.5U/mL，由此可以看出，其具有显著的耐高温以及较高的酶活性。
7、具有滋养补气的功效：在食用烧烤食物的过程中，由于烧烤是通过高温方式使食物里的水分减少，食物到身体里要正常消化就要吸收身体里的水分，身体里的水分被吸走了，身体就会干燥，食用后易上火，而本发明在制备蜗牛蛋白粉的过程中，通过蜗牛食用陈皮、金银花、甘草等物质的过程，通过蜗牛机体的氧化分解，从而得到分子量更小，更易被机体消化吸收、同时兼具抗氧化活性、营养价值更高的的有益物质。
8、有效利用珍珠层：
贝壳的结构分为三层：最外是角质层，由硬化蛋白组成；中间是棱柱层，由方解石型碳酸钙组成；最内为珍珠层，一般由方解石或文石等碳酸钙矿物和少量有机质(一般小于5％)组成。将贝壳的最内层加工磨成粉即为珍珠层粉，现代珍珠养殖及加工业的发展，极大地增加了珍珠层粉的产量。如何充分利用这些珠母贝资源，开发创新型产品，提高珍珠层粉的利用价值，是近年来学者们研究的热点。
本发明将珍珠层作为原料获取蛋白冻干粉，不仅降低了生产成本，有效利用了贝壳类原料，具有较高的应用价值与市场价值；利用高压脉冲电场配合微波以及发酵分解，最终获得珍珠层蛋白冻干粉，在水解程度方面具有更为显著的溶解度，且通过乳酸菌以及酵母菌发酵分解，获得了更易于人体吸收的小分子蛋白肽，无需额外添加蛋白酶等物质，该工艺且比传统加热方法节能40-50％，更加的节能，更加解决成本，显著降低生产成本。
在一定温度下，某固态物质在100g溶剂中达到饱和状态时所溶解的质量，叫做这种物质在这种溶剂中的溶解度。经试验，蛋白冻干粉在常温下22.3℃的溶解度为20.65g/100ml。
9、珍珠层液：以珍珠层作为原料，通过高压脉冲电场配合干馏炭化以及蒸馏处理，获得了特殊物质的液体(在此称为珍珠层液)，该液体对于高血压症、气管炎及痰热咳嗽、心脏病、湿疹、皮肤溃疡、癫痫等病症均有显著疗效显著，特别对于胃溃疡患者有显著的缓解功效。
具体实施方式
实施例1 蜗牛蛋白粉的制备
蜗牛蛋白粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)蜗牛饲料液的制备：将陈皮3份，金银花3份、甘草3份、小茴香10份、布楂叶4份、大茴香2份、罗勒1.5份、仙草6份、枸杞8份、水60份按重量比混合，100℃蒸煮10-30min，打浆后，冷却至室温后与红糖25份、蜂蜜6份比混合、均质；向其中加入酵母菌，15℃低温发酵5h，转速160rpm，发酵结束后，得到蜗牛饲料液；
(2)选择进入夏眠期前或冬眠期前，体重为45-55克，月龄为4.5个月的蜗牛，将营养浆料饲喂蜗牛，每天饲喂量为蜗牛体重的12％，并于温度25℃，空气湿度70％，连续饲喂40d；
(3)喂养后，将蜗牛转移至温度为6℃，密闭的饲养装置中，向装置中冲入氮气同时打开排气阀，通气70s后，关闭氮气和排气阀，之后向密闭装置中冲入氧气同时开启排气阀，通气20s后关闭氧气和排气阀，密闭饲养25min后；向装置中冲入氮气同时打开排气阀，通气80s后，关闭氮气和排气阀，之后向密闭装置中冲入氧气同时开启排气阀，通气10s后关闭氧气和排气阀，密闭饲养8min后，迅速置于-10℃冷冻，机械去壳后，破碎，研磨成匀浆，得到一次匀浆；
将一次匀浆进行超声，400W下处理30min；一次匀浆使用超声波破碎仪的处理方式是：超声波处理8s、间歇6s，再超声波处理8s、间歇6s，持续按上述超声波处理时间、间歇时间操作，当超声波处理时间和间歇时间之和达到30min时，即完成处理，得到二次匀浆；将二次匀浆置于-20℃冷冻20min，破碎，研磨，得到蜗牛蛋白粉。
进一步地，所述饲养装置为间歇性低氧环境的实验装置，具体为发明专利“提供间歇性低氧环境的动物实验装置”，公开号为CN101491477A，唯一不同的是，在该装置中加入温度控制装置，可设置该装置的温度并恒温至6℃。
实施例2 珍珠层蛋白冻干粉的制备
珍珠层蛋白冻干粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)将经处理后的珍珠层进行机械粉碎，过100-200目筛，得到珍珠层粉末；向珍珠层粉末中加入质量体积比30％的醋酸溶液，搅拌至珍珠层粉末全部溶解,过滤，得到滤液，并用蒸馏水洗涤沉淀，将洗涤液转入滤液，最终获得珍珠层清液；
(2)将珍珠层清液以20mL/min流速经蠕动泵泵送高压脉冲电场处理室，电场强度35k V/cm，脉冲数16个；
(3)发酵-微波提取：调节珍珠层清液pH至5.0-6.5，向珍珠层清液中加入酵母菌以及乳酸菌，混合均匀，100rpm，28℃发酵6h，发酵结束后，8000rpm离心10min，去上清，将上清液置于微波辐射下，磁力搅拌，在微波功率240W条件下，提取5min；
(4)将上清液经过冷冻干燥至珍珠层蛋白冻干粉。
进一步地，所述步骤(1)中的醋酸浓度为0.1mol·L-1；
优选地，所述步骤(1)中的珍珠层为育珠蚌珍珠层或翡翠贻贝珍珠层中的一种或两种混合；
进一步地，所述步骤(3)中，酵母菌为酿酒酵母，接种量为2.0×108CFU/L珍珠层清液，所述乳酸菌为植物乳杆菌，接种量为2.0×108CFU/L珍珠层清液。
实施例3 珍珠层液的制备
珍珠层液的制备方法，包括如下步骤：
(1)将珍珠层进行切边处理，将经处理后的珍珠层进行机械粉碎，使粉碎后颗粒的平均直径不大于1-2cm；
(2)将珍珠层颗粒在以25mL/min流速经蠕动泵泵送高压脉冲电场处理室，电场强度20k V/cm，脉冲数15个，之后将珍珠层颗粒置入微波装置中，在220W条件下，处理5min；
(3)将经过处理后的珍珠层颗粒置入提取提纯设备，进行自燃式连续式干馏炭化，温度控制在600℃；然后进行两级冷凝，并将两级冷凝所得的液体在混合罐中混合后静置；将混合液于55℃、真空度0.15Mpa以上的条件下进行一级蒸馏，至馏出体积为原液体积的85％，进行冷凝，其中，在馏出体积为原液体积的90％时可再加入新的混合液，继续按照上述步骤进行蒸馏和冷凝，最终得到珍珠层液。
其中，珍珠层为育珠蚌珍珠层。
实施例4 贝壳粉的制备
贝壳粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)将贝壳进行初步粉碎后，进行清洗后，之后将粉碎贝壳置于干燥箱中，75℃，烘干1h；将粉碎贝壳继续粉碎5min，并过80目筛，得到贝壳粗粉；
(2)向乳酸菌液体培养基中接入乳酸菌，30℃静置培养6h，得到乳酸菌发酵液；
(3)将贝壳粗粉与乳酸菌发酵液按照质量比1:50混合，继续静置发酵6h，之后8000rpm离心5min，取上清，之后将上清液进行微波处理，功率160W，处理25min；反应结束后，冷却在室温，真空抽滤两次。残渣烘干后称重。滤液置于55℃烘箱内，烘干，研磨，即得贝壳粉。
其中，贝壳为鲍贝壳、文蛤壳按任意比例的组合。
实施例5 生物活性烧烤调味料的制备与应用：
(1)将花椒0.5份、陈皮1份、甘草5份、土茯苓5份按照比例混合，加入混合物质量0.4倍的水，打浆20min，加热蒸煮40℃，15min，过滤，得到滤液A；
(2)将大茴香2份、香叶2份、大青叶2份以及菠菜2份按照比例混合，加入该混合物质量0.4倍的水，进行研磨粉碎后，得到研磨浆液，将研磨浆液置于微波装置中，300W，微波处理10秒；之后将研磨浆液置于超声波装置中，在超声波300W的功率下处理0.5min；之后将研磨浆液倾注于平板内，置于红外光下照射70秒，红外光源功率为10W；采用板框压滤，得到滤液，之后用离心3000rpm，取上清液，得到滤液B；
(3)将滤液A以及滤液B混合，得到混合液A；向混合液A中添加酵母菌以及乳酸菌，混合均匀，在25℃，转速80rpm条件下发酵6h，发酵结束后，6000rpm，离心10min，取上清液，得到混合发酵液；
(4)将蜗牛蛋白粉20份、珍珠层蛋白冻干粉5份、白砂糖2份、食盐5份、亚麻籽油1份、贝壳粉1份按照重量份数比混合，并加入该混合物质量0.2倍的水，并调节pH 4，得到混合液B，将混合发酵液与混合液B按照质量比1:1混合，搅拌400rpm，搅拌10min，之后调节转速700rpm，滴加弱碱性溶液滴加至体系溶液中，调节pH7，并继续搅拌20min，静置，得到乳化液A；
(5)将乳化液A滴加到珍珠层液中，滴加速度为1滴/秒，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为500rpm，搅拌20min，得到乳化液B；
将麦芽糊精按照重量份数比加入到乳化液B中，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为600rpm，搅拌20min，得到乳化液C；之后将所述乳化液C进行高压匀浆处理，在40℃，20MPa压力下均质，均质时间0.5h，得到均质液；
(6)将上述均质液利用离心式雾化器，离心式雾化器转数为8000rpm，将雾化后的均质液送入干燥机中进行干燥，干燥机的进风温度为160℃，出风温度为50℃，制得的微胶囊粒径为110μm。
其中，步骤(3)中，酵母菌的接种量为1.0×108CFU/L混合液A，所述乳酸菌的接种量为1.5×108CFU/L混合液A。
其中，步骤(4)中的弱碱性溶液为食品级碳酸钠溶液，浓度为0.4mol/L。
其中，步骤(5)中的乳化液B与珍珠层液的体积比为15:8。
将生物活性烧烤调味料以及番茄酱、豆瓣酱按照重量份数5:1:0.5混合后涂布于羊肉表面，放置烤箱内，160℃进行高温烧烤，烤制10min。
实验例6 生物活性烧烤调味料的制备与应用
(1)将花椒5份、陈皮5份、甘草10份、土茯苓15份按照比例混合，加入混合物质量1.5倍的水，打浆40min，加热蒸煮55℃，30min，过滤，得到滤液A；
(2)将大茴香5份、香叶5份、大青叶5份以及菠菜8份按照比例混合，加入该混合物质量1倍的水，进行研磨粉碎后，得到研磨浆液，将研磨浆液置于微波装置中，400W，微波处理25秒；之后将研磨浆液置于超声波装置中，在超声波500W的功率下处理3min；之后将研磨浆液倾注于平板内，置于红外光下照射120秒，红外光源功率为20W；采用板框压滤，得到滤液，之后用离心4000r pm，取上清液，得到滤液B；
(3)将滤液A以及滤液B混合，得到混合液A；向混合液A中添加酵母菌以及乳酸菌，混合均匀，在30℃，转速120rpm条件下发酵12h，发酵结束后，8000rpm，离心15min，取上清液，得到混合发酵液；
(4)将滤液A以及滤液B按照质量比1：3混合，得到混合液A；将蜗牛蛋白粉40份、珍珠层蛋白冻干粉20份、白砂糖8份、食盐15份、亚麻籽油5份、贝壳粉4份按照重量份数比混合，并加入该混合物质量0.4倍的水，并调节pH 6，得到混合液B，将混合发酵液与混合液B按照质量比1:1混合，搅拌700rpm，搅拌30min，之后调节转速900rpm，滴加弱碱性溶液滴加至体系溶液中，调节pH8，并继续搅拌50min，静置，得到乳化液A；
(5)将乳化液A滴加到珍珠层液中，滴加速度为10滴/秒，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为800rpm，搅拌30min，得到乳化液B；
将麦芽糖糊精按照重量份数比加入到乳化液B中，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为800rpm，搅拌30min，得到乳化液C；之后将所述乳化液C进行高压匀浆处理，在55℃，30MPa压力下均质，均质时间1h，得到均质液；
(6)将上述均质液利用离心式雾化器，离心式雾化器转数为10000rpm，将雾化后的均质液送入干燥机中进行干燥，干燥机的进风温度为180℃，出风温度为80℃，制得的微胶囊粒径为200μm。
步骤(3)中，酵母菌的接种量为3.0×109CFU/L混合液A，所述乳酸菌的接种量为3.5×109CFU/L混合液A。
步骤(4)中的弱碱性溶液为食品级碳酸氢钠溶液，浓度为0.8mol/L。
其中，步骤(5)中的乳化液B与珍珠层液的体积比为20:10。
将生物活性烧烤调味料以及番茄酱、豆瓣酱按照重量份数10:2:2混合后涂布于羊肉表面，放置烤箱内，190℃进行高温烧烤，烤制15min。
实验例7 生物活性烧烤调味料的制备与应用
(1)将花椒2份、陈皮4份、甘草6份、土茯苓12份按照比例混合，加入混合物质量1倍的水，打浆35min，加热蒸煮45℃，20min，过滤，得到滤液A；
(2)将大茴香4份、香叶4份、大青叶3份以及菠菜6份按照比例混合，加入该混合物质量0.5倍的水，进行研磨粉碎后，得到研磨浆液，将研磨浆液置于微波装置中，350W，微波处理15秒；之后将研磨浆液置于超声波装置中，在超声波350W的功率下处理2min；之后将研磨浆液倾注于平板内，置于红外光下照射100秒，红外光源功率为15W；采用板框压滤，得到滤液，之后用离心3500r pm，取上清液，得到滤液B；
(3)将滤液A以及滤液B混合，得到混合液A；向混合液A中添加酵母菌以及乳酸菌，混合均匀，在27℃，转速100rpm条件下发酵10h，发酵结束后，7000rpm，离心12min，取上清液，得到混合发酵液；
(4)将蜗牛蛋白粉25份、珍珠层蛋白冻干粉10份、白砂糖5份、食盐6份、亚麻籽油4份、贝壳粉3份按照重量份数比混合，并加入该混合物质量0.2倍的水，并调节pH 4，得到混合液B，将混合发酵液与混合液B混合，搅拌500rpm，搅拌15min，之后调节转速800rpm，滴加弱碱性溶液滴加至体系溶液中，调节pH7，并继续搅拌30min，静置，得到乳化液A；
(5)将乳化液A滴加到珍珠层液中，滴加速度为5滴/秒，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为600rpm，搅拌25min，得到乳化液B；
将麦芽糊精按照重量份数比加入到乳化液B中，，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为700rpm，搅拌25min，得到乳化液C；之后将所述乳化液C进行高压匀浆处理，在45℃，25MPa压力下均质，均质时间0.6h，得到均质液；
(6)将上述均质液利用离心式雾化器，离心式雾化器转数为9000rpm，将雾化后的均质液送入干燥机中进行干燥，干燥机的进风温度为170℃，出风温度为65℃，制得的微胶囊粒径为150-160μm。
所述步骤(3)中，酵母菌的接种量为1.5×108CFU/L混合液A，所述乳酸菌的接种量为2.0×108CFU/L混合液A。
其中，步骤(4)中，弱碱性溶液为食品级碳酸氢钠溶液，浓度为0.5mol/L。
其中，步骤(5)中的乳化液B与珍珠层液的体积比为15:8。
将生物活性烧烤调味料以及番茄酱、豆瓣酱按照重量份数8:1:1.5混合后涂布于羊肉表面，放置烤箱内，175℃进行高温烧烤，烤制10min。
实验例8 生物活性烧烤调味料的制备与应用
(1)将花椒2.5份、陈皮3份、甘草7份、土茯苓10份按照比例混合，加入混合物质量1倍的水，打浆30min，加热蒸煮45℃，20min，过滤，得到滤液A；
(2)将大茴香3.5份、香叶3.5份、大青叶4份以及菠菜5份按照比例混合，加入该混合物质量0.6倍的水，进行研磨粉碎后，得到研磨浆液，将研磨浆液置于微波装置中，360W，微波处理15秒；之后将研磨浆液置于超声波装置中，在超声波400W的功率下处理1.5min；之后将研磨浆液倾注于平板内，置于红外光下照射100秒，红外光源功率为15W；采用板框压滤，得到滤液，之后用离心3500rpm，取上清液，得到滤液B；
(3)将滤液A以及滤液B混合，得到混合液A；向混合液A中添加酵母菌以及乳酸菌，混合均匀，在28℃，转速100rpm条件下发酵10h，发酵结束后，7000rpm，离心12min，取上清液，得到混合发酵液；
(4)将蜗牛蛋白粉28份、珍珠层蛋白冻干粉11份、白砂糖5份、食盐7份、亚麻籽油3.5份、贝壳粉3份按照重量份数比混合，并加入该混合物质量0.3倍的水，并调节pH 4，得到混合液B，将混合发酵液与混合液B混合，搅拌500rpm，搅拌15min，之后调节转速800rpm，滴加弱碱性溶液滴加至体系溶液中，调节pH7，并继续搅拌30min，静置，得到乳化液A；
(5)将乳化液A滴加到珍珠层液中，滴加速度为5滴/秒，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为600rpm，搅拌25min，得到乳化液B；
将麦芽糊精按照重量份数比加入到乳化液B中，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为700rpm，搅拌25min，得到乳化液C；之后将所述乳化液C进行高压匀浆处理，在45℃，26MPa压力下均质，均质时间0.5h，得到均质液；
(6)将上述均质液利用离心式雾化器，离心式雾化器转数为9000rpm，将雾化后的均质液送入干燥机中进行干燥，干燥机的进风温度为170℃，出风温度为70℃，制得的微胶囊粒径为150-160μm。
所述步骤(3)中，酵母菌的接种量为2.0×108CFU/L混合液A，所述乳酸菌的接种量为2.5×108CFU/L混合液A。
其中，步骤(4)中的弱碱性溶液为食品级碳酸钠溶液，浓度为0.8mol/L。其中，步骤(5)中的乳化液B与珍珠层液的体积比为15:8。
将生物活性烧烤调味料以及番茄酱、豆瓣酱按照重量份数7.5:1.5:1混合后涂布于羊肉表面，放置烤箱内，180℃进行高温烧烤，烤制15min。
实施例9 对比例
(1)将花椒2.5份、陈皮3份、甘草7份、土茯苓10份按照比例混合，加入混合物质量1倍的水，再混合打浆30min，加热蒸煮45℃，20min，过滤，得到滤液A；
(2)将大茴香3.5份、香叶3.5份、大青叶4份以及菠菜5份按照比例混合，加入该混合物质量0.6倍的水，直接采用板框压滤，得到滤液，之后用离心3500rpm，取上清液，得到滤液B；
(3)将滤液A以及滤液B混合；
(4)将蜗牛蛋白粉28份、珍珠层蛋白冻干粉11份、白砂糖5份、食盐7份、亚麻籽油3.5份、贝壳粉3份按照重量份数比混合，并加入该混合物质量0.3倍的水，得到蛋白混合液；
(5)将珍珠层液、麦芽糊精、滤液A以及滤液B混合液以及蛋白混合液直接混合在45℃，26MPa压力下均质，均质时间0.5-1h，得到均质液；
(6)将上述均质液利用离心式雾化器，离心式雾化器转数为9000rpm，将雾化后的均质液送入干燥机中进行干燥，干燥机的进风温度为170℃，出风温度为70℃，制得的微胶囊粒径为150-160μm。
其中，步骤(5)中的蛋白混合液与珍珠层液的体积比为15:8。
将生物活性烧烤调味料以及番茄酱、豆瓣酱按照重量份数7.5:1.5:1混合后涂布于羊肉表面，放置烤箱内，180℃进行高温烧烤，烤制15min。
实施例10 实验例生物活性烧烤调味料的抗氧化性能测试
样品分类：对照组a：市售普通烧烤调味料；对照组1：利用实施例9制备的生物活性烧烤调味料(未经高温烧烤)；对照组2：对照组1经过180℃,15min高温烧烤后的调味料；实验组1：利用实施例8制备的生物活性烧烤调味料(未经高温烧烤)；实验组2：实验组1经过180℃,15min高温烧烤后的调味料；
样品处理：称取样品，放入预冷的研钵中，加入4℃下预冷的蒸馏水，样品和蒸馏水的质量体积比为0.1g：0.5ml，在冰浴中迅速研磨成浆,转入离心管,在4℃下，10000-12000rpm离心15分钟，取上清液，得到待测溶液，并置入4℃冰箱中保存；
对照组2和实验组2的样品制备：称取一定质量的生物活性烧烤调味料，经过180℃，15min的高温烧烤处理后，再通过称取质量，加水补齐因烧烤流失的重量，并将其进行溶解，其他样品处理步骤同上。
(一)生物活性烧烤调味料对羟自由基的清除作用：
实验采用Fenton反应体系。在试管中加入6mmol/L FeSO4 2mL，不同浓度VC或待测溶液2mL，6mmol/L H2O2溶液2mL，摇匀，静置10min，再加入6mmol/L水杨酸-乙醇2mL反应，37℃温浴30min，于510nm测吸光值。
清除率s＝[A0-(Ai-AiO)]/A0×100％
式中：A0为对照,不加样品；Ai为某浓度时的吸光值；AiO为无显色剂时的该浓度的本底值。
表1为对照品VC，市售调味料以及本发明实施例8、实施例9制备的调味料对羟自由基的清除率的对照表
表1 羟自由基的清除率的对照表
数据表明，本发明的生物活性烧烤调味料对羟自由基的清除能力显著，且随着其浓度的增加而增大，当浓度为16mg/mL时，对羟自由基清除率可达到88.65％；即使经过180℃，15min的高温烧烤处理后，其抗氧化性仍然保持在71.75％，仍然具备较强的抗氧化特性。故本发明的生物活性烧烤调味料具有很强的抗氧化功能。这加大了生物活性烧烤调味料的抗氧化的功能性价值。
同时可以看出，在生物活性烧烤调味料经过高温烘焙之后，依然具有较高的抗氧化性能。
(二)生物活性烧烤调味料对超氧阴离子(O2-)的清除作用
参照文章“孟丽媛,王凤舞.西兰花多酚提取工艺及其抗氧化活性研究[J].中国食品学报,2013,13(5):62-68”关于测定样品对超氧阴离子(O2-)的清除作用的方法：蛋白多肽样品对超氧阴离子(O2-)的清除作用选取1、2、4、8、16mg/mL蛋白多肽样品溶解液，测定其对超氧阴离子的清除率。其中，样品分组、处理以及分类同上。
表2 超氧阴离子的清除率的对照表
需要说明的是：本发明实施例5-7制备的蛋白多肽粉同样具有上述实施例8的实验对照组1为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料，唯一不同的是珍珠层蛋白冻干粉的制备采用的是超微粉碎的方法，其他方法步骤同本发明；
实验对照组2为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是不添加蜗牛蛋白粉，其他方法步骤同本发明；
实验对照组3为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是，在制备过程中蜗牛蛋白粉的制备有所不同，步骤(1)中，蜗牛饲料液替换为普通白菜叶浆液，其他方法步骤同本发明；
实验对照组4为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料，唯一不同的是，不添加珍珠层液，而添加等质量的经过超微粉碎的珍珠层粉，其他方法步骤同本发明；
实验对照组5为按照实施例9制备的生物活性烧烤调味料制备。
实验效果，实施例5-8之间及与上述实验效果差异性不大。
实施例11 超氧化歧化酶的测定
测定方法：称取样品0.1克，放入预冷的研钵中，加入4℃下预冷的pH7.5 0.1MTis-HCl缓冲液(内含1mM EDTA)0.5ml，在冰浴中迅速研磨成浆,转入离心管,在4℃下，10000-12000rpm离心15分钟，取上清液置入4℃冰箱中保存，用于测定SOD的活性,所有的样品均在离心后6小时内测完。
将室温调至25℃，用在25℃水浴中预热过的pH8.2，50mmol/L的Tis-HCl缓冲液在32nm处先将吸光值调零，另取一只光径1cm的石英比色杯，依次加入在25℃水浴中预热过pH8.2，50mmol/L的Tis-HCl缓冲液3ml、45mmol/L邻苯三酚溶液6.5μL，加盖摇匀后测320nm处的吸光值，取出比色杯加入在25℃水浴中预热过的酶液6.5μL,摇匀后立即计时,每隔30秒测一次吸光值,连续测3分钟,以吸光值对时间作图,计算每分钟吸光值的减少值。本实验条件下SOD的活性单位定义为25℃下，使每毫升反应液的自氧化速率抑50％的酶量定为一个单位。
其中市售对照组为来自普通市售的烧烤调味料；
实验对照组1为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是不添加蜗牛蛋白粉，其他方法步骤同本发明；
实验对照组2为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是，在制备过程中蜗牛蛋白粉的制备有所不同，步骤(1)中，蜗牛饲料液替换为普通白菜叶浆液，其他方法步骤同本发明；
实验对照组3为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是，在制备过程中蜗牛蛋白粉的制备有所不同，步骤(3)中，继续饲喂蜗牛，10-20天后直接冷冻，机械去壳后，破碎，其他方法步骤同本发明；
实验对照组4为按照实施例9制备的生物活性烧烤调味料制备。
测定结果如表3：
表3 超氧化歧化酶活力比较
实施例12 抗溃疡实验
实验方法
将大鼠随机分组，分别分成不同组别，按照原料不同剂量(0.5g/100g水，2g/100g水)进行喂食；每组各10只动物，雌雄各半，体质量(180±10)g。依文献方法进行实验，大鼠禁食不禁水24h后，各给药组依照给药剂量设计，将珍珠层粉(原料粉或超微粉)与蒸馏水混匀制成药液，灌胃给药；空白对照组灌服等容积蒸馏水，灌胃体积10mL/kg。给药后1h，每只大鼠灌服1.5mL盐酸乙醇溶液(每100mL盐酸乙醇溶液含盐酸1.7mL，无水乙醇60mL，蒸馏水配制)，再过1h后处死动物，摘取胃，甲醛固定后沿胃大弯剪开胃壁，将胃外翻，用清水轻用清水轻轻洗去胃内容物。观察胃黏膜损伤情况。溃疡指数计算方法为以胃黏膜条索状损伤的长度计分，每1mm为1分，若长度小于1mm者计0.5分。
其中，空白对照组为蒸馏水；市售对照组1为市售普通的烧烤调味料；
实验对照组1为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料，唯一不同的是珍珠层蛋白冻干粉的制备采用的是超微粉碎的方法，其他方法步骤同本发明；
实验对照组2为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是不添加蜗牛蛋白粉，其他方法步骤同本发明；
实验对照组3为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是，在制备过程中蜗牛蛋白粉的制备有所不同，步骤(1)中，蜗牛饲料液替换为普通白菜叶浆液，其他方法步骤同本发明；
实验对照组4为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料，唯一不同的是，不添加珍珠层液，而添加等质量的经过超微粉碎的珍珠层粉，其他方法步骤同本发明；
实验对照组5为按照实施例9制备的生物活性烧烤调味料制备。
实验组1-4分别为本发明实施例5-8制备的生物活性烧烤调味料，在经过180℃，15min的高温烧烤处理后调味料，再通过称取质量，加水补齐因烧烤流失的重量，并将其进行溶解，其他样品处理步骤同上。
结果如下：
表4 调味料放入盐酸乙醇溃疡模型溃疡指数比较结果
从表4中可以看出，市售的普通烧烤调味料基本无改善胃溃疡的作用，而本发明的实验组和实验对照组均有抗胃溃疡的效果；实验组抗胃溃疡效果多优于实验对照组。本发明的烧烤调味料更有利于发挥其抗溃疡的疗效。
另外，通过测试，发现利用本发明制备的珍珠层蛋白冻干粉的粉体粒度降低，粉体均匀度提高，而水分和碳酸钙量变化并不明显；通过测定差角和压缩度发现，二者的流动性无明显差别而通过对大鼠急性胃黏膜损伤影响的药效学试验发现，用本发明制备的珍珠层蛋白冻干粉也可以明显增强珍珠层粉抗溃疡的药效。
实施例13 视力功能性评价
针对于烧烤食品对视力的影响，本实验对其是否对食用烧烤食物后，对视力下降有缓解的功效进行验证。
其中，市售对照组1为市售普通的烧烤调味料；
实验对照组1为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是不添加蜗牛蛋白粉，其他方法步骤同本发明；
实验对照组2为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是，在制备过程中蜗牛蛋白粉的制备有所不同，步骤(1)中，蜗牛饲料液替换为普通白菜叶浆液，其他方法步骤同本发明；
实验对照组3为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是蜗牛蛋白粉的步骤(1)蜗牛饲料液的制备过程中，不添加枸杞；按照上述步骤的重量比取枸杞8份、水12份，100℃蒸煮10-30min，将枸杞混合液打浆后与蜗牛蛋白粉的步骤(3)中的一次匀浆混合，其他方法步骤同本发明；。
实验对照组4为按照实施例8制备的生物活性烧烤调味料制备，唯一不同的是在生物活性烧烤调味料的制备方法的步骤(1)中不添加菠菜，步骤(2)得到滤液B后，按质量比取5份菠菜，经过粉碎、匀浆、过滤后的上清液直接添加至滤液B中，后续制备步骤与实施例8相同；
实验对照组5为按照实施例9制备的生物活性烧烤调味料制备。
实验组1-3分别为本发明实施例5、6、8制备的生物活性烧烤调味料。
实验步骤，选择平均年龄在15-25岁之间、视力水平相当、喜爱吃烧烤的人群，分为9组，每组40人，在实验开始前以及结束后对每个人的视力进行检测。实验开始，9组人分别在每周三、五、周日食用相同的烧烤牛肉，烧烤温度为190℃，25分钟，唯一不同的是每组在烧烤前分别使用对应不同的烧烤酱料；实验周期为3周。
由表5、6可见，4周后，不同组别的左、右眼远视力变化以及改善情况。
表5 试验前后远视力变化情况
注：**表示与实验前比较P＜0.01
针对于表5可以看出，在食用过烧烤食物后，对于食用普通市售的烧烤料的食物，其视力确实略有下降，而采用实验对照组1-2的烧烤料对其的视力下降有缓解的作用，实验对照组3-4较实验对照组1-2具有更明显的缓解作用；而实验组1-3不仅对视力有显著的缓解作用，而且还可以改善经常食用烧烤类食物的人群，具有显著的特性。
针对于食用烧烤食物前后，眼睛出现的症状比例进行调查，详见表6.
表6 试验前后远视力症状情况
其中表6的A表示出现对应症状的人数；B表示未出现对应症状的人数。
由表6可以看出，在食用过烧烤食物后，对于食用普通市售的烧烤料食物的组别中，其眼睛出现明显的眼胀、眼痛、畏光、视物模糊、眼干涩占据大多数，而采用实验对照组1-2的烧烤料对其的眼睛症状有缓解的作用，实验对照组3-4较实验对照组1-2具有更明显的缓解作用；而实验组1-3不仅对眼睛症状有显著的缓解作用，而且还可以改善经常食用烧烤类食物的人群，具有显著的特性。
实施例14 感官评价
实验步骤如下：
主料：羊肉500g
辅料：本发明实施例5-8制备的用于烧烤制作的调味料；对比例1和2分别为市售同类烧烤调味料产品2种；对比例3为按照实施例9制备的调味料。
做法：
①羊肉清洗切成片。
②将本发明的烧烤调味料与水1：7混合，加入适量食盐、小苏打，将羊肉片浸泡2-3小时。
③将浸泡后的羊肉片在木炭上烧烤或者直接用烤箱进行烧烤。
评定方法：选择不同年龄阶段，5-15岁、25-30岁、35-45岁、50-65岁、75-85岁各5人组成评定人员，经品尝后进行综合评分。评分内容包括肉香味、鲜度、留香时间和异味。评分依据如下表所示。每项指标评定结果取八位评定人员得分的平均值，因子及权重如表7，评定结果如表8：
表7 因子及权重
因子 肉香味 鲜度 留香时间 异味
权重 0.6 0.5 0.3 -0.4
表8 (评分项每一项满分为10分)
试验组 肉香味 鲜度 留香时间 膻味或异味 综合评分
对比例1 3.5 7.6 6 5 5.7
对比例2 4.3 7.4 6 5 6.08
对比例3 5.2 7.8 7.5 3 8.07
实施例5 9.5 9.2 9.6 1.0 12.78
实施例6 9.2 9.4 9.5 1.5 12.47
实施例7 9.4 9.3 9.7 1.4 12.64
实施例8 9.5 9.5 9.6 1.2 12.85
从表7、8中可以看出，本发明的烧烤制作的生物活性烧烤调味料在肉香味、鲜度、留香时间上都优于市场上的同类产品，特别是针对羊肉易产生膻味的肉类，可以在保持肉类鲜味的基础上，很好地中和羊肉膻味的效果。本发明的用于烧烤制作的调味料营养丰富，口感鲜美，肉香味明显、醇厚。本发明产品在烧烤前腌制和烧烤时添加，能减少烹饪的时间和劳动强度，增强烧烤的鲜美口感和醇厚风味，是其回味绵长。而且，上述用于烧烤制作的调味料在室温下可存放一年之久，随用随取，使用方便快捷。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种生物活性烧烤调味料的制备方法，其特征在于：步骤如下：
(1)将花椒、陈皮、甘草、土茯苓按照比例混合，加入混合物质量0.4-1.5倍的水，打浆20-40min，加热蒸煮40-55℃，15-30min，过滤，得到滤液A；
(2)将大茴香、香叶、大青叶以及菠菜按照比例混合，加入混合物质量0.4-1倍的水，进行研磨粉碎后，得到研磨浆液，将研磨浆液置于微波装置中，300-400W，微波处理10-25秒；之后将微波处理后的研磨浆液置于超声波装置中，在超声波300W-500W的功率下处理0.5-3min；之后将超声处理后的研磨浆液倾注于平板内，置于红外光下照射70-120秒，红外光源功率为10-20W；采用板框压滤，得到滤液，之后用离心3000-4000rpm，取上清液，得到滤液B；
(3)将滤液A以及滤液B混合，得到混合液A；向混合液A中添加酵母菌以及乳酸菌，混合均匀，在25-30℃，搅拌转速80-120rpm条件下发酵6-12h，发酵结束后，离心转速6000-8000rpm，离心10-15min，取上清液，得到混合发酵液；
(4)将蜗牛蛋白粉、珍珠层蛋白冻干粉、白砂糖、食盐、亚麻籽油、贝壳粉按照重量份数比混合，并加入该混合物质量0.2-0.4倍的水，并调节pH 4-6，得到混合液B，将混合发酵液与混合液B混合，搅拌转速400-700rpm，搅拌10-30min，之后调节转速700-900rpm，滴加弱碱性溶液滴加至体系溶液中，调节pH7-8，并继续搅拌20-50min，静置，得到乳化液A；
(5)将乳化液A滴加到珍珠层液中，滴加速度为1-10滴/秒，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为500-800rpm，搅拌20-30min，得到乳化液B；
将麦芽糖糊精按照重量份数比加入到乳化液B中，同时对溶液进行搅拌，搅拌转速为600-800rpm，搅拌20-30min，得到乳化液C；之后将所述乳化液C进行高压匀浆处理，在40-55℃，20-30MPa压力下均质，均质时间0.5-1h，得到均质液；
(6)将上述均质液利用离心式雾化器，离心式雾化器转数为8000-10000rpm，将雾化后的均质液送入干燥机中进行干燥，干燥机的进风温度为160-180℃，出风温度为50-80℃，制得的微胶囊粒径为110-200μm。
2.如权利要求1所述的一种生物活性烧烤调味料的制备方法，其特征在于：所述生物活性烧烤调味料主要由以下重量份数的原料制备：白砂糖2-8份、食盐5-15份、花椒0.5-5份、陈皮1-5份、甘草5-10份、土茯苓5-15份、大茴香2-5份、香叶2-5份、大青叶2-5份、亚麻籽油1-5份、菠菜2-8份、蜗牛蛋白粉20-40份、珍珠层蛋白冻干粉5-20份、珍珠层液5-20份、贝壳粉1-4份、麦芽糊精4-8份。
3.如权利要求1所述的一种生物活性烧烤调味料的制备方法，其特征在于：所述生物活性烧烤调味料主要由以下重量份数的原料制备：白砂糖4-6份、食盐6-8份、花椒1-4份、陈皮2-4份、甘草6-8份、土茯苓8-12份、大茴香3-4份、香叶3-4份、大青叶3-4份、亚麻籽油2-4份、菠菜4-6份、蜗牛蛋白粉25-35份、珍珠层蛋白冻干粉8-16份、珍珠层液8-15份、贝壳粉2-3份、麦芽糊精6-7份。
4.如权利要求1所述的一种生物活性烧烤调味料的制备方法，其特征在于：
所述步骤(3)中，酵母菌的接种量为1.0×108-3.0×109CFU/L混合液A，所述乳酸菌的接种量为1.5×108-3.5×109CFU/L混合液A；所述步骤(4)中的乳化液B与珍珠层液的体积比为10-20:5-10。
5.如权利要求1所述的一种生物活性烧烤调味料的制备方法，其特征在于：所述蜗牛蛋白粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)蜗牛饲料液的制备：将陈皮、金银花、甘草、小茴香、布楂叶、大茴香、罗勒、仙草、枸杞与水按重量比混合，100℃蒸煮10-30min，打浆后，冷却至室温后与红糖、蜂蜜按重量比混合、均质；向其中加入酵母菌，10-15℃低温发酵3-6h，转速150-180rpm，发酵结束后，得到蜗牛饲料液；所述蜗牛饲料液的重量份数组成为：陈皮1-5份，金银花1-5份、甘草1-5份、小茴香5-15份、布楂叶1-5份、大茴香0.1-3份、罗勒0.1-2份、仙草1-10份、枸杞5-10份、红糖10-30份、蜂蜜1-10份、水30-80份；
(2)选择体重为45-55克，月龄为3.5月-5.5月的蜗牛，将蜗牛饲料液饲喂蜗牛，每天饲喂量为蜗牛体重的7％-15％，并于温度15～30℃，空气湿度50％～90％，连续饲喂20-50d；
(3)喂养后，将蜗牛转移至温度为5-10℃，密闭的饲养装置中，向装置中冲入氮气同时打开排气阀，通气50-80s后，关闭氮气和排气阀，之后向密闭装置中冲入氧气同时开启排气阀，通气15-25s后关闭氧气和排气阀，密闭饲养10-30min后；向装置中冲入氮气同时打开排气阀，通气60-100s后，关闭氮气和排气阀，之后向密闭装置中冲入氧气同时开启排气阀，通气5-15s后关闭氧气和排气阀，密闭饲养5-10min后，迅速置于-4～-20℃冷冻，机械去壳后，破碎，研磨成匀浆，得到一次匀浆；
将所述一次匀浆进行超声，200-600W下处理20-50min；一次匀浆使用超声波破碎仪的处理方式是：超声波处理6-10s、间歇6-10s，再超声波处理6-10s、间歇6-10s，持续按上述超声波处理时间、间歇时间操作，当超声波处理时间和间歇时间之和达到20-50min时，即完成处理，得到二次匀浆；将二次匀浆置于-18～-22℃冷冻10-30min，破碎，研磨，得到蜗牛蛋白粉。
6.如权利要求1所述的一种生物活性烧烤调味料的制备方法，其特征在于：所述珍珠层蛋白冻干粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)将经处理后的珍珠层进行机械粉碎，过100-200目筛，得到珍珠层粉末；向珍珠层粉末中加入质量体积比10％-50％的醋酸溶液，搅拌至珍珠层粉末全部溶解,过滤，得到滤液，并用蒸馏水洗涤沉淀，将洗涤液转入滤液，最终获得珍珠层清液；
(2)将珍珠层清液以15-25mL/min流速经蠕动泵泵送高压脉冲电场处理室，电场强度20-40k V/cm，脉冲数10-20个；
(3)发酵-微波提取：调节珍珠层清液pH至5.0-6.5，向珍珠层清液中加入酵母菌以及乳酸菌，混合均匀，80-120rpm，20-28℃发酵6-10h，发酵结束后，6000-8000rpm离心10-15min，去上清，将上清液置于微波辐射下，磁力搅拌，在微波功率200W-300W条件下，提取5-10min；所述酵母菌的接种量为1.0×108-4.0×109CFU/L珍珠层清液，所述乳酸菌的接种量为1.5×108-4.5×109CFU/L珍珠层清液；
(4)将上清液经过冷冻干燥至珍珠层蛋白冻干粉。
7.如权利要求1所述的一种生物活性烧烤调味料的制备方法，其特征在于：所述珍珠层液的制备方法，包括如下步骤：
(1)将珍珠层进行切边处理，将经处理后的珍珠层进行机械粉碎，使粉碎后颗粒的平均直径不大于1-2cm；
(2)将珍珠层颗粒在以15-25mL/min流速经蠕动泵泵送高压脉冲电场处理室，电场强度15-30k V/cm，脉冲数10-15个，之后将珍珠层颗粒置入微波装置，在200W-300W条件下，处理2-8min；
(3)将经过处理后的珍珠层颗粒置入提取提纯设备，进行自燃式连续式干馏炭化，温度控制在550-650℃；然后进行两级冷凝，并将两级冷凝所得的液体在混合罐中混合后静置；将混合液于50-60℃、真空度0.1-0.15Mpa以上的条件下进行一级蒸馏，至馏出体积为原液体积的80-90％，进行冷凝，其中，在馏出体积为原液体积的80-90％时可再加入新的混合液，继续按照上述步骤进行蒸馏和冷凝，最终得到珍珠层液。
8.如权利要求1所述的一种生物活性烧烤调味料的制备方法，其特征在于：所述贝壳粉的制备方法，包括如下步骤：
(1)将贝壳进行初步粉碎、清洗后，之后将粉碎贝壳置于干燥箱中，70-90℃，烘干0.5-2.5h；将粉碎贝壳继续粉碎2-8min，并过50-100目筛，得到贝壳粗粉；
(2)向乳酸菌液体培养基中接入乳酸菌，28-35℃静置培养4-8h，得到乳酸菌发酵液；
(3)将贝壳粗粉与乳酸菌发酵液按照质量比1-5:20-100混合，继续静置发酵4-8h，之后8000-10000rpm离心5-10min，取上清，之后将上清液进行微波处理，功率150-200W，处理20-40min；反应结束后，冷却在室温，真空抽滤两次；残渣烘干后称重；滤液置于50-65℃烘箱内，烘干，研磨，即得贝壳粉。
9.如权利要求8所述的一种生物活性烧烤调味料的制备方法，其特征在于：所述贝壳为鲍贝壳、文蛤壳、红螺壳、生蚝壳、海螺壳中的一种或多种组合。
10.权利要求1-9任一所述生物活性烧烤调味料的制备方法制得的生物活性烧烤调味料的应用。
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