CN107753997A - 一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜及其制备工艺 - Google Patents

一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜及其制备工艺 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜及其制备工艺，包括有重组人超氧化物歧化酶、羧甲基壳聚糖、明胶、甘油、水和三乙醇胺。先将明胶、羧甲基壳聚糖混合；然后加入水，加热至45‑65℃，搅拌至完全溶解；然后加入甘油、三乙醇胺，搅拌至完全溶解；然后置于28‑32℃条件下恒温10‑30min；然后将重组人超氧化物歧化酶加入，搅拌至完全溶解；然后放入四氟乙烯模具盒内，控制膜厚度小于1.5cm；然后放入冻干机，冻干；然后从模具盒中取出后，在膜上打出透气孔；然后包装，并进行灭菌处理，得抑菌修护膜。能对小伤口形成有效的保护，产生明显的抑菌效果和修复作用；蛋白质活性高，膜的韧性好，不需要利用无纺布进行制备，使用时不会造成创口的二次伤害。

Description

一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜及其制备工艺
技术领域
本发明涉及一种抑菌修护膜及其制备工艺，特别是一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜及其制备工艺。
背景技术
自然界中的大部分细菌和真菌，表面携带大量的负电荷。所以带有正电荷的物质，比如纳米银离子、壳聚糖等，均具备一定的抑菌效果。而自然存在的物质，不会让细菌产生耐药性，从而具有较强的安全性。
重组人超氧化物歧化酶蛋白质，在能有效促进创口的愈合，减少自由基，减少瘢痕、抵抗炎症，减少创口渗出等现象。
目前市场上常见的膜制剂，多采用硅酮等人工合成且完全疏水的基质制备而成，对小伤口不能形成有效的保护，也不能产生明显的抑菌效果和修复作用，更为重要的是，硅酮胶在生产过程中使用的高温和有机试剂，是修复创口物质所不能承受的，会严重降低修复创口物质的活性。而通过无纺布等制备的类似膜制剂，虽然在无纺布上富有抗抑菌以及修护成分，但不能被皮肤吸收，同时，在最终去除无纺布时，非常可能产生对于创口的二次伤害。
综上，现目前的修复膜存在对小伤口不能形成有效的保护，不能产生明显的抑菌效果和修复作用的缺陷；现目前的修复膜制备工艺存在蛋白质活性差，膜的韧性差，需要利用无纺布进行制备，使用时容易造成创口的二次伤害。
发明内容
本发明的目的在于，提供一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜及其制备工艺。本发明的修复膜具有能对小伤口形成有效的保护，产生明显的抑菌效果和修复作用的特点；本发明的修复膜制备工艺具有蛋白质活性高，膜的韧性好，不需要利用无纺布进行制备，使用时不会造成创口的二次伤害的特点。
本发明的技术方案：一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜，按重量份计，包括有重组人超氧化物歧化酶0.1-1份、羧甲基壳聚糖10-20份、明胶250-350份、甘油50-150份、水559-579份和三乙醇胺0.5-1.5份。
前述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜，按重量份计，包括有重组人超氧化物歧化酶0.7-1份、羧甲基壳聚糖13-17份、明胶280-320份、甘油70-120份、水564-574份和三乙醇胺0.8-1.2份。
前述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜，按重量份计，包括有重组人超氧化物歧化酶1份、羧甲基壳聚糖15份、明胶300份、甘油100份、水569份和三乙醇胺1份。
一种前述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，包括如下步骤：
1)将明胶、羧甲基壳聚糖混合，得A品；
2)向A品中加入水，加热至45-65℃，搅拌至A品完全溶解，得B品；
3)向B品中加入甘油、三乙醇胺，搅拌至完全溶解，得C品；
4)将C品置于28-32℃条件下恒温10-30min，得D品；
5)将重组人超氧化物歧化酶添加至D品，搅拌至完全溶解，得E品；
6)将E品放入四氟乙烯模具盒内，控制膜厚度小于1.5cm，得F品；
7)将F品放入冻干机，冻干，得G品；
8)将G品从模具盒中取出后，在膜上打出透气孔，得H品；
9)将H品包装，并进行灭菌处理，得抑菌修护膜。
前述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，所述步骤步骤2)中，加热温度为60℃。
前述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，所述步骤步骤4)中，是将C品置于30℃下恒温20min。
前述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，所述步骤步骤6)中，控制膜厚度为0.5-0.8cm。
前述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，所述步骤步骤7)中，冻干是先在-45℃、常压下预冻4小时，然后在-25℃、8Pa的真空条件下处理11小时，然后在-10℃、8Pa的真空条件下处理3小时，然后在0℃、8Pa的真空条件下处理4小时，然后在10℃、8Pa的真空条件下处理4小时，再在25℃、8Pa的真空条件下处理4小时。
前述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，所述步骤8)中，是利用激光打出透气孔。
前述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，所述步骤9)中，灭菌处理是利用辐射剂量为25000Gy的γ射线进行。
本发明的有益效果：
本发明所生产的膜制品具有较好的抑菌效果，能对小伤口形成有效的保护，产生明显的抑菌效果和修复作用。
本发明解决了现有膜制剂在制备过程中需要高温或者需要有机溶剂的情况，利用真空冻干技术实现由水凝胶向膜制剂的转变，减少了功能性物质在高温或有机溶剂存在的条件下活性的损失。
现有膜制剂制备过程中约在70度左右，制备过程中需要使用到乙醇、甲醇等有机试剂。本发明中，制备温度最终控制在30度以下。
本发明所生产的膜制品能够被皮肤和组织代谢掉，不需要后期去除，且具有较好的韧性和强度，不需要通过无纺布制备。
实验研究数据：
通过实验或临床观察，证明本发明的有益效果。
一、水蒸气透过率
参考标准：GB 1037；试验设备：W3/030水蒸气透过率测试仪
试验方法：于浸泡液中取出膜试样，使之在平整状态下晾至微干后裁取直径为74mm的圆片。因试样较软，在注入蒸馏水的透湿杯中放置专用支撑架，再置入试样，密封透湿杯盖。将透湿杯平稳的移入仪器内部。设备自动将试样两侧的湿度差控制的90％RH，试验温度为38℃。水蒸气在湿度差的作用下，从透湿杯中高湿一侧(即接近杯中水面一侧)透过试样进入干燥的一侧，通过测试透湿杯的重量随时间的变化计算出试样的水蒸气透过率。
表1.水蒸气透过率测试结果
备注：1号试样透过面积：42cm2，2号试样透过面积：38cm2。
结论：本实验数据说明，本品具有一定透气性，保证了创口位置代谢物的排除，减少了二次感染的可能性。
二、断裂强度、断裂伸长率测试方法和标准
参考标准：GB/T 1040.1-2006、GB/T 1040.3-2006；试验设备：XLW(PC)智能电子拉力试验机
试验方法：于浸泡液中取出试样，使之在平整状态下晾至微干后裁取至少5个宽5mm，长度不小于100mm的长条试样，按照智能拉力试验机操作说明安装，开始试验。试样拉断后，系统自动显示试样的拉断力和断裂伸长率，由此计算出试样的断裂强度。本次试验对象同水蒸气透过性能测试试样，测试结果见表2。
表2.断裂强度和断裂伸长率测试结果
试样名称 断裂强度(MPa) 断裂伸长率(％)
1号 1.432 20.46
2号 1.378 21.32
结论：本实验数据说明，本品具有一定的强度，能有效对创口进行支撑和保护。
三、抑菌实验
实验用具和材料：霉菌培养皿，无菌吸管(或针筒)，圆片滤纸(直径2cm)，带玻璃珠的无菌水，带过滤漏斗的三角牌，镊子，接种针(环)，熔化状态的琼脂培养基(最好保温于45℃左右水浴中)，一定浓度的药剂，供试验用的菌种。
实验方法：
1.用接种环挑取各试管斜面的菌种于带玻璃珠的无菌水中，用手振荡数分钟使孢子分散，过滤后制成混合孢子悬液。
2.用无菌吸管(或针筒)向各培养皿中注入一定浓度的混合孢子悬浮液0.5mL。
3.向各培养皿内注入15ml～20ml的熔化状琼脂培养基(约45℃)，将菌液与培养基混合均匀，待其冷却。
4.用镊子将圆片滤纸在不同浓度的防霉剂中浸渍片刻，取出置于带菌培养基平板的中央，盖上盖子。
5.置适宜温度下，培养48h，观察滤纸片圆片周围抑菌圈的有无及大小。实验结果见表3。
表3：膜制剂对不同细菌的有效抑制率
结论：本品能有效的抑制细菌的繁殖，避免创口被金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、白色念珠菌等常见的细菌感染。
四、重组人超氧化物歧化酶活性保留实验
实验仪器与用具：研钵、高速冷冻离心机、分光光度计、计时器、微量移液枪、离心管、光照箱(光照度为4000lx)、指形玻璃管、容量瓶(100ml、200ml、1000ml)
实验方法：按照表4所列内容加入各种溶液(注意最后加入核黄素溶液)。其中3支为测定管，2支对照管。混匀后将1支对照管置于暗处，其他各管置于4000lx日光灯下反应下反应15min后，立即置于暗处终止反应。以避光管作为空白参比调零，分别测定560nm处其他各管的吸光度。活性测定结果见表5.
表4：测定SOD活性时各试剂加入量
表5：重组人超氧化物歧化酶制剂活性收率
结论：本品在制备过程中使用低温，对温度敏感的蛋白质具有较强的保护作用，蛋白活性能得到有效的保持。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明，但并不作为对本发明限制的依据。
本发明的实施例
实施例1：一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜，按重量份计，包括有重组人超氧化物歧化酶1份、羧甲基壳聚糖15份、明胶300份、甘油100份、水569份和三乙醇胺1份。
实施例2：一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜，按重量份计，包括有重组人超氧化物歧化酶0.1份、羧甲基壳聚糖10份、明胶250份、甘油50份、水559份和三乙醇胺0.5份。
实施例3：一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜，按重量份计，包括有重组人超氧化物歧化酶1份、羧甲基壳聚糖20份、明胶350份、甘油150份、水579份和三乙醇胺1.5份。
实施例4：一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，步骤如下：
1)将明胶、羧甲基壳聚糖混合，得A品；
2)向A品中加入水，加热至60℃，搅拌至A品完全溶解，得B品；
3)向B品中加入甘油、三乙醇胺，搅拌至完全溶解，得C品；
4)将C品置于30℃条件下恒温20min，得D品；
5)将重组人超氧化物歧化酶添加至D品，搅拌至完全溶解，得E品；
6)将E品放入四氟乙烯模具盒内，控制膜厚度为0.7cm，得F品；
7)将F品放入冻干机，冻干，得G品；
8)将G品从模具盒中取出后，利用激光打出透气孔在膜上打出透气孔，得H品；
9)将H品包装，并利用辐射剂量为25000Gy的γ射线进行灭菌处理，得抑菌修护膜。
所述冻干是先在-45℃、常压下预冻4小时，然后在-25℃、8Pa的真空条件下处理11小时，然后在-10℃、8Pa的真空条件下处理3小时，然后在0℃、8Pa的真空条件下处理4小时，然后在10℃、8Pa的真空条件下处理4小时，再在25℃、8Pa的真空条件下处理4小时。
实施例5：一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，步骤如下：
1)将明胶、羧甲基壳聚糖混合，得A品；
2)向A品中加入水，加热至45℃，搅拌至A品完全溶解，得B品；
3)向B品中加入甘油、三乙醇胺，搅拌至完全溶解，得C品；
4)将C品置于28℃条件下恒温30min，得D品；
5)将重组人超氧化物歧化酶添加至D品，搅拌至完全溶解，得E品；
6)将E品放入四氟乙烯模具盒内，控制膜厚度为0.5cm，得F品；
7)将F品放入冻干机，冻干，得G品；
8)将G品从模具盒中取出后，利用激光打出透气孔在膜上打出透气孔，得H品；
9)将H品包装，并利用辐射剂量为25000Gy的γ射线进行灭菌处理，得抑菌修护膜。
所述冻干是先在-45℃、常压下预冻4小时，然后在-25℃、8Pa的真空条件下处理11小时，然后在-10℃、8Pa的真空条件下处理3小时，然后在0℃、8Pa的真空条件下处理4小时，然后在10℃、8Pa的真空条件下处理4小时，再在25℃、8Pa的真空条件下处理4小时。
实施例6：一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，步骤如下：
1)将明胶、羧甲基壳聚糖混合，得A品；
2)向A品中加入水，加热至65℃，搅拌至A品完全溶解，得B品；
3)向B品中加入甘油、三乙醇胺，搅拌至完全溶解，得C品；
4)将C品置于32℃条件下恒温10min，得D品；
5)将重组人超氧化物歧化酶添加至D品，搅拌至完全溶解，得E品；
6)将E品放入四氟乙烯模具盒内，控制膜厚度为1.5cm，得F品；
7)将F品放入冻干机，冻干，得G品；
8)将G品从模具盒中取出后，利用激光打出透气孔在膜上打出透气孔，得H品；
9)将H品包装，并利用辐射剂量为25000Gy的γ射线进行灭菌处理，得抑菌修护膜。
所述冻干是先在-45℃、常压下预冻4小时，然后在-25℃、8Pa的真空条件下处理11小时，然后在-10℃、8Pa的真空条件下处理3小时，然后在0℃、8Pa的真空条件下处理4小时，然后在10℃、8Pa的真空条件下处理4小时，再在25℃、8Pa的真空条件下处理4小时。

Claims (10)

1.一种含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜，其特征在于：按重量份计，包括有重组人超氧化物歧化酶0.1-1份、羧甲基壳聚糖10-20份、明胶250-350份、甘油50-150份、水559-579份和三乙醇胺0.5-1.5份。
2.根据权利要求1所述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜，其特征在于：按重量份计，包括有重组人超氧化物歧化酶0.7-1份、羧甲基壳聚糖13-17份、明胶280-320份、甘油70-120份、水564-574份和三乙醇胺0.8-1.2份。
3.根据权利要求1或2所述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜，其特征在于：按重量份计，包括有重组人超氧化物歧化酶1份、羧甲基壳聚糖15份、明胶300份、甘油100份、水569份和三乙醇胺1份。
4.一种根据权利要求1-3任一项所述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，其特征在于，包括如下步骤：
1）将明胶、羧甲基壳聚糖混合，得A品；
2）向A品中加入水，加热至45-65℃，搅拌至A品完全溶解，得B品；
3）向B品中加入甘油、三乙醇胺，搅拌至完全溶解，得C品；
4）将C品置于28-32℃条件下恒温10-30min，得D品；
5）将重组人超氧化物歧化酶添加至D品，搅拌至完全溶解，得E品；
6）将E品放入四氟乙烯模具盒内，控制膜厚度小于1.5cm，得F品；
7）将F品放入冻干机，冻干，得G品；
8）将G品从模具盒中取出后，在膜上打出透气孔，得H品；
9）将H品包装，并进行灭菌处理，得抑菌修护膜。
5.根据权利要求4所述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，其特征在于：所述步骤步骤2）中，加热温度为60℃。
6.根据权利要求4所述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，其特征在于：所述步骤步骤4）中，是将C品置于30℃下恒温20min。
7.根据权利要求4所述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，其特征在于：所述步骤步骤6）中，控制膜厚度为0.5-0.8cm。
8.根据权利要求4所述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，其特征在于：所述步骤步骤7）中，冻干是先在-45℃、常压下预冻4小时，然后在-25℃、8Pa的真空条件下处理11小时，然后在-10℃、8Pa的真空条件下处理3小时，然后在0℃、8Pa的真空条件下处理4小时，然后在10℃、8Pa的真空条件下处理4小时，再在25℃、8Pa的真空条件下处理4小时。
9.根据权利要求4所述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，其特征在于：所述步骤8）中，是利用激光打出透气孔。
10.根据权利要求4所述的含有重组人超氧化物歧化酶的抑菌修护膜的制备工艺，其特征在于：所述步骤9）中，灭菌处理是利用辐射剂量为25000Gy的γ射线进行。
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