CN109157676A - 一种重塑复合生物羊膜的制备方法 - Google Patents

一种重塑复合生物羊膜的制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及医用材料制备技术领域，具体涉及一种重塑复合生物羊膜的制备方法。本发明以活性干酵母为原料得到蛋白酶，将酶解液、亚麻油酸剪切，同时添加抗坏血酸得到生物肽氧化剂，原花青素具有非常强的体内活性，能保护人体细胞组织免受自由基的氧化损伤，还具有加强和保护人体活性组织、稳定细胞膜以及抗酶活性等生物特性，本发明采用瓜尔胶与羊膜组合，羊膜中的活性蛋白的巯基受到瓜尔胶的物理屏障的保护，减少了活性基团的氧化，瓜尔胶的流变性能使不可溶的羊膜胶原成分长期地悬浮，瓜尔胶有利于羊膜低温粉碎和常温保存，具有广阔的应用前景。

Description

一种重塑复合生物羊膜的制备方法
技术领域
本发明涉及医用材料制备技术领域，具体涉及一种重塑复合生物羊膜的制备方法。
背景技术
组织粘连是结缔组织纤维带与相邻的组织或器官结合在一起而形成的异常结构，可引起各种术后并发症：例如，肌腱修复术后粘连，严重的影响手术部位功能的恢复，甚至会造成局部功能的丧失。
羊膜是指人类胎盘的基底膜层，也是胎盘的最内层，光滑且具有一定的弹性，厚度约为0.02至0.5mm。羊膜是无血管、无细胞结构的胶原组织层，富含IV、V型胶原、碱性成纤维细胞生长因子、干细胞生长因子，易使上皮细胞移行长入、促进上皮的分化、增殖，在上皮创伤愈合中起重要作用。羊膜含有丰富的胶原蛋白、层粘连蛋白、纤维粘连蛋白等蛋白成分，为创伤愈合提供细胞生长的网架结构同时，也促进人体细胞的分化、分裂，从而达到快速愈合的效果。另外，羊膜中不含有血管、神经、淋巴等组织，使生物羊膜产品在临床使用后几乎不发生免疫排斥反应。此外还有来源广泛、保存简便、手术操作简单等特点，适用于烧伤、普外、眼科、内分泌等科室各类常规手术当中。
羊膜具有5层结构，分别是上皮细胞层、基底膜、致密层、纤维母细胞层和海绵层。目前，羊膜主要用于外科手术中，其中包括：
（1）眼睛表面疾病如角膜修复、先天性青光眼、角膜溃疡等；
（2）修补鼓膜损伤；
（3）用于疝修补；
（4）外科手术后预防粘连；
（5）烧伤后表面覆盖，用作生物敷料。
传统制备得到的羊膜材料比较薄、易卷曲、黏附性较差、使用时易滑动脱落。为了克服上述缺点，目前采用交联技术制备复合生物衍生羊膜以改善其可操作性，但处理时使用了氯仿、甲醇、戊二醛等多种有机试剂，处理强度大，经过脱脂等多个步骤后对羊膜的天然结构破坏很大，造成胶原束排列不规则，胶原纤维断裂，同时大量的生物活性因子失活，试剂残留风险高。
根据临床报道，由于羊膜细胞的存在，在眼科，羊膜植片可能会发生植片排斥反应、植片脱落、移位溶解、感染等并发症，其安全性存在一定的风险。为了降低产品的的免疫原性，就需要对羊膜进行脱细胞处理。目前对于羊膜的处理方法大多为临时剥离处理的新鲜羊膜，或者经过预处理的深低温保存羊膜，但两者均不能做到随取随用。还有一种技术是将羊膜预处理后真空冷冻干燥，灭菌包装储存，该种方式能够做到随取随用，延长保存期到1～3年。目前对于羊膜的处理方法容易使羊膜损失大量天然胶原及活性因子，对羊膜临床使用效果造成了极为不利的影响，同时存在细胞残留、机械性能不足以及降解周期较短等缺陷，限制了其临床应用范围。而且处理过的羊膜材料，极少能完全取出细胞等抗原成分，因此仍具有一定的抗原性，有可能在使用时引发炎症。此外，单层的羊膜或羊膜材料较薄，机械强度较差，易撕裂，手术中操作困难，不利于临床使用和研究。
因此，能够研制出一种能够解决上述问题的生物羊膜具有重要意义。
发明内容
本发明主要解决的技术问题，针对目前生物羊膜在反复冻融、干燥和脱细胞等工艺处理过程中，羊膜中大量天然胶原及活性因子易被氧化，并且有机化学试剂会破坏胶原蛋白、胶原纤维等成分，造成生物羊膜生物性功能不能满足临床要求的缺陷，提供了一种重塑复合生物羊膜的制备方法。
为了解决上述技术问题，本发明所采用的技术方案是：
一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）取胎盘置于无菌工作台，将羊膜连同绒毛膜自胎盘上钝性分离后用生理盐水清洗血渍，得到洁净的羊膜，再用庆大霉素洗涤后放入DMEM培养基中培养4～5天，培养结束后冰冻储存，得到预处理的羊膜，备用；
（2）将活性干酵母加水配制成酵母乳，用柠檬酸钠溶液调节酵母乳的pH，加热升温，加入酵母乳质量0.5%的混合蛋白酶，酶解得到酶解液；
（3）按重量份数计，将40～50份上述酶解液、20～25亚麻油酸混合置于高速剪切机中，同时添加4～5份抗坏血酸，剪切乳化20～25min，得到混合乳液，将混合乳液放入旋蒸仪中，旋蒸10～15min，取下旋蒸瓶置于真空干燥箱中干燥，得到生物肽氧化剂；
（4）取葡萄籽置于蒸馏水中，进行超声波破碎提取，再转移至离心分离机中，离心后用微孔滤膜器过滤，去除滤渣，得到滤液，将滤液放入冷冻干燥机中冻干，得到葡萄籽冻干提取物；
（5）将瓜尔胶溶解于柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液中，制得瓜尔胶溶液，将预处理的羊膜置于瓜尔胶溶液中，随后将瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物混合，置于球磨机中进行磨碎处理3～4h，球磨完毕后在冰水浴下过200目筛，得到过滤液，将过滤液用流延设备制成生物羊膜，流延过程中用高能电子束辐照。
步骤（1）所述的庆大霉素的浓度为4～5×106U/L，DMEM培养基中青霉素和链霉素的含量为100～120×103U/L，小牛血清的体积分数为10%，冰冻储存温度为-25～-20℃。
步骤（2）所述的酵母乳的质量分数为15%的，柠檬酸钠溶液质量分数为20%，调节酵母乳的pH为4.5～5.0，加热升温后温度为50～55℃，混合蛋白酶由木瓜蛋白酶和细菌蛋白酶按质量比2:1混合而成，酶解时间为4～6h。
步骤（3）所述的剪切乳化转速为3000～4000r/min，旋蒸温度为90～110℃，真空干燥箱设定温度为50～60℃，干燥时间为3～4h。
步骤（4）所述的超声波破碎提取时控制提取温度为70～80℃，超声频率为30～35kHz，离心转速为3000～3500r/min，微孔滤膜器孔径为0.22～0.25μm，冷冻干燥温度为-60～-50℃。
步骤（5）所述的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液浓度为0.1mol/L、pH为6.6～6.8，瓜尔胶溶液的质量分数为1%，羊膜置于瓜尔胶溶液时控制羊膜与瓜尔胶的质量比为1︰1，瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物混合质量比为50︰5︰1，球磨时温度为-90～-80℃，高能电子束辐照时剂量为20～25kGy，流延设备温度控制为-25～-20℃。
本发明的有益效果是：
（1）本发明将活性干酵母配制成酵母乳，用柠檬酸钠溶液调节pH，加热处理并添加混合蛋白酶，酶解得到酶解液，最后将酶解液、亚麻油酸混合剪切，同时添加抗坏血酸防氧化，得到混合乳液，经过旋蒸处理后，真空干燥旋蒸瓶，得到生物肽氧化剂，所用的葡萄籽中含有多酚类物质，主要有儿茶素类和原花青素类抗氧化活性成分，制备的葡萄籽提取物中主要成分为原花青素（OPC），原花青素具有非常强的体内活性，OPC的抗自由基氧化能力是维生素E的50倍，维生素C的20倍，OPC能有效清除体内多余的自由基，保护人体细胞组织免受自由基的氧化损伤，防治过敏、癌症、衰老等100多种与自由基有关的疾病，还具有加强和保护人体活性组织、稳定细胞膜以及抗酶活性等生物特性，因而将葡萄籽提取物用于生物羊膜中天然胶原和活性因子的抗氧化性保护，效果显著，此外，OPC还具有很好的生物利用度，易于被人体吸收，其它的抗氧化剂如胡萝卜素、超氧化物岐化酶不是效力太弱就是没有体内活性，葡萄籽精华含丰富生物类黄酮，是强力的精华分子，用于对抗自由基与维护微丝血管的健康，应用于结膜重建时防老化作用显著，利用亚麻油酸提高葡萄籽提取物和生物肽的油溶性能，并且在氧气因素作用下，发生氧化反应生成烷基自由基和烷基过氧自由基，这些烷基自由基和烷基过氧自由基与葡萄籽提取物中酚酸类物质和活性生物肽反应生成氮自由基和活性较低的醇和酸类化合物，氮自由基在苯环共轭效应影响下变的非常稳定，从而使生物羊膜制备时粉碎和流延过程不易受空气的氧化干扰；
（2）本发明采用瓜尔胶与羊膜组合，使羊膜在低温粉碎过程中，羊膜中的活性蛋白的巯基受到瓜尔胶的物理屏障的保护，减少了活性基团的氧化，与常规方法相比，本发明方法制备的复合羊膜保留的活性因子远远高于常规方法制备的羊膜，制成的复合羊膜用于临床具有预防、减轻炎症，加速组织修复等功能，所用的瓜尔胶是已知的最有效和水溶性最好的天然聚合物，它在低浓度下，可形成高粘稠溶液，表现出非牛顿流变特性，从而使瓜尔胶溶液在流延时赋予复合羊膜假塑性，瓜尔胶在低温、高剪切力的粉碎过程中表现出高流变性，瓜尔胶的流变性能使不可溶的羊膜胶原成分长期地悬浮，粉碎时新产生的微小羊膜颗粒迅速被瓜尔胶包裹，使保护性能达到最佳，粉碎完成后，混合物迅速成为高黏、稳定的凝胶，这是其他高分子保护剂不具备的特质，瓜尔胶有利于羊膜低温粉碎和常温保存，具有广阔的应用前景。
具体实施方式
取胎盘置于无菌工作台，将羊膜连同绒毛膜自胎盘上钝性分离后用生理盐水清洗血渍，得到洁净的羊膜，再用4～5×106U/L的庆大霉素洗涤后放入DMEM培养基中培养4～5天，其中DMEM培养基含100～120×103U/L的青霉素和链霉素，以及体积分数为10%的小牛血清，培养结束后放入-25～-20℃的温度条件下冰冻储存，得到预处理的羊膜，备用；将活性干酵母加水配制成质量分数为15%的酵母乳，用质量分数为20%的柠檬酸钠溶液调节酵母乳的pH为4.5～5.0，加热升温至50～55℃，加入酵母乳质量0.5%的混合蛋白酶，其中混合蛋白酶由木瓜蛋白酶和细菌蛋白酶按质量比2:1混合而成，酶解4～6h，得到酶解液；按重量份数计，将40～50份上述酶解液、20～25亚麻油酸混合置于高速剪切机中，同时添加4～5份抗坏血酸，以3000～4000r/min的转速剪切乳化20～25min，得到混合乳液，将混合乳液放入旋蒸仪中，在90～110℃条件下旋蒸10～15min，取下旋蒸瓶置于设定温度为50～60℃的真空干燥箱中干燥3～4h，得到生物肽氧化剂；取葡萄籽置于蒸馏水中，进行超声波破碎提取，控制提取温度为70～80℃，超声频率为30～35kHz，再转移至离心分离机中，在3000～3500r/min的转速下离心，用孔径为0.22～0.25μm的微孔滤膜器过滤，去除滤渣，得到滤液，将滤液放入冷冻干燥机中，在-60～-50℃条件下冻干，得到葡萄籽冻干提取物；将瓜尔胶溶解于浓度为0.1mol/L、pH为6.6～6.8的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液中，制得质量分数为1%的瓜尔胶溶液，将预处理的羊膜置于瓜尔胶溶液中，控制羊膜与瓜尔胶的质量比为1︰1，随后在-90～-80℃的低温环境下，将瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物按质量比为50︰5︰1混合，置于球磨机中进行磨碎处理3～4h，球磨完毕后在冰水浴下过200目筛，得到过滤液，将过滤液用流延设备制成生物羊膜，流延过程中用高能电子束辐照，剂量为20～25kGy，流延设备温度控制为-25～-20℃。
取胎盘置于无菌工作台，将羊膜连同绒毛膜自胎盘上钝性分离后用生理盐水清洗血渍，得到洁净的羊膜，再用4×106U/L的庆大霉素洗涤后放入DMEM培养基中培养4天，其中DMEM培养基含100×103U/L的青霉素和链霉素，以及体积分数为10%的小牛血清，培养结束后放入-25℃的温度条件下冰冻储存，得到预处理的羊膜，备用；将活性干酵母加水配制成质量分数为15%的酵母乳，用质量分数为20%的柠檬酸钠溶液调节酵母乳的pH为4.5，加热升温至50℃，加入酵母乳质量0.5%的混合蛋白酶，其中混合蛋白酶由木瓜蛋白酶和细菌蛋白酶按质量比2:1混合而成，酶解4h，得到酶解液；按重量份数计，将40份上述酶解液、20亚麻油酸混合置于高速剪切机中，同时添加4份抗坏血酸，以3000r/min的转速剪切乳化20min，得到混合乳液，将混合乳液放入旋蒸仪中，在90℃条件下旋蒸10min，取下旋蒸瓶置于设定温度为50℃的真空干燥箱中干燥3h，得到生物肽氧化剂；取葡萄籽置于蒸馏水中，进行超声波破碎提取，控制提取温度为70℃，超声频率为30kHz，再转移至离心分离机中，在3000r/min的转速下离心，用孔径为0.22μm的微孔滤膜器过滤，去除滤渣，得到滤液，将滤液放入冷冻干燥机中，在-60℃条件下冻干，得到葡萄籽冻干提取物；将瓜尔胶溶解于浓度为0.1mol/L、pH为6.6的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液中，制得质量分数为1%的瓜尔胶溶液，将预处理的羊膜置于瓜尔胶溶液中，控制羊膜与瓜尔胶的质量比为1︰1，随后在-90℃的低温环境下，将瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物按质量比为50︰5︰1混合，置于球磨机中进行磨碎处理3h，球磨完毕后在冰水浴下过200目筛，得到过滤液，将过滤液用流延设备制成生物羊膜，流延过程中用高能电子束辐照，剂量为20kGy，流延设备温度控制为-25℃。
取胎盘置于无菌工作台，将羊膜连同绒毛膜自胎盘上钝性分离后用生理盐水清洗血渍，得到洁净的羊膜，再用4×106U/L的庆大霉素洗涤后放入DMEM培养基中培养4天，其中DMEM培养基含110×103U/L的青霉素和链霉素，以及体积分数为10%的小牛血清，培养结束后放入-23℃的温度条件下冰冻储存，得到预处理的羊膜，备用；将活性干酵母加水配制成质量分数为15%的酵母乳，用质量分数为20%的柠檬酸钠溶液调节酵母乳的pH为4.7，加热升温至53℃，加入酵母乳质量0.5%的混合蛋白酶，其中混合蛋白酶由木瓜蛋白酶和细菌蛋白酶按质量比2:1混合而成，酶解5h，得到酶解液；按重量份数计，将45份上述酶解液、23亚麻油酸混合置于高速剪切机中，同时添加4份抗坏血酸，以3500r/min的转速剪切乳化23min，得到混合乳液，将混合乳液放入旋蒸仪中，在100℃条件下旋蒸13min，取下旋蒸瓶置于设定温度为55℃的真空干燥箱中干燥3h，得到生物肽氧化剂；取葡萄籽置于蒸馏水中，进行超声波破碎提取，控制提取温度为75℃，超声频率为33kHz，再转移至离心分离机中，在3250r/min的转速下离心，用孔径为0.23μm的微孔滤膜器过滤，去除滤渣，得到滤液，将滤液放入冷冻干燥机中，在-55℃条件下冻干，得到葡萄籽冻干提取物；将瓜尔胶溶解于浓度为0.1mol/L、pH为6.7的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液中，制得质量分数为1%的瓜尔胶溶液，将预处理的羊膜置于瓜尔胶溶液中，控制羊膜与瓜尔胶的质量比为1︰1，随后在-85℃的低温环境下，将瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物按质量比为50︰5︰1混合，置于球磨机中进行磨碎处理3h，球磨完毕后在冰水浴下过200目筛，得到过滤液，将过滤液用流延设备制成生物羊膜，流延过程中用高能电子束辐照，剂量为23kGy，流延设备温度控制为-23℃。
取胎盘置于无菌工作台，将羊膜连同绒毛膜自胎盘上钝性分离后用生理盐水清洗血渍，得到洁净的羊膜，再用5×106U/L的庆大霉素洗涤后放入DMEM培养基中培养5天，其中DMEM培养基含120×103U/L的青霉素和链霉素，以及体积分数为10%的小牛血清，培养结束后放入-20℃的温度条件下冰冻储存，得到预处理的羊膜，备用；将活性干酵母加水配制成质量分数为15%的酵母乳，用质量分数为20%的柠檬酸钠溶液调节酵母乳的pH为5.0，加热升温至55℃，加入酵母乳质量0.5%的混合蛋白酶，其中混合蛋白酶由木瓜蛋白酶和细菌蛋白酶按质量比2:1混合而成，酶解6h，得到酶解液；按重量份数计，将50份上述酶解液、25亚麻油酸混合置于高速剪切机中，同时添加5份抗坏血酸，以4000r/min的转速剪切乳化25min，得到混合乳液，将混合乳液放入旋蒸仪中，在110℃条件下旋蒸15min，取下旋蒸瓶置于设定温度为60℃的真空干燥箱中干燥4h，得到生物肽氧化剂；取葡萄籽置于蒸馏水中，进行超声波破碎提取，控制提取温度为80℃，超声频率为35kHz，再转移至离心分离机中，在3500r/min的转速下离心，用孔径为0.25μm的微孔滤膜器过滤，去除滤渣，得到滤液，将滤液放入冷冻干燥机中，在-50℃条件下冻干，得到葡萄籽冻干提取物；将瓜尔胶溶解于浓度为0.1mol/L、pH为6.8的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液中，制得质量分数为1%的瓜尔胶溶液，将预处理的羊膜置于瓜尔胶溶液中，控制羊膜与瓜尔胶的质量比为1︰1，随后在-80℃的低温环境下，将瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物按质量比为50︰5︰1混合，置于球磨机中进行磨碎处理4h，球磨完毕后在冰水浴下过200目筛，得到过滤液，将过滤液用流延设备制成生物羊膜，流延过程中用高能电子束辐照，剂量为25kGy，流延设备温度控制为-20℃。
对比例以广州市某公司生产的生物羊膜作为对比例对本发明制得的重塑复合生物羊膜和对比例中的生物羊膜进行检测，检测结果如表1所示：
机械强度测定将本发明制得的重塑复合生物羊膜和对比例中的生物羊膜分别切成尺寸为2cm×6cm的待测试样4份，将4份待测试样分别置于智能电子拉力试验机，用50N传感器，速度为20mm/min，测定样品的拉伸强度、断裂伸长率和弹性模量。
细胞生长因子含量的检测将4份待测试样分别置于细胞培养皿中，加入无血清培养基，置于细胞培养箱，在37℃条件下，静置7d，收集浸提的培养液并用0.22μm过滤器过滤消毒，用ELISA试剂盒检测EGF、FGF、HGF含量。重复测定3次，取平均值。
毒性检测将4份待测试样分别置于无血清的培养基中，在37℃下静置7d后，收集浸提培养液并用0.22μm过滤器过滤消毒。将表皮细胞以1×104cells/孔的浓度接种至96孔板中，表皮细胞培养基培养待细胞完全贴壁后换成浸提培养液培养，隔日换液。培养2d、4d和6d后分别用CCK-8检测法测定96孔板中表皮细胞的细胞活性，并用分光光度计读取450nm的吸光度。重复3次，取平均值。
表1性能测定结果
由表1数据可知，本发明制得的重塑复合生物羊膜，可有效保留羊膜各种天然活性成分，包括胶原、生长因子、抗炎因子等，且机械强度高，无毒，降解周期短，具有广阔的使用前景。

Claims (6)

1.一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于具体制备步骤为：
（1）取胎盘置于无菌工作台，将羊膜连同绒毛膜自胎盘上钝性分离后用生理盐水清洗血渍，得到洁净的羊膜，再用庆大霉素洗涤后放入DMEM培养基中培养4～5天，培养结束后冰冻储存，得到预处理的羊膜，备用；
（2）将活性干酵母加水配制成酵母乳，用柠檬酸钠溶液调节酵母乳的pH，加热升温，加入酵母乳质量0.5%的混合蛋白酶，酶解得到酶解液；
（3）按重量份数计，将40～50份上述酶解液、20～25亚麻油酸混合置于高速剪切机中，同时添加4～5份抗坏血酸，剪切乳化20～25min，得到混合乳液，将混合乳液放入旋蒸仪中，旋蒸10～15min，取下旋蒸瓶置于真空干燥箱中干燥，得到生物肽氧化剂；
（4）取葡萄籽置于蒸馏水中，进行超声波破碎提取，再转移至离心分离机中，离心后用微孔滤膜器过滤，去除滤渣，得到滤液，将滤液放入冷冻干燥机中冻干，得到葡萄籽冻干提取物；
（5）将瓜尔胶溶解于柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液中，制得瓜尔胶溶液，将预处理的羊膜置于瓜尔胶溶液中，随后将瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物混合，置于球磨机中进行磨碎处理3～4h，球磨完毕后在冰水浴下过200目筛，得到过滤液，将过滤液用流延设备制成生物羊膜，流延过程中用高能电子束辐照。
2.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（1）所述的庆大霉素的浓度为4～5×106U/L，DMEM培养基中青霉素和链霉素的含量为100～120×103U/L，小牛血清的体积分数为10%，冰冻储存温度为-25～-20℃。
3.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（2）所述的酵母乳的质量分数为15%的，柠檬酸钠溶液质量分数为20%，调节酵母乳的pH为4.5～5.0，加热升温后温度为50～55℃，混合蛋白酶由木瓜蛋白酶和细菌蛋白酶按质量比2:1混合而成，酶解时间为4～6h。
4.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（3）所述的剪切乳化转速为3000～4000r/min，旋蒸温度为90～110℃，真空干燥箱设定温度为50～60℃，干燥时间为3～4h。
5.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（4）所述的超声波破碎提取时控制提取温度为70～80℃，超声频率为30～35kHz，离心转速为3000～3500r/min，微孔滤膜器孔径为0.22～0.25μm，冷冻干燥温度为-60～-50℃。
6.根据权利要求1所述的一种重塑复合生物羊膜的制备方法，其特征在于：步骤（5）所述的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲溶液浓度为0.1mol/L、pH为6.6～6.8，瓜尔胶溶液的质量分数为1%，羊膜置于瓜尔胶溶液时控制羊膜与瓜尔胶的质量比为1︰1，瓜尔胶溶液、生物肽氧化剂、葡萄籽干提取物混合质量比为50︰5︰1，球磨时温度为-90～-80℃，高能电子束辐照时剂量为20～25kGy，流延设备温度控制为-25～-20℃。
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