CN107750664A - 猕猴桃种子的无菌采集方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种猕猴桃种子的无菌采集方法，所述方法包括选取健康、成熟的猕猴桃果实，对器具进行灭菌，然后在超净工作台上剥皮处理后置于灭过菌的蒸馏水中搅拌，然后冲洗饱满健康的种子。本发明操作简单，利用本发明所采集的猕猴桃种子高效且完全无菌，去除了实验过程中消毒杀菌的部分，减小了实验量，对环境无害，对要求无菌操作的猕猴桃种子的相关实验有很大的价值。
Description
技术领域
本发明属于果树育种技术领域，具体涉及一种实验室用猕猴桃种子的无菌采集方法。
背景技术
猕猴桃是浆果类果树的一种，其种子镶嵌在果肉中且十分小，取种工作比较困难。目前，采集猕猴桃种子使用较多的方法是先将猕猴桃存放，待其完全成熟软化后，把猕猴桃内部的果肉和种子一齐揉挤出来，装进纱布袋子里反复揉搓，待果汁被挤尽之后，再用水反复淘洗，淘洗过程可清除漂浮的杂质和空种粒。洗干净的种子，最后还需摊开晾晒。虽然这种方法可获得大量的种子，但缺点也很明显，等待软化、分摊晾晒均需要耗费大量时间，反复淘洗又会对水资源造成浪费，反复揉搓也需耗费人力物力，整个过程繁琐，增加了育种时间，提高了生产成本。
近些年，报道了一些发明人对猕猴桃种子的采集方法进行了改进（例如中国专利申请201210230778.2，公开了一种猕猴桃种子的采集方法，包括放置成熟、切片、平铺粘贴、干燥处理、收集、后处理等步骤），或设计出了猕猴桃种子采集机器（例如中国专利申请201611198460.5，公开了一种便于取出猕猴桃种子的设备），在缩短取种时间、降低资源浪费方面做出了很大贡献，但是，这些方法或设备采集的猕猴桃种子均是裸露在空气中，使本来无菌的种子带上了细菌。果树育种领域技术人员已知的是，胚乳培养是倍性育种的常用手段，猕猴桃属于被子植物且是雌雄异株，双受精作用致使其种子的胚乳属于三倍体组织，通过对其胚乳的离体培养，对改善猕猴桃的食用品质、选育无籽猕猴桃等方面均有重要的意义。然而，实验室中，胚乳的离体培养需要严格的无菌种子，而现有的方法所取的种子都是带菌的，做实验前还需要使用升汞进行消毒杀菌，加重了实验量，消耗的升汞对环境有一定的危害，整个操作也比较复杂。
鉴于此，研究一种适用于实验室的无菌采集猕猴桃种子的方法是非常有必要的。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的目的旨在探究一种耗材少、节水、对环境无害且高效的实验室无菌采集猕猴桃种子的方法。猕猴桃的种子是嵌入在果肉内部的，有果肉、果皮两个防护罩，与外界有菌环境完全隔绝，其是完全无菌的。本发明利用了这一点，设计的实验过程确保在采集种子过程中种子不会接触到有菌环境，因此，取出的种子是完全无菌的，从而完成本发明。
因此，本发明提供了一种猕猴桃种子的无菌采集方法，所述方法包括以下步骤：
（1）取材，选取健康、成熟的猕猴桃果实；
（2）灭菌，将手术刀、镊子、滤纸用报纸包裹起来，将装有蒸馏水的容器用牛皮纸密封瓶口，向带盖的实验瓶内放入磁力搅拌子，再将上述物品置于高压灭菌锅内灭菌，然后放入超净工作台，紫外灯照射40min；
（3）采集，将猕猴桃果实置于灭菌的滤纸上，用镊子和手术刀剥皮，将剥完皮的果肉置于另一张灭菌的滤纸上，用镊子挤压，然后投入实验瓶，倒入灭过菌的蒸馏水至实验瓶体积的三分之二，拧紧瓶盖，置于磁力搅拌器上搅拌2-3min，静置，取沉在瓶底的饱满健康种子，再用无菌水冲洗2-3次，获得干净的猕猴桃种子。
在优选的实施方式中，所述装有蒸馏水的容器可以为三角瓶，所述带盖的实验瓶为果酱瓶。
在具体实施方式中，步骤（2）中在高压灭菌内灭菌的条件为在121℃下，在0.1MPa压强下灭菌20min。
在优选的实施方式中，在步骤（3）中，使用镊子和手术刀之前，在酒精灯上进行灼烧。优选地，磁力搅拌器的转速为1500-2400 r/min。
在具体实施方式中，在步骤（1）中，选取猕猴桃果实后，可在75%的酒精中浸泡30s，进一步进行灭菌处理。
发明人还对采用上述无菌采集方法获得的猕猴桃种子的染菌情况进行验证，结果证明所采集的猕猴桃种子均无染菌迹象，上述处理方法可完全避免升汞的使用，减轻对操作人员及操作环境的毒害。本发明方法步骤简单，适于实验室操作，直接获取无菌种子避免了一般取种方法中对种子灭菌进行的繁杂步骤。另外，节省了取种和清洗过程中的用水量，成本低廉。
附图说明
图1为加入挤压的果肉和蒸馏水的实验瓶的照片。
图2为开启搅拌后的实验瓶的照片，其中，黑色的线为猕猴桃种子。
图3为静置后的实验瓶的照片，其中，饱满健康的种子沉在底部，而空种子漂浮在水面，果肉已完全搅碎与种子分离。
图4为冲洗后获得的干净的猕猴桃种子。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1
采用以下方法进行猕猴桃种子的无菌采集：
（1）取材，选取健康、成熟的猕猴桃果实；
（2）灭菌，将手术刀、镊子、滤纸用报纸包裹起来，将装有蒸馏水的三角瓶用牛皮纸密封瓶口，向带盖的果酱瓶内放入磁力搅拌子，再将上述物品置于高压灭菌锅内，在温度121℃，压强0.1MPa条件下灭菌20min，然后放入超净工作台，紫外灯照射40min；
（3）采集，将猕猴桃果实置于灭菌的滤纸上，用镊子和手术刀剥皮，将剥完皮的果肉置于另一张灭菌的滤纸上，用镊子挤压，然后投入果酱瓶，倒入灭过菌的蒸馏水，拧紧瓶盖，置于磁力搅拌器上以1500r/min的转速搅拌3min，静置，取沉在瓶底的饱满健康种子，再用无菌水冲洗2次，获得干净的猕猴桃种子。
实施例2
采用以下方法进行猕猴桃种子的无菌采集：
（1）取材，选取健康、成熟的猕猴桃果实，在75%的酒精中浸泡30s；
（2）灭菌，将手术刀、镊子、滤纸用报纸包裹起来，将装有蒸馏水的三角瓶用牛皮纸密封瓶口，向带盖的果酱瓶内放入磁力搅拌子，再将上述物品置于高压灭菌锅内，在温度121℃，压强0.1MPa条件下灭菌20min，然后放入超净工作台，紫外灯照射40min；
（3）采集，将猕猴桃果实置于灭菌的滤纸上，用镊子和手术刀剥皮，将剥完皮的果肉置于另一张灭菌的滤纸上，用镊子挤压，然后投入果酱瓶，倒入灭过菌的蒸馏水，拧紧瓶盖，置于磁力搅拌器上以2400r/min的转速搅拌2min，静置，取沉在瓶底的饱满健康种子，再用无菌水冲洗3次，获得干净的猕猴桃种子。
对比例1
采用以下方法进行猕猴桃种子的无菌采集：
（1）取材，选取健康、成熟的猕猴桃果实，在0.1%的升汞中浸泡5min；
（2）灭菌，将手术刀、镊子、滤纸用报纸包裹起来，将装有蒸馏水的三角瓶用牛皮纸密封瓶口，向带盖的果酱瓶内放入磁力搅拌子，再将上述物品置于高压灭菌锅内，在温度121℃，压强0.1MPa条件下灭菌20min，然后放入超净工作台，紫外灯照射40min；
（3）采集，将猕猴桃果实置于灭菌的滤纸上，用镊子和手术刀剥皮，将剥完皮的果肉置于另一张灭菌的滤纸上，用镊子挤压，然后投入果酱瓶，倒入灭过菌的蒸馏水，拧紧瓶盖，置于磁力搅拌器上以2000r/min的转速搅拌3min，静置，取沉在瓶底的饱满健康种子，再用无菌水冲洗3次，获得干净的猕猴桃种子。
实验实施例
将实施例1-2和对比例1中获得的猕猴桃种子各取18枚接种于三组（每组三个）相同的无菌培养基（MS培养基）上，放置一周，观察染菌现象，结果如表1所示：
表1
| 实施例 | 猕猴桃果实处理方法 | 观察时间（3天） | 观察时间（7天） |
| 实施例1 | 不处理 | 无感染 | 无感染 |
| 实施例2 | 75%酒精处理30s | 无感染 | 无感染 |
| 对比例1 | 0.1%升汞处理5min | 无感染 | 无感染 |
由上表可以看出，采用本发明的无菌采集方法，猕猴桃果实不需做任何处理便可获得无菌种子，可满足实验室育种条件，如果担心剥皮等操作可能会污染种子，则可以选择在酒精中浸泡30s进行处理，可得到同样无菌的猕猴桃种子，完全避免升汞的使用。
本发明操作简单，利用本发明所采集的猕猴桃种子高效且完全无菌，去除了实验过程中消毒杀菌的部分，减小了实验量，对环境无害，对要求无菌操作的猕猴桃种子的相关实验有很大的价值。
以上仅描述了本发明的较佳实施方式，但本发明并不限于上述实施例。本领域技术人员可以理解的是，能够实现本发明技术效果的任何相同或相似手段，均应落入本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.猕猴桃种子的无菌采集方法，所述方法包括以下步骤：
（1）取材，选取健康、成熟的猕猴桃果实；
（2）灭菌，将手术刀、镊子、滤纸用报纸包裹起来，将装有蒸馏水的容器用牛皮纸密封瓶口，向带盖的实验瓶内放入磁力搅拌子，再将上述物品置于高压灭菌锅内灭菌，然后放入超净工作台，紫外灯照射40min；
（3）采集，将猕猴桃果实置于灭菌的滤纸上，用镊子和手术刀剥皮，将剥完皮的果肉置于另一张灭菌的滤纸上，用镊子挤压，然后投入实验瓶，倒入灭过菌的蒸馏水至实验瓶体积的三分之二，拧紧瓶盖，置于磁力搅拌器上搅拌2-3min，静置，取沉在瓶底的饱满健康种子，再用无菌水冲洗2-3次，获得干净的猕猴桃种子。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述装有蒸馏水的容器为三角瓶。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述带盖的实验瓶为果酱瓶。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（2）中，高压灭菌锅内灭菌的条件为在121℃下，在0.1MPa压强下灭菌20min。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（3）中，使用镊子和手术刀之前，在酒精灯上进行灼烧。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（3）中，所述磁力搅拌器的转速为1500-2400r/min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤（1）中，选取猕猴桃果实后，在75%的酒精中浸泡30s。
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| CN104718841A (zh) * | 2015-02-26 | 2015-06-24 | 李泽诚 | 白及种子的处理方法 |
| CN105493683A (zh) * | 2016-01-05 | 2016-04-20 | 宁德市农业科学研究所 | 一种金线莲种子采收后的处理方法 |
| CN106508565A (zh) * | 2016-10-26 | 2017-03-22 | 贵州源森龙农业有限公司 | 一种猕猴桃的种植方法 |
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