CN107693665A - 壮药九层楼总黄酮提取方法 - Google Patents

壮药九层楼总黄酮提取方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种壮药九层楼总黄酮提取方法，包括以下步骤：将九层楼药材粉碎后，加入有机醇，在高压脉冲电场下进行提取，过滤，滤渣用有机醇洗涤，合并滤液并减压浓缩，得浸膏；将浸膏溶解后，先加入无机碱溶液，调节溶液pH至碱性，静置过滤后，滤液再加入酸性水溶液调节溶液pH至酸性或中性，自然层析，将沉淀物干燥；将干燥后的产物溶解，经陶瓷超滤膜进行过滤，滤液浓缩干燥后经甲醇溶解，加入葡聚糖凝胶柱进行柱层析吸附，得到的黄色溶液浓缩干燥，即得九层楼总黄酮纯品。本发明的提取方法操作简单，反应时间短，溶剂用量少，总黄酮提取率高，得到的总黄酮活性高，且纯度大于96％。

Description

壮药九层楼总黄酮提取方法
技术领域
本发明属于中药分析技术领域，具体涉及一种壮药九层楼总黄酮提取方法。
背景技术
我国壮族主要集中于广西自治区，据该区有关部门调查，壮药共有709种。《壮族民间用药选编》收载常用壮药500多种。具有地方民族特色的壮药主要有：广西马兜铃、千斤拔、龙船花、闭鞘姜，阳桃、两面针、鸡蛋花、刺芋、金锦香、南蛇簕、薯莨、马鬃蛇、褐家鼠、蟒蛇等。
九层楼，别名鹿药、盘龙七、偏头七、螃蟹七、白窝儿七、狮子七，山糜子，为百合科鹿药属植物鹿药的根茎及根，有药用价值。常生于林下及山坡阴处。分布中国西南、西北、东北和华北等地。九层楼，性味“甘、苦、温，无毒”。具有补气益肾、祛风除湿、活血调经功能，用于治疗风湿骨痛，神经性头痛，乳腺炎，月经不调，痈疖肿毒，跌打损伤等。张东东等进行了《星点设计-响应面法优选鹿药总黄酮提取工艺》，提取工艺为：称取鹿药药材，置于圆底烧瓶中，加入70％乙醇，回流提取。滤液水浴蒸干，残渣用70％乙醇溶解，过滤。赵淑杰等进行了《高速逆流色谱分离与鉴定鹿药中黄酮类化合物》的研究，公开了鹿药的提取过程：将鹿药根茎加入90％乙醇进行超声波提取，提取液浓缩得到的浸膏过D101大孔吸附树脂吸附，洗脱部分再上硅胶柱进行梯度洗脱。刘霞等进行了《大孔吸附树脂纯化鹿药总皂苷和总黄酮的研究》，研究公开了鹿药的总皂苷和总黄酮的提取过程：将鹿药根及根茎，用80％乙醇加热回流提取，滤液旋转蒸发浓缩得浸膏，将浸膏加入水中，用石油醚脱脂，正丁醇萃取，浓缩正丁醇相，用乙醇溶解。现有的提取方法，存在提取时间长、消耗溶剂多、提取效率低等不足。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提供一种壮药九层楼总黄酮提取方法，包括原料预处理、高压脉冲电场提取、层析、膜过滤和柱层析吸附步骤，整个方法操作简单，反应时间短，溶剂用量少，总黄酮提取率高，得到的总黄酮活性高，且纯度大于96％。
本发明通过以下技术方案实现：
壮药九层楼总黄酮提取方法，包括以下步骤：
(1)原料预处理：将九层楼药材洗净，烘干，粉碎，得九层楼药材粉末；
(2)高压脉冲电场提取：向九层楼药材粉末中加入有机醇，浸泡；然后进行高压脉冲电场提取，过滤，滤渣用有机醇洗涤，合并滤液并减压浓缩，得浸膏；
(3)层析：将浸膏用有机醇溶解，加入无机碱溶液，调节溶液pH至碱性，静置，过滤，滤液用酸性水溶液调节溶液pH至酸性或中性，然后将溶液放入层析罐中自然层析，过滤，将沉淀物干燥，得九层楼总黄酮粗品I；
(4)膜过滤：将九层楼总黄酮粗品I用有机醇溶解，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，滤液浓缩干燥，得九层楼总黄酮粗品II；
(5)柱层析吸附：将九层楼总黄酮粗品II用甲醇溶解，加入以葡聚糖凝胶LX-20为吸附剂的层析柱进行吸附，用甲醇洗脱液洗脱，收集黄色色带并浓缩干燥，得纯度大于96％的九层楼总黄酮纯品。
作为本发明的进一步说明，步骤(1)所述九层楼药材粉末为过60-120目筛。
作为本发明的进一步说明，步骤(2)所述九层楼药材粉末与有机醇的料液比为1:30-45，所述有机醇为C1-C4的一元醇。
作为本发明的进一步说明，步骤(2)所述高压脉冲电场的强度为35-45kV/cm，脉冲宽度为20-50μs，脉冲频率为300-800Hz，提取时间为10-30min。
作为本发明的进一步说明，步骤(3)所述无机碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钠或碳酸氢钠溶液中的一种或多种。
作为本发明的进一步说明，步骤(3)所述调节溶液pH至碱性的pH＝9-12。
作为本发明的进一步说明，步骤(3)所述酸性水溶液为盐酸、硫酸、醋酸中的一种多或多种。
作为本发明的进一步说明，步骤(3)所述调节溶液pH至酸性的pH＝4-6。
作为本发明的进一步说明，所述陶瓷超滤膜过滤的条件为：操作压力0.2-0.4MPa，温度为20-35℃，截留分子质量为1000-20000。
作为本发明的进一步说明，步骤(5)所述甲醇洗脱液的浓度为60-90％甲醇。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1、本发明的壮药九层楼总黄酮提取方法，包括原料预处理、高压脉冲电场提取、层析、膜过滤和柱层析吸附步骤，整个方法操作简单，反应时间短，溶剂用量少，总黄酮提取率高，得到的总黄酮活性高，且纯度大于96％。
2、本发明的提取过程均在低温下进行，不仅降低了能源的消耗，而且能够避免热敏性成分在高温下遭到破坏，最大限度的保护了黄酮母核的活性。
3、本发明采用高压脉冲电场提取，高压脉冲电场具有极强的穿透力，能在瞬间使细胞的细胞壁和细胞膜电位混乱，改变其通透性，甚至可以击穿细胞壁和细胞膜，使其发生不可逆转的变化，造成细胞新陈代谢紊乱，从而使细胞内的黄酮流出，使黄酮的提取率大大提高。
4、本发明提取后的溶液依次经过层析、膜过滤和柱层析吸附三个步骤进行除杂纯化，能够有效清除九层楼总黄酮中的杂质，提高总黄酮的纯度。
具体实施方式
下面将结合具体实施例对本发明进一步详细说明，但不限于本发明的保护范围。
实施例1
壮药九层楼总黄酮提取方法，包括以下步骤：
(1)原料预处理：将九层楼药材洗净，烘干，粉碎，过60目筛，得九层楼药材粉末；
(2)高压脉冲电场提取：向九层楼药材粉末中加入乙醇，九层楼药材粉末与乙醇的料液比为1:30，浸泡；然后进行高压脉冲电场提取，高压脉冲电场的强度为35kV/cm，脉冲宽度为20μs，脉冲频率为300Hz，提取时间为30min，过滤，滤渣用乙醇洗涤，合并滤液并减压浓缩，得浸膏；
(3)层析：将浸膏用乙醇溶解，加入氢氧化钠溶液，调节溶液pH至9，静置，过滤，滤液用盐酸调节溶液pH至6，然后将溶液放入层析罐中自然层析，过滤，将沉淀物干燥，得九层楼总黄酮粗品I；
(4)膜过滤：将九层楼总黄酮粗品I用乙醇溶解，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，分离操作压力0.2MPa，温度为20℃，截留分子质量为1000-20000，滤液浓缩干燥，得九层楼总黄酮粗品II；
(5)柱层析吸附：将九层楼总黄酮粗品II用甲醇溶解，加入以葡聚糖凝胶LX-20为吸附剂的层析柱进行吸附，用90％甲醇洗脱，收集黄色色带并浓缩干燥，得九层楼总黄酮纯品。
本实施例获得的九层楼总黄酮纯品，经HPLC检测，纯度为96.7％。
实施例2
壮药九层楼总黄酮提取方法，包括以下步骤：
(1)原料预处理：将九层楼药材洗净，烘干，粉碎，过120目筛，得九层楼药材粉末；
(2)高压脉冲电场提取：向九层楼药材粉末中加入甲醇，九层楼药材粉末与甲醇的料液比为1:45，浸泡；然后进行高压脉冲电场提取，高压脉冲电场的强度为45kV/cm，脉冲宽度为50μs，脉冲频率为800Hz，提取时间为10min，过滤，滤渣用甲醇洗涤，合并滤液并减压浓缩，得浸膏；
(3)层析：将浸膏用甲醇溶解，加入氢氧化钾溶液，调节溶液pH至12，静置，过滤，滤液用硫酸调节溶液pH至中性，然后将溶液放入层析罐中自然层析，过滤，将沉淀物干燥，得九层楼总黄酮粗品I；
(4)膜过滤：将九层楼总黄酮粗品I用甲醇溶解，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，分离操作压力0.4MPa，温度为35℃，截留分子质量为1000-20000，滤液浓缩干燥，得九层楼总黄酮粗品II；
(5)柱层析吸附：将九层楼总黄酮粗品II用甲醇溶解，加入以葡聚糖凝胶LX-20为吸附剂的层析柱进行吸附，用60％甲醇洗脱，收集黄色色带并浓缩干燥，得九层楼总黄酮纯品。
本实施例获得的九层楼总黄酮纯品，经HPLC检测，纯度为97.0％。
实施例3
壮药九层楼总黄酮提取方法，包括以下步骤：
(1)原料预处理：将九层楼药材洗净，烘干，粉碎，过80目筛，得九层楼药材粉末；
(2)高压脉冲电场提取：向九层楼药材粉末中加入丙醇，九层楼药材粉末与丙醇的料液比为1:40，浸泡；然后进行高压脉冲电场提取，高压脉冲电场的强度为40kV/cm，脉冲宽度为30μs，脉冲频率为500Hz，提取时间为20min，过滤，滤渣用丙醇洗涤，合并滤液并减压浓缩，得浸膏；
(3)层析：将浸膏用丙醇溶解，加入碳酸钠溶液，调节溶液pH至10，静置，过滤，滤液用盐酸和醋酸调节溶液pH至中性，然后将溶液放入层析罐中自然层析，过滤，将沉淀物干燥，得九层楼总黄酮粗品I；
(4)膜过滤：将九层楼总黄酮粗品I用丙醇溶解，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，分离操作压力0.3MPa，温度为30℃，截留分子质量为1000-20000，滤液浓缩干燥，得九层楼总黄酮粗品II；
(5)柱层析吸附：将九层楼总黄酮粗品II用甲醇溶解，加入以葡聚糖凝胶LX-20为吸附剂的层析柱进行吸附，用80％甲醇洗脱，收集黄色色带并浓缩干燥，得九层楼总黄酮纯品。
本实施例获得的九层楼总黄酮纯品，经HPLC检测，纯度为99.0％。
实施例4
壮药九层楼总黄酮提取方法，包括以下步骤：
(1)原料预处理：将九层楼药材洗净，烘干，粉碎，过100目筛，得九层楼药材粉末；
(2)高压脉冲电场提取：向九层楼药材粉末中加入丁醇，九层楼药材粉末与丁醇的料液比为1:43，浸泡；然后进行高压脉冲电场提取，高压脉冲电场的强度为40kV/cm，脉冲宽度为40μs，脉冲频率为600Hz，提取时间为18min，过滤，滤渣用丁醇洗涤，合并滤液并减压浓缩，得浸膏；
(3)层析：将浸膏用丁醇溶解，加入氢氧化钠和氢氧化钾溶液，调节溶液pH至11，静置，过滤，滤液用盐酸调节溶液pH至5，然后将溶液放入层析罐中自然层析，过滤，将沉淀物干燥，得九层楼总黄酮粗品I；
(4)膜过滤：将九层楼总黄酮粗品I用丁醇溶解，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，分离操作压力0.4MPa，温度为28℃，截留分子质量为1000-20000，滤液浓缩干燥，得九层楼总黄酮粗品II；
(5)柱层析吸附：将九层楼总黄酮粗品II用甲醇溶解，加入以葡聚糖凝胶LX-20为吸附剂的层析柱进行吸附，用70％甲醇洗脱，收集黄色色带并浓缩干燥，得九层楼总黄酮纯品。
本实施例获得的九层楼总黄酮纯品，经HPLC检测，纯度为98.7％。
实施例5
壮药九层楼总黄酮提取方法，包括以下步骤：
(1)原料预处理：将九层楼药材洗净，烘干，粉碎，过80目筛，得九层楼药材粉末；
(2)高压脉冲电场提取：向九层楼药材粉末中加入乙醇，九层楼药材粉末与乙醇的料液比为1:42，浸泡；然后进行高压脉冲电场提取，高压脉冲电场的强度为40kV/cm，脉冲宽度为30μs，脉冲频率为400Hz，提取时间为25min，过滤，滤渣用乙醇洗涤，合并滤液并减压浓缩，得浸膏；
(3)层析：将浸膏用乙醇溶解，加入碳酸氢钠溶液，调节溶液pH至9，静置，过滤，滤液用醋酸调节溶液pH至中性，然后将溶液放入层析罐中自然层析，过滤，将沉淀物干燥，得九层楼总黄酮粗品I；
(4)膜过滤：将九层楼总黄酮粗品I用乙醇溶解，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，分离操作压力0.3MPa，温度为25℃，截留分子质量为1000-20000，滤液浓缩干燥，得九层楼总黄酮粗品II；
(5)柱层析吸附：将九层楼总黄酮粗品II用甲醇溶解，加入以葡聚糖凝胶LX-20为吸附剂的层析柱进行吸附，用90％甲醇洗脱，收集黄色色带并浓缩干燥，得九层楼总黄酮纯品。
本实施例获得的九层楼总黄酮纯品，经HPLC检测，纯度为98.5％。

Claims (10)

1.壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)原料预处理：将九层楼药材洗净，烘干，粉碎，得九层楼药材粉末；
(2)高压脉冲电场提取：向九层楼药材粉末中加入有机醇，浸泡；然后进行高压脉冲电场提取，过滤，滤渣用有机醇洗涤，合并滤液并减压浓缩，得浸膏；
(3)层析：将浸膏用有机醇溶解，加入无机碱溶液，调节溶液pH至碱性，静置，过滤，滤液用酸性水溶液调节溶液pH至酸性或中性，然后将溶液放入层析罐中自然层析，过滤，将沉淀物干燥，得九层楼总黄酮粗品I；
(4)膜过滤：将九层楼总黄酮粗品I用有机醇溶解，然后经陶瓷超滤膜进行过滤，滤液浓缩干燥，得九层楼总黄酮粗品II；
(5)柱层析吸附：将九层楼总黄酮粗品II用甲醇溶解，加入以葡聚糖凝胶LX-20为吸附剂的层析柱进行吸附，用甲醇洗脱液洗脱，收集黄色色带并浓缩干燥，得纯度大于96％的九层楼总黄酮纯品。
2.根据权利要求1所述壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，步骤(1)所述九层楼药材粉末为过60-120目筛。
3.根据权利要求1所述壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，步骤(2)所述九层楼药材粉末与有机醇的料液比为1:30-45，所述有机醇为C1-C4的一元醇。
4.根据权利要求1所述壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，步骤(2)所述高压脉冲电场的强度为35-45kV/cm，脉冲宽度为20-50μs，脉冲频率为300-800Hz，提取时间为10-30min。
5.根据权利要求1所述壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，步骤(3)所述无机碱溶液为氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、碳酸钠或碳酸氢钠溶液中的一种或多种。
6.根据权利要求1所述壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，步骤(3)所述调节溶液pH至碱性的pH＝9-12。
7.根据权利要求1所述壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，步骤(3)所述酸性水溶液为盐酸、硫酸、醋酸中的一种多或多种。
8.根据权利要求1所述壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，步骤(3)所述调节溶液pH至酸性的pH＝4-6。
9.根据权利要求1所述壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，所述陶瓷超滤膜过滤的条件为：操作压力0.2-0.4MPa，温度为20-35℃，截留分子质量为1000-20000。
10.根据权利要求1所述壮药九层楼总黄酮提取方法，其特征在于，步骤(5)所述甲醇洗脱液的浓度为60-90％甲醇。
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