CN107653223A - 一种羊膜干细胞培养基及其培养方法 - Google Patents

一种羊膜干细胞培养基及其培养方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107653223A
CN107653223A CN201711080968.XA CN201711080968A CN107653223A CN 107653223 A CN107653223 A CN 107653223A CN 201711080968 A CN201711080968 A CN 201711080968A CN 107653223 A CN107653223 A CN 107653223A
Authority
CN
China
Prior art keywords
cell
stem cell
amnion
culture
amnion stem
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201711080968.XA
Other languages
English (en)
Inventor
彭崇军
周星
段中鑫
刘汉龙
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
JIANGXI RUIJI BIO-ENGINEERING TECHNOLOGY Co Ltd
Original Assignee
JIANGXI RUIJI BIO-ENGINEERING TECHNOLOGY Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by JIANGXI RUIJI BIO-ENGINEERING TECHNOLOGY Co Ltd filed Critical JIANGXI RUIJI BIO-ENGINEERING TECHNOLOGY Co Ltd
Priority to CN201711080968.XA priority Critical patent/CN107653223A/zh
Publication of CN107653223A publication Critical patent/CN107653223A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
    • C12N5/0602—Vertebrate cells
    • C12N5/0603—Embryonic cells ; Embryoid bodies
    • C12N5/0605—Cells from extra-embryonic tissues, e.g. placenta, amnion, yolk sac, Wharton's jelly
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/34—Sugars
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/38—Vitamins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/30—Organic components
    • C12N2500/46—Amines, e.g. putrescine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/30—Hormones
    • C12N2501/38—Hormones with nuclear receptors
    • C12N2501/39—Steroid hormones
    • C12N2501/392—Sexual steroids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
    • C12N2501/999—Small molecules not provided for elsewhere

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Developmental Biology & Embryology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

本发明提供一种羊膜干细胞培养基，包括如下组分：DMEM/F12、富血小板血浆、右旋糖酐、三乙醇胺、谷胱甘肽、羟乙基纤维素、叶酸、倍他米松、黄体酮、卫矛醇、枸橼酸钠。本发明从体外取人羊膜提取羊膜干细胞并进行培养，与用含有胎牛血清的培养液培养人羊膜间充质干细胞相比，具有无其他动物源性、来源广泛、不受伦理限制及无异种免疫原性等优越性。

Description

一种羊膜干细胞培养基及其培养方法
技术领域
本发明涉及生物医药工程领域，尤其是涉及一种羊膜干细胞培养基及 其培养方法。
背景技术
近些年来，再生医学蓬勃发展，干细胞的研究取得了重大突破。使用干 细胞来生成机体组织和器官以替代人体丧失功能的器官和组织来达到治疗目 的已逐步成为现实。干细胞很可能在医学领域引发革命性进步，因而具有不 可估量的医学价值而引起全世界的广泛关注和研究。是21世纪最具有发展和 应用前景的领域。再生医学需要具备三个必要的条件：(1)干细胞，即具有高 度的自我更新、增殖和分化能力，能够修复受损器官组织的细胞；(2)支架， 支持细胞的生长；(3)生长和分化因子，促进细胞增殖和分化。其中干细胞起 着举足轻重的作用，人们最早发现胚胎干细胞是能够无限增殖并且向三个胚 层分化，但是胚胎干细胞存在伦理问题。
人羊膜易于获得，具有不引起伦理学争议、所含羊膜干细胞(羊膜上皮 干细胞和羊膜间充质干细胞)含量丰富、免疫原性低等特点，可成为再生医 学临床应用的重要种子细胞来源。
目前，干细胞的常规培养体系中均加入了一定比例的胎牛血清进行培养， 存在异种免疫原性方面的实际问题，限制了临床广泛应用。
发明内容
为解决上述现有技术中所存在的问题，本发明提供一种羊膜干细胞培养 基，采用如下技术方案实现：
一种羊膜干细胞培养基，包括如下组分：
优选地，所述的羊膜干细胞培养基，包括如下组分：
优选地，所述富血小板血浆来自用血细胞分离机直接采集的浓缩血小板 (机采血小板)、静脉采集的全血(抗凝血)经两次离心法分离制备的血小板 浓缩液(富浆法手工血小板)或商业富血小板血浆。
本发明还提供一种羊膜干细胞的培养方法，包括以下步骤：
(1)人羊膜干细胞分离及单细胞悬液的制备
取人羊膜先用浓度3g/L胰蛋白酶，室温消化30～60分钟，共2～4次，然 后用VDMEM∶VF12＝1∶1的DMEM/F12培养液中止胰蛋白酶，采用含加入浓 度为1.0～2.0g/L胶原酶IV和0.1～0.2g/L脱氧核糖核酸酶I的DMEM/F12培养 液，37℃消化30～60分钟，得到细胞悬液，过滤，制成单细胞悬液；
(2)人羊膜干细胞的培养、纯化及扩增
将第(1)步所得细胞接种于培养基中，置于37℃、饱和湿度、体积分数为 5％的CO2培养箱中进行培养，并通过换液和传代，使人羊膜干细胞逐渐得到 扩增和纯化；
所述培养基采用前述的羊膜干细胞培养基；
在上述第(2)步中，将第(1)步所得细胞以1×107L-1～5×108L-1密度接种于培 养基中培养；
将细胞扩增和纯化的过程如下：在第(2)步开始细胞培养后，培养48～72 小时，更换培养液，弃去未贴壁的细胞，根据细胞生长情况，2～3天全量换液 一次，待细胞达到80％～90％融合时，用终浓度3g/L胰蛋白酶消化，然后按 1∶2的比例或1∶3的比例进行传代接种培养，并记为P1代，传代培养过程 中每2～3天全量换液，直至贴壁细胞彼此融合，铺满瓶底，重复上述操作进 行传代培养，并记为P2代，继续上述传代培养过程。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：人羊膜是胎儿出生以后的 废弃物，本发明从体外取人羊膜提取羊膜干细胞并进行培养，与用含有胎牛 血清的培养液培养人羊膜间充质干细胞相比，具有无其他动物源性、来源广 泛、不受伦理限制及无异种免疫原性等优越性。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明一种羊膜干细胞凝胶作进一步的详细说 明。
实施例1
一种羊膜干细胞的培养方法，包括以下步骤：
(1)人羊膜干细胞分离及单细胞悬液的制备
取人羊膜先用浓度3g/L胰蛋白酶，室温消化30～60分钟，共2～4次，然 后用VDMEM∶VF12＝1∶1的DMEM/F12培养液中止胰蛋白酶，采用含加入浓 度为1.0～2.0g/L胶原酶IV和0.1～0.2g/L脱氧核糖核酸酶I的DMEM/F12培养 液，37℃消化30～60分钟，得到细胞悬液，过滤，制成单细胞悬液；
(2)人羊膜干细胞的培养、纯化及扩增
将第(1)步所得细胞接种于培养基中，置于37℃、饱和湿度、体积分数为 5％的CO2培养箱中进行培养，并通过换液和传代，使人羊膜干细胞逐渐得到 扩增和纯化；
所述培养基包括如下组分：DMEM/F12 16g/L，富血小板血浆8g/L，右 旋糖酐6g/L，三乙醇胺8mg/L，谷胱甘肽30mg/L，羟乙基纤维素15mg/L， 叶酸25mg/L，倍他米松18mg/L，黄体酮40mg/L，卫矛醇10mg/L，枸橼 酸钠12mg/L。
在上述第(2)步中，将第(1)步所得细胞以1×107L-1～5×108L-1密度接种于培 养基中培养；
将细胞扩增和纯化的过程如下：在第(2)步开始细胞培养后，培养48～72 小时，更换培养液，弃去未贴壁的细胞，根据细胞生长情况，2～3天全量换液 一次，待细胞达到80％～90％融合时，用终浓度3g/L胰蛋白酶消化，然后按 1∶2的比例或1∶3的比例进行传代接种培养，并记为P1代，传代培养过程 中每2～3天全量换液，直至贴壁细胞彼此融合，铺满瓶底，重复上述操作进 行传代培养，并记为P2代，继续上述传代培养过程。
实施例2
一种羊膜干细胞的培养方法，包括以下步骤：
(1)人羊膜干细胞分离及单细胞悬液的制备
取人羊膜先用浓度3g/L胰蛋白酶，室温消化30～60分钟，共2～4次，然 后用VDMEM∶VF12＝1∶1的DMEM/F12培养液中止胰蛋白酶，采用含加入浓 度为1.0～2.0g/L胶原酶IV和0.1～0.2g/L脱氧核糖核酸酶I的DMEM/F12培养 液，37℃消化30～60分钟，得到细胞悬液，过滤，制成单细胞悬液；
(2)人羊膜干细胞的培养、纯化及扩增
将第(1)步所得细胞接种于培养基中，置于37℃、饱和湿度、体积分数为 5％的CO2培养箱中进行培养，并通过换液和传代，使人羊膜干细胞逐渐得到 扩增和纯化；
所述培养基包括如下组分：DMEM/F12 18g/L，富血小板血浆7g/L，右 旋糖酐7g/L，三乙醇胺6mg/L，谷胱甘肽40mg/L，羟乙基纤维素16mg/L， 叶酸24mg/L，倍他米松16mg/L，黄体酮45mg/L，卫矛醇15mg/L，枸橼 酸钠14mg/L。
在上述第(2)步中，将第(1)步所得细胞以1×107L-1～5×108L-1密度接种于培 养基中培养；
将细胞扩增和纯化的过程如下：在第(2)步开始细胞培养后，培养48～72 小时，更换培养液，弃去未贴壁的细胞，根据细胞生长情况，2～3天全量换液 一次，待细胞达到80％～90％融合时，用终浓度3g/L胰蛋白酶消化，然后按 1∶2的比例或1∶3的比例进行传代接种培养，并记为P1代，传代培养过程 中每2～3天全量换液，直至贴壁细胞彼此融合，铺满瓶底，重复上述操作进 行传代培养，并记为P2代，继续上述传代培养过程。
实施例3
一种羊膜干细胞的培养方法，包括以下步骤：
(1)人羊膜干细胞分离及单细胞悬液的制备
取人羊膜先用浓度3g/L胰蛋白酶，室温消化30～60分钟，共2～4次，然 后用VDMEM∶VF12＝1∶1的DMEM/F12培养液中止胰蛋白酶，采用含加入浓 度为1.0～2.0g/L胶原酶IV和0.1～0.2g/L脱氧核糖核酸酶I的DMEM/F12培养 液，37℃消化30～60分钟，得到细胞悬液，过滤，制成单细胞悬液；
(2)人羊膜干细胞的培养、纯化及扩增
将第(1)步所得细胞接种于培养基中，置于37℃、饱和湿度、体积分数为 5％的CO2培养箱中进行培养，并通过换液和传代，使人羊膜干细胞逐渐得到 扩增和纯化；
所述培养基包括如下组分：DMEM/F12 15g/L，富血小板血浆5g/L，右 旋糖酐5g/L，三乙醇胺5mg/L，谷胱甘肽20mg/L，羟乙基纤维素20mg/L， 叶酸30mg/L，倍他米松15mg/L，黄体酮35mg/L，卫矛醇5mg/L，枸橼 酸钠15mg/L。
在上述第(2)步中，将第(1)步所得细胞以1×107L-1～5×108L-1密度接种于培 养基中培养；
将细胞扩增和纯化的过程如下：在第(2)步开始细胞培养后，培养48～72 小时，更换培养液，弃去未贴壁的细胞，根据细胞生长情况，2～3天全量换液 一次，待细胞达到80％～90％融合时，用终浓度3g/L胰蛋白酶消化，然后按 1∶2的比例或1∶3的比例进行传代接种培养，并记为P1代，传代培养过程 中每2～3天全量换液，直至贴壁细胞彼此融合，铺满瓶底，重复上述操作进 行传代培养，并记为P2代，继续上述传代培养过程。
实施例4
一种羊膜干细胞的培养方法，包括以下步骤：
(1)人羊膜干细胞分离及单细胞悬液的制备
取人羊膜先用浓度3g/L胰蛋白酶，室温消化30～60分钟，共2～4次，然 后用VDMEM∶VF12＝1∶1的DMEM/F12培养液中止胰蛋白酶，采用含加入浓 度为1.0～2.0g/L胶原酶IV和0.1～0.2g/L脱氧核糖核酸酶I的DMEM/F12培养 液，37℃消化30～60分钟，得到细胞悬液，过滤，制成单细胞悬液；
(2)人羊膜干细胞的培养、纯化及扩增
将第(1)步所得细胞接种于培养基中，置于37℃、饱和湿度、体积分数为 5％的CO2培养箱中进行培养，并通过换液和传代，使人羊膜干细胞逐渐得到 扩增和纯化；
所述培养基包括如下组分：DMEM/F12 20g/L，富血小板血浆10g/L， 右旋糖酐10g/L，三乙醇胺10mg/L，谷胱甘肽50mg/L，羟乙基纤维素 10mg/L，叶酸20mg/L，倍他米松20mg/L，黄体酮50mg/L，卫矛醇20mg/L， 枸橼酸钠10mg/L。
在上述第(2)步中，将第(1)步所得细胞以1×107L-1～5×108L-1密度接种于培 养基中培养；
将细胞扩增和纯化的过程如下：在第(2)步开始细胞培养后，培养48～72 小时，更换培养液，弃去未贴壁的细胞，根据细胞生长情况，2～3天全量换液 一次，待细胞达到80％～90％融合时，用终浓度3g/L胰蛋白酶消化，然后按 1∶2的比例或1∶3的比例进行传代接种培养，并记为P1代，传代培养过程 中每2～3天全量换液，直至贴壁细胞彼此融合，铺满瓶底，重复上述操作进 行传代培养，并记为P2代，继续上述传代培养过程。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节， 而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实 现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且 是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨 在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实 施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起 见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也 可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。

Claims (4)

1.一种羊膜干细胞培养基，其特征在于，包括如下组分：
2.根据权利要求1所述的羊膜干细胞培养基，其特征在于，包括如下组分：
3.根据权利要求1或2所述的羊膜干细胞培养基，其特征在于，所述富血小板血浆来自用血细胞分离机直接采集的浓缩血小板(机采血小板)、静脉采集的全血(抗凝血)经两次离心法分离制备的血小板浓缩液(富浆法手工血小板)或商业富血小板血浆。
4.一种羊膜干细胞的培养方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)人羊膜干细胞分离及单细胞悬液的制备
取人羊膜先用浓度3g/L胰蛋白酶，室温消化30～60分钟，共2～4次，然后用VDMEM∶VF12＝1∶1的DMEM/F12培养液中止胰蛋白酶，采用含加入浓度为1.0～2.0g/L胶原酶IV和0.1～0.2g/L脱氧核糖核酸酶I的DMEM/F12培养液，37℃消化30～60分钟，得到细胞悬液，过滤，制成单细胞悬液；
(2)人羊膜干细胞的培养、纯化及扩增
将第(1)步所得细胞接种于培养基中，置于37℃、饱和湿度、体积分数为5％的CO2培养箱中进行培养，并通过换液和传代，使人羊膜干细胞逐渐得到扩增和纯化；
所述培养基采用权利要求1～3中任一项所述的羊膜干细胞培养基；
在上述第(2)步中，将第(1)步所得细胞以1×107L-1～5×108L-1密度接种于培养基中培养；
将细胞扩增和纯化的过程如下：在第(2)步开始细胞培养后，培养48～72小时，更换培养液，弃去未贴壁的细胞，根据细胞生长情况，2～3天全量换液一次，待细胞达到80％～90％融合时，用终浓度3g/L胰蛋白酶消化，然后按1∶2的比例或1∶3的比例进行传代接种培养，并记为P1代，传代培养过程中每2～3天全量换液，直至贴壁细胞彼此融合，铺满瓶底，重复上述操作进行传代培养，并记为P2代，继续上述传代培养过程。
CN201711080968.XA 2017-11-06 2017-11-06 一种羊膜干细胞培养基及其培养方法 Pending CN107653223A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711080968.XA CN107653223A (zh) 2017-11-06 2017-11-06 一种羊膜干细胞培养基及其培养方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711080968.XA CN107653223A (zh) 2017-11-06 2017-11-06 一种羊膜干细胞培养基及其培养方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107653223A true CN107653223A (zh) 2018-02-02

Family

ID=61119840

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711080968.XA Pending CN107653223A (zh) 2017-11-06 2017-11-06 一种羊膜干细胞培养基及其培养方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107653223A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108795848A (zh) * 2018-05-07 2018-11-13 广州沙艾生物科技有限公司 一种黑叶猴羊膜干细胞鉴定方法及其应用
CN111139221A (zh) * 2020-01-09 2020-05-12 赛瑞诺(北京)生物科技有限公司 一种羊膜间充质干细胞的培养及冻存方法

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101444202A (zh) * 2007-11-27 2009-06-03 天津市医药科学研究所 一种新鲜羊膜保存液及新鲜羊膜保存方法与应用
CN101914490A (zh) * 2010-08-13 2010-12-15 中国医科大学 一种人羊膜间充质干细胞无血清培养基及其培养方法
CN104450610A (zh) * 2014-11-28 2015-03-25 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种人羊膜间充质干细胞传代培养方法
CN105861425A (zh) * 2015-01-23 2016-08-17 遵义医学院 透明质酸促人羊膜干细胞增殖的方法及其应用
CN106701673A (zh) * 2017-01-20 2017-05-24 北京天晟宇生物科技有限公司 一种人羊膜间充质干细胞的专用培养基
CN106834218A (zh) * 2017-01-06 2017-06-13 庞希宁 人羊膜上皮干细胞无血清培养基及其培养方法

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101444202A (zh) * 2007-11-27 2009-06-03 天津市医药科学研究所 一种新鲜羊膜保存液及新鲜羊膜保存方法与应用
CN101914490A (zh) * 2010-08-13 2010-12-15 中国医科大学 一种人羊膜间充质干细胞无血清培养基及其培养方法
CN104450610A (zh) * 2014-11-28 2015-03-25 广州赛莱拉干细胞科技股份有限公司 一种人羊膜间充质干细胞传代培养方法
CN105861425A (zh) * 2015-01-23 2016-08-17 遵义医学院 透明质酸促人羊膜干细胞增殖的方法及其应用
CN106834218A (zh) * 2017-01-06 2017-06-13 庞希宁 人羊膜上皮干细胞无血清培养基及其培养方法
CN106701673A (zh) * 2017-01-20 2017-05-24 北京天晟宇生物科技有限公司 一种人羊膜间充质干细胞的专用培养基

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
尹科等: "富血小板血浆诱导犬骨髓间充质干细胞的体外成骨", 《中国组织工程研究与临床康复》 *
方宁等: "人羊膜间充质干细胞的分离、培养及鉴定", 《遵义医学院学报》 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108795848A (zh) * 2018-05-07 2018-11-13 广州沙艾生物科技有限公司 一种黑叶猴羊膜干细胞鉴定方法及其应用
CN111139221A (zh) * 2020-01-09 2020-05-12 赛瑞诺(北京)生物科技有限公司 一种羊膜间充质干细胞的培养及冻存方法
CN111139221B (zh) * 2020-01-09 2022-05-10 赛瑞诺(北京)生物科技有限公司 一种羊膜间充质干细胞的培养及冻存方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105687244B (zh) 一种制剂、其制备方法及其应用
CN110564682B (zh) 一种大规模生产人脂肪间充质干细胞外泌体的方法
CN104222069B (zh) 红系祖细胞冻存液及其应用
CN107384858A (zh) 一种缺氧耐受型间充质干细胞的制备方法及其应用
CN106434559A (zh) 千金藤碱的应用以及一种扩增造血干细胞的培养基和方法
CN107653223A (zh) 一种羊膜干细胞培养基及其培养方法
CN108456655A (zh) 间充质干细胞悬浮液及其制备方法与应用
CN106520681A (zh) 斑点叉尾鮰精原干细胞的体外培养液、冻存液及体外培养、冻存方法
CN107384860A (zh) 细胞培养液和nk细胞的培养方法
CN106039448B (zh) Aids细胞吸附治疗仪
CN108030791A (zh) 一种胎盘多能干细胞制剂在制备治疗急性肺损伤药物中的应用
CN107519207A (zh) 一种免疫抑制细胞制剂及其制备方法和应用
CN102988975A (zh) 甲型、乙型肝炎联合疫苗及其制备方法
CN106267416A (zh) 艾滋病治疗仪
CN105640993A (zh) 用于治疗乙肝的脂肪间充质祖细胞和富含血小板的血浆组合物
CN106967683A (zh) 培养多能造血干细胞的方法
CN107142246A (zh) 一种γδT细胞培养方法
CN108192869A (zh) 一种斑点叉尾鮰头肾巨噬细胞原代分离培养方法及应用
CN116920069B (zh) 一种中药提取液及其在促进脐带干细胞分泌vegf中的应用
CN108324737A (zh) 脐带间充质干细胞联合药物治疗高血糖和糖尿病肾病
CN108310015A (zh) 脐带间充质干细胞联合药物治疗高血糖和糖尿病肾病
CN108210518A (zh) 脐带间充质干细胞联合药物治疗高血糖和糖尿病肾病
CN103566367B (zh) 一种口服过敏原疫苗及其制备和应用
CN107252435A (zh) 一种组合细胞制剂及其应用
CN106581068A (zh) 一种可以快速恢复皮肤创面的生物膜及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20180202

RJ01 Rejection of invention patent application after publication