CN107576652B

CN107576652B - 一种尿液中巯基化合物的检测试剂及其制备方法与用途

Info

Publication number: CN107576652B
Application number: CN201710065176.9A
Authority: CN
Inventors: 刘�东
Original assignee: Shenzhen Huachuang Biomedical Technology Co ltd
Current assignee: Shenzhen Huachuang Bio Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date: 2017-02-06
Filing date: 2017-02-06
Publication date: 2021-05-18
Anticipated expiration: 2037-02-06
Also published as: CN107576652A

Abstract

本发明公开的一种尿液中巯基化合物的检测试剂，包括体积比为1∶1∶2的测试剂、对照试剂、显色试剂；测试剂为纯化水，对照试剂为含汞化合物、含镉化合物的水溶液，显色试剂为含磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物的显色缓冲溶液；制备方法包括，(1)测试剂的分装；(2)对照试剂的制备：将含汞化合物、含镉化合物溶解于纯化水中；(3)显色试剂的制备：将磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液与缓冲溶液混合；本发明的优点在于，有效避免尿酸、Vc等还原性物质对巯基的干扰，避免出现假阴性结果，使检测结果更为准确和可靠，且制备方法简便、成本低、易于规模化生产。

Description

一种尿液中巯基化合物的检测试剂及其制备方法与用途

技术领域

本发明属于生化检测技术领域，具体为一种尿液中巯基化合物的检测试剂及其制备方法与用途。

背景技术

在全世界危害女性健康的恶性肿瘤中，子宫颈癌被列在第三位，据统计，2008年在全球女性所有新发癌症中，新发子宫颈癌所占的比例为9％(529800例)，仅次于乳腺癌和结肠直肠癌。而在女性癌症致死的患者中，女性癌症患者死于宫颈癌的为8％(275100例)，位居第四。而死于子宫颈癌的患者当中又有大约23万人是属于发展中国家的，大约占总人数的83％。在我国，据统计每年新发子宫颈癌患者约例130000例。

子宫颈癌是人体最常见的癌瘤之一，不但在女性生殖器官癌瘤中占首位，而且是女性各种恶性肿瘤中最多见的癌瘤，但其发病率有明显的地区差异。我国宫颈癌的发生，在地理分布上的特点是高发区常连接成片，各省宫颈癌相对高发区的市、县也常有互相连接现象。总的趋势是农村高于城市，山区高于平原。根据29个省、市，自治区回顾调查我国宫颈癌死亡率占总癌症死亡率的第四位，占女性癌的第二位。宫颈癌患者的平均发病年龄，各国、各地报道也有差异，我国发病年龄以40～50岁为最多，60～70岁又有一高峰出现。

宫颈癌前病变和宫颈癌发病的整个过程中巯基分子不可逆脱落并经尿液排出体外。因此检测尿液中的巯基化合物可用于宫颈癌的筛查和辅助诊断。巯基作为一种还原剂，可以使磷钨酸、磷钼酸还原成钨蓝和钼蓝而呈蓝色，利用这一特点可从尿液中定性测定巯基。

但人体尿液中成分复杂，不同人之间尿液组分差别更大，尤其是尿液中某些微量成分或者因其他病因导致的代谢异常产物同样会与检测试剂中的汞离子、结合生成颜色沉淀，会严重干扰检测结果的准确性，因此目前的巯基类化合物定性检测试剂虽然灵敏很高，但常常会出现假阴性问题。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明提供了一种尿液中巯基化合物的检测试剂及其制备方法与用途，实现的目的为规避检测试剂容易出现的假阴性问题，使检测结果更为准确。

为了实现上述目的，本发明公开的技术方案为：本发明提供的一种尿液中巯基化合物的检测试剂，包括体积比为1∶1∶2的测试剂、对照试剂、显色试剂；测试剂为纯化水，对照试剂为含汞化合物、含镉化合物的水溶液，显色试剂为含磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物的显色缓冲溶液。选择上述成分共同组成检测试剂，是由于在酸性条件下巯基、尿酸、Vc等还原性物质能将磷钨酸、磷钼酸还原成钨蓝和钼蓝而呈现蓝色，因此提高试剂准确度的关键在于排查尿酸、Vc等还原性物质对巯基的干扰。在阳性样本中对照试剂里的汞离子与尿液中的巯基结合，而无法和显色试剂反应，所以检测试剂要比对照试剂蓝色深从而判定阳性。一般的宫颈癌检测试剂中汞离子与巯基结合并不牢固，显色试剂的加入下汞离子可能与巯基分离从而影响结果的判定；本试剂中对照试剂里含有镉离子能够加速巯基与汞离子的结合并稳定，使检测结果更有可信性，大大减少假阴性的发生。

进一步的，所述含汞化合物包括氯化汞、硫酸汞、硝酸汞，含镉化合物与含汞化合物具有相同的阴性基团。

进一步的，所述含镉化合物包括氯化镉、硫酸镉、硝酸镉。具体选择的含汞化合物和含镉化合物都是可以作为汞离子、镉离子的来源，所对应的化合物和测试剂、显色试剂配合使用时，不会发生其他化学、物理反应，而引入杂质，从而影响检测结果。

进一步的，所述对照试剂中含汞化合物的浓度为0.04～0.08mol/L，含镉化合物的浓度为0.001mol/L。

进一步的，所述显色试剂为含磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物的水溶液与缓冲溶液按照1∶1体积比混合的混合溶液，磷钨酸在水溶液中的浓度为20g-35g/L，磷钼酸在水溶液的浓度为30-50g/L、含锂化合物在水溶液的浓度为250～350mg/L。上述所优选的原材料浓度，使得检测时显色更为灵敏、清晰。

进一步的，所述显色试剂中的含锂化合物为硫酸锂。

进一步的，所述显色试剂中的缓冲溶液为邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液，缓冲溶液中邻苯二甲酸浓度为0.2mol/L，盐酸浓度为0.2mol/L。

所选择的缓冲溶液可以和磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物组成检测到尿液中巯基化合物显色试剂，显色清晰、稳定持久，便于观察和判断。

本发明还公开了制备上述检测试剂的方法，包括如下步骤，(1)将测试剂分装入安瓿瓶并拉丝灌封；

(4)对照试剂的制备：将含汞化合物、含镉化合物溶解于纯化水中，得到对照试剂，将对照试剂分装入安瓿瓶中并拉丝灌封；

(5)显色试剂的制备：a、将磷钨酸、磷钼酸分别溶于纯化水中加热助溶，待降至室温后将溶解均匀的磷钨酸水溶液与磷钼酸水溶液混合、定容，定容后加入含锂化合物，得到磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物混合水溶液，将该混合水溶液降温；

b、缓冲溶液的制备：将缓冲溶液的PH值调节在3.2-3.8之间；

c、将磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液与缓冲溶液混合得到显色试剂，并分装入安瓿瓶并拉丝灌封。

整个制备方法无污染废液产生、无高耗能条件，制备方法简便、易操作，适于大规模化生产。

进一步的，所述步骤(2)最终得到的对照试剂中含汞化合物的浓度为0.04～0.08mol/L，含镉化合物的浓度为0.001mol/L。

进一步的，所述步骤(3)得到的磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液中，磷钨酸的浓度为20g-35g/L，磷钼酸的浓度为30-50g/L，含锂化合物的浓度为250～350mg/L。

进一步的，所述步骤(3)中，磷钨酸、磷钼酸分别溶于纯化水中，加热助溶的温度均为20-40℃。所选择的温度为了帮助磷钨酸、磷钼酸最快的溶解于水中，缩短制备时间。

进一步的，所述步骤(3)中，将最终得到的磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液降温，于2～8℃冷藏备用。所选择的备用条件使混合溶液不与其他物质发生反应，从而保证混合水溶液不会变质，可随高效利用。

进一步的，所述步骤(3)中缓冲溶液为邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液，缓冲溶液中邻苯二甲酸浓度为0.2mol/L，盐酸浓度为0.2mol/L。

进一步的，所述步骤(3)中将磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液与缓冲溶液按照体积比1∶1混合，得到显色试剂。

本发明发现，将该检测试剂作为筛查宫颈癌检测试剂的应用，能够对宫颈癌初期，即尿液中巯基化合物浓度较低时也能够检测，有效避免了假阴性的出现，确保结果准确、可靠。

本发明的积极进步效果在于：本发明的检测试剂能够有效避免尿酸、Vc等还原性物质对巯基的干扰，避免出现假阴性结果，使检测结果更为准确和可靠，且制备方法简便、成本低、易于规模化生产。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明做进一步的详细描述。以下没有特殊说明环境参数的，均是采用的自然温度等环境参数。

实施例一：本发明提供的尿液中巯基化合物的检测试剂，包括体积比为1∶1∶2的测试剂、对照试剂、显色试剂，测试剂为纯化水，对照试剂为含汞化合物、含镉化合物的水溶液，显色试剂为含磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物的显色缓冲溶液。

所具体选用的含汞化合物、含镉化合物分别为氯化汞、氯化镉，其在对照试剂中的浓度分别为，氯化汞0.04mol/L，氯化镉0.001mol/L。

所选择的显色试剂具体为为含磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物的水溶液与缓冲溶液按照1∶1体积比混合的混合溶液，磷钨酸在水溶液中的浓度为20g/L，磷钼酸在水溶液的浓度为30g/L、含锂化合物在水溶液的浓度为250mg/L。

含锂化合物为硫酸锂，缓冲溶液为邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液，缓冲溶液中邻苯二甲酸浓度为0.2mol/L，盐酸浓度为0.2mol/L，PH值为3.2。

制备所述检测试剂的方法，包括如下步骤，(1)将测试剂分装入安瓿瓶并拉丝灌封；

(2)对照试剂的制备：将上述含汞化合物、含镉化合物溶解于纯化水中，得到对照试剂，将对照试剂分装入安瓿瓶中并拉丝灌封；

(3)显色试剂的制备：a、将磷钨酸、磷钼酸分别溶于纯化水中加热至20℃助溶，待降至室温后将溶解均匀的磷钨酸水溶液与磷钼酸水溶液混合、定容，定容后加入上述含锂化合物，得到磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物混合水溶液，将该混合水溶液降温，于2～8℃冷藏备用；

b、缓冲溶液的制备：邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液的PH值调节为3.2；

c、将磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液与缓冲溶液按照1∶1的体积比混合得到显色试剂，并分装入安瓿瓶并拉丝灌封。

本发明的检测试剂，与现有技术中仅含汞离子的检测试剂相比，汞离子与巯基结合并不牢固，显色试剂的加入下汞离子可能与巯基分离从而影响结果的判定，本试剂中对照试剂里含有镉离子能够加速巯基与汞离子的结合并稳定，使检测结果更有可信性，大大减少假阴性的发生。

以下选取的部分试验用以验证本发明检测试剂的抗干扰能力：

1.试验对象

临床检测为有高血压、肾炎、胆囊炎、糖尿病、肝炎、泌尿系统感染等良性疾病的患者。

2.试验方法

1)以下试验均采用实施例1制备的检测试剂

2)所有试验对象均取新鲜洁净晨尿1mL加入试剂盒中的对照试剂和测试试剂中，摇匀、静置，而后在对照试剂盒检测试剂中分别加入2mL检测试剂；自然光下观察并将对照试剂和检测试剂溶液的颜色进行对比：溶液颜色一致则判定为阴性，若颜色不同，且测试试剂显示的蓝色深于对照试剂则判定为阳性。

3.实验结果：

组别	病例数	检测阳性数	阳性率
				高血压	100	2	2.0％
肾炎	94	7	7.4％
				胆囊炎	152	4	2.6％
糖尿病	236	10	4.2％
				肝炎	140	7	5.0％
泌尿系统感染	174	14	8.0％

由上表可知，即使有其他因素干扰，本发明检测试剂一样可以检测出尿液中巯基化合物，抗干扰能力强，结果更为准确和可靠。

实施例二：本发明提供的尿液中巯基化合物的检测试剂，包括体积比为1∶1∶2的测试剂、对照试剂、显色试剂，测试剂为纯化水，对照试剂为含汞化合物、含镉化合物的水溶液，显色试剂为含磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物的显色缓冲溶液。

所具体选用的含汞化合物、含镉化合物分别为硫酸汞、硫酸镉，其在对照试剂中的浓度分别为，硫酸汞0.08mol/L，硫酸镉0.001mol/L。

所选择的显色试剂具体为为含磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物的水溶液与缓冲溶液按照1∶1体积比混合的混合溶液，磷钨酸在水溶液中的浓度为35g/L，磷钼酸在水溶液的浓度为50g/L、含锂化合物在水溶液的浓度为350mg/L。

含锂化合物为硫酸锂，缓冲溶液为邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液，缓冲溶液中邻苯二甲酸浓度为0.2mol/L，盐酸浓度为0.2mol/L，PH值为3.8。

(3)显色试剂的制备：a、将磷钨酸、磷钼酸分别溶于纯化水中加热至40℃助溶，待降至室温后将溶解均匀的磷钨酸水溶液与磷钼酸水溶液混合、定容，定容后加入上述含锂化合物，得到磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物混合水溶液，将该混合水溶液降温，于2～8℃冷藏备用；

b、缓冲溶液的制备：邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液的PH值调节为3.8；

本发明检测试剂可以用作筛查宫颈癌检测试剂，例如下述验证试验：

1.试验对象

宫颈癌病变、宫颈癌(早、中、晚期)患者以及正常妇女共1862名，应用本试剂盒进行检测。

2.试验方法同实施例1。

3.实验结果：见表1

表1各组尿液比较

组别	患者例数	检测出阳性人数	阳性率
				宫颈癌前病变组	421	354	84.1％
早期宫颈癌组	387	311	80.4％
				中晚期宫颈癌组	384	345	89.8％
正常人	670	5	0.7％

实施例三：本发明提供的尿液中巯基化合物的检测试剂，包括体积比为1∶1∶2的测试剂、对照试剂、显色试剂，测试剂为纯化水，对照试剂为含汞化合物、含镉化合物的水溶液，显色试剂为含磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物的显色缓冲溶液。

所具体选用的含汞化合物、含镉化合物分别为硝酸汞、硝酸镉，其在对照试剂中的浓度分别为，硝酸汞0.06mol/L，硝酸镉0.001mol/L。

所选择的显色试剂具体为为含磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物的水溶液与缓冲溶液按照1∶1体积比混合的混合溶液，磷钨酸在水溶液中的浓度为30g/L，磷钼酸在水溶液的浓度为40g/L、含锂化合物在水溶液的浓度为300mg/L。

含锂化合物为硫酸锂，缓冲溶液为邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液，缓冲溶液中邻苯二甲酸浓度为0.2mol/L，盐酸浓度为0.2mol/L，PH值为3.5。

(3)显色试剂的制备：a、将磷钨酸、磷钼酸分别溶于纯化水中加热至30℃助溶，待降至室温后将溶解均匀的磷钨酸水溶液与磷钼酸水溶液混合、定容，定容后加入上述含锂化合物，得到磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物混合水溶液，将该混合水溶液降温，于2～8℃冷藏备用；

b、缓冲溶液的制备：邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液的PH值调节为3.5；

实施例四：本发明提供的尿液中巯基化合物的检测试剂，包括体积比为1∶1∶2的测试剂、对照试剂、显色试剂，测试剂为纯化水，对照试剂为含汞化合物、含镉化合物的水溶液，显色试剂为含磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物的显色缓冲溶液。

所具体选用的含汞化合物、含镉化合物分别为硝酸汞、硝酸镉，其在对照试剂中的浓度分别为，硝酸汞0.05mol/L，硝酸镉0.001mol/L。

所选择的显色试剂具体为为含磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物的水溶液与缓冲溶液按照1∶1体积比混合的混合溶液，磷钨酸在水溶液中的浓度为25g/L，磷钼酸在水溶液的浓度为35g/L、含锂化合物在水溶液的浓度为270mg/L。

含锂化合物为硫酸锂，缓冲溶液为邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液，缓冲溶液中邻苯二甲酸浓度为0.2mol/L，盐酸浓度为0.2mol/L，PH值为3.7。

b、缓冲溶液的制备：邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液的PH值调节为3.7；

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims

1.一种尿液中巯基化合物的检测试剂，包括体积比为1:1:2的测试剂、对照试剂、显色试剂，其特征在于，测试剂为纯化水，对照试剂为含汞化合物、含镉化合物的水溶液，显色试剂为含磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物的显色缓冲溶液；上述对照试剂中含汞化合物的浓度为0.04～0.08mol/L，含镉化合物的浓度为0.001mol/L；上述显色试剂为含磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物的水溶液与缓冲溶液按照1：1体积比混合的混合溶液，磷钨酸在水溶液中的浓度为20g-35g/L，磷钼酸在水溶液的浓度为30-50g/L、含锂化合物在水溶液的浓度为250～350mg/L。

2.根据权利要求1所述的尿液中巯基化合物的检测试剂，其特征在于，所述含汞化合物包括氯化汞、硫酸汞、硝酸汞，含镉化合物与含汞化合物具有相同的阴性基团。

3.根据权利要求2所述的尿液中巯基化合物的检测试剂，其特征在于，所述含镉化合物包括氯化镉、硫酸镉、硝酸镉。

4.根据权利要求1所述的尿液中巯基化合物的检测试剂，其特征在于，所述显色试剂中的含锂化合物为硫酸锂。

5.根据权利要求1所述的尿液中巯基化合物的检测试剂，其特征在于，所述显色试剂中的缓冲溶液为邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液。

6.根据权利要求5所述的尿液中巯基化合物的检测试剂，其特征在于，缓冲溶液中邻苯二甲酸浓度为0.2mol/L，盐酸浓度为0.2mol/L。

7.一种制备权利要求1-6任一项所述的尿液中巯基化合物检测试剂的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤，

(1)将测试剂分装入安瓿瓶并拉丝灌封；

(2)对照试剂的制备：将含汞化合物、含镉化合物溶解于纯化水中，得到对照试剂，将对照试剂分装入安瓿瓶中并拉丝灌封；上述对照试剂中含汞化合物的浓度为0.04～0.08mol/L，含镉化合物的浓度为0.001mol/L；

(3)显色试剂的制备：a、将磷钨酸、磷钼酸分别溶于纯化水中加热助溶，待降至室温后将溶解均匀的磷钨酸水溶液与磷钼酸水溶液混合、定容，定容后加入含锂化合物，得到磷钨酸、磷钼酸以及含锂化合物混合水溶液，将该混合水溶液降温，上述磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液中，磷钨酸的浓度为20g-35g/L，磷钼酸的浓度为30-50g/L，含锂化合物的浓度为250～350mg/L；b、缓冲溶液的制备：将缓冲溶液的pH 值调节在3.2-3.8之间；c、将磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液与缓冲溶液按照体积比1：1混合得到显色试剂，并分装入安瓿瓶并拉丝灌封。

8.根据权利要求7所述的制备尿液中巯基化合物检测试剂的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，磷钨酸、磷钼酸分别溶于纯化水中，加热助溶的温度均为20-40℃。

9.根据权利要求7所述的制备尿液中巯基化合物检测试剂的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，将最终得到的磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液降温，于2～8℃冷藏备用。

10.根据权利要求7所述的制备尿液中巯基化合物检测试剂的方法，其特征在于，所述步骤(3)中缓冲溶液为邻苯二甲酸-盐酸体系缓冲溶液，缓冲溶液中邻苯二甲酸浓度为0.2mol/L，盐酸浓度为0.2mol/L。

11.根据权利要求7所述的制备尿液中巯基化合物检测试剂的方法，其特征在于，所述步骤(3)中将磷钨酸、磷钼酸、含锂化合物混合水溶液与缓冲溶液按照体积比1:1混合，得到显色试剂。