CN107574223A - 一种大豆蛋白中耐热菌的检测方法及耐热菌检测培养基 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种大豆蛋白中耐热菌的检测方法及耐热菌检测培养基，该方法包括将大豆蛋白样品加入无菌生理盐水中，配制大豆蛋白稀释液，大豆蛋白稀释液煮沸后保温加热，然后快速冷却至室温；将冷却后的大豆蛋白稀释液与耐热菌检测培养基混合均匀，于36℃±1培养48h±2h进行计算培养基菌落数。本发明的检测方法不受大豆蛋白凝胶性的约束，可准确检测大豆蛋白中残存的耐热菌数量，检测方法快速、准确，效果明显。耐热菌培养基简单，菌落特征显著，易于计数，尤其是氯化三苯基四氮唑的添加以及添加比例，不受大豆蛋白凝胶性的影响，并对耐热菌显示明显，可以明显观察耐热菌的菌落。

Description

一种大豆蛋白中耐热菌的检测方法及耐热菌检测培养基

技术领域

本发明涉及一种大豆蛋白中耐热菌的检测方法及耐热菌检测培养基，属于食品卫生检测技术领域。

背景技术

耐热菌是一类含有芽孢，经热加工仍然存活，适宜条件下孢子可活化为营养体从而导致食品腐败的细菌的总称；耐热菌广泛分布于自然界，在蔬菜、水果等农作物上繁殖，并污染以这些农作物为原料的饮食品。然而，耐热菌与通常的其他菌类相比具有高的耐热性，因此，耐热菌的检测要比通常的其他菌类困难的多。

目前常用的耐热菌检测方法有常规的培养检测法、分子生物学的DNA分析或16SrRNA序列分析方法。由于耐热菌生长缓慢，常规的培养检测法需要4～5日才能出检测报告，分析结果的滞后使之无法及时指导生产。分子生物学的DNA分析或16SrRNA序列分析的方法虽然检测的时间较短，但检测成本较高，检测步骤复杂，一般小型果汁厂家不会采用这种分子生物学的分析方法对日常生产进行质量控制。

另外，目前对耐热菌的研究主要涉及乳制品、果汁中嗜酸耐热菌等，其检测方法与试剂皆针对液体食品，由于大豆蛋白具有较好的凝胶性，因此，现有的液体中或固体中耐热菌的检测方法不适用于大豆蛋白。

因此，有必要研发一种能准确、方便的检测大豆蛋白中耐热菌的方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种大豆蛋白中耐热菌的检测方法及耐热菌检测培养基。

本发明是通过如下技术方案实现的：

一种大豆蛋白中耐热菌的检测方法，包括步骤如下：

(1)取大豆蛋白样品加入无菌生理盐水中，配制大豆蛋白稀释液，大豆蛋白样品与无菌生理盐水的质量体积比为：24～26:200～260，单位：g/mL；

(2)大豆蛋白稀释液置于90-100℃下，煮沸后保温加热10-20min，然后以5-8℃/min的降温速度冷却至室温；

(3)将冷却后的大豆蛋白稀释液与耐热菌检测培养基混合均匀，同时将无菌生理盐水与与耐热菌检测培养基混合均匀做平行实验，耐热菌检测培养基凝固后，于36℃±1培养48h±2h进行计算培养基菌落数。

本发明的检测方法，培养结束后以培养基菌落数的平均值乘以稀释倍数即为最终耐热菌结果，单位：CFU/g。

根据本发明优选的，大豆蛋白样品与无菌生理盐水的质量体积比为25:210～250，单位：g/mL，最为优选的，大豆蛋白样品与无菌生理盐水的质量体积比为25:225，单位：g/mL。

根据本发明优选的，无菌生理盐水的质量浓度为0.8-0.9％，最为优选的，无菌生理盐水的质量浓度为0.85％。

根据本发明优选的，大豆蛋白稀释液的冷却速度为5-6℃/min。

根据本发明优选的，大豆蛋白稀释液用流水进行急速冷却，流水流量为0.15-0.5L/S。

根据本发明优选的，大豆蛋白稀释液与耐热菌检测培养基混合的体积比为：1：15-20。

根据本发明优选的，所述的耐热菌检测培养基原料组分如下：

胰蛋白胨4.0-6.0g，牛肉膏0.5-1.5g，酵母浸膏1-3g，葡萄糖0.5-2.5g，琼脂10-20g，复合维B 0.1-0.5g，氯化三苯基四氮唑0.01-0.03g，蒸馏水1000mL。

进一步优选的，所述的耐热菌检测培养基原料组分如下：

胰蛋白胨5.0g，牛肉膏1.0g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1.0g，琼脂15.0g，复合维B0.2g，氯化三苯基四氮唑0.025g，蒸馏水1000mL。

根据本发明优选的，所述的耐热菌检测培养基是按如下方法制备得到：

将胰蛋白胨、牛肉膏、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂、复合维B、氯化三苯基四氮唑加入蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.0±0.2，121℃高压灭菌15min即得。

本发明的有益效果是：

1、本发明的检测方法不受大豆蛋白凝胶性的约束，可准确检测大豆蛋白中残存的耐热菌数量，检测方法快速、准确，效果明显。

2、本发明的耐热菌培养基简单，菌落特征显著，易于计数，尤其是氯化三苯基四氮唑的添加以及添加比例，不受大豆蛋白凝胶性的影响，并对耐热菌显示明显，可以明显观察耐热菌的菌落。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。

实施例中所用产品，如无特殊说明，均为市购产品。

实施例1

耐热菌检测培养基

耐热菌检测培养基原料组分如下：

胰蛋白胨5.0g，牛肉膏1.0g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1.0g，琼脂15.0g，复合维B0.2g，氯化三苯基四氮唑0.025g，蒸馏水1000mL。

制备：将胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂加入蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.0±0.2，121℃高压灭菌15min制得耐热菌检测培养基。

大豆蛋白中耐热菌的检测方法：

(1)以无菌操作取样品25±0.1g，置于无菌均质袋内，再加入225ml无菌生理盐水，利用无菌均质器制成1：10的均匀稀释液。

(2)用10ml灭菌吸量管吸取1：10稀释液10ml，沿管壁注入试管内，将试管放入100℃的水浴锅内，自再次沸腾开始加热10分钟后，取出，用流水急速冷却，冷却速度为5-6℃/min。

(3)用吸管移取1ml加热后的稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。及时将15mL～20mL冷却至46℃的培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1培养48h±2h，进行计算培养基菌落数，进而报告耐热菌结果。

实施例2

耐热菌检测培养基

耐热菌检测培养基原料组分如下：

胰蛋白胨6.0g，牛肉膏1.2g，酵母浸膏3g，葡萄糖1.5g，琼脂18.0g，复合维B 0.3g，氯化三苯基四氮唑0.020g，蒸馏水1000mL。

制备：将胰蛋白胨、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂加入蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.0±0.2，121℃高压灭菌15min制得耐热菌检测培养基。

检测方法按实施例1的方法进行。

Claims (9)

1.一种大豆蛋白中耐热菌的检测方法，包括步骤如下：

(1)取大豆蛋白样品加入无菌生理盐水中，配制大豆蛋白稀释液，大豆蛋白样品与无菌生理盐水的质量体积比为：24～26:200～260，单位：g/mL；

(2)大豆蛋白稀释液置于90-100℃下，煮沸后保温加热10-20min，然后以5-8℃/min的降温速度冷却至室温；

(3)将冷却后的大豆蛋白稀释液与耐热菌检测培养基混合均匀，同时将无菌生理盐水与与耐热菌检测培养基混合均匀做平行实验，耐热菌检测培养基凝固后，于36℃±1培养48h±2h进行计算培养基菌落数。

2.根据权利要求1所述的大豆蛋白中耐热菌的检测方法，其特征在于，大豆蛋白样品与无菌生理盐水的质量体积比为25:250～260，单位：g/mL，最为优选的，大豆蛋白样品与无菌生理盐水的质量体积比为25:250，单位：g/mL。

3.根据权利要求1所述的大豆蛋白中耐热菌的检测方法，其特征在于，无菌生理盐水的质量浓度为0.8-0.9％，最为优选的，无菌生理盐水的质量浓度为0.85％。

4.根据权利要求1所述的大豆蛋白中耐热菌的检测方法，其特征在于，大豆蛋白稀释液的冷却速度为5-6℃/min。

5.根据权利要求1所述的大豆蛋白中耐热菌的检测方法，其特征在于，大豆蛋白稀释液用流水进行急速冷却，流水流量为0.15-0.5L/S。

6.根据权利要求1所述的大豆蛋白中耐热菌的检测方法，其特征在于，大豆蛋白稀释液与耐热菌检测培养基混合的体积比为：1：15-20。

7.根据权利要求1所述的大豆蛋白中耐热菌的检测方法，其特征在于，所述的耐热菌检测培养基原料组分如下：

胰蛋白胨4.0-6.0g，牛肉膏0.5-1.5g，酵母浸膏1-3g，葡萄糖0.5-2.5g，琼脂10-20g，复合维B 0.1-0.5g，氯化三苯基四氮唑0.01-0.03g，蒸馏水1000mL。

8.根据权利要求7所述的大豆蛋白中耐热菌的检测方法，其特征在于，所述的耐热菌检测培养基原料组分如下：

胰蛋白胨5.0g，牛肉膏1.0g，酵母浸膏2.5g，葡萄糖1.0g，琼脂15.0g，复合维B0.2g，氯化三苯基四氮唑0.025g，蒸馏水1000mL。

9.根据权利要求1所述的大豆蛋白中耐热菌的检测方法，其特征在于，所述的耐热菌检测培养基是按如下方法制备得到：

将胰蛋白胨、牛肉膏、酵母浸膏、葡萄糖、琼脂、复合维B、氯化三苯基四氮唑加入蒸馏水中，煮沸溶解，调节pH至7.0±0.2，121℃高压灭菌15min即得。