CN107573435A - 一种低分子量海带岩藻多糖 - Google Patents
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Abstract
本发明公开一种低分子量海带岩藻多糖，属于多糖提取技术领域，海带岩藻多糖的提取方法包括：细胞壁破碎；多糖粗提取；多糖提取和分离纯化，所述细胞壁破碎步骤为：取岩藻粉末20‑34份用无水乙醇浸泡脱脂，固体残渣用水提取料液比1:8~10m/V，搅拌20‑35min，密封静置2‑4h，加入活性多肽，搅拌5‑8min，蒸汽爆破处理，压力为2‑2.8MPa，维持35‑48s，得细胞破碎液，本发明提取的多糖分子量低，易吸收，抗肿瘤和保健效果好，通过活性多肽提高海带岩藻多糖的破碎率，提高多糖得率和纯度，多糖制备成本低。
Description
技术领域
本发明属于多糖提取技术领域，具体涉及一种低分子量海带岩藻多糖。
背景技术
我国是海带生产大国，经过数十年的发展已成为全球最大的海带生产国。据统计2009 年中国海藻产量已经达到 100 万吨，其中海带产量占全球总产量的 70% 以上。已成为我国海洋经济重要的支柱产业之一，具有巨大的社会和经济效益。海带是一种营养丰富的食用褐藻，每 100g 海带中含有营养成分为：蛋白质 8.2g，碳水化合物 56.2g，钙117mg，铁 150mg，碘 25mg，还含有胡萝卜素、硫胺素、核黄素、尼克酸等维生素。营养丰富，特别是低热量、中蛋白、高矿物质，具有帮助消化、防止肥胖等食用功能，是一种理想的天然食品。
大分子量的岩藻多糖虽然具有一定的生物学活性，但由于其分子量大、溶解性差、不容易被吸收，所以在应用方面受到很大的限制。
现有技术如，中国发明授权专利文献，授权公告号CN 103980370 B，该发明涉及海藻多糖的回收，具体的说是一种从海带中回收岩藻多糖的方法。将海带加工废水进行过滤，滤液中加入聚阳离子液体使其充分沉淀；收集沉淀并溶于pH 为2-6 的酸性水溶液中充分混合，混合后经超滤截留并纯化即得到岩藻多糖。该发明中利用绿色环保型的离子液体从废水中回收得到岩藻多糖，离子液体用量少，并且可以重复利用，回收过程中乙醇的用量很少，避免了现有技术中存在的利用大量乙醇沉淀岩藻多糖的缺点，从而降低了生产成本，但是该方法的多糖得率还具有进一步提升空间。
发明内容
本发明的目的在于提供一种低分子量海带岩藻多糖，提取的多糖分子量低，易吸收，抗肿瘤和保健效果好，通过活性多肽提高海带岩藻多糖的破碎率，提高多糖得率和纯度，多糖制备成本低。
本发明为实现上述目的所采取的方案为：一种低分子量海带岩藻多糖，岩藻多糖制备步骤包括：细胞壁破碎；多糖粗提取；多糖提取和分离纯化，具体操作步骤如下：
1）细胞壁破碎：取岩藻粉末20-34份过50-60目网筛，用无水乙醇浸泡脱脂，固体残渣用水提取料液比1:8~10m/V，搅拌20-35min，密封静置2-4h，加入活性多肽，活性多肽加入量为岩藻粉末重量的0.03%~0.05%，活性多肽的氨基酸序列为：HSHACASYYCSKNFCHGSCTHSYLCRVLHPGKNCSR搅拌5-8min，蒸汽爆破处理，压力为2-2.8MPa，维持35-48s，得细胞破碎液；
2）多糖粗提取：将细胞破碎液中加入7-16份去离子水，于62℃~65℃条件下提取2~3h，提取2~4次，合并提取液，5000-6000r/min下离心7-10分钟，浓缩上清液，加入无水乙醇，至所含乙醇的体积分数为25%~28%，过滤，上清液中再加无水乙醇至体积分数为61%~63%，5800-7000r/min下离心10-14分钟，收集沉淀，真空干燥得岩藻粗多糖；
3）多糖提取：取干燥的粗多糖配成水溶液液料比5~8:100，溶液中加入4~6mol/L的CaCl2纯化处理，8000-10000r/min下离心10-15分钟，取上清液，加入乙醇至其体积分数为60%~65%，用乙醇和丙酮浸洗沉淀，39℃~43℃干燥得到岩藻多糖；
4）分离纯化：将岩藻多糖制成水溶液，经DEAE-纤维素柱1.5×50cm初步分离，用去离子水和NaCl溶液洗脱，将洗脱液浓缩，用透析袋3000-4500Da透析去离子水45~50h，换洗3~4次，蒸馏水20~25h，透析物浓缩干燥得海带岩藻多糖。
作为优选，海带岩藻多糖作为抗肿瘤保健品添加剂的应用，海带岩藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，海带岩藻多糖营养丰富，特别是低热量、中蛋白、高矿物质，具有帮助消化、防止肥胖的功能，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：1）在海带岩藻多糖提取前对岩藻粉进行蒸汽爆破处理，利用活性多肽提高蒸汽爆破的细胞破壁率；2）蒸汽爆破过程中，细胞壁的空隙中渗入的蒸汽有限，会导致破壁程度不高，通过加入活性多肽，活性多肽作用于海带岩藻细胞壁表面使其破裂，提高了岩藻破壁效果，使破壁时间大大缩短，细胞内容物释放的多，有利于提高多糖得率；3）利用酸水解法降解岩藻多糖，实现了多糖降解度显著提高，低分子量的多糖产率高，所得多糖的抗肿瘤活性高，尤其是对KB细胞生长的抑制作用效果明显；4）本发明的多糖提取方法操作简单，提取率高，提取成本低，提取的多糖分子量低，溶解性好，易吸收，抗肿瘤和保健效果好。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明作进一步详细描述：
实施例1：
一种低分子量海带岩藻多糖，岩藻多糖制备步骤包括：细胞壁破碎；多糖粗提取；多糖提取和分离纯化，具体操作步骤如下：
1）细胞壁破碎：取岩藻粉末29份过54目网筛，用无水乙醇浸泡脱脂，固体残渣用水提取料液比1:10m/V，搅拌28min，密封静置3h，加入活性多肽，活性多肽加入量为岩藻粉末重量的0.04%，活性多肽的氨基酸序列为：HSHACASYYCSKNFCHGSCTHSYLCRVLHPGKNCSR搅拌6min，蒸汽爆破处理，压力为2.2MPa，维持36s，得细胞破碎液；
2）多糖粗提取：将细胞破碎液中加入10份去离子水，于64℃条件下提取2h，提取2次，合并提取液，5400r/min下离心8分钟，浓缩上清液，加入无水乙醇，至所含乙醇的体积分数为26%，过滤，上清液中再加无水乙醇至体积分数为62%，6300r/min下离心12分钟，收集沉淀，真空干燥得岩藻粗多糖；
3）多糖提取：取干燥的粗多糖配成水溶液液料比6:100，溶液中加入5mol/L的CaCl2纯化处理，9000r/min下离心12分钟，取上清液，加入乙醇至其体积分数为64%，用乙醇和丙酮浸洗沉淀，40℃干燥得到岩藻多糖；
4）分离纯化：将岩藻多糖制成水溶液，经DEAE-纤维素柱1.5×50cm初步分离，用去离子水和NaCl溶液洗脱，将洗脱液浓缩，用透析袋3500Da透析去离子水48h，换洗4次，蒸馏水24h，透析物浓缩干燥得海带岩藻多糖。
海带岩藻多糖作为抗肿瘤保健品添加剂的应用，海带岩藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，海带岩藻多糖营养丰富，特别是低热量、中蛋白、高矿物质，具有帮助消化、防止肥胖的功能，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
实施例2：
一种低分子量海带岩藻多糖，岩藻多糖制备步骤包括：细胞壁破碎；多糖粗提取；多糖提取和分离纯化，具体优选操作步骤如下：
1）细胞壁破碎：取岩藻粉末30份过58目网筛，用无水乙醇浸泡脱脂，固体残渣用水提取料液比1:8m/V，搅拌30min，密封静置2h，加入活性多肽，活性多肽加入量为岩藻粉末重量的0.04%，活性多肽的氨基酸序列为：HSHACASYYCSKNFCHGSCTHSYLCRVLHPGKNCSR搅拌6min，蒸汽爆破处理，压力为2.6MPa，维持36s，得细胞破碎液；
2）多糖粗提取：将细胞破碎液中加入10份去离子水，于64℃条件下提取2h，提取3次，合并提取液，5800r/min下离心10分钟，浓缩上清液，加入无水乙醇，至所含乙醇的体积分数为26%，过滤，上清液中再加无水乙醇至体积分数为61%，7000r/min下离心12分钟，收集沉淀，真空干燥得岩藻粗多糖；
3）多糖提取：取干燥的粗多糖配成水溶液液料比6:100，溶液中加入4mol/L的CaCl2纯化处理，10000r/min下离心14分钟，取上清液，加入乙醇至其体积分数为63%，用乙醇和丙酮浸洗沉淀，42℃干燥得到岩藻多糖；
4）分离纯化：将岩藻多糖制成水溶液，经DEAE-纤维素柱1.5×50cm初步分离，用去离子水和NaCl溶液洗脱，将洗脱液浓缩，用透析袋3000Da透析去离子水47h，换洗3次，蒸馏水20h，透析物浓缩干燥得海带岩藻多糖。
海带岩藻多糖作为抗肿瘤保健品添加剂的应用，海带岩藻多糖具有显著的促进机体免疫力和抗肿瘤的作用，海带岩藻多糖营养丰富，特别是低热量、中蛋白、高矿物质，具有帮助消化、防止肥胖的功能，利于提升加入的保健品的功效和经济价值。
本发明的操作步骤中的常规操作为本领域技术人员所熟知，在此不进行赘述。
以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 磐安县派普特生物科技有限公司
<120> 一种低分子量海带岩藻多糖
<130> 1
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 36
<212> PRT
<213> 人工合成
<400> 1
His Ser His Ala Cys Ala Ser Tyr Tyr Cys Ser Lys Asn Phe Cys His
1 5 10 15
Gly Ser Cys Thr His Ser Tyr Leu Cys Arg Val Leu His Pro Gly Lys
20 25 30
Asn Cys Ser Arg
35
Claims (7)
1.一种低分子量海带岩藻多糖，其特征在于：所述岩藻多糖制备步骤包括：细胞壁破碎；多糖粗提取；多糖提取和分离纯化，所述细胞壁破碎步骤为：取岩藻粉末20-34份用无水乙醇浸泡脱脂，固体残渣用水提取料液比1:8~10m/V，搅拌20-35min，密封静置2-4h，加入活性多肽，搅拌5-8min，蒸汽爆破处理，压力为2-2.8MPa，维持35-48s，得细胞破碎液。
2.根据权利要求1所述的一种低分子量海带岩藻多糖，其特征在于：所述活性多肽加入量为岩藻粉末重量的0.03%~0.05%，所述活性多肽的氨基酸序列为：HSHACASYYCSKNFCHGSCTHSYLCRVLHPGKNCSR。
3.根据权利要求1所述的一种低分子量海带岩藻多糖，其特征在于：所述多糖粗提取步骤为：将细胞破碎液中加入7-16份去离子水，于62℃~65℃条件下提取2~3h，提取2~4次，合并提取液，离心，浓缩上清液，加入无水乙醇，至所含乙醇的体积分数为25%~28%，过滤，上清液中再加无水乙醇至体积分数为61%~63%，离心收集沉淀，真空干燥得岩藻粗多糖。
4.根据权利要求1所述的一种低分子量海带岩藻多糖，其特征在于：所述多糖提取步骤为：取干燥的粗多糖配成水溶液液料比5~8:100，溶液中加入4~6mol/L的CaCl2纯化处理，离心取上清液，加入乙醇至其体积分数为60%~65%，用乙醇和丙酮浸洗沉淀，39℃~43℃干燥得到岩藻多糖。
5.根据权利要求1所述的一种低分子量海带岩藻多糖，其特征在于：所述分离纯化步骤为：将岩藻多糖制成水溶液，经DEAE-纤维素柱1.5×50cm初步分离，用去离子水和NaCl溶液洗脱，将洗脱液浓缩，透析，透析物浓缩干燥得海带岩藻多糖。
6.根据权利要求1所述的一种低分子量海带岩藻多糖，其特征在于：所述透析过程为：用透析袋3000-4500Da透析去离子水45~50h，换洗3~4次，蒸馏水20~25h。
7.根据权利要求1所述的一种低分子量海带岩藻多糖，其特征在于：所述海带岩藻多糖作为抗肿瘤保健品添加剂的应用。
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