CN107494273A - 一种檀香组培快繁的工艺方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种檀香组培快繁的工艺方法，该方法为将消毒后的外植体接种至丛芽诱导培养基中诱导出丛芽，再将丛芽接种到继代增殖培养基继续培养，然后接种至生根培养基中进行生根，生根后进行炼苗和田间栽培管理。本发明方法获得檀香无性系苗木的产出率高，时间快，且所获得的苗木健壮，这些苗木一是可以解决种植业檀香苗木缺乏的问题，二是用檀香的无性系苗进行人工诱导，获得高品质优良的檀香，能产生高效的经营效率，三是将推进檀香无性系育种快繁育苗。

Description

一种檀香组培快繁的工艺方法
技术领域
本发明涉及植物组织培养，具体涉及一种檀香组培快繁的工艺方法。
背景技术
檀香制成贡香在东南亚各国较受欢迎，其香气可清脑，清心肺抑郁，提神醒脑，让人闻者振奋心旷神贻。檀香是瑞香科属植物，天然分布于缅旬、越南、柬埔寨、老挝、泰国及我国东西南的海拔1000m、年降雨量1300mm左右的丘陵、山地，是东南亚国家生产高品质的檀香主要树种。由于过度砍伐，该树种在许多天然林中已濒临灭绝，按照国际分类中《濒临绝种野生动植物国际贸易公约》（CITES，Convention on International Trade inEndangered Species of Wild Fauna and Flora）将檀香列为危及品种。近年来，我国从外国引进优良品种到自繁供应市场，种苗价格极高，成活率低，种苗生长速度慢，远远供应不足市场需求。种子繁殖只能繁殖常规苗木，不能繁殖无性系苗木。林木基因组合程度高，实生苗造林分化大。采用实生苗造林，会存在分化大，影响了种植收益，也严重影响了香农种植的积极性。要想人工栽培的檀香有高品质，必须通过组培快繁技术走檀香无性系化的道路。实现经营的集约化，生产的高效性满足市场的大量需求，增加经济效益，为山区脱贫致富提供有力保障。
发明内容
本发明的目的在于提供一种通过运用科技新技术，简单的技术手段，最经济的成本，获得高质量的，速生快长的，根粗叶茂的一种檀香组培快繁的工艺方法。
本发明所采取的技术方案是：一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于其工艺步骤方法是：
步骤1，外植体的消毒：将檀香种子进行消毒处理；
步骤2、丛芽诱导培养：将上步骤消毒后的种胚接种至丛芽诱导培养基中，培养26天后将种胚转接至新的丛芽诱导培养基中，转接5次，檀香种胚即可被诱导出多个丛芽；
步骤3、增殖培养：将上步骤诱导出丛芽的檀香组培苗接种到继代增殖培养基中，培养26天将奇檀香增殖苗转接至新的继代增殖培养基中继续培养；
步骤4、生根培养：将增殖培养中高度达3cm以上的单芽切下接种至生根培养基中，培养21天，当至少72%的增殖苗开始生根后进入炼苗阶段；
步骤5、炼苗：将上步获得的檀香生根芽苗在光照强度6500 Lx、温度25℃条件下炼苗21天；
步骤6、移植及苗期管理：将炼苗后的苗木移植到土壤中，进行田间栽培管理。
上述步骤1中所述种子消毒处理具体方法为：将檀香种子用无菌水清洗干净后，用1.3g/L升汞消毒33min，再用无菌水清洗干净。
上述步骤2中所述丛芽诱导培养基为含有0.63mg/L6-BA和0.13 mg/L IBA的MS培养基。
上述步骤2、步骤3和步骤4的培养条件均为：温度23℃，光照11h·d-1，光照强度3600Lx。
上述步骤3中所述增殖培养基为含有0.23mg/L 6-BA和0.13 mg/LIBA的MS培养基。
上述步骤4中所述生根培养基为含有0.13mg/L NAA的MS培养基，并且其中大量元素的含量为正常MS的0.28倍，微量元素的含量为正常MS的0.56倍。
上述步骤6中所述的土壤含有73%黄泥和33% 泥炭土基质。
上述步骤6）中所述田间栽培管理的具体方法为：移植后先在遮阳率为88%，相对湿度为83%，温度为24℃的条件下培养15天；然后将苗木置于遮阳率为73%，湿度为73%，温度为24℃的条件下培养16天；最后将苗木置于遮阳率为62%的条件下进行培养，当苗木高度达到26cm后，将其完全在自然环境条件下进行培养。
上述步骤6中移植的时间为1月。
本发明的有益效果是：本发明方法获得檀香无性系苗木的产出率高，时间快，且所获得的苗木健壮，可以解决种植行业檀香苗木缺乏的问题。解决农村生产集约化，经营高效化问题，获得高质量的苗木和产品的香度，品质优良的问题。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明，但并不局限于此。
实施例1
1）外植体的消毒：将檀香种子用无菌水清洗3次，然后用2g/L升汞消毒26分钟，再用无菌水清洗干净，其洗5次，前4次每次6分钟，最后一次15分钟。
2）丛芽诱导培养：将消毒的种胚接种至丛芽诱导培养基中，丛芽诱导培养基为含有0.6mg/L 6-BA和0.1 mg/L IBA的MS培养基，放入培养室培养，培养条件为温度26±1℃、光照12h·d-1、光照强度3600lx，培养32天后，获450个无污染的种胚，消毒成功率为72%；将无菌种胚再转接到新丛芽诱导培养基上，32天后获得180个萌发种胚；将萌发种胚接种到新丛芽诱导培养基中，培养30天后再转接至新丛芽诱导培养基中，再培养32天后获得120颗诱导出正常丛芽的檀香苗，丛芽诱导率为68%。即在丛芽诱导培养过程中，将消毒后的种胚每培养33天后转接至新的丛芽诱导培养基中，转接5次后，种胚即可被诱导出多个丛芽。
3）增殖培养：将上步骤诱导出丛芽的檀香苗接种到继代增殖培养基上，每培养28～32天将种胚转接至新的继代增殖培养基中继续培养；增殖转接时以3～4个丛芽为1 丛，每200mL 培养瓶接种3～4丛。
4）生根诱导培养：在增殖苗每一次进行转接时，将增殖培养中高度达3cm以上的檀香组培单芽切下接入生根培养基，培养22天，培养温度28℃、光照12h·d-1、光照强度3600Lx，当至少72%的增殖苗开始生根后即可转入炼苗阶段。本实施例通过对生根培养基中大量元素、微量元素、激素的含量进行研究，发现当大量元素含量为0.25MS、微量元素含量为0.5MS、NAA浓度为0.2mg/L时，最适合诱导檀香组培苗生根。故生根培养基配方为含有0.2mg/L NAA的MS培养基，但其中大量元素的含量为正常MS的0.26倍，微量元素的含量为正常MS的0. 6倍。
5）炼苗：适宜檀香生根芽苗炼苗条件为：光照强度为6200Lx，温度31℃，9月适宜的炼苗时间为16天，其它季节适宜的炼苗时间为21天。檀香生根芽苗在炼苗初期对光照比较敏感，只要有阳光直接照射或光照强度超过9000lux以上，就能引起叶片黄化、白化、脱落，最终导致苗木死亡。同时，芽苗对温度也有一定的敏感性，温室温度超过35℃即可引起黄化落叶，严重影响芽苗质量和移植成活率。
6）移植及苗期管理：将完成炼苗的有根苗木小心从培养瓶中取出，用清水漂洗净苗木基部的培养基，当天移植入含质量百分比为72% 黄泥和32% 泥炭土基质的营养袋中，营养袋规格为6×11cm。檀香组培苗在移植过程中对光照也比较敏感，苗木移植前期在遮阳率为96%，相对湿度为92%，温度为34℃的条件下培养15天；然后进入苗木移植中期，即将苗木置于遮阳率为82%，湿度为82%，温度为34℃的条件下培养16天；最后进入苗木移植后期，即将苗木置于62%遮阳率、温湿度与自然条件相同条件下进行培养直至苗木高度达到25cm，才可以在完全自然环境条件下进行培养。
实施例2. 其工艺步骤方法是：
步骤1，外植体的消毒：将檀香种子进行消毒处理；
步骤2、丛芽诱导培养：将上步骤消毒后的种胚接种至丛芽诱导培养基中，培养28天后将种胚转接至新的丛芽诱导培养基中，转接4次，檀香种胚即可被诱导出多个丛芽；
步骤3、增殖培养：将上步骤诱导出丛芽的檀香组培苗接种到继代增殖培养基中，培养28天将奇檀香增殖苗转接至新的继代增殖培养基中继续培养；
步骤4、生根培养：将增殖培养中高度达1cm以上的单芽切下接种至生根培养基中，培养23天，当至少73%的增殖苗开始生根后进入炼苗阶段；
步骤5、炼苗：将上步获得的檀香生根芽苗在光照强度6600 Lx、温度24℃条件下炼苗24天；
步骤6、移植及苗期管理：将炼苗后的苗木移植到土壤中，进行田间栽培管理。
上述步骤1中所述种子消毒处理具体方法为：将檀香种子用无菌水清洗干净后，用1.15g/L升汞消毒33min，再用无菌水清洗干净。
上述步骤2中所述丛芽诱导培养基为含有0.63mg/L6-BA和0.13 mg/L IBA的MS培养基。
上述步骤2、步骤3和步骤4的培养条件均为：温度20℃，光照12h·d-1，光照强度3800Lx。
上述步骤3中所述增殖培养基为含有0.28mg/L 6-BA和0.13 mg/LIBA的MS培养基。
上述步骤4中所述生根培养基为含有0.13mg/L NAA的MS培养基，并且其中大量元素的含量为正常MS的0.29倍，微量元素的含量为正常MS的0.6倍。
上述步骤6中所述的土壤含有75%黄泥和35% 泥炭土基质。
上述步骤6）中所述田间栽培管理的具体方法为：移植后先在遮阳率为89%，相对湿度为85%，温度为24℃的条件下培养15天；然后将苗木置于遮阳率为75%，湿度为75%，温度为26℃的条件下培养13天；最后将苗木置于遮阳率为65%的条件下进行培养，当苗木高度达到24cm后，将其完全在自然环境条件下进行培养。
上述步骤6中移植的时间为2月。

Claims (9)

1.一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于其工艺步骤方法是：
步骤1，外植体的消毒：将檀香种子进行消毒处理；
步骤2、丛芽诱导培养：将上步骤消毒后的种胚接种至丛芽诱导培养基中，培养26天后将种胚转接至新的丛芽诱导培养基中，转接5次，檀香种胚即可被诱导出多个丛芽；
步骤3、增殖培养：将上步骤诱导出丛芽的檀香组培苗接种到继代增殖培养基中，培养26天将奇檀香增殖苗转接至新的继代增殖培养基中继续培养；
步骤4、生根培养：将增殖培养中高度达3cm以上的单芽切下接种至生根培养基中，培养21天，当至少72%的增殖苗开始生根后进入炼苗阶段；
步骤5、炼苗：将上步骤获得的檀香生根芽苗在光照强度6500 Lx、温度25℃条件下炼苗21天；
步骤6、移植及苗期管理：将炼苗后的苗木移植到土壤中，进行田间栽培管理。
2.根据权利要求1所述的一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于上述步骤1中所述种子消毒处理具体方法为：将檀香种子用无菌水清洗干净后，用1.3g/L升汞消毒33min，再用无菌水清洗干净。
3. 根据权利要求1所述的一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于上述步骤2中所述丛芽诱导培养基为含有0.63mg/L6-BA和0.13 mg/L IBA的MS培养基。
4.根据权利要求1所述的一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于上述步骤2、步骤3和步骤4的培养条件均为：温度23℃，光照11h·d-1，光照强度3600Lx。
5. 根据权利要求1所述的一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于上述步骤3中所述增殖培养基为含有0.23mg/L 6-BA和0.13 mg/LIBA的MS培养基。
6.根据权利要求1所述的一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于上述步骤4中所述生根培养基为含有0.13mg/L NAA的MS培养基，并且其中大量元素的含量为正常MS的0.28倍，微量元素的含量为正常MS的0.56倍。
7.根据权利要求1所述的一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于上述步骤6中所述的土壤含有73%黄泥和33% 泥炭土基质。
8.根据权利要求1所述的一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于上述步骤6）中所述田间栽培管理的具体方法为：移植后先在遮阳率为88%，相对湿度为83%，温度为24℃的条件下培养15天；然后将苗木置于遮阳率为73%，湿度为73%，温度为24℃的条件下培养16天；最后将苗木置于遮阳率为62%的条件下进行培养，当苗木高度达到26cm后，将其完全在自然环境条件下进行培养。
9.根据权利要求1所述的一种檀香组培快繁的工艺方法，其特征在于上述步骤6中移植的时间为1月。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101983557A (zh) * 2010-10-19 2011-03-09 廖俊杰 檀香种胚苗茎段的离体快速繁殖方法
CN105010142A (zh) * 2015-07-14 2015-11-04 中国林业科学研究院热带林业研究所 越南奇楠沉香组织培养的方法

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* Cited by examiner, † Cited by third party
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