CN107485730A - 一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法 - Google Patents
一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107485730A CN107485730A CN201611114596.3A CN201611114596A CN107485730A CN 107485730 A CN107485730 A CN 107485730A CN 201611114596 A CN201611114596 A CN 201611114596A CN 107485730 A CN107485730 A CN 107485730A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bone
- carbon dioxide
- cell compatibility
- biologically
- freeze
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 27
- 229910052588 hydroxylapatite Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 24
- 239000000463 material Substances 0.000 claims abstract description 56
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 42
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 claims abstract description 32
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 claims abstract description 21
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 claims abstract description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 13
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims abstract description 7
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 claims abstract description 7
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 claims abstract description 7
- 238000009423 ventilation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims abstract description 3
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 30
- 229940036811 bone meal Drugs 0.000 claims description 6
- 239000002374 bone meal Substances 0.000 claims description 6
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 2
- 238000005538 encapsulation Methods 0.000 claims description 2
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 claims description 2
- 238000010792 warming Methods 0.000 claims description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 claims description 2
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 abstract description 15
- 238000001816 cooling Methods 0.000 abstract description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 abstract description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D pentacalcium;hydroxide;triphosphate Chemical compound [OH-].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O XYJRXVWERLGGKC-UHFFFAOYSA-D 0.000 description 12
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 description 8
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 description 8
- 238000001354 calcination Methods 0.000 description 8
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 description 8
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000005242 forging Methods 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001484259 Lacuna Species 0.000 description 1
- 208000037656 Respiratory Sounds Diseases 0.000 description 1
- 206010060872 Transplant failure Diseases 0.000 description 1
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 238000002513 implantation Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 230000011164 ossification Effects 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 238000004544 sputter deposition Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
- A61L27/3608—Bone, e.g. demineralised bone matrix [DBM], bone powder
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/02—Inorganic materials
- A61L27/12—Phosphorus-containing materials, e.g. apatite
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3641—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the site of application in the body
- A61L27/3645—Connective tissue
- A61L27/365—Bones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
- A61L27/3683—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment
- A61L27/3691—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix subjected to a specific treatment prior to implantation, e.g. decellularising, demineralising, grinding, cellular disruption/non-collagenous protein removal, anti-calcification, crosslinking, supercritical fluid extraction, enzyme treatment characterised by physical conditions of the treatment, e.g. applying a compressive force to the composition, pressure cycles, ultrasonic/sonication or microwave treatment, lyophilisation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
- A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
- A61L2430/00—Materials or treatment for tissue regeneration
- A61L2430/02—Materials or treatment for tissue regeneration for reconstruction of bones; weight-bearing implants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Zoology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
Abstract
本发明公开了一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，将猪四肢骨在‑176～‑18℃冷冻3个月后，去除骨组织表面的软组织，骨锯锯成松质骨块，不采用有机溶剂，纯化水超声清洗，去除其内骨髓成分，置于冷冻干燥机内冻干；置于超临界二氧化碳反应釜中，反应后取出置于碱溶液中，冷冻干燥，取出放于通气马弗炉渐进升降温处理；然后封装，钴‑60γ射线辐照灭菌制成。本发明采用超临界二氧化碳进行脱脂脱蛋白处理，无有机物质残留，能有效改善所制备材料的生物相容性和生物力学性能。
Description
技术领域
本发明属于生物移植材料技术领域，具体地说，涉及一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法。
背景技术
骨移植是仅次于输血的第二大组织移植，目前常用的骨移植材料主要包括生物衍生类材料及人工合成类材料，生物衍生类材料由于与自体骨组织具有更为相近的物理结构和化学组成在临床得到广泛应用，但来源于同种异体或异种的骨组织具有较强的抗原性，移植后常易引起免疫排斥反应，导致移植失败，为有效降低这类材料的免疫原性，常采用脱细胞、去蛋白等方法去除抗原的载体，而当前对异种骨最常采用的去抗原方法为采用高温煅烧去除骨组织中的胶原蛋白等有机成分而制备的煅烧骨，其主要成分为羟基磷灰石，这类生物衍生羟基磷灰石虽然有效降低了抗原性，但却丧失了原有骨组织良好的细胞相容性，植入后不利于成骨细胞的贴附，从而影响成骨速度，同时其在制备过程中需采用大量有机溶剂去除蛋白质，易影响到骨组织的微观结构及导致有机溶剂残留，影响材料的生物相容性。
发明内容
本发明的目的在于提供一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，该方法采用超临界二氧化碳进行脱脂脱蛋白处理，并经碱超声联合冷冻干燥处理后进行重复渐进式升降温结合通气煅烧处理，所制备生物衍生羟基磷灰石无有机溶剂残留，能有效改善材料表面结构及生物相容性。其具体技术方案为：
一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，包括以下步骤：
步骤1、将猪四肢骨在-176～-18℃冷冻3个月后，去除骨组织表面的软组织，骨锯锯成5cm×5cm×5cm～5cm×5cm×20cm的松质骨块，超声清洗8～72小时，清洗温度为30～60℃，每1～4小时更换纯化水，并置于甩桶内离心5～15分钟，去除其内骨髓成分，置于冷冻干燥机内冻干至含水量小于5％；
步骤2、将步骤1骨粉或骨块置于超临界二氧化碳反应釜中，密封，然后将二氧化碳压进反应釜至反应釜内压力为15～30MPa，材料与二氧化碳体积比为1∶1～10，使反应釜内温度升至30～60℃，保持20～60分钟，然后以1～10MPa/min的速率放气，重复3～5次，打开反应釜，取出材料；
步骤3、将步骤2中骨粉或骨块置于0.1～1M的Ca(OH)2、KOH或NaOH溶液中，10～300g/L，10～40℃条件下超声10～600分钟，超声温度为30～60℃；
步骤4、将步骤3中材料取出后进行冷冻干燥至含水量为3～10％；
步骤5、将步骤4中材料放于通气马弗炉，200℃/小时渐进升温至600～1500℃，保持2～6小时，200℃/小时渐进退温，重复1～6次；
步骤6、然后封装，10～25kGy钴-60γ射线辐照灭菌制成。
优选地，步骤2中所述材料与二氧化碳体积比为1∶3。
优选地，步骤2中反应釜内温度升至37～40℃。
优选地，步骤3中骨粉或骨块置于0.5M的NaOH。
优选地，步骤4中所述含水量为5％。
优选地，步骤4中冷冻干燥后含水量的测定方法为：将水分测定仪设定在90℃，加一个天平秤盘，加热至自动停止，冷却至室温，迅速打开1袋待测产品，用镊子辅助将骨小块均匀铺洒在秤盘上，盖水分测定仪罩，待水分测定仪数据稳定后读取初始质量值W0，设定温度：90℃，时间：10～15分钟，并开启加热，单位样品的测定在小于设定时间内自动停止为有效，此时读取的R，值即为含水量。
优选地，步骤6中所述钴-60γ射线辐照灭菌过程中，辐射灭菌的辐射剂量为15～20kGy。
与现有技术相比，本发明的有益效果为：
1、本发明采用超临界二氧化碳进行脱脂脱蛋白处理，无有机物质残留，能有效改善所制备材料的生物相容性。
2、本发明在煅烧前采用碱超声处理联合冷冻干燥的方法，能显著提高材料的细胞相容性。
3、本发明采用重复渐进式升降温结合通气的方法进行煅烧处理，能有效改善煅烧过程中出现的裂纹对材料生物力学性能的影响。
附图说明
图1是未经脱脂的材料的扫描电镜图；
图2是经过超临界二氧化碳脱脂的扫描电镜图；
图3是未经超临界二氧化碳脱脂的材料煅烧的扫描电镜观察图；
图4是经过超临界二氧化碳脱脂的材料煅烧的扫描电镜观察图；
图5是未经碱处理组材料与MC3T3-E1细胞复合培养扫描电镜观察图，其中，图5a：材料表面可见死亡细胞；图5b：材料孔隙内可见死亡细胞；
图6是经胶原包被组材料与MC3T3-E1细胞复合培养扫描电镜观察图，其中，图6a：包被胶原表面可见大量死亡细胞；图6b：材料表面可见细胞贴附，但存在大量死亡细胞；
图7是NaOH处理组材料与MC3T3-E1细胞复合培养扫描电镜观察图，其中，图7a：材料表面及孔隙内均可见大量细胞贴附；图7b：材料表面贴附细胞形态良好。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施例对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
超临界二氧化碳脱脂效果观察，将经过超临界二氧化碳脱脂与未经脱脂的骨材料进行扫描电镜观察，结果显示未经脱脂的材料表面有大量脂滴存在，而经超临界二氧化碳脱脂处理的材料表面干净，脂肪去除彻底，同时可去除细胞成份。
由图1可见未经脱脂的材料有大量脂滴存在，脂肪清洗不彻底；图2可见经超临界二氧化碳脱脂骨组织表面未见脂肪颗粒，可见去除细胞后的细胞陷窝。
实施例2
对本发明制备的生物衍生类羟基磷灰石材料进行肉眼和扫描电镜观察，结果显示：未经超临界二氧化碳脱脂的材料煅烧后颜色呈黄白色，表明前期脂肪去除不彻底，对后续羟基磷灰石材料的制备有较显著影响；经超临界二氧化碳脱脂的材料煅烧后颜色呈象牙白，显微结构观察表明传统煅烧方法材料表面易产生大量的微裂痕，而采用本方法制备的煅烧骨表面基本无微裂痕产生。
实施例3为表明本发明制备的生物衍生类羟基磷灰石材料生物力学性能，测定了传统方法制备羟基磷灰石与本法制备羟基磷灰石的生物力学性能，具体如下：
将制备的复合材料修剪5×5×5mm的正方体，每组5块，用RGT-20A微机控制万能试验机测定其抗压缩强度，加载速率为1mm/s，并计算弹性模量。具体结果见表1。表明本法所制备羟基磷灰石由于降低了煅烧时产生的微裂痕，有效提高了材料的生物力学性能。
表1传统煅烧方法与本法制备的生物衍生类羟基磷灰石材料抗压强度和弹性模量
实施例4
为表明本发明制备的生物衍生类羟基磷灰石材料的细胞相容性，做了体外细胞相容性试验，具体如下：
煅烧骨的制备分为3组：1、未经碱处理组：将脱脂处理后的异种骨未经NaOH处理后渐进式升降温700℃4h，重复3次；2、NaOH处理组，置于0.5M NaOH溶液中超声1小时，(40℃)置马弗炉渐进升降温700℃4h，重复3次。3、胶原处理组：未经碱处理组采用传统胶原包被改善细胞相容性的方法，即将材料浸泡于0.2％胶原蛋白溶液中进行包被，冷冻干燥备用。
材料与成骨细胞复合培养试验：将上述3组材料修剪成3mm×3mm×3mm大小，放置于6孔培养板内；将传代至第3代的MC3T3-E1细胞以1×104/ml接种于已放置材料的培养板内，每孔500ul，加入DMEM高糖培养基至完全淹没材料，分别于接种后第1、3、5d倒置相差显微镜观察细胞生长及与材料贴附情况，并于第5d取出材料，2.5％戊二醛4℃固定4h，PBS缓冲液冲洗三遍，冷冻干燥机进行冻干处理后，离子溅射仪进行表面喷金处理，扫描电镜观察细胞贴附情况。
结果如图5至图7所示，未经碱处理组材料表面无细胞贴附生长，可见大量死亡细胞；胶原包被处理组在有胶原包被的地方有较多细胞贴附生长，而无胶原包被的地方，无细胞生长，且可见大量死亡细胞；NaOH处理组材料表面及孔洞内有大量细胞贴附生长，细胞排列密集，细胞形态良好。表明NaOH处理能有效改善材料的细胞亲和性。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (7)
1.一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、将猪四肢骨在-176～-18℃冷冻3个月后，去除骨组织表面的软组织，骨锯锯成5cm×5cm×5cm～5cm×5cm×20cm的松质骨块，超声清洗8～72小时，清洗温度为30～60℃，每1～4小时更换纯化水，并置于甩桶内离心5～15分钟，去除其内骨髓成分，置于冷冻干燥机内冻干至含水量小于5％；
步骤2、将步骤1骨粉或骨块置于超临界二氧化碳反应釜中，密封，然后将二氧化碳压进反应釜至反应釜内压力为15～30MPa，材料与二氧化碳体积比为1∶1～10，使反应釜内温度升至30～60℃，保持20～60分钟，然后以1～10MPa/min的速率放气，重复3～5次，打开反应釜，取出材料；
步骤3、将步骤2中骨粉或骨块置于0.1～1M的Ca(OH)2、KOH或NaOH溶液中，10-300g/L，10～40℃条件下超声10-600分钟，超声温度为30～60℃；；
步骤4、将步骤3中材料取出后进行冷冻干燥至含水量为3～10％；
步骤5、将步骤4中材料放于通气马弗炉，200℃/小时渐进升温至600～1500℃，保持2～6小时，200℃/小时渐进退温，重复1～6次；
步骤6、然后封装，10～25kGy钴-60γ射线辐照灭菌制成。
2.根据权利要求1所述的改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，其特征在于，步骤2中所述材料与二氧化碳体积比为1∶3。
3.根据权利要求1所述的改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，其特征在于，步骤2中反应釜内温度升至37～40℃。
4.根据权利要求1所述的改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，其特征在于，步骤3中骨粉或骨块置于0.5M的NaOH。
5.根据权利要求1所述的改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，其特征在于，步骤4中所述含水量为5％。
6.根据权利要求1所述的改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，其特征在于，步骤4中冷冻干燥后含水量的测定方法为：将水分测定仪设定在90℃，加一个天平秤盘，加热至自动停止，冷却至室温，迅速打开1袋待测产品，用镊子辅助将骨小块均匀铺洒在秤盘上，盖水分测定仪罩，待水分测定仪数据稳定后读取初始质量值W0，设定温度：90℃，时间：10-15分钟，并开启加热，单位样品的测定在小于设定时间内自动停止为有效，此时读取的R，值即为含水量。
7.根据权利要求1所述的改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法，其特征在于，步骤6中所述钴-60γ射线辐照灭菌过程中，辐射灭菌的辐射剂量为15～20kGy。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611114596.3A CN107485730B (zh) | 2016-12-02 | 2016-12-02 | 一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201611114596.3A CN107485730B (zh) | 2016-12-02 | 2016-12-02 | 一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107485730A true CN107485730A (zh) | 2017-12-19 |
| CN107485730B CN107485730B (zh) | 2020-10-30 |
Family
ID=60642903
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201611114596.3A Active CN107485730B (zh) | 2016-12-02 | 2016-12-02 | 一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107485730B (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111686303A (zh) * | 2020-06-09 | 2020-09-22 | 上海亚朋生物技术有限公司 | 一种同种异体或异种肌腱及骨腱复合体的制备方法 |
| CN114177354A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-03-15 | 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 | 一种天然陶瓷化骨的制备方法 |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1126619A (zh) * | 1995-01-11 | 1996-07-17 | 韩巽 | 动物骨制生物相容性人工义眼台 |
| CN1579562A (zh) * | 2003-08-01 | 2005-02-16 | 中国人民解放军第四军医大学口腔医学院 | 一组同类不同结构的陶瓷化骨的制备方法 |
| CN102008749A (zh) * | 2010-11-26 | 2011-04-13 | 邓旭亮 | 一种骨修复支架材料及其制备方法 |
| WO2013057720A2 (pt) * | 2011-10-19 | 2013-04-25 | Universidade Católica Portuguesa - Ucp | Composições e método de obtenção de composições à base de apatite a partir de fonte natural, materiais relacionados e seus usos |
| CN103638557A (zh) * | 2013-10-24 | 2014-03-19 | 陕西佰傲再生医学有限公司 | 一种脱抗原生物骨及其制备方法 |
| CN104174067A (zh) * | 2013-05-22 | 2014-12-03 | 烟台正海生物技术有限公司 | 一种天然无机骨基质及其制备方法 |
| CN104689372A (zh) * | 2015-03-26 | 2015-06-10 | 北京鑫康辰医学科技发展有限公司 | 一种同种骨超临界二氧化碳脱脂处理的方法 |
-
2016
- 2016-12-02 CN CN201611114596.3A patent/CN107485730B/zh active Active
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1126619A (zh) * | 1995-01-11 | 1996-07-17 | 韩巽 | 动物骨制生物相容性人工义眼台 |
| CN1579562A (zh) * | 2003-08-01 | 2005-02-16 | 中国人民解放军第四军医大学口腔医学院 | 一组同类不同结构的陶瓷化骨的制备方法 |
| CN102008749A (zh) * | 2010-11-26 | 2011-04-13 | 邓旭亮 | 一种骨修复支架材料及其制备方法 |
| WO2013057720A2 (pt) * | 2011-10-19 | 2013-04-25 | Universidade Católica Portuguesa - Ucp | Composições e método de obtenção de composições à base de apatite a partir de fonte natural, materiais relacionados e seus usos |
| CN104174067A (zh) * | 2013-05-22 | 2014-12-03 | 烟台正海生物技术有限公司 | 一种天然无机骨基质及其制备方法 |
| CN103638557A (zh) * | 2013-10-24 | 2014-03-19 | 陕西佰傲再生医学有限公司 | 一种脱抗原生物骨及其制备方法 |
| CN104689372A (zh) * | 2015-03-26 | 2015-06-10 | 北京鑫康辰医学科技发展有限公司 | 一种同种骨超临界二氧化碳脱脂处理的方法 |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN111686303A (zh) * | 2020-06-09 | 2020-09-22 | 上海亚朋生物技术有限公司 | 一种同种异体或异种肌腱及骨腱复合体的制备方法 |
| CN114177354A (zh) * | 2021-12-22 | 2022-03-15 | 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 | 一种天然陶瓷化骨的制备方法 |
| CN114177354B (zh) * | 2021-12-22 | 2022-06-17 | 天新福（北京）医疗器材股份有限公司 | 一种天然陶瓷化骨的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107485730B (zh) | 2020-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Wahl et al. | Controlling the processing of collagen-hydroxyapatite scaffolds for bone tissue engineering | |
| EP2884944B1 (en) | Reinforced placental tissue grafts and methods of making and using the same | |
| EP2968419B1 (en) | Molded placental tissue compositions and methods of making and using the same | |
| JP5865382B2 (ja) | 歯牙骨移植材の製造方法 | |
| AU2015231110A1 (en) | Methods for preparation of a terminally sterilized hydrogel derived from extracellular matrix | |
| CN106492285A (zh) | 可注射的脱细胞软骨基质微粒及其在植入剂中的应用 | |
| CN104707183B (zh) | 基于丝纤蛋白的可吸收骨科内固定材料及其制备方法 | |
| Bretcanu et al. | Biodegradable polymer coated 45S5 Bioglassderived glass-ceramic scaffolds for bone tissue engineering | |
| CN107890586B (zh) | 一种同种异体生物乳房补片的制备方法 | |
| CN112755247B (zh) | 一种脱细胞真皮基质及其制备方法 | |
| CN107158465B (zh) | 一种骨支架复合材料的制备方法 | |
| CN107485730A (zh) | 一种改善生物衍生羟基磷灰石细胞相容性的方法 | |
| CN107198794B (zh) | 具有活性离子释放功能的天然高分子生物活性创伤修复材料及其制备方法 | |
| WO2003070290A1 (fr) | Biomateriau composite contenant de la phospholine | |
| CN102755665A (zh) | 一种异种骨移植材料的制备方法 | |
| CN108795866B (zh) | 基于骨脱细胞支架的人多发性骨髓瘤微环境模型的构建方法 | |
| CN112691235A (zh) | 以物理方法为主制备人和猪脂肪源性脱细胞基质制备及应用 | |
| CN107213517B (zh) | 一种复合骨水泥及其制备方法 | |
| US20230158212A1 (en) | Composite scaffold material | |
| RU86455U1 (ru) | Биоинженерная конструкция | |
| CN100496623C (zh) | 异种脱蛋白骨支架材料及其制备方法 | |
| CN114848914A (zh) | 一种软骨组织工程复合物及其用途 | |
| WO2006090696A1 (ja) | 上皮が除去された羊膜を調製する方法 | |
| CN109876187B (zh) | 球状蛋白作致孔剂的组织工程软骨修复支架及其制备方法 | |
| CN117838924A (zh) | 一种形状记忆丝蛋白/氧化镁骨修复支架及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20231017 Address after: 030000 No. 102 Xuefu Street, Xiaodian District, Taiyuan City, Shanxi Province Patentee after: SHANXI AORUI BIOMATERIALS Co.,Ltd. Address before: No. 121, Daxue street, College Park, Jinzhong City, Shanxi Province Patentee before: SHANXI University OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE |