CN107466858B - 一种笋兰种苗快速繁殖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种笋兰种苗快速繁殖的方法,步骤包括:a、选取野生笋兰茎尖段,得A品;b、将A品清水冲洗干净,无菌水冲洗,75%医用酒精浸泡,无菌水洗净,再用HgCl2溶液消毒,无菌水洗净HgCl2,得B品;c、培养基配制,得增值培养基C1品和生根培养基C2品;d、笋兰成苗培养,将B品接种到C1品培养,再接种到C2品中培养,得种苗。本发明能够实现笋兰种苗快速繁殖,并保证种苗的优质性、稳定性、整齐性,且方法操作简单、成本低,标准化程度高、可实现规模化生产。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物种苗快速繁殖的方法,特别是笋兰种苗的快速繁殖方法。
背景技术
笋兰(Thunia alba(Lindl.)Rchb.f.)又称通兰,属于兰科(Orchidaceae)笋兰属(Thunia)地生或附生草本植物。笋兰夏季开花,顶生总状花序,花大而美丽,具芳香。主要分布在我国云南西南部至南部和西藏东部,生于林下岩石上或树杈凹处。目前市场上对笋兰的需求主要表现在观赏和药用两方面,我国兰科植物的花卉文化历史悠久,兰花具有较高的观赏价值,被喻为花中四君子之一;笋兰是一味民族药材(苗药),以全草入药,药性淡、平,具有活血、祛瘀、接骨、生肌之功效。目前,笋兰野生资源枯竭,现有资源已不能满足当前的市场需求。
现有的笋兰种苗繁殖技术主要采用分株繁殖法,该方法笋兰种苗繁殖速度慢,种苗质量参差不齐,操作方法复杂,成本高,标准化程度低,难以实现规模化生产。
发明内容
本发明的目的在于,提供一种笋兰种苗快速繁殖的方法。本发明能够实现笋兰种苗快速繁殖,并保证种苗的优质性、稳定性、整齐性,且方法操作简单、成本低,标准化程度高、可实现规模化生产。
本发明的技术方案:一种笋兰种苗快速繁殖的方法,步骤包括:
a、选取野生笋兰茎尖段,得A品;
b、将A品清水冲洗干净,无菌水冲洗,75%医用酒精浸泡,无菌水洗净,再用HgCl2溶液消毒,无菌水洗净HgCl2,得B品;
c、培养基配制:配制如下表所示的增值培养基C1品和生根培养基C2品;
d、笋兰成苗培养:将B品接种到C1品培养28~32天,再接种到C2品中培养28~32天,得种苗;所述培养条件为:光照强度2000~3000Lx、光照时间12h/d、培养温度25±2℃。
前述的笋兰种苗快速繁殖的方法,所述的步骤a中,野生笋兰茎尖段采自5~6月份无黄叶、无病害的野生笋兰植株茎端幼嫩部分。
前述的笋兰种苗快速繁殖的方法,所述的步骤b中,将A品用清水冲洗24h。
前述的笋兰种苗快速繁殖的方法,所述的步骤b中,无菌水冲洗2~3次,每次10~20s;75%医用酒精浸泡15~20s;HgCl2溶液消毒2次,每次5~8min。
前述的笋兰种苗快速繁殖的方法,所述的步骤b中,HgCl2溶液浓度为0.1~0.15%。
前述的笋兰种苗快速繁殖的方法,所述的步骤c中,MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括1.9g的KNO3、1.65g的NH4NO3、0.35g的MgSO4·7H2O和0.17g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.44g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇。
前述的笋兰种苗快速繁殖的方法,所述的步骤c中,1/2MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括0.95g的KNO3、0.825g的NH4NO3、0.175g的MgSO4·7H2O和0.085g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.22g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇。
前述的笋兰种苗快速繁殖的方法,所述的步骤c中,增值培养基C1品中的成分含量包括:MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+50g/L的香蕉汁+1.5mg/L的NAA+0.1mg/L的6-BA,pH值5.8~6.1。
前述的笋兰种苗快速繁殖的方法,所述的步骤c中,生根培养基C2品中的成分含量包括:1/2MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+50g/L的香蕉汁+2.0mg/L的NAA+0.5mg/L的6-BA,pH值5.8~6.1。
与现有技术相比,本发明是利用笋兰野生种质资源携有优良的遗传信息,保证种苗繁育的优质性;研制的培养基可显著促进笋兰生长发育,提高芽增值系数,根系发达,达到快速繁殖笋兰种苗的效果;且通过该方法可以获得大量的笋兰无菌苗,植株结构完整,种苗整齐一致;步骤简单、所需材料价格低廉、笋兰种苗生产不受季节限制,使其生产成本低、标准化程度高,可实现规模化生产。
发明人选取5-6月份无黄叶、无病害的野生笋兰茎尖段为A品,将A品用清水冲洗干净,无菌水冲洗2~3次,每次10~20s,75%医用酒精浸泡15~20s,无菌水洗净,再用HgCl2溶液消毒2次,每次5~8min,无菌水洗净HgCl2,得B品,结果详见表1.1。
表1.1不同消毒时间处理外植体(野生笋兰茎尖)染菌统计
通过笋兰芽增值系数正交试验,笋兰最适宜的增值培养基为:MS+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.3g/L活性碳+50g/L香蕉汁+1.5mg/L NAA+0.1mg/L 6-BA,pH为5.8~6.1。详见表1.2-1.4。
表1.2增值培养三因素三水平正交试验增值系数计算表
注:基本培养基为MS,香蕉汁浓度单位g/L,NAA、6-BA浓度单位mg/L;Ti1、Ti2、Ti3分别表示各因素第1、2、3水平试验指标之和;下同;xi1、xi2、xi3分别表示各个因素第1、2、3水平的平均数;x.1、x.2、x.3、x..分别表示重复1、2、3、合计的试验指标和,下同。增值系数=出芽数/原有芽数。
表1.3三因素有重复观测值正交试验资料方差分析表
注:“**”表示极显著,“*”表示显著;SS表示平方和,df表示自由度,MS表示均方,F表示进行F检验,下同。
表1.4各处理平均增值系数多重比较表
注:当显著水平α=0.05时,用小写英文字母a、b、c等表示多重比较结果;当显著水平α=0.01时,用大写英文字母A、B、C等表示多重比较结果,下同。
通过笋兰生根培养正交试验,笋兰最适宜的生根培养基为:1/2MS+30g/L蔗糖+6g/L琼脂+0.3g/L活性碳+50g/L香蕉+2.0mg/L NAA+0.5mg/L 6-BA,PH为5.8~6.1。详见表1.5-1.7。
表1.5生根培养三因素三水平正交试验根干重计算表
注:表中字母同表1.2。
表1.6三因素有重复观测值正交试验资料方差分析表
注:表中字母同表1.3。
表1.7各处理平均根干重多重比较表
注:表中小写、大写字母同表1.4。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步的说明,但并不作为对本发明限制的依据。
一种笋兰种苗快速繁殖的方法,步骤如下:
a、选取野生笋兰茎尖段,得A品;所述野生笋兰茎尖段采自5~6月份无黄叶、无病害的野生笋兰植株茎端幼嫩部分;
b、将A品清水冲洗干净,无菌水冲洗,75%医用酒精浸泡,无菌水洗净,再用HgCl2溶液消毒,无菌水洗净HgCl2,得B品;优选将A品清水冲洗24h,无菌水冲洗2~3次,每次10~20s,75%医用酒精浸泡15~20s,无菌水洗净,再用HgCl2溶液消毒2次,每次5~8min,无菌水洗净HgCl2,得B品;所述HgCl2溶液浓度为0.1~0.15%;
c、培养基配制:配制如下表所示的增值培养基C1品和生根培养基C2品;
其中,所述MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括1.9g的KNO3、1.65g的NH4NO3、0.35g的MgSO4·7H2O和0.17g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.44g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇;所述1/2MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括0.95g的KNO3、0.825g的NH4NO3、0.175g的MgSO4·7H2O和0.085g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.22g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇;优选的增值培养基C1品中的成分含量包括:MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+50g/L的香蕉汁+1.5mg/L的NAA+0.1mg/L的6-BA,pH值5.8~6.1;优选的生根培养基C2品中的成分含量包括:1/2MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+50g/L的香蕉汁+2.0mg/L的NAA+0.5mg/L的6-BA,pH值5.8~6.1。
d、笋兰成苗培养:将B品接种到C1品培养28~32天,再接种到C2品中培养28~32天,得种苗;所述培养条件为:光照强度2000~3000Lx、光照时间12h/d、培养温度25±2℃。
实施例1
一种笋兰种苗快速繁殖的方法,步骤如下:
a、选取野生笋兰茎尖段,得A品;所述野生笋兰茎尖段选自5~6月份无黄叶、无病害的野生笋兰植株茎端幼嫩部分;
b、将A品用清水冲洗干净,无菌水冲洗2次,每次10s,75%医用酒精浸泡15s,无菌水洗净,再用HgCl2溶液消毒2次,每次5min,无菌水洗净HgCl2,得B品;所述HgCl2溶液浓度为0.1%;
c、培养基配制:配制增值培养基C1品和生根培养基C2品,所述增值培养基C1品中成分含量包括:MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+50g/L的香蕉汁+1.5mg/L的NAA+0.1mg/L的6-BA,pH值5.8;所述生根培养基C2品中成分含量包括:1/2MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+50g/L的香蕉汁+2.0mg/L的NAA+0.5mg/L的6-BA,pH值5.8;
其中,所述MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括1.9g的KNO3、1.65g的NH4NO3、0.35g的MgSO4·7H2O和0.17g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.44g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇;所述1/2MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括0.95g的KNO3、0.825g的NH4NO3、0.175g的MgSO4·7H2O和0.085g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.22g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇;
d、笋兰成苗培养:将B品接种到C1品培养30天,再接种到C2品中培养30天,得种苗;所述培养条件为:光照强度2500Lx、光照时间12h/d、培养温度25℃。
实施例2
一种笋兰种苗快速繁殖的方法,步骤如下:
a、选取野生笋兰茎尖段,得A品;所述野生笋兰茎尖段选自5~6月份无黄叶、无病害的野生笋兰植株茎端幼嫩部分;
b、将A品用清水冲洗干净,无菌水冲洗3次,每次15s,75%医用酒精浸泡20s,无菌水洗净,再用HgCl2溶液消毒2次,每次8min,无菌水洗净HgCl2,得B品;所述HgCl2溶液浓度为0.15%;
c、培养基配制:配制增值培养基C1品和生根培养基C2品,所述增值培养基C1品中成分含量包括:MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+70g/L的香蕉汁+1.0mg/L的NAA+0.3mg/L的6-BA,pH值6.1;所述生根培养基C2品中成分含量包括:1/2MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+70g/L的香蕉汁+1.5mg/L的NAA+0.1mg/L的6-BA,pH值6.1;
其中,所述MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括1.9g的KNO3、1.65g的NH4NO3、0.35g的MgSO4·7H2O和0.17g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.44g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇;所述1/2MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括0.95g的KNO3、0.825g的NH4NO3、0.175g的MgSO4·7H2O和0.085g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.22g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇;
d、笋兰成苗培养:将B品接种到C1品培养28天,再接种到C2品中培养32天,得种苗;所述培养条件为:光照强度2000Lx、光照时间12h/d、培养温度23℃。
实施例3
一种笋兰种苗快速繁殖的方法,步骤如下:
a、选取野生笋兰茎尖段,得A品;所述野生笋兰茎尖段选自5~6月份无黄叶、无病害的野生笋兰植株茎端幼嫩部分;
b、将A品用清水冲洗干净,无菌水冲洗2次,每次15s,75%医用酒精浸泡18s,无菌水洗净,再用HgCl2溶液消毒2次,每次6min,无菌水洗净HgCl2,得B品;所述HgCl2溶液浓度为0.13%;
c、培养基配制:配制增值培养基C1品和生根培养基C2品,所述增值培养基C1品中成分含量包括:MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+60g/L的香蕉汁+1.3mg/L的NAA+0.2mg/L的6-BA,pH值6.0;所述生根培养基C2品中成分含量包括:1/2MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性碳粉+60g/L的香蕉汁+1.7mg/L的NAA+0.3mg/L的6-BA,pH值6.0;
其中,所述MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括1.9g的KNO3、1.65g的NH4NO3、0.35g的MgSO4·7H2O和0.17g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.44g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇;所述1/2MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括0.95g的KNO3、0.825g的NH4NO3、0.175g的MgSO4·7H2O和0.085g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.22g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇;
d、笋兰成苗培养:将B品接种到C1品培养32天,再接种到C2品中培养28天,得种苗;所述培养条件为:光照强度3000Lx、光照时间12h/d、培养温度27℃。
Claims (6)
1.一种笋兰种苗快速繁殖的方法,其特征在于:步骤包括:
a、选取采自5~6月份无黄叶、无病害的野生笋兰植株茎端幼嫩部分的野生笋兰茎尖段,得A品;
b、将A品清水冲洗干净;无菌水冲洗2~3次,每次10~20 s;75%医用酒精浸泡15~20 s;无菌水洗净;再用溶液浓度为0.1~0.15%的HgCl2溶液消毒2次,每次5~8 min;无菌水洗净HgCl2,得B品;
c、培养基配制:配制如下表所示的增殖培养基C1品和生根培养基C2品;
d、笋兰成苗培养:将B品接种到C1品培养28 ~32天,再接种到C2品中培养28 ~32天,得种苗;所述培养条件为:光照强度2000 ~3000 Lx、光照时间12 h/d、培养温度25±2 ℃。
2.根据权利要求1所述的笋兰种苗快速繁殖的方法,其特征在于:所述的步骤b中,将A品用清水冲洗24 h。
3.根据权利要求1所述的笋兰种苗快速繁殖的方法,其特征在于:所述的步骤c中,MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括1.9g的KNO3、1.65g的NH4NO3、0.35g的MgSO4·7H2O和0.17g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.44g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MoO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl2·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇。
4.根据权利要求1所述的笋兰种苗快速繁殖的方法,其特征在于:所述的步骤c中,1/2MS基本培养基的配比为每升蒸馏水中加入大量元素、钙盐、铁盐、微量元素和有机质;所述的大量元素包括0.95g的KNO3、0.825g的NH4NO3、0.175g的MgSO4·7H2O和0.085g的KH2PO4,所述的钙盐包括0.22g的CaCl2;所述的铁盐包括0.03726g的Na2-EDTA和0.02785g的FeSO4·7H2O;所述的微量元素包括22.3mg的MnSO4·4H2O、8.6mg的ZnSO4·7H2O、6.2mg的H3BO3、0.83mg的KI、0.25mg的Na2MoO4·2H2O、0.025mg的CuSO4·5H2O和0.025mg的CoCl2·6H2O;所述的有机质包括1mg的甘氨酸、0.2mg的盐酸硫胺素、1mg的烟酸、50mg的肌醇和0.25mg的盐酸吡哆醇。
5.根据权利要求1所述的笋兰种苗快速繁殖的方法,其特征在于:所述的步骤c中,增殖培养基C1品中的成分含量包括:MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性炭粉+50g/L的香蕉汁+1.5mg/L的 NAA + 0.1 mg/L的 6-BA,pH值5.8~6.1。
6.根据权利要求1所述的笋兰种苗快速繁殖的方法,其特征在于:所述的步骤c中,生根培养基C2品中的成分含量包括:1/2MS+30g/L的蔗糖+6g/L的琼脂+0.3g/L的活性炭粉+50g/L的香蕉汁+2.0mg/L的 NAA+0.5mg/L 的6-BA,pH值5.8~6.1。
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