CN107454898A - 生长素释放肽o‑酰基转移酶抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供新型GOAT抑制剂和其盐和其药物组合物。

Description

生长素释放肽O-酰基转移酶抑制剂
本发明涉及可用于抑制生长素释放肽O-酰基转移酶(ghrelin O-acyltransferase，GOAT)的化合物，用于治疗与GOAT活性相关的疾病的药物组合物和方法。
GOAT属于膜结合的O-酰基转移酶(MBOAT)酶家族。其通过将脂肪酸转移至去酰基生长素释放肽的Ser3残基而将去酰基-生长素释放肽(也称为未酰化生长素释放肽或UAG)转化成生物活性形式酰基-生长素释放肽(AG)。已显示在人类和啮齿动物中酰基-生长素释放肽增加食物摄入且增加肥胖。也已显示在人中输注AG抑制葡萄糖诱导的胰岛素分泌。已显示生长素释放肽基因的消除增强胰岛素释放以预防或改善喂食高脂肪饮食的ob/ob小鼠中的葡萄糖不耐受。
小分子GOAT抑制剂已报导在文献中。参见WO 2013/125732。
然而，肥胖和糖尿病的流行以及肥胖和糖尿病的当前治疗的不同有效性和对所述治疗的反应使得患者有必要获得更多的治疗选择。本发明提供作为GOAT抑制剂的某些新型化合物。此类新化合物可解决肥胖的强有效治疗的需求。进一步相信，GOAT抑制剂作为饮食和/或运动、被设计以减少体重增加或治疗肥胖的其它治疗药剂或程序的辅助，也可用于减少体重增加或体重反弹。类似地，GOAT抑制剂可单独或与2型糖尿病的其它疗法组合而用于治疗2型糖尿病。
本发明提供下式化合物或其药学上可接受的盐：
其中
n是1或2；
R1和R2选自-CH3和-Cl，只要R1和R2不都是-CH3或不都是-Cl；
R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；
R5选自任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OC1-C4烷基；C3-C6环烷基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基；
条件是当n是1、R1是-CH3、R2是-Cl、R3是-CH3且R4是-H时，则R5不可以是环丙基。
本发明提供药物组合物，其包含本发明化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。在另一个实施方案中，所述组合物与一种或多种其它治疗剂组合使用。
本发明的另一个方面提供减少体重增加或体重反弹或治疗2型糖尿病或肥胖的方法，所述方法包括向有需要的患者给药本发明化合物或其药学上可接受的盐。
本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗，尤其用于减少体重增加或体重反弹或治疗2型糖尿病或肥胖。再进一步，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于减少体重增加或体重反弹或治疗2型糖尿病或肥胖。此外，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐在制备用于减少体重增加或体重反弹或治疗2型糖尿病或肥胖的药物中的用途。
本发明进一步提供治疗缺血事件的后遗症的方法，所述方法包括向有需要的患者给药本发明化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述缺血事件为心肌缺血或心脏缺血或大脑缺血。
在又一个方面，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗，尤其用于治疗缺血事件的后遗症。再进一步，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗缺血事件的后遗症。此外，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗缺血事件的后遗症的药物中的用途。在另一个实施方案中，所述缺血事件为心肌缺血或心脏缺血或大脑缺血。
本发明进一步提供治疗成瘾病症的方法，所述方法包括向有需要的患者给药本发明化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述成瘾病症涉及完成行为(consummatory behavior)，诸如酒精摄入、吸烟、饮食过量或使用禁药。
本发明提供改善促进成瘾行为的应激后果的方法，所述方法包括向有需要的患者给药本发明化合物或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，所述成瘾行为涉及完成行为，诸如酒精、吸烟、饮食过量或使用禁药。
本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗，尤其用于治疗成瘾病症。再进一步，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗成瘾病症。此外，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗成瘾病症的药物中的用途。在另一个实施方案中，所述成瘾病症涉及完成行为，诸如酒精、吸烟、饮食过量或使用禁药。
本发明还提供本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗，尤其用于改善促进成瘾行为的应激后果。在另一个实施方案中，所述成瘾病症涉及完成行为，诸如酒精、吸烟、饮食过量或使用禁药。再进一步，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐，其用于改善促进成瘾行为的应激后果。此外，本发明提供本发明化合物或其药学上可接受的盐在制备用于改善促进成瘾行为的应激后果的药物中的用途。在另一个实施方案中，所述成瘾行为涉及完成行为，诸如酒精、吸烟、饮食过量或使用禁药。
本发明还涵盖可用于合成本发明化合物的中间体和方法。
如本文所用的术语“治疗(treating)”(或“治疗(treat)”或“治疗(treatment)”)是指限制、减缓、阻止或逆转现存症状、病况或病症的进展或严重水平。
如本文所用，术语“减少体重增加”是指减少患者体重的增加。术语“减少体重反弹”是指减少体重减轻之后经历体重反弹的患者的体重增加。体重反弹可归因于停止经由饮食、运动、行为改变或认可的疗法所实现的体重减轻之后的反弹作用。为了避免疑问，如本文所用的体重增加或体重恢复是指由食物摄入或饮食习惯诱导的体重增加或体重恢复，且不指非食物相关的体重增加，诸如归因于流体积聚(build up of fluids)、由于水滞留、肌肉质量或炎症导致的重量。
如本文所用的“缺血事件”是指至器官或身体部分的血液供应不足。血流量降低减少氧气供应至受影响的器官或身体部分。缺血事件也可称为缺血。本领域技术人员知道，缺血可能影响身体的不同器官或部分，例如心脏，诸如心肌缺血或心脏缺血，或脑，诸如脑缺血。
如本文所用的“成瘾病症”描述个体尽管有负面后果、但仍展现不能控制的过度不适应行为。与本发明特别相关的是成瘾病症，其涉及完成行为，诸如酒精摄入、吸烟、饮食过量以及使用禁药。本发明在患有成瘾病症的个体中使失调的异常的刺激和奖励性神经基质正常化。应激通常是成瘾病症的病因和维持中的诱发剂(precipitating agent)；本发明提供改善促进成瘾行为的应激后果的方法。
本发明化合物可反应以形成药学上可接受的盐。药学上可接受的盐和制备其的常见方法是本领域中众所周知的。参见例如P. Stahl, 等人. Handbook of Pharmaceutical Salts: properties, Selection and Use, 第2修订版 (Wiley-VCH, 2011); S.M.Berge, 等人, “Pharmaceutical Salts,” Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol.66, No. 1, 1977年1月。
技术人员将理解，本发明化合物或其药学上可接受的盐包含含有至少一个手性中心(以下(I)中由*表示)的核心：
本发明的优选化合物由(II)表示，其中R3是-H且R4是-CH3：
或其药学上可接受的盐。
技术人员将理解，可通过选择某些变量而在本发明化合物中生成额外的手性中心。本发明涵盖所有单个对映异构体或非对映异构体，以及所述化合物的对映异构体和非对映异构体的混合物，包括外消旋体。
技术人员还将理解，所有手性中心的Cahn-Ingold-Prelog (R)或(S)指定将根据具体化合物的取代模式而变。单一对映异构体或非对映异构体可以手性试剂开始或通过立体选择性或立体特异性合成技术来制备。或者，单一对映异构体或非对映异构体可通过标准手性色谱或结晶技术在本发明化合物合成中的任何便利点处从混合物中分离。本发明化合物的单一对映异构体是本发明的优选实施方案。
本发明化合物优选配制为通过多种途径(诸如口服给药)给药的药物组合物。此类药物组合物和制备其的方法是本领域中众所周知的。参见例如Remington: The Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro, 等人编, 第21版, Mack Publishing Co.,2005)。更特别优选的是包含由下式表示的本发明化合物或其药学上可接受的盐和一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物
其中n是1或2；
R1和R2选自-CH3和-Cl，只要R1和R2不都是-CH3或不都是-Cl；
R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；
R5选自任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OC1-C4烷基；C3-C6环烷基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基；
条件是当n是1、R1是-CH3、R2是-Cl、R3是-CH3且R4是-H时，则R5不可以是环丙基。
尽管本发明的所有例示化合物都是GOAT抑制剂，但某些类别的化合物是优选的。以下段落描述此类优选类别：
a) n是1；
b) n是2；
c) R1是-CH3且R2是-Cl；
d) R1是-Cl且R2是-CH3；
e) R3是-CH3且R4是-H；
f) R3和R4是-H；
g) R5是任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OC1-C4烷基；环丙基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
h) R5是任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；环丙基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
i) R5是-OC1-C4烷基；
j) R5是-OCH3或-OC(CH3)3；
k) R5是吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；
l) R5是吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一次；
m) R5是吡唑基，其可任选地被-CH3取代两次；
n) R5是吡唑基，其可任选地被-CH2CH3取代一次；
o) R5是吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；
p) R5是任选地被-OCH3取代的苯基；
q) R5是环丙基；
r) R5是任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；
s) R5是任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OC1-C4烷基；环丙基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
t) R5是任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
u) R5是吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
v) R5是任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；或-OCH3或-OC(CH3)3；
w) R5是吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；
x) R5是吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
y) R5是吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；
z) R5是吡啶基或哒嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
aa) R5是吡啶基或哒嗪基；
bb) R5是-OC(CH3)3；
cc) R5是-CH3或-CH2CH3，其任选地被-OH取代；-OCH3或-OC(CH3)3；环丙基；吡咯烷基，其任选地被-C(O)CH3取代；吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代；吡啶基或哒嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
dd) R5是环丙基；吡咯烷基，其任选地被-C(O)CH3取代；吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代；吡啶基或哒嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
ee) R5是环丙基；吡咯烷基，其任选地被-C(O)CH3取代；
ff) R5是吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代；吡啶基或哒嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
gg) R5是吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代；
hh) R5是-CH3或-CH2CH3，其任选地被-OH取代；-OCH3或-OC(CH3)3；
ii) R5是-CH3或-CH2CH3，其任选地被-OH取代；
jj) R5是-OCH3或-OC(CH3)3；
kk) R5是任选地被-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3、吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
ll) R5是任选地被-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
mm) R5是任选地被-CF3取代的-C1-C3烷基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；
nn) R5是吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3取代；或任选地被-OCH3取代的苯基；
oo) R5是吡唑基或噁唑基，其中各自可任选地被-CH3取代；
pp) R5是-CH3、-OCH3、吡唑基或噻唑基，其中吡唑基或噻唑基可任选地被-CH3取代；
qq) 当R1是-CH3且R2是-Cl时，R5不是环丙基；
rr) 当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)；且
ss) 本发明化合物是游离碱。
本发明的一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中
n是1或2；
R1和R2选自-CH3和-Cl，只要R1和R2不都是-CH3或不都是-Cl；
R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；
R5选自任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OC1-C4烷基；环丙基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基；
条件是当n是1、R1是-CH3、R2是-Cl、R3是-CH3且R4是-H时，则R5不可以是环丙基。在另一个实施方案中，当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
本发明的另一个优选实施方案涉及化合物或其药学上可接受的盐，其中，n是1或2；R1和R2选自-CH3和-Cl，只要R1和R2不都是-CH3或不都是-Cl；R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5选自任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；环丙基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基；条件是当n是1、R1是-CH3、R2是-Cl、R3是-CH3且R4是-H时，则R5不可以是环丙基。在另一个实施方案中，当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
本发明的另一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中
n是1或2；R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5选自任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基。在另一个实施方案中，当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，n是1或2；R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5是任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；或-OCH3或-OC(CH3)3；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，n是1或2；R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5是吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，n是1或2；R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5是吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，本发明涉及下式化合物，n是1或2；R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5是吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，n是1或2；R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5是任选地被-OCH3取代的苯基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
本发明的另一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
n是1或2；R5是-OCH3或-OC(CH3)3。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的另一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5是吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次。在另一个实施方案中，当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5是吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；或其药学上可接受的盐。在另一个优选实施方案中，n是1或2；R5是吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的另一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中R5是任选地被-OCH3取代的苯基。在另一个优选实施方案中，R5是-OCH3或-OC(CH3)3；或任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，R5是任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，R5是-OCH3或-OC(CH3)3；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的另一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中R5是吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，R5是吡啶基、哒嗪基或任选地被-OCH3取代的苯基；或其药学上可接受的盐。在另一个优选实施方案中，R5是吡啶基或哒嗪基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，R5是任选地被-OCH3取代的苯基；或其药学上可接受的盐。在另一个优选实施方案中，R5是-OC(CH3)3；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的另一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
R5选自-CH3或-CH2CH3，其任选地被-OH取代；-OCH3或-OC(CH3)3；环丙基；吡咯烷基，其任选地被-C(O)CH3取代；吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代；吡啶基或哒嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，R5是环丙基；吡咯烷基，其任选地被-C(O)CH3取代；吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代；吡啶基或哒嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，R5是吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代；吡啶基或哒嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个实施方案中，R5是吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代；吡啶基或哒嗪基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个实施方案中，R5是吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个实施方案中，R5是吡啶基或哒嗪基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，R5是任选地被-OCH3取代的苯基；或其药学上可接受的盐。在另一个优选实施方案中，R5是环丙基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，R5是-CH3或-CH2CH3，其任选地被-OH取代；或-OCH3或-OC(CH3)3；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个实施方案中，R5是-CH3或-CH2CH3，其任选地被-OH取代；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个实施方案中，R5是-OCH3或-OC(CH3)3；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中
n是1或2；
R1和R2选自-CH3和-Cl，只要R1和R2不都是-CH3或不都是-Cl；
R5选自任选地被-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中
n是1或2；
R5选自任选地被-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
在另一个优选实施方案中，n是1或2；R5选自任选地被-CF3取代的-C1-C3烷基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基；或其药学上可接受的盐。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中R5是吡唑基、噁唑基或噻唑基，其中各自可任选地被-CH3取代；或任选地被-OCH3取代的苯基。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中R5是吡唑基或噁唑基，其中各自可任选地被-CH3取代。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的另一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐，
其中R5是-CH3；-OCH3；或吡唑基或噻唑基，其中吡唑基或噻唑基可任选地被-CH3取代。在另一个实施方案中，连接-CH3基团的碳原子的构型是(S)。
本发明的另一个优选实施方案涉及下式化合物或其药学上可接受的盐：
本发明的一个尤其优选实施方案涉及以下化合物或其药学上可接受的盐，
本发明的一个尤其优选实施方案涉及以下化合物，
。
本发明的另一个优选实施方案涉及以下化合物或其药学上可接受的盐，
本发明的另一个尤其优选实施方案涉及以下化合物或其药学上可接受的盐，
本发明的另一个尤其优选实施方案涉及以下化合物，
。
本发明的另一个优选实施方案涉及以下化合物或其药学上可接受的盐，
本发明的另一个尤其优选实施方案涉及以下化合物或其药学上可接受的盐，
本发明的另一个尤其优选实施方案涉及以下化合物，
。
本发明的另一个优选实施方案涉及以下化合物或其药学上可接受的盐，
本发明的另一个尤其优选实施方案涉及以下化合物或其药学上可接受的盐，
本发明的另一个尤其优选实施方案涉及以下化合物，
。
本发明的化合物通常在宽剂量范围内是有效的。例如，每日剂量落入约0.03至约30mg/Kg体重的范围内。在一些情况下，低于前述范围下限的剂量水平可能是绰绰有余的，而在其它情况下，可以在维持有利的益处/风险概况的同时仍采用更大剂量，因此以上剂量范围并不意欲以任何方式限制本发明的范围。应理解，实际上给药的化合物的量将由医师考虑相关情况包括待治疗的病况、选择的给药途径、给药的实际的一种或多种化合物、个体患者的年龄、体重和反应以及患者症状的严重度来决定。
在本领域中众所周知的是，用于治疗糖尿病和/或肥胖的试剂可以与用于治疗糖尿病和/或肥胖的其它试剂组合。本发明化合物或其药学上可接受的盐可以与用于糖尿病或肥胖的其它有效治疗同时或依次共同给药。在认可的医学程序诸如肥胖症治疗手术(例如，胃旁路手术或可调节胃束带手术)之后，本发明的化合物或其药学上可接受的盐可以单独或与其它有效治疗组合来同时或依次给药。
本发明化合物或其盐可以通过本领域中已知的多种程序来制备，所述程序中的一些在以下方案、制备和实施例中进行说明。所述各途径的特定合成步骤可以不同方式组合或与来自不同方案的步骤结合以制备本发明的化合物或盐。以下方案中各步骤的产物可通过本领域中众所周知的常规方法(包括萃取、蒸发、沉淀、色谱、过滤、研磨和结晶)回收。在以下方案中，除非另外指明，否则所有取代基均如先前所定义。试剂和起始材料是本领域普通技术人员可容易获得的。
另外，以下方案中所述的某些中间体可以含有一个或多个氮保护基。不同保护基在每次出现时根据特定反应条件和待进行的特定转化可以是相同或不同的。保护和脱保护条件是本领域技术人员众所周知的且描述于文献(参见例如“Greene's Protective Groups in Organic Synthesis”, 第四版, Peter G.M. Wuts和Theodora W. Greene,John Wiley and Sons, Inc. 2007)中。
为了清楚起见，在以下方案中，未指明某些立体化学中心且已消除某些取代基，这并不意欲以任何方式限制所述方案的教导。单一对映异构体或非对映异构体可以手性试剂开始或通过立体选择性或立体特异性合成技术制备。或者，单一对映异构体或非对映异构体可通过标准手性色谱或结晶技术在合成本发明化合物的任何方便点通过一些方法诸如选择性结晶技术或手性色谱来从混合物分离(参见例如，J. Jacques,等人, "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981,以及E.L. Eliel和S.H. Wilen,” Stereochemistry of Organic Compounds”, Wiley-Interscience, 1994)。
本发明的一些中间体或化合物可具有一个或多个手性中心。本发明考虑所有单个对映异构体或非对映异构体，以及所述化合物的对映异构体和非对映异构体的混合物，包括外消旋体。优选的是，含有至少一个手性中心的本发明化合物作为单一对映异构体或非对映异构体存在。单一对映异构体或非对映异构体可以手性试剂开始或通过立体选择性或立体特异性合成技术来制备。或者，单一对映异构体或非对映异构体可通过标准手性色谱或结晶技术从混合物分离。技术人员将理解，在一些情况下，对映异构体或非对映异构体的洗脱顺序可以是不同的，这是由于色谱柱和流动相的不同。
某些缩写定义如下：“ACN”是指乙腈；“BSA”是指牛血清白蛋白；“DCC”是指1,3-二环己基碳二亚胺；“DCM”是指二氯甲烷；“DIC”是指二异丙基碳二亚胺；“DIPEA”是指二异丙基乙胺或N-乙基-N-异丙基-丙-2-胺；“DMAP”是指二甲基氨基吡啶；“DMF”是指二甲基甲酰胺；“DMSO”是指二甲亚砜；“EDCI”是指1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐；“EDTA”是指乙二胺四乙酸；“ee”是指对映异构体过量；“ELISA”是指酶联免疫测定，“EtOAc”是指乙酸乙酯；“EtOH”是指乙醇(ethanol)或乙醇(ethyl alcohol)；“Ex”是指实施例；“FBS”是指胎牛血清；“HATU”是指(二甲基氨基)-N,N-二甲基(3H-[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡啶-3-基氧基)甲铵(methaniminium)六氟磷酸盐；“HOAt”是指1-羟基-7-偶氮苯并三唑；“HOBt”是指1-羟基苯并三唑水合物；“HBTU”是指2-(1H-苯并三唑-1-基)-1,1,3,3-四甲脲鎓六氟磷酸盐；“HPLC”是指高效液相色谱；“HRP”是指辣根过氧化酶；“IC50”是指试剂产生该试剂可能的50%最大抑制反应的浓度；“IPA”是指异丙醇；“LC-ES/MS”是指液相色谱电喷雾质谱；“MeOH”是指MeOH或甲醇；“MS”是指质谱；“min”是指分钟；“OAc”是指乙酸盐；“PBS”是指磷酸盐缓冲盐水；“PG”是指保护基；“Prep”是指制备；“PyBOP®”是指苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷子基-鏻六氟磷酸盐；“PyBROP®”是指溴-三-吡咯烷子基鏻六氟磷酸盐；“RT”是指室温；“SCX”是指强阳离子交换；“SFC”是指超临界流体色谱；“SPE”是指固相萃取；“TEA”是指三乙胺；“TFA”是指三氟乙酸；“TMB”是指3,3',5,5'-四甲基联苯胺；且“TR”是指保留时间。
在以下方案中，除非另外指明，否则所有取代基均如先前所定义。试剂和起始材料是本领域普通技术人员可容易获得的。其它可通过有机和杂环化学的标准技术(其类似于已知的结构上相似化合物的合成)和随后的制备和实施例中所述的程序(其包括任何新型程序)来制备。
在方案1中，Rx是适当的胺保护基。胺保护基是本领域中公知和理解的，且可包括氨基甲酸酯类和酰胺类。本领域技术人员熟悉添加和移除所述保护基的替代试剂和程序。
化合物(2)可通过用卤化剂(诸如一氯化碘、I2或N-碘代琥珀酰亚胺)处理化合物(1)来制备。本领域技术人员将认识到，存在许多杂芳族卤化的方法。在另一个步骤中，化合物(4)可通过在标准偶联条件下、例如利用钯衍生的有机金属试剂(诸如Pd(PPh3)2Cl2、Pd(OAc)2或Pd2(dba)3)、在催化剂(诸如CuI)和碱(诸如Et3N、DIPEA、K2CO3或Cs2CO3)存在的情况下使化合物(2)与市售的炔烃(3)偶联来制备。或者，化合物(3)的相应游离胺可购买且由适当的胺保护基保护。化合物(4)可以通过在过渡金属催化剂(诸如氧化铂)存在的情况下催化氢化而还原。本领域技术人员将认识到，存在在芳基卤存在的情况下还原炔烃的其它方法。胺保护基然后可在本领域中公知的条件下，诸如在适当的酸性或碱性条件下移除，以提供化合物(5a)。
在方案2中，Rz是适当的烯醇化物活化基团。烯醇化物活化基团是本领域中公知且理解的。化合物(7)可通过进行与用于上述方案1中化合物(3)的偶联相似的偶联、随后将炔烃脱保护而由化合物(2)和甲硅烷基化乙炔(6)制备。技术人员熟悉制备替代的甲硅烷基乙炔的方法。
活化的烯醇化物，化合物(8)可通过使用适当的碱(诸如LiHMDS或LDA)和适当的活化剂(诸如N-苯基双(三氟甲烷-磺酰亚胺)或九氟丁烷磺酰氟)由相应的酮制备。在另一步骤中，化合物(9)可通过使化合物(7)和化合物(8)偶联来制备。偶联在催化量的钯催化剂(诸如双(三苯基膦)氯化钯(II)和碘化铜(I))存在的情况下进行。技术人员熟悉其它偶联条件，诸如针对上述方案1中的化合物(4)包括的那些。最终，化合物(5b)可通过如上述方案1中对于由化合物(4)制备化合物(5a)所述的方法中还原炔烃且将胺脱保护来由化合物(9)制备。
中间体(5c)的替代途径呈现于方案3中。Ry是醇活化基团，诸如甲磺酸酯、对甲苯磺酸酯或三氟甲磺酸酯。化合物(11)通过添加适当的碱(诸如三乙胺、吡啶或DIPEA)，随后添加适当的磺酰氯来由化合物(10)制备。在另一个步骤中，化合物(13)可通过使化合物(11)与使用适当的碱(诸如乙醇钠、NaH或正丁基锂)制备的化合物(12)的阴离子反应来制备。化合物(15)通过在乙醇中在碱(诸如乙醇钠)存在的情况下用化合物(14)处理化合物(13)来制备。在另一步骤中，化合物(16)可通过使用适当的氯化剂(诸如POCl3或SOCl2)氯化化合物(15)来制备。任选地，可添加催化量的DMF以促进氯化。最终，化合物(5c)可通过如对于上述方案1中由化合物(4)制备化合物(5a)所述的方法中脱保护来由化合物(16)制备。
化合物(18)可通过使化合物(5a-c)与化合物(17)在标准偶联条件下反应来合成。本领域技术人员将认识到存在多种方法和试剂用于由羧酸与胺反应而导致形成酰胺。化合物(5a-c)与化合物(17)的偶联可在合适的偶联剂和合适的胺碱(诸如DIPEA或三甲胺)存在的情况下实现。合适的偶联试剂可以包括碳二亚胺类(诸如DCC、DIC、EDCI)和其它偶联试剂(诸如HOBt和HOAt)。另外，非亲核性阴离子的脲鎓或鏻盐(诸如HATU、HBTU、PYBOP®和PYBROP®)可用于替代更传统的偶联试剂。可以使用添加剂诸如DMAP来增强反应。或者，化合物(5a-c)可使用取代的酰基氯类在碱(诸如三乙胺或吡啶)存在的情况下被酰化。
由化合物(18)的脱保护导致的胺可与化合物(19)在标准酰胺偶联条件(包括先前在制备(18)中描述的那些)下反应，以产生式(I)化合物。技术人员将认识到，存在由脱保护的化合物(18)制备式(I)化合物的替代方法，包括在有机碱(诸如三乙胺)存在的情况下与酰基氯反应或在碱和催化剂(诸如DMAP)存在的情况下与酸酐反应。
在任选的步骤中，式(I)化合物的药学上可接受的盐可通过使式(I)的适当游离碱与适当的药学上可接受的酸在标准条件下在合适的溶剂中反应来形成。另外，此类盐的形成可在氮保护基的脱保护时同时发生。此类盐的形成在本领域中是公知和理解的。
制备和实施例
以下制备和实施例进一步举例说明本发明且代表本发明的化合物的典型合成。试剂和起始材料可容易获得或可由本领域普通技术人员容易合成。应理解，制备和实施例通过举例说明而非限制的方式阐述，且本领域普通技术人员可做出各种修改。
名称“异构体1”和“异构体2”是指分别从手性色谱第一和第二洗脱的化合物，且如果手性色谱在合成早期开始，则相同名称适用于随后的中间体和实施例。
本发明的化合物的R或S构型可通过标准技术诸如X射线分析和与手性HPLC保留时间的关联性进行测定。以下制备和实施例的命名通常使用MDL ACCELRYS® Draw版本4.0.NET中的IUPAC命名特征来进行。
LC-ES/MS在AGILENT® HP1100液相色谱系统上进行。电喷雾质谱测量(以正离子模式获取)在界接至使用XTERRA® MS C18柱 2.1×50 mm, 3.5μm，操作至50 ºC的HP1100HPLC系统的Mass Selective Detector四极质谱仪上进行。流动相是10mM碳酸氢铵pH 9(溶剂A)和ACN(溶剂B)。使用两个流动相梯度程序：
梯度程序1是5%溶剂A持续0.25分钟，梯度为在3分钟内5-100%溶剂B和100%溶剂B持续0.5分钟。流动速率为1.1mL/min且UV波长设定为214nm。
梯度程序2是在3分钟内10-100%溶剂B和在100%溶剂B下持续0.75分钟。流动速率为1.0mL/min且UV波长设定为214nm。
制备1
2-氯-5-碘-6-甲基-嘧啶-4-胺
在室温下将一氯化碘于DCM中的1M溶液(243.77mL，243.77mmol)添加至2-氯-6-甲基-嘧啶-4-胺(5.0g，34.82mmol)于MeOH(17mL)中的溶液中。将混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成时，在真空下移除溶剂至30mL，冷却至0℃，并添加10%硫代硫酸钠水溶液(175mL)。将混合物搅拌10分钟，并使用2N氢氧化钠调节至pH=10。用EtOAc (3×100mL)萃取混合物。将有机相经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。使用硅胶色谱用己烷中的0-30%丙酮洗脱来纯化材料。浓缩纯化的级分，以产生作为灰白色固体的标题化合物(6.2g，66%)。LC-ES/MSm/z (35Cl/37Cl) 270/272 (M+H)，TR = 1.38 min，梯度程序1。
制备2
6-氯-5-碘-2-甲基-嘧啶-4-胺
将含有甲醇(350mL)中的6-氯-2-甲基-嘧啶-4-胺(35.3g，245mmol)的烧瓶冷却至0-5℃。使用加料漏斗经40分钟的时段添加一氯化碘(275g，1.69mol)于MeOH中的溶液。将混合物缓慢温热至室温。将混合物在室温下搅拌16小时。在反应完成时，冷却并添加20%亚硫酸钠水溶液(2.3L)。使用5N氢氧化钠水溶液调节至pH=6至7。将固体过滤，并用水(100mL)洗涤。在真空下干燥材料，以获得作为灰白色固体的标题化合物(56.0g，85%)。1H NMR (400MHz, DMSO-d 6) δ 7.94 (s, br, 1H), 6.78 (s, br, 1H), 2.27 (s, 3H)。
制备3
4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙炔基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
将2-氯-5-碘-6-甲基-嘧啶-4-胺(30g，111.3mmol)、4-乙炔基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(34.95g，166.99mmol)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(15.63g，22.27mmol)和碘化铜(I)(2.12g，11.13mmol)溶解于TEA(445mL)中。将混合物用氮气脱气15min。将混合物加热至80℃持续24小时且然后在室温下持续2天。用EtOAc(1000mL)稀释材料并通过硅藻土塞过滤，用EtOAc(500mL)洗涤。将有机层用饱和氯化钠水溶液(2×300mL)洗涤。将有机溶液经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。使用硅胶色谱用己烷/EtOAc(1：1)洗脱来纯化材料。浓缩纯化的级分，以产生作为淡橙色粉末的标题化合物(24.2g，62%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl)351/353 (M+H)，TR = 2.10 min，梯度程序2。
制备4
4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙炔基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
在3颈烧瓶中将6-氯-5-碘-2-甲基-嘧啶-4-胺(20g，74.22mmol)、4-乙炔基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(18.64g，89.06mmol)和二异丙胺(10.44mL，74.22mmol)溶解于THF(200mL)中。或者，抽空并用氮气装填烧瓶三次。将双(三苯基膦)氯化钯(II)(2.63g，3.71mmol)和碘化铜(I)(0.713g，3.71mmol)添加至溶液。将混合物加热至50-55℃持续16小时。将混合物冷却至室温，并添加更多的双(三苯基膦)氯化钯(II)(1.31g，1.86mmol)、碘化铜(I)(0.356g，1.86mmol)和4-乙炔基-哌啶-1-甲酸叔丁酯(1.55g，7.42mmol)。将混合物加热至60℃持续3.5小时。将反应物冷却至室温并将其在减压下浓缩。将混合物用DCM(300mL)稀释，并用饱和氯化铵水溶液(100mL)、水(100mL)和饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤。将有机溶液经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过色谱(800g硅胶柱)用己烷中的20-100%EtOAc洗脱来纯化残余物。浓缩纯化的级分，以产生作为淡橙色粉末的标题化合物(22.6g，86%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 351.2/353.1 (M+H)。
制备5
4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙炔基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(25.0g，71.26mmol)和氧化铂(IV)(2.0g，7.13mmol)在EtOH(285mL)中合并。在60psi氢气下搅拌4小时。将反应混合物通过硅藻土塞过滤，用EtOH冲洗，并在减压下移除溶剂。用EtOH(285mL)溶解粗混合物，并再次添加氧化铂(IV)(2.0g，7.13mmol)。在80psi氢气下搅拌8小时。小心地监测反应，以避免由移除2-氯引起的潜在副产物。将反应混合物通过硅藻土塞过滤，用EtOH(250mL)洗涤，并在减压下移除溶剂。使用硅胶色谱用己烷/EtOAc(1：1)洗脱来纯化材料。合并纯化的级分并在减压下浓缩，以获得作为无色油的标题化合物(17g，67%)。LC-ES/MS m/z(35Cl/37Cl) 355/357 (M+H)，TR = 2.00 min，梯度程序2。
制备6
4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
将4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙炔基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.30g，12.26mmol)和氧化铂(IV)(0.139g，0.61mmol)在EtOH(81mL)和EtOAc(40mL)中合并。或者，抽空并用氢气(气球压力(balloon pressure))装填烧瓶，并在室温下搅拌8小时。小心地监测反应以避免由移除分子中的氯引起的潜在副产物。注意，产物比起始炔烃更溶于溶剂混合物中。通过SPE滤筒(ISOLUTE® HM-N)过滤混合物，用MeOH冲洗。在减压下浓缩溶液。向烧瓶中添加二氧化硅1-丙硫醇(4g，装载量=1.28mmol/g，SILIABOND® 硫醇)以从先前的偶联反应物和EtOAc(300mL)移除残余钯。将材料在室温下搅拌3天。过滤固体并在减压下浓缩滤液。如下对所得残余物重复氢化。用氧化铂(IV)(0.139g，0.61mmol)、EtOH(81mL)和EtOAc(40mL)装填含有残余物的烧瓶。或者，抽空并使用氢气气球用氢气装填烧瓶，并在室温下搅拌8小时。通过硅藻土过滤，用MeOH冲洗，并在减压下浓缩滤液。如下对所得残余物重复氢化。用氧化铂(IV)(0.139g，0.61mmol)、EtOH(81mL)和EtOAc(40mL)装填含有残余物的烧瓶。或者，抽空并使用氢气气球用氢气装填烧瓶，并在室温下搅拌8小时。通过硅藻土过滤，用MeOH冲洗，并在减压下将滤液浓缩至硅胶(20g)上。通过色谱(120g硅胶柱)用己烷中的70-100%EtOAc洗脱来纯化材料。合并纯化的级分并在减压下浓缩。用DCM和己烷稀释残余物并在减压下浓缩三次。在真空下干燥材料，以获得作为白色固体的标题化合物(3.20g，73%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 355.2/357.2 (M+H)。
制备7
2-氯-6-甲基-5-[2-(4-哌啶基)乙基]嘧啶-4-胺
将4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(5.0g，14.09mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(141mL)中，并添加1,4-二氧杂环己烷中的4M氯化氢(70.45mL，281.79mmol)。将溶液在室温下搅拌2小时。在减压下浓缩混合物。通过SCX (50 g× 5个柱)使用5个柱体积的MeOH和然后5个柱体积的MeOH中的2N氨来纯化材料，以获得标题化合物(3.22g，90%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 255/257 (M+H)，TR = 0.36 min，梯度程序2。
制备8
6-氯-2-甲基-5-[2-(4-哌啶基)乙基]嘧啶-4-胺
将4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(3.2g，9.0mmol)溶解于DCM(60mL)中。经15分钟逐滴添加TFA(45mL，596.3mmol)，并将溶液在室温下搅拌1小时。在真空下浓缩反应混合物。将所得残余物溶解于MeOH(10mL)中并应用至SCX柱(50g)。将柱用水(100mL)、MeOH(100mL)洗涤，并用MeOH中的2M氨(400mL)洗脱所需产物。在减压下浓缩，与1：1 DCM/己烷(3×250mL)共沸，并在减压下干燥所得残余物，以获得作为灰白色固体的标题化合物(2.23g，97%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 255.2/257.2 (M+H)。
制备9
6-氯-2-甲基-5-[2-(4-哌啶基)乙基]嘧啶-4-胺盐酸盐
将4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]哌啶-1-甲酸叔丁酯(29.0g，81.72mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(145mL)中，并添加1,4-二氧杂环己烷中的4M氯化氢(204.2mL，817.1mmol)。将溶液在室温下搅拌18小时。将混合物在减压下浓缩，在二乙醚(250mL)中制浆（slurry），过滤，并在真空下干燥所得固体，以产生作为粗白色固体的标题化合物(29g)，其具有足以不经进一步纯化即使用的纯度。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl)255.2/257.2 (M+H)。
制备10
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯
将TEA(5.25mL，37.68mmol)、1-羟基苯并三唑(2.05g，15.07mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.89g，15.07mmol)添加至2-氯-6-甲基-5-[2-(4-哌啶基)乙基]嘧啶-4-胺(3.2g，12.56mmol)和(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(2.85g，15.07mmol)于DMF(63mL)中的混合物。将所得混合物在室温下搅拌过夜。添加水(50mL)并用EtOAc(3×200mL)萃取。将有机层用饱和氯化钠水溶液(3×100mL)洗涤，经Na2SO4干燥，并在减压下移除溶剂。通过色谱(硅胶)用己烷中的20-80% EtOAc洗脱来纯化材料，以获得作为白色固体的标题化合物(5.15g，96%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 426/428 (M+H)，TR =1.89 min，梯度程序1。
制备11
N-[2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯
将6-氯-2-甲基-5-[2-(4-哌啶基)乙基]嘧啶-4-胺(3.0g，11.78mmol)、N-(叔丁氧基羰基)甘氨酸(2.29g，12.95mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(1.8g，2.95mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(2.75g，14.13mmol)和TEA(4.9mL，35.3mmol)溶解于THF(235mL)中。将所得混合物在室温下在氮气下搅拌12小时。将混合物用EtOAc(60mL)、水(10mL)稀释，并搅拌10分钟。在大气压力下用EtOAc(40mL)预装填hydromatrix柱(25g)，将反应混合物应用至hydromatrix柱，并将混合物静置10分钟。在低真空下用EtOAc(3×20mL)冲洗柱。合并并在减压下浓缩所有柱洗脱液。通过色谱(330g硅胶柱)用EtOAc中的0-10%MeOH洗脱来纯化粗混合物，并蒸发所需级分。将所得固体与1：1 DCM/己烷(3×100mL)共沸，并在真空下干燥，以获得作为白色固体的标题化合物(4.4g，91%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 412.3/414.3 (M+H)。
制备12
(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮二盐酸盐
将 N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(5.15g，12.1mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(121mL)中。添加1,4-二氧杂环己烷中的4M氯化氢(45.3mL，181.4mmol)，并在室温下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩，以获得作为白色固体的标题化合物(4.63g，96%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 326/328 (M+H)，TR = 1.39 min，梯度程序1。
制备13
(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮
将N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(15.78g，37.05mmol)溶解于DCM(185mL)中。经3分钟以逐滴方式添加TFA(185mL)，并将溶液搅拌过夜。通过LC-MS(低pH)分析反应物以显示完全转化。由于放热混合，缓慢添加MeOH(400mL)。用水(20mL)且然后用MeOH(20mL)预洗涤三个SCX柱(50g)。将反应混合物分成三个相等部分并同样装载至SCX柱上。将每个柱用水(40mL)、MeOH(40mL)洗涤，并用MeOH中的2M氨(60mL)洗脱所需产物。在减压下浓缩，与DCM/己烷(1：1)共沸三次，并在真空下放置，以获得作为白色泡沫的标题化合物(10.29g，84%)。LC-ES/MS m/z(35Cl/37Cl) 326.2/328.2 (M+H)。
制备14
(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮盐酸盐
将N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(28.75g，67.49mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(143.7mL)中。添加1,4-二氧杂环己烷中的4M氯化氢(168.7mL，674.9mmol)并搅拌10分钟。添加MeOH(20mL)，并将混合物在剧烈搅拌下搅拌3小时。将混合物在减压下浓缩，将固体用二乙醚(200mL)稀释并搅拌过夜。过滤材料，用二乙醚(2×25mL)冲洗。将材料经由抽吸干燥15分钟，且然后在真空下在45℃下干燥1小时，以获得作为粗白色粉末的标题化合物(27.7g)，其具有足以不经进一步纯化即使用的纯度。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 326.1/328.2 (M+H)。
制备15
2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]乙酮
将N-[2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(4.4g，10.68mmol)溶解于DCM(53.4mL)中，并用TFA(53.4mL，706mmol)逐滴处理所得溶液。将溶液搅拌2小时并在真空下浓缩。将所得残余物溶解于MeOH中，并应用至SCX柱(5g，用20mL水和20mL MeOH预洗涤)。将柱用水(40mL)、MeOH(20mL)洗涤，并用MeOH中的2M氨(60mL)洗脱所需产物。在减压下浓缩，以获得稠油。与1：1 DCM/己烷(3×100mL)共沸，并在真空下干燥所得残余物，以获得作为粗灰白色泡沫的标题化合物(3.8g)，其具有足以不经进一步纯化即使用的纯度。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 312.3/314.3 (M+H)。
制备16
(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮二盐酸盐
将IPA (154mL)加热至50℃且由于放热反应而缓慢添加乙酰氯(19.3mL，271mmol)。将反应物在50℃下搅拌10分钟，且然后添加 N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(21.0g，45.3mmol)。将反应物搅拌2小时，经由LC-MS(低pH)监测。将反应物冷却至室温并添加二乙醚(386mL)。将浆料搅拌15分钟。将固体过滤，以快速方式用二乙醚(2×50mL)洗涤，因为材料是吸湿性的。将材料过滤，经由过滤干燥1分钟，且然后在真空干燥烘箱中在50℃下干燥过夜，以产生作为粗白色粉末的标题化合物(18.4g)，其具有足以不经进一步纯化即使用的纯度。通过离子色谱的抗衡离子分析与二盐酸盐一致。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 326.1/328.2 (M+H)。
制备17
6-氯-2-甲基-5-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)嘧啶-4-胺
将6-氯-5-碘-2-甲基-嘧啶-4-胺(128g，475mmol)和TEA(2600mL)添加至3颈圆底烧瓶并脱气10分钟。添加碘化铜(I)(4.5g，23.63mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(II)(8.3g，11.82mmol)，以获得黄色悬浮液。将反应混合物加热至70℃，以得到澄清溶液，并在60分钟内添加(三甲基甲硅烷基)乙炔(73mL，518mmol)。将溶液在70℃下搅拌6.5小时。将混合物冷却至室温，将固体经硅藻土过滤，并用EtOAc(3×200mL)洗涤。在减压下浓缩。将残余物溶解于EtOAc(1.5L)中，用5%氢氧化铵(3×200mL)和饱和氯化钠水溶液(3×200mL)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。用戊烷(300mL)制浆，以获得作为黄色固体的标题化合物(92g，81%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 240/242 (M+H)。
制备18
6-氯-5-乙炔基-2-甲基-嘧啶-4-胺
在3颈圆底烧瓶中将6-氯-2-甲基-5-(2-三甲基甲硅烷基乙炔基)嘧啶-4-胺(92g，383.6mmol)溶解于THF (900mL)中。在10分钟内逐滴添加水(300mL)和0.1M氢氧化钠(38mL，3.8mmol)，以产生棕色溶液。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。添加乙酸乙酯(1L)并用饱和氯化钠水溶液(1L)洗涤。将有机相经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，以获得作为黄色固体的标题化合物(63g，98%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 168/170 (M+H)。
制备19
4-(三氟甲基磺酰基氧基)-2,3,6,7-四氢氮杂䓬（azepine）-1-甲酸叔丁酯
在-78℃下在氮气下将六甲基二硅烷基氨基锂(THF中的1M溶液，32.33mL，32.33mmol)逐滴添加至4-氧代氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(5g，23.09mmol)于THF(15mL)中的溶液中。逐滴添加N-苯基双(三氟甲烷-磺酰亚胺)(10.72g，30.02mmol)于THF(15mL)中的溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时，将反应物温热至室温，并在该温度下搅拌1小时。冷却至0℃，并用水淬灭。添加EtOAc，分离有机相，并用饱和氯化钠水溶液洗涤。经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过色谱(120g硅胶柱)用己烷中的0-20%EtOAc洗脱来纯化粗混合物，以获得标题化合物(7.9g，99%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 259/261 (M+H)。
制备20
4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙炔基]-2,3,6,7-四氢氮杂䓬-1-甲酸叔丁酯
在氮气下合并4-(三氟甲基磺酰基氧基)-2,3,6,7-四氢氮杂䓬-1-甲酸叔丁酯(11g，22.3mmol)、6-氯-5-乙炔基-2-甲基-嘧啶-4-胺(4.48g，26.76mmol)、双(三苯基膦)氯化钯(II)(1.57g，2.23mmol)、碘化铜(I)(212mg，1.11mmol)、TEA(6.2mL，44.59mmol)和DMF(223mL)。将混合物在90℃下搅拌过夜。将反应混合物通过硅藻土塞过滤，用EtOAc冲洗。将滤液用饱和氯化钠水溶液洗涤。经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过色谱(330g硅胶柱)用己烷中的0-40%丙酮洗脱来纯化粗混合物，以获得标题化合物(4.75g，59%)。LC-ES/MSm/z (35Cl/37Cl) 363/365 (M+H)。
制备21
(4R,S)-4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯
将4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙炔基]-2,3,6,7-四氢氮杂䓬-1-甲酸叔丁酯(3.2g，8.82mmol)溶解于EtOH(176mL)中。添加二氧化铂(40mg，0.172mmol)，并将所得混合物在大气压下在氢气下搅拌5小时。将混合物通过硅藻土塞过滤。在减压下移除溶剂，并通过色谱(80g硅胶柱)用己烷中的0-40%丙酮洗脱来纯化粗混合物，以获得标题化合物(2.8g，85%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 369/371 (M+H)。
制备22
5-[2-[(4R,S)-氮杂环庚烷-4-基]乙基]-6-氯-2-甲基-嘧啶-4-胺
将(4R,S)-4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(2.8g，7.59mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(76mL)中，并添加1,4-二氧杂环己烷中的4M氯化氢(38mL，152mmol)。将溶液在室温下搅拌8小时。将混合物在减压下浓缩。将残余物溶解于MeOH中，并将其应用至SCX柱(3×25g)。用MeOH洗涤柱，并用MeOH中的2M氨洗脱所需产物。在减压下浓缩，以产生作为粗泡沫的标题化合物(2.04g)，其具有足以不经进一步纯化即使用的纯度。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 269/271 (M+H)。
制备23
(2S)-2-氨基-1-[(4R,S)-4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]氮杂环庚烷-1-基]丙-1-酮
将 N-[(1S)-2-[(4R,S)-4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]氮杂环庚烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯(2.40g，5.45mmol)溶解于1,4-二氧杂环己烷(55mL)中。添加1,4-二氧杂环己烷中的4M氯化氢(41mL，163.6mmol)并在室温下搅拌过夜。将混合物在减压下浓缩。将所得残余物溶解于MeOH中并应用至SCX柱(50g)。用MeOH洗涤柱，并用MeOH中的2M氨洗脱所需产物。在减压下浓缩，以获得标题化合物(1.75g，94%)，其具有足以不经进一步纯化即使用的纯度。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 340/342 (M+H)。
实施例1
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-2-甲基-吡唑-3-甲酰胺
添加(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮二盐酸盐(150mg，0.38mmol)、1-甲基-1H-吡唑-5-甲酸(52mg，0.41mmol)、THF(7.5mL)和TEA(0.31mL，2.26mmol)。将混合物搅拌5分钟，并添加1-羟基苯并三唑(61mg，0.45mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(87mg，0.45mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。添加水(20mL)并用EtOAc(3×50mL)萃取。将有机相用饱和氯化钠水溶液(3×30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗混合物溶解至最低量的DCM中，并通过SPE滤筒(20g二氧化硅)过滤，用己烷中的50-100%丙酮洗脱。将粗混合物通过质量引导的SFC纯化[Waters SFC-MS制备型100；30×150mm 2-乙基吡啶柱；5μ粒度；CO2 (A)/MeOH(B)作为流动相；等度模式(10%B持续1分钟，梯度为在3分钟内10-20%B，在0.5分钟内20-40%B，在40%B下1分钟洗涤步骤且在0.5分钟内回到初始条件)；流动速率100mL/min]，以获得作为白色固体的标题化合物(90mg，55%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 434/436 (M+H)，TR = 1.39 min，梯度程序2。
基本上如实施例1中所述使用相应的胺中间体和适当取代的羧酸制备实施例2-41。LC-ES/MS数据包括在以下表1中。
实施例42
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-2-甲基-噻唑-5-甲酰胺
将(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮(600mg，1.84mmol)和2-甲基噻唑-5-甲酸(290mg，2.03mmol)溶解于THF(12.3mL)中。添加1-羟基-7-氮杂苯并三唑(281mg，2.03mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(430mg，2.21mmol)和TEA(0.77mL，5.52mmol)。将混合物在室温下搅拌12小时。将混合物用EtOAc稀释，通过SPE滤筒(ISOLUTE® HM-N)过滤，用EtOAc洗涤，并在减压下移除溶剂。将粗混合物通过质量引导的SFC纯化(Waters ZQ MS；4-硝基苯-磺酰胺柱，用MeOH中的0.14mM氨/CO2洗脱)，以获得作为黄色焦油的标题化合物(626mg，75%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl)451/453 (M+H)。
基本上如实施例42中所述使用相应的胺中间体和适当取代的羧酸制备实施例43-65。LC-ES/MS数据包括在以下表2中。
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-2-甲基-噻唑-5-甲酰胺(实施例42)的替代途径
将(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮二盐酸盐(21.0g，52.66mmol)、2-甲基-5-噻唑甲酸(11.31g，78.99mmol)和DIPEA(36.7mL，210.65mmol)溶解于DCM(210mL)中。搅拌直至完全溶解，且然后在冰浴中冷却(内部温度5℃)。经5分钟逐滴添加1-丙烷膦酸酐的溶液(EtOAc中的50%溶液，50.27g，78.99mmol)以维持内部温度在5-10℃之间。在冰浴中搅拌1小时，将其温热至室温，并搅拌过夜。用DCM(200mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)洗涤。将水层用DCM(3×100mL)萃取，并将合并的有机层用饱和氯化铵(300mL)、水(300mL)和盐水(500mL)洗涤。经MgSO4干燥，过滤并在真空中移除溶剂。通过色谱(330g硅胶柱)用EtOAc中的15-60% THF洗脱来纯化粗混合物，以产生作为淡黄色固体的标题化合物(12.8g，54%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl)451/453 (M+H)。
实施例48，N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-哒嗪-3-甲酰胺可以基本上如上述实施例42的替代途径中所述使用相应的胺中间体替代地制备。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 432/434 (M+H)。
实施例66
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-2-甲基-吡唑-3-甲酰胺
将DIPEA(15.5mL，87.7mmol)溶解于DCM(100mL)中，并添加(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮二盐酸盐(10.0g，25.0mmol)。将溶液搅拌10分钟，且然后添加2-甲基吡唑-3-甲酸(3.32g，26.3mmol)和HATU (9.73g，25.6mmol)。将反应物在室温下搅拌1小时，通过LC-MS(低pH)监测。将混合物用DCM (150mL)稀释，并用水(200mL)洗涤。用DCM (2×100mL)萃取水层。将有机层合并，并用饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)、饱和氯化铵水溶液(2×100mL)和水(100mL)洗涤。将有机溶液用MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将黄色油溶解于EtOAc (400mL)中，并用饱和氯化铵水溶液(2×100mL)、水(100mL)和饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤。将有机溶液用MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过色谱(硅胶)用EtOAc中的0-40%THF洗脱来纯化材料。合并纯化的级分并在减压下浓缩。将所得材料稀释于异己烷(100mL)中，并搅拌1小时。在减压下移除溶剂，以产生作为白色粉末的标题化合物(9.85g，88%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 434.2/436.2 (M+H)。
实施例67 (异构体 1)和68 (异构体 2)
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-2-羟基-丙酰胺异构体 1和异构体 2
合并(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮(60mg，0.184mmol)、乳酸(85%，在水中，0.02mL，0.202mmol)、THF (4mL)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(28.1mg，0.202mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(43mg，0.221mmol)和TEA(0.077mL，0.55mmol)。将混合物在室温下搅拌12小时。将混合物用EtOAc稀释，通过SPE滤筒(ISOLUTE® HM-N)过滤，用EtOAc洗涤，并在减压下移除溶剂。通过质量引导的SFC纯化粗混合物(Waters ZQ MS；200A 150 × 30 mm Phenomenex Luna HILIC柱，5μ粒度，用10-20% EtOH/CO2洗脱)，以获得作为无色固体的 N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-2-羟基-丙酰胺异构体1(12mg，16%)和作为无色固体的 N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]-2-羟基-丙酰胺异构体2 (12mg，16%)。异构体 1：LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 451/453 (M+H)。异构体 2：LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 451/453(M+H)。
实施例69
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]乙酰胺
在两个独立批次中执行以下程序。
将(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮盐酸盐(13.5g，31.6mmol)溶解于DCM (114mL)中，并添加DIPEA (16.5mL，95.0mmol)。添加乙酸酐(12.0mL，126mmol)，并搅拌45分钟。将混合物用DCM (100mL)稀释，并用饱和碳酸氢钠水溶液(50mL)、水(3×75mL)和饱和氯化钠水溶液(75mL)洗涤。将有机部分经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。向所得残余物中添加二乙醚(50mL)，涡旋，并过滤，用二乙醚(2×15mL)冲洗。将所得固体在真空下干燥2小时。此时，将两个批次合并，并将合并的固体在真空下干燥2小时，以产生作为白色细粉的标题化合物(17.4g，75%)。LC-ES/MSm/z (35Cl/37Cl) 368.2/370.2 (M+H)。
实施例70
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸甲酯
添加(2S)-2-氨基-1-[4-[2-(4-氨基-2-氯-6-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]丙-1-酮二盐酸盐(125mg，0.31mmol)、DCM (10mL)和TEA (0.1mL，0.7mmol)。将混合物搅拌5分钟，并添加N,N-二甲基4-吡啶胺(4mg，0.03mmol)和二甲基二碳酸酯(420mg，3.13mmol)。将反应物在室温下搅拌过夜。添加DCM (50mL)，并用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)洗涤。将有机相用饱和氯化钠水溶液(30mL)洗涤，经Na2SO4干燥，过滤并在减压下浓缩。将粗混合物溶解至最低量DCM中，并通过SPE滤筒(20g二氧化硅)过滤，用己烷中的30-100%丙酮洗脱。将粗混合物通过质量引导的SFC纯化[Waters SFC-MS制备型100；30×150mm 2-乙基吡啶柱；5μ粒度；CO2 (A) / MeOH (B)作为流动相；等度模式(10%B持续1分钟，梯度为在3分钟内10-20%B，在0.5分钟内20-40% B，在40% B下的1分钟洗涤步骤且在0.5分钟内回到初始条件)；流动速率100mL/min]，以获得作为白色固体的标题化合物(60mg，46%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 384/386 (M+H)，TR = 1.34 min，梯度程序2。
实施例71
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸甲酯
实施例71的化合物基本上如实施例70中所述使用相应的胺中间体和适当取代的二甲基二碳酸酯制备。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 384/386 (M+H)。
实施例72
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯
向两个圆底烧瓶中的每个中添加6-氯-2-甲基-5-[2-(4-哌啶基)乙基]嘧啶-4-胺盐酸盐(12.50g，42.92mmol)、DIPEA(22.46mL，128.7mmol)和DMF(100mL)。将两种混合物在冷水浴中冷却并搅拌5分钟。向各混合物中一次性添加HATU (17.95g，47.21mmol)和(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(8.93g，47.21mmol)。将混合物在室温下搅拌90分钟。将混合物连同水(300mL)和EtOAc(400mL)倒入独立的分液漏斗中，振荡并分配。将水层用EtOAc (3 ×300 mL)萃取，将各自的有机层用水(4×250mL)、饱和氯化钠水溶液(200mL)洗涤并经MgSO4干燥，过滤并在减压下浓缩。经由硅胶色谱用己烷中的70-100% EtOAc洗脱来纯化合并的材料。合并并在减压下浓缩纯化的级分。将残余物用EtOAc (500mL)稀释，并用饱和氯化铵水溶液(100mL)、饱和碳酸氢钠水溶液(100mL)、水(100mL)和饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤。将有机物经MgSO4干燥，过滤，并在减压下浓缩，以产生作为白色固体的标题化合物(28.0g，76%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 426.2/428.2 (M+H)。
实施例73
N-[(1S)-2-[(4R,S)-4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]氮杂环庚烷-1-基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯
将5-[2-[(4R,S)-氮杂环庚烷-4-基]乙基]-6-氯-2-甲基-嘧啶-4-胺(1.0g，3.72mmol)、(2S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)丙酸(1.06g，5.58mmol)溶解于DCM (4mL)和THF(10mL)中。添加TEA (1.56mL，11.16mmol)、1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.760g，5.58mmol)和1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(1.43g，7.44mmol)。将所得混合物在室温下在氮气下搅拌过夜。在减压下移除溶剂，将残余物溶解于EtOAc中，并用水洗涤。将有机级分经Na2SO4干燥，过滤，并在减压下浓缩。通过色谱(80g硅胶柱)用甲醇中的0-10%DCM洗脱来纯化粗混合物，以获得标题化合物(1.40g，86%)。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 440/442 (M+H)。
实施例74
N-[(1R)-2-[4-[2-(4-氨基-6-氯-2-甲基-嘧啶-5-基)乙基]-1-哌啶基]-1-甲基-2-氧代-乙基]氨基甲酸叔丁酯
实施例74的化合物基本上如实施例73中所述使用相应的胺中间体和适当取代的羧酸制备。LC-ES/MS m/z (35Cl/37Cl) 426/428 (M+H)。
测定
GOAT是将UAG转化成AG的主要酶。关于GOAT和生长素释放肽的作用的综述，参见：Kristy M. Heppner 等人, The ghrelin O-acyltransferase–ghrelin system: a novel regulator of glucose metabolism, Current Opinion in Endocrinology, Diabetes &Obesity 2011, 18:50–55; Phillip A. Cole 等人, Glucose and Weight Control in Mice with a Designed Ghrelin OAcyltransferase Inhibitor, Science. 2010December 17; 330(6011): 1689–1692. doi:10.1126/science.1196154, Matthias H.Tschöp 等人, Gastric O-acyl transferase activates hunger signal to the brain,Proc Natl Acad Sci U S A. 2008 April 29; 105(17): 6213–6214, 和JesusGutierrez, 等人, Ghrelin octanoylation mediated by an orphan lipid transferase, Proc Natl Acad Sci U S A., 2008 April 29, 105 (17):6320-6325。
在缺乏GOAT基因的小鼠中观察到的表型支持GOAT的作用。因此，预期GOAT的抑制减少循环AG并提高循环UAG。因此，AG与总生长素释放肽(UAG+AG)的比率在GOAT抑制剂处理之后降低。
体外无细胞人类GOAT酶促测定
将人类GOAT基因(登录号：NM_001100916)亚克隆至pAN51杆状病毒表达载体中。杆状病毒储备物遵循由供应商Invitrogen, California, USA提供的Bac-to-Bac方案制备。将5毫升人类GOAT杆状病毒储备物添加至2L Erlenmeyer烧瓶中的HyQ SFX-InsectTM培养基(HyClone目录号SH30278.02)中的500mL Sf9细胞(密度为1 × 106个细胞/毫升)中。将具有人类GOAT基因感染的Sf9细胞的烧瓶在28℃下、在120rpm的平板振动器上放置48小时。在48小时孵育之后，将细胞在4℃下以1,000xg离心10min。收集细胞沉淀并在冰箱中在-80℃下储存，直至准备用于进一步处理。
制备GOAT酶的微粒体膜用于酶促测定：
将1g细胞沉淀悬浮于9mL冷冻的均质化缓冲液(50 mM Tris-HCl，250 mM蔗糖，调节至pH 7.5，并通过0.2μm Millipore过滤器无菌过滤)中。将细胞悬浮液转移至Dounce玻璃均质器。将细胞沉淀在冰上用40次行程(strokes)而均质化。将均质物在Beckman水平转子中在4℃下以3,000rpm离心10min以移除未破碎细胞。收集上清液并在4℃下以40,000 xg离心1小时。使用Dounce玻璃均质器将所得膜沉淀悬浮于均质化缓冲液中，并在冰箱中在-20℃下储存以用于测定。对于人类GOAT酶膜制备物的长期储存，将悬浮的膜在-80℃冰箱中储存。
人类GOAT酶促测定方案：
在DMSO中制备测试化合物以制成0.2mM储备溶液。对于十种浓度，在DMSO中连续稀释储备溶液以在96孔圆底平板中获得最终化合物浓度范围为10μM至0.5nM的十点稀释曲线。在测定缓冲液(50mM Tris中的0.02% TWEEN™-20， pH 7.5，含有250mM蔗糖，1mg/mL BSA和10mM EDTA)中制备酶和底物溶液。将稀释的化合物(1μL)添加至相应低蛋白结合384孔平板的行A至N的各孔中。将由人类去酰基-生长素释放肽-生物素(CPC Scientific Inc., 6.0µM最终浓度)、辛酰基-CoA(Sigma，60μM最终浓度)和AG特异性抗体(WO 2006/091381)(1.0μg/mL最终浓度)组成的人类GOAT底物混合物(10μL)添加至化合物中。将已在测定缓冲液(9μL)中制备的GOAT-His/sf9酶制备物添加至含有底物和测试化合物的平板的各孔中，产生0.01μg/mL的最终浓度以起始反应。将混合物在室温下在平缓旋转振荡器上孵育1小时。将4M盐酸胍(20μL)添加至所有孔中，混合，并孵育3小时以终止反应。
通过用2%热失活的FBS/PBS (40 µL) (Invitrogen)封闭缓冲液封闭3小时来制备ELISA平板(STREPTAVIDIN SPECTRAPLATETM 384, Perkin Elmer)。从ELISA平板吸出封闭缓冲液并将封闭缓冲液(23μL)添加至列1-24、行A-N中。对于酰基生长素释放肽标准曲线，保留行O和P。将反应混合物(2μL)添加至ELISA平板中。通过以2.5pM起始、在含有0.2M盐酸胍的封闭缓冲液中进行连续2倍稀释来制备10点标准曲线(生物素标记的辛酰基-生长素释放肽)。在4℃下，在ELISA平板中将反应混合物或生物素标记的AG标准品孵育过夜。第二天，用洗涤缓冲液(0.1% TWEEN™-20/PBS，各洗涤周期中每孔100μL)洗涤平板3次。将AG特异性抗体(WO 2006/091381)(25μL，封闭缓冲液中0.5μg/mL)添加至各孔中，并在室温下孵育1小时。类似于前一步骤，用洗涤缓冲液洗涤平板3次。添加在封闭缓冲液中3,000倍稀释的蛋白G-HRP (25 µL)(Southern Biotech)，并在室温下孵育1小时。如前述步骤中，用洗涤缓冲液洗涤平板3次。将TMB试剂(25 µL) (Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc.)添加至各孔中，使其显影20分钟，并用1M磷酸(每孔25μL)终止。使用ENVISION®多标记读板器在450nm读板。相对于拟合的标准曲线计算AG水平并计算抑制百分比。绘制10点抑制曲线，并使用ACTIVITYBASE® (版本7.3.2.1)、用四参数逻辑方程拟合以获得IC50值。
遵循基本上如上文所述的方案，测试本文中实施例的所有化合物，实施例的所有化合物在体外无细胞人类GOAT酶促测定中展现低于1μM的IC50。以下例举的本发明化合物基本上如上文所述测试，并展现如下表3中所示的以下活性。
表3
实施例编号 IC50 [nM]
2 54.4 (n=1)
37 574 (n=1)
42 96.4 ± 28.3 (n=3)
66 68.9 ± 23.6 (n=4)
69 170 ± 103 (n=10)
71 149 ± 46 (n=3)
表3中的数据表明表3的化合物在体外抑制纯化的GOAT酶活性。
化合物处理组中AG与总生长素释放肽的比率的改变与媒介物处理组中AG与总生长素释放肽的比率的改变的比较反映体内GOAT酶抑制的程度，这是由于通过GOAT酶的UAG至AG的动态处理。在本文中的体内药效动力学研究中，在媒介物和化合物处理组中，血浆和胃中的AG和UAG的水平通过特定针对这两种分析物的ELISA测量。各样品的总生长素释放肽水平通过这些ELISA测量计算为AG和UAG的总和。AG与总生长素释放肽的比率通过各样品中的AG的水平除以相同样品中的总生长素释放肽的水平来定义。计算媒介物处理组中的AG、UAG的水平和AG与总生长素释放肽的比率且设定为100%。然后计算化合物处理组中的这些参数的相对改变以测定测试化合物的有效性。
关于GOAT抑制剂的体内剂量依赖性3天BID研究：
动物和处理：
从Harlan (Indianapolis, IN)购买9周龄的雄性C57BL/6小鼠。将小鼠单独圈养于具有12小时光/暗循环(光照，2200h)的温控(24℃)设施中，并允许自由取用标准啮齿动物食物(饮食2014, Harlan)和水。通常，使用在研究时为10-13周龄的小鼠。在实验的第0天，将小鼠随机化为处理组(N=7/组)，因此各组具有相似的平均体重。在第1天和第2天，在7 am和7 pm通过经口管饲用媒介物(1%羟基乙基纤维素，0.25% TWEEN™ 80，0.05%消泡剂)或在媒介物中制备的作为悬浮液的测试化合物以多种剂量处理动物。在第3天，使动物禁食，将其移至洁净笼中，并在8 am通过经口管饲用媒介物或测试化合物再次给药。同一天1 pm，通过断头术处死动物以收集血液。对于血液收集和血浆处理的细节，参见下文血液收集和从血浆萃取生长素释放肽部分。
血液收集：
将大约600μL血液收集至含有600μL(定义为V 防腐剂 )新鲜制备的防腐剂(4 mM PEFABLOC®[4-(2-氨基乙基)苯磺酰氟盐酸盐]、72mM NaCl、58mM NaF、0.032N盐酸，pH 3.0)的预称重的EDTA管中，并立即混合。再次将管称重并保持在冰上。为了使用该血液收集程序精确测定各样品的准确血液体积，各小鼠的血液的重量使用以下公式计算：
血液的重量=(含有血液+防腐剂的管的重量)-(含有防腐剂的管的重量)
血液体积(V 血液 )=(血液的重量)/1.06
注意，啮齿动物血液的密度假设为1.06g/mL。
在血液收集之后的15分钟内，将样品在4℃下以5000rpm离心8min。将血浆(650μL)移取至含有1N盐酸(65μL)的5mL玻璃管中，混合并保持在冰上。
通过SEP-PAK®柱的生长素释放肽萃取：
在进行ELISA之前使用SEP-PAK®_C18柱从血浆萃取AG和UAG以去除干扰。通过SEP-PAK®_C18柱进行的AG和UAG肽的固相萃取可以在真空歧管(Waters Corp)上或使用蠕动泵进行。将样品SEP-PAK®_柱萃取程序独立地应用于获自各单个小鼠的血浆样品。一般萃取方案描述如下。
用于SEP-PAK®柱萃取的整个方案的所有溶液均应在冰冷条件下。用99.9% ACN/0.1% TFA(100 mL ACN/0.1 mL TFA的溶液中的1 mL)润湿SEP-PAK®_柱(WAT054960,Waters Corp, Milford MA)。施加压力以将流速调节至约1mL/min以从柱床去除液体，但不使柱在任何点变干。一旦从柱中去除液体，终止压力。用3% ACN/0.1% TFA(97mL水、3mLACN、0.1mL TFA中的1mL)平衡柱。施加压力以将流速调节至约1mL/min以从柱床去除液体，但不使柱变干。将大约650μL酸化血浆(定义为 V 添加至柱的血浆 )稀释至1.4mL冰冷0.1% TFA。将来自前一步骤的所有稀释的酸化血浆装载至柱上。施加压力以将流速调节至约0.5mL/min以使样品穿过柱并使生长素释放肽吸收至柱的树脂上。不使柱变干。用3% ACN/0.1% TFA(97mL水、3mL ACN、0.1mL TFA中的0.9mL)洗涤。施加压力以将流速调节至约1mL/min以从柱床去除液体，但不使柱变干。将洗涤再重复两次。用60% ACN/0.1% TFA(40mL水、60mL ACN、0.1mL TFA中的1mL)洗脱。将收集管置于各柱下方，施加压力以调节流速至约0.5mL/min以推动液体通过柱并将洗脱液收集至收集管中。立即在干冰上冷冻样品。在speed-vacuum(型号SC110A, Savant)中冻干样品，并储存在-20℃下，直至进行ELISA测定。
生长素释放肽的ELISA测定：
用100μL的1μg/mL抗体(WO 2005/026211和WO2006/019577)包被96孔MULTI-ARRAY®MSD®平板(Meso Scale Discovery, Gaithersberg, MD, 目录号L15XA-3)，所述抗体识别PBS(Invitrogen)中的生长素释放肽的酰基形式和未酰化形式的中间结构域。轻敲平板的侧面以确保孔的覆盖，用粘合平板密封剂密封，并在室温下孵育过夜。丢弃内容物并将BLOCKER™酪蛋白/PBS (100 µL) (Thermo Scientific, Rockford, IL, 目录号37528)添加至各孔中。再密封平板并在室温下置于平板振动器上1小时。
在BLOCKER™酪蛋白/PBS (针对各样品为400μL，该体积定义为 V 重构 )中重构冻干保存的来自SEP-PAK® C18柱萃取的血浆样品，用涡旋混合器充分混合并在冰上孵育45-60min。丢弃来自平板的内容物并将25μL重构的血浆样品添加至各孔中。以8000pg/mL开始且针对8个总浓度进行连续1：4稀释来制备酰基生长素释放肽和未酰化生长素释放肽标准曲线。将制备的标准品一式两份添加至封闭的平板中，每孔25μL。密封平板并在平板振动器上在室温下孵育2h。
丢弃平板内容物并用包括0.1% TWEEN™ 20的PBS(150μL)(PBS-T)洗涤三次。将用MSD® SULFO-TAG™ (Meso Scale Discovery)标记的酰基生长素释放肽特异性抗体(WO2006/091381)或未酰化生长素释放肽特异性抗体(WO 2006/055347)在含有0.05% TWEEN™200的0.2 × Blocker酪蛋白中稀释至0.05μg/mL(命名为二抗溶液)。去除最终洗涤液并添加特异性识别AG或UAG的二抗溶液(向各孔添加25μL)。再密封平板并在平板振动器上在室温下孵育1小时，然后用PBS-T (150 µL/孔)最后再洗涤3次。
丢弃最终洗涤液并用1× MSD®读取缓冲液(150 µL/孔)置换。使用MSD® SECTOR®Imager 6000分析仪(Meso Scale Discovery)，读取通过结合至平板上的电极的MSD®SULFO-TAG™标记的活化产生的电化学发光信号。基于通过MSD®软件产生的各自标准曲线，计算酰基生长素释放肽或未酰化生长素释放肽的浓度。通过将测量的酰基生长素释放肽或未酰化生长素释放肽水平乘以稀释因子来测定各样品的实际血浆浓度。各血浆样品的稀释因子用以下公式计算。
结果：
分别以0.3、1和3mg/kg给药实施例42的化合物3天使血浆AG降低51%、57%和70%，且使UAG增加至1.61、2.04和2.00倍(下表6中的结果，对于各处理组，n=7)。当与媒介物处理的对照动物相比时，以0.3、1和3mg/kg给药分别导致AG与总生长素释放肽的比率降低61%、73%和81%。
表4
处理 AG(对照的%) UAG(媒介物对照的%) AG/总生长素释放肽(媒介物对照的%)
媒介物 100 (n=7) 100 (n=7) 100 (n=7)
0.3 mg/kg 49 ± 7 (n=7) 161 ± 24 (n=7) 39 ± 2 (n=7)
1 mg/kg 43 ± 6 (n=7) 204 ± 24 (n=7) 27 ± 1 (n=7)
3 mg/kg 30 ± 4 (n=7) 200 ± 20 (n=7) 19 ± 1(n=7)
表4中的结果证明实施例42的化合物抑制AG产生且提升循环中的UAG，如体内GOAT敲除小鼠中所显示。
分别以0.2、0.6、2、6和18mg/kg给药实施例66的化合物3天使血浆AG降低34%、52%、72%、79%和81%，且使UAG增加至2.13、2.61、2.92、3.02和2.79倍(下表7中的结果)。当与媒介物处理的对照动物相比时，以0.2、0.6、2、6和18mg/kg给药分别导致AG与总生长素释放肽的比率降低50%、65%、79%、84%和86%。
表5
处理 AG(对照的%) UAG(媒介物对照的%) AG/总生长素释放肽(媒介物对照的%)
媒介物 100 (n=7) 100 (n=7) 100 (n=7)
0.2 mg/kg 66 ± 12 (n=7) 213 ± 27 (n=7) 50 ± 3 (n=7)
0.6 mg/kg 48 ± 4 (n=7) 261 ± 30 (n=7) 35 ± 1 (n=7)
2 mg/kg 28 ± 3 (n=14) 292 ± 43 (n=14) 21 ± 1 (n=14)
6 mg/kg 21 ± 3 (n=7) 302 ± 48 (n=7) 16 ± 1 (n=7)
18 mg/kg 19 ± 6 (n=7) 279 ± 36 (n=7) 14 ± 2 (n=7)
表5的结果证明实施例66的化合物抑制AG产生且提升循环中的UAG，如体内GOAT敲除小鼠中所显示。
分别以0.3、1和3mg/kg给药实施例71的化合物3天使血浆AG降低13%、37%和66%，且使UAG增加至2.87、3.44和2.90倍(下表9中的结果)。当与媒介物处理的对照动物相比时，以0.3、1和3mg/kg给药分别导致AG与总生长素释放肽的比率降低59%、73%和82%。
表6
处理 AG(对照的%) UAG(媒介物对照的%) AG/总生长素释放肽(媒介物对照的%)
媒介物 100 (n=7) 100 (n=7) 100 (n=7)
0.3 mg/kg 87 ± 18 (n=7) 287 ± 43 (n=7) 41 ±3 (n=7)
1 mg/kg 63 ± 15 (n=7) 344 ± 63 (n=7) 27 ± 2 (n=7)
3 mg/kg 34 ± 5 (n=7) 290 ± 30 (n=7) 18 ± 1 (n=7)
表6的结果证明实施例71的化合物抑制AG产生且提升循环中的UAG，如体内GOAT敲除小鼠中所显示。

Claims (29)

1.下式的化合物或其药学上可接受的盐，
其中
n是1或2；
R1和R2选自-CH3和-Cl，只要R1和R2不都是-CH3或不都是-Cl；
R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；
R5选自任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OC1-C4烷基；C3-C6环烷基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基；
条件是当n是1、R1是-CH3、R2是-Cl、R3是-CH3且R4是-H时，则R5不可以是环丙基。
2.权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐，其中n是1或2；R1和R2选自-CH3和-Cl，只要R1和R2不都是-CH3或不都是-Cl；R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；R5选自任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；环丙基；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基；条件是当n是1、R1是-CH3、R2是-Cl、R3是-CH3且R4是-H时，则R5不可以是环丙基。
3.权利要求1或2的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有下式：
其中
n是1或2；
R3和R4选自-H和-CH3，只要R3和R4不都是-CH3；
R5是任选地被-OH或-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基、嘧啶基或吡嗪基；以及任选地被-OCH3取代的苯基。
4.权利要求1至3中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，所述化合物具有下式
其中
n是1或2；
R5是任选地被-CF3取代的-C1-C3烷基；-OCH3或-OC(CH3)3；吡唑基、噁唑基、噻唑基或噻二唑基，其中吡唑基、噁唑基或噻唑基各自可任选地被-CH3或-CH2CH3取代一至两次；吡啶基、哒嗪基或吡嗪基；或任选地被-OCH3取代的苯基。
5.权利要求1至4中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
其中R5是-CH3；-OCH3；或吡唑基或噻唑基，其中吡唑基或噻唑基可任选地被-CH3取代。
6.权利要求1至5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中当R3或R4是-CH3时，具有所述-CH3的碳原子的构型是(S)。
7.权利要求1至5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
。
8.权利要求6的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
。
9.权利要求1至5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
。
10.权利要求9的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
。
11.权利要求1至5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
。
12.权利要求11的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
。
13.权利要求1至5中任一项的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
。
14.权利要求13的化合物或其药学上可接受的盐，其中所述化合物是
。
15.药物组合物，其包含权利要求1-14中任一项的化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
16.根据权利要求15所述的药物组合物，其与一种或多种其它治疗剂组合。
17.减少体重增加的方法，其包括向有需要的患者给药根据权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
18.减少体重反弹的方法，其包括向有需要的患者给药根据权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
19.治疗肥胖的方法，其包括向有需要的患者给药根据权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
20.治疗2型糖尿病的方法，其包括向有需要的患者给药根据权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐。
21.根据权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗。
22.根据权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于减少体重增加。
23.根据权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于减少体重反弹。
24.根据权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗肥胖。
25.根据权利要求1-14中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐，其用于治疗2型糖尿病。
26.权利要求1-14中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于减少体重增加的药物中的用途。
27.权利要求1-14中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于减少体重反弹的药物中的用途。
28.权利要求1-14中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗2型糖尿病的药物中的用途。
29.权利要求1-14中任一项的化合物或其药学上可接受的盐在制备用于治疗肥胖的药物中的用途。
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