ES2773994T3 - Inhibidores de grelina O-aciltransferasa - Google Patents

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Christopher Stanley Galka
Erik James Hembre
Nicholas Allan Honigschmidt
Stacy Jo Keding
Maria Angeles Martinez-Grau
Gema Ruano Plaza
Almudena Rubio
Daryl Lynn Smith
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Abstract

Un compuesto de fórmula **(Ver fórmula)** en la que n es 1 o 2; R1 y R2 se seleccionan de -CH3 y -Cl, en la que R1 y R2 no pueden ser ambos -CH3 o -Cl; R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3, en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3; R5 se selecciona de -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3; -Oalquilo C1-C4; cicloalquilo C3-C6; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o - CH2CH3; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; con la condición de que, cuando n es 1, R1 es -CH3, R2 es -Cl, y R3 o R4 es -CH3, entonces R5 no puede ser ciclopropilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y además con la condición de que el compuesto no sea terc-butil N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1- metil-2-oxo-etil]carbamato.

Description

DESCRIPCIÓN
Inhibidores de grelina O-aciltransferasa
La presente invención se refiere a compuestos útiles para inhibir la grelina O-aciltransferasa (GOAT), a composiciones farmacéuticas y usos terapéuticos relacionados con la actividad de la GOAT.
La GOAT pertenece a la familia de enzimas de O-aciltransferasa (MBOAT) ligadas a membrana. Convierte la desacil-grelina (también conocida como grelina no acilada o UAG) en una forma biológicamente activa, acil-grelina (AG), transfiriendo un ácido graso al residuo Ser3 del péptido de desacilgrelina. Se ha demostrado que la acilgrelina incrementa la ingesta de alimentos y aumenta la adiposidad en seres humanos y en roedores. Se ha demostrado que la infusión de AG en humanos también suprime la secreción de insulina inducida por la glucosa. Se ha demostrado que la eliminación del gen de grelina mejora la liberación de insulina para evitar o mejorar la intolerancia a la glucosa en ratones ob/ob alimentados con dieta rica en grasa.
Se ha informado en la literatura sobre inhibidores de GOAT de pequeñas moléculas. Véase el documento WO 2013/125732.
Sin embargo, la frecuencia de obesidad y diabetes acopladas con la eficacia variable y las respuestas a los tratamientos corrientes para obesidad y diabetes necesitan que haya más elecciones de tratamiento disponibles para pacientes. La presente invención proporciona ciertos compuestos novedosos que son inhibidores de GOAT. Estos nuevos compuestos podrían abordar la necesidad de un potente tratamiento efectivo de obesidad. También se cree un inhibidor de GOAT puede ser de utilidad para reducir el aumento de peso o la recuperación de peso como un complemento de la dieta y/o el ejercicio, otros agentes medicinales terapéuticos o procedimientos diseñados para reducir el aumento de peso o tratar la obesidad. De modo similar, un inhibidor de GOAT puede ser de utilidad para el tratamiento de diabetes de tipo 2, solo o en combinación con otros tratamientos para diabetes de tipo 2.
La presente invención proporciona un compuesto de fórmula
Figure imgf000002_0001
en la que
n es 1 o 2;
R1 y R2 se seleccionan de -CH3 y -Cl, en la que R1 y R2 no pueden ser ambos -CH3 o -Cl;
R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3;
R5 se selecciona de -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3; -Oalquilo C1-C4 ; cicloalquilo C3-C6; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o - CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
con la condición de que, cuando n es 1, R1 es -CH3 , R2 es -Cl, y R3 o R4 es -CH3 , entonces R5 no puede ser ciclopropilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y además con la condición de que el compuesto no sea ferc-butil N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1 -metil-2-oxo-etil]carbamato.
La presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con uno o varios portadores, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables. En otra realización, la composición se usa en combinación con uno o varios otros agentes terapéuticos.
La presente invención también proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en terapia, en particular para reducir el aumento de peso o recuperación de peso o tratamiento de diabetes de tipo 2 u obesidad. Además, la presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en la reducción del aumento de peso o recuperación de peso o tratamiento de diabetes de tipo 2 u obesidad. Por otra parte, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para reducir el aumento de peso o recuperación de peso o tratamiento de diabetes de tipo 2 u obesidad.
En otro aspecto adicional, la presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en terapia, en particular para tratar las secuelas de un evento isquémico. Además, la presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en el tratamiento de las secuelas de un evento isquémico. Por otra parte, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para tratar las secuelas de un evento isquémico. En otra realización, el evento isquémico es isquemia de miocardio o isquemia cardíaca o isquemia cerebral.
La presente invención también proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en terapia, en particular para el tratamiento de trastornos de la adicción. Además, la presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en el tratamiento de trastornos de la adicción. Adicionalmente, la presente invención proporciona el uso de un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de trastornos de la adicción. En otra realización, el trastorno de la adicción implica comportamiento de consumo, tales como alcohol, tabaquismo, comer en exceso o uso de drogas ilícitas.
La presente invención también proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en terapia, en particular para mejorar las consecuencias del estrés que promueven comportamientos adictivos. En otra realización, el trastorno de la adicción implica comportamiento de consumo, tales como alcohol, tabaquismo, comer en exceso o uso de drogas ilícitas. Además, la presente invención proporciona un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para usar en la mejora de las consecuencias del estrés que promueven comportamientos adjetivos. Adicionalmente, la presenteinvención proporciona el uso de un compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, en la fabricación de un medicamento para mejorar las consecuencias del estrés que promueven comportamientos adictivos. En otra realización, los comportamientos adjetivos implican comportamiento de consumo, tales como alcohol, tabaquismo, comer en exceso o uso de drogas ilícitas.
La presente invención también comprende productos intermedios y procesos útiles para la síntesis de un compuesto de la presente invención.
La expresión “que trata" (o “tratar” o “tratamiento”) como se usa en la presente se refiere a restringir, ralentizar, detener o revertir el progreso o la severidad de un síntoma, afección o trastorno existente.
Como se usa en la presente, la expresión “reducir el aumento de peso” se refiere a disminuir el aumento de peso de un paciente. La expresión “reducir la recuperación de peso” se refiere a disminuir el aumento de peso de un paciente que está experimentando el rebote del peso después de la pérdida de peso. La recuperación de peso se puede deber a un efecto de rebote después de la cesión de la pérdida de peso lograda por medio de dieta, ejercicio, modificación del comportamiento o terapias aprobadas. Para evitar la duda de un aumento de peso o recuperación de peso como se usa en la presente, se refiere a aumento de peso o recuperación de peso inducido por ingesta de alimento o hábitos alimenticios y no se refiere a aumento de peso no relacionado con comida tales como formación de fluidos, peso debido a retención de agua, masa muscular o inflamación.
Un “evento isquémico”, como se usa en la presente, se refiere a un suministro insuficiente de sangre a un órgano o parte del cuerpo. Una reducción del flujo sanguíneo reduce el suministro de oxígeno al órgano o la parte corporal afectada. Un evento isquémico también se puede conocer como isquemia. Un experto en la técnica conocerá que la isquemia puede afectar diferentes órganos o partes del cuerpo, por ejemplo, el corazón, tales como isquemia de miocardio o isquemia cardíaca o el cerebro, tales como isquemia cerebral.
“Trastornos de adicción” como se usa en la presente describen comportamientos mal adaptativos excesivos para los que un individuo exhibe una incapacidad de control a pesar de las consecuencias negativas. Son de particular relevancia para la presente invención los trastornos de la adicción que implican el comportamiento de consumo tales como ingesta de alcohol, tabaquismo, comer en exceso y uso de drogas ilícitas. La presente invención normaliza el incentivo aberrante y recompensa los sustratos neurales que se desregulan en individuos con trastornos adjetivos. El estrés es a menudo un agente precipitante en la etiología y el mantenimiento de trastornos adjetivos; la presente invención proporciona un procedimiento para mejorar las consecuencias del estrés que promueven comportamientos adjetivos.
Un compuesto de la presente invención puede reaccionar para formar sales farmacéuticamente aceptables. Las sales farmacéuticamente aceptables y la metodología común para prepararlas se conocen bien en la técnica. Véase, por ejemplo, P. Stahl, et al. Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection and Use, 2a edición revisada (Wiley-VCH, 2011); S.M. Berge, et al., “Pharmaceutical Salts”, Journal of Pharmaceutical Sciences, Vol.
66, No. 1, enero de 1977.
El experto en la técnica apreciará que los compuestos de la invención o sus sales farmacéuticamente aceptables estén compuestos por un núcleo con contenido de al menos un centro quiral, representado por un * en (I) a continuación:
Figure imgf000004_0001
Los compuestos preferidos de la invención están representados por (II), en la que R3 es -H y R4 es -CH3 :
Figure imgf000004_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
El experto en la técnica apreciará que los centros quirales adicionales se puedan crear en los compuestos de la invención por selección de ciertas variables. La presente invención contempla todos los enantiómeros o diastereómeros individuales, así como mezclas de los enantiómeros y diastereómeros de dichos compuestos, incluyendo racematos.
El experto en la técnica también apreciará que las designaciones de Cahn-lngold-Prelog (R) o (S) para todos los centros quirales varíen según los patrones de sustitución del compuesto particular. Los enantiómeros o diastereómeros individuales se pueden preparar comenzando con reactivos quirales o por técnicas de síntesis estereoselectivas o estereospecíficas. De modo alternativo, los enantiómeros o diastereómeros individuales se pueden aislar de las mezclas por técnicas estándar de cromatografía quiral o cristalización en cualquier punto en la síntesis de compuestos de la invención. Los enantiómeros simples de los compuestos de la invención son una realización preferente de la invención.
Un compuesto de la presente invención se formula, con preferencia, como composiciones farmacéuticas administradas por una variedad de rutas, como la administración oral. Estas composiciones farmacéuticas y procesos para prepararlas son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Remington: The Science and Practice of Pharmacy (A. Gennaro, et al., eds., 21a ed., Mack Publishing Co., 2005). Más particularmente, se prefiere una composición farmacéutica que comprende un compuesto de la invención representado por la fórmula
Figure imgf000004_0003
en la que
n es 1 o 2 ;
R1 y R2 se seleccionan de -CH3 y -Cl, en la que R1 y R2 no pueden ser ambos -CH3 o -Cl;
R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3;
R5 se selecciona de -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3; -Oalquilo C1-C4 ; cicloalquilo C3-C6; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
con la condición de que, cuando n es 1, R1 es -CH3 , R2 es -Cl, y R3 o R4 es -CH3 , entonces R5 no puede ser ciclopropilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo,
y además con la condición de que el compuesto no sea ferc-butil N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metilpirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato, y uno o varios vehículos o diluyentes farmacéuticamente aceptables.
A pesar de que todos los compuestos de ejemplo de la invención son inhibidores de GOAT, se prefieren ciertas clases de compuestos. Los siguientes párrafos describen tales clases preferidas:
a) n es 1;
b) n es 2;
c) R1 es -C H 3 y R2 es -Cl;
d) R1 es -Cl y R2 es -CH3;
e) R3 es-CH3 y R4 es-H;
f) R3 y R4 son -H;
g) R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3 ; -Oalquilo C1-C4 ; ciclopropilo; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
h) R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3 ; -OCH3 u -OC(CH3)3 ; ciclopropilo; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
i) R5 es -Oalquilo C1-C4 ;
j) R5 es -OCH3 o -OC(CH3)3 ;
k) R5 es pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ;
l) R5 es pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una vez con -CH3 o -CH2CH3 ;
m) R5 es pirazolilo, que se puede sustituir opcionalmente dos veces con -CH3 ;
n) R5 es pirazolilo, que se puede sustituir opcionalmente una vez con -CH2CH3;
o) R5 es piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo;
p) R5 es fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3 ;
q) R5 es ciclopropilo;
r) R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3;
s) R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3 ; -Oalquilo C1-C4 ; ciclopropilo; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
t) R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3 ; -OCH3 u -OC(CH3)3; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3 ;
u) R5 es piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
v) R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3 u -OCH3 u -OC(CH3)3;
w) R5 es pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ;
x) R5 es piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
y) R5 es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno se puede sustituir opcionalmente una a dos veces con -CH3 o - CH2CH3 ;
z) R5 es piridinilo o piridazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
aa) R5 es piridinilo o piridazinilo;
bb) R5 es -OC(CH3)3;
cc) R5 es -CH3 o -CH2CH3, opcionalmente sustituido con -OH; -OCH3 u -OC(CH3)3 ; ciclopropilo; pirrolidinilo, opcionalmente sustituido con -C(O)CH3; pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo o piridazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
dd) R5 es ciclopropilo; pirrolidinilo, opcionalmente sustituido con -C(O)CH3 ; pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo o piridazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
ee) R5 es ciclopropilo; pirrolidinilo, opcionalmente sustituido con -C(O)CH3 ;
ff) R5 es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo o piridazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
gg) R5 es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 o -CH2CH3;
hh) R5 es -CH3 o -CH2CH3, opcionalmente sustituido con -OH; -OCH3 u -OC(CH3)3 ;
ii) R5 es -CH3 o -CH2CH3, opcionalmente sustituido con -OH;
jj) R5 es -OCH3 u -OC(CH3)3;
kk) R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -CF3; - OCH3 u -OC(CH3)3 ; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
ll) R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -CF3; - OCH3 u -OC(CH3)3 ; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
mm)R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -CF3; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; nn) R5 es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 ;
o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
oo) R5 es pirazolilo u oxazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3; pp) R5 es -CH3 , -OCH3 pirazolilo o tiazolilo, en la que pirazolilo o tiazolilo puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 ;
qq) R5 no es ciclopropilo si R1 es -CH3 y R2 es -Cl;
rr) cuando R3 o R4 es -CH3, la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S); y
ss) el compuesto de la presente invención es la base libre.
Una realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000006_0001
en la que
n es 1 o 2;
R1 y R2 se seleccionan de -CH3 y -Cl, en la que R1 y R2 no pueden ser ambos -CH3 o -Cl;
R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3;
R5 se selecciona de -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3; -Oalquilo C1-C4 ; ciclopropilo; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o - CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3;
con la condición de que, cuando n es 1, R1 es -CH3 , R2 es -Cl, y R3 o R4 es -CH3 , entonces R5 no puede ser ciclopropilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo y además con la condición de que el compuesto no sea ferc-butil N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1 -metil-2-oxo-etil]carbamato.
En una realización adicional, cuando R3 o R4 es -CH3 , la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S).
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos en los que, n es 1 o 2; R1 y R2 se seleccionan de -CH3 y - Cl, en los que R1 y R2 no pueden ser ambos -CH3 o -Cl; R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en los que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3 ; R5 se selecciona de -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3 ; -0 CH3 u -OC(CH3)3; ciclopropilo; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en los que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3 ; a condición de que, cuando n es 1, R1 es -CH3, R2 es -Cl, y R3 o R4 es -CH3, entonces R5 no puede ser ciclopropilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y además con la condición de que el compuesto no sea ferc-butil N-[(1S)2-[4-[2-(4-amino-6-doro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato. En otra realización, cuando R3 o R4 es -CH3, la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S).
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000007_0001
en la que
n es 1 o 2 ;
R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3;
R5 se selecciona de -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3; -OCH3 u -OC(CH3)3 ; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y además con la condición de que el compuesto no sea ferc-butil N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato. En otra realización, cuando R3 o R4 es -CH3 , la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S).
En otra realización preferente, n es 1 o 2; R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3 ; R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3 u -OCH3 u -OC(CH3)3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y además con la condición de que el compuesto no sea ferc-butil N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato. En otra realización, cuando R3 o R4 es -CH3, la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S).
En otra realización preferente, n es 1 o 2; R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3; R5 es pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, cuando R3 o R4 es -CH3, la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S).
En otra realización preferente, n es 1 o 2; R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3 ; R5 es piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, cuando R3 o R4 es -CH3, la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S).
En otra realización preferente, la presente invención se refiere a compuestos de fórmula, n es 1 o 2; R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3 ; R5 es piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, cuando R3 o R4 es -CH3, la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S).
En otra realización preferente adicional, n es 1 o 2; R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3, en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3; R5 es fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, cuando R3 o R4 es -CH3, la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S).
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000007_0002
n es 1 o 2; R5 es -OCH3 u -OC(CH3)3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000008_0001
en la que R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3, en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3 ; R5 es pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, cuando R3 o R4 es -CH3 , la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S).
En otra realización preferente adicional, R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH3 ; R5 es piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización preferente, n es 1 o 2; R5 es piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000008_0002
en la que R5 es fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización preferente adicional, R5 es -OCH3 u -OC(CH3)3 ; o -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización preferente, R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización preferente, R5 es -OCH3 u -OC(CH3)3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000008_0003
en la que R5 es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno se puede sustituir opcionalmente una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización preferente adicional, R5 es piridinilo, piridazinilo o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización preferente, R5 es piridinilo o piridazinilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización preferente adicional, R5 es fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización preferente, R5 es -OC(CH3)3 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000009_0001
R5 se selecciona de -CH3 o -CH2CH3, opcionalmente sustituido con - OH; -OCH3 u -OC(CH3)3; ciclopropilo; pirrolidinilo, opcionalmente sustituido con -C(O)CH3 ; pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en. donde cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 o -CH2CH3; piridinilo o piridazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización preferente adicional, R5 es ciclopropilo; pirrolidinilo, opcionalmente sustituido con -C(O)CH3; pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno de pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 o -CH2CH3; piridinilo o piridazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización preferente, R5 es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 o -CH2CH3; piridinilo o piridazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización, R5 es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 o -CH2CH3; piridinilo o piridazinilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización, R5 es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 o - CH2CH3 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización adicional, R5 es piridinilo o piridazinilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, R5 es fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización preferente, R5 es ciclopropilo; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo - CH3 unido es (S).
En otra realización preferente adicional, R5 es -CH3 o -CH2CH3 , opcionalmente sustituido con -OH; u -OCH3 u -OC(CH3)3 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización, R5 es -CH3 o -CH2CH3 , opcionalmente sustituido con -OH; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S). En otra realización adicional, R5 es -OCH3 u -OC(CH3)3 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Una realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000010_0001
en la que
n es 1 o 2;
R1 y R2 se seleccionan de -CH3 y -Cl, en la que R1 y R2 no pueden ser ambos -CH3 o -Cl;
R5 se selecciona de -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -CF3; -OCH3 u -OC(CH3)3; pirazolMo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y además con la condición de que el compuesto no sea ferc-butil N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Una realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000010_0002
en la que
n es 1 o 2;
R5 se selecciona de -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -CF3; -OCH3 u -OC(CH3)3; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y además con la condición de que el compuesto no sea ferc-butil N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato.
En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
En otra realización preferente, n es 1 o 2; R5 se selecciona de - alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -CF3; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3 ; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Una realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000010_0003
en la que R5 es pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Una realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000011_0001
en la que R5 es pirazolilo u oxazolilo, en la que cada uno puede estar opcionalmente sustituido con -CH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000011_0002
en la que R5 es -CH3 ; -OCH3 ; o pirazolilo o tiazolilo, en la que pirazolilo o tiazolilo puede estar opcionalmente sustituido con -CH3 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. En otra realización, la configuración del átomo de carbono con el grupo -CH3 unido es (S).
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula:
Figure imgf000011_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Una realización especialmente preferente de la presente invención se refiere al compuesto,
Figure imgf000011_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Una realización especialmente preferente de la presente invención se refiere al compuesto,
Figure imgf000012_0001
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a compuestos de fórmula,
Figure imgf000012_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otra realización especialmente preferente de la presente invención se refiere al compuesto,
Figure imgf000012_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otra realización especialmente preferente de la presente invención se refiere al compuesto,
Figure imgf000012_0004
Figure imgf000013_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otra realización especialmente preferente de la presente invención se refiere al compuesto,
Figure imgf000013_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otra realización especialmente preferente de la presente invención se refiere al compuesto,
Figure imgf000013_0003
Otra realización preferente de la presente invención se refiere a los compuestos de fórmula,
Figure imgf000013_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otra realización especialmente preferente de la presente invención se refiere al compuesto,
Figure imgf000013_0005
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
Otra realización especialmente preferente de la presente invención se refiere al compuesto,
Figure imgf000014_0001
El compuesto de la presente invención es efectivo en general en un amplio intervalo de dosis. Por ejemplo, las dosis por día caen dentro del intervalo de aproximadamente 0,03 a aproximadamente 30 mg/Kg de peso corporal. En algunas instancias, los niveles de dosis por debajo del límite inferior de dicho intervalo pueden ser más que adecuados, mientras que, en otros casos, se pueden emplear dosis aún mayores mientras se mantiene un perfil de beneficio/riesgo favorable y, por consiguiente, el intervalo de dosis anterior no pretende limitar el alcance de la invención de modo alguno. Se entenderá que la cantidad del compuesto realmente administrado será determinado por un médico, a la luz de las circunstancias relevantes, incluyendo la afección por tratar, la ruta de administración seleccionada, el compuesto o compuestos reales administrados, la edad, el peso y la respuesta del paciente individual y la gravedad de los síntomas del paciente.
Se sabe bien en la técnica que los agentes para el tratamiento de diabetes y/u obesidad se pueden combinar con otros agentes para el tratamiento de diabetes y/u obesidad. El compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo se puede coadministrar, simultánea o secuencialmente, con otros tratamientos efectivos para diabetes u obesidad. El compuesto de la invención o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, solo o en combinación con otros tratamientos efectivos se pueden administrar, simultánea o secuencialmente, según procedimientos médicos aprobados tales como cirugías bariátricas, por ejemplo, cirugía de derivación gástrico o procedimientos de cinturón gástrico ajustable.
Los compuestos de la presente invención o sus sales se pueden preparar por medio de una variedad de procedimientos conocidos en la técnica, algunos de los cuales se ilustran en los esquemas, preparaciones y ejemplos de abajo. Las etapas de síntesis específicas para cada una de las rutas descritas se pueden combinar en diferentes formas o en conjunto con las etapas de los diversos esquemas, para preparar prepare compuestos o sales de la presente invención. Los productos de cada etapa en los esquemas de abajo se pueden recuperar por medio de procedimientos convencionales bien conocidos en la técnica, incluyendo extracción, evaporación, precipitación, cromatografía, filtración, trituración y cristalización. En los esquemas de abajo, todos los sustituyentes a menos que se indique otra cosa son como se definieron previamente. Los reactivos y materiales de partida son fácilmente asequibles para un experto en la técnica.
Además, determinados productos intermedios descritos en los siguientes esquemas pueden contener uno o varios grupos protectores de nitrógeno. El grupo protector variable puede ser igual o diferente en cada aparición según las condiciones de reacción particulares y las transformaciones particulares por realizar. Las condiciones de protección y desprotección son bien conocidas para el experto en la técnica y se describen en la literatura (véase, por ejemplo, “Greene's Protective Groups in Organic Synthesis", cuarta edición, de Peter G. M. Wuts y Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc. 2007).
Ciertos centros estereoquímicos se han dejado sin especificar y ciertos sustituyentes se eliminaron en los siguientes esquemas con fines de claridad y no pretenden limitar las enseñanzas de los esquemas de modo alguno. Los enantiómeros o diastereómeros simples se pueden preparar comenzando con reactivos quirales o por técnicas de síntesis estereoselectivas o estereospecíficas. Alternativamente, los enantiómeros o diastereómeros simples se pueden aislar de mezclas por medio de técnicas estándar de cromatografía quiral o cristalización en cualquier punto conveniente en la síntesis de compuestos de la invención por procedimientos tales como técnicas selectivas de cristalización o cromatografía quiral (véase, por ejemplo, J. Jacques, et al., “Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981 y E. L. Eliel y S.H. Wilen”, Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley-lnterscience, 1994).
Algunos productos intermedios o compuestos de la presente invención pueden tener uno o varios centros quirales. La presente invención contempla todos los enantiómeros o diastereómeros individuales, así como mezclas de los enantiómeros y diastereómeros de dichos compuestos incluidos los racematos. Se prefiere que los compuestos de la presente invención contengan al menos un centro quiral que existe como enantiómero o diastereómero simple. El enantiómero o diastereómero simple se puede preparar comenzando con reactivos quirales o por técnicas sintéticas estereoselectivas o estereospecíficas. De modo alternativo, el enantiómero o diastereómero simple se puede aislar de mezclas por técnicas estándar de cromatografía quiral o cristalización. El experto en la técnica apreciará que en ciertas circunstancias el orden de elución de los enantiómeros o diastereómeros pueda ser diferente debido a diferentes columnas y fases móviles de cromatografía.
Ciertas abreviaturas se definen de la siguiente manera: “ACN” se refiere a acetonitrilo; “BSA” se refiere a albúmina de suero bovino; “DCC” se refiere a 1,3-diciclohexilcarbodiimida; “DCM” se refiere a diclorometano; “DIC” se refiere a diisopropilcarbodiimida; “DIPEA” se refiere a diisopropiletilamina o N-etil-N-isopropil-propan-2-amina; “DMAP” se refiere a dimetilaminopiridina; “DMF” se refiere a dimetilformamida; “DMSO” se refiere a dimetilsulfóxido; “EDCI” se refiere a clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida; “EDTA” se refiere a ácido etilendiamintetraacético; “ee” se refiere a exceso enantiomérico; “ELISA” se refiere a inmunoensayo ligado a enzimas, “EtOAc” se refiere a acetato de etilo; “EtOH” se refiere a etanol o alcohol etílico; “Ej” se refiere a ejemplo; “FBS” se refiere a suero bovino fetal; “HATU” se refiere a hexafluorofosfato de (dimetilamino)-N,N-dimetil(3H-[1,2,3]triazolo[4,5-b]piridin-3-iloxi)metaniminio; “HOAt” se refiere a l-hidroxi-7-azobenzotriazol; “HOBt” se refiere a hidrato de 1-hidroxilbenzotriazol; “HBTU” se refiere a hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronio; “HPLC” se refiere a cromatografía líquida de alto rendimiento; “HRP” se refiere a peroxidasa de rábano picante; “ IC50” se refiere a la concentración de un agente que produce el 50% de la respuesta inhibidora máxima posible para ese agente; “IPA” se refiere a alcohol isopropílico; “LC-ES/MS” se refiere a espectrometría de masa por electropulverización-cromatografía líquida; “MeOH" se refiere a MeOH o alcohol metílico; “MS” se refiere a espectrometría de masa; “min” se refiere a minuto o minutos; “OAc” se refiere a acetato; “PBS” se refiere a solución salina amortiguado con fosfato; “PG” se refiere a grupo protector; “Prep” se refiere a preparación; “PyBOP” se refiere a hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitripirrolidino- fosfonio; “PyBrop” se refiere a hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidinofosfonio; “TA” se refiere a temperatura ambiente; “SCX” se refiere a intercambio catiónico fuerte; “SFC” se refiere a cromatografía líquida supercritical “SPE” se refiere a extracción en fase sólida; “TEA” se refiere a trietilamina; “TFA” se refiere a ácido trifluoroacético; “TMB” se refiere a 3,3',5,5'-tetrametilbencidina; y “Tr” se refiere a tiempo de retención.
En los siguientes esquemas, todos los sustituyentes, a menos que se indique otra cosa, son como se definieron previamente. Los reactivos y materiales de partida son fácilmente asequibles para un experto en la técnica. Se pueden hacer otros por medio de técnicas estándar de química orgánica y heterociclica que son análogos a las síntesis de compuestos de estructura similar y los procedimientos descritos en las preparaciones y los ejemplos que siguen, incluyendo cualquier procedimiento novedoso.
Esquema 1
Figure imgf000015_0001
En el Esquema 1, Rx es un grupo protector amina apropiado. Los grupos protectores amina son bien conocidos y apreciados en la técnica y pueden incluir carbamatos y amidas. Un experto en la técnica está familiarizado con reactivos alternativos y procedimientos para añadir y remover dichos grupos protectores.
El compuesto (2) se puede preparar por tratamiento del compuesto (1) con un agente halogenante, tales como cloruro de monoyodo, I2 o W-yodosuccinimida. Un experto en la técnica reconocerá que hay una variedad de procedimientos de halogenación heteroaromática. En una etapa adicional, el compuesto (4) se puede preparar acoplando el compuesto (2) con alquino (3) asequible en comercios en condiciones de acoplamiento estándar, por ejemplo, utilizando un reactivo organometálico derivado de paladio tales como Pd(PPH3)2Ch, Pd (OAc )2 o Pd2(dba)3 en presencia de un catalizador, tales como Cul y una base, tales como Et3N, DIPEA, K2CO3 o Cs2CO3. De modo alternativo, la correspondiente amina libre del compuesto (3) se pueden comprar y proteger por medio de un grupo protector amina apropiado. El compuesto (4) se puede reducir por hidrogenación catalítica en presencia de un catalizador de metal de transición tales como óxido de platino. Un experto en la técnica reconocerá que hay otros procedimientos para reducir un alquino en presencia de un haluro de arilo. El grupo protector amina se puede remover luego en condiciones bien conocidas en la técnica, tales como en condiciones ácidas o básicas apropiadas para proporcionar el compuesto (5a).
Esquema 2
Figure imgf000016_0001
En el Esquema 2, Rz es un grupo de activación de enolato apropiado. Los grupos de activación de enolato son bien conocidos y apreciados en la técnica. El compuesto (7) se puede preparar a partir del compuesto (2) y acetileno sililado (6) realizando un acoplamiento similar al acoplamiento para el compuesto (3) en el esquema 1 anterior, seguido por desprotección del alquino. El experto en la técnica es familiar con procedimientos para preparar sililacetilenos alternativos.
El enolato activado, el compuesto (8), se puede preparar a partir de la cetona correspondiente usando una base apropiada, tales como LiHMDS o LDA y el agente activante apropiado como N-fenilbis(trifluorometan-sulfonimida o fluoruro de nonafluorobutansulfonilo. En otra etapa, el compuesto (9) se puede preparar acoplando el compuesto (7) y el compuesto (8). El acoplamiento tiene lugar en presencia de una cantidad catalítica de un catalizador de paladio, tales como cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) y yoduro de cobre (I). El experto en la técnica es familiar con otras condiciones de acoplamiento, tales como aquellas que incluyen el compuesto (4) en el Esquema 1 anterior. Finalmente, el compuesto (5b) se puede preparar a partir del compuesto (9) reduciendo el alquino y desprotegiendo la amina como en el procedimiento descrito para la preparación del compuesto (5a) a partir del compuesto (4) en el esquema 1 anterior.
Esquema 3
Figure imgf000017_0001
Una ruta alternativa del intermedio (5c) se presenta en el Esquema 3. Ry es un grupo de activación de alcohol, tales como metansulfonato, para-toluensulfonato o trifluorometansulfonato. El compuesto (11) se prepara a partir del compuesto (10) por adición de una base apropiada, tales como trietilamina, piridina o DIPEA, seguido por la adición de un cloruro de sulfonilo apropiado. En otra etapa, el compuesto (13) se puede preparar haciendo reaccionar el compuesto (11) con el anión del compuesto (12) que se prepara usando una base apropiada tales como etóxido de sodio, NaH o n-butil-litío. El compuesto (15) se prepara por tratamiento del compuesto (13) con el compuesto (14) en presencia de una base, tales como etóxido de sodio en etanol. En otra etapa, el compuesto (16) se puede preparar por cloración del compuesto (15) usando un agente de cloración apropiado, tales como POCI3 o SOCI2. Opcionalmente, se puede añadir una cantidad catalítica de DMF para facilitar la cloración. Finalmente, el compuesto (5c) se puede preparar a partir del compuesto (16) por desprotección como en el procedimiento descrito para la preparación del compuesto (5a) a partir del compuesto (4) en el esquema 1 anterior.
Esquema 4
Figure imgf000017_0002
El compuesto (18) se puede sintetizar haciendo reaccionar el compuesto (5a-c) con el compuesto (17), en condiciones de acoplamiento estándar. Un experto en la técnica reconocerá que hay una cantidad de procedimientos y reactivos para la formación de amida resultante de la reacción de ácidos carboxílicos y aminas. El acoplamiento del compuesto (5a-c) con el compuesto (17) se puede efectuar en presencia de un reactivo de acoplamiento apropiado y una base aminada apropiada, tales como DIPEA o trimetilamina. Los reactivos de acoplamiento apropiados pueden incluir carbodiimidas, tales como DCC, DIC, EDCI y otros reactivos de acoplamiento, tales como HOBt y HOAt. Además, se pueden usar sales de uronio o fosfonio de aniones no nucleofílicos, tales como HATU, HBTU, PYBOP® y PYBROP® en vez de los reactivos de acoplamiento más tradicionales. Los aditivos tales como DMAP se pueden usar para mejorar la reacción. De modo alternativo, el compuesto (5a-c) se puede acilar usando cloruro de acilo sustituidos en presencia de una base, tales como trietilamina o piridina.
La amina resultante de la desprotección del compuesto (18) se puede hacer reaccionar con el compuesto (19) en condiciones estándar de acoplamiento de amida, incluyen aquellas previamente descritas en la preparación (18), para dar un compuesto de fórmula (I). El experto en la técnica reconocerá que hay procedimientos alternativos para preparar un compuesto de fórmula (I) a partir del compuesto desprotegido (18), incluyendo la reacción con un cloruro de ácido en presencia de una base orgánica, tales como trietilamina o con un anhídrido en presencia de una base y un catalizador, tales como DMAP.
En una etapa opcional, se puede formar una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de fórmula (I) por reacción de una base libre apropiada de fórmula (I) con un ácido farmacéuticamente aceptable apropiado en un solvente apropiado en condiciones estándar. Además, la formación de tales sales puede ocurrir simultáneamente después de la desprotección de un grupo protector de nitrógeno. La formación de tales sales es bien conocida y apreciada en la técnica.
Preparaciones y Ejemplos
Las siguientes preparaciones y ejemplos también ilustran la invención y representan la síntesis típica del compuesto de la invención. Los reactivos y materiales de partida son fácilmente asequibles o se pueden sintetizar con facilidad por un experto en la técnica.
Las designaciones “ isómero 1” e “isómero 2” se refieren a los compuestos que se eluyen de cromatografía quiral primera y segunda, respectivamente y si la cromatografía quiral se inicia temprano en la síntesis, se aplica la misma designación a los posteriores productos intermedios y ejemplos.
La configuración R o S del compuesto de la invención se puede determinar por medio de técnicas estándar tales como análisis por rayos * y correlación con tiempo de retención de HPLC quiral. La denominación de las siguientes preparaciones y ejemplos se lleva a cabo en general usando la denominación IUPAC caracterizada en MDL ACCELRYS® Draw versión 4.0.NET.
LC-ES/MS se lleva a cabo en un sistema de cromatografía líquida AGILENT® HP1100. Las mediciones por espectrometría de masa por electropulverización (adquiridas en modo positivo) se llevan a cabo en un espectrómetro de masa cuadrupolar con detector selectivo de masa con interfaz con el sistema de HPLC HP1100 usando las columnas XTERRA® MS C18 2,1*50 mm, 3,5 pm operadas a 50 °C. La fase móvil es 10 mM de bicarbonato de amonio pH 9 (solvente A) y ACN (solvente B). Se usan dos programas de gradiente en fase móvil:
Programa de gradiente 1 es de 5% de solvente A durante 0,25 min, gradiente de 5-100% de solvente B en 3 min y 100% de solvente B durante 0,5 min. El caudal es de 1,1 ml/min y la longitud de onda UV se fija en 214 nm.
Programa de gradiente 2 es de 10-100% de solvente B en 3 min y 100% de solvente B durante 0,75 min. El caudal es de 1,0 ml/min y la longitud de onda UV se fija en 214 nm.
Preparación 1
2-Cloro-5-yodo-6-metil-pirimidin-4-amina
Figure imgf000018_0001
Se añadió una solución 1M de cloruro de monoyodo en DCM (243,77 ml, 243,77 mmol) a una solución de 2-cloro-6-metil-pirimidin-4-amina (5,0 g, 34,82 mmol) en MeOH (17 ml) a temperatura ambiente. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas. Después de completar la reacción, se removió el solvente al vacío hasta 30 ml, se dejó enfriar hasta 0 °C y se añadió una solución acuosa al 10% de tiosulfato de sodio (175 ml). Se agitó la mezcla durante 10 min y se ajustó a un pH = 10 usando hidróxido de sodio 2 N. Se extrajo la mezcla con EtOAc (3 * 100 ml). Se dejó secar la fase orgánica sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el material usando cromatografía en gel de sílice eluyendo con 0-30% de acetona en hexano. Se concentraron las fracciones purificadas para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino (6,2 g, 66%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 270/272 (M+H), Tr = 1,38 min, programa de gradiente 1.
Preparación 2
6-Cloro-5-yodo-2-metil-pirimidin-4-amina
Figure imgf000019_0001
Se dejó enfriar un recipiente con contenido de 6-doro-2-metil-pirimidin- 4-amina (35,3 g, 245 mmol) en metanol (350 ml) hasta 0-5 °C. Se añadió una solución de cloruro de monoyodo (275 g, 1,69 mol) en MeOH durante un período de 40 min usando un embudo de adición. Dejar que la mezcla se caliente lentamente hasta temperatura ambiente. Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 16 horas. Después de completar la reacción, se dejó enfriar y se añadió una solución acuosa al 20% de sulfito de sodio (2,3 l). Se ajustó a un pH = 6 a 7 usando hidróxido de sodio acuoso 5 N. Se filtró el sólido y se lavó con agua (100 ml). Se dejó secar el material al vacío para obtener el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino (56,0 g, 85%). 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) 87,94 (s, br, 1H), 6,78 (s, br, 1H), 2,27 (s, 3H).
Preparación 3
4-[2-(4-amino-2-cloro-6-metil-pirimidin-5-il)etinil]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000019_0002
Se disolvió 2-cloro-5-yodo-6-metil-pirimidin-4-amina (30 g, 111,3 mmol), éster ferc-butílico de acido 4-etinilpiperidin-1-carboxilico (34,95 g, 166,99 mmol), cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (15,63 g, 22,27 mmol) y yoduro de cobre (I) (2,12 g, 11,13 mmol) en TEA (445 ml). Se desgasificó la mezcla con nitrógeno durante 15 min. Se calentó la mezcla hasta 80 °C durante 24 horas y luego a temperatura ambiente durante 2 días. Se diluyó el material con EtOAc (1000 ml) y se filtró a través de un tapón de tierra de diatomeas, se lavó con EtOAc (500 ml). Se lavó la capa orgánica con cloruro de sodio acuoso saturado (2 * 300 ml). Se dejó secar la solución orgánica sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el material usando cromatografía en gel de sílice eluyendo con hexano/EtOAc (1:1). Se concentraron las fracciones purificadas para dar el compuesto del título en forma de un polvo naranja pálido (24,2 g, 62%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 351/353 (M+H), Tr = 2,10 min, programa de gradiente 2.
Preparación 4
4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etinil]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000019_0003
Se disolvió 6-cloro-5-yodo-2-metil-pirimidin-4-amina (20 g, 74,22 mmol), éster ferc-butílico de ácido 4-etinilpiperidin-1-carboxílico (18,64 g, 89,06 mmol) y diisopropilamina (10,44 ml, 74,22 mmol) en THF (200 ml) en un recipiente de 3 bocas. Alternativamente, se evacuó y se cargó el recipiente con nitrógeno tres veces. Se añadió cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (2,63 g, 3,71 mmol) y yoduro de cobre (I) (0,713 g, 3,71 mmol) a la solución. Se calentó la mezcla hasta 50-55 °C durante 16 horas. Se dejó enfriar la mezcla hasta temperatura ambiente y se añadió más cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (1,31 g, 1,86 mmol), yoduro de cobre (I) (0,356 g, 1,86 mmol) y éster ferc-butílico de ácido 4-etinil-piperidin-1-carboxílico (1,55 g, 7,42 mmol). Se calentó la mezcla hasta 60 °C durante 3,5 horas. Se dejó enfriar la reacción hasta temperatura ambiente y se concentró a presión reducida. Se diluyó la mezcla con DCM (300 ml) y se lavó con cloruro de amonio acuoso saturado (100 ml), agua (100 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (100 ml). Se dejó secar la solución orgánica sobre MgSO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el residuo por cromatografía (800 g de columna de gel de sílice) eluyendo con 20-100% de EtOAc en hexano. Se concentraron las fracciones purificadas para dar el compuesto del título en forma de un polvo naranja pálido (22,6 g, 86%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 351,2/353,1 (M+H).
Preparación 5
4-[2-(4-amino-2-cloro-6-metil-pirimidin-5-il)etil]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000020_0001
Se combinó 4-[2-(4-amino-2-cloro-6-metil-pirimidin-5-il)etinil]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (25,0 g, 71,26 mmol) y óxido de platino (IV) (2,0 g, 7,13 mmol) en EtOH (285 ml). Se agitó bajo 60 psi de hidrógeno durante 4 horas. Se filtró la mezcla de reacción a través de un tapón de tierra de diatomeas, se enjuagó con EtOH y se removió el solvente a presión reducida. Se disolvió la mezcla cruda con EtOH (285 ml) y se añadió otra vez óxido de platino (IV) (2,0 g, 7,13 mmol). Se agitó bajo 80 psi de hidrógeno durante 8 horas. Se monitorizó la reacción cuidadosamente para evitar un subproducto potencial resultante de la remoción del 2-cloro. Se filtró la mezcla de reacción a través de un tapón de tierra de diatomeas lavando con EtOH (250 ml) y se removió el solvente a presión reducida. Se purificó el material usando cromatografía en gel de sílice eluyendo con hexano/EtOAc (1:1). Se combinaron las fracciones purificadas y se concentraron a presión reducida para obtener el compuesto del título en forma de aceite incoloro (17 g, 67%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 355/357 (M+H), Tr = 2,00 min, programa de gradiente 2.
Preparación 6
4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000020_0002
Se combinó 4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etinil]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (4,30 g, 12,26 mmol) y óxido de platino (IV) (0,139 g, 0,61 mmol) en EtOH (81 ml) y EtOAc (40 ml). Alternativamente se evacuó y se cargó el recipiente con hidrógeno (presión de globo) y se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas. Se monitorizó la reacción cuidadosamente para evitar un subproducto potencial resultante de la remoción del cloruro en la molécula. Notar que el producto es más soluble en la mezcla de solvente que el alquino de partida. Se filtró la mezcla a través de un cartucho SPE (ISOLUTE® HM-N) enjuagando con MeOH. Se concentró la solución a presión reducida. Se añadió en el recipiente sílice 1-propanotiol (4 g, carga = 1,28 mmol/g, SILIABOND® Thiol) para remover el paladio residual de la reacción de acoplamiento previa y EtOAc (300 ml). Se agitó el material a temperatura ambiente durante 3 días. Se filtró el sólido y se concentró el filtrado a presión reducida. Se repitió la hidrogenación en el residuo resultante de la siguiente manera. Se cargó el recipiente que contiene el residuo con óxido de platino (IV) (0,139 g, 0,61 mmol), EtOH (81 ml) y EtOAc (40 ml). Alternativamente se evacuó y se cargó el recipiente con hidrógeno usando un globo de hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas. Se filtró a través de tierra de diatomeas, enjuagando con MeOH y se concentró el filtrado a presión reducida. Se repitió la hidrogenación en el residuo resultante de la siguiente manera. Se cargó el recipiente que contiene el residuo con óxido de platino (IV) (0,139 g, 0,61 mmol), EtOH (81 ml) y EtOAc (40 ml). Alternativamente se evacuó y se cargó el recipiente con hidrógeno usando un globo de hidrógeno y se agitó a temperatura ambiente durante 8 horas. Se filtró a través de tierra de diatomeas, enjuagando con MeOH y se concentró el filtrado a presión reducida en gel de sílice (20 g). Se purificó el material por cromatografía (120 g de columna de gel de sílice) eluyendo con 70-100% de EtOAc en hexano. Se combinaron las fracciones purificadas y se concentraron a presión reducida. Se diluyó el residuo con DCM y hexano y se concentró a presión reducida tres veces. Se dejó secar el material al vacío para obtener el compuesto del título en forma de un sólido blanco (3,20 g, 73%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 355,2/357,2 (M+H).
Preparación 7
2-Cloro-6-metil-5-[2-(4-piperidil)etil]pirimidin-4-amina
Figure imgf000021_0001
Se disolvió 4-[2-(4-amino-2-doro-6-metil-pirimidin-5-il)etil]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (5,0 g, 14,09 mmol) en 1,4-dioxano (141 ml) y se añadió cloruro de hidrógeno 4M en 1,4-dioxano (70,45 ml, 281,79 mmol). Se agitó la solución durante 2 horas a temperatura ambiente. Se concentró la mezcla a presión reducida. Se purificó el material por SCX (50 g * 5 columnas) usando 5 volúmenes de columna de MeOH y luego 5 volúmenes de columna de amoníaco 2N en MeOH para obtener el compuesto del título (3,22 g, 90%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 255/257 (M+H), Tr = 0,36 min, programa de gradiente 2.
Preparación 8
6-Cloro-2-metil-5-[2-(4-piperidil)etil]pirimidin-4-amina
Figure imgf000021_0002
Se disolvió 4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (3,2 g, 9,0 mmol) en DCM (60 ml). Se añadió TFA (45 ml, 596,3 mmol) gota a gota durante 15 min y se agitó la solución a temperatura ambiente durante 1 hora. Se concentró la mezcla de reacción al vacío. Se disolvió el residuo resultante en MeOH (10 ml) y se aplicó a una columna SCX (50 g). Se lavó la columna con agua (100 ml), MeOH (100 ml) y eluir el producto deseado con amoníaco 2M en MeOH (400 ml). Se concentró a presión reducida un azeótropo con 1:1 DCM/hexano (3 * 250 ml) y se dejó secar el residuo resultante a presión reducida para obtener el compuesto del título en forma de un sólido blanquecino (2,23 g, 97%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 255,2/257,2 (M+H).
Preparación 9
Clorhidrato de 6-cloro-2-metil-5-[2-(4-piperidil)etil]pirimidin-4-amina
Figure imgf000021_0003
Se disolvió 4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]piperidin-1-carboxilato de ferc-butilo (29,0 g, 81,72 mmol) en 1,4- dioxano (145 ml) y se añadió cloruro de hidrógeno 4M en 1,4-dioxano (204,2 ml, 817,1 mmol). Se agitó la solución durante 18 horas a temperatura ambiente. Se concentró la mezcla a presión reducida, suspender en éter dietílico (250 ml), se filtró y se dejó secar el sólido resultante al vacío para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco crudo (29 g) de suficiente pureza para usar sin ulterior purificación. LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 255,2/257,2 (M+H).
Preparación 10
N-[(1 S)-2-[4-[2-(4-amino-2-cloro-6-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de ferc-butilo
Figure imgf000022_0001
Se añadió TEA (5,25 ml, 37,68 mmol), 1-hidroxibenzotriazol (2,05 g, 15,07 mmol) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,89 g, 15,07 mmol) a una mezcla de 2-cloro-6-metil-5-[2-(4-piperidil)etil]pirimidin-4-amina (3,2 g, 12,56 mmol) y ácido (2S)-2-(ferc-butoxicarbonilamino)propanoico (2,85 g, 15,07 mmol) en DMF (63 ml). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió agua (50 ml) y se extrajo con EtOAc (3 * 200 ml). Se lavó la capa orgánica con cloruro de sodio acuoso saturado (3 * 100 ml), se dejó secar sobre Na2SO4 y se removió el solvente a presión reducida. Se purificó el material por cromatografía (gel de sílice) eluyendo con 20-80% de EtOAc en hexano para obtener el compuesto del título en forma de un sólido blanco (5,15 g, 96%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 426/428 (M+H), Tr = 1,89 min, programa de gradiente 1.
Preparación 11
W-[2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-2-oxo-etil]carbamato de terc-butilo
Figure imgf000022_0002
Se disolvió 6-cloro-2-metil-5-[2-(4-piperidil)etil]pirimidin-4-amina (3,0 g, 11,78 mmol), W-(terc-butoxicarbonil)gl¡c¡na (2,29 g, 12,95 mmol), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (1,8 g, 2,95 mmol), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (2,75 g, 14,13 mmol) y TEA (4,9 ml, 35,3 mmol) en t Hf (235 ml). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante 12 horas. Se diluyó la mezcla con EtOAc (60 ml), agua (10 ml) y se agitó durante 10 min. Se precargó una columna de hidromatriz (25 g) con EtOAc (40 ml) bajo presión atmosférica, se aplicó la mezcla de reacción a la columna de hidromatriz y se dejó reposar la mezcla durante 10 min. Se enjuagó la columna con EtOAc (3 * 20ml) a bajo vacío. Se combinaron y se concentraron todos los eluyentes de la columna a presión reducida. Se purificó la mezcla cruda por cromatografía (330 g de columna de gel de sílice) eluyendo con 0-10% de MeOH en EtOAc y se dejaron evaporar las fracciones deseadas. Se formaron azeótropos con el sólido resultante con 1:1 DCM/hexano (3 * 100 ml) y se dejaron secar al vacío para obtener el compuesto del título en forma de un sólido blanco (4,4 g, 91%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 412,3/414,3 (M+H).
Preparación 12
Diclorhidrato de (2S)-2-amino-1-[4-[2-(4-amino-2-cloro-6-metil- pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]propan-1-ona
Figure imgf000022_0003
Se disolvió W-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-2-cloro-6-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de ferc-butilo (5,15 g, 12,1 mmol) en 1,4-dioxano (121 ml). Se añadió cloruro de hidrógeno 4M en 1,4-dioxano (45,3 ml, 181,4 mmol) y se agitó durante 3 horas a temperatura ambiente. Se concentró la mezcla a presión reducida para obtener el compuesto del título en forma de un sólido blanco (4,63 g, 96%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 326/328 (M+H), Tr = 1,39 min, programa de gradiente 1.
Preparación 13
(2S)-2-amino-1-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]propan-1-ona
Figure imgf000023_0001
Se disolvió W-[(1S)-2-[4-[2-(4-am¡no-6-cloro-2-met¡l-p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)et¡l]-1-p¡per¡d¡l]-1-met¡l-2-oxo-et¡l]carbamato de ferc-but¡lo (15,78 g, 37,05 mmol) en DCM (185 ml). Se añad¡ó TFA (185 ml) gota a gota durante 3 m¡n y se agitó la soluc¡ón durante la noche. Se anal¡zó la reacc¡ón por LC-MS (bajo pH) para mostrar una convers¡ón completa. Se añad¡ó lentamente MeOH (400 ml) deb¡do al mezclado exotérm¡co. Se prelavaron tres columnas SCX (50 g) con agua (20 ml) y luego MeOH (20 ml). Se d¡v¡d¡ó la mezcla de reacc¡ón en tres porc¡ones ¡guales y se cargó ¡gualmente en las columnas SCX. Se lavó cada columna con agua (40 ml), MeOH (40 ml) y se eluyó el producto deseado con amoníaco 2M en MeOH (60 ml). Se concentró a pres¡ón reduc¡da un azeótropo con DCM/hexano (1:1) tres veces y se colocó al vacío para obtener el compuesto del título en forma de una espuma blanca (10,29 g, 84%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 326,2/328,2 (M+H).
Preparación 14
Clorh¡drato de (2S)-2-am¡no-1-[4-[2-(4-am¡no-6-cloro-2-met¡l- p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)et¡l]-1-p¡per¡d¡l]propan-1-ona
Figure imgf000023_0002
Se d¡solv¡ó W-[(1S)-2-[4-[2-(4-am¡no-6-cloro-2-met¡l-p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)et¡l]-1-p¡per¡d¡l]-1-met¡l-2-oxo-et¡l]carbamato de ferc-but¡lo (28,75 g, 67,49 mmol) en 1,4-d¡oxano (143,7 ml). Se añad¡ó cloruro de h¡drógeno 4M en 1,4-d¡oxano (168,7 ml, 674,9 mmol) y se agitó durante 10 m¡n. Se añad¡ó MeOH (20 ml) y se ag¡tó la mezcla durante 3 horas con ag¡tac¡ón v¡gorosa. Se concentró la mezcla a pres¡ón reduc¡da, se diluyó el sól¡do con éter d¡etíl¡co (200 ml) y se ag¡tó durante la noche. Se f¡ltró el mater¡al enjuagando con éter d¡etíl¡co (2 * 25 ml). Se dejó secar el mater¡al por succ¡ón durante 15 m¡n y luego al vacío durante 1 hora a 45 °C para obtener el compuesto del título en forma de un polvo blanco crudo (27,7 g) de suf¡c¡ente pureza para usar s¡n ulterior pur¡f¡cac¡ón. LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 326,1/328,2 (M+H).
Preparación 15
2-Am¡no-1-[4-[2-(4-am¡no-6-cloro-2-met¡l-p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)et¡l]-1-p¡per¡d¡l ]etanona
Figure imgf000023_0003
Se d¡solv¡ó A/-[2-[4-[2-(4-am¡no-6-cloro-2-met¡l-p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)et¡l]-1-p¡per¡d¡l]-2-oxo-et¡l]carbamato de ferc-but¡lo (4,4 g, 10,68 mmol) en DCM (53,4 ml) y se trató la soluc¡ón resultante gota a gota con TFA (53,4 ml, 706 mmol). Se ag¡tó la soluc¡ón durante 2 horas y se concentró al vacío. Se d¡solv¡ó el res¡duo resultante en MeOH y se apl¡có a una columna SCX (5 g, prelavada con 20 ml de agua y 20 ml de MeOH). Se lavó la columna con agua (40 ml), MeOH (20 ml) y se eluyó el producto deseado con amoníaco 2M en MeOH (60 ml). Se concentró a pres¡ón reduc¡da para obtener un ace¡te espeso. Se formaron azeótropos con 1:1 DCM/hexano (3 * 100 ml) y se dejó secar el res¡duo resultante al vacío para obtener el compuesto del título en forma de una espuma blanquec¡na cruda (3,8 g) de suf¡c¡ente pureza para usar s¡n ulter¡or pur¡f¡cac¡ón. LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 312,3/314,3 (M+H).
Preparación 16
D¡clorh¡drato de (2S)-2-am¡no-1-[4-[2-(4-am¡no-6-cloro-2-met¡l-p¡r¡m¡d¡n-5-¡l)et¡l]-1-p¡per¡d¡l]propan-1-ona
Figure imgf000024_0001
Se calentó IPA (154 ml) hasta 50 °C y se añadió cloruro de acetilo (19,3 ml, 271 mmol) lentamente debido a una reacción exotérmica. Se agitó la reacción a 50 °C durante 10 min y luego se añadió W-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etM]-1-piperidil]-1 -metil-2- oxo-etil]carbamato de ferc-butilo (21,0 g, 45,3 mmol). Se agitó la reacción durante 2 horas controlando por medio de LC-MS (bajo pH). Se dejó enfriar la reacción hasta temperatura ambiente y se añadió éter dietílico (386 ml). Se agitó la suspensión durante 15 min. Se filtró el sólido lavando con éter dietílico (2 * 50 ml) de manera enérgica ya que el material es hidroscópico. Se filtró el material, se dejó secar por filtración durante 1 min y luego en un horno de secado al vacío a 50 °C durante la noche para dar el compuesto del título en forma de un polvo blanco crudo (18,4 g) de suficiente pureza para usar sin ulterior purificación. El análisis contraiónico por cromatografía iónica es consistente con la sal de diclorhidrato. LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 326,1/328,2 (M+H).
Preparación 17
6-Cloro-2-metil-5-(2-trimetilsililetinil)pirimidin-4-amina
Figure imgf000024_0002
Se añadió 6-cloro-5-yodo-2-metil-pirimidin-4-amina (128 g, 475 mmol) y TEA (2600 ml) a un recipiente de base redonda de 3 bocas y se desgasificó durante 10 min. Se añadió yoduro de cobre (I) (4,5 g, 23,63 mmol) y cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (8,3 g, 11,82 mmol) para obtener una suspensión amarilla. Se calentó la mezcla de reacción hasta 70 °C para obtener una solución transparente y se añadió (trimetilsilil)acetileno (73 ml, 518 mmol) en 60 min. Se agitó la solución a 70 °C durante 6,5 horas. Se dejó enfriar la mezcla hasta temperatura ambiente, se filtró el sólido sobre tierra de diatomeas y se lavó con EtOAc (3 * 200 ml). Se concentró a presión reducida. Se disolvió el residuo en EtOAc (1,5 l), se lavó con 5% de hidróxido de amonio (3 * 200 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (3 * 200 ml). Se dejó secar la fase orgánica sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Suspender con pentano (300 ml) para obtener el compuesto del título en forma de un sólido amarillo (92 g, 81%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 240/242 (M+H).
Preparación 18
6-Cloro-5-etinil-2-metil-pirimidin-4-amina
Figure imgf000024_0003
Se disolvió 6-cloro-2-metil-5-(2-trimetilsililetinil)pirimidin-4-amina (92 g, 383,6 mmol) en THF (900 ml) en recipiente de base redonda de 3 bocas. Se añadió agua (300 ml) e hidróxido de sodio 0,1M (38 ml, 3,8 mmol) gota a gota en 10 min para dar una solución marrón. Se agitó la mezcla de reacción a temperatura ambiente durante 30 min. Se añadió acetato de etilo (1 l) y se lavó con cloruro de sodio acuoso saturado (1 l). Se dejó secar la fase orgánica sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título en forma de un sólido amarillo (63 g, 98%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 168/170 (M+H).
Preparación 19
4-(trifluorometilsulfoniloxi)-2,3,6,7-tetrahidroazepin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000025_0001
Se añadió hexametildisilazida de litio (solución 1M en THF, 32,33 ml, 32,33 mmol) gota a gota bajo nitrógeno a una solución de 4-oxoazepan-1-carboxilato de ferc-butilo (5 g, 23,09 mmol) en THF (15 ml) a -78 °C. Se añadió una solución de A/-fenilbis(trifluorometan-sulfonimida) (10,72 g, 30,02 mmol) en THF (15 ml) gota a gota. Se agitó la mezcla de reacción a -78 °C durante 1 hora, se calentó la reacción hasta temperatura ambiente y se agitó a esta temperatura durante 1 hora. Se dejó enfriar hasta 0 °C y se desactivó con agua. Se añadió EtOAc, se separó la fase orgánica y se lavó con cloruro de sodio acuoso saturado. Se dejó secar sobre Na2SO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó la mezcla cruda por cromatografía (120 g de columna de gel de sílice) eluyendo con 0-20% de EtOAc en hexano para obtener el compuesto del título (7,9 g, 99%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 259/261 (M+H).
Preparación 20
4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etinil]-2,3,6,7-tetrahidroazepin-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000025_0002
Se combinó 4-(trifluorometilsulfoniloxi)-2,3,6,7-tetrahidroazepin-1-carboxilato de ferc-butilo (11 g, 22,3 mmol), 6-cloro-5-etinil-2-metil-pirimidin-4-amina (4,48 g, 26,76 mmol), cloruro de bis(trifenilfosfina)paladio (II) (1,57 g, 2,23 mmol), yoduro de cobre (I) (212 mg, 1,11 mmol), TEA (6,2 ml, 44,59 mmol) y DMF (223 ml) bajo nitrógeno. Se agitó la mezcla a 90 °C durante la noche. Se filtró la mezcla de reacción a través de un tapón de tierra de diatomeas enjuagando con EtOAc. Se lavó el filtrado con cloruro de sodio acuoso saturado. Se dejó secar sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó la mezcla cruda por cromatografía (330 g de columna de gel de sílice) eluyendo con 0-40% de acetona en hexano para obtener el compuesto del título (4,75 g, 59%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 363/365 (M+H).
Preparación 21
(4R,S)-4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]azepane-1-carboxilato de ferc-butilo
Figure imgf000025_0003
Se disolvió 4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etinil]-2,3,6,7-tetrahidroazepin-1-carboxilato de ferc-butilo (3,2 g, 8,82 mmol) en EtOH (176 ml). Se añadió dióxido de platino (40 mg, 0,172 mmol) y se agitó la mezcla resultante bajo hidrógeno a presión atmosférica durante 5 horas. Se filtró la mezcla a través de un tapón de tierra de diatomeas. Se removió el solvente a presión reducida y se purificó la mezcla cruda por cromatografía (80 g de columna de gel de sílice) eluyendo con 0-40% de acetona en hexano para obtener el compuesto del título (2,8 g, 85%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 369/371 (M+H).
Preparación 22
5-[2-[(4R,S)-azepan-4-il]etil]-6-cloro-2-metil-pirimidin-4-amina
Figure imgf000025_0004
Se disolvió (4R,S)-4-[2-(4-am¡no-6-cloro-2-met¡l-p¡rim¡d¡n-5-¡l)et¡l]azepan-1-carbox¡lato de tere-butilo (2,8 g, 7,59 mmol) en 1,4- dioxano (76 ml) y se añadió cloruro de hidrógeno 4m en 1,4-dioxano (38 ml, 152 mmol). Se agitó la solución a temperatura ambiente durante 8 horas. Se concentró la mezcla a presión reducida. Se disolvió el residuo en MeOH y se aplicó a una columna SCX (3 * 25 g). Se lavó la columna con MeOH y se eluyó el producto deseado con amoníaco 2M en MeOH. Se concentró a presión reducida para dar el compuesto del título en forma de una espuma cruda (2,04 g) de suficiente pureza para usar sin ulterior purificación. LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 269/271 (M+H).
Preparación 23
(2S)-2-am¡no-1-[(4R,S)-4-[2-(4-am¡no-6-cloro-2-met¡l-p¡rim¡d¡n-5-¡l)et¡l]azepan-1-¡l]propan-1-ona
Figure imgf000026_0001
Se disolvió W-[(1S)-2-[(4R,S)-4-[2-(4-am¡no-6-cloro-2-met¡l-p¡r¡mid¡n-5-¡l)et¡l]azepan-1-¡l]-1-met¡l-2-oxoetil]carbamato de tere- butilo (2,40 g, 5,45 mmol) en 1,4-dioxano (55 ml). Se añadió cloruro de hidrógeno 4M en 1,4-dioxano (41 ml, 163,6 mmol) y se agitó a temperatura ambiente durante la noche. Se concentró la mezcla a presión reducida. Se disolvió el residuo resultante en MeOH y se aplicó a una columna SCX (50 g). Se lavó la columna con MeOH y se eluyó el producto deseado con amoníaco 2M en MeOH. Se concentró a presión reducida para obtener el compuesto del título (1,75 g, 94%) con suficiente pureza para usar sin ulterior purificación. LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 340/342 (M+H).
Ejemplo 1
/V-[(1 S)-2-[4-[2-(4-am¡no-2-cloro-6-met¡l-pirimid¡n-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]-2-met¡l-p¡razol-3-carboxamida
Figure imgf000026_0002
Se añadió diclorhidrato de (2S)-2-am¡no-1-[4-[2-(4-am¡no-2-cloro-6-met¡l-pir¡m¡d¡n-5-¡l)et¡l]-1-p¡per¡d¡l]propan-1-ona (150 mg, 0,38 mmol), ácido 1-metil-1H-pirazol-5-carboxíl¡co (52 mg, 0,41 mmol), THF (7,5 ml) y TEA (0,31 ml, 2,26 mmol). Se agitó la mezcla durante 5 min y se añadió 1-hidroxibenzotriazol (61 mg, 0,45 mmol) y clorhidrato de 1-(3-dimet¡lam¡noprop¡l)-3-et¡lcarbod¡¡mida (87 mg, 0,45 mmol). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió agua (20 ml) y se extrajo con EtOAc (3 * 50 ml). Se lavó la fase orgánica con cloruro de sodio acuoso saturado (3 * 30 ml), se dejó secar sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se disolvió la mezcla cruda en una cantidad mínima de DCM y se filtró a través de un cartucho SPE (20 g de sílice) eluyendo con 50-100% de acetona en hexano. Se purificó la mezcla cruda por SFC guiada con masa [Waters SFC-MS Prep 100; columna de 2-etilpiridina 30 * 150 mm; 5 pm de tamaño de partícula; CO2 (A) / MeOH (B) como fase móvil; modo ¡socrático (10% de B durante 1 min, gradiente del 10-20% de B en 3 min, del 20-40% de B en 0,5 min, 1 min de etapa de lavado al 40% de B y nuevamente a condiciones iniciales en 0,5 min); caudal 100 ml/min] para obtener el compuesto del título en forma de un sólido blanco (90 mg, 55%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 434/436 (M+H), Tr = 1,39 min, programa de gradiente 2.
Se prepararon los Ejemplos 2-41 esencialmente como se describe en el Ejemplo 1 usando el correspondiente intermedio de amina y el ácido carboxílico apropiadamente sustituido. Los datos de LC-ES/MS están incluidos en la siguiente Tabla 1.
Tabla 1
Figure imgf000027_0001
Figure imgf000028_0001
Figure imgf000029_0001
Figure imgf000030_0001
Figure imgf000031_0002
Ejemplo 42
N-[(1 S)-2-[4-[2-(4-amino-6-doro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]-2-metil-tiazol-5-carboxamida
Figure imgf000031_0001
Se disolvió (2S)-2-amino-1-[4-[2-(4-amino-6-doro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]propan-1-ona (600 mg, 1,84 mmol) y ácido 2-metiltiazol-5-carboxilico (290 mg, 2,03 mmol) en THF (12,3 ml). Se añadió 1 -hidroxi-7-zabenzotriazol (281 mg, 2,03 mmol), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (430 mg, 2,21 mmol) y TEA (0,77 ml, 5,52 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 12 horas. Se diluyó la mezcla con EtOAc, se filtró a través de un cartucho SPE (ISOLUTE® HM-N) lavando con EtOAc y se removió el solvente a presión reducida. Se purificó la mezcla cruda por SFC guiada con masa (Waters ZQ MS; columna de 4-nitrobencensulfonamida, eluyendo con 0,14 mM de amoníaco en MeOH/CO2) para obtener el compuesto del título en forma de un alquitrán amarillo (626 mg, 75%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 451/453 (M+H).
Se prepararon los Ejemplos 43-65 esencialmente como se describe en el Ejemplo 42 usando el correspondiente intermedio de amina y el ácido carboxílico apropiadamente sustituido. Los datos de LC-ES/MS están incluidos en la siguiente Tabla 2.
Tabla 2
Figure imgf000032_0001
Figure imgf000033_0001
Figure imgf000034_0001
Ruta alternativa para W-[(1S)-2-[4-[2-(4-Ammo-6-cloro-2-metil-pirimidm-5-il)etM]-1-piperidM]-1-metil-2-oxoetil]-2-metil-tiazol-5-carboxamida
Ejemplo 42
Se disolvió diclorhidrato de (2S)-2-amino-1-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]propan-1-ona (21,0 g, 52,66 mmol), ácido 2-metil-5-tiazolecarboxílico (11,31 g, 78,99 mmol) y DIPEA (36,7 ml, 210,65 mmol) en DCM (210 ml). Se agitó hasta disolución completa y luego se dejó enfriar en un baño de hielo (temperatura interna 5 °C). Se añadió gota a gota una solución de anhídrido 1-propanfosfónico (solución al 50% en EtOAc, 50,27 g, 78,99 mmol) durante 5 min para mantener la temperatura interna entre 5-10 °C. Se agitó en baño de hielo durante 1 hora, dejar se calentó hasta temperatura ambiente y se agitó durante la noche. Se diluyó con DCM (200 ml) y se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (300 ml). Se extrajo la capa acuosa con DCM (3 * 100 ml) y se lavaron las capas orgánicas combinadas con cloruro de amonio saturado (300 ml), agua (300 ml) y salmuera (500 ml). Se dejaron secar sobre MgSO4, se filtraron y se removió el solvente al vacío. Se purificó la mezcla cruda por cromatografía (330 g de columna de gel de sílice) eluyendo con 15-60% de THF en EtOAc para dar el compuesto del título en forma de un sólido amarillo pálido (12,8 g, 54%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 451/453 (M+H).
El Ejemplo 48, /V-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metíl-2-oxo-etilj-piridazin-3-carboxamida, se puede preparar alternativamente de modo esencial como se describe en la ruta alternativa al Ejemplo 42 anterior usando el correspondiente intermedio de amina. LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 432/434 (M+H).
Ejemplo 66
W-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]-2-metil-pirazol-3-carboxamida
Figure imgf000035_0001
Se disolvió DIPEA (15,5 ml, 87,7 mmol) en DCM (100 ml) y se añadió diclorhidrato de (2S)-2-amino-1-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil- pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]propan-1-ona (10,0 g, 25,0 mmol). Se agitó la solución durante 10 min y luego se añadió ácido 2-metilpirazol-3-carboxílico (3,32 g, 26,3 mmol) y HATU (9,73 g, 25,6 mmol). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante 1 hora con control por LC- MS (bajo pH). Se diluyó la mezcla con DCM (150 ml) y se lavó con agua (200 ml). Se extrajo la capa acuosa con DCM (2 * 100 ml). Se combinaron las capas orgánicas y se lavaron con bicarbonato de sodio acuoso saturado (100 ml), cloruro de amonio acuoso saturado (2 * 100 ml) y agua (100 ml). Se dejó secar la solución orgánica con MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se disolvió el aceite amarillo en EtOAc (400 ml) y se lavó con cloruro de amonio acuoso saturado (2 * 100 ml), agua (100 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (100 ml). Se dejó secar la solución orgánica con MgSO4 , se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó el material por cromatografía (gel de sílice) eluyendo con 0-40% de THF en EtOAc. Se combinaron las fracciones purificadas y se concentraron a presión reducida. Se diluyó el material resultante en /so-hexano (100 ml) y se agitó durante 1 hora. Se removió el solvente a presión reducida para dar el compuesto del título en forma de un polvo blanco (9,85 g, 88%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 434,2/436,2 (M+H).
Ejemplos 67 (Isómero 1) y 68 (Isómero 2)
Isómero 1 e isómero 2 de /V-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1 -metíl-2-oxo-etil]-2-hidroxi-propanamida
Figure imgf000035_0002
Se combinó (2S)-2-amino-1-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]propan-1-ona (60 mg, 0,184 mmol), ácido láctico (85% en agua, 0,02 ml, 0,202 mmol), Th F (4 ml), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (28,1 mg, 0,202 mmol), clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (43 mg, 0,221 mmol) y TEA (0,077 ml, 0,55 mmol). Se agitó la mezcla a temperatura ambiente durante 12 horas. Se diluyó la mezcla con EtOAc, se filtró a través de un cartucho SPE (ISOLUTE® HM-N) lavando con EtOAc y se removió el solvente a presión reducida. Se purificó la mezcla cruda por SFC guiada con masa (Waters ZQ MS; 200A 150 * 30 mm columna Phenomenex Luna HILIC, 5 |jm de tamaño de partícula, eluyendo con 10-20% de EtOH/CO2) para obtener el isómero 1 de W-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]-2-hidroxi-propanamida en forma de un sólido incoloro (12 mg, 16%) y el isómero 2 de W-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]-2-hidroxi-propanamida en forma de un sólido incoloro (12 mg, 16%). isómero 1: LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 451/453 (M+H). isómero 2: LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 451/453 (M+H).
Ejemplo 69
W-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]acetamida
Figure imgf000035_0003
El siguiente procedimiento se ejecutó en dos lotes separados.
Se disolvió clorhidrato de (2S)-2-amino-1-[4-[2-(4-amino-6-doro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]propan-1-ona (13,5 g, 31,6 mmol) en DCM (114 ml) y se añadió DIPEA (16,5 ml, 95,0 mmol). Se añadió anhídrido acético (12,0 ml, 126 mmol) y se agitó durante 45 min. Se diluyó la mezcla con DCM (100 ml) y se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (50 ml), agua (3 * 75 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (75 ml). Se dejó secar la porción orgánica sobre MgSO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Al residuo resultante se añadió éter dietílico (50 ml), se agitó y se filtró enjuagando con éter dietílico (2 * 15 ml). Se dejó secar el sólido resultante durante 2 horas al vacío. En este punto, se combinaron los dos lotes y se dejó secar el sólido combinado durante 2 horas al vacío para dar el compuesto del título en forma de un polvo blanco fino (17,4 g, 75%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 368,2/370,2 (M+H).
Ejemplo 70
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-2-cloro-6-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de metilo
Figure imgf000036_0001
Se añadió diclorhidrato de (2S)-2-amino-1-[4-[2-(4-amino-2-cloro-6-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]propan-1-ona (125 mg, 0,31 mmol), Dc M (10 ml) y TEA (0,1 ml, 0,7 mmol). Se agitó la mezcla durante 5 min y se añadió N,N-dimetil-4-piridinamina (4 mg, 0,03 mmol) y dicarbonato de dimetilo (420 mg, 3,13 mmol). Se agitó la reacción a temperatura ambiente durante la noche. Se añadió DCM (50 ml) y se lavó con bicarbonato de sodio acuoso saturado (20 ml). Se lavó la fase orgánica con cloruro de sodio acuoso saturado (30 ml), se dejó secar sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se disolvió la mezcla cruda en una cantidad mínima de DCM y se filtró a través de un cartucho SPE (20 g de sílice) eluyendo con 30-100% de acetona en hexano. Se purificó la mezcla cruda por SFC guiada con masa [Waters SFC-Ms Prep 100; columna de 2-etilpiridina 30 * 150 mm; 5 |jm de tamaño de partícula; CO2 (A) / MeOH (B) como fase móvil; modo ¡socrático (10% de B durante 1 min, gradiente del 10-20% de B en 3 min, del 20-40% de B en 0,5 min, 1 min de etapa de lavado al 40% de B y nuevamente a condiciones iniciales en 0,5 min); caudal 100 ml/min] para obtener el compuesto del título en forma de un sólido blanco (60 mg, 46%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 384/386 (M+H), Tr = 1,34 min, programa de gradiente 2.
Ejemplo 71
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de metilo
Figure imgf000036_0002
El compuesto del Ejemplo 71 se preparó esencialmente como se describe en el Ejemplo 70 usando el correspondiente intermedio de amina y el dicarbonato de dimetilo apropiadamente sustituido. LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 384/386 (M+H).
Ejemplo de Referencia 72
N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de tere-butilo
Figure imgf000037_0001
En cada uno de dos recipientes de base redonda se añadió clorhidrato de 6-cloro-2-metil-5-[2-(4-piperidil)etil]pirimidin-4-amina (12,50 g, 42,92 mmol), DIPEA (22,46 ml, 128,7 mmol) y DMF (100 ml). Se dejaron enfriar las dos mezclas en un baño de agua fría y se agitaron durante 5 min. Se añadió a cada una de las mezclas HATU (17,95 g, 47,21 mmol) y ácido (2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoico (8,93 g, 47,21 mmol) en una porción. Se agitaron las mezclas a temperatura ambiente durante 90 min. Se virtieron las mezclas en embudos de separación separados junto con agua (300 ml) y EtOAc (400 ml), se agitaron y se dividieron. Se extrajeron las capas acuosas con EtOAc (3 * 300 ml), se lavaron las respectivas capas orgánicas con agua (4 * 250 ml), cloruro de sodio acuoso saturado (200 ml) y se dejaron secar sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida. Se purificaron los materiales combinados por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 70-100% de EtOAc en hexano. Se combinaron y se concentraron las fracciones purificadas a presión reducida. Se diluyó el residuo con EtOAc (500 ml) y se lavó con cloruro de amonio acuoso saturado (100 ml), bicarbonato de sodio acuoso saturado (100 ml), agua (100 ml) y cloruro de sodio acuoso saturado (100 ml). Se dejaron secar las capas orgánicas sobre MgSO4, se filtraron y se concentraron a presión reducida para dar el compuesto del título en forma de un sólido blanco (28,0 g, 76%). LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 426,2/428,2 (M+H).
Ejemplo 73
W-[(1 S)-2-[(4R,S)-4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]azepan-1-il]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butilo
Figure imgf000037_0002
Se disolvió 5-[2-[(4R,S)-azepan-4-il]etil]-6-cloro-2-metil-pirimidin-4-amina (1,0 g, 3,72 mmol), ácido (2S)-2-(terc-butoxicarbonilamino)propanoico (1,06 g, 5,58 mmol) en DCM (4 ml) y THF (10 ml). Se añadió TEA (1,56 ml, 11,16 mmol), 1-hidroxi-7-azabenzotriazol (0,760 g, 5,58 mmol) y clorhidrato de 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (1,43 g, 7,44 mmol). Se agitó la mezcla resultante a temperatura ambiente bajo nitrógeno durante la noche. Se removió solvente a presión reducida, se disolvió el residuo en EtOAc y se lavó con agua. Se dejó secar la fracción orgánica sobre Na2SO4, se filtró y se concentró a presión reducida. Se purificó la mezcla cruda por cromatografía (80 g de columna de gel de sílice) eluyendo con 0-10% de DCM en metanol para obtener el compuesto del título (1,40 g, 86%). LC-ES/MS m/2 (35CI/37CI) 440/442 (M+H).
Ejemplo 74
W-[(1R)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato de terc-butilo
Figure imgf000037_0003
El compuesto del Ejemplo 74 se preparó esencialmente como se describe en el Ejemplo 73 usando el correspondiente intermedio de amina y el ácido carboxílico apropiadamente sustituido. LC-ES/MS m/z (35CI/37CI) 426/428 (M+H).
Ensayos
GOAT es la principal enzima que convierte UAG en AG. Para reseñas del papel de GOAT y grelina, véase: Kristy M. Heppner et al, The ghrelin O-acyltransferase-ghrelin system: a novel regulator of glucose metabolism, Current Opinion in Endocrinology, Diabetes & Obesity 2011, 18:50-55; Phillip A. Cole et al., Glucose and Weight Control in Mice with a Designed Ghrelin OAcyltransferase Inhibitor, Science. 17 de diciembre de 2010; 330(6011): 1689-1692. doi:10.1126/science.1196154, Matthias H. Tschop et al., Gastric O-acyl transferase activates hunger signal to the brain, Proc Natl Acad Sci USA. 2008. 29 de abril de 2008; 105(17): 6213-6214 y Jesús Gutiérrez, et al., Ghrelin octanoylation mediated by an orphan lipid transferase, Proc Natl Acad Sci USA., 29 de abril de 2008, 105 (17): 6320-6325.
El papel de GOAT está respaldado por los fenotipos observados en ratones carentes de gen GOAT. En consecuencia, se espera que la inhibición de GOAT reduzca el AG circulante y eleva el UAG circulante. En consecuencia, la relación de AG a grelina total (UAG AG) se reduce después del tratamiento con inhibidor de GOAT.
Ensayo enzimático in vitro de GOAT humano libre de células
Gen humano de GOAT (número de acceso: NM_001100916) se subclona en el vector de la expresión baculoviral pAN51. La solución de baculovirus se preparó de acuerdo con el protocolo Bac-to-Bac por el vendedor, Invitrogen, California, Estados Unidos. Se añadieron 5 millitros de solución baculoviral de GOAT humana a 500 ml de células Sf9 en medio HyQ SFX-Insect™ (número de catálogo HyClone SH30278.02) a la densidad de 1 * 106 células por mililitro en un matraz de Erlenmeyer de 2 l. El matraz con gen de GOAT humana infectado con células Sf9 se colocó en un agitador de placas a 120 rpm a 28 °C durante 48 h. Después de 48 h de incubación, las células se centrifugaron a 1000 * g durante 10 min a 4 °C. Los gránulos celulares se recolectaron y se almacenaron a -80 °C en un congelador hasta estar listas para posterior procesamiento.
Preparación de membrana microsomal de enzima de GOAT para el ensayo enzimático:
Se suspende 1 gramo de gránulos celulares en 9 ml de tampón frío de homogeneización (50 mM de Tris-HCI, 250 mM de sacarosa, se ajustan a un pH de 7,5 y se filtran con esterilidad a través de un filtro Millipore de 0,2 pm). La suspensión celular se transfiere a un homogeneizador de vidrio Dounce. Los gránulos celulares se homogeneizan con 40 golpes en el hielo. El homogenato se centrifuga a 3000 rpm en un rotor basculante Beckman a 4 °C durante 10 min para remover las células no fraccionadas. El sobrenadante se recolecta y se centrifuga a 40000 xg durante 1 h a 4 °C. El gránulo de membrana resultante se suspende en el tampón de homogeneización usando un homogeneizador de vidrio Dounce y se almacena a -20 °C en el refrigerador para el ensayo. Para un almacenamiento a largo plazo de la preparación de membrana enzimática de GOAT humana, la membrana suspendida se almacena en un congelador a -80 °C.
Protocolo de ensayo enzimático de GOAT humana:
Se prepararon los compuestos de ensayo en DMSO para lograr una solución madre de 0,2 mM. Se diluyeron de forma serial la solución madre en DMSO para diez concentraciones con concentraciones finales de compuesto que va de 10 pM a 0,5 nM en una placa de base redonda de 96 pocillos. Se preparó la solución de enzima y sustrato en tampón de ensayo (0,02% de TWEEN™-20 en 50 mM de Tris, pH 7,5 con contenido de 250 mM de sacarosa, 1 mg/ml de BSA y 10 mM de EDTA). Se añadió compuesto diluido (1 pl) a cada pocillo de la fila A a N de una correspondiente placa de 384 pocillos de baja proteína de unión. Se añadió mezcla de sustrato de GOAT humana (10 pl), que consiste en desacil-grelina-biotina humana (CPC Scientific Inc., 6,0 pM final), octanoil-CoA (Sigma, 6 0 pM final) y un anticuerpo específico de AG (documento WO 2006/091381) (1,0 pg/ml final), a los compuestos. Se añadió preparación enzimática de GOAT-His/sf9, que se preparó en tampón de ensayo (9 pl), a cada pocillo de la placa que contiene sustrato y los compuestos de ensayo resultantes en una concentración final de 0,01 pg/ml para iniciar la reacción. Incubar la mezcla durante 1 h a temperatura ambiente en un oscilador de rotación moderada. Se añadió clorhidrato de guanidina 4M (20 pl) a todos los pocillos, mezclar e incubar durante 3 h para detener la reacción.
Preparar placas de ELISA (STREPTAVIDIN SPECTRAPLATE™ 384, Perkin Elmer) por bloqueo con 2% de FBS inactivado con calor en tampón de bloqueo de PBS (40 pl) (Invitrogen) durante 3 h. Aspirar el tampón de bloqueo de la placa de ELISA y se añadió tampón de bloqueo (23 pl) a las columnas 1-24, filas A-N. Reservar las filas O y P para la curva estándar de acilgrelina. Se añadió la mezcla de reacción (2 pl) a las placas de ELISA. Preparar una curva estándar de a 10 puntos (octanoil-grelina rotulada con biotina) por dilución serial 2X en tampón de bloqueo con contenido de clorhidrato de guanidina 0,2M partiendo a 2,5 pM. Incubar la mezcla de reacción o estándar de AG rotulado con biotina en la placa de ELISA durante la noche a 4 °C. Al día siguiente, se lavó la placa 3* con tampón de lavado (0,1% de Tw Ee N™-20/PBS, 100 pl por pocillo en cada ciclo de lavado). Se añadió anticuerpo específico de AG (documento WO 2006/091381) (25 pl de 0,5 pg/ml en tampón de bloqueo) a cada pocillo e incubar a temperatura ambiente durante 1 h. Se lavó la placa 3* con el tampón de lavado, de modo similar a la etapa previa. Se añadió proteína G-HRP (25 pl) (Southern Biotech) diluida 3.000x en tampón de bloqueo e incubar 1 h a temperatura ambiente. Se lavaron los últimos 3* con tampón de lavado, como en las etapas previas. Se añadió reactivo de TMB (25 pl) (Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc.) a cada pocillo y dejar desarrollar durante 20 min y detener con ácido fosfórico 1M (25 pl por pocillo). Leer las placas a 450 nm usando una lectora de placas ENVISION® Multilabel. Los niveles de AG se calcularon versus una curva estándar ajustada y se calculó el porcentaje de inhibición. La curva de inhibición de 10 puntos se gráficó y se ajustó con la ecuación logística de cuatro parámetros para obtener valores de IC50 usando ACTIVITYBASE® (véase. 7.3.2.1).
De conformidad con un protocolo esencialmente como se describió con anterioridad, todos los compuestos de los ejemplos de la presente se sometieron a prueba y exhibieron una IC50 para el ensayo enzimático de GOAT humana libre in vitro de menos de 1 pM. Los siguientes compuestos de la invención ejemplificados se sometieron a prueba esencialmente como se describió con anterioridad y exhibieron la siguiente actividad como se ilustra en la siguiente Tabla 3.
Tabla 3
Figure imgf000039_0001
Los datos en la Tabla 3 demuestran que los compuestos de la Tabla 3 inhiben la actividad enzimática de GOAT purificada in vitro.
Comparando el cambio en la relación de AG a la grelina total en el grupo tratado con compuesto y aquel del grupo tratado con vehículo refleja el grado de inhibición enzimática de GOAT in vivo, debido al procesamiento dinámico de UAG a AG por la enzima de GOAT. En los estudios farmacodinámicos in vivo en la presente, los niveles de AG y UAG en plasma y estómago en los grupos tratados con vehículo y compuesto se miden por ELISA específicamente respecto de estos dos analitos. El nivel de grelina total de cada muestra se calcula como la suma de AG y UAG por estas mediciones de ELISA. La relación de AG a grelina total se define por el nivel de AG en cada muestra dividido por el nivel de la grelina total en la misma muestra. Los niveles de AG, UAG y la relación de AG a grelina total en el grupo tratado con vehículo se calculan y se fijan como el 100%. El cambio relativo de estos parámetros en el grupo tratado con compuesto se calcula luego para determinar la efectividad del compuesto de ensayo.
Estudio BID de 3 días dependientes de la dosis in vivo para el inhibidor de GOAT:
Animales y tratamiento:
Comprar ratones macho C57BL/6 de Harlan (Indianapolis, IN) de 9 semanas de edad. Alojar los ratones de forma individual en una instalación de temperatura controlada (24 °C) con un ciclo de 12 h de luz/oscuridad (luces en 2200 h) y dejar libre acceso a una dieta estándar para roedores (dieta 2014, Harlan) y agua. Típicamente, usar los ratones cuando tienen 10-13 semanas de edad al momento del estudio. El día 0 del experimento, aleatorizar los ratones en los grupos de tratamiento (N = 7/grupo) de modo que cada grupo tenga similares pesos corporales medios. El día 1 y el día 2, tratar los animales con vehículo (1% de hidroxietilcelulosa, 0,25% de TWEEN™ 80, 0,05% de antiespumante) o compuesto de ensayo preparado en el vehículo como suspensión en varias dosis por sonda oral a 7 am y 7 pm. El día 3, alimentar a los animales, moverlos a jaulas limpias y dosificar con vehículo o el compuesto de ensayo otra vez a las 8 am por sonda oral. Ese mismo día a 1 pm, sacrificar los animales por decapitación para recolectar la sangre. Para detalles acerca de la recolección de sangre y tratamientos de plasma, véase recolección de sangre y extracción de grelina de la sección de plasma siguiente.
Recolección de sangre:
Recolectar aproximadamente 600 pl de sangre en un tubo previamente pesado de EDTA con contenido de 600 pl (definido como Vconservante) de conservantes recién preparado (4 mM de PEFABLOC® [clorhidrato de fluoruro de 4-(2-aminoetil)bencensulfonilo], 72 mM de NaCI, 58 mM de NaF, ácido clorhídrico 0,032 N, pH 3,0) y mezclar de inmediato. Pesar el tubo otra vez y mantener en hielo. Para determinar precisamente el volumen exacto de sangre de cada muestra usando este procedimiento de recolección de sangre, el peso de la sangre para cada ratón se calcula usando la siguiente ecuación:
Peso de la sangre = (peso del tubo que contiene sangre conservante) - (peso del tubo que contiene conservante)
Volumen de sangre ( Vsangre) = (peso de sangre) / 1,06
Nótese que la densidad de sangre de roedor se asume como 1,06 g/ml.
Dentro de un lapso de 15 minutos después de la recolección de sangre, se centrifugaron las muestras a 5000 rpm a 4 °C durante 8 min. Se removió el plasma (650 |jl) en un tubo de vidrio de 5 ml con contenido de ácido clorhídrico 1 N (65 jl), mezclar y mantener en hielo.
Extracción de grelina por columna SEP-PAK®:
AG y UAG se extraen del plasma usando columna SEP-PAK® Cía para remover la interferencia antes de realizar el ELISA. La extracción de fase sólida de péptidos de AG y UAG por columnas SEP-PAK® Cía se puede llevar a cabo en un colector de vacío (Waters Corp) o usando una bomba peristáltica. El procedimiento de extracción de muestras en columna SEP-PAK® se aplica independientemente a la muestra de plasma obtenida de cada ratón por individual. El protocolo de extracción general se describe de la siguiente manera.
Todas las soluciones usadas para todo el protocolo de la extracción en columna SEP-PAK® deberán estar bajo una condición helada. Las columnas SEP-Pa K® húmedas (WAT054960, Waters Corp, Milford MA) con 99,9% de ACN/0,1% de TFA (1 ml de solución de 100 ml de ACN/0,1 ml de TFA). Se aplicó presión para ajustar el caudal a aproximadamente 1 ml/min para remover el líquido del lecho de la columna, pero no permitir que la columna se seque en ningún punto. Una vez que se remueve el líquido de la columna, se detiene la presión. Se equilibraron las columnas con 3% de ACN/0,1% de TFA (1 ml de 97 ml de agua, 3 ml de ACN, 0,1 ml de TFA). Se aplicó presión para ajustar el caudal a aproximadamente 1 ml/min para remover el líquido del lecho de la columna, pero no dejar que la columna se seque. Se diluyó aproximadamente 650 j l de plasma acidificado (definido como Vpiasma añadido a columna) a 1, 4 ml de 0,1% de TFA helado. Se cargó todo el plasma acidificado diluido de la etapa previa en las columnas. Se aplicó presión para ajustar el caudal a aproximadamente 0,5 ml/min para dejar que la muestra pase a través de la columna y que los péptidos de grelina se absorban en la resina de la columna. No dejar que la columna se seque. Se lavó con 3% de ACN/0,1% de TFA (0,9 ml de 97 ml de agua, 3 ml de ACN, 0,1 ml de TFA). Se aplicó presión para ajustar el caudal a aproximadamente 1 ml/min para remover el líquido del lecho de la columna pero dejar que la columna se seque. Se repitió el lavado dos veces más. Se eluyó con 60% de ACN/0,1% de TFA (1 ml de 40 ml de agua, 60 ml de ACN, 0,1 ml de TFA). Se colocó un tubo de recolección por debajo de cada columna, se aplicó presión para ajustar el caudal a aproximadamente 0,5 ml/min para empujar el líquido a través de la columna y se recolectó el eluyente en el tubo de recolección. Se congelaron las muestras en hielo seco de forma inmediata. Se liofilizaron las muestras en un vacío a velocidad (Modelo N.° SC110A, Savant) y se almacenaron a -20 °C hasta haber realizado el ensayo de ELISA.
Ensayo de ELISA para grelina:
Se recubren las placas MULTI-ARRAY® MSD® de 96 pocillos (Meso Scale Discovery, Gaithersberg, MD, catálogo n.° L15XA-3) con 100 j l de 1 jg/m l de un anticuerpo (documento WO 2005/026211 y W02006/019577) que reconoce el dominio medio de las formas aciladas como no adiadas de grelina en PBS (Invitrogen). Se tocan los laterales para asegurar el recubrimiento de los pocillos, se sellan con sellador adhesivo de placas e incuban durante la noche a temperatura ambiente. Se sescartan los contenidos y se añade caseína BLOCKER™ en PBS (100 j l) (Thermo Scientific, Rockford, IL, catálogo n.° 37528) a cada pocillo. Se vuelven a sellar las placas y se colocan en un agitador de placas a temperatura ambiente durante 1 h.
Se reconstituyen las muestras de plasma preservadas liofilizadas por extracción de la columna SEP-PAK® Cía en caseína BLOCKER™ en PBS (400 j l a cada muestra, este volumen se define como Vreconstucón), se mezclan bien con un mezclador de vórtex e incubar en hielo durante 45-60 min. Se descartan los contenidos de estas placas y se añaden muestras de plasma reconstituidas a 25 j l a cada pocillo. Se preparan curvas estándar de acilgrelína y grelina no acilada comenzando con 8000 jg/m l y se realizan diluciones seriales 1:4 para 8 concentraciones totales. Se añaden los estándares preparados por duplicado a las placas bloqueadas con 25 j l en cada pocillo. Se sellan las placas e incubar a temperatura ambiente en un agitador de placas durante 2 h.
Se descartan los contenidos de la placa y se lavan tres veces con PBS que incluye 0,1% de TWEEN™ 20 (150 j l) (PBS-T). Se diluye un anticuerpo específico de acilgrelina (documento WO 2006/091381) o anticuerpo específico de grelina no acilada (documento WO 2006/055347) rotulado con MSD® SULFO-TAG™ (Meso Scale Discovery) hasta 0,05 jg/m l en 0,2 * caseína Blocker con contenido de 0,05% de TWEEN™ 20, denominada solución de anticuerpo secundario. Se remueve el lavado final y se añade solución de anticuerpo secundario (25 j l a cada pocillo) que reconoce específicamente AG o UAG. Las placas se resellan y se incuban durante 1 h a temperatura ambiente en un agitador de placas antes de lavar finalmente 3* otra vez con PBS-T (150 jl/pocillo).
Se descarta el lavado final y se reemplaza con 1* tampón MSD® Read (150 jl/pocillo). Se lee la señal electroquimioluminiscente generada por activación del rótulo ligado MSD® SULFO-TAG™ a los electrodos en las placas usando el analizador MSD® SECTOR® Imager 6000 (Meso Scale Discovery). Se calculan las concentraciones de acilgrelina o grelina no acilada a base de la respectiva curva estándar generada por el software MSD®. Se determina la concentración real en plasma para cada muestra multiplicando el nivel medido de acilgrelina o grelina no acilada por un factor de dilución. El factor de dilución para cada muestra de plasma se calcula con la siguiente ecuación.
Y'sangre ^ co n serv a n te V7 r e co n stitu c ió n F a c t o r d e D i l u c i ó n X ■
Y'sangre V, p la sm a ca rg a d o en colum n a Resultados:
La administración del compuesto del Ejemplo 42 durante 3 días reduce AG en plasma en un 51%, 57% y 70% y aumenta UAG 1,61,2,04 y 2,00 veces, respectivamente a 0,3, 1 y 3 mg/kg (resultados en la siguiente Tabla 6, n = 7 para cada grupo de tratamiento). La administración a 0,3, 1 y 3 mg/kg resulta en un 61%, 73% y 81% de reducción, respectivamente, en la relación de AG a grelina total en comparación con los animales de control tratados con vehículo.
Tabla 4
Figure imgf000041_0001
Los resultados en la Tabla 4 demuestran que el compuesto del Ejemplo 42 suprime la producción de AG y eleva UAG en circulación, como se muestra en los ratones de inactivación GOAT, in vivo.
La administración del compuesto del Ejemplo 66 durante 3 días reduce AG en plasma en un 34%, 52%, 72%, 79% y 81% y aumenta UAG 2,13, 2,61,2,92, 3,02 y 2,79 veces, respectivamente, a 0,2, 0,6, 2, 6 y 18 mg/kg (resultados en la Tabla 7 de abajo). La administración a 0,2, 0,6, 2, 6 y 18 mg/kg resulta en un 50%, 65%, 79%, 84% y 86% de reducción, respectivamente, en la relación de AG a grelina total en comparación con los animales de control tratados con vehículo.
Tabla 5
Figure imgf000041_0003
Los resultados de la Tabla 5 demuestran que el compuesto del Ejemplo 66 suprime la producción de AG y eleva UAG en circulación, como se muestra en el ratón de inactivación Go At in vivo.
La administración del compuesto del Ejemplo 71 durante 3 días reduce AG en plasma en un 13%, 37% y 66% y aumenta UAG 2,87, 3,44 y 2,90 veces, respectivamente, a 0,3, 1 y 3 mg/kg (resultados en la Tabla 9 siguiente). La administración a 0,3, 1 y 3 mg/kg resulta en un 59%, 73% y 82% de reducción, respectivamente, en la relación de AG a grelina total en comparación con los animales de control tratados con vehículo.
Tabla 6
Figure imgf000041_0002
Los resultados de la Tabla 6 demuestran que el compuesto del Ejemplo 71 suprime la producción de AG y eleva UAG en circulación, como se muestra en el ratón de inactivación GOAT in vivo.

Claims (21)

REIVINDICACIONES
1. Un compuesto de fórmula
Figure imgf000042_0001
en la que
n es 1 o 2;
R1 y R2 se seleccionan de -CH 3 y -Cl, en la que R1 y R2 no pueden ser ambos -CH 3 o -Cl;
R3 y R4 se seleccionan de -H y -CH 3 , en la que R3 y R4 no pueden ser ambos -CH 3 ;
R5 se selecciona de -alquilo C 1 -C 3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF 3 ; -Oalquilo C 1 -C 4 ; cicloalquilo C 3 -C 6 ; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH 3 o - CH 2 CH 3 ; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH 3 ;
con la condición de que, cuando n es 1, R1 es -CH 3 , R2 es -Cl, y R3 o R4 es -CH 3 , entonces R5 no puede ser ciclopropilo o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, y además con la condición de que el compuesto no sea ferc-butil N-[(1S)-2-[4-[2-(4-amino-6-cloro-2-metil-pirimidin-5-il)etil]-1-piperidil]-1-metil-2-oxo-etil]carbamato.
2. El compuesto según la reivindicación 1, en el que R5 se selecciona de alquilo -C 1 -C 3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF 3 ; -OCH 3 u -OC(CH 3 ) 3 ;
ciclopropilo; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH 3 o -CH 2 CH 3 ; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH 3 ; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
3. El compuesto según la reivindicación 1 o 2 de fórmula
Figure imgf000042_0002
en la que
R5 es -alquilo C 1 -C 3 opcionalmente sustituido con -OH o -CF 3 ; -OCH 3 u -OC(CH 3 ) 3 ; pirazolilo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH 3 o -CH 2 CH 3 ; piridinilo, piridazinilo, pirimidinilo o pirazinilo; y fenilo opcionalmente sustituido con -OCH 3 ;
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
4. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3 de fórmula
Figure imgf000042_0003
en la que
R5 es -alquilo C1-C3 opcionalmente sustituido con -CF3 ; -OCH3 u -OC(CH3)3; pirazolMo, oxazolilo, tiazolilo o tiadiazolilo, en la que pirazolilo, oxazolilo o tiazolilo pueden estar cada uno opcionalmente sustituidos una a dos veces con -CH3 o -CH2CH3; piridinilo, piridazinilo o pirazinilo; o fenilo opcionalmente sustituido con -OCH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
5. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 en el que el compuesto es
Figure imgf000043_0001
en la que R5 es -CH3 ; -OCH3; o pirazolilo o tiazolilo, en la que pirazolilo o tiazolilo pueden estar opcionalmente sustituidos con -CH3; o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
6. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en el que cuando R3 o R4 es -CH3 , la configuración del átomo de carbono con dicho -CH3 es (S); o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
7. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que el compuesto es
Figure imgf000043_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
8. El compuesto según la reivindicación 7 en el que el compuesto es
Figure imgf000043_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
9. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que el compuesto es
Figure imgf000043_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
10. El compuesto según la reivindicación 9 en el que el compuesto es
Figure imgf000044_0001
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
11. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que el compuesto es
Figure imgf000044_0002
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
12. El compuesto según la reivindicación 11 en el que el compuesto es
Figure imgf000044_0003
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
13. El compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 en el que el compuesto es
Figure imgf000044_0004
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
14. El compuesto según la reivindicación 13 en el que el compuesto es
Figure imgf000044_0005
o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.
15. Una composición farmacéutica que comprende un compuesto según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, con uno o más vehículos, diluyentes o excipientes farmacéuticamente aceptables.
16. La composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 15 en combinación con uno o más de otros agentes terapéuticos.
17. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en terapia.
18. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la reducción del aumento de peso.
19. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en la reducción de la recuperación de peso.
20. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de la obesidad.
21. Un compuesto de acuerdo con cualquiera de las reivindicaciones 1 a 14, o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su uso en el tratamiento de la diabetes tipo 2.
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