CN107439536A - 一种耐储存的细胞冻存液 - Google Patents

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熊华强
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    • A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
    • A01N1/0205—Chemical aspects
    • A01N1/021—Preservation or perfusion media, liquids, solids or gases used in the preservation of cells, tissue, organs or bodily fluids
    • A01N1/0221—Freeze-process protecting agents, i.e. substances protecting cells from effects of the physical process, e.g. cryoprotectants, osmolarity regulators like oncotic agents

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Abstract

一种耐储存的细胞冻存液，所述细胞冻存液含有丙二醇、右旋糖酐、氯化钾、氯化镁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、维生素C、胆固醇、碳酸氢钠、白蛋白、葡萄糖、肌酐、氯霉素、链霉素、甘油、羧甲基纤维素钠、灭菌注射用水。本发明的细胞冻存液各成分相互协调，共同作用，使得本发明冻存液易于保存并具有较长的货架期,货架期长达3个月以上，操作简单，无需临用新配，省时省力，本发明能直接进行低温保存，无需复杂的程序冻存，大大缩短的细胞冻存时间，提高了冻存效率，本品保存效果稳定可靠，便于运输，方便使用，配制所需原材料简单易得，值得市场推广应用。

Description

一种耐储存的细胞冻存液
技术领域
本发明属生物技术领域，具体涉及一种耐储存的细胞冻存液。
背景技术
细胞冻存即将细胞置于低温环境下保存，以使细胞暂时脱离生长状态，保存其细胞特性。这样保存的成本较低，可以在需要时将细胞复苏培养，与些同时，也避免了培养保存中因细胞污染而导致的细胞品种损失。保持细胞活性的长期冻存最常用的方法是液氮冻存，能够保持80％以上的细胞活率。但在细胞制品的运输和临床应用中，液氮不易于通过交通工具运输，细胞液氮冻存在转移运输时受到很大限制。在临床应用时，应用地点需要配备液氮储存装置和液氮供应，受当地地域和条件限制。
另外，目前市场上常用的细胞冻存液，主要由DMSO、血清以及细胞培养液组成，细胞培养液一般作为溶剂。这种冻存液一般为即用型冻存液，需要现配现用，批次差异大，保持期短，保存效果不稳定。
发明内容
本发明的目的在于提供一种耐储存的细胞冻存液。
本发明的目的是通过如下技术措施实现的：
一种耐储存的细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液含有丙二醇、右旋糖酐、氯化钾、氯化镁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、维生素C、胆固醇、碳酸氢钠、白蛋白、葡萄糖、肌酐、氯霉素、链霉素、甘油、羧甲基纤维素钠、灭菌注射用水。
进一步，一种耐储存的细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液含有3～8v/v％丙二醇、1.1～1.6w/v％右旋糖酐、0.2～0.6w/v％氯化钾、0.3～0.8w/v％氯化镁、2～5w/v％磷酸氢二钠、2～5w/v％磷酸二氢钾、7～9w/v％氯化钠、8～12w/v％维生素C、1.6～2.2w/v％胆固醇、3.5～5.1w/v％碳酸氢钠、3～6w/v％白蛋白、11～15w/v％葡萄糖、2～6w/v％肌酐、3～8v/v％链霉素、1.6～2.1v/v％甘油、3.7～6.3w/v％羧甲基纤维素钠、余量为灭菌注射用水。
进一步，一种耐储存细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液还需加入pH调节剂调节冻液的pH为6.5～7.0，所述链霉素的规格为10mg/ml。
进一步，一种耐储存细胞冻存液，其特征在于，所述pH调节剂为0.1mol/L的磷酸溶液。
进一步，一种耐储存的细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液含有6v/v％丙二醇、1.3w/v％右旋糖酐、0.5w/v％氯化钾、0.6w/v％氯化镁、3w/v％磷酸氢二钠、4w/v％磷酸二氢钾、8w/v％氯化钠、10w/v％维生素C、1.9w/v％胆固醇、4.2w/v％碳酸氢钠、5w/v％白蛋白、13w/v％葡萄糖、5w/v％肌酐、6v/v％链霉素、1.9v/v％甘油、5.1w/v％羧甲基纤维素钠、余量为灭菌注射用水。
本发明具有如下的有益效果：
本发明的细胞冻存液各成分相互协调，共同作用，使得本发明冻存液易于保存并具有较长的货架期,货架期长达3个月以上，操作简单，无需临用新配，省时省力，本发明能直接进行低温保存，无需复杂的程序冻存，大大缩短的细胞冻存时间，提高了冻存效率，本品保存效果稳定可靠，便于运输，方便使用，配制所需原材料简单易得，值得市场推广应用。
具体实施方式
下面通过实施例对本发明进行具体的描述，有必要在此指出的是以下实施例只用于对本发明进行进一步说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
实施例1
一种耐储存的细胞冻存液包括以下配比的各组分：
名称 用量
丙二醇 30ml
右旋糖酐 11g
氯化钾 2g
氯化镁 3g
磷酸氢二钠 20g
磷酸二氢钾 20g
氯化钠 90g
维生素C 80g
胆固醇 16g
碳酸氢钠 35g
白蛋白 30g
葡萄糖 110g
肌酐 20g
链霉素(10mg/ml) 30ml
甘油 16ml
羧甲基纤维素钠 37g
灭菌注射用水 补液并定容至1000ml
制备方法：称取或量取配方量的物质，置于适宜容器中，搅拌10～15分钟使溶解，转速50～60转/分，溶解后，加0.1mol/L磷酸溶液调节溶液pH为6.5，用0.45微米的微孔滤膜抽滤，收集滤液，保存即得。
实验一：货架期时间确定：
实验方法：取实施例1制得的细胞冻存液，分成两份，其中一份在配制完成后立即使用，另一份置于(2～8℃)条件下放置3个月后，再取出使用，比较新配冻存液与放置3个月后的冻存效果。
实验结果：在相同冻存条件下新配冻存液与放置3月后冻存液具有相同冻存效果。
实验结论：本发明冻存液货架期至少3个月。
实施例2
一种耐储存的细胞冻存液包括以下配比的各组分：
名称 用量
丙二醇 60ml
右旋糖酐 13g
氯化钾 5g
氯化镁 6g
磷酸氢二钠 30g
磷酸二氢钾 40g
氯化钠 80g
维生素C 100g
胆固醇 19g
碳酸氢钠 42g
白蛋白 50g
葡萄糖 130g
肌酐 50g
链霉素(10mg/ml) 60ml
甘油 19ml
羧甲基纤维素钠 51g
灭菌注射用水 补液并定容至1000ml
制备方法：称取或量取配方量的物质，置于适宜容器中，搅拌10～15分钟使溶解，转速50～60转/分，溶解后，加0.1mol/L磷酸溶液调节溶液pH为6.8，用0.45微米的微孔滤膜抽滤，收集滤液，保存即得。
按实施例1的实验方法，进行货架期确定，实验结果表明，本发明细胞冻存液货架期最少3个月。
实施例3
一种耐储存的细胞冻存液包括以下配比的各组分：
名称 用量
丙二醇 80ml
右旋糖酐 16g
氯化钾 6g
氯化镁 8g
磷酸氢二钠 50g
磷酸二氢钾 50g
氯化钠 70g
维生素C 120g
胆固醇 22g
碳酸氢钠 51g
白蛋白 60g
葡萄糖 150g
肌酐 60g
链霉素(10mg/ml) 80ml
甘油 21ml
羧甲基纤维素钠 63g
灭菌注射用水 补液并定容至1000ml
制备方法：称取或量取配方量的物质，置于适宜容器中，搅拌10～15分钟使溶解，转速50～60转/分，溶解后，加0.1mol/L磷酸溶液调节溶液pH为6.8，用0.45微米的微孔滤膜抽滤，收集滤液，保存即得。
按实施例1的实验方法，进行货架期确定，实验结果表明，本发明细胞冻存液货架期最少3个月。

Claims (5)

1.一种耐储存的细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液含有丙二醇、右旋糖酐、氯化钾、氯化镁、磷酸氢二钠、磷酸二氢钾、氯化钠、维生素C、胆固醇、碳酸氢钠、白蛋白、葡萄糖、肌酐、氯霉素、链霉素、甘油、羧甲基纤维素钠、灭菌注射用水。
2.如权利要求1所述的一种耐储存的细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液含有3~8v/v%丙二醇、1.1~1.6w/v%右旋糖酐、0.2~0.6 w/v%氯化钾、0.3~0.8w/v%氯化镁、2~5w/v%磷酸氢二钠、2~5w/v%磷酸二氢钾、7~9w/v%氯化钠、8~12w/v%维生素C、1.6~2.2w/v%胆固醇、3.5~5.1w/v%碳酸氢钠、3~6w/v%白蛋白、11~15w/v%葡萄糖、2~6w/v%肌酐、3~8v/v%链霉素、1.6~2.1v/v%甘油、3.7~6.3w/v%羧甲基纤维素钠、余量为灭菌注射用水。
3.如权利要求1或2所述的一种耐储存细胞冻存液，其特征在于，所述冻存液还需加入pH调节剂调节冻液的pH为6.5~7.0，所述链霉素的规格为10mg/ml。
4.如权利要求3所述的一种耐储存细胞冻存液，其特征在于，所述pH调节剂为0.1mol/L的磷酸溶液。
5.如权利要求4所述的一种耐储存的细胞冻存液，其特征在于，所述细胞冻存液含有6v/v%丙二醇、1.3w/v%右旋糖酐、0.5 w/v%氯化钾、0.6w/v%氯化镁、3w/v%磷酸氢二钠、4w/v%磷酸二氢钾、8w/v%氯化钠、10w/v%维生素C、1.9w/v%胆固醇、4.2w/v%碳酸氢钠、5w/v%白蛋白、13w/v%葡萄糖、5w/v%肌酐、6v/v%链霉素、1.9v/v%甘油、5.1w/v%羧甲基纤维素钠、余量为灭菌注射用水。
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