CN107430066B - 仪器验证的方法和系统 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于验证仪器的方法。所述方法包括接收来自一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线(102、202)。所述验证板包括一个第一数量样本和一个第二数量样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域。该方法还包括基于所述多条扩增曲线(104、204)的指数区域确定一组荧光阈值；对于该组的每个荧光阈值，确定由所述第一数量样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量样本生成的扩增曲线的第二组Ct值(106、206)。该方法包括基于所述多个荧光阈值(108、208‑218)的每一个荧光阈值的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。

Description

仪器验证的方法和系统
技术领域
本发明涉及一种仪器验证的方法和系统。
背景技术
实验室仪器的安装和校准可能是一个耗时又昂贵的过程。许多情况下，仪器供应商的工程师必须现场执行这些过程。这一成本通常要转移到用户身上。在某些情况下，经验丰富的用户可以使用多步骤程序成功校准正确制造的仪器。在这种校准过程中，物理标准和孔板可与手动处理程序结合使用。手动校准处理和数据检查容易产生误差，并且可能有赖于临时或主观性措施。尽管最后的系统验证步骤允许灵活接受次优的校准结果，但是在这种活动期间，自动化流程将提供改善的客观性和一致性。
安装和多次使用后，务必要验证该仪器工作正常。通常，用户将手动运行一项已知测定以验证一台仪器，诸如RNase P测定。
在一个传统的RNase P测定实例中，根据由一组重复标准品(1250、2500、5000、10000和20000个拷贝)获得的所述Ct(循环阈值)值生成一条标准曲线。然后该标准曲线被用以测定两组已知模板的拷贝数(5000个和10000个重复群体)。如果能够证明该仪器有能力对在一个单孔中运行的一个后续样本以99.7％的置信水平区分5000个和10000个基因组当量，那么该仪器会被验证。
发明内容
一个示例性实施例中，提供了一种用于验证仪器的方法。所述方法包括接收一块验证板的扩增数据，以生成多条扩增曲线。所述验证板包括一个第一数量样本和一个第二数量样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域。该方法还包括基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值；对于该组的每个荧光阈值，确定由所述第一数量样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量样本生成的扩增曲线的第二组Ct值。该方法包括基于所述多个荧光阈值的每一个的Ct值计算第一和第二数量是否充分可区分。
另一个示例性实施例中，提供了一个计算机可读存储介质，该存储介质以处理器可执行的指令编码以便验证仪器。所述指令包含用于接收一块验证板之扩增数据的指令，以生成多条扩增曲线。所述验证板包括一个第一数量样本和一个第二数量样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域。该指令还包含以下指令：基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值；对于该组的每一个荧光阈值，确定由所述第一数量样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量样本生成的扩增曲线的第二组Ct值。该指令包含以下指令：基于所述多个荧光阈值的每一个的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
另一个示例性实施例中，提供了一个用于验证仪器的系统。所述系统包括一个处理器和一个存储器，该存储器经配置，用于存储处理器可执行的指令。该指令包括用于接收一块验证板之扩增数据的指令，以生成多条扩增曲线。所述验证板包括一个第一数量样本和一个第二数量样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域。该指令还包括以下指令：基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值，并对于该组的每一荧光阈值确定由所述第一数量样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量样本生成的扩增曲线的第二组Ct值。该指令包括以下指令：基于所述多个荧光阈值的每一个的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
另一个示例性实施例中，提供了一个用于验证仪器的系统。所述系统包括一个PCR仪器接口，该仪器接口被配置为接收一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线。所述验证板包括一个第一数量样本和一个第二数量样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域。所述系统还包括一个(循环阈值)Ct计算器，该计算器被配置为：基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值，并为该组每一荧光阈值确定由所述第一数量样本生成的扩增曲线的第一组Ct值和由所述第二数量样本生成的扩增曲线的第二组Ct值。所述系统包括一个Ct数据库，该数据库被配置为存储该组每一个荧光阈值的所述第一和第二组Ct值。所述系统还包括一个验证器，该验证器被配置为基于所述多个荧光阈值的每一个的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
附图说明
图1示出根据本文所述的各种实施例用于验证仪器的一种示例性方法；
图2示出根据本文所述的各种实施例用于验证仪器的另一种示例性方法；
图3示出根据本文所述的各种实施例由扩增数据确定多个荧光阈值；
图4示出根据本文所述的各种实施例用于验证仪器的一种系统；
图5示出一种用于实施本文所述的各种实施例的示例性计算系统；
图6示出根据本文所述的各种实施例的一种示例性分布式网络系统；
图7为示出一台PCR仪器700的框图，在该仪器上可实现本教导内容的实施例；以及
图8示出可用于根据本文所述实施例成像的一个示例性光学系统300。
具体实施方式
为了更全面地理解本发明，以下描述阐明了大量具体细节，如具体配置、参数、实例等。然而，应当认识到，此类描述并非旨在限制本发明的范围，而是旨在更好地描述示例性实施例。
如上所述，务必要验证某一仪器以确保其工作正常，在新安装或多次使用后尤其如此。通过这种方式，一个用户可能确保实验结果和分析准确可靠。以前，由一个用户对该仪器进行一项验证测定，并且该用户基于验证分析的扩增数据手动进行数据分析以验证所述仪器。由于所述数据分析由用户手动进行，因此该验证过程更容易出错且花费的时间更多。
根据本教导内容的各种实施例，描述了自动验证方法和系统。一项验证测定的一个实例是一项RNase P测定。然而，如本文所用，验证测定可能为具有已知且可靠性质并且可用以验证一台仪器的任何测定。
安装和多次使用后，务必要验证该仪器工作正常。通常，一个用户将手动运行一项已知测定以验证一台仪器，诸如一项RNase P测定。所述RNase P基因是对RNase P酶的RNA部分进行编码的一个单拷贝基因。尤其由于其已知性质和特性，因而通常用作一项验证测定。
在一块验证板预先装载检测和定量分析所述样本的基因组拷贝所需的试剂。例如，在一块RNase P验证板中，每孔含有PCR预混液、RNase P引物、FAMTM染料标记探针和一个已知浓度的人类基因组DNA模板。
在一个传统的RNase P测定实例中，根据由一组重复标准品(1250、2500、5000、10000和20000个拷贝)获得的所述Ct(循环阈值)值生成一条标准曲线。然后该标准曲线被用以测定两组已知模板的拷贝数(5000个和10000个重复群体)。如果能够证明该仪器有能力对在一个单孔中运行的一个后续样本以99.7％的置信水平区分5000个和10000个基因组当量，那么该仪器会被验证。
要通过安装，仪器必须证实有能力对在一单孔中运行的一种后续样本以99.7％置信水平区分5,000与10,000基因组当量。
根据各实施例，本教导内容可以将专业知识结合到一个自动校准和验证系统中，在识别出故障时提供通过/失败状态和故障排除反馈。如果一台仪器未能通过所述验证过程，则该用户可以例如致电维修工程师。本教导内容可最大程度减少安装和校准程序所需的的成本和时间。
如上所述，根据本文所述的各种实施例，一项验证分析的目标是确认该仪器是否充分区分相同样本的两个数量。通过这种方式，可以验证仪器性能。
根据本教导内容的各种实施例，提供了一个自动验证方法和系统。由一个系统分析和比较一项验证测定的循环阈值(Cts)以确定一台仪器是否可充分区分一种样本的两个数量。一项验证测定的一个实例是所述RNase P测定。在此实例中，一个系统确定针对5000个和10000个基因组拷贝的RNase P样本所生成的Ct值，以确定5000和10000个基因组拷贝的数据是否充分可区分。根据本文所述实施例，充分可区分意指5000与10000个基因组拷贝扩增数据之间至少相差三个标准偏差(3σ)(-99.7％)。根据各种实施例的方法如下文所述，参见图1和2。
图1示出根据本文所述的各种实施例用于验证仪器的一种示例性方法。一般而言，在步骤102开始时，通过接收来自一块验证测定板的扩增数据来生成多条扩增曲线，每条扩增曲线对应于所述板上的一个孔。
板包含多个孔。在一些实施例中，一块板包含96个孔。在其他实施例中，一块板包含384个孔。所述板中的一部分孔中可包含一个第一数量的样本，并且板中的另一部分孔可包含一个第二数量的样本。所述第一数量和第二数量不同。在本文所述的各种实施例中，所述第二数量大于第一数量。在一些实施例中，所述第二数量可能为第一数量的1.5倍。在其他实施例中，所述第二数量可能为第一数量的2倍。根据本文所述的各种实施例，所述第二数量可能为第一数量的任意倍。在一些实施例中，所述第一数量可能为每个孔5000个基因组拷贝，并且第二数量可能为每个孔10000个基因组拷贝。
参见图1，在步骤104中，基于所述多条生成的扩增曲线测定多个荧光阈值。比较所述多条扩增曲线的指数区域以确定该指数区域下降的荧光值的范围。例如，确定从所述多条扩增曲线的指数区域底部的最低荧光值到该指数区域顶部的最高荧光值的荧光值范围。根据本教导内容的实施例，所述荧光值范围用于所述多条扩增曲线的自动分析中以验证该仪器。
参见图3，示出多条扩增曲线以及荧光值和对应循环阈值之范围的测定。所述多条扩增曲线中的每条均包括该曲线的一个指数区域。轴302指示荧光值。轴304示出循环次数。荧光范围306示出从所述多个指数区域中的一个指数区域的一个已测定底部的最低荧光值到所述多个指数区域中的一个指数区域的一个已测定顶部的最高荧光值之荧光值范围。根据各种实施例，荧光值的范围均由一个预定数值均分，以便由所述系统生成一组用于自动分析的荧光值。在一个实例中，荧光值的范围306由100均分，以确定一组荧光阈值的100个荧光值。在一些实施例中，剔除最高的5个荧光值和最低的5个荧光值，使得以一组90个荧光阈值进行分析。
参见图1，在步骤106中，对于所述荧光值组中的每个荧光值，测定根据包含所述样本之第一数量的孔所生成的所述多条扩增曲线中的每条扩增曲线的循环阈值(Ct)。相似地，对于所述荧光值组中的每个荧光值，测定根据包含所述样本之第二数量的孔所生成的所述多条扩增曲线之每条扩增曲线的循环阈值(Ct)。
在步骤108中，使用所述组中每个荧光值的第一和第二数量的Ct值，确定所述第一和第二数量是否充分可区分。根据各种实施例，充分可区分意指使用公式(1)使所述组中的至少一个荧光值得到正的结果：
((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2)) (1)
公式1确定一个第一和第二数量是否充分可区分，根据本文所述的实施例，其中quant2大于quant1。充分可区分意指所述第一和第二数量的Ct值相差至少3倍标准偏差(3σ)(-99.7％)。如果发现所述数量充分可区分，则向该用户提供一则仪器验证通过的指示。
图2示出根据本文所述的各种实施例用于验证仪器的另一种示例性方法。在步骤202中，接收来自一块验证板的孔中所包含的多个样本的扩增数据。所述验证板中的一部分孔包含一种具有一个第一数量的样本。所述验证板中的另一部分孔包含一种具有一个第二数量的样本。所述第一数量和第二数量不同。在本文所述的各种实施例中，所述第二数量大于第一数量。在一些实施例中，所述第二数量可能为第一数量的1.5倍。在其他实施例中，所述第二数量可能为第一数量的2倍。根据本文所述的各种实施例，所述第二数量可能为第一数量的任意倍。在一些实施例中，所述第一数量可能为每个孔5000个基因组拷贝，并且第二数量可能为每个孔10000个基因组拷贝。
在步骤204中，基于所述多条生成的扩增曲线测定第一组荧光阈值。比较所述多条扩增曲线的指数区域以确定该指数区域下降的荧光值的范围。例如，确定从所述多条扩增曲线的指数区域底部的最低荧光值到该指数区域顶部的最高荧光值的荧光值范围。根据本教导内容的实施例，所述荧光值范围用于所述多条扩增曲线的自动分析中以验证该仪器。
根据各种实施例，荧光值的范围均由一个预定数值均分，以便由所述系统生成一组用于自动分析的荧光值。在一个实例中，荧光值的范围306由100均分，以确定一组荧光阈值的100个荧光值。在一些实施例中，剔除最高的5个荧光值和最低的5个荧光值，使得以一组90个荧光阈值进行分析。
在步骤206中，对于所述组中的每个荧光阈值，测定对应于所述第一数量的扩增曲线的第一组Ct值。相似地，对于所述组中的每个荧光阈值，测定对应于所述第二数量的扩增曲线的第二组Ct值。所述组中的每个荧光阈值均重复这种关系。
在一些实施例中，执行进一步计算之前，从每组Ct值中去除预定数量的异常Ct值。例如，在一些实施例中，如果使用一块96孔板，则从每组Ct值中去除6个异常值。一个异常值为距离该组Ct值之平均值最远的Ct值。又如，如果使用一块364孔板，则从每组Ct值中去除10个异常值。去除所述异常值后，在该方法剩余的步骤中使用每组中剩余的Ct值。
在步骤208中，计算每组Ct值的一个平均值。换言之，对于在步骤204中所测定的组的每个荧光阈值，计算所述第一数量扩增曲线的一个第一Ct平均值，并且计算所述第二数量扩增曲线的一个第二Ct平均值。
类似于步骤208，在在步骤210中，计算每组Ct值的3倍标准偏差。换言之，对于在步骤204中所测定的组的每个荧光阈值，计算所述第一数量扩增曲线的一个第一3倍标准偏差，并且计算所述第二数量扩增曲线的一个第二3倍标准偏差。
为确定所述第一数量和第二数量的Ct值是否为一个荧光值处充分可区分的Ct值，根据各种实施例，对该值进行比较。根据各种实施例，采用公式(1)进行比较。
((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2)) (1)
公式1确定一个第一和第二数量是否充分可区分，根据本文所述的实施例，其中quant2大于quant1。充分可区分意指所述第一和第二数量的Ct值相差至少3倍标准偏差(3σ)(-99.7％)。
在步骤214中，对采用公式(1)得到组中所有荧光阈值的结果进行比较以确定最大值。如果该最大值为正数，则仪器可充分区分第一数量和第二数量，并且在步骤216中向用户提供仪器验证通过的指示。如果该最大值为负数，则仪器无法充分区分第一数量和第二数量，并且在步骤218中向用户提供仪器验证失败的指示。
图4示出根据本文所述的各种实施例用于验证仪器的系统400。系统400包括PCR仪器接口402、Ct数据库404、显示引擎/GUI 406、Ct计算器408和验证器410。
PCR仪器接口402接收来自PCR仪器的扩增数据以生成扩增曲线。如上所述，该PCR仪器对所述验证板中包含的样本进行扩增。该验证板包括包含第一数量的样本的孔的一部分以及包含第二数量的样本的孔的另一部分。PCR仪器接口402接收由样本扩增生成的荧光数据。
在步骤104和204中测定一组荧光阈值后(分别参见图1和2)，Ct计算器406计算对应于分别由所述第一数量和第二数量样本所生成的扩增曲线的第一组和第二组Ct值。计算该组荧光阈值中的每个荧光阈值的第一组和第二组Ct值。所述多组Ct值存储于Ct数据库404中。
验证器410确定所述第一和第二数量是否充分可区分，如图1的步骤108以及图2的步骤210和212所述。
显示引擎/GUI将所述多条扩增曲线显示给用户。另外，在验证器410确定第一数量和第二数量是否充分可区分后，显示引擎/GUI 406向用户显示验证通过或验证失败的指示。
而且，可确定一个最优荧光阈值。根据各个实施例，可能通过选定造成(μCtquant1-3σCtquant1)与(μCtquant2-3σCtquant2)之间最大间距的Ct值，而确定最优荧光阈值。而且，也可基于造成最少数量已确定异常值的Ct值，选定所述最优荧光阈值。也可基于造成(μCtquant1-3σCtquant1)与(μCtquant2+3σCtquant2)之间最大间距及最少已确定异常值的Ct值，选定所述最优荧光阈值。
计算机实现的系统
本领域的技术人员将认识到，可以适当使用硬件、软件、固件或它们的组合来实现各种实施例的操作。例如，一些过程可使用处理器或软件、固件或硬连线逻辑部件控制下的其他数字电路进行。(术语“逻辑部件”在本文中是指如本领域的技术人员所认识到的能够执行上述功能的固定硬件、可编程逻辑部件和/或它们的适当组合。)软件和固件可存储在非暂态计算机可读介质上。一些其他过程可使用模拟电路来实现，正本领域的普通技术人员所熟知。另外，存储器或其他存储设备以及通信部件也可以用于本发明的实施例中。
图5为示出根据各种实施例可用于执行处理功能的一种计算机系统500的框图。执行实验的仪器可以连接至所述示例性计算系统500。计算系统500可包括一个或多个处理器，诸如处理器504。例如，处理器504可使用通用或专用处理引擎诸如微处理器、控制器或其他控制逻辑部件来实施。在本实例中，处理器504连接至一条总线502或其他通信媒介。
另外，应当理解，图5的一个计算系统500还可能实现为下列多种形式中的任一种，诸如机架式计算机、大型机、超级计算机、服务器、客户端、台式计算机、笔记本电脑、平板计算机、手持式计算设备(例如，PDA、蜂窝电话、智能电话、掌上电脑等)、集群网格、上网本、嵌入式系统，或某一给定应用或环境下可能理想或适当的任何其他类型的专用或通用计算设备。另外，计算系统500可包括一个传统网络系统或与LIS/LIMS基础设施的集成，其中传统网络系统包括客户端/服务器环境和一个或多个数据库服务器。多种传统网络系统在本领域中是已知的，其中包括局域网(LAN)或广域网(WAN)，并且包括无线和/或有线部件。另外，客户端/服务器环境、数据库服务器和网络在本领域中已有充分记载。根据本文所述的各种实施例，计算系统500可能被配置为连接至分布式网络中的一个或多个服务器。计算系统500可接收来自分布式网络的信息或更新。计算系统500还可以传输待存储于分布式网络内的信息，该信息可以由连接至分布式网络的其他客户端来访问。
计算系统500可包括用于传输信息的总线502或其他通信机制，以及与总线502耦合以用于处理信息的处理器504。
计算系统500还包括一个存储器506，该存储器可为随机存取存储器(RAM)或其他动态存储器，耦合至总线502，用于存储有待处理器504执行的指令。存储器506还可用于在执行将由处理器504执行的指令之过程中存储临时变量或其他中间信息。计算系统500还包括耦合到总线502用于存储处理器504的静态信息和指令的只读存储器(ROM)508或其他静态存储设备。
计算系统500还可包括一个存储设备510，诸如提供并且耦合到总线502以存储信息和指令的磁盘、光盘或固态驱动器(SSD)。存储设备510可包括介质驱动器和移动存储接口。介质驱动器可包括支持固定或移动存储介质的驱动器或其他机构，如硬盘驱动器、软盘驱动器、磁带驱动器、光盘驱动器、CD或DVD驱动器(R或RW)、闪盘驱动器或者其他移动或固定介质驱动器。如这些实例所示，该存储介质可包括一个计算机可读存储介质，其中存储有特定的计算机软件、指令或数据。
在另选的实施例中，存储设备510可包括其他类似的工具以允许计算机程序或其他指令或数据加载到计算系统500中。此类工具可包括例如移动存储单元和接口，诸如程序盒式存储器和盒式存储器接口、移动存储器(例如，闪速存储器或其他移动存储模块)和存储器插槽，以及用于允许将软件和数据从存储设备510传送至计算系统500的其他移动存储单元和接口。
计算系统500还可包括一个通信接口518。通信接口518可用于允许软件和数据在计算系统500和外部设备之间传输。通信接口518的实例可包括调制解调器、网络接口(诸如以太网或其他NIC卡)、通信端口(诸如USB端口、RS-232C串行端口)、PCMCIA插槽和PCMCIA卡、蓝牙等。通过通信接口518传送的软件和数据形式可以是能够由通信接口518接收的电子、电磁、光学及其他信号的形式。这些信号可能由通信接口518经由一个信道诸如无线介质、线材或线缆、光纤，或其他通信介质来发送和接收。信道的一些实例包括电话线、蜂窝电话链路、RF链路、网络接口、局域网或广域网及其他通信信道。
计算系统500可能经由总线502耦合到显示器512，诸如阴极射线管(CRT)或液晶显示器(LCD)，该显示器512用于向计算机用户显示信息。例如，包括字母数字键及其他键的输入设备514耦合到总线502，用于将信息和命令选择传输至处理器504。输入设备还可以是具有触摸屏输入能力的显示器，诸如LCD显示器。另一种类型的用户输入设备为光标控制装置516，诸如用于将方向信息和命令选择传递至处理器504并且用于控制光标在显示器512上移动的鼠标、轨迹球或光标方向键。此输入设备通常具有两个轴上的两种自由度以使设备指定平面的位置，所述两个轴为一个第一轴(例如，x轴)和一个第二轴(例如，y轴)。计算系统500提供数据处理并且提供此类数据的置信水平。与本教导内容实施例的某些具体实现一致的是，数据处理和置信水平值由计算系统500提供以响应处理器504执行包含在存储器506中的一个或多个指令的一个或多个序列。此类指令可以由另一个计算机可读介质诸如存储设备510读入存储器506中。执行包含在存储器506中的指令序列引起处理器504执行本文所述的过程。或者，硬连线电路可用于代替软件指令或与软件指令结合以实现本教导的实施例。因此，本教导内容实施例的具体实现不限于硬件电路和软件的任何特定组合。
本文中使用的术语“计算机可读介质”和“计算机程序产品”通常与向处理器504提供用于执行的一个或多个序列或一个或多个指令的任何介质有关。在执行时，通常被称为“计算机程序代码”的此类指令(其可能以计算机程序的形式或其他编组的形式分组)使计算系统500能够执行本发明的实施例的特征或功能。这些及其他形式的非暂态计算机可读介质可采取多种形式，包括但不限于非易失性介质、易失性介质和传输介质。非易失性介质包括例如固态光盘或磁盘，诸如存储设备510。易失性介质包括动态存储器，诸如存储器506。传输介质包括同轴线缆、铜线和光纤，该光纤包括线材，该线材包括总线502。
计算机可读介质的常见形式包括例如软盘(floppy disk)、软磁盘(flexibledisk)、硬盘、磁带，或任何其他磁介质、CD-ROM、任何其他光学介质、穿孔卡、纸带、任何其他具有孔图案的物理介质、RAM、PROM以及EPROM、FLASH-EPROM、任何其他存储器芯片或盒式存储器、如下文所述的载波，或计算机可读取的任何其他介质。
各种形式的计算机可读介质可涉及将一个或多个指令的一个或多个序列携带至用于执行的处理器504。例如，指令最初可携带在远程计算机的磁盘上。远程计算机可将指令加载到其动态存储器中并且使用调制解调器通过电话线路发送指令。计算系统500的本地调制解调器可接收电话线的数据并且使用红外发射器将数据转换为红外信号。耦合到总线502的红外检测器可接收红外信号中携带的数据并且将该数据置于总线502上。总线502将该数据携带至存储器506，处理器504从存储器506中检索并且执行指令。由存储器506接收的指令可选地在处理器504执行之前或执行之后存储于存储设备510上。
应当理解，为清楚起见，上述说明参考不同的功能单元和处理器描述本发明的实施例。然而，显而易见的是，在不脱离本发明的情况下可使用不同的功能单元、处理器或域之间的任何合适的功能分布。例如，示出的由独立的处理器或控制器执行的功能可以由相同的处理器或控制器来执行。因此，对特定功能单元的引用仅应视为对提供所述功能的合适装置的引用，而非指示一个严格的逻辑或物理结构或组织。
分布式系统
典型的互联网网络配置600的一些元素如图6所示，其中可能处于远程本地办公室中的多个客户端机器602被示出为连接至网关/集线器/隧道服务器等610，网关/集线器/隧道服务器等610本身通过一些互联网服务提供商(ISP)连接610连接到互联网608。还示出了类似地通过ISP连接614连接到互联网608的其他可能的客户端612，其中这些单元与可能的中心实验室或办公室进行通信，例如，通过ISP连接616连接到网关/隧道服务器618，网关/隧道服务器618已连接620至各种企业应用服务器622，其可通过另一个集线器/路由器626连接到各个本地客户端630。这些服务器622中的任一种可用作用于分析本发明中所述的潜在内容管理和传输设计解决方案的开发服务器，下文提供了更为全面的描述。
本教导内容参考实时聚合酶链反应(RT-PCR)仪器进行描述。具体地，本教导内容的一个实施例由采用孔板光学成像的RT-PCR仪器实现。此类仪器能够同时测量来自多个样本或斑点的信号以作分析目的，并且通常需要校准，包括但不限于下列过程：在多组分分析中识别ROI(感兴趣区域)、测定背景信号、均匀性和纯染料光谱校准。校准还可涉及使用具有预期结果的已知样本板的RT-PCR验证反应。本领域的技术人员将理解，虽然本教导内容已经结合有关RT-PCR仪器的实例来描述，但是它们的原理广泛适用于可能需要校准和验证的其他形式的实验室仪器，以确保准确性和/或结果最优化。
PCR仪器
如前所述，根据但不限于各种实施例，可能利用的一种仪器是聚合酶链反应(PCR)仪器。图7为示出一台PCR仪器700的框图，在该仪器上可实现本教导内容的实施例。PCR仪器700可包括一个加热的盖子710，该盖子被置于基板(未示出)中所容纳的多个样本712上。在各种实施例中，基板可能为具有多个样本区域的玻璃或塑料滑片，其样本区域具有位于样本区域和加热的盖子710之间的盖子。一块基板的一些实例可能包括但不限于一块多孔板诸如一标准微量滴定96孔板、一384孔板或一微卡，一基本平面载体诸如一玻璃或塑料滑片，或任何其他类型的阵列或微阵列。在一基板的各种实施例中，所述反应位点可能包括孔、凹陷、凹痕、脊以及它们的组合，在所述基板的表面上形成规则或不规则阵列。PCR仪器的多种实施例包括一个样本块714、用于加热和冷却的元件716、一个热交换器718、控制系统720和用户界面722。根据本教导内容的一个热块组件的各种实施例包含图7所示的PCR仪器700的部件714-718。
实时PCR仪器700有一个光学系统724。在图7中，一个光学系统724可能具有一发射电磁能量的照明源(未示出)、一用于接收来自基板上样本712的电磁能量的光学传感器、检测器或成像器件(未示出)，以及用以将所述电磁能量从每个DNA样本引导至所述成像器的光学器件740。对于图7所示PCR仪器700以及实时PCR仪器700的实施例，控制系统720可能被用以控制所述检测系统、加热的盖子和热块组件的功能。控制系统720可能由最终用户通过图7中所示PCR仪器700和图7中所示实时PCR仪器700的用户界面722进行访问。此外，计算系统700，如图7所示，可能用于提供对图7中PCR仪器700以及用户界面功能的控制。另外，图5的计算机系统500可提供数据处理、显示和报告准备功能。所有此类仪器控制功能可局部专用于PCR仪器，或图5的计算系统500可提供对控制、分析和报告功能中的一部分或全部的远程控制，如随后所详述。
成像光学系统
图8示出可用于根据本文所述各种实施例成像的一个示例性光学系统800。应当认识到，光学系统800为一个示例性光学系统，并且本领域技术人员将认识到可以使用其他光学系统来捕获一个目标对象的图像。根据各种实施例，目标对象可为样本固持器，例如本文所述的校准板。例如，相机804中包括的光学传感器802可对目标对象810进行成像。所述光学传感器802可为一个CCD传感器，而所述相机804可为一个CCD相机。此外，该光学传感器包括一个相机透镜806。
根据目标对象，根据各种实施例，可选择一个发射滤光片808对目标对象810成像。在其他实施例中，可将发射滤光器808更改为对目标对象801射出的荧光发射成像。
光学系统800可采用一个反射光源812对目标对象810成像。来自光源812的光可通过一非球面814、一聚焦器/发散器816和激发滤光器818进行过滤，再由分束器820反射到目标对象810。光学系统800还可包括一个场透镜822。根据所述目标对象，根据各种实施例，可选择或改变所述激发滤光器818以对目标对象810成像。
在实例1中，提供了一个用于验证仪器的方法。该方法包括：接收来自一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括第一数量和第二数量的样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域；基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值；对于该组每个荧光阈值，确定由所述第一数量的样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量的样本生成的扩增曲线的第二组Ct值；并且基于所述多个荧光阈值中的每个荧光阈值的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
在替代实例2中，如果所述第一和第二数量充分可区分，则实例1的所述方法还包括显示一个所述仪器已验证的指示。
在替代实例3中，提供了实例1的所述方法，其中第一和第二数量是否充分可区分的计算包括确定第一和第二组Ct值的一个平均值(μ)和一个标准偏差(σ)。
在替代实例4中，提供了实例3的所述方法，其中若以下方程的结果为一正数，则第一和第二数量充分可区分：((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2))。
在替代实例5中，提供了实例1的所述方法，其中所述样本为一种RNase P基因。
在替代实例6中，提供了实例1的所述方法，其中第一和第二数量不同。
在替代实例7中，提供了实例1的方法，其中第二数量与第一数量之间相差2倍。
替代实例8中，提供了实例1的所述方法，其中若至少一个荧光阈值的所述方程的结果为一正数，则第一和第二数量充分可区分。
在替代实例9中，提供了实例1的所述方法，还包括：从所述第一和第二组Ct值中丢弃预定数量的异常值。
在替代实例10中，描述了实例1的所述方法，其中该组荧光阈值包括90个荧光阈值。
在实例11中，提供了一个计算机可读存储介质，该存储介质以处理器可执行的指令编码以便验证仪器。所述指令包含以下指令：接收一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括第一数量和第二数量的样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域；基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值；对于该组每个荧光阈值，确定由所述第一数量的样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量的样本生成的扩增曲线的第二组Ct值；以及基于所述多个荧光阈值中的每个荧光阈值的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
在替代实例12中，提供了实例11中所述的计算机可读存储介质，还包含以下指令：如果所述第一和第二数量充分可区分，则显示一个所述仪器已验证的指示。
在替代实例13中，提供了实例11中所述的计算机可读存储介质，其中第一和第二数量是否充分可区分的计算指令包括确定所述第一和第二组Ct值的一个平均值(μ)和一个标准偏差(σ)。
在替代实例14中，提供了实例13中所述的计算机可读存储介质，其中若以下方程的结果为一正数，则所述第一和第二数量充分可区分：((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2))。
在替代实例15中，提供了实例11中所述的计算机可读存储介质，其中所述样本为一RNase P基因。
在替代实例16中，提供了实例11中所述的计算机可读存储介质，其中所述第一和第二数量不同。
在替代实例17中，提供了实例11中所述的计算机可读存储介质，其中所述第二数量与第一数量之间相差2倍。
在替代实例18中，提供了实例14中所述的计算机可读存储介质，其中若至少一个荧光阈值的所述方程的结果为一正数，则所述第一和第二数量充分可区分。
在替代实例19中，提供了实例11中所述的计算机可读存储介质，还包含：从所述第一和第二组Ct值中丢弃预定数量的异常值的指令。
在替代实例20中，提供了实例11中所述的计算机可读存储介质，其中该组荧光阈值包括90个荧光阈值。
在实例21中，提供了一个用于验证仪器的系统。该系统包括：一个处理器；以及一个存储器，该存储器配置为存储处理器可执行的以下指令：接收一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括一个第一数量和第二数量的样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域；基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值；对于该组每个荧光阈值，确定由所述第一数量的样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量的样本生成的扩增曲线的第二组Ct值；以及基于所述多个荧光阈值中的每个荧光阈值的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
在替代实例22中，提供了实例21的所述系统，还包括以下指令：如果所述第一和第二数量充分可区分，则显示一个所述仪器已验证的指示。
在替代实例23中，提供了实例21的所述系统，其中所述第一和第二数量是否充分可区分的计算指令包括确定所述第一和第二组Ct值的一个平均值(μ)和一个标准偏差(σ)。
在替代实例24中，提供了实例23的所述系统，其中若以下方程的结果为一正数，则所述第一和第二数量充分可区分：((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2))。
在替代实例25中，提供了实例21的所述系统，其中所述样本为一RNase P基因。
在替代实例26中，提供了实例21的所述系统，其中所述第一和第二数量不同。
在替代实例27中，提供了实例21的所述系统，其中所述第二数量与第一数量之间相差2倍。
在替代实例28中，提供了实例24的所述系统，其中若至少一个荧光阈值的所述方程的结果为一正数，则所述第一和第二数量充分可区分。
在替代实例29中，提供了实例21的所述系统，其中所述存储器还包含从所述第一和第二组Ct值中丢弃预定数量的异常值的指令。
在替代实例30中，提供了实例21的所述系统，其中该组荧光阈值包括90个荧光阈值。
在实例31中，提供了一个用于验证仪器的系统。该系统包括：一个PCR仪器接口，该接口配置为接收一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括一个第一数量和第二数量的样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域；一个(循环阈值)Ct计算器，该计算器被配置为：基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值，而且对于该组每个荧光阈值，确定由所述第一数量的样本生成的扩增曲线的第一组Ct以及由所述第二数量的样本生成的扩增曲线的第二组Ct值；一个Ct数据库，该数据库被配置为存储该组每一个荧光阈值的所述第一和第二组Ct值；以及一个验证器，该验证器被配置为基于所述多个荧光阈值中的每个荧光阈值的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
在替代实例32中，提供了实例31的所述系统，还包含：一个配置过的显示引擎，若所述第一和第二数量充分可区分，则该显示引擎显示所述仪器验证通过的指示。
在替代实例33中，提供了实例31的所述系统，其中所述验证器经过进一步配置，用于确定所述第一和第二组Ct值的一个平均值(μ)和一个标准偏差(σ)，以便计算该第一和第二数量是否充分可区分。
在替代实例34中，提供了实例33的所述系统，其中所述验证器确定，若以下方程的结果为一正数，则所述第一和第二数量充分可区分：((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2))。
在替代实例35中，实例31的所述系统，其中样本为一RNase P基因。
在替代实例36中，实例31的所述系统，其中第一和第二数量不同。
在替代实例37中，实例31的所述系统，其中第二数量与第一数量之间相差2倍。
在替代实例38中，实例37的所述系统，其中所述验证器确定，若至少一个荧光阈值的所述方程的结果为一正数，则所述第一和第二数量充分可区分。
在替代实例39中，实例31的所述系统，其中Ct被进一步配置，以从所述第一和第二组Ct值中丢弃预定数量的异常值。
在替代实例40中，实例31的所述系统，其中该组荧光阈值包括90个荧光阈值。
在实例41中，提供了一个用于验证仪器的方法。该方法包括：接收来自一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括第一数量和第二数量的样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域；基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值；对于该组每个荧光阈值，确定由所述第一数量的样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量的样本生成的扩增曲线的第二组Ct值；并且基于所述多个荧光阈值中的每个荧光阈值的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
在实例42中，提供了一个计算机可读存储介质，该存储介质以处理器可执行的指令编码以便验证仪器。所述指令包含以下指令：接收一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括一个第一数量和第二数量的样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域；基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值；对于该组每个荧光阈值，确定由所述第一数量的样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量的样本生成的扩增曲线的第二组Ct值；以及基于所述多个荧光阈值中的每个荧光阈值的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
在实例43中，提供了一个用于验证仪器的系统。该系统包括：一个处理器；以及一个存储器，该存储器配置为存储处理器可执行的以下指令：接收一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括一个第一数量和第二数量的样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域；基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值；对于该组每个荧光阈值，确定由所述第一数量的样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)以及由所述第二数量的样本生成的扩增曲线的第二组Ct值；以及基于所述多个荧光阈值中的每个荧光阈值的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
在实例44中，提供了一个用于验证仪器的系统。该系统包括：一个PCR仪器接口，该接口配置为接收一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括一个第一数量和第二数量的样本，并且每条扩增曲线包括一个指数区域；一个(循环阈值)Ct计算器，该计算器被配置为：基于所述多条扩增曲线的指数区域确定一组荧光阈值，而且对于该组每个荧光阈值，确定由所述第一数量的样本生成的扩增曲线的第一组Ct以及由所述第二数量的样本生成的扩增曲线的第二组Ct值；一个Ct数据库，该数据库被配置为存储该组每一个荧光阈值的所述第一和第二组Ct值；以及一个验证器，该验证器被配置为基于所述多个荧光阈值中的每个荧光阈值的Ct值计算所述第一和第二数量是否充分可区分。
在实例54中，实例41、42、43、44或前述任一实例还可包括显示一个指示：若所述第一和第二数量充分可区分，则所述仪器已验证。
在实例55中，提供了实例41、42、43、44或前述任一实例，其中所述第一和第二数量是否充分可区分的计算包括确定所述第一和第二组Ct值的一个平均值(μ)和一个标准偏差(σ)。
在实例56中，提供了实例41、42、43、44、55或前述任一实例，其中若以下方程的结果为一正数，则所述第一和第二数量充分可区分：((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2))。
实施例57中，描述了实施例41、42、43、44或前述任一实施例，其中所述样本为一种RNase P基因。
实施例58中，描述了实施例41、42、43、44或前述任一实施例，其特征在于第一和第二数量不同。
在实例59中，提供了实例41、42、43、44或前述任一实例，其中所述第二数量与第一数量之间相差2倍。
在实例60中，提供了实例41、42、43、44或前述任一实例，其中若至少一个荧光阈值的所述方程的结果为一正数，则所述第一和第二数量充分可区分。
在实例61中，提供了实例41、42、43、44或前述任一实例，还包括从所述第一和第二组Ct值中丢弃预定数量的异常值。
在实例62中，提供了实例41、42、43、44或前述任一实例，其中该组荧光阈值包括90个荧光阈值。
在实例63中，提供了实例41、42、43、44或前述任一实例，其中对一个荧光显示引擎进行配置，以显示一个指示：若所述第一和第二数量充分可区分，则所述仪器已验证。
以下关于本教导内容各种实现的描述旨在供说明和描述之用。其并非详尽无遗，也并不将本教导内容限制为所公开的确切形式。修改和变化可以根据上述教导内容，或者可从本教导内容的实践中习得。此外，所描述的实现包括软件，但本教导内容可以实现为硬件和软件的组合或仅硬件。本教导内容可以通过面向对象和非面向对象的编程系统实现。
虽然对各实施例的描述均考虑到一定的示例性实施例、实例和应用，但对本领域的技术人员而言，显然可以不脱离本教导内容而进行各种修改和变更。

Claims (28)

1.一种用于验证PCR仪器的方法，该方法包括：
接收来自一块验证板的扩增数据，其中所述验证板包括第一部分和第二部分，所述第一部分包含第一数量的样本，所述第二部分包含第二数量的样本；
基于所接收的扩增数据来生成多条扩增曲线，其中每条扩增曲线均包括一个指数区域；
通过由一个预定数值均分从所述多条扩增曲线的指数区域底部的最低荧光值到所述多条扩增曲线的指数区域顶部的最高荧光值的荧光值范围，来对于所述多条扩增曲线确定一组荧光阈值；
对于该组荧光阈值的每一个荧光阈值，确定所述第一数量样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)值(Ctquant1)和所述第二数量样本生成的扩增曲线的第二组Ct值(Ctquant2)；以及
基于该组荧光阈值的每个阈值处的Ct值，来计算所述第一数量和第二数量是否充分可区分，
其中所述第一数量和所述第二数量是否充分可区分的计算包括确定所述第一组Ct值和所述第二组Ct值的一个平均值(μ)和一个标准偏差(σ)；并且
其中若至少一个荧光阈值的以下方程的结果为一正数，则所述第一数量和所述第二数量充分可区分：
((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2))。
2.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：
显示一个指示，表明如果所述第一数量和所述第二数量充分可区分，则所述仪器已被验证。
3.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一数量的样本和所述第二数量的样本为RNase P样本。
4.根据权利要求1所述的方法，其中所述第一数量和所述第二数量不同。
5.根据权利要求1所述的方法，其中所述第二数量与所述第一数量之间相差2倍。
6.根据权利要求1所述的方法，进一步包括：
从所述第一组Ct值和所述第二组Ct值中丢弃预定数量的异常值。
7.根据权利要求1所述的方法，其中该组荧光阈值包括90个荧光阈值。
8.一种计算机可读存储介质，该存储介质以处理器可执行的PCR仪器验证指令编码，所述指令包括：
接收来自一块验证板的扩增数据，其中所述验证板包括第一部分和第二部分，所述第一部分包含第一数量的样本，所述第二部分包含第二数量的样本；
基于所接收的扩增数据来生成多条扩增曲线，其中每条扩增曲线均包括一个指数区域；
通过由一个预定数值均分从所述多条扩增曲线的指数区域底部的最低荧光值到所述多条扩增曲线的指数区域顶部的最高荧光值的荧光值范围，来对于所述多条扩增曲线确定一组荧光阈值；
对于该组荧光阈值的每一个荧光阈值，确定所述第一数量样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)值(Ctquant1)和所述第二数量样本生成的扩增曲线的第二组Ct值(Ctquant2)；以及
基于该组荧光阈值的每个阈值处的Ct值，来计算所述第一数量和所述第二数量是否充分可区分，
其中用于计算所述第一数量和所述第二数量是否充分可区分的指令包括确定所述第一组Ct值和所述第二组Ct值的一个平均值(μ)和一个标准偏差(σ)；并且
其中若至少一个荧光阈值的以下方程的结果为一正数，则所述第一数量和所述第二数量充分可区分：
((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2))。
9.根据权利要求8所述的计算机可读存储介质，进一步包括以下用途的指令：
显示一个指示，表明如果所述第一数量和所述第二数量充分可区分，则所述仪器已被验证。
10.根据权利要求8所述的计算机可读存储介质，其中所述第一数量的样本和所述第二数量的样本为RNase P样本。
11.根据权利要求8所述的计算机可读存储介质，其中所述第一数量和所述第二数量不同。
12.根据权利要求8所述的计算机可读存储介质，其中所述第二数量与第一数量之间相差2倍。
13.根据权利要求8所述的计算机可读存储介质，进一步包括以下用途的指令：
从所述第一组Ct值和所述第二组Ct值中丢弃预定数量的异常值。
14.根据权利要求8所述的计算机可读存储介质，其中该组荧光阈值包括90个荧光阈值。
15.一种用于验证PCR仪器的系统，该系统包括：
一个处理器；以及
一个存储器，该存储器被配置为存储处理器可执行的以下指令：
接收来自一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括第一部分和第二部分，所述第一部分包含第一数量的样本，所述第二部分包含第二数量的样本，并且每条扩增曲线均包括一个指数区域；
通过由一个预定数值均分从所述多条扩增曲线的指数区域底部的最低荧光值到所述多条扩增曲线的指数区域顶部的最高荧光值的荧光值范围，来对于多条扩增曲线确定一组荧光阈值；
对于该组荧光阈值的每一个荧光阈值，确定所述第一数量样本生成的扩增曲线的第一组循环阈值(Ct)值(Ctquant1)和所述第二数量样本生成的扩增曲线的第二组Ct值(Ctquant2)；以及
基于该组荧光阈值的每个阈值处的Ct值，来计算所述第一数量和所述第二数量是否充分可区分，
其中用于计算所述第一数量和所述第二数量是否充分可区分的指令包括确定所述第一组和第二组Ct值的一个平均值(μ)和一个标准偏差(σ)；并且
其中若至少一个荧光阈值的以下方程的结果为一正数，则所述第一数量和所述第二数量充分可区分：
((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2))。
16.根据权利要求15所述的系统，所述存储器还包含以下指令：
显示一个指示，表明如果所述第一数量和所述第二数量充分可区分，则所述仪器已被验证。
17.根据权利要求15所述的系统，其中所述第一数量的样本和所述第二数量的样本为RNase P样本。
18.根据权利要求15所述的系统，其中所述第一数量和所述第二数量不同。
19.根据权利要求15所述的系统，其中所述第二数量与第一数量之间相差2倍。
20.根据权利要求15所述的系统，其中所述存储器还包含以下指令：从所述第一和第二组Ct值中丢弃预定数量的异常值。
21.根据权利要求15所述的系统，其中该组荧光阈值包括90个荧光阈值。
22.一种用于验证PCR仪器的系统，该系统包括：
一个PCR仪器接口，该接口被配置为接收来自一块验证板的扩增数据以生成多条扩增曲线，其中所述验证板包括第一部分和第二部分，所述第一部分包含第一数量的样本，所述第二部分包含第二数量的样本，且每条扩增曲线包括一个指数区域；
一个循环阈值(Ct)计算器，该计算器经过配置以：
通过由一个预定数值均分从所述多条扩增曲线的指数区域底部的最低荧光值到所述多条扩增曲线的指数区域顶部的最高荧光值的荧光值范围，来对于所述多条扩增曲线确定一组荧光阈值，以及
对于该组荧光阈值的每一个荧光阈值，确定由所述第一数量的样本所生成的扩增曲线的第一组Ct值(Ctquant1)和由所述第二数量的样本所生成的扩增曲线的第二组Ct值(Ctquant2)；
一个Ct数据库，该数据库被配置为存储该组每一荧光阈值的所述第一组Ct值和所述第二组Ct值；以及
一个验证器，该验证器经过配置以基于该组荧光阈值的每个阈值处的Ct值，来计算所述第一数量和所述第二数量是否充分可区分，
其中所述验证器经过进一步配置，用于确定所述第一组和第二组Ct值的一个平均值(μ)和一个标准偏差(σ)，以便计算该第一数量和所述第二数量是否充分可区分；并且
其中若至少一个荧光阈值的以下方程的结果为一正数，则所述第一数量和所述第二数量充分可区分：
((μCtquant1-3σCtquant1)-(μCtquant2+3σCtquant2))。
23.根据权利要求22所述的系统，还包含：
一个经过配置的显示引擎，用于显示一个指示，该指示表明如果所述第一数量和所述第二数量充分可区分，则所述仪器已被验证。
24.根据权利要求22所述的系统，其中所述第一数量的样本和所述第二数量的样本为RNase P样本。
25.根据权利要求22所述的系统，其中所述第一数量和所述第二数量不同。
26.根据权利要求22所述的系统，其中所述第二数量与第一数量之间相差2倍。
27.根据权利要求22所述的系统，其中Ct计算器被进一步配置，用于从所述第一组Ct值和所述第二组Ct值中丢弃预定数量的异常值。
28.根据权利要求22所述的系统，其中该组荧光阈值包括90个荧光阈值。
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