KR102434235B1 - 장비 검증을 위한 방법 및 시스템 - Google Patents

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Abstract

장비를 검증하기 위한 방법이 제공된다. 상기 방법은 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하는 단계(102, 202)를 포함한다. 검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함한다. 상기 방법은 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하는 단계(104, 204) 및 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하는 단계(106, 206)를 더 포함한다. 상기 방법은 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하는 단계(108, 208 내지 218)를 포함한다.

Description

장비 검증을 위한 방법 및 시스템
실험실 장비의 설치 및 보정은 시간과 비용이 많이 소요되는 프로세스일 수 있다. 많은 경우, 장비 공급업체의 엔지니어들은 이러한 프로세스를 수행하기 위해 현장에 있어야만 한다. 이 비용은 일반적으로 사용자에게 전가된다. 일부 경우, 숙련된 사용자는 적절히 제조된 장비를 다단계 절차를 이용하여 성공적으로 보정할 수 있다. 이러한 보정 중에, 물리적 표준 및 웰 플레이트가 수동 절차와 함께 사용될 수 있다. 수동 보정 처리 및 데이터 검사는 오류가 발생하기 쉬우며, 특별한 조치 또는 주관적인 조치에 의존적일 수 있다. 최종 시스템 검증 단계는 차선의 보정 수용에 대한 탄력성을 제공할 수 있고, 자동화는 이러한 활동 중에 개선된 객관성과 통일성을 제공한다.
설치 후에 그리고 여러 번의 사용 후에, 장비가 적절하게 작동하고 있음을 검증하는 것이 중요하다. 종종, 사용자는 장비를 검증하기 위해 공지된 검정, 예컨대 RNase P 검정을 수동으로 실행시킬 것이다.
일반적인 RNase P 검정의 예에서, 한 세트의 복제 표준(1,250개, 2,500개, 5,000개, 10,000개 및 20,000개 카피)으로부터 얻어진 Ct(사이클 임계치, cycle threshold) 값으로부터 표준 곡선이 생성된다. 이어서, 표준 곡선은 두 세트의 미지의 템플릿(5,000개 및 10,000개의 복제 개체군)에 대한 카피 수를 판정하는 데 사용된다. 장비가 단일 웰 내의 후속 샘플 실행에 대해 5,000개 및 10,000개 게놈 등가물을 99.7% 신뢰도 수준으로 구별할 수 있는 능력을 입증할 수 있다면 장비는 검증된다.
하나의 예시적인 구현예에서, 장비를 검증하기 위한 방법이 제공된다. 상기 방법은 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하는 단계를 포함한다. 검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함한다. 상기 방법은 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하는 단계, 및 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하는 단계를 더 포함한다. 상기 방법은 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하는 단계를 포함한다.
다른 예시적인 구현예에서, 장비를 검증하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어로 인코딩된 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다. 명령어는 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하기 위한 명령어를 포함한다. 검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함한다. 명령어는 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하기 위한 명령어, 및 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하기 위한 명령어를 더 포함한다.
명령어는 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 명령어를 포함한다.
다른 예시적인 구현예에서, 장비를 검증하기 위한 시스템이 제공된다. 시스템은 프로세서, 및 프로세서 실행 가능 명령어를 저장하도록 구성된 메모리를 포함한다. 명령어는 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하기 위한 명령어를 포함한다. 검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함한다. 명령어는 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하기 위한 명령어, 및 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하기 위한 명령어를 더 포함한다. 명령어는 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 명령어를 포함한다.
다른 예시적인 구현예에서, 장비를 검증하기 위한 시스템이 제공된다. 시스템은 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하도록 구성된 PCR 장비를 포함한다. 검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함한다. 시스템은, 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하도록, 그리고 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제1 세트 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하도록 구성된 (사이클 임계치) Ct 산출부를 더 포함한다. 시스템은 세트의 각각의 형광 임계치에 대한 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트를 저장하도록 구성된 Ct 데이터베이스를 포함한다. 시스템은 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하도록 구성된 검증부를 더 포함한다.
도 1은 본원에 기재된 다양한 구현예에 따른, 장비를 검증하기 위한 예시적인 방법을 도시한다.
도 2는 본원에 기재된 다양한 구현예에 따른, 장비를 검증하기 위한 다른 예시적인 방법을 도시한다.
도 3은 본원에 기재된 다양한 구현예에 따른, 증폭 데이터로부터 복수의 형광 임계치를 결정하는 것을 도시한다.
도 4는 본원에 기재된 다양한 구현예에 따른, 장비의 검증을 위한 시스템을 도시한다.
도 5는 본원에 기재된 다양한 구현예를 구현하기 위한 예시적인 컴퓨팅 시스템을 도시한다.
도 6은 본원에 기재된 다양한 구현예에 따른 예시적인 분산형 네트워크 시스템을 도시한다.
도 7은 본 교시내용의 구현예가 구현될 수 있는 PCR 장비(700)를 도시한 블록도이다.
도 8은 본원에 기재된 구현예에 따른, 이미징에 사용될 수 있는 예시적인 광학 시스템(300)을 도시한다.
본 발명의 보다 철저한 이해를 제공하기 위해, 다음의 설명은 특정 구성, 파라미터, 예 등과 같은 다수의 특정 세부사항을 설명한다. 그러나, 이러한 설명은 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것이 아니라, 예시적인 구현예를 더 잘 설명하기 위한 것이라는 것을 인지해야 한다.
전술된 바와 같이, 장비를 검증하여, 그것이 특히 새로운 설치 후에 또는 여러 번의 사용 후에 작동하고 있음을 확인하는 것이 중요하다. 이러한 방식으로, 사용자는 실험 결과 및 분석이 정확하고 신뢰성 있다는 것을 확신할 수 있다. 이전에는, 사용자에 의해 장비에 대한 검증 검정이 실행되었고, 사용자는 검증 검정으로부터 증폭 데이터에 대한 데이터 분석을 수동으로 수행하여 장비를 검증했다. 데이터 분석이 사용자에 의해 수동으로 수행되었기 때문에, 검증 프로세스는 오류가 발생하기 더 쉽고 시간이 걸렸다.
본 교시내용의 다양한 구현예에 따르면, 자동화된 검증 방법 및 시스템이 제공된다. 검증 검정의 일례는 RNase P 검정이다. 그러나, 본원에 사용된 바와 같이, 검증 검정은, 공지되고 신뢰할 수 있는 속성을 갖고 장비를 검증하는 데 이용될 수 있는 임의의 검정일 수 있다.
설치 후에 그리고 여러 번의 사용 후에, 장비가 적절하게 작동하고 있음을 검증하는 것이 중요하다. 종종, 사용자는 장비를 검증하기 위해 공지된 검정, 예컨대 RNase P 검정을 수동으로 실행시킬 것이다. RNase P 유전자는 RNase P 효소의 RNA 모이어티(moiety)를 인코딩하는 단일 카피 유전자이다. RNase P 유전자는 그 속성 및 특성이 알려져 있기 때문에 검증 검정으로서 흔히 사용된다.
검증 플레이트에는 샘플의 게놈 카피의 검출 및 정량화에 필요한 시약이 미리 적재된다. 예를 들어, RNase P 검증 플레이트에서, 각각의 웰은 PCR 마스터 믹스, RNase P 프라이머, FAM™ 염료-표기 프로브, 및 기지 농도의 인간 게놈 DNA 템플릿을 함유한다.
일반적인 RNase P 검정의 예에서, 한 세트의 복제 표준(1,250개, 2,500개, 5,000개, 10,000개 및 20,000개 카피)으로부터 얻어진 Ct(사이클 임계치, cycle threshold) 값으로부터 표준 곡선이 생성된다. 이어서, 표준 곡선은 두 세트의 미지의 템플릿(5,000개 및 10,000개의 복제 개체군)에 대한 카피 수를 판정하는 데 사용된다. 장비가 단일 웰 내의 후속 샘플 실행에 대해 5,000개 및 10,000개 게놈 등가물을 99.7% 신뢰도 수준으로 구별할 수 있는 능력을 입증할 수 있다면 장비는 검증된다.
설치를 통과하기 위해, 장비는 단일 웰 내의 후속 샘플 실행에 대해 5,000개 및 10,000개 게놈 등가물을 99.7% 신뢰도 수준으로 구별할 수 있는 능력을 입증해야 한다.
다양한 구현예에 따르면, 본 교시내용은 전문 지식을 자동화 보정 및 검증 시스템에 통합시켜 고장이 확인되었을 때 통과/실격 상태 및 문제 해결 피드백을 제공할 수 있다. 장비가 검증 프로세스를 통과하지 못하면, 사용자는 예를 들어, 서비스 엔지니어가 호출될 수 있음을 알게 된다. 본 교시내용은 설치 및 보정 절차에 필요한 비용 및 시간을 최소화할 수 있다.
전술된 바와 같이, 본원에 기재된 다양한 구현예에 따르면, 검증 분석의 목표는 동일한 샘플의 2개의 수량이 장비에 의해 충분히 구별 가능하다는 것을 확인하는 것이다. 이러한 방식으로, 장비 성능이 검증될 수 있다.
본 교시내용의 다양한 구현예에 따르면, 자동화된 검증 방법 및 시스템이 제공된다. 검증 검정의 사이클 임계치 값(Ct)이 시스템에 의해 분석되고 비교되어, 장비가 샘플의 2개의 수량을 충분히 구별할 수 있는지가 결정된다. 검증 검정의 일례는 RNase P 검정이다. 이러한 예에서, 시스템은, 5000개 및 1000개의 게놈 카피의 RNase P 샘플에 대해 생성된 Ct 값을 결정하여, 5000개 및 1000개의 게놈 카피로부터의 데이터가 충분히 구별 가능한지 결정한다. 본원에 기재된 구현예에 따르면, 충분히 구별 가능하다는 것은 적어도 3-표준 편차(3σ)(-99.7%)가 5000개 및 10000개의 게놈 카피 증폭 데이터를 분리한다는 것을 의미한다. 다양한 구현예에 따른 방법을 도 1 및 도2 를 참조하여 이하 추가로 설명한다.
도 1은 본원에 기재된 다양한 구현예에 따른, 장비를 검증하기 위한 예시적인 방법을 도시한다. 일반적으로, 검증 검정 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성함으로써 단계(102)에서 시작되고, 각각의 증폭 곡선은 플레이트 상의 웰에 대응한다.
플레이트는 복수의 웰을 포함한다. 일부 예에서, 플레이트는 96개의 웰을 포함한다. 다른 예에서, 플레이트는 384개의 웰을 포함한다. 플레이트의 일부 웰은 제1 수량의 샘플을 함유할 수 있고, 플레이트의 일부 다른 웰은 제2 수량의 샘플을 함유할 수 있다. 제1 수량과 제2 수량은 서로 다르다. 본원에 기재된 다양한 구현예서 제2 수량은 제1 수량을 초과한다. 일부 구현예에서 제2 수량은 제1 수량과 1.5배 차이가 날 수 있다. 다른 구현예에서, 제2 수량은 제1 수량과 2배 차이가 날 수 있다. 본원에 기재된 다양한 구현예에 따르면, 제2 수량은 제1 수량과 임의의 배수 차이가 날 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 수량은 웰당 5000개의 게놈 카피일 수 있고, 제2 수량은 웰당 10000개의 게놈 카피일 수 있다.
도 1을 참조하면, 단계(104)에서, 복수의 생성된 증폭 곡선에 기초하여 복수의 형광 임계치가 결정된다. 복수의 증폭 곡선의 지수 영역들을 비교하여 지수 영역이 속하는 형광 값의 범위를 결정한다. 예를 들어, 복수의 증폭 곡선에서 지수 영역 하단의 최저 형광 값으로부터 지수 영역 상단의 최고 형광 값까지의 형광 값의 범위가 결정된다. 형광 값 범위는 본 교시내용의 구현예에 따라 복수의 증폭 곡선의 자동 분석에 사용되어 장비를 검증한다.
도 3을 참조하면, 복수의 증폭 곡선 및 형광 값의 범위와 해당 사이클 임계치의 결정이 도시되어 있다. 복수의 증폭 곡선 각각은 곡선의 지수 영역을 포함한다. 축(302)은 형광 값을 나타낸다. 축(304)은 사이클 수를 나타낸다. 형광 범위(306)는 복수의 지수 영역 중 하나의 지수 영역의 결정된 하단의 최저 형광 값으로부터 복수의 지수 영역 중 하나의 지수 영역의 결정된 상단의 최고 형광 값까지의 형광 값의 범위를 나타낸다. 다양한 구현예에 따르면, 형광 값의 범위는 소정의 개수로 균등하게 분할되어 시스템에 의한 자동 분석을 위한 형광 값의 세트를 생성한다. 일례에서, 형광 값의 범위(306)는 100개로 분할되어 형광 임계치의 세트에 대한 100개의 형광 값을 결정한다. 일부 구현예에서, 상단 5개의 형광 값 및 하단 5개의 형광 값은 폐기되어 90개의 형광 임계치의 세트로 분석이 진행된다.
도 1을 다시 참조하면, 단계(106)에서, 형광 값의 세트의 각각의 형광 값에 대해, 샘플의 제1 수량을 함유한 웰로부터 생성된 복수의 증폭 곡선 각각에 대한 사이클 임계치(Ct)가 결정된다. 유사하게, 형광 값의 세트의 각각의 형광 값에 대해, 샘플의 제2 수량을 함유한 웰로부터 생성된 복수의 증폭 곡선 각각에 대한 사이클 임계치(Ct)가 결정된다.
단계(108)에서, 세트의 형광 값 각각에 대한 제1 수량 및 제2 수량의 Ct 값을 이용하여, 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지가 결정된다. 다양한 구현예에 따르면, 충분히 구별 가능하다는 것은, 식 (1)을 이용하여, 세트의 형광 값들 중 적어도 하나에 대해 양의 결과를 산출한다는 것을 의미한다:
Figure 112017086536729-pct00001
(1)
본원에 기재된 구현예에 따르면, 식 1은 제1 수량과 제2 수량(quant2는 quant1을 초과함)이 충분히 구별 가능한지 여부를 결정한다. 충분히 구별 가능하다는 것은 적어도 3-표준 편차(3σ)(-99.7%)가 제1 수량 및 제2 수량의 Ct 값을 분리한다는 것을 의미한다. 수량이 충분히 구별 가능하다는 것이 확인되면, 장비가 검증되었다는 표시가 사용자에게 제공된다.
도 2는 본원에 기재된 다양한 구현예에 따른, 장비를 검증하기 위한 다른 예시적인 방법을 도시한다. 단계(202)에서, 검증 플레이트의 웰 내에 포함된 복수의 샘플로부터 증폭 데이터가 수신된다. 검증 플레이트의 일부 웰은 제1 수량의 샘플을 함유한다. 검증 플레이트의 일부 다른 웰은 제2 수량의 샘플을 함유한다. 제1 수량과 제2 수량은 서로 다르다. 본원에 기재된 다양한 구현예서 제2 수량은 제1 수량을 초과한다. 일부 구현예에서 제2 수량은 제1 수량과 1.5배 차이가 날 수 있다. 다른 구현예에서, 제2 수량은 제1 수량과 2배 차이가 날 수 있다. 본원에 기재된 다양한 구현예에 따르면, 제2 수량은 제1 수량과 임의의 배수 차이가 날 수 있다. 일부 구현예에서, 제1 수량은 웰당 5000개의 게놈 카피일 수 있고, 제2 수량은 웰당 10000개의 게놈 카피일 수 있다.
단계(104)에서, 복수의 생성된 증폭 곡선에 기초하여 형광 임계치의 제1 세트가 결정된다. 복수의 증폭 곡선의 지수 영역들을 비교하여 지수 영역이 속하는 형광 값의 범위를 결정한다. 예를 들어, 복수의 증폭 곡선에서 지수 영역 하단의 최저 형광 값으로부터 지수 영역 상단의 최고 형광 값까지의 형광 값의 범위가 결정된다. 형광 값 범위는 본 교시내용의 구현예에 따라 복수의 증폭 곡선의 자동 분석에 사용되어 장비를 검증한다.
다양한 구현예에 따르면, 형광 값의 범위는 소정의 개수로 균등하게 분할되어 시스템에 의한 자동 분석을 위한 형광 값의 세트를 생성한다. 일례에서, 형광 값의 범위(306)는 100개로 분할되어 형광 임계치의 세트에 대한 100개의 형광 값을 결정한다. 일부 구현예에서, 상단 5개의 형광 값 및 하단 5개의 형광 값은 폐기되어 90개의 형광 임계치의 세트로 분석이 진행된다.
단계(206)에서, 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제 1 수량에 대응하는 증폭 곡선에 대한 Ct 값의 제1 세트가 결정된다. 유사하게, 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제 1 수량에 대응하는 증폭 곡선에 대한 Ct 값의 제2 세트가 결정된다. 세트 내의 모든 형광 임계치에 대해 이것이 반복된다.
일부 구현예에서, 소정의 개수의 이상치 Ct 값은 추가 계산이 수행되기 전에 Ct 값의 각각의 세트로부터 제거된다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 96 웰 플레이트가 사용되는 경우, Ct 값의 각각의 세트로부터 6개의 이상치가 제거된다. 이상치는 Ct 값의 세트의 평균 값으로부터 가장 먼 Ct 값이다. 다른 구현예에서, 364 웰 플레이트가 사용되는 경우, Ct 값의 각각의 세트로부터 10개의 이상치가 제거된다. 이상치가 제거된 후, 각각의 세트의 남은 Ct 값이 방법의 나머지 단계에서 사용된다.
단계(208)에서, Ct 값의 각각의 세트에 대해, 평균이 계산된다. 다시 말해, 단계(204)에서 결정된 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량 증폭 곡선에 대한 제1 Ct 평균이 계산되고, 제2 수량 증폭 곡선에 대한 제2 Ct 평균이 계산된다.
단계(208)과 유사하게, 단계(210)에서, Ct 값의 각각의 세트의 3-표준 편차가 계산된다. 다시 말해, 단계(204)에서 결정된 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량 증폭 곡선에 대한 제1 3-표준 편차가 계산되고, 제2 수량 증폭 곡선에 대한 제2 3-표준 편차가 계산된다.
제1 수량 및 제2 수량의 Ct값이 충분히 구별 가능한지 결정하기 위해, 다양한 구현예에 따른, 형광 값에서의 Ct 값들이 비교된다. 다양한 구현예에 따르면, 비교를 위해 식 (1)이 사용된다.
Figure 112017086536729-pct00002
(1)
본원에 기재된 구현예에 따르면, 식 1은 제1 수량과 제2 수량(quant2는 quant1을 초과함)이 충분히 구별 가능한지 여부를 결정한다. 충분히 구별 가능하다는 것은 적어도 3-표준 편차(3σ)(-99.7%)가 제1 수량 및 제2 수량의 Ct 값을 분리한다는 것을 의미한다.
단계(214)에서, 세트의 모든 형광 임계치에 대한 식(2)의 결과들이 비교되어 최대 값이 결정된다. 최대 값이 양수인 경우, 장비는 제1 수량과 제2 수량을 충분히 구별할 수 있으며, 장비가 검증되었다는 표시가 단계(216)에서 사용자에게 제공된다. 최대 값이 음수인 경우, 장비는 제1 수량과 제2 수량을 충분히 구별할 수 없으며, 장비가 검증에 실패했다는 표시가 단계(218)에서 사용자에게 제공된다.
도 4는 본원에 기재된 다양한 구현예에 따른, 장비의 검증을 위한 시스템(400)을 도시한다. 시스템(400)은 PCR 장비 인터페이스(402), Ct 데이터베이스(404), 디스플레이 엔진/GUI(406), Ct 산출부(408), 및 검증부(410)를 포함한다.
PCR 장비 인터페이스(402)는 PCR 장비로부터 증폭 데이터를 수신하여 증폭 곡선을 생성한다. 전술된 바와 같이, PCR 장비는 검증 플레이트에 들어있는 샘플을 증폭한다. 검증 플레이트는 제1 수량의 샘플을 함유하는 일부 웰 및 제2 수량의 샘플을 포함하는 다른 일부 웰을 포함한다. 샘플의 증폭으로부터 생성된 형광 데이터가 PCR 장비 인터페이스(402)에 의해 수신된다.
도 1 및 도 2를 각각 참조하여, 단계(104) 및 단계(204)에서와 같이 형광 임계치의 세트가 결정된 후, Ct 산출부(406)는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선에 대응하는 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트를 각각 산출한다. 형광 임계치의 세트에서의 각각의 형광 임계치에 대해 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트가 계산된다. 복수 세트의 Ct값이 Ct 데이터베이스(404)에 저장된다.
검증부(410)는 도 1의 단계(108) 및 도 2의 단계(210) 및 단계(212)에서 설명되는 바와 같이 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 여부를 결정한다.
디스플레이 엔진/GUI는 사용자에게 복수의 증폭 곡선을 디스플레이한다. 또한, 검증부(410)가 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 여부를 결정한 후, 디스플레이 엔진/GUI(406)는 사용자에게 검증 또는 검증 실패의 표시를 디스플레이한다.
또한, 최적의 형광 임계치가 결정될 수 있다. 또한, 다양한 구현예에 따르면, 최적의 형광 임계치는,
Figure 112017086536729-pct00003
와
Figure 112017086536729-pct00004
사이에 최대 분리를 가져오는 Ct 값을 선택함으로써 결정될 수 있다. 또한, 최적의 형광 임계치는 결정된 이상치의 개수가 가장 적은 Ct 값에 기초하여 선택될 수도 있다. 또한, 최적의 형광 임계치는 결정된 이상치의 개수가 가장 적고
Figure 112017086536729-pct00005
와
Figure 112017086536729-pct00006
사이에 최대 분리를 가져오는 Ct 값에 기초하여 선택될 수도 있다.
컴퓨터 구현 시스템
당업자는 여러 구현예들의 작동이 하드웨어, 소프트웨어, 펌웨어, 또는 이들의 조합을 이용하여 적절히 구현될 수 있음을 인식할 것이다. 예를 들어, 일부 프로세스는 소프트웨어, 펌웨어, 또는 하드웨어에 내장된 로직의 제어 하에 프로세서 또는 다른 디지털 회로를 이용하여 수행될 수 있다. (본원에서 용어 “로직”은 언급된 기능을 실행하는 것으로 당업자가 인식하는, 고정 하드웨어, 프로그램 가능한 로직 및/또는 이들의 적절한 조합을 말한다.) 소프트웨어 및 펌웨어는 비일시적 컴퓨터 판독 가능 매체 상에 저장될 수 있다. 일부 다른 프로세스는, 당업자에게 잘 알려진 바와 같이, 아날로그 회로를 이용하여 구현될 수 있다. 또한, 통신 구성 요소와 더불어 메모리 또는 다른 기억 장치가 본 발명의 구현예들에서 이용될 수 있다.
도 5는 다양한 구현예에 따른, 프로세싱 기능을 수행하도록 이용될 수 있는 컴퓨터 시스템(500)을 도시한 블록도이다. 실험을 수행하기 위한 장비가 예시적인 컴퓨팅 시스템(500)에 연결될 수 있다. 컴퓨팅 시스템(500)은 하나 이상의 프로세서, 예컨대 프로세서(504)를 포함할 수 있다. 프로세서(504)는, 예를 들어 마이크로프로세서, 제어기, 또는 다른 제어 로직과 같은 일반 또는 범용 프로세싱 엔진을 사용하여 구현될 수 있다. 이러한 예에서, 프로세서(504)는 버스(502) 또는 다른 통신 매체에 연결된다.
또한, 도 5의 컴퓨팅 시스템(500)은 랙(rack)-장착 컴퓨터, 메인프레임, 수퍼컴퓨터, 서버, 클라이언트, 데스크톱 컴퓨터, 랩톱 컴퓨터, 태블릿 컴퓨터, 휴대용 컴퓨팅 장치(예컨대, PDA, 셀룰러폰, 스마트폰, 팜톱 등), 클러스터 그리드, 넷북, 임베디드 시스템, 또는 주어진 애플리케이션 또는 환경에 대해 바람직하거나 적절할 수 있는 임의의 다른 타입의 전용 또는 범용 컴퓨팅 장치와 같은 다수의 형태 중 임의의 형태로 구체화될 수 있는 것을 이해해야 한다. 또한, 컴퓨팅 시스템(500)은 클라이언트/서버 환경 및 하나 이상의 데이터베이스 서버를 비롯한 종래의 네트워크 시스템, 또는 LIS/LIMS 인프라구조와의 통합을 포함할 수 있다. 근거리 통신망(LAN) 또는 광역 통신망(WAN)을 포함하고 무선 및/또는 유선 컴포넌트를 포함하는 다수의 종래의 네트워크 시스템은 당업계에 공지되어 있다. 또한, 클라이언트/서버 환경, 데이터베이스 서버, 및 네트워크가 당업계에 문서로 잘 기록되어 있다. 본원에 기재된 다양한 구현예에 따르면, 컴퓨팅 시스템(500)은 분산형 네트워크 내의 하나 이상의 서버에 접속하도록 구성될 수 있다. 컴퓨팅 시스템(500)은 분산형 네트워크로부터 정보 또는 업데이트를 수신할 수 있다. 컴퓨팅 시스템(500)은 분산형 네트워크에 접속된 다른 클라이언트에 의해 액세스될 수 있는 분산형 네트워크 내에 저장될 정보를 전송할 수도 있다.
컴퓨팅 시스템(500)은 정보 통신을 위한 버스(502) 또는 다른 통신 메커니즘, 및 버스(502)와 연결된 정보 처리용 프로세서(504)를 포함한다.
컴퓨팅 시스템(500)은 또한, 프로세서(504)에 의해 실행될 명령어를 저장하기 위해 버스(502)에 연결되는 메모리(506)(랜덤 액세스 메모리(RAM) 또는 다른 동적 메모리일 수 있음)를 포함한다. 메모리(506)는 또한, 프로세서(504)에 의해 실행될 명령어의 실행 동안에 일시적 변수 또는 다른 중간 정보를 저장하는 데 사용될 수 있다. 컴퓨팅 시스템(500)은 정적 정보 및 프로세서(504)를 위한 명령어를 저장하기 위한 것으로서 버스(502)에 연결된 읽기 전용 메모리(ROM)(508) 또는 다른 정적 저장 장치를 더 포함한다.
컴퓨팅 시스템(500)은 또한, 정보 및 명령어를 저장하기 위해 제공되고 버스(502)에 연결되는 저장 장치(510), 예컨대 자기 디스크, 광 디스크, 또는 솔리드 스테이트 드라이브(SSD)를 포함할 수 있다. 저장 장치(510)는 미디어 드라이브 및 착탈식 저장 인터페이스를 포함할 수 있다. 미디어 드라이브는 고정식 또는 착탈식 저장 매체를 지원하는 드라이브 또는 다른 기구, 예컨대 하드 디스크 드라이브, 플로피 디스크 드라이브, 자기 테이프 드라이브, 광 디스크 드라이브, CD 또는 DVD 드라이브(R 또는 RW), 플래시 드라이브, 또는 기타 착탈식 또는 고정식 미디어 드라이브를 포함할 수 있다. 이들 예가 나타내는 바와 같이, 저장 매체는 특정 컴퓨터 소프트웨어, 명령어, 또는 데이터를 저장한 컴퓨터 판독 가능 저장 매체를 포함할 수 있다.
대안적 구현예에서, 저장 장치(510)는 컴퓨터 프로그램 또는 다른 명령어 또는 데이터가 컴퓨팅 시스템(500)에 로딩될 수 있게 하는 다른 유사한 수단을 포함할 수 있다. 이러한 수단은, 예를 들어, 착탈식 저장 유닛과 인터페이스, 예컨대 프로그램 카트리지와 카트리지 인터페이스, 착탈식 메모리(예를 들어, 플래시 메모리 또는 다른 착탈식 메모리 모듈)와 메모리 슬롯, 및 소프트웨어 및 데이터가 저장 장치(510)에서 컴퓨팅 시스템(500)로 전송될 수 있게 하는 다른 착탈식 저장 유닛과 인터페이스를 포함할 수 있다.
컴퓨팅 시스템(500)은 또한 통신 인터페이스(518)를 포함할 수 있다. 통신 인터페이스(518)는 컴퓨팅 시스템(500)과 외부 장치 간에 소프트웨어 및 데이터가 전송될 수 있도록 하는 데 사용될 수 있다. 통신 인터페이스(518)의 예로는 모뎀, 네트워크 인터페이스(예컨대, 이더넷 또는 다른 NIC 카드), (예를 들어 USB 포트, RS-232C 직렬 포트와 같은) 통신 포트, PCMCIA 슬롯 및 카드, 블루투스 등이 포함될 수 있다. 통신 인터페이스(518)를 통해 전송되는 소프트웨어 및 데이터는 신호 형태로서, 통신 인터페이스(518)에 의해 수신될 수 있는 전자, 전자기, 광학, 또는 기타 신호일 수 있다. 이들 신호는 채널, 예컨대 무선 매체, 유선 또는 케이블, 광섬유, 또는 다른 통신 매체를 통해 통신 인터페이스(518)에 의해 송신 및 수신될 수 있다. 채널의 일부 예로는 전화선, 셀룰러폰 링크, RF 링크, 네트워크 인터페이스, 근거리 또는 광역 통신망, 및 다른 통신 채널이 포함된다.
컴퓨팅 시스템(500)은 버스(502)를 통해, 음극선관(CRT) 또는 액정 디스플레이(LCD)와 같이 컴퓨터 사용자에게 정보를 표시하기 위한 디스플레이(512)에 연결될 수 있다. 문자/숫자 및 다른 키를 포함하는 입력 장치(514)는 예를 들어, 정보 및 명령 선택을 프로세서(504)에 전달하기 위해 버스(502)에 연결된다. 입력 장치는 터치스크린 입력 기능을 가지고 구성된 디스플레이, 예컨대 LCD 디스플레이일 수도 있다. 다른 종류의 사용자 입력 장치는 방향 정보 및 명령 선택을 프로세서(504)에 전달하고 디스플레이(512) 상의 커서 이동을 제어하기 위한 마우스, 트랙볼 또는 커서 방향 키와 같은 커서 제어부(516)이다. 일반적으로 이러한 입력 장치는 2개의 축, 제1 축(예컨대, x) 및 제2 축(예컨대, y)에서 장치가 평면에서의 위치를 특정할 수 있도록 하는 2개의 자유도를 갖는다. 컴퓨팅 시스템(500)은 데이터 처리를 제공하고, 이러한 데이터에 대한 신뢰 수준을 제공한다. 본 교시내용의 구현예의 특정 구현에 따라, 데이터 처리 및 신뢰도 값은 메모리(506)에 포함된 하나 이상의 명령어의 하나 이상의 시퀀스를 실행하는 프로세서(504)에 응답하여 컴퓨팅 시스템(500)에 의해 제공된다. 이러한 명령어는 저장 장치(510)와 같은 또 다른 컴퓨터 판독 가능 매체로부터 메모리(506)로 읽혀질 수 있다. 메모리(506)에 포함된 명령어 시퀀스의 실행은 프로세서(504)로 하여금 본원에 기재된 프로세스 상태를 수행하도록 한다. 대안적으로, 소프트웨어 명령어 대신 또는 이와 함께 하드웨어에 내장 회로를 사용하여 본 교시내용의 구현예를 구현할 수 있다. 따라서, 본 교시내용의 구현예의 구현이 하드웨어 회로 및 소프트웨어의 임의의 특정 조합으로 제한되는 것은 아니다.
본원에 사용된 용어 "컴퓨터 판독 가능 매체" 및 "컴퓨터 프로그램 제품"은, 일반적으로, 실행을 위해 하나 이상의 시퀀스 또는 하나 이상의 명령어를 프로세서(504)에 제공하는 데 수반되는 임의의 매체를 지칭한다. 일반적으로 "컴퓨터 프로그램 코드"(컴퓨터 프로그램 또는 다른 그룹으로 그룹화될 수 있음)로 지칭되는 이러한 명령어는, 실행될 때, 컴퓨팅시스템(500)이 본 발명의 구현예의 특징 또는 기능을 수행하게 할 수 있다. 이들 및 다른 형태의 비일시적 컴퓨터 판독 가능 매체는 비휘발성 매체, 휘발성 매체, 및 전송 매체를 포함할 수 있지만 이로 한정되지 않는다. 비휘발성 매체는, 예를 들어 솔리드 스테이트, 광 또는 자기 디스크, 예컨대 저장 장치(510)를 포함한다. 휘발성 매체는 동적 메모리, 예컨대 메모리(506)를 포함할 수 있다. 전송 매체는 버스(502)를 포함하는 전선을 포함하여, 동축 케이블, 구리선, 및 광섬유를 포함할 수 있다.
컴퓨터 판독 가능 매체의 일반적인 형태는 예를 들어, 플로피 디스크, 플렉시블 디스크, 하드 디스크, 자기 테이프, 또는 임의의 다른 자기 매체, CD-ROM, 임의의 다른 광학 매체, 펀치 카드, 종이 테이프, 홀 패턴을 갖는 임의의 다른 물리적 매체, RAM, PROM, 및 EPROM, FLASH-EPROM, 임의의 다른 메모리 칩 또는 카트리지, 이하에 기술되는 바와 같은 반송파, 또는 컴퓨터가 판독할 수 있는 임의의 다른 매체를 포함한다.
다양한 형태의 컴퓨터 판독 가능 매체가 실행을 위한 프로세서(504)에 하나 이상의 명령의 하나 이상의 시퀀스를 전달하는 데 관여할 수 있다. 예를 들어, 초기에 원격 컴퓨터의 자기 디스크 상에 명령어가 전달될 수 있다. 원격 컴퓨터는 동적 메모리에 명령을 로딩할 수 있고, 모뎀을 이용하여 전화선을 통해 명령어를 전송할 수 있다. 컴퓨팅 시스템(500)에 접속된 모뎀은 전화선 상의 데이터를 수신하고, 적외선 송신기를 이용하여 데이터를 적외선 신호로 변환할 수 있다. 버스(502)에 연결된 적외선 검출기는 적외선 신호로 전달되는 데이터를 수신하고 이 데이터를 버스(502) 상에 배치할 수 있다. 버스(502)는 데이터를 메모리(506)에 전달하고, 프로세서(504)는 메모리로부터 명령어를 검색하고 실행한다. 메모리(506)에 의해 수신된 명령어는 선택적으로 프로세서(504)에 의한 실행 전 또는 후에 저장 장치(510)에 저장될 수 있다.
명료성을 위해, 위의 설명은 상이한 기능 유닛들 및 프로세서들을 기준으로 본 발명의 구현예를 기술했음을 이해할 것이다. 그러나, 본 발명을 벗어나지 않고 상이한 기능 유닛들, 프로세서들, 또는 도메인들 사이의 임의의 적합한 기능 분포가 이용될 수 있음은 명백할 것이다. 예를 들어, 개별 프로세서 또는 제어기에 의해 수행되는 것으로 예시된 기능성이 동일한 프로세서 또는 제어기에 의해 수행될 수 있다. 따라서, 특정 기능 유닛에 대한 언급은 엄격한 논리적 또는 물리적 구조 또는 조직을 나타내는 것이 아니라, 단지, 기술된 기능을 제공하기 위한 적합한 수단에 대한 언급으로만 이해되어야 한다.
분산형 시스템
전형적인 인터넷 네트워크 구성(600)의 요소 중 일부가 도 6에 도시되어 있고, 도면에서, 가능하게는 원격 지역 사무실에 있는 다수의 클라이언트 머신(602)은 자체가 일부 인터넷 서비스 제공자(ISP) 접속(610)을 통해 인터넷(608)에 접속되는 게이트웨이/허브/터널-서버/기타(610)에 접속된 것으로 도시되어 있다. ISP 접속(614)을 통해 인터넷(608)에 유사하게 접속된 다른 가능한 클라이언트(612)도 또한 도시되어 있고, 이때 이들 유닛은 가능하게는 중앙 연구실 또는 사무실로, 예를 들어 ISP 접속(616)을 통해 게이트웨이/터널-서버(618)로 통신하고, 게이트웨이/터널-서버(1318)는 다른 허브/라우터(626)를 통해 다양한 국부적 클라이언트(630)에 접속될 수 있는 다양한 기업 애플리케이션 서버(622)에 접속된다(620). 이들 서버(622) 중 임의의 것은, 아래에 더 충분히 기술되는 바와 같이, 본 발명에서 기술되는 바와 같은, 잠재적 콘텐츠 관리 및 전달 설계 솔루션의 분석을 위한 개발 서버로서 기능할 수 있다.
본 교시내용은 실시간 중합효소 연쇄반응(RT-PCR) 장비를 참조하여 설명된다. 특히, 본 교시내용의 일 구현예는 웰 플레이트의 광학 이미징을 이용하는 RT-PCR 장비에 대해 구현된다. 이러한 장비는 분석 목적의 복수의 샘플 또는 스팟으로부터 신호를 동시에 측정할 수 있고, 대개 보정을 필요로 하는데, 이러한 보정은 관심 영역(ROI)을 식별하는 단계, 다성분 분석을 위한 백그라운드 신호, 균일성 및 순수 염료 스펙트럼 보정을 결정하는 단계를 포함하는 단계들을 포함하지만, 이에 한정되는 것은 아니다. 보정은 또한, 결과가 예상되는 알려진 샘플 플레이트를 이용한 RT-PCR 검증 반응을 수반할 수 있다. 본 교시내용이 RT-PCR 장비에 관한 예들로 설명되었지만, 그 원칙은 결과의 정확성 및/또는 최적성을 보장하기 위해 보정 및 검증을 필요로 할 수 있는 다른 형태의 실험실 장비에 폭넓게 적용될 수 있다는 것을 당업자라면 이해할 것이다.
PCR 장비
전술된 바와 같이, 다양한 구현예에 따라 활용될 장비는 중합효소 연쇄반응(PCR) 장비이지만, 이로 한정되는 것은 아니다. 도 7는 본 교시내용의 구현예가 구현될 수 있는 PCR 장비(700)를 도시한 블록도이다. PCR 장비(700)는 기판(미도시) 내에 포함된 복수의 샘플(712) 위에 놓인 가열된 커버(710)를 포함할 수 있다. 다양한 구현예에서, 기판은 복수의 샘플 영역을 갖는 유리 또는 플라스틱 슬라이드일 수 있고, 샘플 영역은 샘플 영역과 가열된 커버(710) 사이에 커버를 갖는다. 기판의 일부 예는 다중-웰 플레이트, 예컨대 표준 마이크로역가(microtiter) 96-웰, 384-웰 플레이트, 또는 마이크로카드, 또는 실질적으로 평면인 지지부, 예컨대 유리 또는 플라스틱 슬라이드를 포함할 수 있지만, 이들로 한정되지 않는다. 기판의 다양한 구현예에서의 반응 부위는 기판의 표면 상에 형성된 규칙적 또는 불규칙적 어레이로 패턴화된 함몰부(depression), 압입부(indentation), 융부(ridge), 및 이들의 조합을 포함할 수 있다. PCR 장비의 다양한 구현예는 샘플 블록(714), 가열 및 냉각을 위한 요소(716), 열 교환기(718), 제어 시스템(720), 및 사용자 인터페이스(722)를 포함한다. 본 교시내용에 따른 열 블록 조립체의 다양한 구현예는 도 7의 PCR 장비(700)의 컴포넌트(714 내지 718)를 포함한다.
실시간 PCR 장비(700)는 광학 시스템(724)을 갖는다. 도 7에서, 광학 시스템(724)은 기판 내의 샘플(712)로부터 전자기 에너지를 수신하기 위한, 전자기 에너지를 방출하는 조명원(미도시), 광학 센서, 검출기, 또는 이미저(미도시), 및 각각의 DAN 샘플의 전자기 에너지를 이미저로 유도하는 데 사용되는 광학기기(740)를 가질 수 있다. 도 7의 PCR 장비(700) 및 도 7의 실시간 PCR 장비(700)의 구현예에 대해, 제어 시스템(720)은 검출 시스템, 가열된 커버, 및 열 블록 조립체의 기능을 제어하는 데 사용될 수 있다. 제어 시스템(720)은 도 7의 PCR 장비(700) 및 도 7의 실시간 PCR 장비(700)의 사용자 인터페이스(722)를 통해 최종 사용자가 액세스할 수 있다. 또한, 도 7에 도시된 바와 같은 컴퓨터 시스템(700)은 사용자 인터페이스 기능뿐 아니라 도 7의 PCR 장비(700)의 기능의 제어를 제공하도록 하는 역할을 할 수 있다. 추가로, 도 5의 컴퓨터 시스템(500)은 데이터 처리를 제공할 수 있고, 준비 기능을 디스플레이 및 보고할 수 있다. 이후 더 상세히 논의되는 바와 같이, 모든 그러한 장비 제어 기능은 PCR 장비에 대해 국부적으로 전용될 수 있고, 또는 도 5의 컴퓨터 시스템(500)은 제어, 분석, 및 보고 기능 중 일부 또는 전부의 원격 제어를 제공할 수 있다.
이미징을 위한 광학 시스템
도 8은 본원에 기재된 구현예에 따른, 이미징에 사용될 수 있는 예시적인 광학 시스템(800)을 도시한다. 광학 시스템(800)이 예시적인 광학 시스템임을 인식해야 하고, 당업자는 다른 광학 시스템이 관심 객체의 이미지를 캡처하는 데 사용될 수 있음을 인식할 것이다. 다양한 구현예에 따르면, 관심 객체는, 예를 들어 본원에 기재된 보정 플레이트와 같은 샘플 홀더일 수 있다. 카메라(804) 내에 포함된 광학 센서(802)는, 예를 들어 관심 객체(810)를 이미징할 수 있다. 광학 센서(802)는 CCD 카메라일 수 있고, 카메라(804)는 CCD 카메라일 수 있다. 또한, 광학 센서는 카메라 렌즈(806)를 포함한다.
관심 객체에 따라, 다양한 구현예에 따라 관심 객체(810)를 이미징하기 위해 방출 필터(808)가 선택될 수 있다. 방출 필터(808)는 다른 구현예에서 관심 객체(801)로부터 방출된 형광 방출을 이미징하도록 변경될 수 있다.
광학 시스템(800)은 반사광원(812)을 사용하여 관심 객체(810)를 이미징할 수 있다. 광원(812)으로부터의 광은 빔스플리터(820)에 의해 관심 객체(810)에 반사되기 전에 비구면체(814), 포커서(focuser)/다이버저(diverger)(816), 및 여기 필터(818)를 통해 필터링될 수 있다. 광학 시스템(800)은, 또한, 필드 렌즈(822)를 포함할 수 있다. 관심 객체에 따라, 다양한 구현예에 따라 관심 객체(810)를 이미징하기 위해 여기 필터(818)가 선택 또는 변경될 수 있다.
실시예 1에서, 장비를 검증하기 위한 방법이 제공된다. 방법은, 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하는 단계(검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함); 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하는 단계; 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트, 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하는 단계; 및 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하는 단계를 포함한다.
대안적 실시예 2에서, 실시예 1의 방법은 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 경우에 장비가 검증된다는 표시를 디스플레이하는 단계를 더 포함한다.
대안적 실시예 3에서, 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하는 단계가 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트의 평균(μ) 및 표준 편차(σ)를 결정하는 단계를 포함하는 실시예 1의 방법이 제공된다.
대안적 실시예 4에서, 하기 식의 결과가 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 실시예 3의 방법이 제공된다:
Figure 112017086536729-pct00007
.
대안적 실시예 5에서, 샘플은 RNase P 유전자인 실시예 1의 방법이 제공된다.
대안적 실시예 6에서, 제2 수량과 제1 수량은 서로 다른 실시예 1의 방법이 제공된다.
대안적 실시예 7에서, 제2 수량과 제1 수량은 2배 차이가 나는 실시예 1의 방법이 제공된다.
대안적 실시예 8에서, 식의 결과가 적어도 하나의 형광 임계치에 대해 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 실시예 1의 방법이 제공된다.
대안적 실시예 9에서, Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트로부터 소정 개수의 이상치를 폐기하는 단계를 더 포함하는 실시예 1의 방법이 제공된다.
대안적 실시예 10에서, 형광 임계치의 세트는 90개의 형광 임계치를 포함하는 실시예 1의 방법이 제공된다.
실시예 11에서, 장비를 검증하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어로 인코딩된 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다. 명령어는, 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하기 위한 명령어(검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함); 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하기 위한 명령어; 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트, 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하기 위한 명령어; 및 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 명령어를 포함한다.
대안적 실시예 12에서, 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 경우에 장비가 검증된다는 표시를 디스플레이하기 위한 명령어를 더 포함하는 실시예 11의 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다.
대안적 실시예 13에서, 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 명령어가 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트의 평균(μ) 및 표준 편차(σ)를 결정하는 것을 포함하는 실시예 11의 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다.
대안적 실시예 14에서, 하기 식의 결과가 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 실시예 13의 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다:
Figure 112017086536729-pct00008
.
대안적 실시예 15에서, 샘플은 RNase P 유전자인 실시예 11의 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다.
대안적 실시예 16에서, 제2 수량과 제1 수량은 서로 다른 실시예 11의 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다.
대안적 실시예 17에서, 제2 수량과 제1 수량은 2배 차이가 나는 실시예 11의 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다.
대안적 실시예 18에서, 식의 결과가 적어도 하나의 형광 임계치에 대해 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 실시예 14의 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다.
대안적 실시예 19에서, Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트로부터 소정 개수의 이상치를 폐기하는 단계를 더 포함하는 실시예 11의 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다.
대안적 실시예 20에서, 형광 임계치의 세트는 90개의 형광 임계치를 포함하는 실시예 11의 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다.
실시예 21에서, 장비를 검증하기 위한 시스템이 제공된다. 시스템은 프로세서; 및 메모리를 포함하고, 메모리는, 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어(검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함); 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어; 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트, 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어; 및 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어를 저장하도록 구성된다.
대안적 실시예 22에서, 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 경우에 장비가 검증된다는 표시를 디스플레이하기 위한 명령어를 더 포함하는 실시예 21의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 23에서, 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 명령어가 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트의 평균(μ) 및 표준 편차(σ)를 결정하는 것을 포함하는 실시예 21의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 24에서, 하기 식의 결과가 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 실시예 23의 시스템이 제공된다:
Figure 112017086536729-pct00009
.
대안적 실시예 25에서, 샘플은 RNase P 유전자인 실시예 21의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 26에서, 제2 수량과 제1 수량은 서로 다른 실시예 21의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 27에서, 제2 수량과 제1 수량은 2배 차이가 나는 실시예 21의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 28에서, 식의 결과가 적어도 하나의 형광 임계치에 대해 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 실시예 24의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 29에서, 메모리가 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트로부터 소정 개수의 이상치를 폐기하기 위한 명령어를 더 포함하는 실시예 21의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 30에서, 형광 임계치의 세트는 90개의 형광 임계치를 포함하는 실시예 21의 시스템이 제공된다.
실시예 31에서, 장비를 검증하기 위한 시스템이 제공된다. 시스템은 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하도록 구성된 PCR 장비 인터페이스(검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함); (사이클 임계치) Ct 산출부로서, 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하도록, 그리고 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct값의 제1 세트, 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하도록 구성된 Ct 산출부; 세트의 각각의 형광 임계치에 대한 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트를 저장하도록 구성된 Ct 데이터베이스; 및 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하도록 구성된 검증부를 포함한다.
대안적 실시예 32에서, 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 경우에 장비가 검증된다는 표시를 디스플레이하도록 구성된 디스플레이 엔진을 더 포함하는 실시예 31의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 33에서, 검증부는, 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위해, Ct 값의 제1 세트와 제2 세트의 평균(μ) 및 표준 편차(σ)를 결정하도록 추가로 구성된 실시예 31의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 34에서, 검증부는 하기 식의 결과가 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 것으로 결정하는 실시예 33의 시스템이 제공된다:
Figure 112017086536729-pct00010
.
대안적 실시예 35에서, 샘플은 RNase P 유전자인 실시예 31의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 36에서, 제2 수량과 제1 수량은 서로 다른 실시예 31의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 37에서, 제2 수량과 제1 수량은 2배 차이가 나는 실시예 31의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 38에서, 검증부는 식의 결과가 적어도 하나의 형광 임계치에 대해 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 것으로 결정하는 실시예 37의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 39에서, Ct는 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트로부터 소정 개수의 이상치를 폐기하도록 추가로 구성된 실시예 31의 시스템이 제공된다.
대안적 실시예 40에서, 형광 임계치의 세트는 90개의 형광 임계치를 포함하는 실시예 31의 시스템이 제공된다.
실시예 41에서, 장비를 검증하기 위한 방법이 제공된다. 방법은, 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하는 단계(검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함); 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하는 단계; 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트, 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하는 단계; 및 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하는 단계를 포함한다.
실시예 42에서, 장비를 검증하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어로 인코딩된 컴퓨터 판독 가능 저장 매체가 제공된다. 명령어는, 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하기 위한 명령어(검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함); 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하기 위한 명령어; 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트, 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하기 위한 명령어; 및 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 명령어를 포함한다.
실시예 43에서, 장비를 검증하기 위한 시스템이 제공된다. 시스템은 프로세서; 및 메모리를 포함하고, 메모리는, 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어(검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함); 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어; 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 사이클 임계치(Ct) 값의 제1 세트, 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어; 및 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어를 저장하도록 구성된다.
실시예 44에서, 장비를 검증하기 위한 시스템이 제공된다. 시스템은 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하도록 구성된 PCR 장비 인터페이스(검증 플레이트는 제1 수량 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함); (사이클 임계치) Ct 산출부로서, 복수의 증폭 곡선의 지수 영역에 기초하여 형광 임계치의 세트를 결정하도록, 그리고 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct값의 제1 세트, 및 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선의 Ct 값의 제2 세트를 결정하도록 구성된 Ct 산출부; 세트의 각각의 형광 임계치에 대한 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트를 저장하도록 구성된 Ct 데이터베이스; 및 복수의 형광 임계치 각각에서의 Ct 값에 기초하여 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하도록 구성된 검증부를 포함한다.
실시예 54에서, 실시예 41, 42, 43, 44, 또는 임의의 상기 실시예는 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 경우에 장비가 검증된다는 표시를 디스플레이하는 것을 더 포함할 수 있다.
실시예 55에서, 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하는 것이 Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트의 평균(μ) 및 표준 편차(σ)를 결정하는 것을 포함하는 실시예 41, 42, 43, 44, 또는 임의의 상기 실시예가 제공된다.
실시예 56에서, 하기 식의 결과가 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 실시예 41, 42, 43, 44, 55, 또는 임의의 상기 실시예가 제공된다:
Figure 112017086536729-pct00011
.
실시예 57에서, 샘플은 RNase P 유전자인 실시예 41, 42, 43, 44, 또는 임의의 상기 실시예가 제공된다.
실시예 58에서, 제1 수량과 제2 수량은 서로 다른 실시예 41, 42, 43, 44, 또는 임의의 상기 실시예가 제공된다.
실시예 59에서, 제2 수량과 제1 수량은 2배 차이가 나는 실시예 41, 42, 43, 44, 또는 임의의 상기 실시예가 제공된다.
실시예 60에서, 식의 결과가 적어도 하나의 형광 임계치에 대해 양수인 경우에 제1 수량과 제2 수량이 충분히 구별 가능한 실시예 41, 42, 43, 44, 또는 임의의 상기 실시예가 제공된다.
실시예 61에서, Ct 값의 제1 세트 및 제2 세트로부터 소정 개수의 이상치를 폐기하는 것을 더 포함하는 실시예 41, 42, 43, 44, 또는 임의의 상기 실시예가 제공된다.
실시예 62에서, 형광 임계치의 세트는 90개의 형광 임계치를 포함하는 실시예 41, 42, 43, 44, 또는 임의의 상기 실시예가 제공된다.
실시예 63에서, 디스플레이 엔진은 제1 및 제2 수량이 충분히 구별 가능한 경우에 장비가 검증된다는 표시를 디스플레이하도록 구성된 실시예 41, 42, 43, 44, 또는 임의의 상기 실시예가 제공된다.
본 교시내용의 다양한 구현예에 대한 다음의 설명은 예증 및 설명의 목적을 위해 제시되었다. 그것은 배타적이지 않고, 본 교시내용을 개시된 정밀한 형태로 한정하지 않는다. 수정 및 변형이 위의 교시내용의 관점에서 가능하고, 본 교시내용의 실시로부터 획득될 수 있다. 추가로, 기술된 구현예는 소프트웨어를 포함하지만, 본 교시내용은 하드웨어와 소프트웨어의 조합으로서 또는 하드웨어 단독으로 구현될 수 있다. 본 교시내용은 객체 지향 및 비객체 지향 프로그래밍 시스템 양측 모두와 함께 구현될 수 있다.
다양한 실시예가 소정의 예시적인 실시예, 예, 및 응용에 대해 기술되었지만, 본 교시내용으로부터 벗어남이 없이 다양한 수정 및 변경이 이루어질 수 있음은 당업자에게 명백할 것이다.

Claims (40)

  1. 장비를 검증하는 방법으로서,
    장비 인터페이스에서, 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하는 단계 - 상기 검증 플레이트는 제1 수량의 샘플 및 제2 수량의 샘플을 포함함 -;
    상기 수신된 증폭 데이터에 기초하여 복수의 증폭 곡선을 생성하는 단계 - 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함-;
    상기 복수의 증폭 곡선의 상기 지수 영역에 기초하여 형광 임계치들의 세트를 결정하는 단계;
    상기 형광 임계치들의 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 상기 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선들의 사이클 임계치(Ct) 값들의 제1 세트 및 상기 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선들의 Ct 값들의 제2 세트를 결정하는 단계;
    Ct 값들의 상기 제1 세트 및 상기 제2 세트로부터 소정 개수의 이상치를 폐기하는 단계;
    상기 Ct 값들의 제1 세트의 적어도 일부 및 상기 Ct 값들의 제2 세트의 적어도 일부에 기초하여 상기 장비에 의해 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하는 단계;
    상기 계산에 기초하여 상기 장비의 검증 성공 또는 상기 장비의 검증 실패의 표시를 디스플레이하는 단계; 및
    상기 장비의 검증 성공에 따라, 검증된 장비가 하나 이상의 샘플을 측정하는 실험을 수행하도록 동작하는 단계
    를 포함하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하는 단계는 Ct 값들의 상기 제1 세트와 상기 제2 세트의 평균(μ) 및 표준 편차(σ)를 결정하는 단계를 포함하는 방법.
  3. 제2항에 있어서, 하기 식의 결과가 양수인 경우에 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한 방법:
    Figure 112020114809931-pct00024
    .
  4. 제1항에 있어서, 상기 제1 수량의 샘플과 상기 제2 수량의 샘플은 RNase P 샘플들인 방법.
  5. 제3항에 있어서, 상기 식의 결과가 적어도 하나의 형광 임계치에 대해 양수인 경우에 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한 방법.
  6. 삭제
  7. 장비를 검증하기 위한 프로세서 실행 가능 명령어로 인코딩된 컴퓨터 판독 가능 저장 매체로서, 상기 명령어는,
    장비 인터페이스에서, 검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하기 위한 명령어 - 상기 검증 플레이트는 제1 수량의 샘플 및 제2 수량의 샘플을 포함함 -;
    상기 수신된 증폭 데이터에 기초하여 복수의 증폭 곡선을 생성하기 위한 명령어 - 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함 -;
    상기 복수의 증폭 곡선의 상기 지수 영역에 기초하여 형광 임계치들의 세트를 결정하기 위한 명령어;
    상기 형광 임계치들의 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 상기 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선들의 사이클 임계치(Ct) 값들의 제1 세트 및 상기 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선들의 Ct 값들의 제2 세트를 결정하기 위한 명령어;
    Ct 값들의 상기 제1 세트 및 상기 제2 세트로부터 소정 개수의 이상치를 폐기하기 위한 명령어;
    상기 Ct 값들의 제1 세트의 적어도 일부 및 상기 Ct 값들의 제2 세트의 적어도 일부에 기초하여 상기 장비에 의해 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 명령어;
    상기 계산에 기초하여 상기 장비의 검증 성공 또는 상기 장비의 검증 실패의 표시를 디스플레이하기 위한 명령어; 및
    상기 장비의 검증 성공에 따라, 검증된 장비가 하나 이상의 샘플을 측정하는 실험을 수행하도록 동작하기 위한 명령어
    를 포함하는 컴퓨터 판독 가능 저장 매체.
  8. 제7항에 있어서, 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위한 명령어는 Ct 값들의 상기 제1 세트와 상기 제2 세트의 평균(μ) 및 표준 편차(σ)를 결정하는 것을 포함하는 컴퓨터 판독 가능 저장 매체.
  9. 제8항에 있어서, 하기 식의 결과가 양수인 경우에 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한 컴퓨터 판독 가능 저장 매체:
    Figure 112020114809931-pct00025
    .
  10. 제7항에 있어서, 상기 제1 수량의 샘플과 상기 제2 수량의 샘플은 RNase P 샘플들인 컴퓨터 판독 가능 저장 매체.
  11. 제9항에 있어서, 상기 식의 결과가 적어도 하나의 형광 임계치에 대해 양수인 경우에 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한 컴퓨터 판독 가능 저장 매체.
  12. 제7항에 있어서, 상기 형광 임계치들의 세트는 90개의 형광 임계치를 포함하는 컴퓨터 판독 가능 저장 매체.
  13. 장비를 검증하기 위한 시스템으로서,
    검증 플레이트로부터 증폭 데이터를 수신하여 복수의 증폭 곡선을 생성하도록 구성되는 장비 인터페이스 - 상기 검증 플레이트는 제1 수량의 샘플 및 제2 수량의 샘플을 포함하고, 각각의 증폭 곡선은 지수 영역을 포함함 -;
    상기 복수의 증폭 곡선의 상기 지수 영역들에 기초하여 형광 임계치들의 세트를 결정하고,
    상기 형광 임계치들의 세트의 각각의 형광 임계치에 대해, 상기 제1 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선들의 Ct 값들의 제1 세트 및 상기 제2 수량의 샘플로부터 생성된 증폭 곡선들의 Ct 값들의 제2 세트를 결정하고,
    Ct 값들의 상기 제1 세트 및 상기 제2 세트로부터 소정 개수의 이상치를 폐기하도록 구성된 (사이클 임계치) Ct 산출부;
    상기 Ct 값들의 제1 세트의 적어도 일부 및 상기 Ct 값들의 제2 세트의 적어도 일부에 기초하여 상기 장비에 의해 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하도록 구성된 검증부;
    상기 계산에 기초하여 상기 장비의 검증 성공 또는 상기 장비의 검증 실패의 표시를 디스플레이하도록 구성된 디스플레이; 및
    상기 장비의 검증 성공에 따라, 하나 이상의 샘플을 측정하는 실험을 수행하기 위해 동작하도록 구성된 상기 장비의 서브-시스템
    을 포함하는 시스템.
  14. 제13항에 있어서, 상기 검증부는 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한지 계산하기 위해 Ct 값들의 상기 제1 세트와 상기 제2 세트의 평균(μ) 및 표준 편차(σ)를 결정하도록 더 구성되는 시스템.
  15. 제14항에 있어서, 상기 검증부는 하기 식의 결과가 양수인 경우에 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한 것으로 결정하는 시스템:
    Figure 112020114809931-pct00026
    .
  16. 제13항에 있어서, 상기 제1 수량의 샘플과 상기 제2 수량의 샘플은 RNase P 샘플들인 시스템.
  17. 제13항에 있어서, 상기 제2 수량과 상기 제1 수량은 2배 차이가 나는 시스템.
  18. 제15항에 있어서, 상기 검증부는 상기 식의 결과가 적어도 하나의 형광 임계치에 대해 양수인 경우에 상기 제1 수량과 상기 제2 수량이 충분히 구별 가능한 것으로 결정하는 시스템.
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  20. 제13항에 있어서, 상기 형광 임계치들의 세트는 90개의 형광 임계치를 포함하는 시스템.
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