CN107427573B - 用于免疫疗法的纳米颗粒组合物和方法 - Google Patents

用于免疫疗法的纳米颗粒组合物和方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供用于免疫疗法的组合物和方法，所述组合物包括用于诱导抗原特异性T细胞的贮存稳定的药物组合物。此类组合物被用作人工抗原呈递细胞(aAPC)的组分，以便为患者提供用于呈递抗原(例如，肿瘤抗原)的复合物和/或T细胞共刺激分子。

Description

用于免疫疗法的纳米颗粒组合物和方法
优先权申请的引用
本申请要求2014年12月24日提交的美国临时申请号62/096,725的优先权，所述临时申请在此以引用的方式整体并入。
发明领域
本发明涉及呈递用于调节免疫细胞的活性的生物配体的纳米颗粒组合物。
背景
抗原呈递细胞(APC)是加工并展现在其表面上具有主要组织相容性复合物(MHC)蛋白的复合物中的抗原肽的细胞。效应细胞(诸如T细胞)通过细胞表面受体(诸如T细胞受体(TCR))识别这些肽-MHC(pMHC)复合物。
树突状细胞(DC)是抗原呈递细胞的实例，所述抗原呈递细胞可被刺激以有效呈递抗原并支持免疫效应细胞的扩增，从而激活对抗原的细胞毒性应答。在一些免疫疗法中，DC从患者获得并且使用抗原进行脉冲或用病毒载体转染。在输注回到患者中之后，这些激活的细胞向效应淋巴细胞(例如，CD4+T细胞、CD8+T细胞和B细胞)呈递肿瘤抗原。在成功之后，此疗法引发针对表达抗原(包括肿瘤抗原)的细胞的细胞毒性应答。
然而，仍然存在对于可有效用于免疫疗法(包括针对癌症的抗原特异性免疫疗法)的贮存稳定的药物组合物的需要。本公开满足这些和其他目标。
发明简述
本发明提供用于免疫疗法的组合物和方法，所述组合物包括用于在患者中诱导抗原特异性T细胞的贮存稳定的药物组合物。此类组合物可用于治疗例如癌症和感染性疾病。在一些方面，所述组合物是包含药学上可接受的珠粒或颗粒的人工抗原呈递细胞(aAPC)，所述珠粒或颗粒在其表面上具有抗原呈递复合物和任选的T细胞共刺激信号，以便为患者提供在适当的情况下呈递用于激活抗原特异性T细胞(例如，细胞毒性T细胞)的一种或多种抗原(例如，肿瘤抗原)的分子复合物。所述珠粒或颗粒被设计来提供药效学优点，包括循环特性、生物分布、降解动力学以及抗原特异性激活和/或原初的和/或先前激活的T细胞的扩增。物理参数包括大小、表面电荷、多分散指数、聚合物组成、配体缀合化学物质、配体密度、配体比率等等。在一些方面，本发明提供分布到靶组织(诸如淋巴结、脾和肿瘤部位)的纳米级aAPC(例如，小于200nm)。本文所述的纳米aAPC平台可针对各种免疫疗法应用进行微调。在一些实施方案中，aAPC的范围是约20nM至约200nM，并且可容纳5至约1500个配体/颗粒，包括在一些实施方案中，小于约150个配体/颗粒或小于约100个配体/颗粒，诸如约5至约90个配体/颗粒。在一些实施方案中，纳米aAPC具有(平均而言)缀合到其表面的小于约150个配体或小于约100个配体，从而在不损失活性和/或效能的情况下，避免由于表面上充足的配体而引起的空间约束。
在一些实施方案中，所述T细胞共刺激信号是抗CD28抗体或其抗原结合部分，其可包含人类重链氨基酸序列，包括选自IgG、IgD、IgA或IgM同种型的序列。在一些实施方案中，免疫球蛋白序列包括人类IgG恒定序列和可变序列。框架(FW)序列可被修饰以含有重要的或所需的鼠框架残基，以便维持抗原结合位点的完整性。互补决定区(CDR)可基于鼠抗体氨基酸序列(例如，9.3mAb)或其他CD28结合序列，并且所述序列可结合具有9.3mAb的竞争表位。在一些实施方案中，抗体重链是人类IGHV4(例如，IGHV4-59)种系FW的变体。在一些实施方案中，抗体包含轻链并且轻链是人类IGKV4-01FW的变体。抗体可包含恒定区，并且在一些实施方案中，恒定区是人类IgG4恒定区或其变体。
共刺激分子可缀合到具有抗原呈递分子复合物的固体载体，以便诱导抗原特异性T细胞。抗原呈递分子复合物可包括包含抗原结合裂隙的MHC I类和/或II类复合物或其部分。在一些实施方案中，分子复合物包含一种或多种HLA氨基酸序列(例如，包含HLA或其抗原呈递部分的细胞外结构域)，所述HLA氨基酸序列可含有另外的序列，诸如免疫球蛋白序列或其他多聚化(例如，二聚化)或稳定化序列。在一些实施方案中，HLA-Ig二聚化融合体提供稳定性、结合亲和力和/或T细胞激活方面的优点。
因此，在一些实施方案中，本发明提供一种用于向T细胞呈递抗原的珠粒或颗粒缀合的分子复合物，其中所述复合物包含形成I类或II类抗原结合裂隙的氨基酸序列或其部分。抗原呈递复合物的氨基酸序列可包括与异源序列的融合体，以便提供例如稳定性、亲和力和空间优点。在一些实施方案中，异源序列包括免疫球蛋白序列。在一些实施方案中，分子复合物包含融合到异源序列(诸如免疫球蛋白序列)的HLA(例如，HLA-A2)氨基酸序列。在一些实施方案中，免疫球蛋白序列包括人类重链免疫球蛋白序列(例如，IGVH4)，其可包括免疫球蛋白恒定区序列(例如，包含铰链区)以便提供二聚体HLA，并且可任选地包括可变区序列。可变区序列(如果存在的话)可任选地被修饰以减少或消除潜在的抗原结合，并且任选地没有鼠FW残基。在一些实施方案中，HLA抗原呈递复合物直接融合到Ig铰链区(例如，不包含轻链或重链可变序列)。HLA氨基酸序列可以是HLA-A*02:01(IMGT登录号HLA00005)或其衍生物。
T细胞共刺激配体和/或抗原呈递复合物(以及本文所述的其他配体，包括靶向配体)缀合到用于体外或体内抗原呈递和抗原特异性T细胞激活的颗粒载体。在一些实施方案中，所述颗粒由PLGA或PLA聚合物芯与PLGA-PEG或PLA-PEG聚合物形成。可替代地，可使用其他聚合物和/或共聚物。例如，共聚物可含有比率在1:0与0:1之间(诸如，约1:0至约1:1)的乳酸(L)和乙醇酸(G)。在一些实施方案中，用于偶联配体的表面官能团附接到形成亲水鞘的PEG链的末端。颗粒被设计来提供药效学优点，包括循环特性、生物分布和降解动力学以及用于激活抗原特异性T细胞的高效能。物理参数包括大小、表面电荷、聚合物组成、配体缀合化学物质、配体密度等等。例如，在一些实施方案中，颗粒具有PLGA或PLA聚合物芯以及由共聚物的PEG部分形成的亲水壳，其中聚合物中的一部分具有多肽配体的末端附接件。亲水壳包含相对于用于配体缀合的官能团是惰性的一些PEG链，诸如PLGA-PEG-MeOH或PLA-PEG-MeOH聚合物。在这些实施方案中，颗粒化学物质能实现对配体密度的良好控制。
在一些实施方案中，颗粒是聚合物纳米颗粒，诸如本文详细描述的PLGA-PEG或PLA-PEG化学物质或其他聚合物化学物质，并且其大小范围是约20至约200nm。在一些实施方案中，配体密度是受控的，使得存在5至约1500个配体/颗粒(平均而言)，并且在一些实施方案中，小于约150个配体/颗粒或小于约100个配体/颗粒(例如，约5至约90个配体/颗粒)。
在各种实施方案中，药物组合物还可包含用于向T细胞呈递的抗原肽，并且所述抗原肽可与配体缀合的珠粒或颗粒共同配制。在各种实施方案中，药物组合物是贮存稳定的，并且可以用于在施用之前复溶的冻干形式提供，或者可替代地，以用于向患者施用(例如，通过胃肠外施用)的便利的样式提供。
本文所述的药物组合物可用于免疫疗法，例如，可用于通过向有需要的患者施用有效量的组合物来诱导抗原特异性T细胞形成的方法中。具体地，抗原呈递平台可用于治疗患有癌症、感染性疾病或自身免疫疾病的患者，或者向免疫抑制患者提供预防性保护。在一些实施方案中，纳米颗粒组合物在癌症免疫疗法(诸如检查点抑制剂疗法)之后和/或过继性T细胞免疫疗法之后施用，并且因此提供对各种癌症的增强的和/或持续的免疫学攻击。
本发明还提供编码本文所述的氨基酸序列的多核苷酸以及表达所述氨基酸序列的宿主细胞。
本发明的细节在以下随附的描述和权利要求书中列出。虽然与本文所述的那些方法和材料类似或等效的方法和材料可用于本发明的实践或测试中，但是现在描述说明性的方法和材料。本发明的其他特征、目的和优点将根据描述和根据权利要求书是显而易见的。在说明书和所附权利要求书中，单数形式也包括复数，除非上下文另外清楚地指出。除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域中的普通技术人员通常所理解的相同含义。
附图简述
图1-3示出抗CD28的三种人源化可变重序列(SEQ ID NOs:1,2,3,4,5,6)。
图4-6示出抗CD28的三种人源化可变轻序列(SEQ ID NOs:7,8,9,10,11,12)。
图7示出修饰的恒定重序列(SEQ ID NOs:13,14)。
图8示出恒定κ轻序列(SEQ ID NOs:15,16)。
图9示出用于构建HLA融合体的人源化非CD28结合的可变区(SEQ ID NOs:17,18)。
图10示出人源化HLA-IgG4HC的氨基酸序列(SEQ ID NO:19)。
图11示出轻链3(LC3或Vκ3)的氨基酸序列(SEQ ID NO:20)。
图12示出重链1(HC1)的氨基酸序列(SEQ ID NO:21)。
图13示出重链2(HC2)的氨基酸序列(SEQ ID NO:22)。
图14-16示出用于在STABLEFAST-NS0细胞系中表达的表达构建体。
图17示出人源化抗CD28mAb不是超激动剂。
图18示出人源化抗CD28克隆特异性地染色人类T细胞系上的CD28。图18(A)：使用鼠抗人类CD8mAb(克隆9.3，同种型IgG2a)的染色；图18(B)：使用人源化抗CD28(同种型IgG4)的染色。
图19示出基于抗原呈递复合物直接融合到Fc铰链区的较小MHC-Ig融合蛋白的设计。
图20示出PLGA纳米aAPC与PLGA-PEG-COOH纳米aAPC之间的对比，其中配体通过可用的伯胺缀合。在1:4的PEG-COOH:mPEG比率的情况下，珠粒是稳定的且具有活性的。
图21示出纳米aAPC特异性地染色具有同源TCR的T细胞。示出针对TCR结合特异性的基于FACS的生物分析测定。
图22示出PLGA-PEG aAPC颗粒以剂量依赖方式刺激抗原特异性T细胞的增殖。
图23示出基于PLGA-PEG的aAPC在冻干之后是稳定的。
图24示出使用增加量的SIY负载的PLGA-PEG纳米aAPC的2C T细胞的第4天培养。
图25示出使用纳米aAPC刺激1天之后的T细胞增殖簇。
图26示出修饰的(2.0代)共刺激配体的结合活性。
图27示出基于Kb-SIY Fc-铰链蛋白的纳米aAPC特异性地染色同源靶2C T细胞。
图28示出具有配体的位点特异性硫醇缀合的纳米aAPC。珠粒含有1:1的PEG-COOH与mPEG聚合物比率(72B)或1:9的PEG-马来酰亚胺:mPEG比率(77B)。两者均是稳定的且具有活性的。
图29示出使用含有铰链二聚体构建体的纳米aAPC的Kb-特异性2C T细胞(A)和Db-gp100-特异性pmel T细胞的扩增。
图30示出人类CMV或MART-1特异性T细胞的基于纳米aAPC的扩增。示出基于Dynal的APC以用于对比。
图31示出示例性纳米颗粒配制。(A)配体缀合到具有马来酰亚胺定点化学物质的颗粒；(B)通过动态光散射(DLS)的对颗粒的表征；(C)NI-26批次的电荷和PDI。
图32列出示例性纳米颗粒制剂批次的特性。
发明详述
以下缩写贯穿全文使用：BLAST-基本局部比对检索工具，CDR-互补决定区，Cκ-Kappa轻链恒定区，Fc-抗体片段可结晶区，Fw-(可变区的)框架区，HLA-人类白细胞抗原，MHC-主要组织相容性复合物，VH-可变重，Vκ-可变kappa轻，以及V区-抗体VH或Vκ的可变区。
本发明提供用于免疫疗法的组合物和方法，所述组合物包括用于在患者中诱导抗原特异性T细胞的贮存稳定的药物组合物。在一些实施方案中，所述组合物包含二聚体HLA抗原呈递复合物。在一些实施方案中，所述组合物包含人源化免疫球蛋白序列或其部分，所述组合物可被用作人工抗原呈递细胞(aAPC)上的配体的组分，以便为患者提供用于呈递一种或多种抗原(例如，肿瘤抗原)的二聚体分子复合物和任选地一种或多种共刺激信号。如以下更详细地描述的，抗原呈递平台可基于人工固体载体，诸如药学上可接受的载体，包括聚合物珠粒或颗粒。
在一些实施方案中，T细胞共刺激信号是抗CD28抗体或其部分。在一些实施方案中，抗CD28抗体包含选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgD、IgA或IgM的至少一种人类免疫球蛋白同种型的序列。例如，抗CD28抗体可以是IgG同种型，并且可含有一种或多种IgG种系框架序列中的序列。例如，抗CD28可含有人类IGHV4重链氨基酸序列，其可被修饰具有一至十五个氨基酸修饰。所述修饰可包括鼠框架残基以支持抗原结合位点的完整性。
在一些实施方案中，互补决定区(CDR)基于鼠抗体氨基酸序列，其可任选地具有一至十个(诸如一至五个)氨基酸修饰。在一些实施方案中，一个、两个、三个或更多个CDR基于小鼠9.3mAb(Tan等人，J.Exp.Med.1993 177:165)，其可公开获得。示例性CDR在图1-6中示出。在一些实施方案中，抗体具有9.3mAb的全套重链CDR和/或全套轻链CDR。例如，在一些实施方案中，重链可变区含有以下CDR中的一个、两个或三个，所述CDR各自可任选地通过一个、两个或三个氨基酸取代、缺失或添加来修饰：CDR1(DYGVH，SEQ ID NO:23)、CDR2(VIWAGGGTNYNSALMS，SEQ ID NO:24)和CDR3(DKGYSYYYSMDY，SEQ ID NO:25)。在一些实施方案中，轻链可变区含有以下CDR中的一个、两个或三个，所述CDR各自可通过一个、两个或三个氨基酸取代、缺失或添加来修饰：CDR1(RASESVEYYVTSLMQ，SEQ ID NO:26)、CDR2(AASNVES，SEQ ID NO:27)和CDR3(QQSRKVPYT，SEQ ID NO:28)。
在一些实施方案中，抗CD28配体结合到与9.3mAb相同或重叠的表位，或者结合与具有9.3mAb的CDR1、CDR2和CDR3的抗体相同或重叠的表位。具有相同或重叠表位的抗体可通过任何合适的技术来选择，包括使用例如表面等离子共振(Biacore)的竞争性免疫测定。
可在各种实施方案中采用替代CDR序列、可变区或CD28结合配体。替代配体、CD28表位和抗CD28抗体在例如美国专利7,612,170、美国专利6,987,171和美国专利6,887,466中进行描述，并且这些公开内容在此以引用的方式整体并入。
在一些实施方案中，抗体重链包括人类IGHV4-59种系框架(FW)的变体，所述变体被修饰而包含5至15个鼠FW残基。在一些实施方案中，抗体包含轻链氨基酸序列，并且轻链序列可以是人类IGKV4-01FW序列的变体，并且所述变体可被修饰而包含3至15个鼠FW残基。
抗CD28人类重链序列可被修饰而例如在位置1、3、6、37、48、67、71、73、76、78、82、82a和82c处(基于Kabat编号)包含一个或多个(例如，2个或更多个，3个或更多个，4个或更多个，5个或更多个或全部)鼠Fw残基。在这些位置处的鼠Fw残基可以是如在9.3mAb中的。轻链可被修饰而在位置3、4、6、49、70、85、87和80处包含一个或多个(例如，2个或更多个，3个或更多个，4个或更多个，5个或更多个或全部)鼠Fw残基。所选的鼠Fw残基可支持抗原结合位点的完整性。人源化抗CD28抗体维持9.3mAb的对于CD28的亲和力和T细胞共刺激活性，并且对于CD28结合和T细胞激活是9.3mAb的至少40％、50％、75％、80％、90％并且在一些实施方案中100％有效或比9.3mAb更有效。在各种实施方案中，抗CD28配体不是超激动剂。在一些实施方案中，抗CD28配体结合到与9.3mAb相同或重叠的表位。
抗体可包含恒定区并且恒定区可以是任何同种型。在一些实施方案中，抗体恒定区是人类IgG4或其变体。在一些实施方案中，恒定区包含一个或多个铰链稳定化突变，所述突变可引入在CH链中(例如，S241，其可以P取代)。在一些实施方案中，抗体包含恒定区，并且所述恒定区包含适于将抗体化学地偶联到固体载体的一个或多个突变。适于偶联的一个或多个突变可创建氨基酸侧链官能团(例如，硫醇、胺或羟基)，所述突变诸如未配对的半胱氨酸(例如，在S473处)。对恒定区的其他改变包括减少Fcγ受体结合的那些修饰。例如，CH链可在L248(例如L248E)处进行修饰。
在一些实施方案中，共刺激配体可被最小化，使得配体更适于功能性地附接到纳米颗粒表面。例如，抗体可以是抗体片段，诸如F(ab’)2或Fab，或者是单链抗体或其他抗原结合抗体片段。例如，抗体片段可以是本文所述的人源化mAb或其他抗CD28的单链可变片段。
在一些实施方案中，共刺激分子是包含抗原结合环或基本上由其组成的单链可变片段(scFv)，所述抗原结合环由抗CD28mAb(诸如本文所述的抗体)的VH和VL链形成。scFv抗体构建体可包含一个或数个(2、3、4或5个)VH和VL高变区链(每个链的一起形成3-D抗原表位结合口袋的部分)，所述VH和VL高变区链通过短肽接头以头头或头尾构型连接在一起。此类构建体由于其较小的大小可通过完全合成途径便利地产生。此外，scFv可表现出对于免疫原性的较低潜力。
在其他实施方案中，共刺激配体是包含接合到共刺激分子配体或抑制性配体的scFv的一个或多个HLA分子的双特异性构建体。抗原呈递复合物和共刺激或抑制性配体可通过使双特异性构建体共价地连接到纳米颗粒表面的肽系链缀合。在一些实施方案中，此类构建体产生与含有各自独立地连接到NP表面的HLA的较大构建体和共刺激或抑制性配体的纳米颗粒相同的活性，从而提供制造优点。
在一些实施方案中，使用其他配体结合样式来产生共刺激配体，包括肽、适体和AdNectin。用于靶结合的各种样式包括单结构域抗体、重组仅重链抗体(VHH)、单链抗体(scFv)、鲨鱼仅重链抗体(VNAR)、微蛋白(半胱氨酸结蛋白，knottin)、DARPin、四柄蛋白(Tetranectin)、亲合体(Affibody)；转移体(Transbody)、Anticalin、Affilin、微体(Microbody)、肽适体、聚合物、stradobody、maxibody、evibody、fynomer、犰狳重复蛋白、Kunitz结构域、avimer、atrimer、probody、免疫体(immunobody)、triomab、troybody、pepbody、UniBody、DuoBody、Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2、肽模拟分子或合成分子或如以下美国专利号或专利申请号中所描述的：US 7,417,130、US 2004/132094、US 5,831,012、US2004/023334、US 7,250,297、US 6,818,418、US 2004/209243、US 7,838,629、US 7,186,524、US 6,004,746、US 5,475,096、US 2004/146938、US 2004/157209、US 6,994,982、US6,794,144、US 2010/239633、US 7,803,907、US 2010/119446和/或US 7,166,697，其内容在此以引用的方式整体并入。还参见Storz MAbs，2011年5月-6月；3(3):310-317。
共刺激分子可缀合到具有抗原呈递分子复合物的固体载体，以便诱导抗原特异性T细胞。抗原呈递分子复合物可包括包含抗原结合裂隙的MHC I类和/或II类复合物或其部分。在一些实施方案中，分子复合物包含一种或两种HLA氨基酸序列，所述HLA氨基酸序列可含有另外的异源序列，诸如免疫球蛋白序列。替代异源序列包括二聚化氨基酸序列，诸如c-fos和c-jun。在一些实施方案中，HLA融合体提供稳定性、结合亲和力和/或T细胞激活方面的另外的优点。
在各种实施方案中，抗原呈递复合物是MHC I类分子复合物或MHC II类分子复合物，或可替代地CD1d。MHC I类分子复合物可包含至少两个融合蛋白。第一融合蛋白包含第一MHC I类α链和第一免疫球蛋白重链，并且第二融合蛋白包含第二MHC I类α链和第二免疫球蛋白重链。第一免疫球蛋白重链和第二免疫球蛋白重链缔合形成MHC I类分子复合物。MHC I类分子复合物包含第一MHC I类肽结合裂隙和第二MHC I类肽结合裂隙。MHC II类分子复合物可包含至少四个融合蛋白。两个第一融合蛋白包含(i)免疫球蛋白重链和(ii)MHCII类β链的细胞外结构域。两个第二融合蛋白包含(i)免疫球蛋白轻链和(ii)MHC II类α链的细胞外结构域。两个第一融合蛋白和两个第二融合蛋白缔合形成MHC II类分子复合物。每个第一融合蛋白的MHC II类β链的细胞外结构域和每个第二融合蛋白的MHC II类α链的细胞外结构域形成MHC II类肽结合裂隙。抗原肽结合到肽结合裂隙。在各种实施方案中，免疫球蛋白序列是包含铰链区以支持二聚化的部分重链序列。
在一些实施方案中，抗原呈递复合物是合成的或重组的HLA单体(例如，具有β2微球蛋白的I类α链)，其被工程化而含有未配对的半胱氨酸或使用天然存在的未配对的半胱氨酸以用于缀合到纳米颗粒。此外，共刺激信号(或其他基于抗体的配体)可以是Fab或scFv。在此类实施方案中，两种信号可组合在单个多功能性构建体中，所述构建体包含拴系到结合到所需的受体的抗原结合抗体片段(例如，scFv)的HLA分子。
在其他方面和实施方案中，本发明提供用于向T细胞呈递抗原的珠粒或颗粒缀合的分子复合物，其中所述复合物包含融合到抗原呈递序列(例如HLA氨基酸序列)的人源化免疫球蛋白序列或其部分。在一些实施方案中，免疫球蛋白序列是人类重链序列(例如，IGHV4框架)。可变区不具有对CD28或其他人类蛋白的抗原结合活性。HLA氨基酸序列可以是HLA-A*02:01(IMGT登录号HLA00005)或其衍生物或片段，诸如具有1至10个或1至5个氨基酸取代、缺失或插入的衍生物。人源化免疫球蛋白序列还可包括HLA序列与免疫球蛋白序列之间的接头氨基酸序列。优选地，接头缺乏免疫原性。分子复合物还可包含β2微球蛋白肽。
在各种实施方案中，免疫球蛋白融合序列具有IgG、IgD、IgA或IgM同种型，并且可源自任何人类种系框架。种系框架包括IGHV4(例如，IGHV4-59)，其可包含或可不包含关于抗CD28所述的鼠框架残基中的一种或多种。在一些实施方案中，根据此方面，以上所述的抗CD28抗体的重链(有或没有鼠框架残基)融合到HLA，并且在此类实施方案中，可变区被修饰以减少或消除CD28结合。
在一些实施方案中，HLA融合构建体不含有可变链序列。例如，HLA或抗原呈递复合物可融合到铰链区以上的Ig恒定区序列以提供二聚体HLA。例如，HLA或其抗原呈递部分可缀合到每个IgG重链的CH1部分。所有的IgG分子由通过铰链区(上部或下部)中的二硫键接合在一起的两个相同的重链(恒定区和可变区)组成。例如，在一些实施方案中，HLA分子或抗原呈递复合物融合到CH1(IgH链的在铰链区以上的N末端)，从而创建由于缺乏任何VH和VL轻链序列而较小的二聚体融合蛋白。因此，此类构建体包含CH2和CH3结构域。此类构建体可提供制造优点，并且表现出对于免疫原性的较小潜力。在一些实施方案中，此类构建体还展现对于有效T细胞激活的足够的结合协同性，虽然与铰链区的距离较小。
颗粒化学物质使配体密度能够进行微调。通常，纳米aAPC具有缀合到其表面的平均而言5至约1500个配体。在一些实施方案中，颗粒具有小于约500个配体/颗粒，或小于约400个配体/颗粒，或小于约300个配体/颗粒，或小于约200个配体/颗粒。在一些实施方案中，聚合物纳米颗粒具有小于约150个配体/颗粒，或小于约100个配体/颗粒。例如，颗粒可具有约5至约90个配体/颗粒。在各种实施方案中，纳米颗粒具有小于约90个缀合配体/颗粒，或小于约80个、或小于约70个、或小于约60个、或小于约50个、或小于约40个、或小于约30个、或小于约20个缀合配体/颗粒。在一些实施方案中，颗粒在其表面上含有10至约80个缀合配体，或10至70个或约10至约50个缀合配体/颗粒。
在再另外的实施方案中，抗原呈递复合物(例如，HLA序列)不含有Ig融合配偶体，并且是单体。例如，在一些实施方案中，抗原呈递复合物或HLA分子(例如，HLA-A2等)的C末端含有适于定点结合到固体/半固体底物(诸如合成纳米颗粒(例如，含有PLGA-PEG-马来酰亚胺或PLA-PEG-马来酰亚胺嵌段聚合物))上的官能团的肽系链序列。系链序列可包括任何合适的序列，所述合适的序列可主要由亲水残基诸如甘氨酸、丝氨酸、丙氨酸和苏氨酸(诸如GGGSG(SEQ ID NO:29)或AAAGG(SEQ ID NO:30)的两个、三个、四个或五个重复序列)与并入在约5至约15个(或约5至约10个氨基酸)系链内某处的半胱氨酸残基构成。半胱氨酸残基应并入在预测不形成分子内二硫键的位点处。
在一些实施方案中，HLA-Ig融合体或其他HLA构建体还包含结合到HLA的用于向T细胞呈递的抗原肽。抗原肽可包括以下中的一个或多个的抗原部分：酪氨酸酶、hTERT、MAGE-1、MAGE-3、gp-100、NY-ESO-1、Melan A/Mart-1、HPV 16-E7、gp75/棕色、BAGE和S-100和/或如在WO 2004/006951中所描述的用于通过I类或II类复合物呈递的抗原肽中的任一种，所述文献的内容在此以引用的方式整体并入。
可与抗原呈递复合物一起提供的其他信号包括：CD80(B7-1)、CD86(B7-2)、B7-H3、4-1BBL、CD27、CD30、CD134(OX-40L)、B7h(B7RP-1)、CD40、LIGHT、(或此类分子或其活性部分的Ig融合体，任选地如本文所述人源化)、特异性地结合到HVEM的抗体、特异性地结合到CD40L的抗体、特异性地结合到OX40的抗体、特异性地结合Fas的抗体、特异性地结合PD1的抗体、特异性地结合到GITR的抗体、以及特异性地结合到4-1BB的抗体。在共刺激信号是针对天然配体的抗体的情况下，可采用本文所用的使抗体配体(例如，scFv和双特异性构建体)人源化和/或使其的大小最小化并且对用于缀合到颗粒的抗体进行工程化的技术。
可用于本发明的抗原呈递平台的粘附分子可介导平台到T细胞或到T细胞前体的粘附。可用于本发明中的粘附分子包括例如ICAM-1和LFA-3。
T细胞生长因子影响T细胞的增殖和/或分化。T细胞生长因子的实例包括细胞因子(例如白细胞介素、干扰素)和超抗原。特别可用的细胞因子包括IL-2、IL-4、IL-7、IL-10、IL-12、IL-15和γ干扰素。T细胞生长因子可封装在珠粒或颗粒中或化学地缀合或吸附到表面。因此，在一些实施方案中，纳米颗粒还包含包埋在颗粒的疏水芯中的治疗性化合物或蛋白质/肽(例如，化疗剂、细胞因子或白细胞介素诸如IL-2、吸引T细胞的趋化因子像CCL9和/或检查点抑制剂分子像抗PD1抗体或抗PD1肽)。在一些实施方案中，此aAPC被构建来靶向用于刺激或抑制以及重编程的特异性细胞。在一些实施方案中，包埋的化合物通过颗粒基体的降解来释放。此aAPC可通过限制由脱靶相互作用引起的不需要的活性来使得组合疗法更耐受和有效。在一些实施方案中，纳米颗粒aAPC不封装药物化合物，诸如细胞因子和小分子药物。
根据本发明的各方面呈递的抗原包括肿瘤相关抗原。肿瘤相关抗原包括通过肿瘤抗原衍生的肿瘤排他性地表达的独特的肿瘤抗原、在许多肿瘤但不在正常成人组织中表达的共享肿瘤抗原(胚性抗原、癌症/睾丸抗原)以及也由肿瘤所发生的正常组织表达的组织特异性抗原。肿瘤相关抗原可以是例如，雏形抗原、具有异常翻译后修饰的抗原、分化抗原、突变的癌基因或肿瘤抑制子的产物、融合蛋白或肿瘤病毒(oncoviral)蛋白。多种肿瘤相关抗原在本领域中是已知的，并且这些中的许多可公开获得。胚性和雏形抗原包括癌胚抗原和α-胎蛋白(通常仅在发育胚胎中高度表达，但是频繁地分别由肝脏和结肠的肿瘤高度表达)、胎盘碱性磷酸酶唾液酸-Lewis X(在腺癌中表达)、CA-125和CA-19(在胃肠、肝和妇科肿瘤中表达)、TAG-72(在结肠直肠肿瘤中表达)、上皮糖蛋白2(在许多癌中表达)、胰癌胚抗原、5T4(在胃癌中表达)、α胎蛋白受体(在多个肿瘤类型尤其是乳房肿瘤中表达)以及M2A(在生殖细胞瘤形成中表达)。
在一些实施方案中，至少一种抗原是癌症/睾丸(CT)抗原，所述可包括NY-ESO-1、MAGE-A、B和C、CTAG-1、CTAG-45、GAGE以及SSX，其通过睾丸的生殖细胞正常表达并且不在正常成人体细胞组织中表达。然而，数种类型的癌细胞已经显示表达CT抗原，所述癌细胞包括黑素瘤、乳腺癌、肝癌、肺癌、卵巢癌以及霍奇金淋巴瘤(Hodgkin Lymphoma)。
肿瘤相关的分化抗原包括酪氨酸酶(在黑素瘤中表达)和特定的表面免疫球蛋白(在淋巴瘤中表达)。
突变的癌基因或肿瘤-抑制子基因产物包括Ras和ρ53(其两者均在许多肿瘤类型中表达)、Her-2/neu(在乳腺癌和妇科癌中表达)、EGF-R、雌激素受体、孕酮受体、眼癌基因产物、myc(与肺癌相关联)、ras、与乳腺肿瘤相关联的p53非突变体、MAGE-1和MAGE-3(与黑素瘤癌、肺癌和其他癌症相关联)。
其他肿瘤抗原包括融合蛋白(诸如BCR-ABL，其在慢性骨髓性白血病中表达)和肿瘤病毒蛋白(诸如HPV类型16、E6和E7，其存在于宫颈癌中)。组织-特异性肿瘤抗原包括黑素转铁蛋白和MUC1(在胰腺癌和乳腺癌中表达)；CD 10(先前已知为常见的急性淋巴性白血病抗原或CALLA)或表面免疫球蛋白(在B细胞白血病和淋巴瘤中表达)；IL-2受体的α链、T细胞受体、CD45R、CD4+/CD8+(在T细胞白血病和淋巴瘤中表达)；前列腺特异性抗原和前列腺酸性磷酸酶(在前列腺癌中表达)；gp 100、MelanA/Mart-1、酪氨酸酶、gp75/棕色、BAGE和S-100(在黑素瘤中表达)；细胞角蛋白(在各种癌中表达)；以及CD19、CD20和CD37(在淋巴瘤中表达)。
在一些实施方案中，抗原肽包括MART-1、gp100、NY-ESO-1和MAGE-A3，其通过本文所述的HLA抗原呈递复合物(诸如本文所述的HLA-Ig融合复合物)呈递。
在一些实施方案中，aAPC基于肿瘤驱动的突变呈递一种或多种抗原肽，或取决于患者肿瘤的个人化评估呈递一种或多种新抗原。
在再另外的实施方案中，所述组合物包含含有针对肿瘤类型的多种抗原的aAPC的混合药(cocktail)，所述多种抗原诸如2、3、4、5、6、7、8、9或10种抗原(例如，2至10种或3-8种抗原)。通常，每个aAPC呈递单种抗原。
在一些实施方案中，抗原是自身抗原，所述自身抗原是生物体对其产生免疫应答的生物体自己的“自体抗原”。自身抗原涉及自身免疫疾病，诸如古德帕斯彻氏综合征(Goodpasture's syndrome)、多发性硬化症、格雷夫斯病(Graves'disease)、重症肌无力、系统性红斑狼疮、胰岛素依赖性糖尿病、类风湿性关节炎、寻常性天疱疮、阿狄森氏病(Addison's disease)、疱疹样皮炎、乳糜泻以及桥本氏甲状腺炎(Hashimoto'sthyroiditis)。例如，糖尿病相关的自身抗原包括胰岛素、谷氨酸脱羧酶(GAD)和其他胰岛细胞自身抗原，例如，ICA512/IA-2蛋白质酪氨酸磷酸酶、ICA12、ICA69、前胰岛素原或其免疫活性片段(例如，胰岛素B-链、A链、C肽或其免疫活性片段)、IGRP、HSP60、羧肽酶H、外周蛋白、神经节糖苷(例如，GM1-2、GM3)或其免疫活性片段。
在一些实施方案中，抗原是感染剂，诸如原生动物、细菌、真菌(单细胞和多细胞两者)、病毒、阮病毒、细胞内寄生生物、蠕虫和可诱导免疫应答的其他感染剂的组分。
抗原(包括抗原肽)可主动地或被动地结合到抗原呈递复合物的抗原结合裂隙，如美国专利6,268,411中所述，所述专利在此以引用的方式整体并入。任选地，抗原肽可共价地结合到肽结合裂隙。
如果需要，肽系链可用于将抗原肽连接到肽结合裂隙。例如，多种I类MHC分子的晶体学分析指示β2M的氨基末端距驻留在MHC肽结合裂隙的抗原肽的羧基末端非常近，距离大约20.5埃。因此，使用长度大约13个氨基酸的相对短的接头序列，可将肽拴系到β2M的氨基末端。如果序列适当，此肽将结合到MHC结合沟槽(参见美国专利6,268,411，所述专利在此以引用的方式并入)。
在一些实施方案中，aAPC具有物理特性，所述物理特性使得aAPC能够扩增并激活抗原特异性T细胞(包括原初细胞)，以便例如产生细胞毒性T细胞和理想地长寿命的记忆T细胞。根据本公开的纳米aAPC基于以下各项的方面被工程化：除其他之外，颗粒大小、配体亲和力、配体结合的持续时间、结合配体的密度和/或簇、配体的大小和取向以及颗粒表面特性。人工抗原呈递细胞(aAPC)常规上被认为属于免疫突触领域，其中TCR和共信号簇被认为在激活尤其是针对原初T细胞的激活方面发挥重要作用。因此，虽然aAPC被创建来试图通过使用被设计来提供“群落(rafts)”或配体簇的细胞大小的颗粒和/或基体来模拟这些相互作用，但是当前的纳米级aAPC通过纳米大小的颗粒来模拟生物系统，从而在各种实施方案中具有工程化的颗粒大小和化学物质、T细胞配体、配体取向、配体密度和配体比率。
在一些实施方案中，抗原呈递复合物和共刺激信号缀合到在PEG共聚物的末端(例如，向外面向颗粒的表面的端部)上具有表面官能团的PLGA/PLGA-PEG颗粒或PLA/PLA-PEG颗粒，诸如PLGA-PEG-马来酰亚胺或PLA-PEG-马来酰亚胺颗粒，其提供亲水性外部表面上的用于化学偶联的官能团。在一些实施方案中，aAPC在外周血循环中持续足够长的时间以使得能够分布到靶组织，包括通过血液/淋巴交换运输到淋巴结。壳体的成分也可影响生物分布。因此，在各种实施方案中，所述颗粒具有亲水壳，其可通过共聚物的PEG部分形成。在各种实施方案中，所述颗粒的电荷例如由于PLGA或PLA上的COOH基团的组合以及通过由附接到颗粒表面的靶向配体贡献的电荷而是稍微负的。在一些实施方案中，所述颗粒(有或没有缀合的配体)具有约0至约-20mV，或者在一些实施方案中-5至-15mV或约-5至约-10mV的表面电荷。在一些实施方案中，纳米颗粒的大小和表面特征使得纳米颗粒能够被T细胞内化。
包含PLGA-PEG共聚物的纳米颗粒例如在美国专利8,420,123中进行描述，所述专利在此以引用的方式并入。
所述颗粒可从不规则形状到球形和/或从具有不平或不规则表面到具有平滑表面之间变化。球形颗粒相对于不规则大小的颗粒具有较小的表面积。如果使用球形颗粒，则由于减小的表面积而需要较少的药剂。在另一方面，不规则形状的颗粒比球形颗粒具有显著更大的表面积，这提供缀合蛋白含量/表面积和对细胞的表面积接触的优点。例如，不对称纳米颗粒可拥有具有沿着至少一个轴线的曲率半径的至少一个表面，所述曲率半径在以下范围中的一个中：(a)约1nm至约10nm；(b)约11nm至约100nm；(c)约101nm至约400nm；(d)约401nm至约1μm；(e)约10μm至约20μm；(f)约20μm至约100μm；以及(g)约101μm至约1mm。在一些实施方案中，不对称纳米颗粒可具有由以下尺寸限定的不对称形状：沿着x轴的尺寸(a)、沿着y轴的尺寸(b)以及沿着z轴的尺寸(c)，其中(a)、(b)或(c)中的至少一个不等于至少一个其他尺寸(a)、(b)或(c)。在一些实施方案中，不对称形状是椭圆形，其可通过以下等式中的一个描述：a>b＝c(长椭圆形)；a>b>c(三轴椭球型)；以及a＝b>c(扁椭圆形)。根据本发明可使用的不对称纳米颗粒在WO 2013/086500中进行描述，所述文献在此以引用的方式整体并入。
在各种实施方案中，颗粒大小的直径(平均直径)范围是20至500nm或50至500nm。在一些实施方案中，颗粒的平均大小小于约400nm，或小于约300nm，或小于约200nm，以允许组织(包括肿瘤组织)的更好的外周血循环和渗透。在一些实施方案中，纳米颗粒的平均大小(例如，直径或最大轴)是约50nm至约200nm，或约100nm至约200nm，诸如约120nm至约180nm或约50至约100nm。术语“约”在与数字特征相关联时意指±10％。在一些实施方案中，颗粒中的至少90％的范围是约120nm至约180nm，或者范围是约40nm至约110nm。颗粒的大小可以是一致的或者大小可变化，其中平均颗粒大小优选地如以上所述。在一些实施方案中，颗粒足够小以便利用“EPR效应”(增强的渗透性和保留效应)。
本文所述的配体和分子复合物可使用任何可用的过程化学地缀合到珠粒。用于配体结合的官能团包括PEG-COOH、PEG-NH2、PEG-SH、PEG-马来酰亚胺、PEG-吡啶基二硫化物和PEG丙烯酸酯。参见例如Hermanson，BIOCONJUGATE TECHNIQUES，Academic Press，NewYork，1996。激活官能团包括烷基和卤化酰基、胺、巯基、醛、不饱和键、酰肼、异氰酸酯、异硫氰酸酯、酮、叠氮基、炔烃衍生物、酸酐、环氧化物、碳酸酯、氨氧基、呋喃衍生物和已知激活用于化学结合的其他基团。可替代地，分子可通过使用小分子偶联剂结合到固体载体。偶联剂的非限制性实例包括碳二亚胺、马来酰亚胺、N-羟基琥珀酰亚胺酯、二氯乙基胺、双官能的醛诸如戊二醛、酐等。在其他实施方案中，如本领域所熟知，分子可通过亲和力结合诸如生物素-链亲和素连接或偶联来偶联到固体载体。例如，链亲和素可通过共价或非共价附接件结合到固体载体，并且生物素酰化分子可使用本领域中为人们所熟知的方法来合成。
激活化学物质使分子能够特异性地稳定地附接到固体载体的表面。存在可用于将蛋白质附接到官能团的多种方法。例如，常见的交联剂戊二醛可用于以两步过程将蛋白质胺基附接到胺化的固体载体表面。所得的连接是水解稳定的。其他方法包括包含与蛋白质上的胺反应的n-羟基-琥珀酰亚胺基(NHS)酯的交联剂、包含与含有胺-、巯基-或组氨酸-蛋白质反应的活性卤素的交联剂、包含与胺或巯基反应的环氧化物的交联剂的使用、马来酰亚胺基团和巯基之间的缀合以及通过侧糖部分的高碘酸盐氧化接着还原胺化的蛋白质醛基团的形成。
在一些实施方案中，颗粒或珠粒是包含PLGA作为芯聚合物、PLGA-PEG-马来酰亚胺以及酯封端的PLGA-PEG的聚合物。可替代地，颗粒或珠粒包含PLA作为芯聚合物、PLA-PEG-马来酰亚胺以及酯封端的PLA-PEG。马来酰亚胺基团为形成的颗粒提供颗粒的外表面上的亲水“隐形”涂层(PEG)以及附接到此壳体的可用于具有可用的至少一个游离巯基(-SH)基团的配体的共价附接的官能团。例如，HLA-Ig配体和/或抗CD28(或其他抗体配体)可被构建在Fc中含有S473C取代的人类IgG4框架(如文本所述)上。HLA-Ig或抗CD28的在473处的此未配对的半胱氨酸残基可在温和的还原条件下缀合到附接到PEG的马来酰亚胺基团。温和的还原条件不太可能使蛋白质，尤其是HLA-Ig分子的HLA-β-2-微球蛋白部分不可逆地变性。
在示例性实施方案中，纳米颗粒具有可针对体内特异性生物降解速率进行微调(通过调整LA:GA比率和/或PLGA聚合物的分子量)的芯(PLGA)、防止血清蛋白的调理作用和从循环去除的亲水外壳(像“PEG刷”一样起作用)、以连续控制配体密度(1分子/马来酰亚胺基团的随机关系)和配体的远离芯的取向而功能化的表面。在示例性实施方案中，PLGA基于20:1至1:20的LA:GA比率，包括以下比率的L/G的组成：5/95、10/90、15/85、20/80、25/75、30/70、35/65、40/60、45/55、50/50、55/45、60/40、65/35、70/30、75/25、80/20、85/15、90/10或95/5。PLGA通过其酯键的水解来降解。PLGA降解所需的时间与单体的比率相关：与主要是丙交酯单元相比，乙交酯单元的含量越高，降解所需的时间约低。另外，以酯(与游离羧酸相对)封端的聚合物具有更长的降解半寿期。
在一些实施方案中，PLGA基于4:1至1:4的LA:GA比率，并且在一些实施方案中，基于约1:1的比率。在一些实施方案中，PLGA芯的分子量是约20K至约50K，或约30K至约40K(例如，约35K)。PLGA-PEG聚合物(包括PLGA-PEG-马来酰亚胺和PLGA-PEG-MeOH聚合物)的PLGA部分的分子量范围是10K至30K(例如，约20K)，PEG部分的分子量是约2K至约10K，诸如约3K和/或约5K。在各种实施方案中，PLGA-PEG-马来酰亚胺和PLGA-PEG-MeOH聚合物的质量比是约15:1至约1:15，诸如约10:1至约1:10或约5:1至约1:5。在一些实施方案中，PLGA-PEG-马来酰亚胺和PLGA-PEG-MeOH聚合物的比率是约4:1至约1:4，诸如约4:1、约3:1、约2:1、约1:1、约1:2、约1:3和约1:4。在再另外的实施方案中，PLGA-PEG-马来酰亚胺和PLGA-PEG-MeOH聚合物的质量比的范围是1:5至约1:15，诸如约1:10。在一些实施方案中，此比率被选择来对配体密度进行微调，以用于最佳的T细胞激活。
在一些实施方案中，所述颗粒基于PLA聚合物。在一些实施方案中，PLA聚合物的分子量是约20K至约50K，或约30K至约40K(例如，约35K)。PLA-PEG聚合物(包括PLA-PEG-马来酰亚胺和PLA-PEG-MeOH聚合物)的PLA部分的分子量范围是10K至30K(例如，约20K)，PEG部分的分子量是约2K至约10K，诸如约3K和/或约5K。在各种实施方案中，PLA-PEG-马来酰亚胺和PLA-PEG-MeOH聚合物的质量比是约15:1至约1:15，诸如约10:1至约1:10或约5:1至约1:5。在一些实施方案中，PLA-PEG-马来酰亚胺和PLA-PEG-MeOH聚合物的比率是约1:4至约4:1，诸如约4:1、约3:1、约2:1、约1:1、约1:2、约1:3和约1:4。在再另外的实施方案中，PLA-PEG-马来酰亚胺和PLA-PEG-MeOH聚合物的质量比的范围是1:5至约1:15，诸如约1:10。在一些实施方案中，此比率被选择来对配体密度进行微调，以用于最佳的T细胞激活。
颗粒上的特定蛋白质的比率可变化。例如，抗原呈递复合物与抗CD28的比率可以是至少约30:1，或至少约10:1、约3:1、约1:1、约1:3、约1:10或至少约1:30。在一些实施方案中，所述比率是约5:1、约4:1、约3:1、约2:1、约1:1、约1:2、约1:3、约1:4或约1:5。偶联到颗粒的蛋白质的总量可以是1至约100μg，或约1至约50μg，或1至约10μg/颗粒的mg，或者在一些实施方案中，2至6μg/颗粒的mg。在一些实施方案中，颗粒的配体密度是约103至约105配体/μm2，或约104配体/μm2。例如，对于大小范围是20至200nm的纳米颗粒，纳米颗粒平均而言具有约5至约1500个配体/颗粒，诸如约10至约1500个配体/颗粒，或约10至约1200个配体/颗粒，或约10至约1000个配体/颗粒，或约10至约800个配体/颗粒。在一些实施方案中，颗粒含有小于约500个配体/颗粒，或小于约400个配体/颗粒，或小于约300个配体/颗粒，或小于约100个配体/颗粒，或小于约90个配体/颗粒，或小于约80个配体/颗粒，或小于约70个配体/颗粒，或小于约60个配体/颗粒，或小于约50个配体/颗粒，或小于约40个配体/颗粒，或小于约30个配体/颗粒，或小于约20个配体/颗粒，或小于约10个配体/颗粒，在一些实施方案中低至或小于约5个配体/颗粒。
在一些实施方案中，本发明采用针对信号1和信号2的最小构建体(诸如，针对信号1，是具有连接的β2微球蛋白的单体I类α链，其通过融合到正好在铰链区以上的Ig序列任选地是二聚体，并且针对信号2，是如所述的scFv)，从而提供用于自组装纳米颗粒的潜力。例如，PLGA-PEG或PLA-PEG聚合物使用缀合的配体(例如，PLGA-PEG-信号1和PLGA-PEG-信号2)制备，然后在特定的聚合物比率下与PLGA或PLA混合，接着进行纳米沉淀，使得最终的NP产物在混合/沉淀步骤(自组装)过程中形成。此过程可极大地简化制造程序。
在各种实施方案中，本发明提供药物组合物，所述药物组合物包含聚合物珠粒或颗粒、如本文所述的抗CD28抗体和/或抗原呈递复合物，诸如如本文所述的人源化Ig HLA融合复合物。药物组合物还可包含如所述的用于向T细胞呈递的抗原肽，并且所述抗原肽可与缀合的珠粒或颗粒共同配制。在各种实施方案中，药物组合物是贮存稳定的，并且在一些实施方案中以用于在施用之前复溶的冻干形式提供，或者以另一种“现用的”药物制剂提供。
在一些实施方案中，本发明提供药物组合物，所述药物组合物包含直径或平均直径是50至200nm(例如，100至200nm)的基于PLGA/PLGA-PEG的纳米颗粒或基于PLA/PLA-PEG的纳米颗粒，并且包含表面缀合的抗CD28抗体以及抗原呈递复合物。抗CD28抗体可以是人源化抗体，例如，如本文所述的，并且可以是抗体片段，诸如单链可变片段。在一些实施方案中，抗原呈递复合物包含至少一个HLA抗原结合裂隙。抗CD28和HLA复合物可单独或在同一反应中一起偶联到颗粒。药物组合物可包含至少一种肽抗原，诸如肿瘤抗原(例如，MART-1或本文所述的其他抗原)，并且所述抗原可与颗粒共同配制而不需要任何活性负载过程。
可与本文所述的纳米aAPC平台结合使用的替代聚合物包括以下中的一种或多种：含环糊精的聚合物、阳离子含环糊精的聚合物、聚(D，L-乳酸-共-乙醇酸)(PLGA)、聚(己内酯)(PCL)、乙烯乙酸乙烯酯聚合物(EVA)、聚(乳酸)(PLA)、聚(L-乳酸)(PLLA)、聚(乙醇酸)(PGA)、聚(L-乳酸-共-乙醇酸)(PLLGA)、聚(D，L-丙交酯)(PDLA)、聚(L-丙交酯)(PLLA)、PLGA-b-聚(乙二醇)-PLGA(PLGA-bPEG-PLGA)、PLLA-bPEG-PLLA、PLGA-PEG-马来酰亚胺(PLGA-PEG-mal)、PLA-PEG-马来酰亚胺、聚(D，L-丙交酯-共-己内酯)、聚(D，L-丙交酯-共-己内酯-共-乙交酯)、聚(D，L-丙交酯-共-PEO-共-D，L-丙交酯)、聚(D，L-丙交酯-共-PPO-共-D，L-丙交酯)、聚氰基丙烯酸烷基酯、聚氨酯、聚-L-赖氨酸(PLL)、甲基丙烯酸羟丙酯(HPMA)、聚乙二醇、聚-L-谷氨酸、聚(羟基酸)、聚酸酐、聚原酸酯、聚(酯酰胺)、聚酰胺、聚(酯醚)、聚碳酸酯、聚烯烃诸如聚乙烯和聚丙烯、聚亚烷基二醇诸如聚(乙二醇)(PEG)、聚环氧烷(PEO)、聚对苯二甲酸亚烷基酯诸如聚(对苯二甲酸乙二醇酯)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯醚、聚乙烯酯诸如聚(乙酸乙烯酯)、聚乙烯卤化物诸如聚(氯乙烯)(PVC)、聚乙烯吡咯烷酮、聚硅氧烷、聚苯乙烯(PS)、聚氨酯、衍生的纤维素诸如烷基纤维素、羟基烷基纤维素、纤维素醚、纤维素酯、硝基纤维素、羟丙基纤维素、羧甲基纤维素、丙烯酸的聚合物(诸如聚甲基丙烯酸甲酯(PMA)、聚((甲基)丙烯酸乙酯)、聚((甲基)丙烯酸丁酯)、聚((甲基)丙烯酸异丁酯)、聚((甲基)丙烯酸己酯)、聚((甲基)丙烯酸异癸酯)、聚((甲基)丙烯酸月桂酯)、聚((甲基)丙烯酸苯酯)、聚(丙烯酸甲酯)、聚(丙烯酸异丙酯)、聚(丙烯酸异丁酯)、聚(丙烯酸十八烷基酯)(丙烯酸)及其共聚物和混合物)、聚二氧杂环己酮及其共聚物、聚羟基烷羧酸酯、聚丙二醇富马酸酯)、聚甲醛、泊洛沙姆(poloxamer)、聚(原酸)酯、聚(丁酸)、聚(戊酸)、聚(丙交酯-共-己内酯)、三亚甲基碳酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、聚原酸酯、聚磷腈和聚磷酸酯、树枝状聚合物及其衍生物、以及两种或更多种此类聚合物的共混物和/或嵌段聚合物。
本文所述的药物组合物可用于免疫疗法，例如，可用于通过向有需要的患者施用有效量的组合物来诱导抗原特异性细胞毒性T细胞形成的方法中。在一些实施方案中，所述患者是癌症患者。
本文所述的基于颗粒的抗原呈递平台可通过任何适当的途径向患者施用，所述途径包括静脉内施用、动脉内施用、皮下施用、皮内施用、淋巴管内施用和肿瘤内施用。患者包括人类患者和兽医学概念上的患者。
在一些实施方案中，本发明提供包含聚合物PLGA/PLGA-PEG颗粒或PLA/PLA-PEG颗粒的药物组合物，所述聚合物PLGA/PLGA-PEG颗粒或PLA/PLA-PEG颗粒具有约20至200nm(例如，在一些实施方案中，50至200nm或100至200nm)的大小范围、约-0至-20mV(并且在一些实施方案，-5至-10mV)的表面电荷以及约10至1500个蛋白配体/颗粒或10至约150个配体/颗粒(例如，约10至约100个配体/颗粒)。示例性颗粒具有0.3或更小的多分散指数(PDI)。在一些实施方案中，蛋白质配体通过巯基-马来酰亚胺化学物质各自偶联到颗粒。配体包括抗CD28抗体配体的群体、和HLA配体的群体以及用于向T细胞呈递的一种或多种抗原肽。组合物包含用于静脉内、动脉内、皮下、皮内、淋巴管内或肿瘤内施用的药学上可接受的载体。在一些实施方案中，组合物被配制成用于皮下施用。
具体地，抗原呈递平台可用于治疗患有感染性疾病、癌症或自身免疫疾病的患者，或者向免疫抑制患者提供预防性保护。
可被治疗的感染性疾病包括由细菌、病毒、朊病毒、真菌、寄生生物、蠕虫等导致的那些疾病。此类疾病包括AIDS、肝炎、CMV感染以及移植后淋巴增生性病症(PTLD)。例如，CMV是存在于器官移植患者中的最常见的病毒病原体并且是经历骨髓或外周血干细胞移植的患者发病和死亡的主要原因(Zaia，Hematol.Oncol.Clin.North Am.4，603-23，1990)。这是由于这些患者的免疫受损状态引起的，所述免疫受损状态允许血清反应阳性的患者中的潜伏病毒的再激活或血清反应阴性的个体中的机会性感染。当前治疗聚焦于使用抗病毒化合物诸如更昔洛韦，所述化合物具有缺点，最显著的是药物耐受的CMV的发展。对这些治疗的可用替代方法是预防性免疫治疗方案，其涉及在开始移植程序前，生成源自患者或合适的供体的病毒特异性CTL。
PTLD发生在相当大比例的移植患者中并且由爱泼斯坦－巴尔二氏病毒(EBV)感染引起。据信EBV感染存在于大约90％的美国成人群体中(Anagnostopoulos&Hummel，Histopathology 29，291-2)15，1996)。活性病毒复制和感染由免疫系统保持检查，但是在CMV的情况下，由移植疗法而免疫受损的个体丧失了控制T细胞群，这允许病毒再激活。这表示对移植方案的严重阻碍。EBV还可涉及多种血液学和非血液学癌症中的肿瘤促进。EBV与鼻咽癌之间也存在强烈的关联。因此，使用EBV特异性的T细胞的预防性治疗为当前疗法提供了优异的替代方法。
根据本发明可被治疗的癌症包括黑素瘤、癌症例如结肠癌、头颈癌、十二指肠癌、前列腺癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、导管癌、结肠癌、肝癌、胰腺癌、肾癌、子宫内膜癌、胃癌、发育异常口腔粘膜癌、息肉病、侵入性口腔癌、非小细胞性肺癌、尿道移行细胞癌及鳞状上皮细胞癌等；神经系统恶性肿瘤，例如成神经细胞瘤、神经胶质瘤等；血液恶性肿瘤，例如慢性粒细胞白血病、儿童急性白血病、非何杰金氏淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病、恶性皮肤T-细胞瘤、蕈样肉芽肿病，非MF皮肤T-细胞淋巴瘤、淋巴瘤样丘疹病、T-细胞富集性皮肤淋巴增生、大疱性类疱疮、全身性盘状红斑狼疮、扁平苔癣等；以及类似的癌症。参见，例如Mackensen等人，Int.J.Cancer 86，385-92，2000；Jonuleit等人，Int.J.Cancer 93，243-51，2001；Lan等人，J.Immunotherapy 24，66-78，2001；Meidenbauer等人，J.Immunol.170(4)，2161-69，2003。
在一些实施方案中，本发明提供用于通过施用本文所述的药物组合物以激活具有抗肿瘤活性的T细胞来治疗癌症的方法，所述癌症包括以上确认的那些癌症。在一些实施方案中，所述疗法与一种或多种免疫检查点抑制剂一起提供，所述免疫检查点抑制剂诸如纳武单抗(Nivolumab)、派姆单抗(Pembrolizumab)和依匹单抗(Ipilimumab)。在一些实施方案中，另外的疗法是抗CTLA4或抗PD1或抗PD-L1。另外的疗法或检查点抑制剂可通过其常规方案单独施用，或者可作为另外的配体施用到本文所述的纳米颗粒，或者附接到纳米颗粒的单独的群体。在一些实施方案中，一种或多种免疫检查点抑制剂作为初始疗法提供，并且使用本文所述的aAPC的疗法例如在检查点抑制剂疗法的约1至约8周之后，或者检查点抑制剂疗法的约2至约4周之后随后开始。在一些实施方案中，一种或多种检查点抑制剂例如在疗法开始时并且约每两周一次与纳米颗粒疗法同时提供，或者在疗法开始时并且约每两周一次提供一种或多种检查点抑制剂并且约每四周一次提供纳米颗粒疗法。在一些实施方案中，患者对检查点抑制剂疗法具有抗性或仅显示部分或瞬态应答，并且本文所述的aAPC在这些患者中增强肿瘤消退。在再另外的实施方案中，针对通常对检查点抑制剂疗法有抗性的癌症，本文所述的组合物扩展检查点抑制剂对此类癌症的成功使用。
在一些实施方案中，肽抗原基于对患者肿瘤的分析，针对患者在个人化的基础上进行选择。例如，可使用由Ionov Y.，A high throughput method for identifying personalized tumor-associated antigens，Oncotarget1(2):148-155(2010)(所述文献在此以引用的方式并入)所述的过程或其他过程。在这些实施方案中，可在个人化基础上提供纳米颗粒，并且选择和负载肿瘤抗原。
在一些实施方案中，纳米aAPC在过继性T细胞疗法之后用作加强疫苗，其中，来自患者的原初T细胞或来自HLA匹配供体的T细胞在体外扩增，并且施用给患者。在这些实施方案中，纳米aAPC组合物可在4个月至约1年的时间内施用1至约10次以增强癌症免疫性。
可被治疗的自身免疫疾病包括哮喘、系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、I型糖尿病、多发性硬化症、克罗恩氏病(Crohn's disease)、溃疡性结肠炎、牛皮癣、重症肌无力、古德帕斯彻氏综合征、格雷夫斯病、寻常性天疱疮、阿狄森氏病、疱疹样皮炎、乳糜泻以及桥本氏甲状腺炎。
抗原特异性辅助T细胞可用于激活巨噬细胞或激活B细胞以产生可用于例如治疗感染性疾病和癌症的特异性抗体。抗体产生B细胞自身也可用于此目的。
本发明还提供编码本文所述的氨基酸序列的多核苷酸以及表达所述氨基酸序列的宿主细胞。
本发明进一步通过以下非限制性实施例进行说明。
实施例
实施例1：种系人源化可变区和人类恒定区序列的设计
此实施例除其他外示范了来自小鼠抗CD28抗体模板的种系人源化(CDR接枝)抗体的序列的设计；包括人类IgG4的人类恒定区序列的设计，所述序列含有S241P(Kabat编号)铰链稳定化突变、去除残余Fcγ受体结合的L248E(Kabat编号)突变以及适于偶联抗体的半胱氨酸残基(S473C，Kabat编号)；具有潜在非结合到CD28的变体种系人源化抗体V结构域的设计；用于将HLA-A*02:01融合到种系人源化抗体的不含有潜在T细胞表位的N末端的接头序列的设计。
起始抗CD28抗体是鼠9.3单克隆抗体(Tan等人，J.Exp.Med.1993 177:165)。使用Swiss PDB产生9.3抗体V区的结构模型并进行分析，以便识别V区中的可能对抗体的结合特性是必需的氨基酸。与大量的框架残基一起包含在CDR(使用Kabat和Chothia定义两者)内的所有残基被认为对于结合具有潜在的重要性。抗CD28的VH和Vκ序列两者含有典型的框架(Fw)残基，并且CDR1、2和3基序与许多鼠抗体是相当的。
对于人源化，选择人类IGHV4-59种系Fw作为重链的模板(优先于由Tan等人，J.Immunol 2002 169:1119-1125所选择的IGHV3/OR16-10)。选择IGKV4-01种系Fw作为轻链的模板。这两个Fw对于其相应的鼠VH和Vκ序列均具有62％同源性。将鼠CDR接枝到这些Fw中并且也包含变化数量的鼠Fw残基，以创建三种人源化VH变体和三种人源化Vκ变体(图1-6)。
对于重链Fw，Fw1残基1和3被认为对于抗原结合是重要的，因为它们与结合口袋相邻，而残基6被认为影响β链支持残基1和3的构象和CDR3的构象两者。因此将这些鼠Fw残基保留在所有变体中。
在Fw2中，残基37被认为对于维持VH与Vκ之间的界面是重要的，而残基48被认为支持CDR2的构象；因此将这两个残基保留在所有变体中。
在Fw3中，残基73、76和78直接接触CDR1，而残基71接触CDR1和CDR2两者；因此可能需要这些残基用于抗原结合(取决于CDR1和CDR2的贡献)并且因此保留在所有变体中。残基71有时可通过影响残基71至78的构象而间接影响CDR1的构象，而残基82a和82c也可间接影响CDR2的构象。因此将这些残基仅保留在VH1中。残基67和82在三维结构中相邻并且相互作用，以便填充可影响CDR2的构象并且潜在地影响支持CDR 1和3的β链的空间。因此将这些残基保留在变体VH1和VH2中。
对于轻链Fw，Fw1残基3与结合口袋相邻并且可直接参与抗原结合，而残基4直接支持CDR3的构象。因此将这些鼠Fw残基保留在所有变体中。
在Fw2中，残基49支持CDR2的构象并且对于重链与轻链之间的界面也是重要的，其中残基49直接支持重链CDR3的构象，因此被保留在所有变体中。
在Fw3中，残基85和87被认为对于重链和轻链的界面是重要的并且对于支持CDR3的构象也是重要的，并且因此被保留在所有变体中。残基80被认为潜在地对CDR 2和3的构象具有间接的影响，并且因此仅保留在Vκ1中。残基70通常与轻链残基R24形成盐桥，并且因此对于Vκ结构域具有重要的构象影响。在抗CD28中，此盐桥不存在(因为残基70是N而不是D)并且引入此相互作用可能是不利的；然而在鼠抗体中，N70是糖基化的(NFS)并且在人源化过程中去除此是有益的；因此将鼠N保留在Vκ1和Vκ2中，但是在Vκ3中改变为D。
将基于人类IgG4/κ的恒定区序列设计成并入铰链稳定化突变(S241P)和在较低铰链中的去除残余的Fcγ受体结合的突变(L248E)。半胱氨酸残基也包含在Fc的C末端附近以用于化学偶联目的(S473C)。修饰的IgG4重链恒定区序列在图7中示出，与κ轻链恒定区序列(图8)一起示出。
将另一个VH结构域设计成潜在地非结合到CD28，并且此序列在图9中示出。对鼠V区序列的分析表明(根据小鼠种系V区的体细胞突变的程度)VH可能是CD28结合的主要原因。因此仅设计一个潜在的非结合人源化VH变体。此变体不含有重新组成正确的CDR构象的任何小鼠Fw残基，并且还含有在可能对于结合是重要的残基处的CDRH3的三种突变(Y100A、Y100aA、Y100bA)。
实施例2：用于将HLA-A*02:01融合到人源化抗体的接头的设计
构建用于将HLA-A*02:01(IMGT登录号HLA00005)融合到人源化抗CD28抗体的N末端的接头并将其并入通过iTopeTM和TCEDTM进行的分析以去除潜在的免疫原性。
iTopeTM软件预测在34个人类MHC II类等位基因的开端结合沟槽内的肽的氨基酸侧链与特异性结合口袋(具体地是口袋位置；p1、p4、p6、p7和p9)之间的有利相互作用。这些等位基因表示在世界范围内存在的最普通的HLA-DR等位基因，没有归因于在任何特定种族人群中最普遍地存在的那些等位基因的加权。二十个等位基因含有‘开放’p1构型，并且十四个含有‘闭合’构型，其中在位置83处的甘氨酸被缬氨酸替换。关键结合残基的定位通过在电脑中生成通过横跨测试蛋白序列的一个氨基酸重叠的9聚体肽来实现。与物理MHC II类结合实验的对比显示iTopeTM可用于以高准确度成功区分结合或不结合MHC II类分子的肽。使用含有源自先前在EpiScreenTM体外T细胞表位作图测定中筛选的序列的大数据库的肽(>10,000个肽)的序列的TCEDTM，减少电脑上MHC II类结合分析的任何限制。因此可使用TCEDTM来针对非相关的抗体和蛋白序列检索任何测试序列以找到与真实的体外免疫原性的相关性。
使用iTopeTM进行的对接头序列的分析使用横跨接头序列的重叠的9聚体进行，针对34个MHC II类等位基因中的每一个对其进行测试。基于与MHC II类分子的潜在‘适配’和相互作用对每个9聚体评分。通过软件计算的肽评分处于0与1之间。产生高平均结合评分(在iTopeTM评分函数中>0.55)的非种系肽被突出显示，并且如果≥50％的MHC II类结合肽(即，34个等位基因中的17个)具有高结合亲和力(评分>0.6)，那么此类肽被定义为“混杂高亲和力”MHC II类结合肽(其被认为具有含有CD4+T细胞表位的高风险)。具有评分>0.55(但是没有大部分>0.6)的≥50％MHC II类结合肽的肽被定义为“混杂中等亲和力”MHC II类结合肽。使用TCEDTM进行对序列的进一步分析。使用序列通过BLAST检索询问TCEDTM，以便识别来自在先前EpiScreenTM研究中刺激T细胞应答的非相关蛋白的肽(T细胞表位)之间的任何高序列同源性。
Schneck等人所使用的序列并入两个接头，一个在HLA-A*02:01的N末端处以与N末端信号序列连接，并且一个在C末端处以用于融合到抗CD28VH结构域(例如见图9)。对于N末端接头，分析从信号序列裂解位点通过接头并且包括HLA-A*02:01成熟蛋白的前8个氨基酸的序列。对于C末端接头，分析从HLA-A*02:01α3结构域的末端8个氨基酸通过接头序列并且多至抗CD28VH结构域的前8个氨基酸的序列。
结合评分>0.6(高亲和力)的肽结合到MHC II类等位基因中的大部分(≥17)(被称为混杂高亲和力结合物)。结合评分在0.55与0.6之间的中等亲和力结合物结合≥17个MHCII类等位基因。发现N末端接头含有两个混杂MHC II类结合序列，一个高亲和力(其中p1锚在位置2处)和一个中等亲和力(其中p1锚在位置4处)。发现C末端接头含有一个混杂中等亲和力MHC II类结合肽，其中p1锚在位置11处。
使用如在iTopeTM分析中所使用的相同序列实施Antitopes T细胞表位数据库(TCEDTM)的BLAST检索，以便确定与先前识别的表位的任何同源性。使用TCEDTM来针对源自在EpiScreenTMT细胞表位作图测定中测试的非相关序列的大数据库的肽(>10,000个肽)检索任何测试序列。发现接头序列中的任一个在TCEDTM中均不含有任何‘命中’。
进一步使用iTopeTM来评定接头的序列改变，以便降低其结合到MHC II类的倾向。注意到，N末端接头可完全去除，使得HLA-A*02:01的N末端直接融合到pBFKsr载体中提供的信号序列或融合到其天然信号序列。这确保融合蛋白的N末端仅含有人类种系序列并且避免T细胞表位的风险。发现以下推荐的接头序列降低MHC II类结合到本底残基水平(等位基因中<5个被任何9聚体结合)，并且提供适用于克隆的限制性位点(虽然两条序列均需要载体的修饰)：
N末端接头：
Figure GDA0001386740110000331
C末端接头：
Figure GDA0001386740110000332
实施例3：序列的密码子优化和表达克隆
使用
Figure GDA0001386740110000333
优化密码子，并且克隆优化的序列以用于如下所示的表达。
使用PmeI限制性位点、Kozak序列和信号肽对序列工程化以用于在NS0细胞中表达。翻译紧接着Kozak序列的下游开始。
HLA-IgG4HC融合体的完整翻译序列在图10中示出。
LC3(VK3)的翻译序列在图11中示出。
HC1的翻译序列在图12中示出。
HC2的翻译序列在图13中示出。
也表达人类β2微球蛋白。
实施例4：NS0细胞中的表达
基于Biacore亲和力数据和其他考虑，选择HC1::LC3和HC2::LC3重链和轻链组合分别作为用于StableFast-NS0细胞系开发的初级和二级mAb候选物。
用于STABLEFAST-NS0细胞系生成的pBFksr::HC1::LC3双顺反子表达载体的最终载体图在图14中描绘。使用相同的方式完成pBFksr::HC2::LC3的构建。
在补充的不含血清的生长培养基中扩增亲本NS0细胞。在建立健康的培养物之后，使一千万个细胞(10×106)转染有45μg线性化的(ΔPvuI)表达载体DNA。使细胞在生长培养基中整体恢复24小时。恢复之后，将细胞在补充的不含血清的选择性培养基(胆固醇-)中洗涤，重悬浮在选择性培养基中并且以200μL/孔分布到40×96孔板。真实分布是对于HC1::LC3和HC2::LC3分别是1140个细胞/孔和840个细胞/孔。将板在37℃，5％CO2下孵育一周并且进料有酚红补充的选择性培养基。在转染之后两周时，基于从红色到黄色的培养基颜色变化，大量孔在活跃地生长。
通过ELISA针对人类IgG表达筛选来自HC1::LC3转染的总计1,127个孔。筛选来自HC2::LC3转染的总计612个孔。基于IgG浓度，针对HC1::LC3和HC2::LC3分别将总计290个和101个细胞系按比例扩大到24孔板。使用24小时生产率测定选择最佳表达者以用于进一步分析。简单而言，在500μL新鲜培养基中以5×105个细胞接种24孔板。在24小时之后，通过ELISA筛选上清液。基于IgG浓度，针对HC1::LC3和HC2::LC3分别将总计60个和24个细胞系按比例扩大到6孔板。
使用3天比生产率测定选择最佳表达者以用于进一步分析。简单而言，在1.5mL新鲜培养基中以4×105个细胞接种6孔板。在3天之后，对细胞进行计数并且通过ELISA筛选上清液。基于IgG浓度和生长，可计算以pg/细胞/天计的平均比生产率或SPR。基于相对SPR，针对HC1::LC3和HC2::LC3分别将总计20个和10个细胞系按比例扩大到T-75烧瓶。在T-75规模下重复3天SPR测定以针对悬浮适应选择最终细胞系并按比例扩大以用于mAb生产。
将每种mAb的五个细胞系按比例扩大到30-mL振荡器培养基并且针对SPR和生长重新评估。将所有的悬浮系储备入库。将每种mAb的表现最佳的细胞系按比例扩大到旋转培养基以用于小规模生产。
对于HLA-IgG4融合蛋白，构建pBFksr::HLA-IgG4::LC3双顺反子表达载体以用于STABLEFAST-NS0细胞系生成。载体图在图15中示出。还针对编码全部三种融合蛋白亚单元(人类HLA-IgG4重链融合体、CD28轻链[LC3]和人类β2微球蛋白)的三顺反子表达载体创建含有人类β2微球蛋白基因的表达盒和载体。三顺反子构建体在图16中示出。通过上清液的ELISA和蛋白质印迹分析确认全部三种基因的表达均在瞬态HEK293培养物中。
实施例5：人源化配体的功能性表征
测试针对CD28的人源化单克隆抗体的诱导新鲜分离的PBMC在涂覆mAb的板上的扩增的能力。如图17所示，人源化抗CD28与亲本闭合相似地发挥作用并且不是超激动剂。
测试人源化单克隆抗体的对人类T细胞系上的CD28染色的能力。结果在图18中示出。图(A)示出使用鼠抗人类CD28mAb(克隆9.3，同种型IgG2a)的染色。从左向右的峰是：未染色的细胞、抗IgG2a FITC和抗CD28+抗IgG2a FITC。图(B)示出使用人源化抗CD28(同种型IgG4)的染色。从左向右的峰是：未染色的细胞、抗IgG4PE、抗CD28(35ng)+抗IgG4PE、抗CD28(1μg)+抗IgG4 PE。使用人源化抗CD28的染色可使用克隆9.3mAb阻断(未示出)。
在HLA-Ig纯化之后，通过ELISA使用构象依赖性抗HLA mAb捕获肽负载的蛋白来检查抗原肽负载效率(如在Immunology Chapter 17.2中的Current protocols所述)。与非特异性肽的0％(即，MHC错配)相比，预期特异性肽的～90％的可再现负载效率(即，正确的MHC限制)。
实施例6：纳米颗粒制剂
以下实施例示范了纳米颗粒的合成，所述纳米颗粒具有由分子量为35K的PLGA(LA:GA＝1:1)形成的芯。颗粒的电晕由来自PLGA-PEG-COOH或PLGA-PEG-马来酰亚胺和PLGA-mPEG(甲氧基PEG)的混合物的PEG共聚物形成。COOH和马来酰亚胺官能端基允许多肽缀合。甲氧基PEG相对于PEG链上的官能端基是惰性的。PLGA部分的分子量是10-30K(例如，约20K)，并且PEG部分的分子量是3和5K。对于此实施例，纳米颗粒由50％芯PLGA(35K)以及25％PLGA-PEG-COOH和25％PLGA-mPEG的混合物形成。PLGA-PEG-COOH(或马来酰亚胺)和PLGA-mPEG的比率使得能够对颗粒表面上的配体密度进行微调。相似的颗粒可使用其他聚合物制备，诸如PLA和PLA-PEG，包括具有相似的分子量和官能团密度。
PLGA内芯提供结构和大小，并且是降解速率的驱动因素。使用水浸润芯纳米颗粒导致PLGA聚合物的水解并最终导致纳米颗粒的降解。
PLGA-mPEG聚合物相对于可用于缀合蛋白质/肽配体是惰性的，并且因此起到向芯纳米颗粒提供从具有亲水PRG最外层的疏水PLGA芯向外延伸的电晕涂层的作用。除其他情况之外，这有助于包括通过限制血清蛋白(例如，白蛋白)的结合来防止单核吞噬细胞系统(MPS)调理和去除纳米颗粒。
PLGA-PEG-COOH和PLGA-PEG-马来酰亚胺与PLGA-mPEG起到相同的作用，并且另外，共聚物的每个PEG链都以官能团终止。在完整的纳米颗粒形成之后，可使用EDC-磺基-NHS激活PLGA-PEG上的末端COOH基团以创建将与蛋白质/肽上的可用的伯胺基形成肽键的反应性基团。因为此策略不控制哪些可用的伯胺基将缀合到PLGA-PEG聚合物上的激活的-COOH基团，所以纳米颗粒的表面上的配体的取向是不受控的，并且因此并非所有的将均是具有生物活性的。
替代方案是制备诸如在单克隆IgG(针对小鼠配体是IgG1；针对人类配体是IgG4)的远侧Fc区中含有未配对的半胱氨酸残基的配体。此未配对的半胱氨酸起到用于缀合到PLGA-PEG-马来酰亚胺(或可用于与未配对的半胱氨酸残基形成共价键的其他合适的官能团)的特异性位点的作用。这使得每个配体能够以位点特异性方式缀合，这应导致大部分表面配体以支持生物活性的外部取向缀合。例如，所述策略使得每个配体的结合部分从纳米颗粒的疏水PLGA部分向外延伸并且稍微在电晕的亲水PEG链的外部。
纳米颗粒的大小范围是20至200nm；多分散指数(PDI)是2或更小(例如，在一些实施方案中是0.3或更小)；并且ζ电位(表面电荷)是-15mV至0mV。预期具有此组成、大小和电荷的纳米颗粒对于体内PK/ADME具有有益特性。具体地，它们足够小(<200nm)来运输到靶组织(包括肿瘤微环境)并且在血液与淋巴之间移动；它们的亲水PEG层和稍微负的电荷将有助于阻滞血清蛋白的结合以及纳米颗粒的调理作用，所述调理作用将导致在分布到靶组织之前通过MPS的细胞从循环中去除；聚合物混合物应导致在数天多至2周内测量的生物降解速率；并且外部取向的蛋白配体应提供关于具有同源TCR和共刺激受体(例如，CD28、4-1BB)的T细胞的结合的最大生物活性。此外，在一些实施方案中，在配制过程中，纳米颗粒的疏水芯可负载有可溶性有效载荷(例如，IL-2、抗TGF-b、IL-21或小分子药物)。
示例性聚合物组成(总聚合物重量100mg)：
PLGA 35KDa 50％w/w
PLGA-PEG-官能团20KDa-5KDa 25％w/w
PLGA-PEG-MeOH 20KDa-5KDa 25％w/w
将聚合物溶解在1ml二氯甲烷中，添加2.3ml 5％PVA(20KDa)并且使用探针超声波仪使溶液乳化。向46ml 0.5％PVA溶液添加乳液并且搅拌2小时，直至溶剂完全蒸发。
为了纯化，将颗粒以3,700rpm离心30分钟，通过0.45微米过滤器过滤并且以10,000rpm离心10分钟以去除较大颗粒。使用以2000rpm离心过滤(截断值100KDa)，用去离子水洗涤颗粒以去除PVA。
使用以下方案用于配体的缀合。将40mg的纳米颗粒以1mg/ml浓度分散在pH 6的10mM HEPES缓冲液中。向溶液添加80mg EDC和89.16mg S-NHS并且搅拌30分钟。通过离心过滤器在2500rpm下去除过量EDC和S-NHS。将颗粒以1mg/ml浓度重新分散在PBS中，并且向溶液添加对应于8mg/mg颗粒的Kb-Ig和抗CD28的混合物。将颗粒在4℃下搅拌过夜。
使用PBS洗涤颗粒(17,000rpm x 50分钟)。在第二次洗涤之后，将颗粒在100mg/ml蔗糖溶液中(总计添加的蔗糖是4mg)复溶。
测定颗粒特性。
Figure GDA0001386740110000381
实施例7：Fc铰链区融合
通过将抗原呈递复合物(诸如H2-Kb或HLA-2)直接融合到Ig铰链区来设计二聚体抗原呈递配体。H2-Kb Fc铰链蛋白含有融合到小鼠IgG1的铰链-CH2-CH3部分的小鼠I类Kb细胞外结构域，对于其，未配对的半胱氨酸被工程化以替换在重链的位置231处的丝氨酸残基。此设计在图19中示出。
图27示出基于Kb-SIY Fc-铰链蛋白的纳米aAPC特异性地染色同源靶2C T细胞。
图29示出使用含有铰链二聚体构建体的纳米aAPC的Kb-特异性2C T细胞(A)和Db-gp100-特异性pmel T细胞的扩增。使用Miltenyi珠粒和Dyna珠粒(约4.5微米直径)以用于对比。批次NI-19、NI-21、NI-22(含有Kb铰链二聚体)和批次NI-24和NI-25(含有Db铰链二聚体)的物理特性在图32中示出。NI-22是阴性对照。
实施例8：示例性纳米aAPC化学物质
使用通过可用的伯胺缀合的配体制备PLGA和PLGA-PEG-COOH纳米aAPC。基于PLGA40的PLGA颗粒(200nm)没有显示出足够的稳定性。基于PLGA-PEG-COOH(40K/3K):PLGA-mPEG(17K/3K)并且具有1:4的PEG:mPEG比率的颗粒显示出良好的稳定性和活性。(图20)
以下描述配体的定点缀合的过程，在图31中示出。使用第二生成配体的位点特异性硫醇缀合制备纳米aAPC，所述配体包括基于融合到Ig铰链区的pHLA复合物的配体。配体的鼠版本和人源化版本两者均用于制备纳米aAPC。经由两步骤方法制备纳米APC。首先，通过纳米沉淀方法制备由PLGA-mPEG和PLGA-PEG-马来酰亚胺组成的颗粒。例如，将PLGA-mPEG和PLGA-PEG-马来酰亚胺的混合物(PLGA-PEG-马来酰亚胺％w/w在1-55％之间变化)以50mg/mL的最终浓度溶解在乙腈中。在搅拌下使用注射泵将此溶液以5mL/分钟注入到PVA溶液中(MnPVA＝9kDa，0.5％w/v)。有机溶剂:含水溶剂在1:1至1:20之间跳变变化。可使用微流控、限定的碰撞喷射器(confined impinging jet)和多入口的涡流混合器装置制备颗粒，从而确保优异的稠度和较窄的粒度分布。通过切向流过滤(TFF)或使用Amicon离心过滤器纯化颗粒。然后将颗粒重悬浮在缀合缓冲液(HEPES 50mM，EDTA 10mM，pH＝6.7)中。最后，通过将抗CD28和KbSIY/HLA配体的混合物缀合到颗粒来制备纳米aAPC。配体到颗粒的缀合允许在室温下过夜进行。配体:颗粒的质量比的范围是1-500μg/mg颗粒。抗CD28:Kb/HLA的比率在0-1之间变化。使用SEC或TFF去除未结合的配体。制备具有90nm的平均大小直径和在50-120nm之间的粒度分布的颗粒。(图32)
如图22所示，PLGA-PEG aAPC颗粒以剂量依赖方式刺激抗原特异性T细胞的增殖。此外，并且如图23所示，基于PLGA-PEG的aAPC在冻干之后是稳定的。
使用增加量的SIY负载的PLGA-PEG纳米aAPC的2C T细胞的第4天培养在图24中示出，显示抗原特异性T细胞的剂量依赖扩增。图25示出使用纳米aAPC刺激1天之后的T细胞增殖簇。
图28示出具有配体的位点特异性硫醇缀合的纳米aAPC。珠粒含有1:1比率的PEG-COOH与mPEG聚合物(批次72B)或1:9的PEG-马来酰亚胺:mPEG比率(批次77B)。两者均是稳定的且具有活性的。
图30示出人类CMV或MART-1特异性T细胞的基于纳米aAPC的扩增。示出基于Dynal的APC以用于比较。在第0天、第7天、第14天和第21天显示扩增。CD8染色在X轴上示出，并且抗原特异性T细胞基于肽-MHC四聚体染色在Y轴上识别。
图31示出示例性纳米颗粒的配制，包括将配体缀合到具有马来酰亚胺定点化学物质的颗粒(A)；通过动态光散射(DLS)对颗粒表征(B)；以及对代表性批次(NI26)的大小、电荷和PDI表征。NI26颗粒在大约108nm、0.08的PDI和-6.7mV的电荷下显示出峰粒度分布。
以引用的方式并入
本文引用的所有专利和出版物在此以引用的方式整体并入。
Figure IDA0001386740120000011
Figure IDA0001386740120000021
Figure IDA0001386740120000031
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Figure IDA0001386740120000341

Claims (24)

1.一种包含aAPC的组合物，其中所述aAPC包含附接了二聚体抗原呈递复合物的纳米颗粒，其中所述二聚体抗原呈递复合物包含HLA免疫球蛋白融合体，所述HLA免疫球蛋白融合体包含与两个免疫球蛋白序列中的每一个融合的HLA氨基酸序列，每个免疫球蛋白序列具有CH2和CH3结构域的部分重链序列和铰链区，不存在可变结构域序列和不存在轻链序列，其中所述HLA氨基酸序列直接融合到铰链区，并且所述抗原呈递复合物附接到所述纳米颗粒，所述纳米颗粒的大小范围是20至200nm，
其中，所述纳米颗粒包括：
PLGA或PLA聚合物芯，和
由PEG聚合物形成的亲水壳，
其中聚合物纳米颗粒包括PLGA/PLA-PEG和PLGA/PLA-mPEG嵌段共聚物，PLGA/PLA部分的分子量为10kDa至30kDa，PEG部分的分子量为2kDa至10kDa，PEG部分形成亲水壳；其中所述PLGA/PLA-PEG和PLGA/PLA-mPEG嵌段共聚物以1∶10至2∶1的质量比存在；并且其中PLGA/PLA-PEG聚合物的一部分具有多肽配体的末端附接件；其中多肽配体包括肽-HLA配体及抗CD28和抗4-1BB配体中的一种或多种，并且每个颗粒含有少于500个配体。
2.如权利要求1所述的组合物，其中所述两个免疫球蛋白序列通过二硫键接合。
3.如权利要求1或2所述的组合物，其中所述CH2和CH3结构域是人类IgG4。
4.如权利要求1或2所述的组合物，其中所述CH2和CH3结构域包含一个以上铰链稳定化突变。
5.如权利要求1所述的组合物，其中所述纳米颗粒包含选自CD80、CD86、B7-H3、4-1BBL、CD27、CD30、CD134、B7h、CD40、LIGHT、特异性地结合到HVEM的抗体、特异性地结合到CD40L的抗体、特异性地结合到OX40的抗体、特异性地结合Fas的抗体、特异性地结合PD1的抗体、特异性地结合到GITR的抗体、和特异性地结合到4-1BB的抗体的信号。
6.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗CD28配体包括抗原结合抗体片段或部分。
7.如权利要求1所述的组合物，其中所述抗CD28配体和所述HLA免疫球蛋白融合体具有IgG4恒定区，所述IgG4恒定区具有在S241和L248处的突变和在密码子473处的未配对的半胱氨酸。
8.如权利要求7所述的组合物，其中所述抗CD28配体通过在所述免疫球蛋白重链的密码子473处的所述未配对的半胱氨酸缀合到所述颗粒。
9.如权利要求1所述的组合物，其中所述HLA氨基酸序列是HLA-A2氨基酸序列。
10.如权利要求9所述的组合物，其中HLA-A2氨基酸序列是HLA-A*02∶01。
11.如权利要求1所述的组合物，其还包含与所述HLA结合以呈递给T细胞的抗原肽。
12.如权利要求11所述的组合物，其中所述抗原肽包含一种以上肿瘤相关抗原的抗原部分。
13.如权利要求1所述的组合物，其还包含β2微球蛋白肽。
14.如权利要求1所述的组合物，其中所述纳米颗粒具有少于200个配体/纳米颗粒。
15.如权利要求14所述的组合物，其中所述纳米颗粒具有少于100个配体/纳米颗粒。
16.如权利要求1所述的组合物，其中所述多肽配体通过在所述PEG末端处的官能团附接。
17.如权利要求16所述的组合物，其中所述多肽配体通过所述多肽上的伯胺附接到PEG。
18.如权利要求17所述的组合物，其中所述多肽配体通过未配对的半胱氨酸侧链附接。
19.如权利要求1至18中任一项所述的组合物在制备用于诱导患者中抗原特异性细胞毒性T细胞的形成的药物中的应用。
20.如权利要求19所述的应用，其中所述患者是癌症患者。
21.如权利要求19或20所述的应用，其中所述患者正在经历或已经经历使用一种或多种检查点抑制剂的疗法。
22.如权利要求19或20所述的应用，其中所述患者正在经历过继性T细胞疗法。
23.如权利要求19或20所述的应用，其中所述组合物通过静脉内施用、动脉内施用、皮下施用、皮内施用、淋巴管内施用或肿瘤内施用来施用。
24.一种人工抗原呈递细胞，其包括一种聚合物纳米颗粒，所述纳米颗粒具有附接的多肽配体，适合于激活抗原特异性T细胞，所述纳米颗粒的大小范围是20至200nm并且包括：
PLGA或PLA聚合物芯，和
由PEG形成的亲水壳，
其中所述聚合物纳米颗粒包括PLGA/PLA-PEG和PLGA/PLA-mPEG嵌段共聚物，PLGA/PLA部分的分子量为10kDa至30kDa，PEG部分的分子量为2kDa至10kDa，PEG部分形成亲水壳；其中所述PLGA/PLA-PEG和PLGA/PLA-mPEG嵌段共聚物以1∶10至2∶1的质量比存在；其中PLGA/PLA-PEG聚合物的一部分具有多肽配体的末端附接件；并且其中多肽配体包括肽-HLA配体及抗CD28和抗4-1BB配体中的一种或多种，并且每个颗粒含有少于500个配体。
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Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8883507B2 (en) 2005-10-18 2014-11-11 The Regents Of The University Of Colorado Conditionally immortalized long-term hematopoietic stem cells and methods of making and using such cells
WO2009139930A2 (en) 2008-05-16 2009-11-19 Taiga Biotechnologies, Inc. Antibodies and processes for preparing the same
DK2966084T3 (en) 2008-08-28 2018-08-06 Taiga Biotechnologies Inc MODULATORS OF MYC, PROCEDURES FOR USING SAME AND PROCEDURES FOR IDENTIFYING SUBSTANCES MODULATING MYC
CA3133302A1 (en) 2012-07-20 2014-01-23 Taiga Biotechnologies, Inc. Enhanced reconstitution and autoreconstitution of the hematopoietic compartment comprising a myc polypeptide
US10272115B2 (en) 2013-03-11 2019-04-30 Taiga Biotechnologies, Inc. Production and use of red blood cells
CA3029813A1 (en) 2016-06-13 2017-12-21 Torque Therapeutics, Inc. Methods and compositions for promoting immune cell function
AU2017357865B2 (en) * 2016-11-09 2024-10-31 Uti Limited Partnership Recombinant pMHC class II molecules
CA3045017A1 (en) * 2016-12-02 2018-06-07 Taiga Biotechnologies, Inc. Nanoparticle formulations
US11433131B2 (en) 2017-05-11 2022-09-06 Northwestern University Adoptive cell therapy using spherical nucleic acids (SNAs)
KR20200030593A (ko) * 2017-07-21 2020-03-20 버클리 라잇츠, 인크. 항원 제시 합성 표면, 공유결합으로 관능화된 표면, 활성화된 t 세포, 및 이들의 용도
WO2019023622A1 (en) * 2017-07-27 2019-01-31 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University POLYMERIC NANOPARTICLES FOR IMPROVED ANTICANCERIC IMMUNOTHERAPY
US10149898B2 (en) 2017-08-03 2018-12-11 Taiga Biotechnologies, Inc. Methods and compositions for the treatment of melanoma
JP7285828B2 (ja) 2017-09-05 2023-06-02 トルク セラピューティクス， インコーポレイテッド 治療用タンパク質組成物ならびにその作製および使用方法
BR112020005552A2 (pt) * 2017-09-20 2020-10-27 Neximmune, Inc. composições de células compreendendo células t específicas de antígeno para terapia adotiva
WO2019126818A1 (en) * 2017-12-23 2019-06-27 Rubius Therapeutics, Inc. Artificial antigen presenting cells and methods of use
CN108359013A (zh) * 2018-02-07 2018-08-03 上海交通大学 一种人工抗原递呈纳米制剂及其用于体内外扩增特异性t细胞的应用
CN110464848B (zh) * 2018-05-11 2022-07-05 中国医学科学院肿瘤医院 人工抗原递呈细胞及其制备方法与应用
WO2020061499A1 (en) 2018-09-21 2020-03-26 Berkeley Lights, Inc. Functionalized well plate, methods of preparation and use thereof
CN110176272B (zh) * 2019-04-18 2021-05-18 浙江工业大学 一种基于多序列联配信息的蛋白质二硫键预测方法
CN110964816A (zh) * 2019-11-20 2020-04-07 深圳市鲲鹏未来科技有限公司 包含血液稳定性纳米颗粒的溶液、其制备方法及miRNA标志物的检测方法
WO2021262846A1 (en) * 2020-06-26 2021-12-30 The Johns Hopkins University Adaptive nanoparticle platforms for high throughput expansion and detection of antigen-specific t cells
CN112843016A (zh) * 2020-12-25 2021-05-28 浙江康佰裕生物科技有限公司 一种人工抗原呈递纳米粒及其制备方法和应用
WO2023060123A1 (en) * 2021-10-05 2023-04-13 The Johns Hopkins University Mhc ii artificial antigen presenting cells harness the effector and helper functions of antigen-specific cd4+ t cells
CN118696062A (zh) * 2022-02-16 2024-09-24 上海优替济生生物医药有限公司 人源化抗cd28抗体及其与抗cd40的双特异性抗体
WO2024077071A2 (en) * 2022-10-05 2024-04-11 The Johns Hopkins University Nanoparticles for delivery of immunoregulatory materials to t cells
WO2024206207A1 (en) * 2023-03-24 2024-10-03 Neximmune, Inc. Injectable artificial antigen presenting cells for immune therapy

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6811785B2 (en) * 2001-05-07 2004-11-02 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Multivalent MHC class II—peptide chimeras
WO2010042555A2 (en) * 2008-10-06 2010-04-15 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Particles with multiple functionalized surface domains
US8629098B2 (en) * 2008-01-15 2014-01-14 Yale University Compositions and methods for adoptive and active immunotherapy
CN105555302A (zh) * 2013-06-24 2016-05-04 耐克西缪恩公司 用于免疫疗法的组合物和方法

Family Cites Families (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6352694B1 (en) 1994-06-03 2002-03-05 Genetics Institute, Inc. Methods for inducing a population of T cells to proliferate using agents which recognize TCR/CD3 and ligands which stimulate an accessory molecule on the surface of the T cells
DK0533838T3 (da) 1990-06-11 1998-02-23 Nexstar Pharmaceuticals Inc Nukleinsyreligander
SE9400088D0 (sv) 1994-01-14 1994-01-14 Kabi Pharmacia Ab Bacterial receptor structures
DK0773952T3 (da) 1994-07-20 2004-03-22 Inst Genetics Llc Interaktionsfældesystemer til påvisning af proteininteraktioner
US6268411B1 (en) 1997-09-11 2001-07-31 The Johns Hopkins University Use of multivalent chimeric peptide-loaded, MHC/ig molecules to detect, activate or suppress antigen-specific T cell-dependent immune responses
DE19722888A1 (de) 1997-05-28 1998-12-03 Thomas Prof Dr Huenig Human-CD28 spezifische monoklonale Antikörper zur antigenunspezifischen Aktivierung von T-Lymphozyten
DE19742706B4 (de) 1997-09-26 2013-07-25 Pieris Proteolab Ag Lipocalinmuteine
AUPP221098A0 (en) 1998-03-06 1998-04-02 Diatech Pty Ltd V-like domain binding molecules
US6818418B1 (en) 1998-12-10 2004-11-16 Compound Therapeutics, Inc. Protein scaffolds for antibody mimics and other binding proteins
ATE320486T1 (de) 1999-05-05 2006-04-15 Phylogica Ltd Isolierung von biologischen modulatoren aus bibiotheken mit biologisch vielfältigen genfragmenten
AU4761100A (en) 1999-05-26 2000-12-18 Kalle Saksela Methods and materials for generating sh3 domains with tailored binding properties
US6867041B2 (en) 2000-02-24 2005-03-15 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
US6797514B2 (en) 2000-02-24 2004-09-28 Xcyte Therapies, Inc. Simultaneous stimulation and concentration of cells
SE0001877D0 (sv) 2000-05-22 2000-05-22 Klaus Mosbach Molecular imprinting
EP1360290A2 (en) 2000-06-23 2003-11-12 Maxygen, Inc. Co-stimulatory molecules
DK1332209T3 (da) 2000-09-08 2010-03-29 Univ Zuerich Samlinger af repeatproteiner indeholdende repeatmoduler
DE10053224A1 (de) 2000-10-26 2002-05-08 Univ Goettingen Georg August Verfahren zur Exposition von Peptiden und Polypeptiden auf der Zelloberfläche von Bakterien
US20040132094A1 (en) 2000-12-13 2004-07-08 Michael Etzerodt Combinatorial libraries of proteins having the scaffold structure of c-type lectinlike domains
AU2002368077B2 (en) 2001-07-12 2010-03-04 Jefferson Foote Super humanized antibodies
CA2457520A1 (en) 2001-08-30 2003-03-13 Biorexis Pharmaceutical Corporation Modified transferrin fusion proteins
MY135678A (en) 2001-09-14 2008-06-30 Rothmans Benson & Hedges A process for making rare earth metal oxide-coated microporous materials
AU2003256506B2 (en) 2002-07-12 2009-06-04 The Johns Hopkins University Reagents and methods for engaging unique clonotypic lymphocyte receptors
KR101132555B1 (ko) 2002-10-02 2012-04-02 리전츠 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 변경된 특이성을 갖는 프로테아제의 제조 및 선별 방법
US20040209243A1 (en) 2003-01-07 2004-10-21 Andrew Nixon Kunitz domain library
US20060008844A1 (en) 2004-06-17 2006-01-12 Avidia Research Institute c-Met kinase binding proteins
DE102004049479A1 (de) 2004-10-11 2006-04-13 Scil Proteins Gmbh Proteinkonjugate zur Verwendung in Therapie, Diagnose und Chromatographie
WO2007087341A2 (en) * 2006-01-25 2007-08-02 The Board Of Trustees Of The University Of Illinois Tolerogenic biodegradable artificial antigen presenting system
EP1892248A1 (en) 2006-08-21 2008-02-27 Eidgenössische Technische Hochschule Zürich Specific and high affinity binding proteins comprising modified SH3 domains of FYN kinase
AU2007307206B2 (en) 2006-10-04 2016-02-11 Janssen Pharmaceutica, N.V. Preparation of inactivated artificial antigen presenting cells and their use in cell therapies
WO2008109852A2 (en) 2007-03-07 2008-09-12 Uti Limited Partnership Compositions and methods for the prevention and treatment of autoimmune conditions
KR101580938B1 (ko) 2007-06-01 2015-12-30 유니버시티 오브 매릴랜드, 발티모어 면역글로불린 불변영역 Ｆｃ 수용체 결합제
PE20090993A1 (es) 2007-08-29 2009-07-08 Sanofi Aventis Anticuerpos anti-cxcr5 humanizados y derivados de los mismos
PL2774608T3 (pl) 2008-06-16 2020-05-18 Pfizer Inc. Polimerowe nanocząstki napełnione lekiem oraz sposoby ich wytwarzania i zastosowania
US8343498B2 (en) * 2008-10-12 2013-01-01 Massachusetts Institute Of Technology Adjuvant incorporation in immunonanotherapeutics
US8343497B2 (en) * 2008-10-12 2013-01-01 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Targeting of antigen presenting cells with immunonanotherapeutics
WO2012021786A2 (en) 2010-08-12 2012-02-16 Theraclone Sciences, Inc. Anti-hemagglutinin antibody compositions and methods of use thereof
US9511151B2 (en) 2010-11-12 2016-12-06 Uti Limited Partnership Compositions and methods for the prevention and treatment of cancer
EP2596802A1 (en) * 2011-11-23 2013-05-29 PLS-Design GmbH Pharmaceutical composition for treatment of allergic reactions
JP2015500296A (ja) 2011-12-09 2015-01-05 ザ・ジョンズ・ホプキンス・ユニバーシティ 定義された動的形状を有する人工抗原提示細胞
RU2631599C2 (ru) 2011-12-14 2017-09-25 Дзе Джонс Хопкинс Юниверсити Наночастицы, легче проникающие в слизистую оболочку или вызывающие меньше воспаления
MX368507B (es) * 2012-05-15 2019-10-07 Bristol Myers Squibb Co Uso de un anticuerpo anti-pd-1 en combinación con un anticuerpo anti-ctla-4 en la manufactura de un medicamento para el tratamiento de cáncer.
US10548957B2 (en) * 2012-09-28 2020-02-04 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Targeted expansion of Qa-1-peptide-specific regulatory CD8 T cells to ameliorate arthritis
KR102164405B1 (ko) 2013-03-14 2020-10-12 더 존스 홉킨스 유니버시티 나노스케일 인공 항원 제시 세포
SG10201912301XA (en) 2013-11-04 2020-02-27 Uti Lp Methods and compositions for sustained immunotherapy
SG11201702191YA (en) 2014-09-17 2017-04-27 Univ Johns Hopkins Reagents and methods for identifying, enriching, and/or expanding antigen-specific t cells

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6811785B2 (en) * 2001-05-07 2004-11-02 Mount Sinai School Of Medicine Of New York University Multivalent MHC class II—peptide chimeras
US8629098B2 (en) * 2008-01-15 2014-01-14 Yale University Compositions and methods for adoptive and active immunotherapy
WO2010042555A2 (en) * 2008-10-06 2010-04-15 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Particles with multiple functionalized surface domains
CN105555302A (zh) * 2013-06-24 2016-05-04 耐克西缪恩公司 用于免疫疗法的组合物和方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PEGylation strategies for active targeting of PLA/PLGA nanoparticles;Betancourt Tania等;《Journal of biomedical materials research Part A》;20081103;第91卷(第1期);第263-276页 *

Also Published As

Publication number Publication date
IL253036A0 (en) 2017-08-31
JP6743022B2 (ja) 2020-08-19
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US20190022215A1 (en) 2019-01-24
JP2022166133A (ja) 2022-11-01
BR112017013838A2 (pt) 2018-06-19
IL286025B1 (en) 2023-07-01
SG11201705064XA (en) 2017-07-28
US11510981B2 (en) 2022-11-29
IL286025A (en) 2021-10-31
WO2016105542A3 (en) 2016-10-27
KR102582035B1 (ko) 2023-09-22
ES2897707T3 (es) 2022-03-02
US10632193B2 (en) 2020-04-28
IL253036B (en) 2021-09-30
EP3237003A4 (en) 2018-08-15
HK1245661A1 (zh) 2018-08-31
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