CN107417699A

CN107417699A - 盐霉素肟及肟醚衍生物、其制备方法和抗肿瘤用途

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Publication number: CN107417699A
Application number: CN201610347806.7A
Authority: CN
Inventors: 吴松; 周琪; 张文轩; 吴骏; 李波; 王柳; 郝捷
Original assignee: Institute of Materia Medica of CAMS; Institute of Zoology of CAS
Current assignee: Institute of Materia Medica of CAMS; Institute of Zoology of CAS
Priority date: 2016-05-24
Filing date: 2016-05-24
Publication date: 2017-12-01
Anticipated expiration: 2036-05-24
Also published as: CN107417699B; WO2017202295A1

Abstract

本发明属于药物化学领域，涉及盐霉素肟及肟醚衍生物以及其制备方法和在制备抗肿瘤药物中的用途，尤其是在制备治疗肺癌、结肠癌或肝癌药物中的用途。

Description

盐霉素肟及肟醚衍生物、其制备方法和抗肿瘤用途

技术领域

本发明属于药物化学领域，涉及盐霉素肟及肟醚衍生物以及制备方法和抗肿瘤用途，尤其是用于治疗肝癌，结肠癌和肺癌的用途。

背景技术

肿瘤干细胞(cancer stem cell，CSC)是近年来发现的一个新的潜在治疗肿瘤的靶点，它们是存在于肿瘤组织中的一小部分具有干细胞性质的细胞群体，具有自我更新的能力，可以形成不同分化程度的肿瘤细胞。现有的治疗肿瘤的方法如化学治疗和放射性治疗多是针对一般肿瘤细胞，而非肿瘤干细胞，这就导致治疗不彻底，仍会造成肿瘤的耐药、复发和转移。

盐霉素(salinomycin)是从白色链霉菌中分离得到的一种多聚醚类离子载体型抗生素，一直以来，盐霉素钠作为生长促进剂和抗球虫剂用于家禽。2009年的研究发现，盐霉素在体外能高选择性杀死乳腺癌干细胞，在小鼠体内可以明显抑制乳腺癌的生长，其效力比临床上使用的抗肿瘤药物紫杉醇高100倍(Gupta,P.B.；Onder,T.T.；Jiang,G.；Tao,K.；Kuperwasser,C.；Weinberg,R.A.；Lander,E.S.Identification of selectiveinhibitors of cancer stem cells by high-throughput screening.Cell 2009,138,645.)。盐霉素还对其它肿瘤组织中的干细胞有很好的活性，如急性骨髓性白血病干细胞、肺癌干细胞、胃癌干细胞、骨肉瘤干细胞、大肠癌干细胞、鳞状细胞癌干细胞、胰腺癌干细胞和前列腺癌干细胞等(Mertins,S.D.Cancer stem cells:a systems biology view oftheir role in prognosis and therapy.Anti-Cancer Drugs:2014,25(4),353–367.)。

除此之外，盐霉素还对分化的肿瘤细胞如白血病、乳腺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、食道癌、神经胶质瘤、肝癌、膀胱癌、前列腺癌和肺癌肿瘤细胞等具有很好的抑制作用，还对多药耐药，放疗耐受以及细胞凋亡耐受的癌细胞具有很好的抑制活性，如慢性淋巴细胞白血病和人类转移性乳腺癌(Huczynski,A.Salinomycin–A New Cancer DrugCandidate.Chem.Biol.Drug Des.,2012,79,235.)。

文献报道盐霉素具有抑制P-糖蛋白gp170、干扰Wnt信号级联、增加DNA损伤和降低p21蛋白水平、克服ABC转运蛋白介导的多药耐药和凋亡耐受，增加氧化应激以及提高活性氧水平等作用。其中盐霉素通过抑制Wnt/β-Catenin信号通路从而诱导肿瘤干细胞凋亡被认为是其发挥抗肿瘤活性的主要机理之一。

Wnt/β-Catenin通路在维持癌症干细胞特性有重要作用，尤其Wnt/β-Catenin激活可使癌症干细胞获得放疗及化疗抗性。Lu等发现盐霉素可以抑制白血病细胞Wnt/β-Catenin信号通路并阐明了机制：盐霉素作用于Wnt/Fzd/LPR复合体，LPR(低密度脂蛋白受体相关蛋白)复合体活性被抑制，从而导致下游Wnt靶标基因LEF1、Cyclin D1和Fibronectin表达下调，最终结果是癌细胞凋亡(Lu D,Choi MY,Yu J,Castro JE,KippsTJ,Carson DA.Salinomycin inhibits Wnt signaling and selectively inducesapoptosis in chronic lymphocytic leukemia cells.Proc Natl Acad Sci U SA.2011；108(32):13253-7.)。

随后，Tang等又发现骨母细胞瘤细胞U2OS、MG63及SAOS2中，盐霉素可降低GSK3β磷酸化水平激活期活性，加速降解β-Catenin，从而使核内β-Catenin减少，抑制癌关联基因Cyclin D1表达。King等也发现盐霉素通过抑制LPR，进而抑制Wnt/β-Catenin通路，从而诱导三阴性乳腺癌肿瘤细胞凋亡。Zhu等发现盐霉素可诱导鼻咽癌NPC细胞CNE-1、CNE-2及CNE-2/DDP内Wnt受体LRP蛋白水平，并促进β-Catenin降解。Mao等发现激活wnt 1信号通路可以明显加快胃癌肿瘤干细胞的增殖，而盐霉素在抑制wnt 1信号通路中发挥了关键作用，继而诱导胃癌肿瘤干细胞的调亡。Lu等最近发现盐霉素在前列腺肿瘤干细胞中通过抑制LRP6的表达，不仅能抑制相关Wnt/β-catenin信号通路，还可以抑制mTORC1信号通路。以上研究结果说明LRP蛋白和Wnt/β-catenin通路是潜在的重要抗肿瘤药物靶点。

这些研究结果表明，盐霉素具有研发为一种新型的抗癌药物的潜能。到目前为止，已经开展盐霉素治疗三阴性乳腺癌、小儿高级别胶质瘤干细胞的临床前试验。

然而，盐霉素药代动力学性质欠佳，水溶性很差，酸性条件下不稳定，生物利用率低，并且对哺乳动物和人毒性较大，这给其临床使用带来了一定的困难。而对盐霉素进行构效关系研究以及结构优化，就可能得到活性更好、毒性更低以及药代动力学性质更好的先导化合物。

目前，针对于肿瘤干细胞靶点的盐霉素药物化学研究才刚刚开始，已报道的研究主要在C1以及羟基的修饰上，Adam Huczynski小组合成了C1位酯化或者酰胺化取代的衍生物，体外抗肿瘤活性并未有显著提高(Antoszczak,M.；Popiel,K.；Stefańska,J.；Wietrzyk,J.；Maj,E.；Janczak,J.；Michalska,G.；Brzezinski,B.Huczyński,A.Synthesis,cytotoxicity and antibacterial activity of new esters ofpolyether antibiotic e salinomycin,Eur.J.Med.Chem.2014,76,435-444)；DanielStrand小组合成了羟基酰化衍生物，其中发现了一些在体外比盐霉素活性更好的化合物，活性提高了5倍(Borgstrom,B.；Huang,X.L.；Posta,M.；Hegardt,C.；Oredssonb S.andStrand.D.Synthetic modification of salinomycin:selective O-acylation andbiological evaluation.Chem.Commun.,2013,49,9944.)。吴松等合成了盐霉素差向异构体以及酰化衍生物，发现17,21位差向异构化盐霉素以及20位差向异构酰化盐霉素的活性比母体盐霉素有较大提高(1.吴松，杜冠华，张文轩，何国荣，李莉，C20位差向异构化盐霉素及其酰化衍生物以及制备方法和抗肿瘤用途，201510679541.6。2.吴松，周琪，张文轩，吴骏，郝捷，王柳，李波，一类C17，21差向异构化盐霉素以及苯甲酰化衍生物及其制备方法和抗肿瘤用途，201511032317.4)。

发明内容：

本发明解决的技术问题是提供一类盐霉素肟及肟醚生物及其药学上可接受的盐、其制备方法、药物组合物以及其在制备预防或/和治疗肿瘤药物中的应用。

为解决本发明的技术问题，本发明提供如下技术方案：

本发明的技术方案第一方面是提供了通式Ⅰ所示的化合物，通式Ⅰ所示的化合物具体结构如下：

其中，X选自H、Na、K、Ca、Mg；R选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C₁-C₁₄烷基、含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C₁-C₁₄烷基、取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₈环烷基、含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₈环烷基、取代或未取代的C₆-C₁₂芳基、取代或未取代的C₅-C₁₂杂环基、取代或未取代的C₆-C₁₂芳基C₁-C₆烷基、取代或未取代的C₅-C₁₂杂环基C₁-C₆烷基，所述取代基独立选自C₁-C₃烷基、卤素取代的C₁-C₃烷基、C₁-C₄烷氧基、羧基、氰基、卤素、羟基、硝基，所述芳基独立地选自苯基、萘基，所述杂原子选自N、O、S，所述的卤素选自F、Cl、Br、I。

其中优选的化合物，R选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C₁-C₈烷基，含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C₁-C₈烷基、取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₆环烷基、含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₆环烷基、取代或未取代的C₆-C₁₂芳基C₁-C₃烷基、取代或未取代的C₅-C₁₂杂环基C₁-C₃烷基，所述取代基独立选自C₁-C₃烷基、卤素取代的C₁-C₃烷基、C₁-C₄烷氧基、羧基、氰基、卤素、羟基、硝基，所述芳基独立地选自苯基、萘基，所述杂原子选自N、O、S，所述的杂环基选自呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、咪唑、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢吡咯、四氢噻唑、吡啶、哌啶、吲哚，所述的卤素选自F、Cl、Br、I。

其中更优选的化合物，R选自取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₆环烷基、取代或未取代的苯基C₁-C₃烷基、所述取代基独立选自C₁-C₃烷基、卤素取代的C₁-C₃烷基、C₁-C₄烷氧基、羧基、氰基、卤素、羟基、硝基，所述的卤素选自F、Cl、Br、I。最优选的化合物为：

本发明第二方面提供了制备本发明第一方面所述化合物的方法，

其包括以下步骤：

其中，X和R的定义与第一方面相同

步骤一：化合物a通过氧化反应得到化合物b，其中所用氧化剂分别为二氧化锰、戴斯-马丁试剂、2-碘酰基苯甲酸中的一种，所用溶剂分别为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈等。反应温度为0℃-100℃。

步骤二：化合物b在碱的作用下与相应的羟胺反应得到化合物I，其中所用的碱为碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸锂、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铯、甲醇钠、乙醇钠、水合肼、DBU，所用羟胺为脂肪或者芳香羟胺，所用溶剂分别为四氢呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亚砜、甲醇和乙醇等醇类溶剂。

本发明第三方面提供了一种药物组合物和剂型，其包含治疗和/或预防有效量的本发明第一方面所述化合物及其药学上可接受的盐，以及任选的一种或多种药学可接受的载体或赋形剂。

该药物组合物可根据本领域公知的方法制备。可通过将本发明化合物与一种或多种药学上可接受的固体或液体赋形剂和/或辅剂结合，制成适于人或动物使用的任何剂型。本发明化合物在其药物组合物中的含量通常为0.1-95重量％。

本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、静脉注射、肌肉注射、皮下注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼吸道、皮肤、阴道、直肠等。

给药剂型可以是液体剂型、固体剂型或半固体剂型。液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、滴眼剂、滴鼻剂、洗剂和搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂、喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

本发明化合物可以制成普通制剂、也制成是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。

为了将本发明化合物制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种赋形剂，包括稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助溶剂。稀释剂可以是淀粉、糊精、蔗糖、葡萄糖、乳糖、甘露醇、山梨醇、木糖醇、微晶纤维素、硫酸钙、磷酸氢钙、碳酸钙等；湿润剂可以是水、乙醇、异丙醇等；粘合剂可以是淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、微晶纤维素、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、乙基纤维素、丙烯酸树脂、卡波姆、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇等；崩解剂可以是干淀粉、微晶纤维素、低取代羟丙基纤维素、交联聚乙烯吡咯烷酮、交联羧甲基纤维素钠、羧甲基淀粉钠、碳酸氢钠与枸橼酸、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠等；润滑剂和助溶剂可以是滑石粉、二氧化硅、硬脂酸盐、酒石酸、液体石蜡、聚乙二醇等。

还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。

为了将给药单元制成胶囊剂，可以将有效成分本发明化合物与稀释剂、助溶剂混合，将混合物直接置于硬胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物先与稀释剂、黏合剂、崩解剂制成颗粒或微丸，再置于硬胶囊或软胶囊中。用于制备本发明化合物片剂的各稀释剂、黏合剂、润湿剂、崩解剂、助溶剂品种也可用于制备本发明化合物的胶囊剂。

为将本发明化合物制成注射剂，可以用水、乙醇、异丙醇、丙二醇或它们的混合物作溶剂并加入适量本领域常用的增溶剂、助溶剂、pH调节剂、渗透压调节剂。增溶剂或助溶剂可以是泊洛沙姆、卵磷脂、羟丙基-β-环糊精等；pH调节剂可以是磷酸盐、醋酸盐、盐酸、氢氧化钠等；渗透压调节剂可以是氯化钠、甘露醇、葡萄糖、磷酸盐、醋酸盐等。如制备冻干粉针剂，还可加入甘露醇、葡萄糖等作为支撑剂。

此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或其它添加剂。

为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。

本发明化合物药物组合物的给药剂量依照所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的个体情况，给药途径和剂型等可以有大范围的变化。一般来讲，本发明化合物的每天的合适剂量范围为0.001-5mg/Kg体重。上述剂量可以一个剂量单位或分成几个剂量单位给药，这取决于医生的临床经验以及包括运用其它治疗手段的给药方案。

本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。当本发明的化合物与其它治疗药物存在协同作用时，应根据实际情况调整它的剂量。

本发明第四方面提供了第一方面所述化合物以及第三方面所述药物组合物或者制剂在制备抗肿瘤药物中的应用。

其中所述的肿瘤包括但不限于：结肠癌、直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、乳腺癌、卵巢癌、肺癌(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、前列腺癌、膀胱癌、上皮癌、食管癌、宫颈癌、子宫内膜癌、肾上腺皮质癌、基底细胞癌、腺癌、支气管癌、肝瘤、胆管癌、绒膜癌、胚胎癌、白血病、黑色素瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、霍奇金氏淋巴瘤、非-霍奇金氏淋巴瘤、多发性骨髓瘤或原发性脑瘤。优选的，所述肿瘤选自胃癌、肺癌、乳腺癌、结肠癌或肝癌。更优选的，所述肿瘤选自肝癌、胃癌或结肠癌。特别优选的，所述肿瘤选自肝癌。

发明详述:

术语“烷基”是指具有指定数目碳原子数的由碳氢原子组成的基团，其可以为直链或支链的烷基。术语“饱和”是指烷基的碳原子和氢原子个数满足CnH2n+1通式的基团,而“不饱和”烷基包括其中含有1个到数个双键、三键的结构。术语“取代”是指在烷基中的碳原子上引入取代基。

例如所述的“取代或未取代的饱和或不饱和C₁-C₁₄烷基”、“含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C₁-C₁₄烷基”是指碳原子数为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14的饱和或不饱和烷基以及被取代的上述烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、上述烷基中含有不饱和双键或者三键的基团、上述饱和或不饱和烷基被取代的基团。

同样的“C₁-C₈烷基”是指碳原子数为1、2、3、4、5、6、7、8的烷基，“C₁-C₆烷基”是指碳原子数为1、2、3、4、5、6的烷基。

所述“C₁-C₃烷基”，是指碳原子数为1、2、3的烷基，例如甲基、乙基、正丙基、异丙基、丙烯基。

所述“卤素取代的C₁-C₃烷基”，是指被卤素如F、Cl、Br、I取代的含有1、2、3个碳原子的烷基，其中卤素可以为1-8个，而且同一烷基上可以有不同卤素取代，如一氟代甲基、二氟代甲基、三氟代甲基、1-氟代乙基、2-氟代乙基、1、2-二氟代乙基，1,1,2,2-四氟代乙基，1,1-二氟代-2，2-二氯代乙基等，其中所述“氟代”可被“氯代”、“溴代”和“碘代”任意替换。

所述“C₁-C₄烷氧基”是指含有1、2、3、4个碳原子同时被氧原子取代的基团，如甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、丁基氧基、异丁基氧基、叔丁氧基、环丙氧基、环丁氧基。

所述的“取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₈环烷基”、“含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₈环烷基”是指具有3、4、5、6、7、8个碳原子的饱和或者不饱和环烷基以及上述环烷基被取代后的基团，如环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基、环辛基、上述环烷基中含有不饱和双键或者三键的烷基、上述环烷基被取代后的基团。同样的，所述“取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₆环烷基”、“含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₆环烷基”中提到的C₃-C₆环烷基是指具有3、4、5、6个碳原子的环烷基。

术语“取代或未取代的C₆-C₁₂芳基”是指苯基、萘基以及在上述集团的任意位置进行取代后的基团，如烷基取代苯基、烷氧基取代苯基、卤素取代苯基、硝基取代苯基、羧基取代苯基以及相应的萘基等。

术语“杂环基”是指环烷基被杂原子如N、O、S所取代的饱和或不饱和环烷基。

所述的“取代或未取代的C₅-C₁₂杂环基”中提到的“C₅-C₁₂杂环基”是指含有5、6、7、8、9、10、11、12个包括碳原子和杂原子的基团，其中杂原子有N、O、S，杂原子数目为1、2、3、4、5个，其中杂环基包括单环和并环结构，如呋喃、噻吩、吡咯、吡嗪、噻唑、咪唑、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢吡咯、四氢噻唑、吡啶、哌啶、吗啉、吡喃、嘧啶、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并咪唑、嘌呤以及对上述杂环进行取代后的基团，如呋喃甲基、呋喃乙基等。

术语“芳基烷基”是指被芳基取代的烷基。所述的“取代或未取代的C₆-C₁₂芳基C₁-C₆烷基”是指被含有6、7、8、9、10、11、12个碳原子的芳基取代的含有1、2、3、4、5、6个碳原子的烷基，如苄基、苯乙基、苯丙基、苯基异丙基、苯基丁基、苯基戊基、苯基己基、萘苄基、萘乙基、萘丙基、萘丁基、萘戊基、萘己基以及上述芳基烷基被取代的基团。同样的，所述的“取代或未取代的C₆-C₁₂芳基C₁-C₃烷基”是指被含有6、12个碳原子的芳基取代的含有1、2个碳原子的烷基。

术语“杂环基烷基”是指被杂环基取代的烷基。所述的“取代或未取代的C₅-C₁₂杂环基C₁-C₆烷基”，是指被含有5、6、7、8、9、10、11、12个碳原子和杂原子的杂环基取代的含有1、2、3、4、5、6个碳原子的烷基，如被呋喃、噻吩、吡咯、噻唑、咪唑、四氢呋喃、四氢噻吩、四氢吡咯、四氢噻唑、吡啶、哌啶、吗啉、吲哚、苯并呋喃、苯并噻吩、苯并吡咯、苯并咪唑、取代的甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、戊基、己基以及上述杂环基烷基被取代后的基团。同样的，所述的“取代或未取代的C₅-C₁₂杂环基C₁-C₃烷基“是指被含有5、6、7、8、9、10、11、12个碳原子和杂原子的杂环基取代的含有1、2、3个碳原子的烷基以及上述杂环基烷基被取代后的基团。

有益技术效果

本研究内容提供了一类结构新颖、药理活性强的盐霉素衍生物，可用于癌症及其相关病症的预防和治疗。本发明中绝大部分盐霉素衍生物具有很强的抗肿瘤活性，比盐霉素提高了近100倍，可用于癌症及其相关病症的预防和治疗。

具体实施方式

通过下面的实施例可以对本发明进行进一步的描述，然而，本发明的范围并不限于下述实施例。本领域的专业人员能够理解，在不背离本发明的精神和范围的前提下，可以对本发明进行各种变化和修饰。本发明对试验中所使用到的材料以及试验方法进行一般性和/或具体的描述。虽然为实现本发明目的所使用的许多材料和操作方法是本领域公知的，但是本发明仍然在此作尽可能详细描述。

对于以下全部实施例，可以使用本领域技术人员已知的标准操作和纯化方法。除非另有说明，所有温度以℃(摄氏度)表示。化合物的结构是通过核磁共振氢谱(¹H NMR)和质谱(MS)来确定的。核磁共振氢谱位移(δ)以百万分之一(ppm)的单位给出。核磁共振氢谱用Mercury-400型核磁共振仪测定，氘代氯仿(CDCl₃)作溶剂，四甲基硅烷(TMS)为内标。

制备例

制备例1 C20-氧代盐霉素(中间体b)的制备

将盐霉素(1.0g，1.33mmol)溶解在15mL无水二氯甲烷溶液中，加入戴斯-马丁氧化剂(2.26g,5.32mmol)，室温条件下反应30min，加入0.1M NaOH水溶液20mL搅拌5min，分液漏斗萃取有机相，再用0.1M HCl洗(25mL*2)，水洗至中性，饱和食盐水洗，无水硫酸钠干燥。硅胶柱分离(流动相石油醚：乙酸乙酯＝5：1)，得到白色固体480mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.09(d,J＝10.8Hz,1H),6.18(d,J＝10.8Hz,1H),3.99(dd,J＝14.5,8.4Hz,2H),3.89(dd,J＝11.1,5.8Hz,1H),3.74(d,J＝10.1Hz,1H),3.53(d,J＝9.9Hz,1H),3.43(d,J＝6.2Hz,1H),2.78(td,J＝11.0,3.7Hz,1H),2.63(dd,J＝10.2,6.9Hz,1H),2.51(td,J＝14.4,12.9,5.3Hz,2H),2.12–0.44(m,56H).

实施例1盐霉素-20-肟的制备(1)

将C20-氧代盐霉素(53mg，0.07mmol)溶解在2mL的乙醇中，再加入醋酸钠(12mg，0.14mmol)和盐酸羟胺(10mg，0.14mmol)，回流反应4h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝2:1)后得到白色固体12mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.98(d,J＝10.8Hz,1H),6.51(d,J＝10.9Hz,1H),4.11(d,J＝10.1Hz,1H),3.96(dt,J＝13.6,6.4Hz,3H),3.80(d,J＝10.2Hz,2H),3.63(d,J＝9.8Hz,2H),3.46(dd,J＝10.1,3.2Hz,2H),2.94–2.81(m,1H),2.69(dd,J＝9.8,6.8Hz,1H),2.58(d,J＝9.6Hz,2H),2.10–0.53(m,55H).

实施2盐霉素-20-酮肟-O-甲基醚(2)

将C20-氧代盐霉素(53mg，0.07mmol)溶解在2mL的乙醇中，再加入醋酸钠(12mg，0.14mmol)和O-甲基羟胺盐酸盐(12mg，0.14mmol)，回流反应4h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝4:1)得到白色固体18mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ6.89(d,J＝10.9Hz,1H),6.50(d,J＝10.9Hz,1H),4.13–4.10(m,1H),4.02(dd,J＝11.0,5.7Hz,1H),3.86(m,4H),3.82(d,J＝18.2Hz,1H),3.67(dd,J＝9.9,2.2Hz,1H),3.57–3.52(m,1H),2.92(td,J＝11.1,3.9Hz,1H),2.73(ddd,J＝10.8,5.9,3.2Hz,2H),2.61(dd,J＝10.9,2.6Hz,1H),2.09–0.65(m,55H).

实施例3盐霉素-20-酮肟-O-苄基醚(3)

将C20-氧代盐霉素(53mg，0.07mmol)溶解在2mL的甲醇中，再加入醋酸钠(12mg，0.14mmol)和O-苄基羟胺盐酸盐(22mg，0.14mmol)，室温反应12h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝4:1)得到白色固体25mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.29–7.14(m,5H),6.88(d,J＝10.9Hz,1H),6.41(d,J＝10.9Hz,1H),5.01(q,J＝12.8Hz,2H),4.01(d,J＝10.2Hz,1H),3.90(dd,J＝11.1,5.7Hz,1H),3.84(q,J＝6.7Hz,1H),3.76(d,J＝10.2Hz,1H),3.56(d,J＝9.9Hz,1H),3.31(q,J＝4.3Hz,1H),2.81(td,J＝11.1,3.7Hz,1H),2.62(tt,J＝10.6,6.0Hz,2H),2.51(d,J＝9.9Hz,1H),1.99–0.50(m,55H)

实施例4盐霉素-20-酮肟-O-4’-氯苄基醚(4)

将C20-氧代盐霉素(100mg，0.134mmol)溶解在2mL的甲醇中，再加入醋酸钠(22mg，0.268mmol)和O-(4-氯苄基)羟胺盐酸盐(52mg，0.268mmol)，室温反应12h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝4:1)得到白色固体30mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.27(d,J＝8.2Hz,2H),7.21(d,J＝8.2Hz,2H),6.93(d,J＝10.8Hz,1H),6.50(d,J＝10.9Hz,1H),5.03(q,J＝13.1Hz,2H),4.08(d,J＝10.3Hz,1H),3.98(dd,J＝11.1,5.8Hz,1H),3.91(d,J＝6.8Hz,1H),3.82(d,J＝10.2Hz,1H),3.62(d,J＝9.9Hz,1H),3.37(t,J＝5.6Hz,1H),2.87(td,J＝11.1,3.7Hz,1H),2.74–2.61(m,2H),2.58(d,J＝10.3Hz,1H),2.07–0.58(m,55H).

实施例5盐霉素-20-酮肟-O-3’-氯苄基醚(5)

将C20-氧代盐霉素(100mg，0.134mmol)溶解在2mL的甲醇中，再加入醋酸钠(22mg，0.268mmol)和O-(3-氯苄基)羟胺盐酸盐(52mg，0.268mmol)，室温反应12h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝4:1)得到白色固体48mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.31–7.14(m,4H),6.93(d,J＝10.8Hz,1H),6.50(d,J＝10.9Hz,1H),5.02(q,J＝13.0Hz,2H),4.07(d,J＝10.3Hz,1H),4.01–3.87(m,2H),3.82(d,J＝10.2Hz,1H),3.62(d,J＝9.9Hz,1H),3.39(d,J＝6.0Hz,1H),2.87(d,J＝3.5Hz,1H),2.67(ddd,J＝14.7,8.8,4.8Hz,2H),2.58(d,J＝10.7Hz,1H),2.06–0.52(m,55H).

实施例6盐霉素-20-酮肟-O-4’-硝基苄基醚(6)

将C20-氧代盐霉素(100mg，0.134mmol)溶解在2mL的甲醇中，再加入醋酸钠(22mg，0.268mmol)和O-(4-硝基苄基)羟胺盐酸盐(55mg，0.268mmol)，室温反应12h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝4:1)得到白色固体25mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.18(d,J＝8.3Hz,2H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),6.97(d,J＝10.8Hz,1H),6.55(d,J＝10.9Hz,1H),5.16(q,J＝13.0Hz,2H),4.17–4.04(m,1H),3.95(dq,J＝25.1,6.8,6.3Hz,2H),3.82(d,J＝10.1Hz,1H),3.62(d,J＝9.9Hz,1H),3.37(dd,J＝7.0,4.2Hz,1H),2.86(td,J＝11.0,3.6Hz,1H),2.75–2.53(m,3H),2.06–0.60(m,55H).

实施例7盐霉素-20-酮肟-O-4’-甲基苄基醚(7)

将C20-氧代盐霉素(100mg，0.134mmol)溶解在2mL的甲醇中，再加入醋酸钠(22mg，0.268mmol)和O-(4-甲基苄基)羟胺盐酸盐(47mg，0.268mmol)，室温反应12h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝6:1)得到白色固体30mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.18(d,J＝7.7Hz,2H),7.10(d,J＝7.7Hz,2H),6.91(d,J＝10.8Hz,1H),6.46(d,J＝10.8Hz,1H),5.15–4.92(m,2H),4.06(d,J＝10.4Hz,1H),4.03–3.92(m,2H),3.80(d,J＝10.2Hz,1H),3.63(d,J＝9.9Hz,1H),3.38(t,J＝5.5Hz,1H),2.89(td,J＝11.1,3.8Hz,1H),2.74–2.61(m,2H),2.57(d,J＝10.5Hz,1H),2.32(s,3H),2.04–0.49(m,55H).

实施例8盐霉素-20-酮肟-O-4’-甲氧基苄基醚(8)

将C20-氧代盐霉素(100mg，0.134mmol)溶解在2mL的甲醇中，再加入醋酸钠(22mg，0.268mmol)和O-(4-甲氧基苄基)羟胺盐酸盐(51mg，0.268mmol)，室温反应12h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝6:1)得到白色固体42mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.23(d,J＝8.1Hz,2H),6.89(d,J＝10.8Hz,1H),6.83(d,J＝8.2Hz,2H),6.46(d,J＝10.9Hz,1H),5.10–4.88(m,2H),4.11–3.92(m,3H),3.80(d,J＝10.2Hz,1H)，3.79(s,3H),3.62(d,J＝9.9Hz,1H),3.39(t,J＝5.4Hz,1H),2.88(td,J＝11.1,3.7Hz,1H),2.73–2.61(m,2H),2.57(d,J＝9.8Hz,1H),2.03–0.52(m,55H).

实施例9盐霉素-20-酮肟-O-4’-三氟甲基苄基醚(9)

将C20-氧代盐霉素(100mg，0.134mmol)溶解在2mL的甲醇中，再加入醋酸钠(22mg，0.268mmol)和O-(4-三氟甲基苄基)羟胺盐酸盐(61mg，0.268mmol)，室温反应12h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝6:1)得到白色固体52mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.50(d,J＝8.0Hz,2H),7.32(d,J＝7.9Hz,2H),6.91(d,J＝10.8Hz,1H),6.46(d,J＝10.8Hz,1H),4.03(d,J＝10.2Hz,1H),3.90(dd,J＝11.0,5.8Hz,1H),3.78(t,J＝7.2Hz,2H),3.55(d,J＝10.0Hz,1H),3.31(q,J＝3.9Hz,1H),2.79(td,J＝11.1,3.6Hz,1H),2.61(ddd,J＝13.4,9.2,5.1Hz,2H),2.52(d,J＝10.6Hz,1H),2.00–0.44(m,55H).

实施例10盐霉素-20-酮肟-O-4’-三氟甲氧基苄基醚(10)

将C20-氧代盐霉素(100mg，0.134mmol)溶解在2mL的甲醇中，再加入醋酸钠(22mg，0.268mmol)和O-(4-三氟甲氧基苄基)羟胺盐酸盐(66mg，0.268mmol)，室温反应12h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝6:1)得到白色固体37mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ7.31(d,J＝8.2Hz,2H),7.15(d,J＝8.3Hz,2H),6.93(d,J＝10.9Hz,1H),6.51(d,J＝10.9Hz,1H),5.13–5.01(m,2H),4.07(d,J＝10.2Hz,1H),4.03–3.93(m,2H),3.81(d,J＝10.0Hz,1H),3.62(d,J＝10.1Hz,1H),3.40(d,J＝6.2Hz,1H),2.87(td,J＝11.0,3.8Hz,1H),2.67(td,J＝13.4,11.8,6.8Hz,2H),2.58(d,J＝10.4Hz,1H),2.02–0.56(m,55H).

实施例11盐霉素-20-酮肟-O-吡啶亚甲基醚(11)

将C20-氧代盐霉素(100mg，0.134mmol)溶解在2mL的甲醇中，再加入醋酸钠(22mg，0.268mmol)和O-(吡啶亚甲基)羟胺盐酸盐(53mg，0.268mmol)，室温反应12h，反应液倒入水中，过滤得到白色沉淀。柱色谱分离后(流动相：石油醚：乙酸乙酯＝1:1)得到白色固体55mg。

¹H NMR(400MHz,Chloroform-d)δ8.59(d,J＝5.2Hz,2H),7.32(d,J＝5.2Hz,2H),6.98(d,J＝10.8Hz,1H),6.58(d,J＝10.9Hz,1H),5.14(s,2H),4.08(d,J＝10.2Hz,1H),3.96(m,2H),3.61(d,J＝9.9Hz,1H),3.37(t,J＝5.8Hz,1H),2.85(td,J＝10.8,3.4Hz,1H),2.69(p,J＝7.3Hz,1H),2.60(dd,J＝15.0,9.7Hz,2H),2.05–0.56(m,55H).

试验例部分

试验例1盐霉素肟及肟醚的体外抗肿瘤活性试验

实验方法

(1)选用对数生长期的贴壁HGC-27、HT-29和MDA-MB-231三种肿瘤细胞，分别用胰酶消化后，用10％小牛血清的RPMI1640培养液配成15000个/ml的细胞悬液，接种在96孔培养板中，每孔接种190ul，37℃，5％CO₂培养24h。

(2)实验组加样品10ul，每孔终体积为200ul，用1640培养液补足。37℃，5％CO₂培养3d。

(3)弃上清液，每孔加入100ul新鲜配制的0.5mg/mlMTT的无血清培养液，37℃继续培养4h。小心弃上清，并加入150ul DMSO溶解MTT formazon沉淀，用微型超声振荡器混匀，在酶标仪上测定波长570nm处的光密度值。

(4)计算肿瘤细胞生长抑制率。

结果：测试化合物体外抗肿瘤活性IC₅₀(μM)

结果表明，盐霉素-20-肟及肟醚衍生物在体外具有显著的抗肿瘤活性。其中，化合物2-10对肿瘤细胞的药理活性比母体化合物盐霉素增强了80-100倍左右，对耐药肿瘤细胞MDA-MB-231提高了20-70倍左右，其中化合物10的药理活性最好，对胃癌细胞HGC-27的活性提高了200倍，对人结肠癌细胞HT-27提高了50倍，对耐药的乳腺癌细胞MDA-MB-231的活性提高了60倍。

Claims

1.一类如式(I)所示的盐霉素肟及肟醚衍生物及药学上可接受的盐，

其中，X选自H、Na、K、Ca、Mg；

R选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C₁-C₁₄烷基、含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C₁-C₁₄烷基、取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₈环烷基、含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₈环烷基、取代或未取代的C₆-C₁₂芳基、取代或未取代的C₅-C₁₂杂环基、取代或未取代的C₆-C₁₂芳基C₁-C₆烷基、取代或未取代的C₅-C₁₂杂环基C₁-C₆烷基，所述取代基独立选自C₁-C₃烷基、卤素取代的C₁-C₃烷基、C₁-C₄烷氧基、羧基、氰基、卤素、羟基、硝基，所述芳基独立地选自苯基、萘基，所述杂原子选自N、O、S，所述的卤素选自F、Cl、Br、I。

2.根据权利要求1的盐霉素肟及肟醚衍生物及其药学上可接受的盐，其特征在于，其中X选自Na或者H；R选自H、取代或未取代的饱和或不饱和C₁-C₈烷基，含1-2个杂原子的取代或未取代饱和或不饱和的C₁-C₈烷基、取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₆环烷基、含1-2个杂原子的取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₆环烷基、取代或未取代的C₆-C₁₂芳基C₁-C₃烷基、取代或未取代的C₅-C₁₂杂环基C₁-C₃烷基，所述取代基独立选自C₁-C₃烷基、卤素取代的C₁-C₃烷基、C₁-C₄烷氧基、羧基、氰基、卤素、羟基、硝基，所述芳基独立地选自苯基、萘基，所述杂原子选自N、O、S，所述的卤素选自F、Cl、Br、I。

3.根据权利要求2的盐霉素肟及肟醚衍生物及其药学上可接受的盐，其特征在于，其中R选自取代或未取代的C₁-C₆烷基、取代或未取代的饱和或不饱和C₃-C₆环烷基、取代或未取代的苯基C₁-C₃烷基、所述取代基独立选自C₁-C₃烷基、卤素取代的C₁-C₃烷基、C₁-C₄烷氧基、羧基、氰基、卤素、羟基、硝基，所述的卤素选自F、Cl、Br、I。

4.根据权利要求1-3任一项的盐霉素肟及肟醚衍生物及其药学上可接受的盐，其特征在于，所述化合物为下列化合物：

5.权利要求1-4中任一项所述盐霉素肟及肟醚衍生物及其药学上可接受的盐的制备方法，其包括以下步骤：

其中，X和R的定义与权利要求1-4任一项相同；

步骤一：化合物a通过氧化反应得到化合物b，其中所用氧化剂分别为二氧化锰、戴斯-马丁试剂、2-碘酰基苯甲酸中的一种，所用溶剂分别为二氯甲烷、氯仿、四氢呋喃、乙酸乙酯、乙腈，反应温度为0℃-100℃；

步骤二：化合物b在碱的作用下与相应的羟胺反应得到式I所示的化合物，其中所用的碱为碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯、碳酸锂、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铯、甲醇钠、乙醇钠、水合肼、DBU，所用羟胺为脂肪类和芳香类羟胺，所用溶剂分别为四氢呋喃、吡啶、二氯甲烷、乙酸乙酯、乙腈、甲苯、二甲基亚砜、甲醇和乙醇。

6.一种药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包含权利要求1-4任一项所述的盐霉素肟及肟醚衍生物及其药学上可接受的盐以及药学上可接受的载体或赋形剂。

7.权利要求1-4任一项所述的盐霉素肟及肟醚衍生物及其药学上可接受的盐以及权利要求6的药物组合物在制备预防或/治疗肿瘤药物中的应用，其特征在于，所述的肿瘤包括白血病、乳腺癌、胃癌、结肠癌、胰腺癌、食道癌、神经胶质瘤、肝癌、膀胱癌、前列腺癌、肺癌。