CN107412371A - 一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法 - Google Patents

一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法 Download PDF

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Abstract

一种酸枣仁皂苷提取方法，具体方法步骤如下：(1)将酸枣仁置于真空低温冷风干燥设备中，在40‑50℃温度下保持60‑90分钟；(2)将干燥后的酸枣仁粉碎成细末，将酸枣仁粉溶于水中，制成12％浓度的悬浮液；(3)将悬浮液在温度56℃，自然pH值下自溶2.2小时后放入一密封的设备中，利用高压蒸汽对料液进行翻动，得到料液待用；(4)将料液送入球磨机，以玛瑙球为磨球，连续研1.5小时，收集滤液，加热到55℃‑70℃，保温2小时，能够保证产品质量稳定，收率高，之后进行超微过滤，经高压均质机均质，收集滤液待用；(5)将滤液投入反应釜，在反应釜中连续搅拌18分钟；(6)将搅拌后的滤液进行喷雾干燥，将干燥物粉碎成细末，即得到酸枣仁皂苷。

Description

一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法
技术领域
本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法。
背景技术
酸枣仁是鼠李科枣属植物酸枣(Ziziphus jujubevar.spinosa)的干燥成熟种仁，为《中国药典》收载中药。
酸枣仁皂苷具有镇静催眠、降压、抗心肌缺血、降血脂、防止动脉粥样硬化、护脑和抗脂质过氧化等药理作用。酸枣仁皂苷属于四环三萜类皂苷，其主要包括酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、酸枣仁皂苷B1、酸枣仁皂苷E、酸枣仁皂苷D、酸枣仁皂苷H等十几种。
最常用的酸枣仁粗皂苷提取方法为溶剂提取法。为提高萃取溶剂的提取率，一般需要在酸枣仁粗皂苷的提取过程中引入半仿生提取、复合酶提取、微波辅助提取、超声辅助提取或超高压提取等辅助提取技术手段。但是，采用上述各种方法提取的酸枣仁粗皂苷的纯度也仅能达到5.3～18.3％。酸枣仁皂苷的纯度对于其的应用影响限制极大。因此，酸枣仁皂苷的提取纯化技术就成为其得以安全、广泛推广应用的关键。
已有前人对酸枣仁中的黄酮、皂苷、油脂和生物碱等分别进行催眠活性的研究。但各研究结果之间存在一些差异，例如郭胜民等(中药材.1998，(21)11：578～579；西北医学杂志.1996，(8)11：166～168)报道酸枣仁中总黄酮、总皂苷均具有催眠活性，Woo.Siekwoo等(Phytochemistry.1978,18:353～355)也认为酸枣仁皂苷A为有效成分之一，但吴树勋等(中国中药杂志.1991，16(7)：435～437)研究发现酸枣仁皂甙A无中枢神经抑制作用,相反却能加强苯丙胺的兴奋作用,认为酸枣仁皂苷A可能不是安神作用的有效成分；袁昌鲁等(中药通报.1987，12(3)：34～35)通过实验指出黄酮类成分也是镇静催眠的有效成分之一,而石油醚提取的脂肪油无此作用，但赵秋贤等(西安医科大学学报.1995，(16)4：421～423)研究了酸枣仁脂肪油对中枢神经系统的影响，认为酸枣仁油也可能是镇静催眠的有效成分。但是酸枣仁中安神催眠活性成分的鉴定和分离方法对人类的健康有着重要的意义，仍有很多需要进行研究。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种方法简单，易于操作的具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法。
本发明所要解决的技术问题采用以下技术方案来实现：
一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法，具体方法步骤如下：
(1)将酸枣仁置于真空低温冷风干燥设备中，在40-50℃温度下保持60-90分钟，使酸枣仁的表皮干燥，便于粉碎；
(2)将干燥后的酸枣仁粉碎成细末，以酸枣仁粉作为原料，首先将酸枣仁粉溶于水中，制成12％(w/w)浓度的悬浮液；
(3)将含有酸枣仁粉的悬浮液在温度56℃，自然pH值下自溶2.2小时，然后放入一能够密封的设备中，从设备的底部向内吹入高压蒸汽，利用高压蒸汽对料液进行翻动，保持35-42分钟，得到料液待用；
在蒸汽搅拌的同时采用抽真空设备对设备内部进行抽真空，将蒸汽搅拌过程产生的气泡抽出；
(4)将料液送入球磨机，以玛瑙球为磨球，连续研1.5小时，研磨时间不能过长，否则会破坏药物的有效成分，以1.5小时为佳，收集滤液，加热到55℃-70℃，保温2小时，能够保证产品质量稳定，收率高，之后进行超微过滤，经高压均质机均质，均质压力为15～20MPa，经200目筛过滤，收集滤液待用；
(5)将滤液投入反应釜，在反应釜中连续搅拌18分钟，搅拌速度控制在100-250转/分钟；
上述搅拌分为6个阶段完成：
第1阶段：反应釜设定压力为130mbar，温度为55℃，搅拌时间3分钟；
第2阶段：反应釜设定压力为110mbar，温度为52℃，搅拌时间3分钟；
第3阶段：反应釜设定压力为95mbar，温度为49℃，搅拌时间3分钟；
第4阶段：反应釜设定压力为90mbar，温度为48℃，搅拌时间3分钟；
第5阶段：反应釜设定压力为85mbar，温度为47℃，搅拌时间3分钟；
第6阶段：反应釜设定压力为75mbar，温度为46℃，搅拌时间3分钟；
该搅拌方式能够使料液中的牛黄粉料分布均匀，药效得到最大的释放，分散更均匀细腻，便于人体消化吸收。
(6)将搅拌后的滤液进行喷雾干燥，将干燥物粉碎成细末，即得到酸枣仁安神催眠活性皂苷样品。
本发明与现有技术相比，具有以下优点和效果：
1、本发明的酸枣仁超细粉粒径较小，分布均匀，工艺先进，将产生良好的社会和经济效益。
2、本发明的酸枣仁超细粉粒溶解度快，生物利用度高，疗效非常显著。
3、本发明的酸枣仁超细粉可克服传统工艺制备的酸枣仁粒径较大、吸收度低、起效缓慢，药效难以得到充分发挥的问题，可明显提高其在体内的生物利用度，增强其中药制剂的临床疗效，药理作用效果显著高于传统工艺制备的酸枣仁中药制剂。
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
实施例1
一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法，具体方法步骤如下：
(1)将酸枣仁置于真空低温冷风干燥设备中，在50℃温度下保持90分钟，使酸枣仁的表皮干燥，便于粉碎；
(2)将干燥后的酸枣仁粉碎成细末，以酸枣仁粉作为原料，首先将酸枣仁粉溶于水中，制成12％(w/w)浓度的悬浮液；
(3)将含有酸枣仁粉的悬浮液在温度56℃，自然pH值下自溶2.2小时，然后放入一能够密封的设备中，从设备的底部向内吹入高压蒸汽，利用高压蒸汽对料液进行翻动，保持42分钟，得到料液待用；
在蒸汽搅拌的同时采用抽真空设备对设备内部进行抽真空，将蒸汽搅拌过程产生的气泡抽出；
(4)将料液送入球磨机，以玛瑙球为磨球，连续研1.5小时，研磨时间不能过长，否则会破坏药物的有效成分，以1.5小时为佳，收集滤液，加热到70℃，保温2小时，能够保证产品质量稳定，收率高，之后进行超微过滤，经高压均质机均质，均质压力为20MPa，经200目筛过滤，收集滤液待用；
(5)将滤液投入反应釜，在反应釜中连续搅拌18分钟，搅拌速度控制在250转/分钟；
上述搅拌分为6个阶段完成：
第1阶段：反应釜设定压力为130mbar，温度为55℃，搅拌时间3分钟；
第2阶段：反应釜设定压力为110mbar，温度为52℃，搅拌时间3分钟；
第3阶段：反应釜设定压力为95mbar，温度为49℃，搅拌时间3分钟；
第4阶段：反应釜设定压力为90mbar，温度为48℃，搅拌时间3分钟；
第5阶段：反应釜设定压力为85mbar，温度为47℃，搅拌时间3分钟；
第6阶段：反应釜设定压力为75mbar，温度为46℃，搅拌时间3分钟；
该搅拌方式能够使料液中的牛黄粉料分布均匀，药效得到最大的释放，分散更均匀细腻，便于人体消化吸收。
(6)将搅拌后的滤液进行喷雾干燥，将干燥物粉碎成细末，即得到酸枣仁安神催眠活性皂苷样品。
实施例2
一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法，具体方法步骤如下：
(1)将酸枣仁置于真空低温冷风干燥设备中，在40℃温度下保持60分钟，使酸枣仁的表皮干燥，便于粉碎；
(2)将干燥后的酸枣仁粉碎成细末，以酸枣仁粉作为原料，首先将酸枣仁粉溶于水中，制成12％(w/w)浓度的悬浮液；
(3)将含有酸枣仁粉的悬浮液在温度56℃，自然pH值下自溶2.2小时，然后放入一能够密封的设备中，从设备的底部向内吹入高压蒸汽，利用高压蒸汽对料液进行翻动，保持35分钟，得到料液待用；
在蒸汽搅拌的同时采用抽真空设备对设备内部进行抽真空，将蒸汽搅拌过程产生的气泡抽出；
(4)将料液送入球磨机，以玛瑙球为磨球，连续研1.5小时，研磨时间不能过长，否则会破坏药物的有效成分，以1.5小时为佳，收集滤液，加热到55℃，保温2小时，能够保证产品质量稳定，收率高，之后进行超微过滤，经高压均质机均质，均质压力为15MPa，经200目筛过滤，收集滤液待用；
(5)将滤液投入反应釜，在反应釜中连续搅拌18分钟，搅拌速度控制在100转/分钟；
上述搅拌分为6个阶段完成：
第1阶段：反应釜设定压力为130mbar，温度为55℃，搅拌时间3分钟；
第2阶段：反应釜设定压力为110mbar，温度为52℃，搅拌时间3分钟；
第3阶段：反应釜设定压力为95mbar，温度为49℃，搅拌时间3分钟；
第4阶段：反应釜设定压力为90mbar，温度为48℃，搅拌时间3分钟；
第5阶段：反应釜设定压力为85mbar，温度为47℃，搅拌时间3分钟；
第6阶段：反应釜设定压力为75mbar，温度为46℃，搅拌时间3分钟；
该搅拌方式能够使料液中的牛黄粉料分布均匀，药效得到最大的释放，分散更均匀细腻，便于人体消化吸收。
(6)将搅拌后的滤液进行喷雾干燥，将干燥物粉碎成细末，即得到酸枣仁安神催眠活性皂苷样品。
实施例3
一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法，具体方法步骤如下：
(1)将酸枣仁置于真空低温冷风干燥设备中，在45℃温度下保持75分钟，使酸枣仁的表皮干燥，便于粉碎；
(2)将干燥后的酸枣仁粉碎成细末，以酸枣仁粉作为原料，首先将酸枣仁粉溶于水中，制成12％(w/w)浓度的悬浮液；
(3)将含有酸枣仁粉的悬浮液在温度56℃，自然pH值下自溶2.2小时，然后放入一能够密封的设备中，从设备的底部向内吹入高压蒸汽，利用高压蒸汽对料液进行翻动，保持40分钟，得到料液待用；
在蒸汽搅拌的同时采用抽真空设备对设备内部进行抽真空，将蒸汽搅拌过程产生的气泡抽出；
(4)将料液送入球磨机，以玛瑙球为磨球，连续研1.5小时，研磨时间不能过长，否则会破坏药物的有效成分，以1.5小时为佳，收集滤液，加热到60℃，保温2小时，能够保证产品质量稳定，收率高，之后进行超微过滤，经高压均质机均质，均质压力为17MPa，经200目筛过滤，收集滤液待用；
(5)将滤液投入反应釜，在反应釜中连续搅拌18分钟，搅拌速度控制在150转/分钟；
上述搅拌分为6个阶段完成：
第1阶段：反应釜设定压力为130mbar，温度为55℃，搅拌时间3分钟；
第2阶段：反应釜设定压力为110mbar，温度为52℃，搅拌时间3分钟；
第3阶段：反应釜设定压力为95mbar，温度为49℃，搅拌时间3分钟；
第4阶段：反应釜设定压力为90mbar，温度为48℃，搅拌时间3分钟；
第5阶段：反应釜设定压力为85mbar，温度为47℃，搅拌时间3分钟；
第6阶段：反应釜设定压力为75mbar，温度为46℃，搅拌时间3分钟；
该搅拌方式能够使料液中的牛黄粉料分布均匀，药效得到最大的释放，分散更均匀细腻，便于人体消化吸收。
(6)将搅拌后的滤液进行喷雾干燥，将干燥物粉碎成细末，即得到酸枣仁安神催眠活性皂苷样品。
上述实施例中原料均符合药典标准。
本发明酸枣仁皂苷提取率测定实验研究资料
实验药物：本发明酸枣仁皂苷：按实施例1-3方法制备。对照组采用普通方法提取酸枣仁皂苷。
实验结果：
各实施例酸枣仁皂苷的提取率
药品来源 酸枣仁皂苷提取率(％)
实施例1 3.46
实施例2 3.65
实施例3 3.84
对照组 1.20
根据上表的试验结果可知，本发明实施例1-3提取率明显高于对照组。
对本发明制得的酸枣仁皂苷进行催眠活性实验测定
(一)对小鼠自主活动与协调运动的影响
(1)自主运动
酸枣仁安神催眠活性皂苷组分Ⅰ(实施例1制得)、Ⅱ(实施例3制得)分别配成10mg/ml的药液。取小鼠30只，雌雄各半，随机分为三组，每组10只。各组分别灌胃给予0.15ml/10g·d的药液(相当于生药17g/kg·d，约为临床成人剂量的50倍)，空白组给予同体积生理盐水，每天一次连续3d，并于末次灌药前禁食24h。末次给药45min后，将小鼠置于纸箱中，使其适应5min后，记录5min内活动次数(测定小鼠走动时间及双前肢向上抬举次数)。组分Ⅰ组相对于空白组在走动时间上有极显著差异，由空白组的68.56秒缩短为21.47秒，而在双上肢抬起次数上无明显差异，均为16次；组分Ⅱ组相对于空白组在走动时间和双上肢抬起次数上均有明显差异，由空白组的68.56秒缩短为39.26秒，双上肢抬起次数由空白组的16次减少为6次。
(2)协调运动
小鼠同上。灌胃6d。于末次给药45min后测定小鼠协调运动情况，方法为用光滑滑玻璃板倾斜42.5°，将小鼠放在玻璃板上端，记录其滑下时间。组分Ⅰ组相对于空白组在协调运动上有显著差异，从玻璃板上滑下时间由空白组的2.41秒缩短为样品I组的1.16秒；组分Ⅱ组相对于空白组在协调运动上无显著差异。
(二)对巴比妥钠致小鼠睡眠时间的影响
(1)巴比妥钠阈上及阈下睡眠剂量的确定
另取小鼠40只，雌雄各半，随机分成4组，每组10只。各给药组分别腹腔注射巴比妥钠35、40、45、50mg/kg；空白组给予同体积的生理盐水。记录给药60min内入睡的小鼠数(翻正反射消失超过1min作为入睡的指标)。由此可确定巴比妥钠的阈值为45mg/kg。所以在以后的动物实验中，巴比妥钠阈下睡眠剂量采用40mg/kg，阈上睡眠剂量采用50mg/kg。
(2)对阈上剂量戊巴比妥钠所致小鼠入睡时间的影响
小鼠同上。灌胃9d。于末次给药30min后，各组均按50mg/kg的剂量腹腔注射巴比妥钠，记录各组小鼠睡眠潜伏期及持续睡眠时间(翻正反射消失至翻正反射恢复的时间)。样品对小鼠的巴比妥钠阈上睡眠时间影响实验表明，组分Ⅰ组相对于空白组在阈上睡眠时间上有极显著差异，由空白组的91.9秒延长为样品I组的115.8秒；组分Ⅱ组相对于空白组在阈上睡眠时间上也有显著差异，由空白组的91.9秒延长为组分II组的121.3秒。
(3)对阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠入睡只数的影响
小鼠同上。灌胃12d。于末次给药30min后,各组均按40mg/kg的剂量腹腔注射巴比妥钠，观察并记录出现睡眠的小鼠只数。样品对阈下剂量戊巴比妥钠所致小鼠入睡只数的影响实验表明，组分Ⅰ组相对于空白组在阈下睡眠只数上增加了30％；组分Ⅱ组相对于空白组在阈下睡眠只数上增加了20％。
通过小鼠自主活动实验、协调运动实验和巴比妥钠实验，可看出酸枣仁安神催眠活性组分Ⅰ、Ⅱ均具有显著催眠活性，且组分Ⅰ优于组分Ⅱ。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (5)

1.一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法，其特征在于具体方法步骤如下：
(1)将酸枣仁置于真空低温冷风干燥设备中，在40-50℃温度下保持60-90分钟；
(2)将干燥后的酸枣仁粉碎成细末，以酸枣仁粉作为原料，首先将酸枣仁粉溶于水中，制成12％(w/w)浓度的悬浮液；
(3)将含有酸枣仁粉的悬浮液在温度56℃，自然pH值下自溶2.2小时，然后放入一能够密封的设备中，从设备的底部向内吹入高压蒸汽，利用高压蒸汽对料液进行翻动，保持35-42分钟，得到料液待用；
(4)将料液送入球磨机，以玛瑙球为磨球，连续研1.5小时，收集滤液，加热到55℃-70℃，保温2小时，之后进行超微过滤，经高压均质机均质，均质压力为15～20MPa，经200目筛过滤，收集滤液待用；
(5)将滤液投入反应釜，在反应釜中连续搅拌18分钟，搅拌速度控制在100-250转/分钟；
(6)将搅拌后的滤液进行喷雾干燥，将干燥物粉碎成细末，即得到酸枣仁安神催眠活性皂苷样品。
2.根据权利要求1所述的一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法，其特征在于：上述步骤(3)在蒸汽搅拌的同时采用抽真空设备对设备内部进行抽真空，将蒸汽搅拌过程产生的气泡抽出。
3.根据权利要求1所述的一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法，其特征在于：上述步骤(4)中均质压力为20MPa。
4.根据权利要求1所述的一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法，其特征在于：上述步骤(4)中均质压力为15MPa。
5.根据权利要求1所述的一种具有养心安神、镇静催眠功能的酸枣仁皂苷提取方法，其特征在于：上述步骤(4)中均质压力为17MPa。
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