CN105998104B - 一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途 - Google Patents
一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途 Download PDFInfo
- Publication number
- CN105998104B CN105998104B CN201610583358.0A CN201610583358A CN105998104B CN 105998104 B CN105998104 B CN 105998104B CN 201610583358 A CN201610583358 A CN 201610583358A CN 105998104 B CN105998104 B CN 105998104B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- fruits
- elm
- extract
- concentrated
- volume ratio
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 title claims abstract description 63
- 229940105922 elm extract Drugs 0.000 title claims abstract description 50
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 23
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 title claims abstract description 10
- 230000004224 protection Effects 0.000 title claims abstract description 10
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 117
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 61
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 60
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 53
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 45
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 33
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 27
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 27
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 claims description 27
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 claims description 27
- 229960001866 silicon dioxide Drugs 0.000 claims description 27
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 23
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 19
- HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N ethoxyethane;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.CCOCC HWJHWSBFPPPIPD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 18
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 18
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 16
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 15
- 239000011347 resin Substances 0.000 claims description 9
- 229920005989 resin Polymers 0.000 claims description 9
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 claims description 7
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 claims description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 7
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 6
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N methyl 1-acetylthieno[3,2-c]pyrazole-5-carboxylate Chemical compound CC(=O)N1N=CC2=C1C=C(C(=O)OC)S2 XELZGAJCZANUQH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000008719 thickening Effects 0.000 claims description 2
- 229940080817 rotenone Drugs 0.000 abstract description 14
- JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N rotenone Natural products O1C2=C3CC(C(C)=C)OC3=CC=C2C(=O)C2C1COC1=C2C=C(OC)C(OC)=C1 JUVIOZPCNVVQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 14
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 abstract description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 13
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 9
- 230000004112 neuroprotection Effects 0.000 abstract description 9
- 230000006698 induction Effects 0.000 abstract description 6
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 abstract description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 21
- 241001106462 Ulmus Species 0.000 description 17
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 16
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 10
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 9
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 8
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 7
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 7
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 5
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- MZNDIOURMFYZLE-UHFFFAOYSA-N butan-1-ol Chemical compound CCCCO.CCCCO MZNDIOURMFYZLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002026 chloroform extract Substances 0.000 description 4
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 4
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 4
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 4
- 238000002137 ultrasound extraction Methods 0.000 description 4
- MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N N-[1-oxo-1-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)propan-2-yl]-2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidine-5-carboxamide Chemical compound O=C(C(C)NC(=O)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F)N1CC2=C(CC1)NN=N2 MKYBYDHXWVHEJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 3
- 210000003061 neural cell Anatomy 0.000 description 3
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 2
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 2
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 2
- 231100000215 acute (single dose) toxicity testing Toxicity 0.000 description 2
- 238000011047 acute toxicity test Methods 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol Chemical compound C1C=C2C[C@@H](O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 description 2
- 239000004090 neuroprotective agent Substances 0.000 description 2
- 230000000324 neuroprotective effect Effects 0.000 description 2
- 230000001603 reducing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010008111 Cerebral haemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 206010008190 Cerebrovascular accident Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N D-lysine Chemical compound NCCCC[C@@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-RXMQYKEDSA-N 0.000 description 1
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical class CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 229940122459 Glutamate antagonist Drugs 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 206010056677 Nerve degeneration Diseases 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 208000006011 Stroke Diseases 0.000 description 1
- 244000058281 Ulmus pumila Species 0.000 description 1
- 235000001547 Ulmus pumila Nutrition 0.000 description 1
- MUCRYNWJQNHDJH-OADIDDRXSA-N Ursonic acid Chemical compound C1CC(=O)C(C)(C)[C@@H]2CC[C@@]3(C)[C@]4(C)CC[C@@]5(C(O)=O)CC[C@@H](C)[C@H](C)[C@H]5C4=CC[C@@H]3[C@]21C MUCRYNWJQNHDJH-OADIDDRXSA-N 0.000 description 1
- 229930003451 Vitamin B1 Natural products 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 150000003851 azoles Chemical class 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000003412 degenerative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 230000002461 excitatory amino acid Effects 0.000 description 1
- 239000003257 excitatory amino acid Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 239000003825 glutamate receptor antagonist Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 241000411851 herbal medicine Species 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- -1 heterocyclic amine compound Chemical class 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000002427 irreversible effect Effects 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 1
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 1
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 1
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 1
- 230000003014 reinforcing effect Effects 0.000 description 1
- 239000011856 silicon-based particle Substances 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 1
- 230000002936 tranquilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000001835 viscera Anatomy 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
- 239000011691 vitamin B1 Substances 0.000 description 1
- 235000010374 vitamin B1 Nutrition 0.000 description 1
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/30—Extraction of the material
- A61K2236/33—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones
- A61K2236/333—Extraction of the material involving extraction with hydrophilic solvents, e.g. lower alcohols, esters or ketones using mixed solvents, e.g. 70% EtOH
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/51—Concentration or drying of the extract, e.g. Lyophilisation, freeze-drying or spray-drying
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/53—Liquid-solid separation, e.g. centrifugation, sedimentation or crystallization
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2236/00—Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
- A61K2236/50—Methods involving additional extraction steps
- A61K2236/55—Liquid-liquid separation; Phase separation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Botany (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途，本发明制备的榆钱提取物对人体无毒副作用，对利用去血清、鱼藤酮诱导PC12细胞损伤模型具有显著神经保护作用。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，具体涉及一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途。
背景技术
神经细胞是组成神经系统的基本功能单位,是中枢神经系统的主要功能载体，属于高度分化细胞,本身无再生能力。许多疾病都会导致神经细胞的损伤，例如中毒，缺氧、脑中风、退化性疾病等，一般可以归为三类，即氧化应激损伤、兴奋性氨基酸损伤和神经退化性损伤，而且神经细胞严重损伤后往往是不可逆的。神经细胞损伤会伴随严重后果，比如脑梗塞、脑出血、帕金森氏病、脑萎缩等等，严重危害人类健康和生命安全，给个人和社会造成沉重负担。目前就神经细胞的损伤做了大量研究，发现神经细胞损伤机制复杂，不是单一途径，也发现很多神经保护剂以及神经损伤治疗药物，例如钙离子拮抗剂、谷氨酸拮抗剂、地巴唑、维生素B1以及一些激素类药物，但是单用效果不稳定，还需要结合其他药物或中药以及物理疗法，周期长，治疗效果不明显，而且长期食用还容易有副作用。
中国专利CN105194504A公开了一种藏药舒更胶囊在制备具有神经保护作用药物中的应用，克服了现有技术应用方面的技术偏见，通过动物实验发现，舒更胶囊能显著增强细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性，降低PC12神经细胞受损伤程度，降低大量一氧化氮(NO)所致神经细胞的损伤，对谷氨酸所致神经细胞损伤具有一定的修复保护作用。中国专利CN1728998A公开了一种杂环胺类化合物作为神经保护剂的用途，可以用于预防和减少患者神经元的损伤。但是这类治疗是以西药为主的治疗，副作用大，而从中草药中寻找新型的神经保护药物，是我国今后药物研究的一个必然趋势。
天然中草药种类丰富，天然化合物多种多样，在用于预防和治疗疾病时有得天独厚的优势。因此，越来越多的医药学家把天然中草药作为未来药物开发的重点对象。榆钱，又名榆实、榆子、榆仁、榆荚仁，为榆科植物榆树的翅果。在民间作为一种野菜，其营养物质非常丰富，深受人们的喜爱。现代医学研究表明，榆钱中不仅具有丰富的氨基酸和维生素，还含有大量的微量元素，如Mg、Ca、Mn、Fe、Cu、Zn、 Sr 和 Rb，具有降低血糖和胆固醇，通淋除湿、健脾益胃、安神以及促进儿童生长发育和减肥等功效。我们通过调研大量文献发现，有关榆钱在神经保护方面的研究未见有相关报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的是针对现有技术的不足，提供一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途，该榆钱提取物具有显著的神经保护作用，可用于制备治疗神经保护药物。
为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：
榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途。
一种榆钱提取物，由以下步骤制备：
（1）将榆钱烘干后粉碎，用体积分数为80-90%的乙醇溶液提取，提取液浓缩得乙醇提取浸膏；
（2）向所述乙醇提取浸膏中加蒸馏水混合均匀后，过滤得滤液，向所述滤液中加入氯仿进行萃取，得到氯仿层和水层，然后采用正丁醇对所述水层进行萃取得正丁醇萃取液，浓缩得正丁醇萃取浸膏；
（3）将所述正丁醇萃取浸膏过大孔吸附树脂柱，依次用体积分数为10%、30%以及95%的乙醇溶液进行梯度洗脱；
（4）将体积分数为30%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱；
（5）将体积比为4:1的石油醚-丙酮洗脱液过凝胶柱，再采用体积分数为80-95 %甲醇溶液进行洗脱，得甲醇洗脱液，将所述甲醇洗脱液浓缩干燥，即得榆钱提取物。
进一步的，所述步骤（1）中烘干温度为40-50℃，所述乙醇溶液提取为超声波提取2-3次，所述榆钱与乙醇溶液的体积比为1:6-9，所述超声波功率为200-300W，提取时间为20-40min，所述提取液浓缩温度为40-50℃。
进一步的，所述步骤（2）中乙醇提取浸膏与蒸馏水的体积比为1:1-2，所述滤液与氯仿体积比为1:1。
进一步的，所述步骤（3）中大孔吸附树脂型号为D-101、X-5或H103。
进一步的，所述步骤（4）中硅胶柱中硅胶粒径为200-300目。
进一步的，所述步骤（5）中凝胶柱为Toyopearl HW-40凝胶柱或Sephadex LH-20凝胶柱。
本发明的有益效果是：
1、本发明公开了一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途，该榆钱提取物原料来自纯天然植物，无毒、无公害，发明人对榆钱提取物进行了小鼠急性毒性试验，在试验期内小鼠活动正常，无死亡，十四日后解剖小鼠， 脏器未见异常现象。另外建立去血清、鱼藤酮诱导PC12细胞损伤药理模型，考察榆钱提取物的神经保护作用，试验结果表明榆钱提取物对利用去血清、鱼藤酮诱导PC12细胞损伤模型具有显著神经保护作用。因此，该榆钱提取物可用于制备治疗神经保护药物。
2、本发明中用于制备治疗神经保护药物的榆钱提取物的制备方法是发明人经过无数次的辛苦试验总结而得到的，其中整个提取过程控制低温即40-50℃，能最大限度减少提取过程中的提取物损失，提取过程中分别过大孔吸附树脂柱、硅胶柱以及凝胶柱，并采用不同的洗脱液洗脱，根据测试筛选出具有神经保护的提取物。其中根据对比试验确定出榆钱提取物制备方法中在步骤步骤（4）选取30%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，在步骤（5）中选取体积比为4:1的石油醚-丙酮洗脱液过凝胶柱进而制备的榆钱提取物对利用鱼藤酮和去血清诱导PC12细胞损伤药理模型具有显著神经保护作用。
3、本发明制备方法简单方便，原料制备过程绿色环保、易于控制，所得提取物产率较高，因此，本发明具有很好的市场开发前景。
附图说明
图1为本发明榆钱提取物制备流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明做进一步的描述。
实施例1
一种榆钱提取物，如图1所示，由以下步骤制备：
（1）将榆钱在40℃下干燥后粉碎至30目，与体积分数为80%的乙醇溶液按体积比1:6混合后，浸泡20min，然后置于超声波提取仪中，在300W功率下超声提取20min，连续提取2次，提取后过滤合并滤液，所得滤液在40℃减压浓缩得乙醇提取浸膏；
（2）向乙醇提取浸膏中加入蒸馏水，其中乙醇提取浸膏与蒸馏水的体积比为1:1，然后搅拌均匀得分散液，静置20h后，过滤，得滤液，然后向滤液中加入相同体积的氯仿（滤液：氯仿=1:1 V/V），萃取2次，得氯仿萃取层和水层，然后采用正丁醇对水层进行萃取得正丁醇萃取液和水层，将正丁醇萃取液浓缩除正丁醇后得正丁醇萃取浸膏；
（3）将正丁醇萃取浸膏与蒸馏水按体积比1:1混合后过D-101大孔吸附树脂柱，依次用体积分数为10%、30%以及95%的乙醇溶液进行梯度洗脱；
（4）将体积分数为30%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，其中硅胶柱中硅胶粒径为200-300目，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱；
（5）将体积比为4:1的石油醚-丙酮洗脱液浓缩干燥后用80%甲醇溶液溶解后过Toyopearl HW-40凝胶柱，再采用体积分数为80%甲醇溶液进行洗脱，得甲醇洗脱液，将所述甲醇洗脱液浓缩干燥，即得榆钱提取物。
实施例2
一种榆钱提取物，如图1所示，由以下步骤制备：
（1）将榆钱在45℃下干燥后粉碎至40目，与体积分数为85%的乙醇溶液按体积比1:7混合后，浸泡30min，然后置于超声波提取仪中，在250W功率下超声提取30min，连续提取3次，提取后过滤合并滤液，所得滤液在45℃减压浓缩得乙醇提取浸膏；
（2）向乙醇提取浸膏中加入蒸馏水，其中乙醇提取浸膏与蒸馏水的体积比为1:2，然后搅拌均匀得分散液，静置25h后，过滤，得滤液，然后向滤液中加入相同体积的氯仿（滤液：氯仿=1:1 V/V），萃取3次，得氯仿萃取层和水层，然后采用正丁醇对水层进行萃取得正丁醇萃取液和水层，将正丁醇萃取液浓缩除正丁醇后得正丁醇萃取浸膏；
（3）将正丁醇萃取浸膏与蒸馏水按体积比1:1混合后过X-5大孔吸附树脂柱，依次用体积分数为10%、30%以及95%的乙醇溶液进行梯度洗脱；
（4）将体积分数为30%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，其中硅胶柱中硅胶粒径为200-300目，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱；
（5）将体积比为4:1的石油醚-丙酮洗脱液浓缩干燥后用85%甲醇溶液溶解后过Sephadex LH-20凝胶柱，再采用体积分数为85%甲醇溶液进行洗脱，得甲醇洗脱液，将所述甲醇洗脱液浓缩干燥，即得榆钱提取物。
实施例3
一种榆钱提取物，如图1所示，由以下步骤制备：
（1）将榆钱在50℃下干燥后粉碎至50目，与体积分数为83%的乙醇溶液按体积比1:8混合后，浸泡40min，然后置于超声波提取仪中，在220W功率下超声提取35min，连续提取2次，提取后过滤合并滤液，所得滤液在50℃减压浓缩得乙醇提取浸膏；
（2）向乙醇提取浸膏中加入蒸馏水，其中乙醇提取浸膏与蒸馏水的体积比为1:1，然后搅拌均匀得分散液，静置28h后，过滤，得滤液，然后向滤液中加入相同体积的氯仿（滤液：氯仿=1:1 V/V），萃取2次，得氯仿萃取层和水层，然后采用正丁醇对水层进行萃取得正丁醇萃取液和水层，将正丁醇萃取液浓缩除正丁醇后得正丁醇萃取浸膏；
（3）将正丁醇萃取浸膏与蒸馏水按体积比1:1混合后过D-101大孔吸附树脂柱，依次用体积分数为10%、30%以及95%的乙醇溶液进行梯度洗脱；
（4）将体积分数为30%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，其中硅胶柱中硅胶粒径为200-300目，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱；
（5）将体积比为4:1的石油醚-丙酮洗脱液浓缩干燥后用90%甲醇溶液溶解后过Toyopearl HW-40凝胶柱，再采用体积分数为90%甲醇溶液进行洗脱，得甲醇洗脱液，将所述甲醇洗脱液浓缩干燥，即得榆钱提取物。
实施例4
一种榆钱提取物，如图1所示，由以下步骤制备：
（1）将榆钱在50℃下干燥后粉碎至30目，与体积分数为90%的乙醇溶液按体积比1:9混合后，浸泡35min，然后置于超声波提取仪中，在200W功率下超声提取40min，连续提取3次，提取后过滤合并滤液，所得滤液在50℃减压浓缩得乙醇提取浸膏；
（2）向乙醇提取浸膏中加入蒸馏水，其中乙醇提取浸膏与蒸馏水的体积比为1:1.5，然后搅拌均匀得分散液，静置30h后，过滤，得滤液，然后向滤液中加入相同体积的氯仿（滤液：氯仿=1:1 V/V），萃取3次，得氯仿萃取层和水层，然后采用正丁醇对水层进行萃取得正丁醇萃取液和水层，将正丁醇萃取液浓缩除正丁醇后得正丁醇萃取浸膏；
（3）将正丁醇萃取浸膏与蒸馏水按体积比1:1混合后过D-101大孔吸附树脂柱，依次用体积分数为10%、30%以及95%的乙醇溶液进行梯度洗脱；
（4）将体积分数为30%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，其中硅胶柱中硅胶粒径为200-300目，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱；
（5）将体积比为4:1的石油醚-丙酮洗脱液浓缩干燥后用95%甲醇溶液溶解后过Toyopearl HW-40凝胶柱，再采用体积分数为95%甲醇溶液进行洗脱，得甲醇洗脱液，将所述甲醇洗脱液浓缩干燥，即得榆钱提取物。
对比例1
对比例1中榆钱提取物的制备方法与实施例3基本相同，不同之处在于：
步骤（5）：将体积比为8:1的石油醚-丙酮洗脱液浓缩干燥后用90%甲醇溶液溶解后过Toyopearl HW-40凝胶柱，再采用体积分数为90%甲醇溶液进行洗脱，得甲醇洗脱液，将所述甲醇洗脱液浓缩干燥，即得榆钱提取物。
其他制备步骤均与实施例3相同。
对比例2
对比例2中榆钱提取物的制备方法与实施例3基本相同，不同之处在于：
步骤（5）：将体积比为2:1的石油醚-丙酮洗脱液浓缩干燥后用90%甲醇溶液溶解后过Toyopearl HW-40凝胶柱，再采用体积分数为90%甲醇溶液进行洗脱，得甲醇洗脱液，将所述甲醇洗脱液浓缩干燥，即得榆钱提取物。
其他制备步骤均与实施例3相同。
对比例3
对比例3中榆钱提取物的制备方法与实施例3基本相同，不同之处在于：
步骤（4）：将体积分数为10%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，其中硅胶柱中硅胶粒径为200-300目，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱。
其他制备步骤均与实施例3相同。
对比例4
对比例4中榆钱提取物的制备方法与实施例3基本相同，不同之处在于：
步骤（4）将体积分数为95%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，其中硅胶柱中硅胶粒径为200-300目，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱。
其他制备步骤均与实施例3相同。
榆钱提取物的急性毒性试验
取体重20±2g小鼠20只，雌雄各半，给药首日，禁食12h，不禁水，用实施例3制备的榆钱提取物，按100mg/10g，灌胃。饲养小鼠两周，观察小鼠生理表现和死亡情况。结果表明试验期内其小鼠活动正常，毛发色泽，摄食及排泄正常，两周内各组小鼠都无死亡，两周后剖杀小鼠，肉眼观察小鼠脏器， 未见异常现象。说明本发明榆钱提取物安全无毒副作用。
榆钱提取物药理作用试验
取铺满单层的PC12细胞，弃去原培养液，加入5% 胎牛血清(FBS)、5%马血清的DMEM完全培养液，用吸管轻轻吹打使细胞分散完全，以5×104个/mL密度，每孔100 μL接种于预先用多聚赖氨酸 (0.l mg/mL) 处理过的96孔培养板中，培养24h即可用于实验。
实验分为三组：
（1）空白组：正常的PC12细胞给予完全培养基培养；
（2）模型组：包括鱼藤酮模型组和去血清模型组；
鱼藤酮模型组是在完全培养基中加入4μM鱼藤酮作用48 h，即造成PC12细胞损伤模型；
去血清模型组是将完全培养基换成无血清DMEM培养基作用细胞48 h，即造成PC12细胞损伤模型；
（3）加药组：即模型组+药物组，在模型组中同时分别加入10 μM实施例3、对比例1、对比例2、对比例3和对比例4中制备的榆钱提取物。
然后加入10 μL 5 mg/mL 噻唑蓝（MTT），4 h后去上清，加入150 μL二甲基亚砜（DMSO）用酶标仪于570nm测定吸光度，计算细胞存活率。其中细胞存活率=（加药组或模型组/对照组）×100%，进而筛选出活性单体化合物，测试结果如表1和表2所示。
表1 榆钱提取物对鱼藤酮诱导PC12细胞损伤的影响(means士SD, n=6)
表2 榆钱提取物对去血清诱导PC12细胞损伤的影响(means士SD, n=6)
注：##P<0.01, ###P<0.001与对照组比较； *P<0.05, **P<0.001与模型组比较
由表1和表2可以看出，在完全培养基中加入鱼藤酮后的鱼藤酮模型组的细胞存活率平均值（73.6±14.4）明显低于对照组（100±6.2），差异具有统计学意义（##P<0.01），去血清模型组的细胞存活率平均值（60.2±12.1）也明显低于对照组（100±4.5），差异具有统计学意义（###P<0.001）。在鱼藤酮模型组中加入10-5M实施例3制备的榆钱提取物的细胞存活率（82.9±5.7）远高于鱼藤酮模型组的细胞存活率（73.6±14.4），差异具有统计学意义（**P<0.001）；在去血清模型组中添加10-5M实施例3制备的榆钱提取物的细胞存活率（67.1±7.3）也远高于去血清模型的细胞存活率（60.2±12.1），差异具有统计学意义（*P<0.05）。说明本发明制备的榆钱提取物对利用鱼藤酮和去血清诱导PC12细胞损伤药理模型具有显著神经保护作用。
而对比例1-4中制备的榆钱提取物的细胞存活率与鱼藤酮模型组的细胞存活率相比，没有明显的差异，对比例1-4中制备的榆钱提取物的细胞存活率与去血清模型组相比，也没有明显的差异，而且对比例的结果也具有统计学意义（*P<0.05, **P<0.001）。对比例1和对比例2与实施例3的不同之处是在步骤（5）中分别选用体积比为8:1和2:1的石油醚-丙酮洗脱液浓缩干燥后用90%甲醇溶液溶解后过Toyopearl HW-40凝胶柱；对比例3和对比例4与实施例3的不同之处是在步骤（3）中分别选取10%和95%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，对比例1-4中的其他步骤均与实施例3相同，说明在步骤（4）选取30%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，在步骤（5）中选取体积比为4:1的石油醚-丙酮洗脱液浓缩干燥后用90%甲醇溶液溶解后过凝胶柱进而制备的榆钱提取物对利用鱼藤酮和去血清诱导PC12细胞损伤药理模型具有显著神经保护作用。
最后说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，本领域普通技术人员对本发明的技术方案所做的其他修改或者等同替换，只要不脱离本发明技术方案的精神和范围，均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。
Claims (7)
1.一种榆钱提取物，其特征在于：由以下步骤制备：
（1）将榆钱烘干后粉碎，用体积分数为80-90%的乙醇溶液提取，提取液浓缩得乙醇提取浸膏；
（2）向所述乙醇提取浸膏中加蒸馏水混合均匀后，过滤得滤液，向所述滤液中加入氯仿进行萃取，得到氯仿层和水层，然后采用正丁醇对所述水层进行萃取得正丁醇萃取液，浓缩得正丁醇萃取浸膏；
（3）将所述正丁醇萃取浸膏过大孔吸附树脂柱，依次用体积分数为10%、30%以及95%的乙醇溶液进行梯度洗脱；
（4）将体积分数为30%乙醇洗脱液浓缩干燥后过硅胶柱，依次用体积比为8:1、4:1和2:1的石油醚-丙酮进行梯度洗脱；
（5）将体积比为4:1的石油醚-丙酮洗脱液过凝胶柱，再采用体积分数为80-95 %甲醇溶液进行洗脱，得甲醇洗脱液，将所述甲醇洗脱液浓缩干燥，即得榆钱提取物。
2.根据权利要求1所述的榆钱提取物，其特征在于：所述步骤（1）中烘干温度为40-50℃，所述乙醇溶液提取为超声波提取2-3次，所述榆钱与乙醇溶液的体积比为1:6-9，所述超声波功率为200-300W，提取时间为20-40min，所述提取液浓缩温度为40-50℃。
3.根据权利要求1所述的榆钱提取物，其特征在于：所述步骤（2）中乙醇提取浸膏与蒸馏水的体积比为1:1-2，所述滤液与氯仿体积比为1:1。
4.根据权利要求1所述的榆钱提取物，其特征在于：所述步骤（3）中大孔吸附树脂型号为D-101、X-5或H103。
5.根据权利要求1所述的榆钱提取物，其特征在于：所述步骤（4）中硅胶柱中硅胶粒径为200-300目。
6.根据权利要求1所述的榆钱提取物，其特征在于：所述步骤（5）中凝胶柱为ToyopearlHW-40凝胶柱或Sephadex LH-20凝胶柱。
7.一种权利要求1-6任一项所述的榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610583358.0A CN105998104B (zh) | 2016-07-22 | 2016-07-22 | 一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610583358.0A CN105998104B (zh) | 2016-07-22 | 2016-07-22 | 一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN105998104A CN105998104A (zh) | 2016-10-12 |
| CN105998104B true CN105998104B (zh) | 2019-09-17 |
Family
ID=57117150
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610583358.0A Expired - Fee Related CN105998104B (zh) | 2016-07-22 | 2016-07-22 | 一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN105998104B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108570058B (zh) * | 2018-06-05 | 2019-06-28 | 南阳师范学院 | 一种从水芹菜提取的联苯型木脂素化合物及其方法和用途 |
| CN110903297B (zh) * | 2019-12-20 | 2020-10-13 | 海南省林业科学研究所 | 一种鱼藤酮及类似物的大孔树脂提取方法 |
-
2016
- 2016-07-22 CN CN201610583358.0A patent/CN105998104B/zh not_active Expired - Fee Related
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| HPLC测定榆钱中水杨酸的含量;黄智鸿等;《中国实验方剂学杂志》;20140831;第20卷(第16期);第112-114页 |
| 榆钱酒精浸泡治疗癣疮80例;王广见等;《中国中药杂志》;19900930;第15卷(第9期);第58页 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN105998104A (zh) | 2016-10-12 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102114102B (zh) | 一种具有保肝利胆作用的中药提取物混合制剂及其应用 | |
| CN103463307A (zh) | 灵芝岩黄连复配咀嚼片及其制备方法 | |
| CN104667021A (zh) | 一种含竹叶黄酮的复方制品及其制备方法 | |
| CN103127232A (zh) | 桑叶方总提物及其制剂和用途 | |
| CN104258193A (zh) | 一种治疗神经衰弱和预防老年痴呆症的药物组合物 | |
| CN105267943A (zh) | 一种地龙生物活性小肽有效部位组合物 | |
| CN104666373A (zh) | 东革阿里新用途 | |
| CN101703695A (zh) | 一种复方铁皮石斛养血柔肝胶囊及其制备方法 | |
| CN105998104B (zh) | 一种榆钱提取物在制备治疗神经保护药物方面的用途 | |
| CN103169788A (zh) | 大枣叶提取物及其在制备防治肝损伤药物及保健食品中的应用 | |
| CN107929337A (zh) | 一种屏边三七抗炎有效部位的制备方法及应用 | |
| CN108976264A (zh) | 一种补肾、益精血、防辐射雪莲淫羊藿红景天中药组合物 | |
| CN108434191A (zh) | 一种具有减肥降糖降脂作用的组合物及其制备方法 | |
| CN104489172A (zh) | 一种提高免疫力的刺五加保健茶及其制备方法 | |
| CN104971088A (zh) | 藏茵陈提取物及其制备方法、药物组合物和用途 | |
| CN101278949A (zh) | 一种组合物及其制备方法和用途 | |
| CN102138957B (zh) | 药西瓜提取物及其生产方法和应用 | |
| CN105617021A (zh) | 一种以铁皮石斛和牛大力为原料的药物或保健品 | |
| CN109276637B (zh) | 韭菜子提取物及其制备方法和在制备保肝护肝药物方面的应用 | |
| CN102260340A (zh) | 五味子蛋白及其制备方法和药物用途 | |
| CN106074682A (zh) | 苦豆子总生物碱提取物及其制备方法和制备抗宫颈癌药物中的应用 | |
| CN106074710A (zh) | 一种治疗癫痫的药物 | |
| CN101057954B (zh) | 一种治疗小中风的中药复方及其制备方法 | |
| CN109223739A (zh) | 一种组合物及其制备方法和应用 | |
| CN113117016B (zh) | 滇黄精萃取物用于制备促进睾固酮生成的组合物的用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20190917 |