CN107412253A - 一种红缘拟层孔菌复方菌片 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药保健品领域，具体而言，涉及一种红缘拟层孔菌复方菌片，以重量份计，所述复方菌片主要由以下原料组份制成：红缘拟层孔菌多糖8～12份以及沙棘多糖1～5份。本发明将红缘拟层孔菌多糖与沙棘多糖进行配伍，制得的红缘拟层孔菌片中多糖类有效成分含量高，服用量小，可取得增强机体免疫力、抗疲劳、抗肿瘤的多重效果，表现出明显的配伍优势。

Description

一种红缘拟层孔菌复方菌片

技术领域

本发明涉及医药保健品领域，具体而言，涉及一种红缘拟层孔菌复方菌片。

背景技术

随着生活节奏的加快，来自社会、工作、生活各方面的压力，让人们觉得免疫力大不如从前，再加上禽流感、H1N1流感病毒和从欧洲传入我国的特殊病菌，无时无刻都在威胁着人们的健康，人们越来越意识到提高免疫力意味着拥有健康的体魄。而机体的免疫力是由免疫系统来执行的。免疫系统承担三个基本功能：免疫防护、免疫自稳、免疫监视。

一旦免疫功能异常，机体就会出现相应的疾病。临床及实验免疫学的发展证明，感染、变态反应性疾病，自身免疫病、肿瘤及获得性免疫缺陷综合症(艾滋病)等均与免疫系统功能的正常与否有密切的关系。

免疫系统包括免疫器官、免疫细胞与免疫分子。可特异性地或非特异性地排除侵入机体的异物。免疫细胞主要包括T及B淋巴细胞、单核或巨噬细胞、树突状细胞、嗜酸性及嗜碱性多形核细胞、红细胞及血小板；免疫器官包括肝、脾、淋巴结、胸腺、骨髓等。免疫细胞及免疫组织、器官的发育状况直接影响到机体免疫力的高低。免疫系统为了特异性免疫应答的识别、激活和效应细胞间相互作用得更完善，布满全身所有的组织。机体免疫力的高低直接影响其抗病力。

红缘拟层孔菌Fomitopsis pinicola，又名“红缘层孔菌”、“松生拟层孔菌”、“红带菌”、“红缘树舌”等，是世界性分布的木腐性真菌,它大多生长在阔叶树活立木、针叶树、腐朽木以及倒木上,在中国东北长白山地区为常见种类，在春季、夏季和秋季均会出现。隶属于担子菌纲(Basidiomycetes)非裙菌目(Aphyllophorales)多孔菌科(Polyporaceae)拟层孔菌属(Fomes)。

红缘拟层孔菌是一种“桑黄”类药用真菌，在世界各地均有分布。味微苦、性平。它的化学成分主要包括类固醇化合物，倍半萜烯和三萜类化合物，有研究表明，红缘拟层孔菌提取物具有抗肿瘤、抑菌、抗炎、抗氧化、抑制肥胖、保护肝脏、抑制水肿并能清除游离基、调节中枢神经系统、治疗糖尿病等功能，尤其具有增强人体免疫力的效果。

目前市面上的用于增强机体免疫力、抗疲劳、抗肿瘤的保健品种类繁多，基于红缘拟层孔菌的保健品也有报道，但作用效果参差不齐，由于缺乏规范高效的提取制备工艺，红缘拟层孔菌类制剂作用单一、价格高昂，适用人群范围小，实际增强机体免疫力效果不够理想。

有鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种红缘拟层孔菌复方菌片，以解决上述问题。

本发明涉及一种红缘拟层孔菌复方菌片，以重量份计，所述复方菌片主要由以下原料组份制成：

红缘拟层孔菌多糖8～12份以及沙棘多糖1～5份。

本发明将红缘拟层孔菌多糖与沙棘多糖进行配伍，制得的红缘拟层孔菌片中多糖类有效成分含量高，服用量小，可取得增强机体免疫力、抗疲劳、抗肿瘤的多重效果。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

(1)药效好，纯中药配方，无明显的毒副反应；

(2)以压片的形式用药，服用方便，效果好；

(3)能有效提升免疫力，抗疲劳和抗肿瘤作用显著。

附图说明

为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。

图1为本发明实施例3制备得到的红缘拟层孔菌复方菌片对淋巴细胞增殖作用的影响；

图2为本发明实施例3制备得到的红缘拟层孔菌复方菌片对小鼠腹腔巨噬细胞释放NO能力的影响。

具体实施方式

本发明涉及一种红缘拟层孔菌复方菌片，以重量份计，所述复方菌片主要由以下原料组份制成：

红缘拟层孔菌多糖8～12份以及沙棘多糖1～5份。

优选的，如上所述的复方菌片，以重量份计，所述复方菌片主要由以下原料组份制成：

红缘拟层孔菌多糖9～11份以及沙棘多糖2～4份；

更优选的，以重量份计，所述复方菌片主要由以下原料组份制成：

红缘拟层孔菌多糖10份以及沙棘多糖3份。

沙棘(Hippophae rhamnoides L)属于胡颓子科沙棘属植物，落叶灌木或小乔木，又名沙枣、酸柳。沙棘果为黄色小浆果，其营养价值很高,含有脂肪、蛋白质、糖类、盐类和维生素，并且含量丰富。近几十年来，国内外专家研究发现沙棘果实、种子、叶、皮等各部器官中含有丰富的营养及药用成分，具有多方面的功效，因而无论在食用上还是药用上沙棘都有着很高的价值。目前对沙棘多糖功能的研究主要集中在抗病毒、抑菌作用、抗氧化和降血脂作用及保肝、护肝等方面。

本发明将红缘拟层孔菌多糖与沙棘多糖进行配伍，制得的红缘拟层孔菌片中多糖类有效成分含量高，服用量小，可取得增强机体免疫力、抗疲劳、抗肿瘤的多重效果，表现出明显的配伍优势。

优选的，如上所述的复方菌片，所述复方菌片还包括填充剂和/或润湿剂；

更优选地，所述填充剂为乳糖；

更优选的，所述润湿剂为硬脂酸镁。

优选的，如上所述的复方菌片，所述红缘拟层孔菌多糖的制备方法包括：

将红缘拟层孔菌子实体切片后粉碎成粉，无水乙醇浸泡脱脂后过滤得到药渣；

将所述药渣用热水浸提，将所得滤液浓缩后加无水乙醇析出沉淀，离心后将沉淀真空冷冻干燥既得。

优选的，如上所述的复方菌片，所述无水乙醇浸泡脱脂具体为：

按照1g红缘拟层孔菌粉:3mL～6mL无水乙醇的比例混合，浸泡8h～16h；

更优选的，所述无水乙醇浸泡清洗具体为：

按照1g红缘拟层孔菌粉:4mL～5mL无水乙醇的比例混合，浸泡10h～14h。

优选的，如上所述的复方菌片，所述热水浸提具体为：

将所述药渣按照1g药渣:13mL～18mL水的比例浸泡8h～16h后，加热至95℃～100℃提取3h～5h；重复上述步骤2～4次；

优选的，所述热水浸提具体为：

将所述药渣按照1g药渣:15mL～16mL水的比例浸泡10h～14h后，加热至95℃～100℃提取4h；重复上述步骤2～4次。

优选的，如上所述的复方菌片，所述沙棘多糖的制备方法为：

将沙棘果烘干粉碎后经回流脱脂并热水浸提、减压浓缩、醇析、脱蛋白处理后进行脱色，真空冷冻干燥得到沙棘多糖。

优选的，如上所述的复方菌片，所述回流脱脂并热水浸提具体为：

用乙醚浸泡沙棘8h～16h，随后加热至60℃～70℃回流脱脂12h～16h；

将所述药渣按照1g药渣:20mL～25mL水的比例于75～85℃加热提取1h～3h，重复2～4次；

更优选的，所述回流脱脂并热水浸提具体为：

用乙醚浸泡沙棘10h～14h，随后加热至63℃～67℃回流脱脂13h～15h；

将所述药渣按照1g药渣:22mL～23mL水的比例于78～82℃加热提取2h，重复3次。

优选的，如上所述的复方菌片，所述脱蛋白处理的具体操作为：

沙棘的水提溶液减压浓缩后，加入其体积1/5～1/4的Sevage试剂，以及终浓度0.01～0.04g/L的木瓜蛋白酶，振荡30～60s，离心，保留上层溶液，重复操作直至中间层无变性蛋白质出现为止。

所述Sevage试剂的配方为，按体积份数计，氯仿：正丁醇＝5:1。

优选的，如上所述的复方菌片，所述脱色的具体操作为：

取脱蛋白处理后的沙棘溶于25～30倍于其质量的蒸馏水中，调节pH＝8.5～9.5，加热搅拌至50～60℃后边搅拌边加入体积百分数为35～40％的H₂O₂至溶液变为浅黄色，搅拌保温5～8h后调pH至中性，透析后干燥。

本发明提供的沙棘多糖和红缘拟层孔菌的提取方法易于操作，且提取效率高，通过本方法提取得到的红缘拟层孔菌纯度为78～82％左右、沙棘多糖纯度为74～76％左右。

下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，但是本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

实施例1

本实施例提供了一种红缘拟层孔菌复方菌片的制备方法，包括以下步骤：

1)、将红缘拟层孔菌子实体切片后粉碎成粉，按照1g红缘拟层孔菌粉:3mL无水乙醇的比例混合，浸泡16h后过滤得到药渣；

将所述药渣按照1g药渣:13mL水的比例浸泡16h后，加热至95℃～100℃提取5h；重复上述步骤2次，将所得滤液浓缩至1/3体积后加无水乙醇至终浓度达80％，静置一段时间，4000r/min离心20min，弃上清，沉淀物通过真空冷冻装置干燥，得红缘拟层孔菌粗多糖粉末。

2)、将沙棘果烘干粉碎后用乙醚浸泡沙棘16h，随后加热至60℃回流脱脂16h；

将所述药渣按照1g药渣:20mL水的比例于75加热提取3h，重复2次；

沙棘的水提溶液减压浓缩后，浓缩液中加入95％的乙醇，使溶液达到80％的醇浓度析出多糖，随后加入其体积1/5的Sevage试剂，以及终浓度0.04g/L的木瓜蛋白酶，振荡30s，离心，保留上层溶液，重复操作直至中间层无变性蛋白质出现为止；

取脱蛋白处理后的沙棘溶于25倍于其质量的蒸馏水中，调节pH＝9.5，加热搅拌至60℃后边搅拌边加入体积百分数为35％的H₂O₂至溶液变为浅黄色，搅拌保温5h后调pH至中性，透析后真空冷冻干燥得到沙棘多糖。

3)、测定步骤1)和2)得到的所述红缘拟层孔菌多糖及沙棘多糖的纯度，再根据其纯度按既定的重量份数进行配伍即得；

按有效含量计，二者的重量含量比为，红缘拟层孔菌多糖8份以及沙棘多糖1份。

4)、将多糖粉末与乳糖以1:6的比例混合，加入4％的硬脂酸镁，混匀后压片。

实施例2

本实施例提供了一种红缘拟层孔菌复方菌片的制备方法，包括以下步骤：

1)、将红缘拟层孔菌子实体切片后粉碎成粉，按照1g红缘拟层孔菌粉:6mL无水乙醇的比例混合，浸泡8h后过滤得到药渣；

将所述药渣按照1g药渣:18mL水的比例浸泡8h后，加热至95℃～100℃提取3h；重复上述步骤4次，将所得滤液浓缩至1/3体积后加无水乙醇至终浓度达80％，静置一段时间，4000r/min离心20min，弃上清，沉淀物通过真空冷冻装置干燥，得红缘拟层孔菌粗多糖粉末。

2)、将沙棘果烘干粉碎后用乙醚浸泡沙棘8h，随后加热至70℃回流脱脂12h；

将所述药渣按照1g药渣:25mL水的比例于85℃加热提取1h，重复4次；

沙棘的水提溶液减压浓缩后，浓缩液中加入95％的乙醇，使溶液达到80％的醇浓度析出多糖，随后加入其体积1/4的Sevage试剂，以及终浓度0.01g/L的木瓜蛋白酶，振荡60s，离心，保留上层溶液，重复操作直至中间层无变性蛋白质出现为止；

取脱蛋白处理后的沙棘溶于30倍于其质量的蒸馏水中，调节pH＝8.5，加热搅拌至50℃后边搅拌边加入体积百分数为40％的H₂O₂至溶液变为浅黄色，搅拌保温8h后调pH至中性，透析后真空冷冻干燥得到沙棘多糖。

3)、测定步骤1)和2)得到的所述红缘拟层孔菌多糖及沙棘多糖的纯度，再根据其纯度按既定的重量份数进行配伍即得；

按有效含量计，二者的重量含量比为，红缘拟层孔菌多糖12份以及沙棘多糖5份。

4)、将多糖粉末与乳糖以1:6的比例混合，加入4％的硬脂酸镁，混匀后压片。

实施例3

本实施例提供了一种红缘拟层孔菌复方菌片的制备方法，包括以下步骤：

1)、将红缘拟层孔菌子实体切片后粉碎成粉，按照1g红缘拟层孔菌粉:4mL无水乙醇的比例混合，浸泡12h后过滤得到药渣；

将所述药渣按照1g药渣:15mL水的比例浸泡12h后，加热至95℃～100℃提取4h；重复上述步骤3次，将所得滤液浓缩至1/3体积后加无水乙醇至终浓度达80％，静置一段时间，4000r/min离心20min，弃上清，沉淀物通过真空冷冻装置干燥，得红缘拟层孔菌粗多糖粉末。

2)、将沙棘果烘干粉碎后用乙醚浸泡沙棘12h，随后加热至65℃回流脱脂14h；

将所述药渣按照1g药渣:23mL水的比例于80℃加热提取2h，重复3次；

沙棘的水提溶液减压浓缩后，浓缩液中加入95％的乙醇，使溶液达到80％的醇浓度析出多糖，随后加入其体积1/5的Sevage试剂，以及终浓度0.02g/L的木瓜蛋白酶，振荡45s，离心，保留上层溶液，重复操作直至中间层无变性蛋白质出现为止；

取脱蛋白处理后的沙棘溶于27倍于其质量的蒸馏水中，调节pH＝9.0，加热搅拌至55℃后边搅拌边加入体积百分数为37％的H₂O₂至溶液变为浅黄色，搅拌保温7h后调pH至中性，透析后真空冷冻干燥得到沙棘多糖。

3)、测定步骤1)和2)得到的所述红缘拟层孔菌多糖及沙棘多糖的纯度，再根据其纯度按既定的重量份数进行配伍即得；

按有效含量计，二者的重量含量比为，红缘拟层孔菌多糖10份以及沙棘多糖3份。

4)、将多糖粉末与乳糖以1:6的比例混合，加入4％的硬脂酸镁，混匀后压片。

实验例1

抗疲劳活性：强迫游泳实验建立疲劳模型。操作方法为：每天10:00AM～3:00PM，将小鼠单独放入盛有23-25℃，10cm高的水的塑料圆柱体(高25cm，直径10cm)中。每只小鼠被迫在水中6min，当小鼠终止挣扎，保持漂浮的状态(或仅有微小的动作以保持头部露出水面)则被认为是固定不动。总测试时间6min，前2min为适应期，后4min记录固定不动时间。每天给药后30min进行实验，连续15天，手动双盲法记录小鼠的固定不动时间和游泳时间。每只小鼠游泳结束后更换容器中的水。实验动物分组：将雄性ICR小鼠随机分组，每组20只。分别为生理盐水组(强迫游泳同时给予生理盐水组)、给样组(强迫游泳同时给实施例1～3制备得到的红缘拟层孔菌复方菌片组)、对照组(制备方法同实施例3，但仅含有红缘拟层孔菌多糖，不含有沙棘多糖)。

各组给药剂量为0.5g/kg/天，每天2次，每天固定时间进行强迫游泳实验，记录小鼠固定不动时间和游泳时间。结果表明，红缘拟层孔菌复方菌片能够显著降低疲劳小鼠的固定不动时间，且效果比对照组更为显著。因此，红缘拟层孔菌复方菌片具有显著的缓解体力疲劳的功效。

表1小鼠强迫游泳实验固定不动时间统计表

实验例2

免疫活性：

(1)红缘拟层孔菌复方菌片小鼠脾淋巴细胞增殖的影响

将小鼠随机分为3组，每组10只，分别为空白对照组(假灌胃实验)、对照组(同实验例1)、红缘拟层孔菌复方菌片0.5g/kg/天组(实施例3制备得到)。对照组、实验组进行灌胃给药，每天2次，连续给药10天。末次给药的第二天，小鼠颈椎脱臼处死，75％酒精中浸泡消毒2min。在消毒通风的超净台中，用剪刀、镊子剔除小鼠的结缔组织和脂肪组织，无菌取出小鼠脾脏，置于含有5mL淋巴细胞分离液的的培养皿中。磨碎脾脏，过滤。收集单核脾细胞层，10％的NBCS-RPMI-1640(完全培养基)重悬脾单核细胞，显微镜下观察计数，RPMI-1640培养液调整细胞浓度到5×10⁶个/mL。

两组分别加入100μL 10％NBCS-RPMI-1640完全培养基，丝裂原诱导组分别加入100μL T细胞丝裂原ConA(终浓度5μg/mL)和100μL B细胞丝裂原LPS(终浓度10μg/mL)。各实验孔终体积均为200μL，设3个复孔。将细胞培养板置于CO₂(浓度5％)恒温培养箱，37℃条件下培养44h。每孔加入20μL 5mg/mL MTT溶液，继续恒温培养4h。使用灭菌后的移液器吸取并弃掉上清，加入150μL DMSO终止反应，静置避光10min。使用酶标仪在波长570nm处检测并记录吸光值。

(2)红缘拟层孔菌复方菌片对小鼠巨噬细胞吞噬功能的影响

连续灌胃给药10天的小鼠，颈椎脱臼处死，无菌条件下打开腹腔并冲洗，收集腹腔液离心，RPMI-1640培养基重悬细胞。计算并调整细胞浓度至5×10⁶个/mL，1mL/孔加入6孔板中。将培养板置于5％CO₂恒温培养箱37℃条件下培养4h，除去未贴壁或贴壁性不好的巨噬细胞，余下的即为纯化的贴壁巨噬细胞。

巨噬细胞吞噬中性红能力的检测：使用PBS配制浓度为0.075％的中性红溶液，过滤，除菌。向纯化的贴壁巨噬细胞中加入中性红溶液(100μL/孔)，培养1-2h。清洗培养板，加入100μL细胞裂解液(乙醇：乙酸＝1:1，v/v)，2h后，酶标仪检测波长为550nm时反应液的吸光值。

(3)红缘拟层孔菌复方菌片对小鼠腹腔巨噬细胞生成NO的影响

亚硝酸盐含量标准曲线的制作：配置1mM/L NaNO₂原液，按梯度浓度倍比稀释，分别配成0～100μM/L的NaNO₂标准溶液。取100μL稀释液加入96孔细胞培养板中，设置3复孔重复实验，再向每孔依次加入等体积的Griess试剂。避光反应10min，酶标仪检测540nm波长处的吸光值。以NaNO2的浓度为横坐标，540nm处吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

小鼠腹腔巨噬细胞的制备方法同上。将巨噬细胞以1×10⁶个/孔的浓度加入到24孔板中。将细胞培养板置于5％CO₂、37℃恒温培养箱中培养48h，将细胞培养上清(100μL)转移到96孔培养板中，加入等体积的Griess试剂后，避光反应10min。酶标仪检测540nm波长时的吸光值。根据吸光值和标准曲线来计算样品刺激孔所对应的NO含量。

结果：

给药浓度为0.5g/kg时，两组均能够显著刺激小鼠淋巴细胞的增殖，能够显著促进ConA诱导的T淋巴细胞的增殖以及LPS诱导的B细胞的增殖；还能够显著促进NO的释放能力(图1及图2)。但实验组对免疫功能的影响要显著高于对照组。

综合以上实验结果，分析得出以下结论：红缘拟层孔菌复方菌片具有一定的增强免疫力的作用，能够促进淋巴细胞增殖和巨噬细胞释放NO的能力。

实验例3

挑选生长状态良好的细胞经0.25％胰蛋白酶消化，终止消化后洗涤2次，再用含10％胎牛血清DMEM培养液配制成单个细胞悬液，以每孔1×10⁴个细胞接种于96孔培养板内，每孔100μl。培养24h后，吸弃培养液，将各组按实验设计(表3)所需的浓度分别加入各孔，每孔200μL，每组设3个复孔，分别设：空白组(培养液)、对照组(设置同实施例1，浓度为10mg/ml)、实验组(实施例3的片剂溶解后做系列稀释)及阳性对照组(5–氟尿嘧啶终浓度为20μg/mL)。于CO₂培养箱中37℃培养44h后，每孔加入5mg/mL MTT 20μL，37℃继续孵育4h，取出96孔板，吸弃培养液，每孔加入150μL DMSO，震荡l0min使结晶物充分溶解，取至微型离心管中稀释至1000μL，紫外分光光度计于波长570nm下检测每孔的吸收度(OD值)。每次实验重复三次，试验结果如下表：

表3肿瘤细胞抑制试验结果

结论：红缘拟层孔菌复方菌片能够抑制肿瘤细胞细胞生长导致肿瘤细胞死亡，该样品具有良好的抗肿瘤效果。

最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，但本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。

Claims (10)

1.一种红缘拟层孔菌复方菌片，其特征在于，以重量份计，所述复方菌片主要由以下原料组份制成：

红缘拟层孔菌多糖8～12份以及沙棘多糖1～5份。

2.根据权利要求1所述的复方菌片，其特征在于，以重量份计，所述复方菌片主要由以下原料组份制成：

红缘拟层孔菌多糖9～11份以及沙棘多糖2～4份。

3.根据权利要求1或2所述的复方菌片，其特征在于，所述复方菌片还包括填充剂和/或润湿剂；

优选地，所述填充剂为乳糖；

优选的，所述润湿剂为硬脂酸镁。

4.根据权利要求1或2所述的复方菌片，其特征在于，所述红缘拟层孔菌多糖的制备方法包括：

将红缘拟层孔菌子实体切片后粉碎成粉，无水乙醇浸泡脱脂后过滤得到药渣；

将所述药渣用热水浸提，将所得滤液浓缩后加无水乙醇析出沉淀，离心后将沉淀真空冷冻干燥既得。

5.根据权利要求4所述的复方菌片，其特征在于，所述无水乙醇浸泡脱脂具体为：

按照1g红缘拟层孔菌粉:3mL～6mL无水乙醇的比例混合，浸泡8h～16h。

6.根据权利要求4所述的复方菌片，其特征在于，所述热水浸提具体为：

将所述药渣按照1g药渣:13mL～18mL水的比例浸泡8h～16h后，加热至95℃～100℃提取3h～5h；重复上述步骤2～4次。

7.根据权利要求1或2所述的复方菌片，其特征在于，所述沙棘多糖的制备方法为：

将沙棘果烘干粉碎后经回流脱脂并热水浸提、减压浓缩、醇析、脱蛋白处理后进行脱色，真空冷冻干燥得到沙棘多糖。

8.根据权利要求7所述的复方菌片，其特征在于，所述回流脱脂并热水浸提具体为：

用乙醚浸泡沙棘8h～16h，随后加热至60℃～70℃回流脱脂12h～16h；

将所述药渣按照1g药渣:20mL～25mL水的比例于75～85℃加热提取1h～3h，重复2～4次。

9.根据权利要求7所述的复方菌片，其特征在于，所述脱蛋白处理的具体操作为：

沙棘的水提溶液减压浓缩后，加入其体积1/5～1/4的Sevage试剂，以及终浓度0.01～0.04g/L的木瓜蛋白酶，振荡30～60s，离心，保留上层溶液，重复操作直至中间层无变性蛋白质出现为止。

10.根据权利要求7所述的复方菌片，其特征在于，所述脱色的具体操作为：

取脱蛋白处理后的沙棘溶于25～30倍于其质量的蒸馏水中，调节pH＝8.5～9.5，加热搅拌至50～60℃后边搅拌边加入体积百分数为35～40％的H₂O₂至溶液变为浅黄色，搅拌保温5～8h后调pH至中性，透析后干燥。