CN107400682A - 一种水稻纹枯病的生物防治方法 - Google Patents
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Abstract
一种水稻纹枯病的生物防治方法,涉及水稻病虫害的生物防治技术领域,包括以下步骤:制备NA固体培养基、制备LB液体培养液、制备种子液、制备发酵液、制备发酵液提取物、制备混配剂、水稻定殖。发酵提取物混配井冈霉素对水稻纹枯病菌的防治具有协同作用,能显著增强井冈霉素对水稻纹枯病的防治效果,为提高井冈霉素对水稻纹枯病的防治效果提供了一定的理论依据,并为拓展拮抗细菌生物农药的应用提供了一条有效途径。
Description
技术领域
本发明涉及水稻病虫害的生物防治技术领域,具体涉及一种水稻纹枯病的生物防治方法。
背景技术
水稻纹枯病,是影响我国水稻生长的常见病害,一般情况下水稻纹枯病会致使水稻减产10%-20%,严重时往往导致水稻倒伏枯死,减产量高达到50%-60%,对我国农业生产造成了巨大的经济损失。
然而,目前防治水稻纹枯病的有效药剂比较单一,主要是井冈霉素。由于长期使用,水稻纹枯病菌对井冈霉素产生了一定程度的抗药性,单一的井冈霉素对水稻纹枯病的防效已明显减弱,使得每年使用的次数逐渐增多,使用量也显著增加。因此,为了提高水稻纹枯病的防效,研发高效的新型药剂已迫在眉睫。生物防治是一种高效、安全控制水稻纹枯病的方法。近年来,国内外专家对水稻纹枯病拮抗菌进行了大量研究,取得了较大成果,然而,研究表明单一的生物防治效果并不理想,常常表现出较大的变异。
发明内容
为了解决现有技术中单一的生物防治存在的问题,本发明提供了一种水稻纹枯病的生物防治方法,采用混配剂混用防治水稻纹枯病具有增效效果。
本发明采用以下技术方案:
一种水稻纹枯病的生物防治方法,包括以下步骤:
步骤一:制备NA固体培养基,采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、葡萄糖2.5g,加蒸馏水溶解,定容至1L,PH调至7±0.1,分装后121℃灭菌20min;
步骤二:制备LB液体培养液,在950ml去离子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g,搅拌直至溶质溶解,用5mol/LNaOH调pH至7.0,用去离子水定容至1L,在15psi高压下蒸汽灭菌21min;
步骤三:将拮抗细菌在NA固体培养基上于37℃活化24h,用无菌水制成菌体悬浮液,取10mL菌体悬浮液接种到装有100mLLB液体培养液的250mL锥形瓶中,在28℃的恒温条件下以220r/min的速率震荡培养48h,得到种子液;
步骤四:种子液以10%的接种量接入装有300mLLB液体培养液的1000mL锥形瓶中,磁力搅拌,转速为1000r/min,置于28℃的振荡培养箱中连续培养84h,得发酵液;
步骤五:将发酵液和乙酸乙酯以质量比1:2充分混匀萃取48h,取萃取液于40℃旋转蒸发仪中,以110r/min的转速旋转蒸发至膏状,用无菌水溶解,配成质量浓度为1000mg/L的发酵液提取物,置于4℃冰箱保存备用;
步骤六:在无菌条件下,将发酵液提取物和质量浓度500mg/L的井冈霉素按质量比4:1混合均匀得混配剂;
步骤七:水稻种子用质量浓度70%的乙醇溶液浸泡2min,然后用质量浓度3%的次氯酸钠水溶液浸泡30min,期间用玻璃棒搅动,无菌水冲洗3次,第3次冲洗持续10min,过夜干燥,置于铺有两层湿润滤纸片的培养皿中,再放于37℃恒温培养箱培养4d直至发芽,最后将发芽的水稻种子播种于田地,在水稻生长的第10、20、50和80天向水稻叶面喷洒混配剂。
优选的,所述的拮抗细菌为拮抗细菌SU8。
优选的,所述的拮抗细菌SU8为铜绿假单胞菌。
本发明的有益效果在于:
1)发酵提取物混配井冈霉素对水稻纹枯病菌的防治具有协同作用,能显著增强井冈霉素对水稻纹枯病的防治效果,为提高井冈霉素对水稻纹枯病的防治效果提供了一定的理论依据,并为拓展拮抗细菌生物农药的应用提供了一条有效途径。
2)本发明的方法可以调控水稻植株的生长发育进程,包含有益的细茵群落在植株生长中具有促生、抗病、抗逆等功能。根据植物微生态理论,这些细菌和宿主之间在长期的进化过程中能够建立互惠互利的关系。从生物间巧生互作等关系考虑,这些细菌将更有利于生物的定殖,可更好地发挥生防作用。
3)本发明采用生物防治是发展绿色水稻产业的重要手段,拮抗细菌是防治水稻纹枯病的重要生防微生物。从植物中寻找具有生物活性的化合物,直接将其发成为新农药,是目前农药研发的一条重要途径。
具体实施方式
下面通过对实施例的描述,对本发明作进一步详细的说明,以帮助本领域技术人员对本发明的发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。
实施例1
一种水稻纹枯病的生物防治方法,包括以下步骤:
步骤一:制备NA固体培养基,采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、葡萄糖2.5g,加蒸馏水溶解,定容至1L,PH调至7±0.1,分装后121℃灭菌20min;
步骤二:制备LB液体培养液,在950ml去离子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g,搅拌直至溶质溶解,用5mol/LNaOH调pH至7.0,用去离子水定容至1L,在15psi高压下蒸汽灭菌21min;
步骤三:将拮抗细菌在NA固体培养基上于37℃活化24h,用无菌水制成菌体悬浮液,取10mL菌体悬浮液接种到装有100mLLB液体培养液的250mL锥形瓶中,在28℃的恒温条件下以220r/min的速率震荡培养48h,得到种子液;
步骤四:种子液以10%的接种量接入装有300mLLB液体培养液的1000mL锥形瓶中,磁力搅拌,转速为1000r/min,置于28℃的振荡培养箱中连续培养84h,得发酵液;
步骤五:将发酵液和乙酸乙酯以质量比1:2充分混匀萃取48h,取萃取液于40℃旋转蒸发仪中,以110r/min的转速旋转蒸发至膏状,用无菌水溶解,配成质量浓度为1000mg/L的发酵液提取物,置于4℃冰箱保存备用;
步骤六:在无菌条件下,将发酵液提取物和质量浓度500mg/L的井冈霉素按质量比4:1混合均匀得混配剂;
步骤七:水稻种子用质量浓度70%的乙醇溶液浸泡2min,然后用质量浓度3%的次氯酸钠水溶液浸泡30min,期间用玻璃棒搅动,无菌水冲洗3次,第3次冲洗持续10min,过夜干燥,置于铺有两层湿润滤纸片的培养皿中,再放于37℃恒温培养箱培养4d直至发芽,最后将发芽的水稻种子播种于田地,在水稻生长的第10、20、50和80天向水稻叶面喷洒混配剂。
所述的拮抗细菌为拮抗细菌SU8;所述的拮抗细菌SU8为铜绿假单胞菌。
Claims (3)
1.一种水稻纹枯病的生物防治方法,其特征在于,包括以下步骤:
步骤一:制备NA固体培养基,采用蛋白胨10.0g、牛肉粉3.0g、氯化钠5.0g、琼脂15.0g、葡萄糖2.5g,加蒸馏水溶解,定容至1L,PH调至7±0.1,分装后121℃灭菌20min;
步骤二:制备LB液体培养液,在950ml去离子水中加入胰蛋白胨10g、酵母提取物5g、NaCl10g,搅拌直至溶质溶解,用5mol/LNaOH调pH至7.0,用去离子水定容至1L,在15psi高压下蒸汽灭菌21min;
步骤三:将拮抗细菌在NA固体培养基上于37℃活化24h,用无菌水制成菌体悬浮液,取10mL菌体悬浮液接种到装有100mLLB液体培养液的250mL锥形瓶中,在28℃的恒温条件下以220r/min的速率震荡培养48h,得到种子液;
步骤四:种子液以10%的接种量接入装有300mLLB液体培养液的1000mL锥形瓶中,磁力搅拌,转速为1000r/min,置于28℃的振荡培养箱中连续培养84h,得发酵液;
步骤五:将发酵液和乙酸乙酯以质量比1:2充分混匀萃取48h,取萃取液于40℃旋转蒸发仪中,以110r/min的转速旋转蒸发至膏状,用无菌水溶解,配成质量浓度为1000mg/L的发酵液提取物,置于4℃冰箱保存备用;
步骤六:在无菌条件下,将发酵液提取物和质量浓度500mg/L的井冈霉素按质量比4:1混合均匀得混配剂;
步骤七:水稻种子用质量浓度70%的乙醇溶液浸泡2min,然后用质量浓度3%的次氯酸钠水溶液浸泡30min,期间用玻璃棒搅动,无菌水冲洗3次,第3次冲洗持续10min,过夜干燥,置于铺有两层湿润滤纸片的培养皿中,再放于37℃恒温培养箱培养4d直至发芽,最后将发芽的水稻种子播种于田地,在水稻生长的第10、20、50和80天向水稻叶面喷洒混配剂。
2.根据权利要求1所述的一种水稻纹枯病的生物防治方法,其特征在于:所述的拮抗细菌为拮抗细菌SU8。
3.根据权利要求1所述的一种水稻纹枯病的生物防治方法,其特征在于:所述的拮抗细菌SU8为铜绿假单胞菌。
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- 2017-09-25 CN CN201710873554.6A patent/CN107400682A/zh not_active Withdrawn
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