CN107375912A - 用于治疗乳糖不耐症或因乳糖酶缺乏引发的疾病的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于治疗乳糖不耐症或因乳糖酶缺乏引发的疾病的组合物，其中所述组合物是非乳制品固体剂型，包含：(a)乳糖酶；和(b)一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物选自德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌；其中所述乳糖酶(a)并非获自所述的一种或以上微生物(b)；以及其中所述一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)是干燥形式。本发明还提供了包含乳糖酶和产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物的非包衣胶囊和片剂组合物。

Description

用于治疗乳糖不耐症或因乳糖酶缺乏引发的疾病的组合物
技术领域
本发明的主题是一种用于给予乳糖不耐症患者的制剂，所述制剂包含乳糖酶(合成半乳糖苷酶(syn.tilactase)、半乳糖苷酶(tilactasum)、β-半乳糖苷酶)和微生物。在本专利申请中，术语乳糖不耐症不仅指医学上定义的乳糖不耐症和乳糖代谢障碍(乳糖吸收不良、乳糖消化不良)，而且还指因摄入乳糖或含乳糖食品，或因人体或动物消化道中其它物质(如药物组合物)释放的乳糖而引发的任何形式的健康问题或症状。
背景技术
乳糖是二糖，并且是重要的供能营养成分。它是主要存在于牛奶和乳制品中的一种成分，但是，它也被食品工业用作甜味剂、膨胀剂和稠度改进剂，例如在糖果、加工肉类、焙烤食品和即食食品中使用。药物组合物也常包含乳糖。在体内，乳糖在小肠内被内源性乳糖酶分解成可以利用的营养素葡萄糖和半乳糖。对于婴儿来说，母乳中含有的乳糖是一种非常重要的营养素。
乳糖不耐症通常是因乳糖酶缺乏引起的。如果体内没有足量的乳糖酶(乳糖酶缺乏)，乳糖以未分解的形式进入肠(大肠)的下部，乳糖在其中被肠道细菌发酵，导致例如气体产生和/或使流入大肠内的水增多。这会导致在食用乳制品后出现各种不适，如胃痛、胃肠胀气、腹胀或腹泻。这被称为乳糖不耐症。由于症状类似，乳糖不耐症常与肠易激综合症相混淆(过敏性结肠、痉挛性结肠)。
通常认为存在三种不同形式的乳糖酶缺乏：
1.原发性乳糖酶缺乏
2.继发性乳糖酶缺乏
3.先天性乳糖酶缺乏
小肠中乳糖酶的量在母乳喂养期的婴儿体内最高，然后由于遗传原因，大多数人体内的乳糖酶不断下降。因此，所导致的所谓原发性乳糖酶缺乏是正常的老化过程，在世界上大多数成人中(70％-90％)可以观察到这种现象。因此，几乎所有非洲人和亚洲人都不耐受乳糖。但同样在德国，大约15％的成年人存在原发性乳糖酶缺乏。因此，由原发性乳糖酶缺乏引起的乳糖不耐症常被称为原发性乳糖不耐症。
各种肠道疾病会引发所谓的继发性乳糖酶缺乏(合成获得性乳糖酶缺乏)，如克罗恩病(Crohn’s disease)、溃疡性结肠炎、麸质过敏症(地方性口炎性腹泻)和其它肠道炎症(如由于病毒感染或细菌感染引起的肠道炎症)。此外，在胃肠道手术后，尤其是在切除部分小肠后，普遍存在继发性乳糖酶缺乏。这被称为继发性或暂时性乳糖不耐症。在引发继发性乳糖酶缺乏的肠道疾病痊愈后，继发性乳糖缺乏通常是可以逆转的。
在非常罕见的先天性乳糖酶缺乏中，新生儿缺乏产生乳糖酶的基因。这会导致体内根本无法产生乳糖酶。此类婴儿应该严格食用不含乳糖的营养物质。
在本专利申请意义上，术语乳糖酶缺乏指的不仅是医学上定义的乳糖酶缺乏，而且也指任何形式的乳糖酶缺乏。
并非所有的乳糖代谢障碍都一定会导致严重的乳糖不耐症。然而，轻度乳糖代谢障碍也可以观察到各种不适。目前，只能够通过保持低乳糖或无乳糖饮食，或在食用含乳糖的食品时服用含有乳糖酶的制剂，才可能避免出现上述不适。保持低乳糖或无乳糖饮食无法令人满意，而且，由于乳制品中包含宝贵的营养物质和重要的物质，从营养生理学的角度来看，也是不利的。无乳糖乳制品的选择是有限的，并且，除此之外，由于乳糖已经被生产期间加入的乳糖酶分解，因此，无乳糖乳制品比含乳糖制品更甜。许多消费者不喜欢这些制品的味道。此外，人们预料不到但含有乳糖的食品非常多。这意味着要购买无乳糖食品通常存在很多问题。即时使用乳糖酶制剂是一个良好的替代方法，并常在很大程度上改善了那些受影响的人的生活质量。一方面，一个人所需的乳糖酶的量取决于使用者对乳糖的敏感程度。这主要由内源性乳糖酶的残留活性决定，除此之外，所需乳糖酶的量取决于食物类型、消耗的食物总量以及食物中所含的乳糖量。众所周知，乳糖酶制剂对于所有患者来说并不总是有效或同等有效。
人们已经提出了多种治疗或减轻乳糖不耐症或乳糖酶缺乏症的症状的产品。
RU 292125公开了土苹果(earth apple)(洋姜)提取物、乳糖酶及含嗜热链球菌(S.thermophilus)和保加利亚乳杆菌(L.bulgaricus)的发酵奶基质的组合。这种产品旨在供患有乳糖不耐症或乳糖酶缺乏症的人群使用，使用乳糖酶的目的将显示为降低奶基中的乳糖含量。没有任何迹象表明这两种微生物对乳糖不耐症有任何有益效果。此外，据该专利声称，为了提供最佳口感和稠度，嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的比率必须是1:4。
DE2725731(相当于US4034115)公开了一种制备乳糖含量低并因而适合乳糖不耐症患者食用的发酵奶制品的四步法。其目的并不是提供一种预防或治疗乳糖不耐症或因乳糖酶缺乏时食用其它类型食品中的乳糖而引起的症状的通用方法。这种方法包括采用乳酸菌(不是嗜热链球菌或保加利亚乳杆菌)的第一发酵步骤，以得到酪乳；第二发酵步骤，其采用酸奶菌，如嗜热链球菌或保加利亚乳杆菌；第三步，包括加入少量初乳；以及第四步，包括用嗜酸乳杆菌(L.acidophilus)或双歧杆菌(L.bifidus)进行发酵。
WO2009/056979(Danisco)公开了特别是(inter alia)包含嗜热链球菌、保加利亚乳杆菌和外源性乳糖酶的乳制品(酸奶)。虽然在第11页第4行提到了乳糖酶在治疗乳糖不耐症方面的已知用途，但是，该产品并不意图用于治疗或预防乳糖不耐症或乳糖酶缺乏症。
WO2004/089290(Pharmachem)公开了乳糖不耐症患者服用包含益生菌微生物和乳糖酶的组合的可咀嚼糖果(confections)。优选的微生物包括嗜热链球菌，但不包括保加利亚乳杆菌。使用乳糖酶的目的(参见第16页)将显示为脱除糖果中存在的任何乳糖。WO2004/089290不包含任何含乳糖酶和/或微生物(如嗜热链球菌或保加利亚乳杆菌)的实例，也并未公开微生物的存在形式。在WO2004/089290的第2页和第3页，其认为使用冻干微生物存在一些问题，并在其它多处声明，糖果的制备未经加热和脱水，从而建议不以干燥形式使用微生物。
US2008/0187525(Porubcan)公开了益生菌微生物和催乳酶的组合。催乳酶(包含乳糖酶)旨在用于促进益生菌微生物的生长。这种组合(或其组分)可以盛放在胶囊中。微生物可以采用冻干形式。该专利未公开也未举例说明乳糖酶与嗜热链球菌或保加利亚乳杆菌的特定组合。该文件并不关注预防或治疗乳糖不耐症或乳糖酶缺乏症。
DE69505374(＝WO95/34292)公开了包含各种生物活性物质如乳糖酶和微生物的微粒，其中所述微粒带肠溶包衣。意图将经包衣的微粒混入食品如奶制品中。作为微生物的实例，该专利提到了嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌。第3页讨论了乳糖不耐症，并提到了乳糖酶。该专利中有含乳糖酶的包衣颗粒的实例，也有含嗜酸乳杆菌的包衣颗粒实例。然而，该专利并未公开乳糖酶与嗜热链球菌或保加利亚乳杆菌组合使用，也并没有提供包含嗜热链球菌或保加利亚乳杆菌的包衣颗粒的实例。
EP1112002公开了给予动物的奶粉。这种奶粉包含了乳糖酶，加入乳糖酶是为了预防动物出现乳糖不耐症的症状。该奶粉还可包含益生菌微生物(参见第3页)。嗜热链球菌在列举的微生物中，而保加利亚乳杆菌则不在列举的微生物中。然而，该专利并没有提供包含益生菌微生物以及乳糖酶的奶粉的实例。
WO96/06924(＝DE 69535290)公开了一种通过将含嗜热链球菌的培养基发酵，生产富含低聚半乳糖和β-半乳糖苷酶(乳糖酶)的发酵制品的方法。第12页声称，患有乳糖缺乏症的患者可以耐受这种产品。该专利似乎并未公开添加外源性乳糖酶，也似乎并未表明这种制品能够用以预防或治疗乳糖不耐症或乳糖酶缺乏症。
US2008/0213320(Eisenstein Mayer)公开了用于治疗胃食管反流病的组合物(特别是，其可为片剂或胶囊)，所述组合物包含至少以下三种成分中的两种：(1)消化酶；(2)益生菌；(3)甜菊。乳糖酶在列举的消化酶中。嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌均列在益生菌中，但是并未声明是优选的。该专利提供了一个实例，并且其包含了乳糖酶以及7种其它消化酶，但是，它还包含6种益生菌种，其中未包含嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌。该专利未提到治疗或预防乳糖不耐症或乳糖缺乏症。
US2009/110674(Loizou Nicos)公开了健康食品增补剂(supplement)，所述增补剂包含选自尤其是矿物质、酶、维生素、植物提取物、选定益生菌和氨基酸等的50多种不同的活性成分。第3页描述了一种包含50多种成分的组合物，包含乳糖酶(5mg)和保加利亚乳杆菌(Lactobacillus bulgaricus)(2.5mg，包括双歧杆菌)。在第12页，乳糖酶被描述为用于水解奶中乳糖的必要成分，并且提出，缺乏乳糖酶会引发乳糖不耐症。这些组合物被描述为覆盖一般健康问题的万用药，而并不是针对任何一种疾病或症状。
US2008/0260708关注用于“使人体化学正常化”的组合物，并且意图作为促进良好健康的万用药。这些组合物必须包含特别是(inter alia)消化酶、可溶和不溶性纤维、泻药、一种或以上益生菌、蛋白酶、脂肪酶、各种矿物质及各种中药和植物提取物。这些组合物并非专门针对预防或治疗乳糖不耐症或乳糖酶缺乏症的症状。消化酶可包括乳糖酶，而益生菌酶可包括保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌。
US6008027(Langner)公开了用于治疗乳糖酶缺乏症的含产乳糖酶的微生物的胶囊。虽然提到了保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌，但是，示例的组合物仅包含嗜酸乳杆菌。US6008027未公开包含外源性乳糖酶。Langner胶囊的基本特点是其包覆在肠溶性聚合物中，该聚合物能够避免其在胃中的酸性条件下释放，而在肠内降解以释放出微生物。
US6410018、US6428786、US6562338和US6562339(全部为Eisenhardt等人)每个都公开了用于治疗乳糖不耐症的组合物，包括最佳工作pH范围为3–6的第一乳糖酶及最佳pH范围为6-8的第二乳糖酶。第二乳糖酶有一肠溶包衣，以防止在胃内过早降解。这些文件中均未提到在所述的组合物、方法和工艺中使用乳酸菌。
Guarner等人在Brit.J.Nutrition(《英国营养学杂志》)，93(2005),783-786页中公开了酸奶细菌嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌均具有高的乳糖酶活性，以及酸奶改善了乳糖的消化并消除了乳糖不耐症的症状。然而，Guarner等的文章中并未提到可添加外源性乳糖酶或提到这样做有任何益处。
此外，Guarner等的文章中没有提供任何证据证明，食用含嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的酸奶将对食用了其它乳制品(如未发酵奶和冰淇淋)的乳糖吸收不良者的乳糖消化有任何效果。
虽然食用酸奶可以为某些喜欢喝酸奶的乳糖吸收不良者提供一般的好处，但是，许多人不喜欢酸奶的口感和质地。因此，含活细菌培养物(如嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌)的酸奶并不能为乳糖吸收不良和乳糖不耐症的问题提供一种通用的解决方案。
Guarner等(参见上文)强调了要获得任何有益效果时采用活培养物的重要性。如果酸奶经过加热处理，则这些益处将会消失。Guarner等未提供证据表明在非乳制品培养基中给予休眠细菌(如冻干细菌)能够为乳糖不耐症患者提供任何益处。根据解决乳糖不耐症问题的WO2004/089290(Pharmachem)的公开内容，使用脱水细菌并不可取。例如，在WO2004/089290的第2页，它声明“也可以获得冻干的，即冷冻干燥的益生菌微生物。冻干细菌处于逆境(abiotic)状态。为了使其恢复活力，需要在服用前湿润微生物，由于许多细菌在重新水化后无法存活，因此，这是不利的。此外，存活的微生物(如果有的话)也不是立即具有代谢活性，并且无法在胃内极端的酸性条件下存活”。因此，根据WO2004/089290，使用干燥细菌并不能提供一种进一步的方法。
Hove等在Amer.J.Clin.Nutr.(《美国营养学杂志》)1994,59:74-79页上描述了在乳糖吸收不良患者身上开展的实验，其中患者服用含有冻干混合乳酸菌(含双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌)的胶囊。Hove等得出结论：含有冻干乳酸菌的胶囊并不能缓解乳糖吸收不良的症状(即腹部绞痛、腹泻和“腹中积气(meteorism)”)，也没有增强乳糖在乳糖吸收不良患者小肠中的水解。
因此，从上文讨论的公开内容来看，仍然需要一种有效产品，其使乳糖不耐症患者能够食用含乳糖食品—而不是被某些患者较好地耐受的含活细菌的酸奶—且不出现通常与乳糖不耐症有关的症状。
因此，比仅含乳糖酶的制剂更可靠和/或效果更好的制剂将能满足目前许多乳糖不耐症患者的急切需求，也意味着乳糖不耐症营养选择方面相当大的改善和巨大的进步。
发明内容
本发明的一个目的是提供一种更有效的的制剂，用于治疗或预防乳糖不耐症和乳糖酶缺乏症的症状，以及即使患者患有乳糖不耐症，也能使他们能够食用含乳糖的食品。此外，本发明的一个目的是使乳糖不耐症患者能够食用目前因乳糖含量而不能食用的食品。此外，本发明的一个目的是提供一种能够预防、减轻或消除摄入含乳糖食品或含乳糖物质后出现的乳糖不耐症症状。
本发明人已经发现，乳糖吸收不良患者服用干燥形式的德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus)和嗜热链球菌(Steptococcusthermophilus)对于乳糖消化并不产生统计学上显著的改善。这一发现与上文讨论的WO2004/089290及Hove等的教导一致。
但是，本发明人还发现，当乳糖吸收不良患者服用含乳糖酶和德氏乳杆菌保加利亚亚种和/或嗜热链球菌的组合的非包衣干燥形式的组合物时，这种组合物与仅含乳糖酶的组合物相比，在改善乳糖消化方面更有效和更可靠得多，并且这种组合物能够在更广泛的患者中发挥其有益的性质。
因此，与前面讨论的先有技术，尤其是US6008027(Langner)和W02004/089290(Pharmachem)中所表明的相反，含乳糖酶和细菌德氏乳杆菌保加利亚亚种和/或嗜热链球菌的组合的非包衣干燥形式的非乳制品组合物可以提供一种有效改善乳糖吸收不良患者的乳糖消化的方法。
因此，本发明提供了一种有效制剂，其使乳糖不耐症患者能够食用含乳糖食品而不出现乳糖不耐症症状。
因此，在第一实施例(实施例1.1)中，本发明提供了一种用于治疗乳糖不耐症或因乳糖酶缺乏而引发的疾病的组合物，其中所述组合物是非乳制品固体剂型，包含：
(a)在pH值3-6的范围内具有活性的乳糖酶；以及
(b)一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物选自德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌；
其中乳糖酶(a)并非获自所述的一种或以上微生物(b)；以及其中所述的一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)是干燥形式。
在进一步的实施例中，本发明提供：
1.2根据实施例1.1使用的组合物，其中所述剂型不是肠溶包衣胶囊。
1.3根据实施例1.1使用的组合物，其中所述产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物并不带肠溶包衣。
1.4根据实施例1.1至1.3任一实施例使用的组合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值2-6范围、温度37℃、1小时后仍然具有至少30％的活性。
1.5根据实施例1.1至1.3任一实施例使用的组合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值3-6范围、温度37℃、1小时后仍然具有至少30％的活性。
1.6根据实施例1.1至1.3任一实施例使用的组合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值4-6范围、温度37℃、1小时后仍然具有至少30％的活性。
1.7根据实施例1.1至1.3任一实施例使用的组合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值3-6范围具有峰活性(peak activity)。
1.8根据实施例1.1至1.3任一实施例使用的组合物，其中所述乳糖酶(a)在pH值4-6范围具有峰活性。
1.9根据实施例1.1至1.8任一实施例使用的组合物，其中所述乳糖酶(a)来自微生物，并且所述组合物基本上不含获取该乳糖酶的微生物。
1.10根据实施例1.1至1.9任一实施例使用的组合物，所述组合物包含德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌这两种菌。
1.11根据实施例1.1至1.10任一实施例使用的组合物，其中所述固体剂型选自胶囊、片剂、糖衣药丸(dragees)、粉剂、丸剂和颗粒剂。
1.12根据实施例1.1至1.11任一实施例使用的组合物，其中所述组合物是单位剂型(unit dosage form)。
1.13根据实施例1.12使用的组合物，其中单位剂型选自胶囊、片剂、糖衣药丸和含粉剂、丸剂或颗粒剂的小袋。
1.14根据实施例1.13使用的组合物，其中所述单位剂型是胶囊。
1.15根据实施例1.1至1.14任一实施例使用的组合物，其中所述组合物包含2000-12000FCC单位的乳糖酶(a)。
1.16根据实施例1.15使用的组合物，其中所述组合物包含2000-6000FCC单位的乳糖酶(a)。
1.17根据实施例1.1至1.16任一实施例使用的组合物，其中所述组合物包含5000万至100亿菌落形成单位的保加利亚乳杆菌和5000万至100亿菌落形成单位的嗜热链球菌。
1.18根据实施例1.17使用的组合物，其中所述组合物包含1亿至20亿菌落形成单位的保加利亚乳杆菌和1亿至20亿菌落形成单位的嗜热链球菌。
1.19根据实施例1.1至1.18任一实施例使用的组合物，其中所述组合物基本上不含乳糖。
1.20根据实施例1.1至1.19任一实施例使用的组合物，其中所述保加利亚乳杆菌是德氏乳杆菌LB-VC18(Lactobacillus delbrueckii LB-VC18)(保藏号：DSM23320)。
1.21根据实施例1.1至1.20任一实施例使用的组合物，其中所述嗜热链球菌是嗜热链球菌ST-VC18(Streptococcus thermophilus ST-VC18)(保藏号：DSM23319)。
1.22根据实施例1.1至1.21任一实施例使用的组合物，其中所述乳糖酶(a)获自曲霉属(Aspergillus)菌种。
1.23根据实施例1.22使用的组合物，其中所述乳糖酶(a)获自米曲霉(Aspergillus oryzae)或黑曲霉(Aspergillus niger)。
1.24根据实施例1.23所述的组合物，其中所述乳糖酶(a)获自米曲霉。
1.25根据实施例1.1至1.24任一实施例使用的组合物，其中所述组合物不是含两种或多种添加中药提取物与外源性脂肪酶和外源性蛋白酶的组合的组合物。
1.26根据实施例1.1至1.25任一实施例使用的组合物，其中所述组合物包含(c)药学上或饮食上可接受的载体或赋形剂。
1.27以下组合的用途：
(a)在pH值3-6时具有活性的乳糖酶；
(b)一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物选自德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌；
其中乳糖酶(a)并非获自所述一种或以上微生物(b)；以及其中所述一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)是干燥形式；以及
其中所述乳糖酶(a)和产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)如实施例1.1至1.26中任一实施例所定义；
用于制造治疗乳糖不耐症或因乳糖酶缺乏引发的疾病的非乳制品固体剂型组合物。
1.28用于治疗乳糖不耐症或因乳糖酶缺乏引发的疾病的方法，其中所述方法包括给需要这种治疗的患者服用有效量的实施例1.1至1.26任一实施例中所定义的组合物。
1.29选自胶囊、片剂、糖衣药丸、粉剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型，其没有包覆肠溶包衣，并且其包含实施例1.1至1.26任一实施例中所定义的乳糖酶和一种或以上选自德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌的产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物；前提是所述组合物并非是含有两种或多种添加中草药提取物与外源性脂肪酶和外源性蛋白酶的组合的组合物。
1.30根据实施例1.29所述的固体剂型，其中所述固体剂型选自胶囊、片剂和糖衣药丸。
1.31根据实施例1.29所述的固体剂型，其中所述固体剂型选自粉剂、丸剂和颗粒剂，以及其中所述粉剂、丸剂和颗粒剂包含在小袋中。
1.32根据实施例1.30所述的固体剂型，其中所述剂型是胶囊。
1.33根据实施例1.30所述的固体剂型，其中所述剂型是片剂。
1.34根据实施例1.30所述的固体剂型，其中所述剂型是糖衣药丸。
具体实施方式
根据下述说明和实例，本发明的其它实施例和方面将变得明显。
本发明的主题是一种能够解决上文本申请介绍部分所述问题的制剂。所述制剂包含乳糖酶和微生物。所述微生物是乳酸菌，尤其优选是德氏乳杆菌保加利亚亚种和/或嗜热链球菌。本发明的乳糖酶指的是能够将乳糖转化(分解)为葡萄糖和半乳糖的酶。本发明的乳酸菌尤其是那些通过其自身的微生物乳糖酶，能够在人体或动物消化道内代谢乳糖和/或释放乳糖酶的微生物。本发明采用的微生物可优选为冻干或喷雾干燥(优选冻干)形式，以提供更长的保质期和良好的加工性。
以下任何时候提到保加利亚乳杆菌时，均指的是德氏乳杆菌保加利亚亚种。
本发明的制剂可以在食用后将食品或食品浆(food pulp)中的乳糖分解成葡萄糖和半乳糖。这意味着不再有乳糖提供给细菌代谢，所述细菌代谢以肠内发酵为特征。
因此，本发明的主题是一种制剂，所述制剂借助乳糖酶和微生物，降低人体内或动物体内乳糖的生物利用率，所述微生物优选乳酸菌，尤其优选保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌。
因此，本发明的主题也是一种制剂，其借助乳糖酶和微生物，减少人体内或动物体内或肠道内细菌可以利用的乳糖量，所述微生物优选乳酸菌，尤其优选保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌。
本发明的主题进一步是一种用于乳糖不耐症的制剂，所述制剂包含乳糖酶以及微生物，所述微生物优选乳酸菌，尤其优选保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌。
本发明进一步的主题是乳糖酶以及微生物在乳糖不耐症的情况中的用途，所述微生物优选乳酸菌，尤其优选保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌。
乳糖酶是一种能够将乳糖转化为葡萄糖和半乳糖的酶。虽然乳糖酶并不从小肠吸收，但是，葡萄糖和半乳糖是单糖，它们容易消化和快速吸收。目前用于口服用途的乳糖酶制剂中使用的乳糖酶是所谓的酸性乳糖酶(有时称为酸乳糖酶)，大多数是采用米曲霉生产的。在食品食用后，酸性乳糖酶在胃内的酸性环境中非常有效。在pH大约3–6时，酸性乳糖酶稳定且具有活性。在本申请意义上，术语“稳定”指的是在37℃和pH3-6下经历1小时后，酸性乳糖酶的活性仍然保留了至少30％。本申请中提到活性的30％指的是在规定的一小时期限后，按照Food Chemical Codex(《食品化学法典》)(FCC)第六版所述酸性乳糖酶的测定方法测试的该酶的残余活性。
在pH值超过6.5(小肠内即是如此)时，酸性乳糖酶稳定但不再非常有活性。因此，酸性乳糖酶在小肠内不再发挥出令人满意的效果。因此，目前，乳糖酶制剂必须包含在胃内将食用的食品中含有的乳糖量尽可能分解所必须的尽可能多的乳糖酶。人们还没有发现在低pH值时稳定且具有活性，并且在胃的酸性环境中和小肠内均有效的乳糖酶，商业上也无法提供这种乳糖酶。由于胃内滞留时间在很大程度上根据消耗的食品及消耗的食品的量而变化，因此，对于使用者来说，乳糖酶制剂的正确剂量常常是一个问题，因此，如上文所述，使用者对这些产品的效果通常并不满意。增加每剂量单位乳糖酶的活性有所帮助，但是，人们已经发现，效果及效果可靠性的增加并不与每剂量单位乳糖酶活性的增加成比例。由于酸性乳糖酶在空的胃中普遍存在的非常低的pH值(1-2.5)条件下快速失活，因此，摄入时间也非常关键。因此，如果使用者在进餐前过早(如10分钟前)空腹食用乳糖酶制剂，则该酶可能在食品摄入时已经不可逆地失去了活性，从而不再能够用于要求的乳糖分解，这样，在这种情况下，每剂量单位乳糖酶的活性没有起到作用。
某些乳酸菌包含一种在小肠内普遍存在的pH值条件下具有活性且稳定的乳糖酶。所述乳酸菌-乳糖酶被细菌外壳保护，至少部分(或在某种程度上)可以通过胃进入到小肠内，在小肠内可以产生两种有利效果。一方面，当细菌外壳被小肠内的消化液破坏时，微生物乳糖酶可以被释放出来，这样，在胃内未被酸性乳糖酶分解的乳糖可以被乳酸菌释放的这种乳糖酶分解。另一方面，保持完好的细菌可以代谢乳糖，并从而也进一步减少小肠内的乳糖量。某些乳糖不耐症患者对于发酵乳制品的耐受能力比未发酵乳制品更强，这一点部分可以归因于乳酸菌的乳糖酶含量。然而，大部分乳糖不耐症患者也无法毫无问题地食用发酵乳制品。在给不耐受乳糖的人服用乳酸菌的研究中，结果表明，他们在与乳糖消化有关的方面并不具有良好而可靠的效果。大量不同的菌株均显示出这种结果，以范围广泛的不同组合使用时也显示出这样的结果。因此，在乳糖不耐症的情况中使用只包含乳酸菌的制剂并没有什么意义(参见前文提到的Hove等的文章)。而为了对身体健康带来有利影响，目前人们常尝试向乳制品和其它食品中添加到达大肠时仍保持完好的乳酸菌，在本发明中，优选食用的乳酸菌尽可能多的在小肠中被破坏，这样，它们的微生物乳糖酶在小肠内被释放出来，从而可以用于乳糖分解。通过添加此类乳酸菌，可以增加乳糖酶制剂的有效性和/或可靠性。一方面，此类制剂能够在胃里分解乳糖(通过酸性乳糖酶)，另一方面，能够在小肠内分解胃内未分解的乳糖(通过乳酸菌-乳糖酶)。因此，通过添加乳酸菌，延长了制剂的效果，达到更大的有效性和/或效果可靠性，这是单纯增加每剂量单位乳糖酶活性无法达到的，或者至少是无法如此符合成本效益地达到。因此，除乳糖酶之外，向本发明制剂中添加在小肠内释放其自身活性足够的且稳定的乳糖酶和/或在小肠内代谢乳糖酶的此类微生物是非常有利的。人们已经发现，乳酸菌保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌尤其很好地适合这种应用，因为凭借保护微生物乳糖酶的完好无损的细菌壳，这些微生物绝大多数，至少部分，在胃内存活，但是，绝大多数，至少部分，无法完好无损地在小肠内存活，从而在相关程度上在小肠内释放出它们的微生物乳糖酶。以下乳酸菌也值得探讨，例如：德氏乳杆菌(Lactobacillus delbrueckii)(非保加利亚乳杆菌的亚种)、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus)、干酪乳杆菌(Lactobacillus casei)、副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)、短乳杆菌(lactobacillus brevis)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)、唾液乳杆菌(Lactobacillus salivarius)、罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus rheuteri)、乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)、乳酸片球菌(Pediococcos acidilacti)、乳双歧杆菌(Bifidobacterium lactis)、两歧双歧杆菌(Bifidobacterium bifidum)、短双歧杆菌(Bifidobacterium breve)、长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)、婴儿双岐杆菌(Bifidobacterium infantis)。
这类组合制剂可以以两种独立的剂量单位形式使用，如以两种独立的片剂或胶囊形式，其中一种包含乳糖酶，另一种包含乳酸菌。
本发明意义上的食品指的是2002年1月28日欧洲议会和理事会(EuropeanParliament and of the Council)第178/2002号条例(EC)意义上的食品。本发明意义上的食品包括，尤其是用于特定营养用途的食品、用于特殊医疗目的的食品、食品增补剂、膳食增补剂和食品添加剂。
本发明意义上的食品增补剂指的是2002年6月10日欧洲议会和理事会2002/46/EC指令意义上的食品增补剂。
本发明意义上用于特定营养用途的食品指的是2009年5月6日欧洲议会和理事会关于旨在用于特定营养用途的食品的2009/39/EC指令意义上的用于特定营养用途的食品。
本发明意义上的特殊医疗用途的食品指的是1999年3月25日委员会关于用于特殊医疗目的的食品的1999/21/EC指令意义上的用于特殊医疗目的的营养食品。
本发明提供用于医药，例如，作为药物组合物的乳糖酶和乳酸菌的组合，尤其是与保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌的组合。因此，本发明的主题还是一种用于医疗程序(尤其是用于治疗处理人体或动物体的程序)，由乳糖酶与保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌组合的产品，或者包含这些物质以及一种或以上其它活性成分的产品。
本发明的主题还是一种用于医药的组合物，其包含乳糖酶及一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物选自保加利亚乳杆菌、德氏乳杆菌、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、短乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、乳酸乳杆菌(Lactobacillus lactis)、乳酸片球菌、乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、长双歧杆菌、婴儿双岐杆菌和嗜热链球菌，据此，乳糖酶优选不源自前面提到的微生物。在本发明意义上，药物组合物是2004/27EC指令版本的2001/83EC指令意义上的产品。
根据本发明的另一方面，提供了一种包含乳糖酶和乳酸菌的组合，尤其是乳糖酶和保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌的组合的食品。此外，根据本发明，提供了一种包含其量能够有效地将乳糖转化为葡萄糖和半乳糖的乳糖酶及乳酸菌组合的食品，尤其是乳糖酶与保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌组合的食品。
还可以采用一种方法来生产食品，在所述方法中，将乳糖酶与保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌的组合添加到食品中，使乳糖酶和乳酸菌在食品食用后主要地(predominantly)开始发挥作用。此类食品的味道实际上与未处理的食品一样，并且，由于减少了食用后存在的乳糖的含量，因此，其适合乳糖不耐症患者使用。在本申请意义上，“主要地”指的是食品食用后酶和乳酸菌分解乳糖效果的至少50％被发挥出来。或者，在食品食用后，可以发挥(a)至少90％，(b)至少80％，(c)至少70％或(d)至少60％的效果。
根据本发明的另一方面，提供了一种包含乳糖酶和乳酸菌的组合的医疗器械，尤其是包含乳糖酶与保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌的组合的医疗器械。因此，本发明的主题还是一种医疗器械，所述医疗器械包含乳糖酶与乳酸菌，尤其是与保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌的组合，或者还包含一种或以上其它活性成分。
本专利申请意义上的医疗器械指的是2007/47/EC指令修订的93/42/EEC指令版本意义上的医疗器械。
本发明的各个方面将在下面进一步描述。只要下文提到制剂，其总是指的是食品、医疗器械或药物组合物。
在医疗-制药领域，尤其是在人体或动物乳糖不耐症方面，目前未见有人将乳糖酶，特别是酸性乳糖酶，更特别是获自曲霉菌属亚种(Aspergillus spp)的酸性乳糖酶，甚至更特别是获自米曲霉的酸性乳糖酶，与保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌组合使用。因此，本发明在此处的描述是这些物质的组合的首次医疗说明。
本发明的制剂可以在餐前、餐中或餐后口服，从而它们可以对食品浆中的乳糖发挥其分解作用。优选地，本发明的制剂在餐前、就餐期间或餐后即时服用。本发明的制剂可包含酶和乳酸菌，而不包含其它添加剂。不过，本发明的制剂优选进一步包含药学上可接受和/或食品上可接受的添加剂，如增量剂(extender)、粘结剂、稳定剂、防腐剂和调味剂等。此类添加剂是生产药物组合物、医疗器械、食品，用于特定营养用途食品、用于特殊医疗目的的食品、食品增补剂、膳食增补剂和食品添加剂中经常使用和众所周知的，本领域的专家知道多少用量的哪些添加剂适用于特定的表现形式。本发明制剂尤其优选包含添加剂磷酸氢钙、改性淀粉、微晶纤维素、麦芽糊精和/或膳食纤维(fibersol)。
本发明的制剂还可在食用前添加到食品中。它们甚至可在生产阶段添加到食品中，其目的是在食品食用后至少部分(但优选绝大多数)发挥其作用。例如，这可以通过微胶囊实现。采用这种方式，以尤其有利的方式降低了食品中可利用的乳糖含量。因此，含乳糖酶与保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌的组合的制剂优选在其进入人体或动物消化道之前，特别是进入胃或小肠之前，主要地不释放这些物质。因此，例如，本发明可用在奶和乳制品的生产中，所述奶制品如凝乳、酸奶、奶油、奶酪、布丁、乳饮料、混有奶的饮料和冰淇淋，以及用于生产，例如，巧克力和巧克力制品、焙烤制品(如饼干和蛋糕)、面包、糖果、含乳糖的饮料、含乳糖的酱(如奶油酱)和含乳糖的甜味剂。对于煮、烘烤或煎炸的菜肴，本发明的制剂可以，例如，在其冷却后混入其中或撒在这些菜肴上面。就奶和乳制品而言，根据本发明，它们可包含酸性乳糖酶及至少一种本申请列出的微生物，优选保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌，但并非嗜酸乳杆菌。
本发明的制剂还可添加到食品中，以在食用后对来源于其它食品的乳糖发挥其作用。这种情况的实例是在麦片中加入本发明的制剂，从而在食用与牛奶一起制备的麦片后，能够降低牛奶中的乳糖含量，而不会有损牛奶的味道。
本发明的主题还是除其它活性成分之外还包含乳糖酶与保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌的组合的制剂。
本发明可以配制为适合指定给药途径的任何形式。对于口服，本发明制剂优选配制成胶囊(有包衣或无包衣)、片剂(有包衣或无包衣)、糖衣药丸(有包衣或无包衣)、含有包衣或无包衣药丸、颗粒剂或微-或迷你片剂的胶囊；由有包衣或无包衣粉剂、丸剂、微-或迷你片剂压成的片剂。可以用于口服的还有包衣或非包衣胶囊(gel cap)(软明胶胶囊)，或液体形式，如溶液、滴剂、悬液或凝胶。本发明还可以采用干或湿口服补充剂的形式。本发明制剂配制为粉末尤其适合混合到食品中。粉末可撒到食物上或可以混到酱中或饮料中。如果作为散装粉末提供的制剂以单一剂量包装，如包装在单个袋中，或者以药剂计量器(dosingapparatus)的形式提供，则尤其适合。
本发明制剂尤其优选配制为口服的粉末或胶囊中的颗粒剂或丸剂，或片剂。
本发明制剂或组合物通常包含至少一种药学上可接受的或饮食上可接受的载体或赋形剂。
对于口服，活性成分可包含在可以接受的赋形剂和/或载体中。术语“可接受的载体”涉及将活性成分输送到其目标位置，并且不会对接受者、人或动物造成明显伤害的载体。然而，载体的准确形式并不重要。
例如，载体可以是装有活性成分的胶囊壳、小袋或基质。
相对于本发明制剂，载体和/或赋形剂的总量优选是组合物的5-99.9％重量，更优选是10-95％重量，甚至更优选是25-90％重量。
合适的赋形剂和/或载体包括麦芽糊精、碳酸钙、磷酸氢钙、磷酸三钙、微晶纤维素、右旋糖、米粉、硬脂酸镁、硬脂酸、交联羧甲基纤维素钠、羧基乙酸淀粉钠、交联聚维酮(crospovidone)、蔗糖、植物胶、乳糖、甲基纤维素、聚维酮(povidone)、羧甲基纤维素、玉米淀粉、改性淀粉、膳食纤维素、明胶、羟丙基甲基纤维素等(包括它们的混合物)。优选的载体包括碳酸钙、硬脂酸镁、麦芽糊精、磷酸氢钙、改性淀粉、微晶纤维素、膳食纤维素、明胶、羟丙基甲基纤维素及它们的混合物。采用常用方法，将各种成分与赋形剂和/或载体混合，形成要求的形式。根据本发明，用于口服的表现形式，如片剂或胶囊，可包覆耐低pH值的包衣或耐胃液的包衣。也可以使用不耐低pH值，但是在低pH值时会延缓释放出各种酶或各种乳酸菌的包衣。还可以将本发明的制剂制成包衣(参见上文)丸剂、颗粒剂或微-或迷你片剂，其可装到非包衣胶囊内或可压制成非包衣片剂。合适的包衣有，例如，醋酸邻苯二甲酸纤维素(cellulose acetate phthalate)、纤维素衍生物、虫胶、聚乙烯吡咯烷酮衍生物、丙烯酸、聚丙烯酸衍生物和聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)，如Eudragit(来自GmbH，Darmstadt)，尤其是Eudragit FS30D和Eudragit L30D-55。通过在包衣制剂中加入，例如，氢氧化钠溶液，还可以影响这种包衣制剂的耐pH性能。有关配方和给予方法进一步的详细情况可参见第21版的《(Remington:TheScience&Practice of Pharmacy(雷明顿：制药科学与实践)》，2005年由美国Lippincott,Williams&Wilkins,Baltimore出版，以及Bauer教授的《Lehrbuch der Pharmazeutischen Technologie(医药科技教材)》，18版，2006年由Wissenschaftliche Verlagsgesellschaft(ISBN3804-72222-9)出版，以上文件通过引用结合到本文中。
虽然根据本发明，此类乳酸菌优选通过在胃内存活而尽可能保持细菌壳完好的方式使用，但是，对乳酸菌施加耐胃液包衣是有利的，或者将它们配制为，例如，带耐胃液的包衣的胶囊、糖衣药丸、片剂、丸剂、颗粒剂、或晶体是有利的，这样，尽可能使大部分细菌到达小肠或至少到达十二指肠(小肠的上部)。乳酸菌还可以包含在，例如，带耐胃液包衣的丸剂、颗粒剂中，或者耐胃液包衣可以应用到乳酸菌粉末(例如，采用喷雾程序)上。丸剂、颗粒剂或粉末可以装到无包衣的胶囊中。这些还可以包含预期在胃内释放的乳糖酶。防止乳酸菌受胃酸影响的包衣非常有好处，尤其是如果使用了乳酸菌的情况下，如果不采用这种包衣，则其细菌壳将在胃内被破坏，这样，由于例如胃内pH值低，它们的微生物乳糖酶在胃内将会失活。
用于本发明的其它合适的药学上可以接受的和/或饮食上可以接受的载体或赋形剂包括水、矿物油、乙二醇、丙二醇、羊毛脂、硬脂酸甘油酯、失水山梨醇硬脂酸酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、丙酮、甘油、卵磷酯、胆酸钠或乙醇钠，但是并不限于这些载体或赋形剂。
用于本发明的组合物还可以包含至少一种共乳化剂，所述共乳化剂包括氧乙烯化失水山梨醇单硬脂酸酯、脂肪醇，如硬脂醇或十六醇，或脂肪酸和多元醇的酯，如硬脂酸甘油酯，但并不限于这些。
本发明采用的制剂优选以稳定化的形式提供。一般说来，本发明可以采用的稳定化方法和程序包括本领域已知的稳定化学品或生物材料的任何方法和所有方法，包括，例如，加入化学试剂、基于温度调节的方法；基于辐射的方法或以上方法的组合。除其它之外，本发明可采用的化学试剂包括防腐剂、酸、碱、盐、抗氧化剂、增稠剂、乳化剂、胶粘剂(gelatiniser)以及它们的混合物。
酸性乳糖酶是商业上可以获得的(如日本的Amano和荷兰的DSM)，并且通常借助微生物米曲霉以微生物方式进行制备。保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌也是商业上可以获得的(例如，丹麦的Danisco或丹麦的Christian Hansen)。然而，本发明并不限于目前商业上可以提供的酸性乳糖酶，而是一般涉及到各种能够与乳酸菌一起将乳糖(专门地或非专门地)转化为葡糖糖和半乳糖的酶，所述乳酸菌能够在小肠内降解乳糖，即，通过释放乳糖酶或通过乳糖的细胞内代谢。
根据本发明，乳糖酶的活性以FCC单位定义(《食品化学法典(Food ChemicalCodex)》单位)。在37℃、pH4.5时，在《食品化学法典》第六版描述的条件下，一个酶单位每分钟释放一微摩尔邻硝基苯酚(参见法典中完整的测量说明、测试描述、活性计算)。
采用根据此定义测定的酶活性时，本发明的制剂每剂量单位乳糖酶应包含500–50,000FCC单位，优选包含2000-20,000FCC单位，以及尤其优选包含3000-12,000FCC单位。
如果本发明制剂中包含的乳酸菌的量在下面标明(以菌落形成单位表示，简称为cfu)，它们指的是本发明制剂保质期结束时仍然存活的乳酸菌的量(单位cfu)。值得注意的是，包含乳酸菌的制剂优选储存在干燥阴凉的地方。因此，为了使乳酸菌存活足够长的时间，将本发明的制剂储存在气密，以及优选不渗水-汽，配备干燥剂(如在盖中)(如硅胶或分子筛)的容器(如玻璃或铝制容器)中是有利的。
乳酸菌的量以cfu(菌落形成单位)表示。本发明的制剂每种乳酸菌菌株应包含1000万至2000亿(10亿＝1000百万)cfu，优选5000万至100亿cfu，以及尤其优选1亿至20亿cfu(如1亿至10亿cfu)。
若除乳糖酶之外，组合制剂包含保加利亚乳杆菌和/或嗜热链球菌，则一个剂量单位应该包含1000万至2000亿cfu保加利亚乳杆菌，优选5000万至100亿cfu保加利亚乳杆菌，以及尤其优选1亿至20亿cfu(如5亿至20亿cfu)保加利亚乳杆菌。除保加利亚乳杆菌之外，本发明制剂还可包含嗜热链球菌，或以嗜热链球菌代替保加利亚乳杆菌，其中本发明制剂每剂量单位应包含1000万至2000亿cfu嗜热链球菌，优选5000万至100亿cfu嗜热链球菌，以及尤其优选1亿至20亿cfu(如5亿至20亿cfu)嗜热链球菌。
已证明，本发明制剂每剂量单位包含2000-12000FCC单位(例如2000-6000FCC单位)酸性乳糖酶、1亿-100亿cfu(如1亿至20亿cfu)保加利亚乳杆菌和1亿-100亿cfu(如1亿至20亿cfu)嗜热链球菌尤其有利。如果酸性乳糖酶与两种菌株德氏乳杆菌LB-VC18(保藏号：DSM23320，保藏日期：2010年2月11日)和嗜热链球菌ST-VC18(保藏号：DSM23319，保藏日期：2010年2月11日)结合使用，可以获得尤其有利的结果。这两种菌株保藏在德国Braunschweig的Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH(德国微生物菌种保藏中心)(German Collection of Microorganisms and Cell Cultures)。
上文提到的较宽的剂量范围可以由本发明的制剂可以应用于范围宽广的不同严重程度和较温和的乳糖代谢障碍这一事实来解释。人和/或动物患者对一定乳糖负荷有不同程度的反应。除此之外，不同的剂量还归因于这一事实：根据各自消耗的食品，供给身体的乳糖量变化非常大。
本发明的制剂每剂量单位可包含，例如，500-50,000FCC单位(例如500-30,000FCC单位)乳糖酶和1000万cfu–2000亿cfu保加利亚乳杆菌和/或1000万cfu–2000亿cfu嗜热链球菌。代替这两种微生物或除这些微生物的一种或两种之外，本发明的制剂在每一情况下还可包含1000万cfu–2000亿cfu的以下乳酸菌：德氏乳杆菌(非保加利亚乳杆菌亚种)、嗜酸乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、干酪乳杆菌、副干酪乳杆菌、短乳杆菌、植物乳杆菌、唾液乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、乳酸乳球菌、乳酸片球菌、乳双歧杆菌、两歧双歧杆菌、短双歧杆菌、长双歧杆菌、婴儿双岐杆菌。
除此之外，合适的添加剂可以以要求的量使用。
本发明可以用于医疗目的和非医疗目的，如作为药物组合物、医疗器械或食品。
本发明内容中的术语“治疗”应在广泛意义上理解。在本申请的意义上，治疗不仅指的是为疾病提供治疗或治疗疾病，而且还包括非常普遍地使用本发明的制剂或在人或动物乳糖不耐症和乳糖酶缺乏症方面(因为几乎所有哺乳动物消化乳糖的能力在母乳喂养停止后均下降)使用本发明的制剂。因此，在本申请意义上，治疗包括尤其是使用本发明的制剂，或使用本发明的制剂以预防、消除、减缓、减轻由于乳糖或含乳糖食品摄入或通过其它物质(如药物组合物)在人体或动物消化道内释放乳糖而引起的(a)所有类型和严重程度的症状，(b)所有类型和严重程度的不适以及(c)所有形式的健康受损和疾病，或作为以上几种情况的预防措施。此外，在本申请意义上，治疗包括消除、减缓、清除、减轻、预防措施对抗与摄入乳糖或含乳糖食品有关或与人体或动物消化道内其它物质(如药物组合物)释放的乳糖有关的腹胀、胀气、胃痛、腹部绞痛、急胃痛、腹泻、水样腹泻、肠音、腹部痉挛、打嗝、恶心、呕吐、气胀、肠内微生物不平衡或肠内气体产生量增加，或以上情况的预防。此外，在本申请意义上，治疗包括消除、减缓、清除、减轻、预防措施对抗与摄入乳糖或含乳糖食品有关或与人体或动物消化道内其它物质(如药物组合物)释放乳糖有关或与乳糖消化不充分或乳糖吸收不良有关的任何类型的抑郁、头痛、偏头痛、湿疹、皮疹、食欲不振和体重减轻，以及以上情况的预防。此外，本发明意义上的治疗包括减轻乳糖在人体或动物体内的生物利用率，以及减少人体或动物体内或人体或动物体内肠道细菌可以利用的乳糖量。
在本申请中，术语“治疗”包括预防和治疗。
实例
现在，将对本发明进行说明，但是，本发明并不限于以下提到的这些实例。
实例1
胶囊组合物
通过将来自米曲霉的乳糖酶与冻干的保加利亚乳杆菌和嗜热链球菌混合而制备以下胶囊组合物。
胶囊组合物A–规格1胶囊
在每个获自Capsugel BVBA,Bornem,Belgium的规格1明胶胶囊(体积0.5ml)内填充70mg乳糖酶(乳糖酶的活性是50,000FCC/g)、40mg冻干嗜热链球菌(300亿cfu/g)、30mg冻干保加利亚乳杆菌(500亿cfu/g)和200mg磷酸氢钙。
优选的嗜热链球菌菌株是嗜热链球菌ST-VC18(保藏号：DSM23319)，优选的保加利亚乳杆菌菌株是德氏乳杆菌LB-VC18(保藏号：DSM23320)。
胶囊组合物B–规格3胶囊
在每个获自Capsugel BVBA,Bornem,Belgium的规格3明胶胶囊内(体积0.3ml)填充70mg乳糖酶(乳糖酶的活性是50,000FCC/g)、30mg嗜热链球菌(300亿cfu/g)、20mg保加利亚乳杆菌(500亿cfu/g)和100mg磷酸氢钙。
胶囊组合物C–规格0胶囊
在每个获自Capsugel BVBA,Bornem,Belgium的规格2明胶胶囊(体积0.68ml)内填充150mg乳糖酶(乳糖酶的活性是50,000FCC/g)、100mg嗜热链球菌(300亿cfu/g)、50mg保加利亚乳杆菌(500亿cfu/g)和250mg磷酸氢钙。
胶囊组合物D–规格2胶囊
在每个获自Capsugel BVBA,Bornem,Belgium的规格3明胶胶囊(体积0.37ml)内填充100mg乳糖酶(乳糖酶的活性是100,000FCC/g)、50mg嗜热链球菌(300亿cfu/g)、30mg保加利亚乳杆菌(500亿cfu/g)和100mg磷酸氢钙。
实例2
乳糖酶和乳酸菌的组合对乳糖吸收不良者乳糖消化的影响研究
开展了乳糖酶、冻干乳酸菌以及乳糖酶和乳酸菌的组合对乳糖吸收不良者乳糖消化影响的对比研究。
此项研究由安慰剂对照的、随机的、双盲交叉研究组成，涉及24名乳糖吸收不良患者。一开始，研究招募了30名受试者，但是，发现其中6名不是乳糖吸收不良患者，因此，在结果分析中排除了这6名受试者的结果。
此项研究包括进入体检(entry examination)和五个实验日，每个实验日间隔两周的4个清洗期(wash-out period)。在此项研究期间，要求参与者不改变饮食习惯，并且避免服用维生素、矿物质和其它增补剂。在每个实验日的开始，在禁食过夜后，采集每个受试者的第一呼吸样品。然后，每名受试者按随机的顺序摄入五种测试制备物(preparation)中的一种制备物。
这些测试制备物以外观相同的胶囊提供，其中研究参与者每一试验餐服用一个胶囊以及喝150ml牛奶，牛奶中加入了5g乳糖，得到含有大约12.5g乳糖的乳糖强化奶。这五种测试制备物的组合物如下：
制备物(a)：含1×109cfu嗜热链球菌以及1×109cfu德氏乳杆菌保加利亚亚种的胶囊。
制备物(b)：含来自米曲霉的3300FCC酸性乳糖酶
制备物(c)：含来自米曲霉的9000FCC酸性乳糖酶的胶囊
制备物(d)：含3300FCC酸性乳糖酶以及1×109cfu嗜热链球菌和1×109cfu德氏乳杆菌保加利亚亚种的胶囊(测试制备物(a))
制备物(e)：磷酸氢钙(安慰剂)。
测试制备物(a)和(d)中的乳酸菌是实例1及前文24页描述的菌株ST-VC18和LB-VC18。测试制备物(b)是Lactrase 3300(Pro Natura Gesellschaft fur gesundeErnahrung mbH,Bad Vilbel,Germany)，测试制备物(c)是Lactrase Plus 9000(ProNatura Gesellschaft fur gesunde Ernahrung mbH,Bad Vilbel,Germany)，测试制备物(d)是Lactrase 3300(Pro Natura)，其中加入了乳酸菌。
研究参与者的随机化以及测试制备物的包装和编码由未参加此项研究的对象执行。
给予的乳糖剂量(12.5g)低于典型的乳糖吸收不良测试(50g)，但是更接近正常摄入食品的乳糖含量。在典型的乳糖吸收不良测试中(采用50g乳糖进行)，H2峰浓度达到20ppm或更高则被视为乳糖吸收不良的证明。然而，因为本研究中给予的乳糖剂量较少，所以采用较低的阈值来确定参与者是否为乳糖吸收不良者。因此，采用安慰剂时，参与者H2峰浓度达到13ppm或更高的则视为乳糖吸收不良者，获自这些参与者的结果被纳入此项研究中。
测试制备物对乳糖消化的影响采用H2-呼吸测试进行测量，此试验采用QuinTronInstruments,Milwaukee，WI 53215,USA的MicroLyzer Model 12i进行。当碳水化合物被结肠内的细菌发酵时，大约90％的群体(population)会放出氢气。因此，呼出气体中的氢气含量提供了指示结肠中发酵乳糖量的良好指标，并且也是小肠中乳糖酶缺乏的良好指标。
采集3小时的呼吸样品。选择H2峰浓度作为乳糖消化的参数。每个受试者及五种制备物中的每一种制备物的H2峰浓度如下表所示。
此项研究结果的统计分析表明，在H2最大值方面，在饮食之间存在显著的整体效应(弗里德曼检验(Friedmann-Test)，p＝0.001)。多重比较(Wilcoxon)表明，含3300FCC单位乳糖酶的制备物(b)和安慰剂制备物(e)之间、含9000FCC单位乳糖酶的制备物(c)和安慰剂制备物(e)之间、含3300FCC乳糖酶及20亿cfu乳酸菌的组合制备物(d)和安慰剂制备物(e)之间存在显著差异。此外，H2最大值的平均变化(分散性)，即制备物(d)的25/75％-四分位面积(interquartiles area)仅为其它测试制备物(即制备物(a)、(b)和(c))平均变化(mean variation)的一半那么大。
结果表明，含活性成分的所有四种制备物；即制备物(a)(仅细菌)、制备物(b)(3300FCC)、制备物(c)(9000FCC)和制备物(d)(组合制备物)降低了至少某些受试者的H2-呼吸浓度，但是，仅3300FCC制备物(制备物(b))、9000FCC制备物(制备物(c))和组合制备物(制备物(d))具有显著的影响。组合制备物(d)甚至比含9000FCC的制备物(c)更有效，而且H2-呼出值的平均变化明显较低。数据分析表明，较少接受组合制备物(d)的参与者享受到很少的有益效果或没有享受任何有益效果。因此，组合制备物(d)的优点不仅是其乳糖消化能力更强，而且其对参与者有效的比例更大。因此，可以得出以下结论：在乳糖吸收不良者中，受益于组合制备物(d)乳糖消化效果的人比受益于单独的乳酸菌制备物(a)和乳糖酶制备物(b)和(c)的乳糖消化效果的人更多。
实例3
通过采用嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌与乳糖一起温育(incubation)对乳糖转 换率(turnover)进行的研究
在此项研究中，对冻干的和重悬的嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌细菌培养物分解乳糖的程度进行了研究。
采用的嗜热链球菌菌株是嗜热链球菌ST-VC18(保藏号：DSM23319)，采用的保加利亚乳杆菌菌株是德氏乳杆菌LB-VC18(保藏号：DSM23320)。
将两种培养物的冻干物重悬于pH7.3的磷酸盐缓冲液中，并以基于菌落形成单位(cfu)1:1的两种细菌混合。此外，对这些细菌制备物的乳糖酶活性在与胃类似的酸性环境(模拟胃液＝SGF)中是否稳定进行了研究。在所有情况下，在来自含活性胰酶的猪胰腺的胰酶(Kreon胶囊，含符合欧洲药典的10000单位脂肪酶、8000单位淀粉酶和600单位胰蛋白酶以及十二烷基硫酸钠)以及清洗剂(detergent)存在下，模拟胆汁活性(模拟肠液＝SIF)，测试乳糖的裂解。采用葡萄糖氧化酶试验经酶法测定葡萄糖量作为乳糖转换的测量。葡萄糖氧化酶试验按1996年Sigma Aldrich Chem Co.的Data sheet glucose oxidase assay(葡萄糖氧化酶试验数据表)所描述和所提到的使用。
将冻干细菌(1mg/ml)重悬于1ml磷酸盐缓冲液(0.1mol/l)中。加入浓度为2个胶囊每升的乳糖(10mmol/l)和Kreon(推荐每餐摄入1-2个胶囊)，将悬液温育10分钟和30分钟。在此实验中，保加利亚乳杆菌温育物在30分钟后放出1.7mmol/l葡萄糖，嗜热链球菌温育物产生2.8mmol/l葡萄糖，表明转换率分别是17％和28％。
为了测试乳糖酶活性的酸稳定性，采用pH4.0的模拟胃液与重悬的冻干物(1mg/ml细菌冻干物/毫升悬液)一起温育10分钟、30分钟和60分钟。悬液通过加入磷酸盐缓冲液中和，使pH达到大约7.0，然后加入乳糖(10mmol/l)和Kreon，按照上面的描述确定乳糖酶的活性(细菌悬液与乳糖温育30分钟，即相同条件)。
30分钟后，乳杆菌属悬液放出2.0–2.5mmol/l葡萄糖，在此期间以后，嗜热链球菌悬液放出3-3.5mmol/l葡萄糖。用模拟胃液温育10分钟、30分钟或60分钟的样品之间未见到差别。
这个实验表明，在重建的胃环境中，两种制备物中乳糖酶的活性是稳定的。
在第三个实验中，嗜热链球菌和保加利亚乳杆菌的冻干物以1:1的基础混合(基于菌落形成单位数)。为了测量转换率，将1mg嗜热链球菌和0.6mg乳杆菌细菌重悬于1ml磷酸盐缓冲液中，将所得混合物与模拟肠液一起温育。在采用10mmol/l乳糖酶温育此混合物30分钟后，检测到3.1mmol葡萄糖。
在确定乳糖酶之前，将同一混合物与模拟胃液温育30分钟。在中和及采用10mmol/l乳糖在模拟肠液中温育30分钟后，发现葡萄糖的浓度是3.15mmol/l，从而表明这种混合物对酸性条件的稳定性。
实验表明了冻干细菌中存在乳糖酶活性。这种乳糖酶活性是稳定的且在模拟肠液中具有活性，即使在在SIF中测试前经历过模拟胃液。从这些实验可以得出结论：通过摄入这两种细菌组合或通过摄入每种细菌自身，都可以实现小肠中乳糖的体内水解，并且单独使用或组合使用时，各种细菌的活性并没有显著差异。
以上实例中提供的数据表明，与仅含乳糖酶的组合物或仅含细菌的组合物相比，酸性乳糖酶与细菌嗜热链球菌和/或保加利亚乳杆菌的组合提供了在乳糖吸收不良者乳糖消化方面更有效和更可靠的改进。此外，与前文讨论的先有技术相反的是，可以采用干燥形式的细菌，以及为了实现要求的疗效，细菌不必带肠溶包衣。

Claims (22)

1.一种组合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗乳糖不耐症或因乳糖酶缺乏引起的疾病，其中所述组合物是非乳制品固体剂型，包含：
(a)在pH值3-6时是稳定的且具有活性的乳糖酶；术语稳定是指在37℃和pH值3-6下经历1小时后，乳糖酶(a)的活性仍然保留至少30％；及
(b)一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物选自德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus)和嗜热链球菌(Steptococcusthermophilus)；
其中所述乳糖酶(a)并非获自所述的一种或以上的微生物(b)；其中所述的一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)是干燥形式。
2.一种组合物在制备药物中的用途，该药物用于治疗乳糖不耐症或因乳糖酶缺乏引起的疾病，其中所述组合物是一胶囊，包含：
(a)2000-12000FCC酶单位的乳糖酶，所述乳糖酶获自曲霉属菌种，在pH值3-6时是稳定的且具有活性；术语稳定是指在37℃和pH值3-6下经历1小时后，乳糖酶(a)的活性仍然保留至少30％；及
(b)一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物选自德氏乳杆菌保加利亚亚种(Lactobacillus delbrueckii ssp bulgaricus)和嗜热链球菌(Steptococcusthermophilus)；
其中所述乳糖酶(a)并非获自所述的一种或以上的微生物(b)；其中所述的一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物(b)是干燥形式；以及其中所述胶囊不是肠溶包衣胶囊。
3.根据权利要求1所述的组合物在制备药物中的用途，其中所述剂型不是肠溶包衣胶囊。
4.根据权利要求1所述的组合物在制备药物中的用途，其中所述产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物并不带肠溶包衣。
5.根据权利要求1、3或4任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述乳糖酶(a)在pH值3-6的范围内具有峰活性。
6.根据权利要求1、3至5任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述乳糖酶(a)获自微生物，其中所述组合物基本上不含获得该乳糖酶的微生物。
7.根据权利要求1至6任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述组合物包含德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌这两种细菌。
8.根据权利要求1、3至7任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述固体剂型选自胶囊、片剂、糖衣药丸、粉剂、丸剂和颗粒剂。
9.根据权利要求1、3至8任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述组合物是单位剂型。
10.根据权利要求9使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述单位剂型选自胶囊、片剂和糖衣药丸。
11.根据权利要求10使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述单位剂型是胶囊。
12.根据权利要求1、3至11任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述组合物包含2000-12000FCC酶单位的乳糖酶(a)。
13.根据权利要求1至12任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述组合物包含5000万至100亿菌落形成单位的保加利亚乳杆菌和5000万至100亿菌落形成单位的嗜热链球菌。
14.根据权利要求1至13任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述组合物基本上不含乳糖。
15.根据权利要求1至14任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述保加利亚乳杆菌是德氏乳杆菌LB-VC18(保藏号：DSM23320)。
16.根据权利要求1至15任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述嗜热链球菌是嗜热链球菌ST-VC18(保藏号：DSM23319)。
17.根据权利要求1、3至16任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述乳糖酶(a)获自曲霉属菌种。
18.根据权利要求2或17使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述曲霉属菌种是米曲霉。
19.根据权利要求1至18任一项使用的组合物在制备药物中的用途，其中所述组合物不是含两种或多种添加中药提取物与外源性脂肪酶和外源性蛋白酶的组合的组合物。
20.根据权利要求1至19任一项所述的组合物在制备药物中的用途，其中所述组合物包含：
(c)药学上或饮食上可以接受的载体或赋形剂。
21.选自胶囊、片剂、糖衣药丸、粉剂、丸剂和颗粒剂的固体剂型，所述固体剂型没有包覆肠溶包衣且包含乳糖酶和如权利要求1至20任一项定义的一种或以上产乳糖酶和/或含乳糖酶的微生物，所述微生物选自德氏乳杆菌保加利亚亚种和嗜热链球菌；前提是所述组合物不是含有两种或多种添加中草药提取物与外源性脂肪酶和外源性蛋白酶的组合的组合物。
22.根据权利要求21所述的固体剂型，其中所述固体剂型选自胶囊、片剂和糖衣药丸。
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