CN107349199A

CN107349199A - 榴菌素类化合物的医药用途

Info

Publication number: CN107349199A
Application number: CN201710583722.8A
Authority: CN
Inventors: 郑智慧; 任晓; 张雪莲; 郑海洲; 路新华; 朱京童; 马瑛; 丁彦博; 穆云龙; 高健
Original assignee: NCPC New Drug Research and Development Co Ltd
Current assignee: NCPC New Drug Research and Development Co Ltd
Priority date: 2017-07-18
Filing date: 2017-07-18
Publication date: 2017-11-17

Abstract

本发明属于药物化学技术领域，具体地说涉及榴菌素类化合物的医药用途。该类化合物用于预防或治疗由IDO和/或TDO引起的色氨酸代谢相关病理学特征的疾病，包括但不限于肿瘤免疫逃逸、病毒感染性疾病、神经系统病症、精神疾病或心血管疾病等。

Description

榴菌素类化合物的医药用途

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，具体地说涉及榴菌素类化合物的医药用途。

背景技术

含血红素蛋白具有不同的功能，其中包括氧的运输、存储、以及单电子转移激活等。吲哚胺2，3双加氧酶（IDO）和色氨酸2，3-双加氧酶（TDO）都属于含血红素蛋白家族（Sedlmayr. et al, Frontiers in Immunology 2014;5:230）。TDO是最先发现的，于1930年左右，TDO通常被认为只限于在哺乳动物的肝脏中表达，但研究证实它即存在于真核生物中也存在于原核生物中。IDO在1967年被发现的，是从兔子的肠中分离出来的，研究证实IDO也存在于很多其它的真核生物中（Ball HJ. et al, Front Immunol 2014;5:485）。

TDO和IDO的活性功能是催化色氨酸氧化生成甲酰犬尿氨酸。TDO和IDO能通过激活氧分子，催化并将其插入到色氨酸中，最终生成甲酰犬尿氨酸。这一反应是犬尿氨酸代谢途径的第一步和限速反应步，因此，TDO和IDO都能通过催化反应消耗色氨酸，并生成犬尿氨酸代谢途径的代谢产物。色氨酸，对于哺乳动物而言，是重要的氨基酸，它是通过饮食摄取，然后通过犬尿氨酸代谢途径被代谢。由于色氨酸可以用于合成蛋白质和神经化学物质5-羟色胺，因此TDO和IDO能通过调控犬尿氨酸代谢途径来调控色氨酸水平，从而抑制细胞增殖和调控5-羟色胺的合成。另外，犬尿氨酸代谢途径的代谢产物还能够为NAD⁺提供来源，TDO和IDO也能通过调控犬尿氨酸代谢途径影响和调控NAD⁺水平。因此，TDO和IDO被认为在肿瘤、免疫、和神经系统等多种疾病中都具有重要的生物活性功能。特别要指出的是，尽管IDO和TDO催化的是同一个反应，但两个酶的序列相似性很低，结构也不尽相同（Badawy AbdullaA-B. et al, Bioscience Reports 2015;35:e00261）。

在肿瘤性疾病中，TDO和IDO能够通过控制色氨酸消耗来调节色氨酸水平，从而抑制T细胞的增殖和降低T细胞对肿瘤细胞免疫响应。研究表明，在人的肿瘤细胞中，IDO能经由mTOR和GCN2激酶途径控制色氨酸的消耗从而抑制T细胞的增殖，也能经由GCN2激酶途径和犬尿氨酸激活AhR的途径生成Treg细胞从而降低肿瘤细胞的免疫响应（Munn DH. Et al,Trends in immunology 2013;34:137-43）。TDO在很多人的肿瘤细胞中也有表达，例如，TDO在神经胶质瘤中能通过激活AhR从而降低肿瘤的免疫响应（Opitz CA. et al, Nature2011;478:197-203）。因此，TDO和IDO被认为是肿瘤免疫抑制的重要作用靶点。

在感染性疾病中，IDO能够通过降低色氨酸水平从而减缓宿主自身的免疫保护，在细菌感染和病毒感染中起到重要作用（Divanovic S. et al, The Journal ofinfectious diseases 2012;205:152-61）。动物实验发现，在感染MuL病毒的老鼠模型中，IDO为高表达，并且在试验中可以通过降低IDO活性来控制病毒复制，进而提高患病老鼠的生存率。在由结核和流感病毒引起呼吸道的感染小鼠模型中，IDO也通过提高Interleukin-10水平促进病原体导致的肺炎作用（van der Sluijs KF. et al, Journal ofInfectious Diseases 2006;193:214-22）。另外，在HIV感染初始阶段，IDO通过肠黏膜上高表达从而促进Treg细胞的形成进而减弱TH17的保护性响应并促进了HIV病毒的进一步感染。（Favre D. et al, Science translational medicine 2010;2:32ra6-ra6）。

在精神疾病中和神经系统疾病中，由于色氨酸5-羟色胺对精神疾病的病理分子机制有调节作用，因此IDO与精神性疾病密切相关，如精神失常，焦虑、抑郁症、心理障碍等。另外，犬尿氨酸代谢途径中产生的其它代谢产物，如犬尿烯酸、羟基犬尿氨酸和喹啉酸，也是刺激神经的作用因子，并与很多炎症相关神经系统疾病的病理生理学有关（Kanai M. etal, Molecular Brain 2009;2:8）。阿兹海默病（AD）、亨廷顿病（HD）和帕金森病（PD）都与TDO和IDO密切相关，其中IDO被研究的最多，被认为是阿兹海默和亨廷顿病的治疗靶点，TDO后来也被认为是亨廷顿病的潜在研究靶点。在阿兹海默病的动物实验中的研究发现，在APP/PS1老鼠模型中，静脉注射IDO抑制剂能保护神经元的流失，阻止淀粉样蛋白斑块的形成，提高认知能力。

在心血管疾病中，由于IDO与血管生物学的很多领域有关，因此研究发现，由内皮上IDO作用产生的犬尿氨酸能作为血管松弛因子起到血管扩张作用，并引起脓毒性休克模型小鼠的低血压，而IDO的抑制剂却通过提高炎症小鼠的血压，提高脓毒性休克模型小鼠存活率（Wang Y. et al, Nature medicine 2010;16:279-85）。小鼠实验证实，通过在动脉粥样硬化的病灶上诱导IDO，能破坏omega-3脂肪酸对小鼠动脉粥样硬化病灶的治疗作用（Nakajima K, et al, Arteriosclerosis, thrombosis and vascular biology 2011;31:1963-1972）。

目前，以IDO和/或TDO为靶点的高效抑制剂已经成为近年来药物开发的研究热点。其中IDO抑制剂在临床前和临床研究中进展很快，IDO抑制剂1- methyl-D-tryptophan，也被称为indoximod，已经检测其在肿瘤疾病上的疗效与安全性。另外，同时进行的还有第二代IDO抑制剂口服药，INCB024360 和NLG919。其它的IDO抑制剂还包括1-methyl-L-tryptophan、Methylthiohydantoin tryptophan、Brassinin、Annulin B及其衍生物以及Exiguamine A及其衍生物等，这些IDO抑制剂也均在临床研究中有一定的进展（VacchelliE. et al, Oncoimmunology 2014;3:e957994）。

发明内容

本发明发现了一类具有下式结构的新型IDO和TDO抑制剂，本发明人经研究发现，下式结构化合物在分子和细胞水平均能良好的抑制IDO和TDO的活性，并完成其制备和医药病症方面的研究，因此完成本发明。

本发明提供下式化合物

I

R为H、或，

II

R1为H、或，

R2为H或 –OH，在制备预防、治疗或减缓IDO和/或TDO引起的的色氨酸代谢相关的病理学特征的疾病中的药物中的用途。本所发明提供化合物其同分异构形式、其结构类似物、其药物可接受的盐，在制备预防、治疗或减缓IDO和/或TDO为靶点的色氨酸代谢相关的病理学特征的疾病中的药物中的用途。

本发明结构式I代表的化合物，当R为H时，简称为化合物A；当R为时，简称为化合物B；当R为时，简称为化合物C。

本发明结构式II代表的化合物，当R1、R2均为H时，简称为化合物D；当R2为H、R1为简称为化合物E；当R1为H、R2为-OH时，简称为化合物F。

本发明还提供药物组合物，其中包含药用载体和一种或多种本发明化合物、其同分异构形式、其结构类似物、其药物可接受的盐。

本发明提供化合物其同分异构形式、其结构类似物、其药物可接受的盐可用于治疗和/或预防多种与IDO/TDO活性抑制剂相关的疾病或病症。

本发明提供化合物、其同分异构形式、其结构类似物、其药物可接受的盐可单独使用或与一种或多种其它药剂组合使用。

本发明所述用途，其中所述疾病为肿瘤免疫逃逸、病毒引起的感染性疾病、神经系统疾病、精神疾病或心血管疾病，包括但不限于上述疾病。

本发明所述用途，其中肿瘤免疫逃逸为脑癌、皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、血癌、肺癌、肾癌、肝癌、骨癌、头颈部癌、淋巴瘤、白血病、黑色素瘤，包括但不限于上述肿瘤免疫逃逸。

本发明所述用途，其中病毒引起的感染性疾病为甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、人乳头状病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、EB病毒、流感病毒、水痘带状疱疹病毒、柯萨奇病毒、人免疫缺陷病毒(HIV)引起的感染性疾病，包括但不限于上述病毒引起的感染性疾病。

本发明所述用途，其中神经系统疾病为阿兹海默病、亨廷顿病或帕金森病，包括但不限于上述神经系统疾病。

本发明所述用途，其中精神疾病为焦虑、抑郁症、心理障碍、失眠、狂躁症、强迫症、恐惧症、精神分裂症，包括但不限于上述精神疾病。

本发明所述的用途，其中心血管疾病为动脉粥样硬化、心绞痛、心肌梗塞、心律失常、感染造成的低血压、脑卒中、缺血性心肌病，包括但不限于上述心血管疾病。

一种或多种其他药物或治疗方法、例如抗病毒剂或其它抗癌剂、免疫增强剂、免疫抑制剂、放射疗法、抗肿瘤和抗病毒免疫疗法、细胞因子疗法，可任选地与本发明化合物、其同分异构形式、其结构类似物、其药物可接受的盐组合用于治疗IDO和/或TDO相关疾病或病症，或可作为单独剂型同时或依序给药。

与本发明所述化合物组合使用的合适的抗病毒剂可包括核苷酸逆转录酶抑制剂（NRYIs）、非核苷类逆转录病毒抑制剂（NNRTIs）、蛋白酶抑制剂和其它抗病毒药物。合适的NRYI的例子包括齐多夫定（AZT）；地达诺新（ddI）；扎西他滨（ddC）；可他夫定（d4T）；拉米夫定(3TC)；阿巴卡韦（1592U89）；阿德福韦酯；洛布卡韦(BMS-180194)；BCH-10652；恩曲他滨；洛德腺苷（FddA）。典型合适的NNRTI包括奈韦拉平（BI-RG-578），地拉韦啶（BHAP）、依法韦仑(DMP-266)、、PNU-142721、AG-1549、MKC-442、（+）-胡桐素A和B。典型合适的蛋白酶抑制剂包括沙奎那韦(Ro 31-8959)、利托那韦（ABT-538）、茚地那韦（MK-693）、奈非那韦（AG-1343）；安普那韦（141W94）、拉西那韦（BMS-234475）、DMP-450、BMS-2322623、ABT-378、AG-1549。其它抗病毒剂包括羟基脲、病毒唑、IL-2、IL-12、喷他夫西等。

与本发明所述化合物组合使用的合适的化疗剂或其它抗癌剂还包括:例如，烷化试剂，包括但不限于氮介、乙烯亚胺衍生物、烷基磺酸盐、亚硝基脲和三嗪，诸如乌拉莫司丁、氮介、环磷酰胺、异环磷酰胺、美法伦、苯丁酸氮介、弧血生、三亚乙基-三聚氰胺、三亚乙基硫代磷酸胺、白消安、卡莫司汀、洛莫司汀、链脲菌素、达卡巴嗪和替莫唑胺；例如，抗代谢药物，包括但不限于叶酸拮抗剂，嘧啶类似物，诸如甲氨喋呤、5-氟脲嘧啶、氟尿苷、阿糖胞苷、6-硫鸟嘌呤、磷酸氟达他滨、喷司他丁和吉西他滨；例如，某些天然产物及其衍生物，包括但不限于长春花生物碱、抗肿瘤抗体、酶、淋巴因子，诸如长春花碱、长春新碱、长春地辛、博来霉素、放线菌D、道诺霉素、阿霉素、表柔比星、伊达比星、阿糖胞苷、紫杉醇、多西他赛、光神霉素、丝裂霉素-C、L-天冬胺酰、干扰素、依托泊苷和替尼泊苷；其它抗癌剂还包括，共调节抗体，诸如CTLA-4、4-1BB、PD-L1和PD-1；细胞因子，诸如IL-10，TGF-β等；阻止免疫细胞迁移，趋化因子受体拮抗剂，诸如CCR2、CCR4和CCR6；抗癌疫苗，包括树突状细胞、合成肽、DNA疫苗和重组病毒。

本发明提供化合物、其同分异构形式、其结构类似物、其药物可接受的盐和药物组合可以利用各种给药途径或方式释放至患者。适合的给药途径包括但不限于吸入、透皮、口服、直肠、经粘膜、肠内和肠胃外给药，肠胃外给药包括肌内、皮下和静脉内注射。

本文所用的术语“给药”可涵盖所有直接与间接释放化合物到其预期作用部位的手段。

本发明所述的活性化合物可以本身形式给药的，或者以药物组合物形式给药，其中活性化合物是与一种或多种药学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂混合的。按照本发明使用的药物组合物通常是按常规方式配制的，使用一种或多种生理学上可接受的载体，包含赋形剂和助剂，它们有利于将活性化合物加工成可以在药学上使用的制剂。适当的制剂取决于所选择的给药途径。

关于口服给药，化合物与本领域熟知的药学上可接受的载体结合。这类载体使本发明化合物能够配制成片剂、丸剂、锭剂、胶囊剂、液体、凝胶、糖浆剂、浆液、悬液等，用于被所要治疗的患者口服。口用药物制剂可以这样得到，与固体赋形剂混合，可选地研磨所得混合物，加工颗粒的混合物，如果需要的话加入适合的助剂，得到片剂或锭剂芯。适合的赋形剂确切地是填充剂，例如糖，包括乳糖、蔗糖或甘露糖醇；纤维素制备物，例如玉米淀粉、小麦淀粉、稻米淀粉、马铃薯淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和/或聚乙烯吡咯烷酮（PVP）。如果需要的话，可以加入崩解剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐，例如藻酸钠。

可以口服的药物制剂包括推入配合的胶囊剂，由明胶制成，以及软的密封胶囊剂，由明胶和一种增塑剂制成，例如甘油。推入配合的胶囊剂可以含有活性成分与下列成分的混合物：填充剂，例如乳糖；粘合剂，例如淀粉；和/或润滑剂，例如滑石粉或硬脂酸镁或微粉硅胶；和可选的稳定剂。在软胶囊剂中，活性化合物可以是溶解或悬浮在适合的液体中的，例如脂肪油、液体石蜡或液体聚乙二醇。另外，可以加入稳定剂。所有口服给药制剂都应当是适合于这类给药的剂量。

关于通过吸入给药，按照本发明使用的化合物适宜以气雾剂的形式从加压包装或雾化器中释放出来，其中利用适合的推进剂，例如二氯二氟甲烷、三氯氟代甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其他适合的气体。在加压气雾剂的情况下，通过提供计量释放的阀门可以确定剂量单位。用在吸入器或吹入器内的明胶胶囊和药筒可以配制成含有化合物与适合的粉末基质的粉末混合物，例如乳糖或淀粉。

化合物可以配制用于肠胃外给药，通过注射，例如急推注射或连续输注。注射用制剂可以是单位剂型，例如在安瓿或多剂量容器内，其中加入防腐剂。组合物可以采取在油性或水性载体中的悬液、溶液或乳液的形式，并且可以含有配制用试剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂，例如交联聚乙烯吡咯烷酮、琼脂或藻酸或其盐，例如藻酸钠。

肠胃外给药用药物制剂包括水溶性活性化合物的水溶液。酌情可以制备活性化合物的油性注射悬液。适合的亲脂性溶剂或载体包括脂肪油，例如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，或脂质体，水性注射悬液可以含有增加悬液粘性的物质，例如羧甲基纤维素钠葡聚糖。可选地，悬液还可以含有适合的稳定剂或增加化合物溶解度的试剂，以便制备高浓缩的溶液。

或者，活性成分可以是粉末形式，在使用前用适合的载体再生，例如无菌无热原的水。

化合物还可以配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规的栓剂基质，例如可可脂或其他甘油酯。

除了前述制剂以外，化合物还可以配制成药库制剂。这类长效制剂可以通过植入或经皮释放（例如皮下或肌内）、肌内注射或透皮贴剂给药。因而，例如，化合物可以与适合的聚合或疏水性材料（例如在可接受的油中的乳液）或离子交换树脂一起配制，或者配制成微溶性衍生物，例如微溶性盐。

药物组合物还可以包含适合的固体或凝胶相载体或赋形剂。这类载体或赋形剂的实例包括但不限于碳酸钙、磷酸钙、各种糖、淀粉、纤维素衍生物，明胶、和聚合物，例如聚乙二醇。

给药方式以及有效剂量的选择将尤其根据所治疗的疾病而异。给药方式和剂量的选择在本领域技术人员的能力范围内。

具体实施方式

下面用具体实施例来进一步证明本发明的内容，但并不以任何方式意味着对本发明进行限制。下列实施例中所用方法如无特别说明均为常规方法。

下列实施例所涉及的仪器设备及部分原材料的规格型号如下：

紫外光谱仪：Pharmacia公司Ultrospec 2100 Pro型。

核磁共振仪：Bruker公司Bruker 500MHz（TMS为内标）。

低分辨质谱仪：Waters LCMS ZQ 2000 (ESI mode)。

中压层析系统：Buchi公司。

高压液相系统（分析）：Waters公司，2个515型泵，996 检测器。

分析型色谱柱：Chromasil ODS column (4.6×250 mm, 10 µm)。

酶标仪：Perkin Elmer公司 Victor2 1420 Multilabel Counter。

反相C18（ODS）层析介质：40-60 µm , Merck 公司。

层析硅胶：300~400目，青岛海洋化工厂。

羟丙基葡聚糖凝胶Sephadex LH20层析介质：法玛西亚公司。

色谱级甲醇和乙腈购自德国Merck公司，其他试剂均为分析纯，购自北京化学试剂厂。

下面实施例中榴菌素类化合物A- F可以采用任何现有技术制备，制备方法在[Barcza S. et al., Helvetica Chimica Acta, 49(6): 1736-1740, 1966; Maehr H.,et al., Monatshefte für Chemie, 110: 531-540, 1979; Elson A. L., et al., TheJournal of Antibiotics, 41(4):570-572,1988.] 等文献中有描述。

发明人利用如下方法制备了化合物A-F，放线菌N01W-352从采自云南的土壤中分离得到，保藏于华北制药集团新药研究开发有限责任公司菌种保藏中心，公众可从华北制药集团新药研究开发有限责任公司获得。

实施例1 本发明所述榴菌素类化合物A- F的提取制备

制备N01W-352的种子液

将菌株N01W-352的斜面培养物或孢子液接种于种子培养基，28 ℃、转速200 rpm培养48 h获得种子液；

其中所说的种子培养基按以下方法制得：玉米淀粉20.0克、葡萄糖4.0克，蛋白胨3.0克、牛肉膏4.0克、酵母浸粉2.0克，加水定容至1000 mL；pH值7.0，121 ℃灭菌30 min；

制备N01W-352的发酵液

将上述种子液以体积百分比8 %的接种量接种于发酵培养基，摇瓶或发酵罐中发酵，发酵温度27 ℃、发酵时间120 h；

其中所说的发酵培养基按以下方法制得：葡萄糖30.0克、蛋白胨5.0克、酵母浸粉5.0克、脱脂豆粉2.0克、NaCl 1.0克、CaCO₃ 6.0克，加水定容至1000 mL，pH值7.5，121 ℃灭菌30 min。

发酵产物（液体发酵）约5L，离心（4000转/分钟，10分钟），分为上清和菌体。菌体加入2L乙酸乙酯浸泡并搅拌，2h后过滤并减压蒸干滤液，得深棕色膏状物2.1g。上清用5L乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯相减压蒸干，得深棕色膏状物2.5g。合并这两部分膏状物共4.6g。

用氯仿加少量甲醇溶解油膏，过硅胶粗分（500mL漏斗，G5孔径，装量40%总容积，硅胶300-400目），洗脱溶剂依次为氯仿-甲醇（10:1, V:V）和氯仿-甲醇（1:1, V:V）各500mL，分别减压抽滤收集洗脱液，减压蒸干得到组份a和b，重量分别为(a)3.1g、(b)0.8g。两个组份定量测活后确定组分a，b为活性组分。

组份b通过ODS中压柱(3.5×50 cm)分离，乙腈和水作流动相，乙腈10%~100%(60min)线性浓度梯度洗脱，流速30mL/min，220nm检测，按峰收集，从第一个峰开始编号，依次为1-5组分，浓缩至干，得到5个组分，分别定量测活，3号组分（53mg）和4号组分(29mg)为活性组分。3号组分通过Sephadex LH20柱分离（纯甲醇洗脱），收集洗脱液，浓缩至干，得到化合物A（34mg）。4号组分通过Sephadex LH20柱分离（纯甲醇洗脱），高压液相检测，按峰收集洗脱液，浓缩至干，得到化合物B（13mg）和化合物C（8mg）。

组份a通过ODS中压柱(3.5×50 cm)分离，乙腈和水作流动相，乙腈10%~100%(60min)线性浓度梯度洗脱，流速25mL/min，220nm检测，按峰收集，从第一个峰开始编号，依次为1-6组分，浓缩至干，得到6个组分，分别定量测活，得到2号组分（化合物F，11mg），3号组分（化合物D，16mg）和4号组分(化合物E，10mg)为活性组分。

化合物A-F通过MS和NMR数据分析分别鉴定为榴菌素A（CAS No. 19879-06-2, 化合物A）、榴菌素 B（CAS No. 19879-03-9，化合物B）、MT 44330（化合物C）、二氢榴菌素A（化合物D）、MM 44325（二氢榴菌素B，化合物E）、榴菌酸（化合物F）。

化合物A（榴菌素A）：深红色固体粉末，易溶于氯仿，易溶于甲醇。UV λmax(CH₃CN)=237, 274, 363nm。ESI-MS m/z 445[M+H]⁺，443[M-H]^-。分子式C₂₂H₂₀O₁₀，¹H NMR (500 MHz,CDCl₃) δ 12.89 (s, 1H), 12.79 (s, 1H), 6.38 (s, 1H), 5.34 (d, J = 3.0 Hz,1H), 5.22(q, J = 6.9 Hz, 1H), 5.20(dd, J = 3.5, 1.8 Hz, 1H), 4.75(dd, J =5.1, 3.0 Hz, 1H), 4.03(dd, J = 8.0, 1.8 Hz, 1H), 3.80(q, J = 6.2 Hz, 1H),2.99(dd, J = 17.8, 5.1 Hz, 1H), 2.74(ddd, J = 14.8, 8.0, 3.5 Hz, 1H), 2.73(d,J = 17.8 Hz, 1H), 2.71 (s, 1H), 1.59 (d, J = 6.9 Hz, 3H), 1.56 ( dt, J =14.8, 1.8 Hz), 1.03(d, J = 6.2 Hz, 3H)。¹³C NMR (125 MHz, CDCl₃) δ 178.6,174.0, 171.8, 166.5, 164.9, 145.3, 145.2, 138.3, 130.8, 111.5, 110.3, 80.6,72.8, 70.9, 68.8, 66.8, 66.1, 61.7, 36.9, 35.4, 18.2, 16.6。

化合物B（榴菌素B）：深红色固体粉末，易溶于氯仿，易溶于甲醇。UV λmax(MeOH)=222, 283, 490, 498 (sh) , 524, 565nm。ESI-MS m/z 581[M+Na]⁺。分子式C₂₈H₃₀O₁₂，¹HNMR (500 MHz, CD₃COCD₃) δ 13.02 (s, 1H), 12.87 (s, 1H), 5.82(s, 1H), 5.46 ( d,J = 3.0 Hz, 1H), 5.17(brs, 1H), 5.16(q, J = 7.0 Hz,1H),4.94(dd, J = 5.0, 3.0Hz, 1H), 4.84( d, J = 2.5 Hz, 1H), 4.11( q, J = 6.5 Hz, 1H), 4.06( d, J = 7.5Hz, 1H), 3.82( q, J = 6.0Hz, 1H), 3.48( brs, 1H), 3.22( dd, J =18.0,5.0 Hz,1H), 2.69( ddd, J = 14.5, 8.0, 3.5 Hz, 1H), 2.52( d, J = 17.5 Hz, 1H), 2.01-1.22(m, 2H+2H), 1.60( d, J = 6.5 Hz, 3H), 1.51( m, 1H), 1.17( d, J = 6.0 Hz,3H), 0.96( d, J = 6.0 Hz, 3H)。¹³C NMR (125 MHz, CD₃COCD₃) δ 175.2, 173.3,172.9, 171.9, 166.9, 147.5, 144.2, 140.3, 133.2, 112.4, 111.3, 96.3, 79.4,77.3, 73.3, 69.6, 68.1, 67.5, 67.4, 67.0, 62.4, 37.3, 35.9, 26.2, 24.4, 18.3,17.6, 17.2。

化合物C（MT 44330）：深红色固体粉末，易溶于氯仿，易溶于甲醇。UV λmax(MeOH)=222, 282, 490, 525, 565nm。ESI-MS m/z 557[M+H]⁺。分子式C₂₈H₂₈O₁₂，¹H NMR (500 MHz,CDCl₃) δ 12.89 (s, 1H), 12.88 (s, 1H), 5.34(d, J=2.9Hz, 1H), 5.26(d, J=2.9Hz,1H), 5.23(q, J = 6.8 Hz,1H), 5.03(t, J = 4.8 Hz, 1H), 4.75( dd, J = 5.1, 2.9Hz, 1H), 4.50( q, J = 6.7 Hz, 1H), 4.16( dd, J = 7.7, 1.3 Hz, 1H), 3.88( q, J= 6.3Hz, 1H), 2.99( dd, J =17.7, 5.1 Hz, 1H), 2.75( m, 1H), 2.72( d, J = 17.7Hz, 1H), 2.40(t, J = 7.0Hz, 1H), 2.20(m), 1.82(m), 1.60( m), 1.59( d, J = 6.8Hz, 3H), 1.36(( d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.05( d, J = 6.3 Hz, 3H)。

化合物D（二氢榴菌素A）：深红色固体粉末，易溶于氯仿，易溶于甲醇。UV λmax(CH₃OH)=222, 282, 488nm。ESI-MS m/z 447[M+H]⁺。分子式C₂₂H₂₂O₁₀，¹³C NMR (125 MHz,DMSO-d6) δ 178.2, 177.5, 171.9, 164.5, 158.4, 144.8, 140.4, 140.1, 137.8,110.3, 110.0, 79.9, 71.8, 70.5, 66.5, 63.0, 61.4, 40.2, 36.8, 27.1, 18.9,16.8。

化合物E（MM 44325，榴菌素B）：深红色固体粉末，易溶于氯仿，易溶于甲醇。UV λmax(MeOH)=222, 282, 488nm。ESI-MS m/z 561[M+H]⁺。分子式C₂₈H₃₂O₁₂，¹H NMR (500 MHz,CDCl₃) δ 13.24 (s, 1H), 12.80 (s, 1H), 5.25 ( dd, J = 3.3, 2.0 Hz, 1H), 5.12(q, J=6.7Hz, 1H), 4.82(brs, 1H), 4.38(m), 4.23(q, J=6.7Hz, 1H), 4.07(dd, J =7.8, 1.5 Hz, 1H), 3.87(q, J=6.3Hz, 1H), 3.59(brs, 1H), 2.95(dd, J = 19.0,3.3Hz, 1H), 2.74(d, J=6.3Hz, 1H), 2.69 (ddd, J=14.4, 7.8, 3.3), 2.42 (ddd, J=19.0, 10.7, 1.6),1.95~1.2(m), 1.62( d, J = 6.7 Hz, 3H), 1.55(ddd, J=14.4,2.0, 1.5,1H), 1.24( d, J = 6.7Hz, 3H), 1.02( d, J = 6.3 Hz, 3H)。¹³C NMR (125MHz, CD₃Cl) δ 176.2, 176.1, 175.1, 167.6, 161.9, 145.0, 141.8, 140.1, 137.8,110.4, 110.2, 95.0, 78.7, 75.5, 72.8, 67.7, 67.4, 67.0, 63.0, 61.8, 40.4,35.3, 27.7, 25.4, 23.6, 19.2, 17.1, 16.8。

化合物F（榴菌酸）：深棕色固体粉末，易溶于氯仿，易溶于甲醇。UV λmax(MeOH)=222, 282, 490nm。ESI-MS m/z 463[M+H]⁺。分子式C₂₂H₂₂O₁₁，¹H NMR (500 MHz, CDCl₃-DMSO-d6) δ5.13 (brs, 1H), 5.03(q, J=6.5Hz, 1H), 4.66(brs, 1H), 4.28(t, J =6.5 Hz, 1H), 3.94(dd, J=8.0, 2.0Hz), 3.74(q, J=6.5Hz, 1H), 2.73(m, 2H), 2.65(m, 1H), 1.54(d, J=6.5Hz,3H), 1.47(m, 1H), 0.97(d, J=6.5Hz, 3H)。¹³C NMR (125MHz, CD₃Cl-DMSO-d6) δ 175.6, 175.5, 172.9, 167.9, 161.9, 144.8, 141.9, 139.8,137.7, 110.8, 110.2, 80.2, 72.1, 70.7, 67.7, 67.1, 61.6, 58.7, 36.7, 35.9,17.7, 16.8。

实施例2 本发明所述榴菌素类化合物对IDO或TDO的抑制活性测定

运用基因工程技术，分别构建含人IDO和人TDO基因的表达质粒，在大肠杆菌中进行重组表达，分离纯化重组人IDO和TDO，并建立IDO或TDO的活性检测系统。IDO或TDO的活性方法检测方法：采用96孔板法，检测缓冲液包含有40mM维生素C、400μg/ml过氧化氢和20μM亚甲基蓝的50mM磷酸钾缓冲液（pH 6.5）。向检测缓冲液中加入适量的IDO或TDO，配成酶混合溶液加入到96孔板中，然后加入底物L -色氨酸，反应在37℃下进行60min，加入30% （w/v）三氯乙酸使反应终止。将96孔板在65℃下孵育15min，使之完成从甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的转化，6000g离心5min，取出适量上清液并转移到新的96孔板内，加入2% （w/v）对二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液，犬尿氨酸与之反应产成的黄颜色，其OD值可在490nm下测定。以IDO抑制剂1-甲基色氨酸（l-MT）作为阳性药，向检测缓冲液中分别加入化合物，配成化合物浓度分别0.5、1、2、4、8、16、32、64ng/ml的混合液，37℃保温5min，然后向混合液中加入适量IDO或TDO，按照上述条件进行反应，并在490nm下检测OD值，数据结果利用IC50计算软件进行计算。

本发明所述化合物A-F对IDO或TDO的抑制活性见下表。

实施例3 本发明所述榴菌素类化合物对Hela细胞中γ-干扰素诱导的IDO的抑制活性

将Hela细胞在96孔板中培养，培养基为含50U/ml青霉素，50U/ml链霉素，10%FBS的高糖DMEM，培养条件为37℃，5%CO₂。使用浓度为200IU的γ-干扰素刺激Hela细胞，以IDO抑制剂1-甲基色氨酸（l-MT）作为阳性药，加入不同浓度的阳性药和化合物以及50μM的底物L-色氨酸，培养48小时后，将细胞培养的上清取出，加入30% （w/v）三氯乙酸，反应体系在65℃孵育15min，使之完成从甲酰犬尿氨酸到犬尿氨酸的转化，12000rpm离心10min，取上清与等体积2% （w/v）对二甲氨基苯甲醛的乙酸溶液混匀反应， 490nm下检测OD值，数据结果利用IC50计算软件进行计算。

本发明所述化合物A-F对干扰素诱导Hela细胞产生的IDO活性的抑制作用见下表。

Claims

1.下式化合物

I

R为H、或，

II

R1为H、或，

R2为H或 –OH，

在制备预防、治疗或减缓IDO和/或TDO引起的色氨酸代谢相关的病理学特征的疾病中的药物中的用途。

2.根据权利要求1所述的用途，其中所述疾病为肿瘤免疫逃逸、病毒引起的感染性疾病、神经系统疾病、精神疾病或心血管疾病。

3.根据权利要求2所述的用途，其中肿瘤免疫逃逸为脑癌、皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、胰腺癌、前列腺癌、结肠癌、血癌、肺癌、肾癌、肝癌、骨癌、头颈部癌、淋巴瘤、白血病、黑色素瘤。

4.根据权利要求2所述的用途，其中病毒引起的感染性疾病为甲肝病毒、乙肝病毒、丙肝病毒、人乳头状病毒、巨细胞病毒、单纯疱疹病毒、EB病毒、流感病毒、水痘带状疱疹病毒、柯萨奇病毒、人免疫缺陷病毒引起的感染性疾病。

5.根据权利要求2所述的用途，其中神经系统疾病为阿兹海默病、亨廷顿病、帕金森病、脊髓性肌萎缩症、共济失调毛细血管扩张症。

6.根据权利要求2所述的用途，其中精神疾病为焦虑、抑郁症、心理障碍、失眠、狂躁症、强迫症、恐惧症、精神分裂症。

7.根据权利要求2所述的用途，其中心血管疾病为动脉粥样硬化、心绞痛、心肌梗塞、心律失常、感染造成的低血压、脑卒中、缺血性心肌病。