CN107334693A - 复合籽提取物及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种复合籽提取物，由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到。本发明提供的复合籽提取物由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到，经本发明人发现，上述复合籽经溶剂提取得到的提取物具有良好的协同酪氨酸酶抑制作用，同时还具有良好的自由基清除作用和抗衰老作用；并且本提取物成分天然，无副作用，具有良好的应用前景。
Description
技术领域
本发明涉及植物提取技术领域，尤其是涉及复合籽提取物及其制备方法。
背景技术
随着人们生活水平和审美标准的提高，越来越多的人追求、渴望白皙及洁润的肌肤。同时，消费者对化妆品的关注重点不仅仅在于其功效性，同时也更注重其安全性。植物化妆品及回归自然的美容方法受到越来越多消费者的青睐。
皮肤由于暴露在紫外线等外界环境中，紫外线产生的活性氧以及其它外界环境中的活性氧，都会在皮肤中产生各种自由基，造成对皮肤氧化应激的损伤，短期会诱发皮肤炎症等皮肤病症，长期将导致皮肤的老化。抗氧剂是具有捕捉自由基能力的物质，可以清除皮肤中的活性自由基，减轻自由基引起的皮肤氧化应激损伤，从而改善由氧化应激等造成的皮肤老化。天然来源的抗氧化活性成分，由于安全性、来源广泛等优点，受到国内外研究者的重视。
皮肤的颜色主要取决于皮肤色素的总和，皮肤色素中主要成分是黑色素。人体可以生成两种类型的黑色素：真黑素和假黑色素。真黑素是造成皮肤、头发和眼睛的可见颜色的主要原因。一般来说，真黑素是受基因调控的，此外还受到UV暴露的刺激作用影响，随着年龄的增长，色素沉着的程度也随之增加。色素沉着的过程是一种复杂的过程，其中关键在于黑色素的合成，黑色素的合成受到酪氨酸酶(EC 1.14.18.1)的控制。通过抑制酪氨酸酶的活性，减缓黑色素的生成，是减少色素沉着最直接和最有效的办法。
真皮衰老表现为真皮对外来化学物清除力下降，真皮厚度变薄、胶原蛋白和弹性蛋白合成减少、分解增加，分解酶活性增强。这些现象都与成纤维细胞数减少以及分泌合成功能下降或异常有关。人皮肤成纤维细胞是皮肤真皮网织层中最重要的细胞，是皮肤衰老和细胞受损后的主要修复细胞之一。它不但能够促进表皮细胞的迁移、增殖和分化，还能分泌大量的胶原蛋白、弹性纤维蛋白及多种细胞修复因子，具有强大的自我更新能力，从而修复老化的皮肤。
在中国丰富的花卉资源中，有许多种类具有多种多样的药用价值，可以防病治病。一些已被历代医药学家收载于医药典籍中，一些已被列为常用中草药；但是也还有相当多的花卉入药却没有被公开和记载。
现有技术ZL200510000271.8公开的是提取自牡丹种子的物质的美白组合物，但其没有公开其是否具有自由基清除作用。因此，开发具有良好的自由基清除作用的籽提取物或复合籽提取物是必要的。
发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供复合籽提取物，本发明提供的复合籽提取物具有良好的自由基清除作用。
本发明提供了一种复合籽提取物，由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到。
优选的，所述牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽的质量比为（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）：（0.1~1）:（1~5）。
优选的，所述溶剂为乙醇或水。
本发明提供了一种复合籽提取物的制备方法，包括：
将牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽混合，得到混合物，将混合物经溶剂提取得到复合籽提取物。
优选的，所述溶剂为乙醇，所述乙醇为体积百分含量为10%~80%的乙醇水溶液。
优选的，所述混合物的质量g与乙醇的体积mL的比例为15~25:150~250。
本发明提供了上述技术方案所述的复合籽提取物或上述技术方案所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物在制备自由基清除剂中的应用。
本发明提供了上述技术方案所述的复合籽提取物或上述技术方案所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。
本发明提供了上述技术方案所述的复合籽提取物或上述技术方案所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物在制备纤维细胞增殖促进剂中的应用。
本发明还提供了一种美白的食品/药品/化妆品，包括上述技术方案所述的复合籽提取物或上述技术方案所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物。
与现有技术相比，本发明提供了一种复合籽提取物，由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到。本发明提供的复合籽提取物由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到，经本发明人发现，上述复合籽经溶剂提取得到的提取物具有良好的协同酪氨酸酶抑制作用，同时还具有良好的自由基清除作用和抗衰老作用；并且本提取物成分天然，无副作用，具有良好的应用前景。
具体实施方式
本发明提供了一种复合籽提取物，由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到。
本发明提供的复合籽提取物，由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到，所述溶剂优选为乙醇或水，所述乙醇优选为体积百分含量为10%~80%的乙醇水溶液，更优选为20%~75%的乙醇水溶液。
本发明对于所述牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽的品种和来源不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。
本发明所述白山茶籽优选为西南白山茶籽。
在本发明中，优选的，所述牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽的质量比为（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）：（0.1~1）:（1~5），更优选的，所述牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽的质量比为（3~5）:（3~5）:（1~2）:（1~2）:（1~2）:（1~2）:（1~2）:（3~5）：（0.1~0.5）:（3~5）。。
本发明提供了一种复合籽提取物的制备方法，包括：
将牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽混合，得到混合物，将混合物经溶剂提取得到复合籽提取物。
本发明提供的复合籽提取物的制备方法首先将牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽混合，得到混合物。
本发明对于所述牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽的品种和来源不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。
本发明所述白山茶籽优选为西南白山茶籽。
在本发明中，优选的，所述牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽的质量比为（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）：（0.1~1）:（1~5），更优选的，所述牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽的质量比为（3~5）:（3~5）:（1~2）:（1~2）:（1~2）:（1~2）:（1~2）:（3~5）：（0.1~0.5）:（3~5）。
在本发明中，将混合物经溶剂提取得到复合籽提取物。
所述溶剂优选为乙醇或水，所述乙醇优选为体积百分含量为10%~80%的乙醇水溶液，更优选为20%~75%的乙醇水溶液。
溶剂为乙醇时，混合物经乙醇提取、浓缩，得到醇提物。
在本发明中，所述混合物的质量g与乙醇的体积mL的比例优选为15~25:150~250；更优选为17~23:160~240。
在本发明中，所述提取优选为超声辅助提取，所述超声的功率优选为400~500w，更优选为450~500w。
在本发明中，所述提取次数优选为1~3次，更优选为2~3次。
在本发明中，所述超声提取的温度优选为20~40℃，更优选为25~35℃。所述超声提取的时间优选为每次20~40min，更优选为25~35min。
本发明在提取后，优选为合并滤液、浓缩。
本发明所述浓缩优选为旋转蒸发浓缩，本发明对于所述旋转蒸发浓缩的装置不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。
所述旋转蒸发浓缩的温度优选为60 ℃~75 ℃；所述时间优选为60min~90min。
浓缩后得到复合籽提取物。
溶剂为水时，混合物经水提取、浓缩，醇沉，得到水提物。
在本发明中，所述混合物的质量g与水的体积mL的比优选为15~25:150~250；更优选为17~23:160~240。
所述提取温度优选为40~90℃，更优选为50~80℃；所述提取次数优选为1~3次，更优选为2次。所述提取时间优选为60min~ 150 min。
提取后过滤，浓缩，得到浓缩物。
将浓缩物与乙醇混合，沉淀，滤液回收得到水提物。
所述浓缩物的质量g与乙醇的体积mL的比例为1:3~4。
所述乙醇的浓度优选为85%~95%，更优选为90%~95%。
浓缩物与乙醇混合后静置，过滤，滤液回收乙醇至无醇味，0.45μm膜过滤，滤液冻干得到水提物。
本发明所述浓缩优选为旋转蒸发浓缩，本发明对于所述旋转蒸发浓缩的装置不进行限定，本领域技术人员熟知的即可。
本发明提供了一种复合籽提取物，由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到。本发明提供的复合籽提取物由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到，经本发明人发现，上述复合籽经溶剂提取得到的提取物具有良好的协同酪氨酸酶抑制作用，同时还具有良好的自由基清除作用和抗衰老作用；并且本提取物成分天然，无副作用，具有良好的应用前景。
本发明提供了上述技术方案所述的复合籽提取物或上述技术方案所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物在制备自由基清除剂中的应用。
本发明提供了上述技术方案所述的复合籽提取物或上述技术方案所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。
本发明提供了上述技术方案所述的复合籽提取物或上述技术方案所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物在制备纤维细胞增殖促进剂中的应用。
本发明还提供了一种美白的食品/药品/化妆品，包括上述技术方案所述的复合籽提取物或上述技术方案所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物。
本发明优选采用以下方式测定得到的复合籽提取物的自由基清除作用、酪氨酸酶抑制作用和抗衰老作用：
自由基清除作用：
1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）是一种稳定的氮中心有机自由基。DPPH法于1958年被提出，广泛用于地量测定生物试样、分类物质和食品的抗衰老能力。此法是根据DPPH自由基有单电子，在517nm处有一强吸收，其醇溶液呈紫色的特性。当有自由基清除剂存在时，由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失，其褪色程度与其接受的电子数量成定量关系，因而可用分光光度计进行快速的定量分析，来检测自由基清除情况，从而评价样品的抗衰老能力。
酪氨酸酶抑制作用：
皮肤的颜色来自于角质形成细胞内存储的黑色素。一般来讲，存储黑色素多的人肤色更深，也更受到保护，远离阳光辐射。黑色素数量和质量在皮肤黑色素是决定皮肤颜色的重要因素。在96孔板中培养B16小鼠黑色素瘤细胞，多巴在黑色素瘤细胞中酪氨酸酶的作用生成黑色素。通过分光光度法测定405nm处的吸光度来原位检测黑色素的含量来评价活性物的作用。酪氨酸酶是结构复杂的含铜氧化还原酶，广泛存在于微生物、动植物及人体中。
在人体中酪氨酸酶是皮肤合成黑色素的关键酶。在酪氨酸酶反应生成黑色素的过程中，酪氨酸酶的催化作用主要发生在酪氨酸转化为多巴以及多巴转化为多巴醌这两个反应中。在96孔板中培养B16小鼠黑色素瘤细胞，多吧在黑色素瘤细胞中酪氨酸酶的作用下生成多巴醌。形成的多巴醌可以与3-甲基-2-苯并噻唑腙偶联反应，生成有色物质，通过分光光度法测定吸光度来检测酪氨酸酶的活性，从而评价活性物对酪氨酸酶的作用。
抗衰老作用：
制备的提取物用去离子水配制成溶液，加入到人成纤维细胞培养液中，以不含样品的去离子水为空白对照。培养48小时后，用MTT法对细胞染色后，用酶标仪测定550nm处吸光度，空白对照的增殖率为100%，参比空白对照，评估对人成纤维细胞的增殖作用。同时取细胞上清样本，用I型胶原蛋白测定试剂盒测定胶原蛋白的生成，空白对照的生成率为100%，参比空白对照，评估对人成纤维细胞的I型胶原合成促进作用。
为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的复合花提取物及其制备方法进行详细描述。
实施例1
将10g牡丹籽、10g莲子、10g玫瑰籽、10g白山茶籽、10g茉莉花籽、10g桃花籽、10g梅花籽、10g人参籽、1g金钗石斛兰花籽和10g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经30%的910 mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到9 g复合籽醇提取物；将另一份混合物经910mL水50℃水提取120min，过滤，浓缩成100mL溶液后加入300mL的95%的乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到24 g复合籽水提取物。
实施例2
将30g牡丹籽、30g莲子、30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2750 mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到23 g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2750 mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到72 g复合籽水提取物。
实施例3
将50g牡丹籽、50g莲子、50g玫瑰籽、50g白山茶籽、50g茉莉花籽、50g桃花籽、50g梅花籽、50g人参籽、10g金钗石斛兰花籽和50g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经80%的4600mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到38 g复合籽醇提取物；将另一份混合物经4600mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成500mL溶液后加入1500mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到120 g复合籽水提取物。
比较例1
将30g莲子、30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2450 mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到19 g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2450mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到60g复合籽水提取物。
比较例2
将30g牡丹籽、30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2450mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到17g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2450mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到56 g复合籽水提取物。
比较例3
将30g牡丹籽、30g莲子、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2450 mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到22 g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2450 mL 70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到69 g复合籽水提取物。
比较例4
将30g牡丹籽、30g莲子、30g玫瑰籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2450 mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到18g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2450mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到58 g复合籽水提取物。
比较例5
将30g牡丹籽、30g莲子、30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2450mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到21 g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2450mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到66 g复合籽水提取物。
比较例6
将30g牡丹籽、30g莲子、30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2450mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到22g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2450mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到67 g复合籽水提取物。
比较例7
将30g牡丹籽、30g莲子、30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2450mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到20g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2450mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到65 g复合籽水提取物。
比较例8
将30g牡丹籽、30g莲子、30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2450mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到22g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2450mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到66 g复合籽水提取物。
比较例9
将30g牡丹籽、30g莲子、30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2700 mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到 23 g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2700mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到71 g复合籽水提取物。
比较例10
将30g牡丹籽、30g莲子、30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2450mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到21g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2450mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到66 g复合籽水提取物。
比较例11
将30g玫瑰籽、30g白山茶籽、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2150 mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到18 g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2150mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到53 g复合籽水提取物。
比较例12
将30g牡丹籽、30g莲子、30g茉莉花籽、30g桃花籽、30g梅花籽、30g人参籽、5g金钗石斛兰花籽和30g桂花籽混合，得到混合物，制备两份上述混合物，将一份混合物经70%的2100mL的乙醇，500W的超声提取两次，每次30min；滤液合并，旋转蒸发浓缩，得到15 g复合籽醇提取物；将另一份混合物经2100mL70℃水提取120 min，过滤，浓缩成300mL溶液后加入900mL的95%乙醇，静置过夜，滤液经0.45μm微孔滤膜过滤，滤液冷冻干燥，得到49 g复合籽水提取物。
实施例4
取实施例1~3以及比较例1~12制备得到的复合花醇提取物和复合花水提取物，分别用DMSO或者水稀释至0.1mg/mL，取样品溶液2ml 加入试管中，再加入2ml 76μmol/L DPPH乙醇溶液，混匀，室温下避光在黑暗处反应 30min，在 525nm 处测定吸光度Abs ；按照下面公式计算清除率，结果如表1所示。
清除率 I(％) ＝ [1-(T-T0)/(C-C0)]×100％
式中 ： T0：0.1ml 水或二甲亚砜 (DMSO) 加2 ml DPPH 溶液的吸光度 ；
T：0.1ml 样品液加 2 ml DPPH 溶液的吸光度 ；
C0：0.1ml 水或二甲亚砜 (DMSO) 加 2ml 95％乙醇的吸光度 ；
C：0.1ml 样品液加 2ml 95％乙醇的吸光度。
表1本发明实施例和比较例制备得到的复合籽提取物DPPH抑制率
| 醇提物DPPH抑制率（%） | 水提物DPPH抑制率（%） | |
| 实施例1 | 80 | 67 |
| 实施例2 | 78 | 66 |
| 实施例3 | 80 | 68 |
| 比较例1 | 71 | 58 |
| 比较例2 | 70 | 57 |
| 比较例3 | 73 | 60 |
| 比较例4 | 70 | 57 |
| 比较例5 | 71 | 60 |
| 比较例6 | 75 | 65 |
| 比较例7 | 76 | 65 |
| 比较例8 | 79 | 65 |
| 比较例9 | 74 | 61 |
| 比较例10 | 72 | 61 |
| 比较例11 | 77 | 65 |
| 比较例12 | 68 | 54 |
实施例5
取实施例1~3以及比较例1~12制备得到的复合花醇提取物和复合花水提取物，，采用Hosoi等改良方法测定提取物对对黑色素抑制作用,测试浓度为0.1 mg/mL。B16黑色素细胞以1×105密度培养在96孔板中，经24h后换液，添加不同浓度的药物，72h后,经PBS洗涤两次，样品经空气干燥,溶于200μl 1N NAOH(含1％DMSO)，经加热80℃至1h后冷却，选择475nm波长在酶联免疫检测仪上读取吸光度值。按照下面公式计算黑色素含量抑制率结果如表2所示。
表2本发明实施例和比较例制备得到的复合籽提取物酪氨酸酶抑制率和黑色素含量抑制率
实施例6
取实施例1~3以及比较例1~12制备得到的复合花醇提取物和复合花水提取物，加入到人成纤维细胞培养液中，以不含样品的去离子水为空白对照，测试终浓度为0.1 mg/mL。培养48小时后，用MTT法对细胞染色后，用酶标仪测定550nm处吸光度，空白对照的增殖率为100%，参比空白对照，评估对人成纤维细胞的增殖作用；同时取细胞上清样本，用I型胶原蛋白测定试剂盒测定胶原蛋白的生成，空白对照的生成率为100%，参比空白对照，评估对人成纤维细胞的I型胶原合成促进作用，结果如表3所示。
表3 本发明实施例和比较例制备得到的复合籽提取物的成纤维细胞增殖率和I型胶原合成率
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种复合籽提取物，其特征在于，由牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽经溶剂提取得到。
2.根据权利要求1所述的复合籽提取物，其特征在于，所述牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽的质量比为（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）:（1~5）：（0.1~1）:（1~5）。
3.根据权利要求1所述的复合籽提取物，其特征在于，所述溶剂为乙醇或水。
4.一种复合籽提取物的制备方法，包括：
将牡丹籽、莲子、玫瑰籽、白山茶籽、茉莉花籽、桃花籽、梅花籽、人参籽、金钗石斛兰花籽和桂花籽混合，得到混合物，将混合物经溶剂提取得到复合籽提取物。
5.根据权利要求4所述的复合籽提取物的制备方法，其特征在于，所述溶剂为乙醇，所述乙醇为体积百分含量为10%~80%的乙醇水溶液。
6.根据权利要求5所述的复合籽提取物的制备方法，其特征在于，所述混合物的质量g与乙醇的体积mL的比例为15~25:150~250。
7.权利要求1~3任意一项所述的复合籽提取物或权利要求4~6任意一项所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物在制备自由基清除剂中的应用。
8.权利要求1~3任意一项所述的复合籽提取物或权利要求4~6任意一项所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物在制备酪氨酸酶抑制剂中的应用。
9.权利要求1~3任意一项所述的复合籽提取物或权利要求4~6任意一项所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物在制备纤维细胞增殖促进剂中的应用。
10.一种美白的食品/药品/化妆品，其特征在于，包括如权利要求1~3任意一项所述的复合籽提取物或权利要求4~6任意一项所述的复合籽提取物的制备方法制备得到的复合籽提取物。
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