CN107328875A - 一种用于人工牛黄原料药质量控制的指纹图谱 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于人工牛黄原料药质量控制的指纹图谱，有8个特征峰，上述8个特征峰分别是1号峰：平均相对保留时间RRT为0.18，相对峰面积为11.08；2号峰的平均相对保留时间RRT为0.32，相对峰面积为0.48；3号峰平均相对保留时间RRT为0.37，相对峰面积为4.77；4号峰平均相对保留时间RRT为0.44，相对峰面积为0.53；5号峰平均相对保留时间RRT为0.54，相对峰面积为3.11；6号峰平均相对保留时间RRT为1，相对峰面积为1；7号峰平均相对保留时间RRT为1.34，相对峰面积为0.54；8号峰平均相对保留时间RRT为1.48，相对峰面积为0.82；其中6号峰为参照峰。本发明为完整、准确评价人工牛黄的质量提供了新的方法，用视觉直观辨识图谱的异同；用半定量指标量化样品的真伪、优劣。

Description

一种用于人工牛黄原料药质量控制的指纹图谱

技术领域

本发明涉及人工牛黄的质量控制技术领域，尤其涉及一种用于人工牛黄原料药质量控制的指纹图谱。

背景技术

人工牛黄是由牛胆粉、胆酸、猪去氧胆酸、牛磺酸，胆红素、胆固醇、微量元素等加工制成。是一种天然牛黄的替代物。收载于中国药典2015年版一部。具有清热解毒，化痰定惊功效。用于痰热谵狂，神昏不语，小儿急惊风，咽喉肿痛，口舌生疮，痈肿疔疮。

众所周知，中成药的药效不是来自任何单一的活性成分，而是多种有效部位群共同作用的结果，由于人工牛黄成份复杂，各组成份目前没有有效的检测手段监控，存在质量隐患。而指纹图谱能比较全面的表征人工牛黄成分，更加严格的控制人工牛黄的质量。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用于人工牛黄原料药质量控制的指纹图谱，以解决上述技术问题。

本发明为解决上述技术问题，采用以下技术方案来实现：

一种用于人工牛黄原料药质量控制的指纹图谱，其特征在于，指纹图谱的建立包括如下步骤：

第一步，先建立人工牛黄中成分标准特征图谱，方法如下：

（1）供试品溶液的制备：精密称取人工牛黄0.1g，置50ml量瓶中，加甲醇适量，以能够将人工牛黄完全溶解为宜，超声1分钟助溶，并用甲醇稀释至量瓶满容量，摇匀，放冷，用微孔滤膜滤过，用甲醇补足滤过损失重量，取续滤液，作为供试品溶液；

（2）参照物溶液的制备：取胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含10μg胆酸的溶液，作为参照物溶液；

（3）色谱条件：依利特Hypersil ODS色谱柱4.6mm×250mm，粒度为5um；流动相为乙腈-水-磷酸，体积比为35∶65∶0.1；检测波长为192 nm，柱温25℃，流速1.5 mL/min；理论塔板数按胆酸计，不低于3000；

（4）测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，用液相色谱法测定，制定人工牛黄特征图谱；

所述人工牛黄特征图谱中，有8个特征峰，以参照物胆酸对照品的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述8个特征峰分别是1号峰：平均相对保留时间RRT为0.18，相对峰面积为11.08；2号峰的平均相对保留时间RRT为0.32，相对峰面积为0.48；3号峰平均相对保留时间RRT为0.37，相对峰面积为4.77；4号峰平均相对保留时间RRT为0.44，相对峰面积为0.53；5号峰平均相对保留时间RRT为0.54，相对峰面积为3.11；6号峰平均相对保留时间RRT为1，相对峰面积为1；7号峰平均相对保留时间RRT为1.34，相对峰面积为0.54；8号峰平均相对保留时间RRT为1.48，相对峰面积为0.82；其中6号峰为参照峰；

第二步，以上述相同的方法测定待测人工牛黄样品特征图谱；

第三步，将待测人工牛黄样品特征图谱与标准的人工牛黄特征图谱比对，判断待测人工牛黄的质量及真伪。

作为优选，所述微孔滤膜采用0.45um微孔滤膜。

本发明是结合大量生产批次统计情况和试验研究工作，建立了人工牛黄的标准特征图谱，能较好地保证人工牛黄在生产过程中投料的准确性与正确性。到目前为止，尚无关于上述人工牛黄指纹图谱控制方法的公开报道。

本发明的有益效果是：

1、整体性、宏观性和模糊性，本发明克服了单一成分含量测定难以反映产品真实投料情况。本发明为完整、准确评价人工牛黄的质量提供了新的方法和手段。

2、用视觉直观辨识图谱的异同；用半定量指标量化样品的真伪、优劣。

附图说明

图1 为人工牛黄标准特征图谱。

具体实施方式

为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明，但下述实施例仅仅为本发明的优选实施例，并非全部。基于实施方式中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得其它实施例，都属于本发明的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1：人工牛黄特征图谱的建立

1、仪器与试药

1.1 仪器

岛津高效液相色谱仪 LC-solution色谱工作站

1.2 试药

胆酸对照品由中国药品生物制品检定所提供；磷酸为分析纯；乙腈、甲醇为色谱纯；人工牛黄由合肥今越制药有限公司提供，批号为160101、160102、160103、160104、160105、160106、160107、160108、160109、160110。

2、方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性

依利特 Hypersil ODS色谱柱（4.6mm×250mm 5um）；流动相为乙腈-水-磷酸(35∶65∶0.1)，检测波长为192 nm，柱温25℃，流速1.5 mL/min。理论塔板数按胆酸计，不得低于3000。

3、特征图谱特征峰的测定

3.1 人工牛黄特征图谱特征峰的建立

（1）供试品溶液的制备：精密称取人工牛黄约0.1g，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声1分钟助溶，并用甲醇稀释至刻度，摇匀，放冷，用甲醇补足损失重量，用微孔滤膜(0.45um)滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

（2）参照物溶液的制备：取胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含10μg的溶液，作为参照物溶液。

分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液各20μl，分别注入液相色谱仪，照液相色谱法测定，即得。以参照物的色谱峰保留时间和峰面积为1，计算相对保留时间和峰面积比值，即得人工牛黄标准特征图谱。

3.2 特征峰确定

通过10批人工牛黄特征图谱的测定，比较其图谱，确定特征峰为8个，以参照物胆酸的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算10批样品共有峰相对保留时间以及相对峰面积。结果见下表1、表2。

表1：10批样品保留时间统计结果

表2：10批样品峰面积比值统计结果

3.3 特征峰的描述

（1）特征峰共有8个，其中1号峰峰面积最大。

（2）1、2、3、4、5、6、7、8号峰的相对保留时间的平均值分别为：0.18、0.32、0.37、0.44、0.54、1（参照峰）、1.34、1.48。

（3）1、2、3、4、5、6、7、8号峰的峰面积比值的平均值分别为：11.08、0.48、4.77、0.53、3.11、1（参照峰）、0.54、0.82。

3.4特征图谱精密度试验

按照特征图谱精密度规定方法操作，以批号为160101的人工牛黄为供试品，依法制备，连续进样6次，对对照特征峰时间以及峰面积进行统计，对照特征峰保留时间的RSD为0.75%，峰面积的RSD为1.14%。

3.5 特征图谱稳定性试验

按照特征图谱稳定性测定方法操作，以批号160101的人工牛黄为供试品，依法制备，于不同时间（0、2、4、8、16、24h）检测，对对照特征峰时间以及峰面积比值进行统计，对照特征峰保留时间的RSD为0.58%，峰面积的RSD为0.74%。

3.6特征图谱重复性试验

按照特征图谱重复性规定方法操作，以批号为160101的人工牛黄为供试品，依法制备6份样品，进样检测，对对照特征峰时间以及峰面积进行统计，对照特征峰保留时间的RSD为1.63%，峰面积的RSD为1.24%。

以上试验结果表明，应用此方法对人工牛黄标准特征图谱进行测定方法可靠，能比较全面的反映本品中的主要成分信息，确保产品投料的准确性与正确性。

以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例，并不用来限制本发明，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (2)

1.一种用于人工牛黄原料药质量控制的指纹图谱，其特征在于，指纹图谱的建立包括如下步骤：

第一步，先建立人工牛黄中成分标准特征图谱，方法如下：

（1）供试品溶液的制备：精密称取人工牛黄0.1g，置50ml量瓶中，加甲醇适量，以能够将人工牛黄完全溶解为宜，超声1分钟助溶，并用甲醇稀释至量瓶满容量，摇匀，放冷，用微孔滤膜滤过，用甲醇补足滤过损失重量，取续滤液，作为供试品溶液；

（2）参照物溶液的制备：取胆酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml中含10μg胆酸的溶液，作为参照物溶液；

（3）色谱条件：依利特Hypersil ODS色谱柱4.6mm×250mm，粒度为5um；流动相为乙腈-水-磷酸，体积比为35∶65∶0.1；检测波长为192 nm，柱温25℃，流速1.5 mL/min；理论塔板数按胆酸计，不低于3000；

（4）测定：分别精密吸取参照物溶液与供试品溶液，注入液相色谱仪，用液相色谱法测定，制定人工牛黄特征图谱；

所述人工牛黄特征图谱中，有8个特征峰，以参照物胆酸对照品的色谱峰的相对保留时间和相对峰面积为1，计算其它色谱峰的相对保留时间和相对峰面积，上述8个特征峰分别是1号峰：平均相对保留时间RRT为0.18，相对峰面积为11.08；2号峰的平均相对保留时间RRT为0.32，相对峰面积为0.48；3号峰平均相对保留时间RRT为0.37，相对峰面积为4.77；4号峰平均相对保留时间RRT为0.44，相对峰面积为0.53；5号峰平均相对保留时间RRT为0.54，相对峰面积为3.11；6号峰平均相对保留时间RRT为1，相对峰面积为1；7号峰平均相对保留时间RRT为1.34，相对峰面积为0.54；8号峰平均相对保留时间RRT为1.48，相对峰面积为0.82；其中6号峰为参照峰；

第二步，以上述相同的方法测定待测人工牛黄样品特征图谱；

第三步，将待测人工牛黄样品特征图谱与标准的人工牛黄特征图谱比对，判断待测人工牛黄的质量及真伪。

2.根据权利要求1所述的用于人工牛黄原料药质量控制的指纹图谱，其特征在于：所述微孔滤膜采用0.45um微孔滤膜。