CN107325818B - 复合抗氧化剂、抗氧化采样装置及用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种复合抗氧化剂，所述复合抗氧化剂至少包括下述浓度的组分：0.01～1mol/L的由弱酸及其共轭酸盐组合成的缓冲溶液；1～200μmol/L的含有至少两种受阻酚类抗氧化剂的溶液；以及1～100μmol/L含有至少一种抑制氧化低密度脂蛋白形成的物质的溶液。该复合氧化剂通过多种抗氧化剂复合发挥协同增效作用，防止样本被氧化，稳定样本浓度，提高样品检测精度和准确性。本发明复合抗氧化剂可广泛应用于免疫检验、微生物检验、血液检验以及寄生虫检验。
Description
技术领域
本发明涉及生物样本检验领域，具体涉及一种复合抗氧化剂及其制法，和一种抗氧化取样管及其用途。
背景技术
血液标本的采集和血清的分离在临床生化检测中是至关重要的，同时也是造成实验室操作人员实验室“感染”的多发地段。真空采血管是近几年应用于临床的检验采血新产品，真空采血管在生产过程中预置了一定量的负压，真空采血管按标本采集类型分类可分为血清管、血浆管和全血管3类。根据不同的用途,不同真空采血管内添加了不同的添加剂。添加剂包括多种成分,如抗凝剂、促凝剂、缓冲剂、保护剂、分离胶等。其品种、性能、浓度直接影响血样的性状和检测结果。试管管帽标有不同的色码，适于不同的检验项目；真空试管为密闭式；真空采血管分别为有刻度的，红，紫，蓝，黑，绿等不同颜色管帽的试管。经过多年的应用推广，由于其洁净安全、简单快捷、准确可靠、安全有效等显著优点，正逐渐代替了传统的注射器采血方法。
然而，在临床使用过程中,有一些问题的发生，影响了标本的顺利采集。在不同性能的采血管中，都不可避免的混入空气，这样一方面会使取样量不精确，另外又容易使管中样本氧化。氧化反应过程可以产生游离自由基，然后这些游离自由基可以启动连锁反应，当这些连锁反应发生在细胞中时，便会造成细胞的损伤或者凋亡。此外，在采集其他临床标本如体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活组织等过程中，同样会发生采集样本被氧化的现象，严重影响了临床数据的准确性。
针对上述文本，专利申请号为201510593451.5公开为一种提高样本检测精度和准确性的生物样本稳定试剂，主要由DNA酶抑制剂、RNA酶抑制剂、固定剂/防腐剂、代谢抑制剂、抗氧化剂、三线态淬灭剂以及再水化强化剂制成，生物样本稳定试剂使用大量抑制剂、抗菌剂、防腐剂和能量来源的ATP混合在一起作为保存基质，以此提高样本的稳定，其适合更长时间的保存试剂。然而其添加的抑制剂、抗菌剂等会影响样本的准确度，如对唾液、尿液等样本中本身含有大量菌群，该试剂同样会对样本的自带菌群带来影响，从而影响样本的检测数据。
申请人结合试剂临床取样环境和取样流程，研制出一种主要具有抗氧化作用，配方简单有效的复合抗氧化剂以及使用该复合抗氧化剂的采样装置。
发明内容
本发明的目的在于提出一种复合抗氧化剂，可以防止样本被氧化，使临床数据更为精准，减少误差。本发明还提供了一种复合抗氧化采样装置，即实现精确标记取样量，又避免样本氧化缺陷。
为实现上述目的，本发明所采用的技术方案是一种复合抗氧化剂，所述复合抗氧化剂至少包括下述浓度的组分：
0.01～1mol/L的由弱酸及其共轭酸盐组合成的缓冲溶液；
1～200μmol/L的含有至少两种受阻酚类抗氧化剂的溶液；以及
1～100μmol/L含有至少一种抑制氧化低密度脂蛋白形成的物质的溶液。
在进一步的方案中，所述复合抗氧化剂还包括下述浓度的组分：
0.1～10mmol/L的含有Ca2螯合剂的溶液；以及
1-100mmol/L的细胞保护剂溶液。
在一个具体的优选方案中，所述缓冲溶液选自柠檬酸盐溶液或磷酸盐溶液；所述受阻酚类抗氧化剂选自BHT、BHA、TBHQ、PG、生素C、维生素E和多酚；所述抑制氧化低密度脂蛋白形成的物质选自双嘧达莫和普罗布考。
在另一个具体的优选方案中，所述Ca2螯合剂为EDTA及其二钠盐；所述细胞保护剂为茶碱。
进一步的，所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.03～5mol/L的缓冲溶液；
5～100μmol/L的含有两种的受阻酚类抗氧化剂的溶液；
0.5～5mmol/L的含Ca2螯合剂的溶液；
5～40μmol/L的含抑制氧化低密度脂蛋白形成的物质的溶液；以及
3～30mmol/L的含细胞保护剂的溶液。
本发明还公开了一个复合抗氧化剂的优选方案，所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.05～2mol/L柠檬酸钠溶液、5～15μmol/L BHT溶液、10～25μmol/L维生素E溶液、0.8～1.5mmol/L EDTA溶液、10～25μmol/L双嘧达莫溶液以及10～20mmol/L茶碱溶液。
进一步的，所述复合抗氧化剂中组分溶液浓度为：
0.1mol/L柠檬酸钠溶液、10μmol/L BHT溶液、20μmol/L维生素E溶液、1mmol/LEDTA溶液、20μmol/L双嘧达莫溶液以及15mmol/L茶碱溶液。
本发明复合抗氧化剂中，柠檬酸钠溶液为缓冲溶液，可降低样本pH变动幅度，同时其与EDTA协同除具有抗凝作用外，还具有一定的抗原修复作用，适用于细胞和组织的采取；BHT和维生素E复用具有更佳的抗氧化效果，提高样本稳定性，而柠檬酸钠和EDTA均有抗氧化作用，四者共同使用具有抗氧化协同增效作用。
双嘧达莫(Dipyridamole，又名双嘧啶胺醇)，可抑制血小板第一相和第二相聚集，可逆性抑制磷酸二酯酶，减少血小板中的cAMP分解；双嘧达莫可阻止氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)的形成，有效发挥抗氧化作用，且抑制组织样本中肿瘤坏死因子及白介素等炎症因子的表达，提高组织样本稳定性；其与其他抗氧化剂协同使用，进一步提高抗氧化效果。此外，茶碱有保护肥大细胞膜、抑制炎性介质释放的作用，稳定样本细胞。
在又一个优选方案中，所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.05～2mol/L柠檬酸钠溶液、5～15μmol/L BHT溶液、10～25μmol/L维生素E溶液、0.8～1.5mmol/L EDTA溶液、10～25μmol/L普罗布考溶液以及10～20mmol/L茶碱溶液。
其中的普罗布考(Probucol，又名丙丁酚)具有较强的抗氧化作用，其抗氧化作用主要来自氧离子捕捉和断链抗氧化的特性，其含有的酚羟基有效降低血浆氧自由基浓度，抑制ox-LDL的形成。
本发明另一方面还提供了上述复合抗氧化剂的制法，所述制法包括：
步骤1、分别配制所述浓度的柠檬酸钠溶液、EDTA溶液、BHT溶液、维生素E溶液、双嘧达莫溶液以及茶碱溶液；
步骤2、将配置好的上述各种溶液混合均匀，即得所述复合抗氧化剂。
在进一步具体的步骤1中，配制各溶液的方法具体为：
将柠檬酸盐加入蒸馏水配置成所述浓度的缓冲溶液；
将Na2H2Y·2H2O置于烧杯中加蒸馏水，微热溶解后进行稀释，摇匀然后用CaCO3作为基准物进行标定，即得所述浓度的EDTA溶液；
将BHT标准物质溶于甲醇溶液中，定容，得到所述浓度的BHT溶液；
将维生素E置于棕色容量瓶中，用乙烷定容，即得维生素E溶液，避光保存；
取粉状双嘧达莫置于容器，加0.01mol/L盐酸溶液适量，溶解完全后，继续加入0.01mol/L盐酸溶液定量稀释制成所述浓度的双嘧达莫溶液；
将茶碱加水微热溶解后进行稀释成所述浓度，摇匀，即得茶碱溶液。
更进一步的为使复合抗氧化溶液更好的涂布在采样装置内壁上，形成三维空间结构，从而使复合抗氧化剂与检测样品更充分结合，所述步骤2中混合各种溶液时，还加入1～50g/L可溶性的增粘剂，所述增粘剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇6000、琼脂糖和果胶酸钙中的一种或几种。
本发明还提供了一种抗氧化采样装置，其为带盖体的封闭式容器，其中上述的抗氧化剂容纳在所述容器中。
在进一步的方案中，所述容器为管状或袋状，所述抗氧化剂涂覆于所述管状容器或袋装容器的内壁；或者涂覆于所述管状容器或袋状容器的内壁和盖体内壁上。
为合理设置复合抗氧化剂的涂布量，所述涂覆面积不少于内壁总面积的3/4。
在一个具体的优选方案中，所述抗氧化采样装置为采样管，所述制备方法包括：将抗氧化剂溶液倒入管状容器内，盖上密封盖，翻转晃荡，直至所述管状容器内壁均匀挂浆，随后将多余溶液倒出，即用或者管壁溶液干燥后待用。
本发明再进一步公开了本发明抗氧化采集装置在生化检验、免疫检验、微生物检验、血液检验以及寄生虫检验中的用途。
具体的，该抗氧化采样装置在血液、血清、血浆、洗嗽液、汗液、粘液、阴道分泌物、毛发、体腔的体液、细胞、活组织取样中的用途。
本发明的复合抗氧化剂的应用范围广，可用于生化检验、免疫检验、微生物检验、血液检验以及寄生虫检验，其适应性好。该符合抗氧化剂通过多种抗氧化剂复合发挥协同增效作用，防止样本被氧化，稳定样本浓度，提高样品检测精度和准确性。本发明采用的抗氧化采样装置通过复合抗氧化剂在其内壁涂覆，使抗氧化剂与检测样本接触更充分，更好的溶于检测样本中，提高抗氧化剂效果；且该涂布方法直接在现有的采样装置(如采样管和采样袋)中使用，操作简单。
具体实施方式
本发明实施例公开了一种复合抗氧化剂及抗氧化采样装置。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数。特别需要指出的是，所有类似的替换替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，他们都被视为包括在本发明内。本发明的复合抗氧化剂、其制备方法以及抗氧化采样装置、其制备方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的抗氧化剂和采样装置进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
为实现本发明目的，采用如下技术方案。
一种复合抗氧化剂，所述复合抗氧化剂至少包括下述浓度的组分：
0.01～1mol/L的由弱酸及其共轭酸盐组合成的缓冲溶液；
1～200μmol/L的含有至少两种受阻酚类抗氧化剂的溶液；以及
1～100μmol/L含有至少一种抑制氧化低密度脂蛋白形成的物质的溶液。
本发明抗氧化剂主要由多种抗氧化剂复合而成，其中受阻酚类抗氧化剂和天然抗氧化剂复合具有协同增效作用，添加抑制氧化低密度脂蛋白形成的抗氧化物质针对性强且更为有效；该复合抗氧化剂还通过缓冲溶液校正样本的pH，以此进一步稳定样本。
在一些实施例中，所述缓冲溶液为pH6～10的缓冲溶液，可以为有机缓冲溶液和/或无极缓冲溶液；在更优选的实施例中，缓冲溶液具体选自柠檬酸盐溶液或磷酸盐溶液。
所述受阻酚类抗氧化剂作为主抗氧化剂，是一类在苯环上羟基的一侧或两侧有取代基的化合物。由于羟基受到空间障碍，H原子容易从分子脱落下来，与过氧化自由基、烷氧自由基、羟自由基等结合使之失去活性，从而使热氧老化的链反应终止。在一些具体实施例中，所述受阻酚类抗氧化剂选自BHT、BHA、TBHQ、PG、维生素C、维生素E和多酚。在一些更优选的实施例中，BHT作为主抗氧化剂，维生素E作为辅助抗氧化剂，将两者并用，配成有效的复合稳定剂。
在一些实施例中，所述抑制氧化低密度脂蛋白形成的物质选自双嘧达莫和普罗布考。这两者药物具有较强的抗氧化作用，其含有的酚羟基有效降低血浆氧自由基浓度，抑制ox-LDL的形成。
本发明另一个技术方案中，在上述方案的基础上，所述复合抗氧化剂还包括下述浓度的组分：
0.1～10mmol/L的含有Ca2螯合剂的溶液；以及
1-100mmol/L的细胞保护剂溶液。
在一些实施例中，Ca2螯合剂为EDTA及其二钠盐；所述细胞保护剂为茶碱。
下面结合具体实施例对本发明复合抗氧化剂的配方进行说明。
实施例1
所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.1mol/L柠檬酸钠溶液、10μmol/L BHT溶液、20μmol/L维生素E溶液、1mmol/LEDTA溶液、20μmol/L双嘧达莫溶液以及15mmol/L茶碱溶液。
实施例2
所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.05mol/L柠檬酸钠溶液、5μmol/L BHT溶液、10μmol/L维生素E溶液、0.8mmol/LEDTA溶液、10μmol/L双嘧达莫溶液以及10mmol/L茶碱溶液。
实施例3
所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
2mol/L柠檬酸钠溶液、15μmol/L BHT溶液、25μmol/L维生素E溶液、1.5mmol/LEDTA溶液、25μmol/L双嘧达莫溶液以及20mmol/L茶碱溶液。
实施例4
所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.05mol/L柠檬酸钠溶液、5μmol/L BHT溶液、10μmol/L维生素E溶液、0.8mmol/LEDTA溶液、10μmol/L普罗布考溶液以及10mmol/L茶碱溶液。
实施例5
所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
2mol/L柠檬酸钠溶液、15μmol/L BHT溶液、25μmol/L维生素E溶液、1.5mmol/LEDTA溶液、25μmol/L普罗布考溶液以及20mmol/L茶碱溶液。
实施例6
所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
5mol/L磷酸盐溶液、50μmol/L BHA溶液、50μmol/L维生素C溶液、5mmol/L EDTA溶液、40μmol/L普罗布考溶液以及30mmol/L茶碱溶液。
实施例7
0.03mol/L磷酸盐溶液、3μmol/L TBHQ溶液、2μmol/LBHA溶液、0.5mmol/L EDTA溶液、5μmol/L双嘧达莫溶液以及3mmol/L茶碱溶液。
实施例8
所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.1mol/L柠檬酸钠溶液、10μmol/L BHT溶液、20μmol/L维生素E溶液以及20μmol/L双嘧达莫溶液。
实施例9
0.01mol/L硼酸盐溶液、1μmol/LBHT溶液、0.5μmol/LBHA溶液、1μmol/L双嘧达莫。
实施例10
1mol/L三羟甲基氨基甲烷溶液、110μmol/PG溶液、95μmol/L多酚溶液、100μmol/L双嘧达莫。
第二方面，本发明复合抗氧化剂的制法将各类抗氧化剂和保护剂分别用溶剂配制成特定浓度的溶液，混合均匀，即可。
在一个具体的实施例中，所述制法包括下述步骤：
步骤1、分别配制所述浓度的柠檬酸钠溶液、EDTA溶液、BHT溶液、维生素E溶液、双嘧达莫溶液以及茶碱溶液；
步骤1.1将柠檬酸盐加入蒸馏水配置成所述浓度的缓冲溶液；
步骤1.2将Na2H2Y·2H2O置于烧杯中加蒸馏水，微热溶解后进行稀释，摇匀然后用CaCO3作为基准物进行标定，即得所述浓度的EDTA溶液；
步骤1.3将BHT标准物质溶于甲醇溶液中，定容，得到所述浓度的BHT溶液；
步骤1.4将维生素E置于棕色容量瓶中，用乙烷定容，即得维生素E溶液，避光保存；
步骤1.5取粉状双嘧达莫置于容器，加0.01mol/L盐酸溶液适量，溶解完全后，继续加入0.01mol/L盐酸溶液定量稀释制成所述浓度的双嘧达莫溶液；
步骤1.6将茶碱加水微热溶解后进行稀释成所述浓度，摇匀，即得茶碱溶液。
步骤2、将配置好的上述各种溶液混合均匀，即得所述复合抗氧化剂。
在另一个实施例中，为了使后续所述复合抗氧化剂涂布挂壁效果更佳，在上述步骤2中，混合各种溶液时，还加入1～50g/L可溶性的增粘剂，所述增粘剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇6000、琼脂糖和果胶酸钙中的一种或几种。在一些实施例中，增粘剂优选为聚乙烯吡咯烷酮和聚乙二醇6000。在实际情况中，具体的可溶性增粘剂的加入量根据复合抗氧化剂的浓度在上述范围内进行调整。聚乙烯吡咯烷酮具有一定的粘接性，极易溶于水及含卤代烃类溶剂、醇类、胺类、硝基烷烃及低分子脂肪酸等；聚乙二醇是水溶性高分子，且与聚乙烯吡咯烷酮协同作为粘接剂，具有较合适的粘度，适应于本发明所述采集装置。
第三方面，本发明提供了一种供用于生化检测样本的复合抗氧化剂使用的抗氧化采集装置，其为带盖体的封闭式容器，本发明所述的复合抗氧化剂容纳在所述容器中。
本发明的采集装置可以盛装液态、固态或固液混合生化样品的容器。一般的，可设计成采集管或者采集袋的形式。在一些实施例中，所述采集管采用玻璃或塑料制成；所述采集袋采用塑料制成。进一步优选的，玻璃材质为硅硼玻璃或石英玻璃；塑料材质为PFT、PBT或者PEN等。采集管的盖体为配套使用的胶塞、管盖或者铝塑膜，可以为插入式或者旋拧式的，实现密封目的。在一些实施例中，本发明使用的采样装置为现有的真空采血管。
在一些实施例中，所述复合抗氧化剂涂覆于所述管状容器或袋装容器的内壁；或者涂覆于所述管状容器或袋状容器的内壁和盖体内壁上。
在一些实施例中，所述涂覆面积不少于内壁总面积的3/4；在一个优选的实施例中，所述涂覆面积与容器内壁面积相等；或者所述涂覆面积与容器内壁面积和盖体内壁面积之和相等；这两种情况都属于完全涂覆；形成三维空间结构，在加入生化检测样本时能够与复合抗氧化剂更充分的结合。
第四方面，本发明用于生化检测标本的抗氧化采样装置的制备方法大致为：直接将复合抗氧化剂倒入容器中，翻转晃荡，使内壁均匀充分覆盖复合抗氧化剂，将多余的复合抗氧化剂倒出即可。
在一个实施例中，所述抗氧化采样装置为采样管，所述制备方法包括：将复合抗氧化剂溶液倒入管状容器内，盖上密封盖，翻转晃荡，直至所述管状容器内壁均匀挂浆，随后将多余溶液倒出，即用或者管壁溶液干燥后待用。其中干燥的方式可以室温下空气干燥，或是适当高温下空气干燥，或是真空干燥，或是其他。
第五方面，本发明提供了一种抗氧化采样装置的用途，其广泛应用于生化检验、免疫检验、微生物检验、血液检验以及寄生虫检验。在一些实施例中，该抗氧化采样装置用在血液、血清、血浆、洗嗽液、汗液、粘液、阴道分泌物、毛发、体腔的体液、细胞、活组织取样中。
下面针对本发明复合抗氧化剂的抗氧化能力作出相关的抗氧化性能试验，并借此验证最佳配方的抗氧化性能。首先设置一组对照实施例：
对照实施例1
所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.1mol/L柠檬酸钠溶液、10μmol/L BHT溶液以及20μmol/L维生素E溶液。
试验例1添加不同配方的复合抗氧化剂的血液抗氧化活性测定
将添加抗氧化剂的血液作为试验对象，具体方法如下。
试验兔子若干只，静脉采血，每只兔子所采集的血液分成7组，其中6组分别放置加入有3ml本发明实施例1、实施例2、实施例4、实施例8、实施例10以及对照实施例1的复合抗氧化剂，1组作为空白对照组；每个组别放入5ml血液，混合均匀，存放于室温下或4℃环境中。分别在24小时后以及5天后，取血液，静置或置37℃环境中促其凝固，待血液凝固后，将其平衡后离心(一般为3000rpm，离心5～10min)，得到的上清液即为血清。
1、DPPH自由基清除能力的测定：
量取7组实验组的血清1mL于试管中，加入0.4mmol/L的DPPH自由基溶液(用无水乙醇配制)0.2mL和2.0mL的蒸馏水，混匀反应体系后，将其置于常温下30min后于517nm波长处测定各个管的吸光度A1。用相同体积的无水乙醇代替DPPH溶液为空白组，记为A2；用相同体积的蒸馏水代替样品溶液作为对照组，记为A0。所有测定值均为三次结果的平均值，根据以下公式计算自由基的清除率。
式中：A0为对照试验(水代样品溶液)的吸光度；A1为样品试验的吸光度；A2为样品干扰试验(无水乙醇代DPPH溶液)的吸光度。
2、羟自由基(·OH)清除能力测定：
采用邻二氮菲法。准确量取0.75mmol/L的邻二氮菲溶液1.0mL置于干净的试管中，再依次加入pH为7.4的PBS缓冲液2.0mL以及蒸馏水1.0mL，混匀反应体系，加入1.0mL的0.75mmol/L FeSO4溶液，然后用0.12％的双氧水(现配现用)1.0mL启动反应，立刻震荡混和均匀，记为Ap；用同体积的蒸馏水代替0.12％的双氧水，其余的条件均同Ap处理方法，记为Ab；用相同体积的7组实验组的样品溶液代替1.0mL的蒸馏水，其余条件均同Ap处理方法，记为As。三个管Ap、Ab、As置于37℃水浴锅中保温1h，反应结束后，用蒸馏水调零，在波长为536nm的条件下测定各个管的吸光度，并将测得的吸光值代入到以下公式中计算羟自由基的清除率。
式中：Ap为1mL邻二氮菲+2mLPBS+1mLlFeSO4+1mLH2O2+1mLH2O的吸光值；Ab为1mL邻二氮菲+2mLPBS+1mLlFeSO4+2mLlH2O的吸光值；As为1mL邻二氮菲+2mLPBS+1mLFeSO4+1mLH2O2+1mL样品溶液的吸光值。
3、超氧阴离子(O2-·)清除率的测定：
取4.5mL、0.5mol/L、pH＝8.2的Tris-HCl缓冲液于干净的试管中，将其置于25℃的水浴锅中保持温度20min，然后向每个管内加入1mL的7组实验组的血清，后准确加入同样经25℃水浴预热后的2.5mmol/L邻苯三酚溶液0.4mL，混合均匀后置于25℃水浴锅中，准确反应4min后立即加入1mL，8mol/L的HCl以终止该氧化反应，以蒸馏水调零，于320nm波长处测定各个管内液体的吸光度，记为A样；空白对照组以相同体积的上述Tris-HCl缓冲液代替样品溶液，其余条件均同样品管处理方法，其吸光度记为A空。每个试管做三个平行管，取平均值，并将所得到的最终吸光值代入到以下公式中计算超氧阴离子的清除率。
式中：A空为空白对照组溶液的吸光值；A样为样品溶液的吸光值。
4、金属离子(Fe2+)螯合能力的比较：
分别取1mL的7组实验组的血清于试管中，依次准确加入50μL的2.0mmol/L的氯化亚铁溶液，200μL的5.0mmol/L的菲咯嗪溶液以及2.75mL的蒸馏水。振荡混和均匀反应体系，然后将其置于室温下保存10min以后，以蒸馏水调零，于562nm的波长处测定各个管的吸光度，记为A1；对照试验以相同体积的蒸馏水代替样品血溶液，其余条件均同样品管处理方法，其吸光度为A0；样品干扰试验以相同体积的蒸馏水代替氯化亚铁溶液，其余条件均同样品管，其吸光度为A2。并将所测得的吸光度值取平均值后代入到以下公式中计算铁离子的螯合率。
式中：A0为对照试验(水代样品)管的吸光度；A1为样品试验管的吸光度；A2为样品干扰试验(水代氯化亚铁)管的吸光度。
上述试验结果见表1。
表1不同配方的抗氧化采样管对血液组分抗氧化活性的影响
由表1可知，实施例1-10的复合抗氧化剂具有良好的抗氧化性能，其中实施例1配方的复合抗氧化剂具有最佳抗氧化性能，其次是实施例2、实施例4。实施例1和实施例2比对，表明实施例1配方用量比更为优选；实施例1和实施例8比较可知，再添加的EDTA和茶碱可提高抗氧化能力。实施例8和对照实施例1比较可知，添加双嘧达莫的抗氧化剂抗氧化能力更佳。
试验例2不同配方的复合抗氧化剂采集的DNA样品的稳定性随时间的变化
对同一合成的目标DNA样品(320bp)，设置14组，其中12组为加入复合抗氧化剂的试验组，2组为对照组。
其中6组试验组分别与水按体积比5:0.1加入实施例1、实施例2、实施例4、实施例9、实施例10和对照实施例1的复合抗氧化剂备用；目标DNA(320对碱基对)，无菌去离子水溶解，加入上述备用的复合抗氧化剂溶液，再加DNA酶I至终量为0.1U，4℃下冷藏24小时。1组对照组：目标DNA(4320对碱基对)，无菌去离子水溶解，加入DNA酶I至终量为0.1U，4℃冷藏24小时。
另其中6组试验组分别与水按体积比5:0.1加入实施例1、实施例2、实施例4、实施例9、实施例10和对照实施例1的复合抗氧化剂备用；目标DNA(320对碱基对)，无菌去离子水溶解，加入上述备用的复合抗氧化剂溶液，再加DNA酶I至终量为0.1U，4℃下冷藏5天。1组对照组：目标DNA(320对碱基对)，无菌去离子水溶解，加入DNA酶I至终量为0.1U，4℃冷藏5天。
将不同试验组处理后的目标DNA进行琼脂糖凝胶电泳检测，琼脂糖含量为2％，着色剂染色，记录结果。
结果依据DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时，在电场中向正极移动。结果为：其中2组对照组分布有两个条带；2组对照组实施例1的试验组分布有两个条带；10组实施例的试验组仅一个条带；说明本发明的技术方案可在室温下将目标DNA进行稳定保存，且保存时间长至5天。
以上所述的实施方式，并不构成对该技术方案保护范围的限定。任何在上述实施方式的精神和原则之内所作的修改、等同替换和改进等，均应包含在该技术方案的保护范围之内。
Claims (12)
1.一种抗氧化采样装置，其特征在于，其为带盖体的封闭式容器，所述容器为管状或袋状，所述容器中容纳有复合抗氧化剂，所述复合抗氧化剂涂覆于所述管状容器或袋装容器的内壁；或者涂覆于所述管状容器或袋状容器的内壁和盖体内壁上；
所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.03～5mol/L的由弱酸及其共轭酸盐组合成的缓冲溶液；
5～100μmol/L的含有两种的受阻酚类抗氧化剂的溶液；
0.5～5mmol/L的含EDTA及其二钠盐的溶液；
5～40μmol/L的含抑制氧化低密度脂蛋白形成的物质的溶液，所述抑制氧化低密度脂蛋白形成的物质选自双嘧达莫和普罗布考；以及
3～30mmol/L的含茶碱的溶液。
2.如权利要求1所述的抗氧化采样装置，其特征在于，所述缓冲溶液选自柠檬酸盐溶液或磷酸盐溶液；所述受阻酚类抗氧化剂选自BHT、BHA、TBHQ、PG、维生素C、维生素E和多酚。
3.如权利要求1所述的抗氧化采样装置，其特征在于，所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.05～2mol/L柠檬酸钠溶液、5～15μmol/L BHT溶液、10～25μmol/L维生素E溶液、0.8～1.5mmol/L EDTA溶液、10～25μmol/L双嘧达莫溶液以及10～20mmol/L茶碱溶液。
4.如权利要求3所述的抗氧化采样装置，其特征在于，所述复合抗氧化剂中组分溶液浓度为：
0.1mol/L柠檬酸钠溶液、10μmol/L BHT溶液、20μmol/L维生素E溶液、1mmol/L EDTA溶液、20μmol/L双嘧达莫溶液以及15mmol/L茶碱溶液。
5.如权利要求1所述的抗氧化采样装置，其特征在于，所述复合抗氧化剂由下述浓度的溶液混合而成：
0.05～2mol/L柠檬酸钠溶液、5～15μmol/L BHT溶液、10～25μmol/L维生素E溶液、0.8～1.5mmol/L EDTA溶液、10～25μmol/L普罗布考溶液以及10～20mmol/L茶碱溶液。
6.如权利要求1所述的抗氧化采样装置，其特征在于，所述涂覆面积不少于内壁总面积的3/4。
7.一种权利要求3-4中任一项所述抗氧化采样装置中复合抗氧化剂的制法，所述制法包括：
步骤1、分别配制所述浓度的柠檬酸钠溶液、EDTA溶液、BHT溶液、维生素E溶液、双嘧达莫溶液以及茶碱溶液；
步骤2、将配置好的上述各种溶液混合均匀，即得所述用于生化检测标本的复合抗氧化剂。
8.如权利要求7所述抗氧化采样装置中复合抗氧化剂的制法，所述步骤1中配制各溶液的方法具体为：
将柠檬酸盐加入蒸馏水配置成所述浓度的缓冲溶液；
将Na2H2Y·2H2O置于烧杯中加蒸馏水，微热溶解后进行稀释，摇匀然后用CaCO3作为基准物进行标定，即得所述浓度的EDTA溶液；
将BHT标准物质溶于甲醇溶液中，定容，得到所述浓度的BHT溶液；
将维生素E置于棕色容量瓶中，用乙烷定容，即得维生素E溶液，避光保存；
取粉状双嘧达莫置于容器，加0.01mol/L盐酸溶液适量，溶解完全后，继续加入0.01mol/L盐酸溶液定量稀释制成所述浓度的双嘧达莫溶液；
将茶碱加水微热溶解后进行稀释成所述浓度，摇匀，即得茶碱溶液。
9.如权利要求7所述抗氧化采样装置中复合抗氧化剂的制法，其特征在于，所述步骤2中混合各种溶液时，还加入1～50g/L可溶性的增粘剂，所述增粘剂选自聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇6000、琼脂糖和果胶酸钙中的一种或几种。
10.一种权利要求1所述的抗氧化采样装置的制备方法，所述抗氧化采样装置为采样管，所述制备方法包括：
将复合抗氧化剂溶液倒入管状容器内，盖上密封盖，翻转晃荡，直至所述管状容器内壁均匀挂浆，随后将多余溶液倒出，即用或者管壁溶液干燥后待用。
11.一种如权利要求1所述的抗氧化采样装置在生化检验、免疫检验、微生物检验、血液检验以及寄生虫检验中的用途。
12.如权利要求11所述的抗氧化采样装置的用途，所述装置用于血液、血清、血浆、洗嗽液、汗液、粘液、阴道分泌物、毛发、体腔的体液、细胞、活组织中的取样。
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