CN107312769A - 一种抗生素替代品氧化酶的制备方法 - Google Patents

一种抗生素替代品氧化酶的制备方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107312769A
CN107312769A CN201710671341.5A CN201710671341A CN107312769A CN 107312769 A CN107312769 A CN 107312769A CN 201710671341 A CN201710671341 A CN 201710671341A CN 107312769 A CN107312769 A CN 107312769A
Authority
CN
China
Prior art keywords
glucose oxidase
antibiotic
strain
gene
substitutes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710671341.5A
Other languages
English (en)
Inventor
季全
季一全
汤佳
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Wuhu Whole Technology Co Ltd
Original Assignee
Wuhu Whole Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Wuhu Whole Technology Co Ltd filed Critical Wuhu Whole Technology Co Ltd
Priority to CN201710671341.5A priority Critical patent/CN107312769A/zh
Publication of CN107312769A publication Critical patent/CN107312769A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
    • C12N15/80—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi
    • C12N15/81—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts
    • C12N15/815—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for fungi for yeasts for yeasts other than Saccharomyces
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y101/00—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1)
    • C12Y101/03—Oxidoreductases acting on the CH-OH group of donors (1.1) with a oxygen as acceptor (1.1.3)
    • C12Y101/03004—Glucose oxidase (1.1.3.4)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Fodder In General (AREA)

Abstract

本发明公开了一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：葡萄糖氧化酶天然产菌株的基因的选育、诱变基因的克隆、含葡萄糖氧化酶基因工程菌构建、葡萄糖氧化酶工程菌株的发酵培养及后处理的步骤，建立了液态发酵工艺与膜分离技术和喷雾干燥技术相耦合葡萄糖氧化酶的生产工艺流程，并研究了耐温、pH范围宽、活力高的葡萄糖氧化酶高产菌株的选育及构建、产品的稳定性；本发明的方法提升酶制剂研发、生产方面的技术水平，促进酶制剂行业的发展，减少抗生素的使用或者部分替代抗生素，提高机体的免疫力并可促进机体生长，不会产生菌体抗药性或药物残留，具有高价值的经济效益和社会效益。

Description

一种抗生素替代品氧化酶的制备方法
技术领域
本发明涉及一种氧化酶的制备方法，特备是一种抗生素替代品氧化酶的制备方法。
背景技术
随着畜牧业的快速发展，饲料中抗生素的使用已经成为畜牧业可持续、健康发展的关键问题。抗生素在畜牧领域的滥用，直接导致了耐药性、毒副作用、环境污染等问题，已经引起了世界各国的高度重视，更为严重的是抗生素在动物产品中的残留，对人类食品安全构成了严重的威胁。随着社会不的断进步，人们对食品和环境质量的要求越来越高，近几年来的大量研究证明，在畜禽饲料中长期且大量使用抗生素作为饲料添加剂存在着许多弊端，然而我国是一个发展中国家，生产力发展水平不高，因此很快完全禁止在畜禽饲料中使用抗生素目前来说是不现实的，抗生素替代品已经成为行业发展研究的的重要关注点，开发绿色、高效、无污染的饲料添加剂已经成为未来畜牧业健康发展的关键。酶制剂可作为抗生素替代方案的一个产品，已经被业界广泛关注。在饲料中添加酶制剂，可以直接补充内源酶的不足、促进饲料营养物质的消化，也可以间接提高机体免疫力、减少粪便排放、降低环境污染等。但传统酶制剂主要是直接补充体内营养性消化酶不足，间接去除饲料中的抗营养物质或者增加动物内原酶的分泌，不能直接作为抗生素替代品添加到饲料中杀灭细菌、调节肠道微生物菌群结构，提高动物的抗病能力和免疫能力。
葡萄糖氧化酶(Glucose oxidase,GOD)是一种需氧脱氢酶，其系统名称为β－D－葡萄糖氧化还原酶 ( EC1.1.3.4)。葡萄糖氧化酶通常与过氧化氢酶组成一个氧化还原酶系统。葡萄糖氧化酶在分子氧的存在下，专一地氧化葡萄糖生成葡萄糖酸和过氧化氢，同时消耗氧气，而过氧化氢则分解生成水。葡萄糖氧化酶因其天然、无毒副作用而作为食品工业中一种重要的工业用酶，广泛用于葡萄酒、啤酒、果汁、奶粉等食品脱氧、面粉改良、防止食品褐变等方面。
葡萄糖氧化酶的作用产物为有机酸和过氧化氢，应用于饲料行业，能够替代部分抗生素或降低抗生素使用量，具有脱氧、杀菌的作用； 能够提高机体的免疫力并可促进机体生长，不会产生菌体抗药性或药物残留。作为一种新型饲料酶制剂，GOD的生理功能主要表现在以下几个方面：GOD 在进入动物胃肠道后以葡萄糖作为酶解底物，生成葡萄糖酸和过氧化氢，其中葡萄糖酸内酯可以自发水解成葡萄糖酸，具有酸化剂相似的作用；过氧化氢具有广谱杀菌作用，可以起到抑制大肠杆菌、沙门氏菌等致病微生物生长繁殖的作用；GOD催化葡萄糖生成的葡萄糖酸可在肠道内发挥酸化剂和微生态制剂的双重作用，可使胃内食糜pH值降低，从而创造酸性环境，激活胃蛋白酶，有利于蛋白质、矿物质、维生素等营养成分的消化吸收，促进益生菌的增殖； 而有益菌大量增殖会形成微生态竞争优势，增强其他消化酶的生物活性，改善肠道菌群，促进肠道蠕动，提高营养物质的利用率，从而提高饲料转化效率；GOD在肠道消耗肠道内的氧气，造成厌氧环境，对预防和解除霉菌毒素中毒有很好的效果，可以促进动物消化道健康，提高动物对饲粮的消化利用；处于应激或病理状态的动物会产生大量自由基，当自由基超过机体自身的清除能力时就会破坏肠道上皮细胞。添加了GOD的畜禽饲料可以清除这些自由基，因为GOD 具有氧化还原作用，能保护肠道上皮细胞的完整性，阻止大量病原菌的入侵，提高免疫力，促进动物健康快速生长；GOD可消耗饲料中的氧气，氧气的消耗不仅抑制了微生物的生长，还减少了饲料营养的损失，同时能防止饲料中的油脂酸败变质，起到防霉剂和抗氧化剂的双重作用，从而改善饲料品质，延长饲料保质期。
发明内容
针对上述提出的问题，本发明提供了一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，葡萄糖氧化酶作为一种新型的绿色、环保高效的饲料添加剂用于饲料中可减少抗生素的使用或者部分替代抗生素，广泛使用将为我们的绿色养殖的领域，其技术方案如下：
一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）葡萄糖氧化酶天然产菌株的基因的选育：
利用微生物菌种选育技术和菌种定向选育技术，选育出葡萄糖氧化酶基因来源的野生型菌株，并在在YPD平板上进行筛选，取孢子制成孢子悬液，利用微生物菌种选育技术获得一株葡萄糖氧化酶突变株GOD－AN1312；
（2）诱变基因的克隆：
将上述步骤（1）中筛选获得的葡萄糖氧化酶突变株GOD－AN1312的DNA为模板，PCR扩增获取葡萄糖氧化酶基因，得到的重组表达载体命名为Gegod-pPIC9K；
（3）含葡萄糖氧化酶基因工程菌构建：
将上述步骤（2）中重组表达载体Gegod-pPIC9K采用BglⅡ进行线性化，线性化后的重组载体电击转化毕赤酵母GS115，电转化后涂布于含G418的YPD平板上进行筛选，筛选获得葡萄糖氧化酶发酵水平最高的工程菌Gegod-pPIC9K-GS115；
（4）葡萄糖氧化酶工程菌株的发酵培养及后处理：
采用筛选获得的葡萄糖氧化酶重组菌株Gegod-pPIC9K-GS115进行高密度液体发酵培养，发酵结束后，发酵液可通过陶瓷膜或超滤膜进行后处理，复配载体进行喷雾干燥制得葡萄糖氧化酶成品。
进一步的，所述步骤（4）中发酵酶活可达到1500U/mL左右的发酵水平。
进一步的，所述步骤（2）中得到的重组表达载体Gegod-pPIC9K基因全长1755bp，编码584个氨基酸。
进一步的，所述步骤（1）中葡萄糖氧化酶突变株GOD－AN1312具有耐温、pH范围宽、高活性的性能。
进一步的，所述步骤（4）中发酵周期为7天。
进一步的，所述步骤（1）中微生物菌种选育技术包括等离子体（ARTP）、紫外线、硫酸二乙酯（DES）进行单独及复合诱变处理其中的任意一种进行单独或复合诱变处理，筛选获得一株葡萄糖氧化酶突变株。
本发明与现有技术相比，有如下优点：
葡萄糖氧化酶作为一种新型的绿色、环保高效的饲料添加剂用于饲料中可减少抗生素的使用或者部分替代抗生素，葡糖糖氧化酶的广泛使用将为我们的绿色养殖的新方案。采用筛选获得的葡萄糖氧化酶重组菌株Gegod-pPIC9K-GS115进行高密度液体发酵培养，发酵结束后，发酵液可通过陶瓷膜或超滤膜进行后处理，复配载体进行喷雾干燥制得葡萄糖氧化酶成品，发酵酶活可达到1500U/mL左右的发酵水平，与国内外目前技术相比，本项目的葡萄糖氧化酶通过高效表达后发酵水平大幅度提高，同时酶活保留时间长，在85℃的条件下没货率达80%以上，在酸性条件下pH值为3.5-6.5，酶活保留率在85%以上；利用其酶活高、稳定性强、成本低等优点，葡萄糖氧化酶替代抗生素在饲料中应用使得饲用葡萄糖氧化酶具有很大的市场空间，符合绿色养殖的标准，具有很高的经济效益和社会效益。
附图说明
图1为葡萄糖氧化酶发酵时间与酶活曲线图。
图2为葡萄糖氧化酶最适反应温度曲线图。
图3为葡萄糖氧化酶耐温性能曲线图。
图4为葡萄糖氧化酶抗胃蛋白酶、胰蛋白酶消化的性能曲线。
图5为葡萄糖氧化酶室温贮存稳定性能曲线。
图6为葡萄糖氧化酶最适反应pH曲线图。
图7为离子对葡萄糖氧化酶抑制或激活示意图。
具体实施方式
为进一步揭示本发明的技术方案，下面结合附图详细说明本发明的实施方式：
一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，采用分子生物学手段结合诱变技术，对现有的工程菌Gegod-pPIC9K-GS115中葡萄糖氧化酶基因来源的野生型菌株在YPD平板上进行筛选，通过微生物菌种选育技术，包括等离子体（ARTP）、紫外线、硫酸二乙酯（DES）进行单独及复合诱变处理，以及菌种定向选育技术等，选育出一株黑曲霉突变株，获得经表达产生的酶具有耐温、pH范围宽、活性高等特点的新的基因。
优选地，采用工程菌Gegod-pPIC9K-GS115的质粒及宿主细胞，以选育的野生型菌株的DNA为模板，PCR扩增获得葡萄糖氧化酶基因，构建一株高性能葡萄糖氧化酶的基因工程菌，使其具有易培养、能高效表达和分泌葡萄糖氧化酶，进一步优化发酵培养基配方。
优选地，利用所构建及筛选获得的产酶菌种，研究发酵动力学和影响酶活力的相关因素，优化发酵工艺及条件，建立葡萄糖氧化酶工业化高密度液体发酵生产工艺；
优选地，研究浸提、陶瓷膜除菌、超滤浓缩或喷雾干燥法等方法对酶的提取收率、酶活的影响，确定最适的提取方法及工艺技术参数，建立完善的后提取生产工艺；采取盐析、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等方法分离纯酶，研究酶的最适温度、pH、抑制剂、促进剂、稳定性等特性；根据酶学特性，研究酶制剂配方及制备技术和工艺，提高酶制剂产品的稳定性，提高酶活的保持率。
优选地，选育酶活在1500U/g葡萄糖氧化酶高产菌株，实现液体发酵酶活达到1500U/g以上，发酵周期140小时以内。
采用上述技术方案，提升酶制剂研发、生产方面的技术水平，促进酶制剂行业的发展，葡萄糖氧化酶作为一种新型的绿色、环保高效的饲料添加剂用于饲料中可减少抗生素的使用或者部分替代抗生素，葡萄糖氧化酶的作用产物为有机酸和过氧化氢，具有脱氧、杀菌的作用； 能够提高机体的免疫力并可促进机体生长，不会产生菌体抗药性或药物残留。促进我国饲料业及养殖行业的可持续发展。葡萄糖氧化酶广泛应用于食品、饲料、制药、临床诊断等行业，本发明将为市场提供高水平，低价格的葡萄糖氧化酶产品，将极大地降低相关行业的生产成本，推动相关行业的发展。
实施例1：
（1）葡萄糖氧化酶天然生产菌株的诱变、培养
从自然界筛选获得葡萄糖氧化酶生产菌株（黑曲霉，Aspergillus niger），在PDA平板上培养，取孢子制成孢子悬液，然后采用紫外线、硫酸二乙酯（DES）进行单独或复合诱变处理，筛选获得一株葡萄糖氧化酶突变株GOD－AN1312；
（2）黑曲霉（GOD－AN1312）葡萄糖氧化酶基因的克隆
采用RNA提取试剂盒，提取黑曲霉（GOD－AN1312）的总RNA，合成第一链cDNA。以cDNA为模板，设计引物进行PCR扩增，并将PCR产物进行EcoRI和NotI双酶切，然后与经过同样酶切的毕赤酵母表达载体pPIC9K相连接，连接产物转化大肠杆菌Topl0感受态细胞，经抗生素G418筛选后，获得阳性克隆。提取阳性克隆的质粒并进行测序。测序结果表明，克隆得到的DNA含有葡萄糖氧化酶完整的开放阅读框。该葡萄糖氧化酶基因（Gegod）全长1755bp，编码584个氨基酸，得到的重组表达载体命名为Gegod-pPIC9K；
（3）含葡萄糖氧化酶基因Gegod的毕赤酵母工程菌构建
将上述重组表达载体Gegod-pPIC9K采用BglⅡ进行线性化，线性化后的重组载体电击转化毕赤酵母GS115，电转化后涂布于含G418的YPD平板上进行筛选，筛选获得葡萄糖氧化酶发酵水平最高的工程菌Gegod-pPIC9K-GS115；
（4）葡萄糖氧化酶工程菌株的发酵培养及后处理
采用筛选获得的葡萄糖氧化酶重组菌株Gegod-pPIC9K-GS115进行高密度液体发酵培养，发酵结束后，发酵液可通过陶瓷膜或超滤膜进行后处理，复配载体进行喷雾干燥制得葡萄糖氧化酶成品。
（5）葡萄糖氧化酶性能指标的研究
本发明产品液体发酵酶活达到1500U/g以上，发酵周期7天左右，发酵时间和发酵酶活如图1所示；经后提取工艺，获得酶活2000U/g的产品，酶活回收率≥90%，葡萄糖氧化酶反应温度和相对酶活的关系如图2所示；在耐热性能：产品经85℃处理1min，酶活保留率≥80%，如图3所示；葡萄糖氧化酶具有优良的抗胃蛋白酶和胰蛋白酶消化能力，胃蛋白酶处理90min后，酶活性保留86.2%，用胰蛋白酶处理90 min后，保留83.1%，葡萄糖氧化酶耐温性处理时间和剩余酶活的关系如图4所示；产品在室温存放一年酶活保留90%以上，产品在室温保留的条件下酶活指数如图5所示；产品在酸性环境中（pH3.5-6.5）酶活保留率≥85%以上，酸性条件和酶活的关系如图6所示； Ca2+、Mg2+ 、Fe2+、Zn2+对酶活有一定的激活作用，K+、Mn2 +、Co2+、EDTA对酶活影响不大，Fe3+、Cu2+、SDS则对酶活有一定程度的抑制作用，如图7所示。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应以所述权利要求的保护范围为准。

Claims (6)

1.一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
（1）葡萄糖氧化酶天然产菌株的基因的选育：利用微生物菌种选育技术和菌种定向选育技术，选育出葡萄糖氧化酶基因来源的野生型菌株，并在在YPD平板上进行筛选，取孢子制成孢子悬液，利用微生物菌种选育技术获得一株葡萄糖氧化酶突变株GOD－AN1312；
（2）诱变基因的克隆：将上述步骤（1）中筛选获得的葡萄糖氧化酶突变株GOD－AN1312的DNA为模板，PCR扩增获取葡萄糖氧化酶基因，得到的重组表达载体命名为Gegod-pPIC9K；
（3）含葡萄糖氧化酶基因工程菌构建：将上述步骤（2）中重组表达载体Gegod-pPIC9K采用BglⅡ进行线性化，线性化后的重组载体电击转化毕赤酵母GS115，电转化后涂布于含G418的YPD平板上进行筛选，筛选获得葡萄糖氧化酶发酵水平最高的工程菌Gegod-pPIC9K-GS115；
（4）葡萄糖氧化酶工程菌株的发酵培养及后处理：采用筛选获得的葡萄糖氧化酶重组菌株Gegod-pPIC9K-GS115进行高密度液体发酵培养，发酵结束后，发酵液可通过陶瓷膜或超滤膜进行后处理，复配载体进行喷雾干燥制得葡萄糖氧化酶成品。
2.根据权利要求1所述的一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中发酵酶活可达到1500U/mL左右的发酵水平。
3.根据权利要求1所述的一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（2）中得到的重组表达载体Gegod-pPIC9K基因全长1755bp，编码584个氨基酸。
4.根据权利要求1所述的一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中葡萄糖氧化酶突变株GOD－AN1312具有耐温、pH范围宽、高活性的性能。
5.根据权利要求1所述的一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（4）中发酵周期为7天。
6.根据权利要求1所述的一种抗生素替代品氧化酶的制备方法，其特征在于：所述步骤（1）中微生物菌种选育技术包括等离子体（ARTP）、紫外线、硫酸二乙酯（DES）进行单独及复合诱变处理其中的任意一种进行单独或复合诱变处理，筛选获得一株葡萄糖氧化酶突变株。
CN201710671341.5A 2017-08-08 2017-08-08 一种抗生素替代品氧化酶的制备方法 Pending CN107312769A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710671341.5A CN107312769A (zh) 2017-08-08 2017-08-08 一种抗生素替代品氧化酶的制备方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710671341.5A CN107312769A (zh) 2017-08-08 2017-08-08 一种抗生素替代品氧化酶的制备方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107312769A true CN107312769A (zh) 2017-11-03

Family

ID=60175559

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710671341.5A Pending CN107312769A (zh) 2017-08-08 2017-08-08 一种抗生素替代品氧化酶的制备方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107312769A (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109430537A (zh) * 2018-12-29 2019-03-08 北京盛拓达生物技术有限公司 葡萄糖氧化酶在饲料中的应用
CN109864188A (zh) * 2019-02-28 2019-06-11 大连大学 一种含低温葡萄糖氧化酶的饲料添加剂及其用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103525778A (zh) * 2013-10-18 2014-01-22 江南大学 一种催化活性提高的葡萄糖氧化酶突变体

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103525778A (zh) * 2013-10-18 2014-01-22 江南大学 一种催化活性提高的葡萄糖氧化酶突变体

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109430537A (zh) * 2018-12-29 2019-03-08 北京盛拓达生物技术有限公司 葡萄糖氧化酶在饲料中的应用
CN109864188A (zh) * 2019-02-28 2019-06-11 大连大学 一种含低温葡萄糖氧化酶的饲料添加剂及其用途

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Panesar et al. Biotechnological approaches for the value addition of whey
CN103535511B (zh) 一种发酵高温豆粕产富肽富益生元饲料的制作方法
Yadav et al. Bioconversion of renewable resources into lactic acid: an industrial view
CN102094054B (zh) 一种枯草杆菌抗菌脂肽的生产方法及其在仔猪饲料中的应用
CN101455267A (zh) 一种富含饲用功能肽的发酵豆粕制备方法
CN103173371B (zh) 酿酒酵母与嗜酸乳杆菌的饲料用复合微生物制剂的生产
CN106376725A (zh) 一种生物发酵饲料及其制备方法
CN103468594B (zh) 一种产朊假丝酵母菌株及其应用
CN106754527A (zh) 一种中草药复合微生态制剂及其制备方法和用途
Faria-Oliveira et al. Yeast: world’s finest chef
US20200109428A1 (en) Process for producing high protein biomass from starch-containing cereal materials by yeast strains
CN107279467A (zh) 一种微生物复合菌剂用于畜牧养殖的方法
CN107312769A (zh) 一种抗生素替代品氧化酶的制备方法
CN106858157A (zh) 一种用于水产养殖的菌制剂
CN100491533C (zh) 改良的高比活木聚糖酶及其基因、包括该基因的表达载体和重组酵母细胞以及表达方法
CN107760612A (zh) 一种黑曲霉yy07菌株及其在固体发酵生产饲用酸性蛋白酶中的应用
CN104872376A (zh) 一种以脱脂米糠为原料两步发酵法制备益生素的方法
CN116789477A (zh) 一种活性肥水剂的生产方法及在贝藻体系中的应用
CN1054031C (zh) 发酵食品产品的生产
Jamilah et al. Activity of proteolytic and amylolytic enzymes from Bacillus spp. isolated from shrimp ponds
CN104357425A (zh) 一种新型α-半乳糖苷酶NGAL及其基因和应用
CN113528599B (zh) 一种高效螯合型酵素肽的生产方法
CN100398645C (zh) 用化学合成和分子进化获得酵母表达高比活植酸酶基因
CN1233826C (zh) 一种重组毕赤酵母乳糖酶及其应用
CN1272260C (zh) 养殖动物微生物饮用水改良剂及制作方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20171103

WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication