CN107286326A - 快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体及其制备和应用 - Google Patents

快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体及其制备和应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体，是由含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物通过自组装而成的，含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物由含有甲氧基的钯作为引发剂通过一锅法合成，即同时引发五氟苯酚异腈单体、四苯乙烯基官能化的苯异腈单体、L型亲水苯异腈单体三种单体的聚合形成两亲性嵌段共聚物，再利用胱胺作为交联剂，实现两亲性嵌段共聚物的交联，得到的含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物，其结构式如下：R1为含有生色团TPE的基团，R2为左手螺旋的PEG亲水链；该纳米载体能够用于药物负载，输运和可控释放以及细胞成像、荧光分子探针。

Description

快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子 纳米载体及其制备和应用
技术领域
本发明涉及聚合物反应领域，具体涉及一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体及其制备和应用。
背景技术
近年来，随着纳米技术与合成化学的飞速发展，纳米载体在生物医学领域中的应用研究受到越来越多的关注；其中，高分子基纳米载体为生物医学成像、诊断、以及药物输运提供了新的手段和思路。研究表明，纳米至亚微米尺度的载体对组织粘膜有着较强的吸附和穿透，高分子基胶束、囊泡等纳米结构可通过在肿瘤组织内的增强渗透和滞留(EPR)效应而“被动靶向”至肿瘤部位。
对于具有生物相容性的两亲性嵌段共聚物而言，其在水溶液中的浓度达到临界胶束浓度(CMC)以上时能形成以亲水嵌段为外壳、以疏水嵌段为内核的组装体，这就赋予了疏水内核增溶憎水性染料分子(如尼罗红)或药物分子的能力，从而实现对肿瘤部位的光学成像及抗癌药物的输运。
细胞膜具有选择透过性，因此细胞膜对于输运药物的高分子纳米载体有很高的要求。一般细胞的表面环境是左手螺旋的。因此，对于合成单一左手螺旋的两亲性高分子纳米载体是非常重要的。
两亲性共聚物高分子纳米载体中若含有二硫键，那么二硫键是可以被过量谷胱甘肽(GSH)切割。研究表明，细胞外和细胞内环境之间的GSH水平显然不同。此外，与正常组织相比，肿瘤组织高度减少，肿瘤细胞质中GSH的浓度比正常细胞高几倍。因此，在还原型物质含量较高的肿瘤细胞中，二硫键就很容易被切割，被还原成巯基。所以由于二硫键的存在，二硫键对于肿瘤细胞内还原性物质的响应，所以使得负载抗癌药物或者药物模型分子(尼罗红)的高分子纳米载体能够在还原性物质含量高的肿瘤细胞处聚集，还原性物质使得二硫键断裂，使得药物释放出来，达到治疗肿瘤细胞的目的。
聚苯异腈(PPIs)是最早发现的具有稳定螺旋构象的高分子之一，其性质稳定、单体易得、聚合方法简单、在溶液中和固态时均能很好的保持螺旋结构，因而是一种非常有意义的人工合成螺旋聚合物。之前有文章报道过利用特定的催化剂去引发苯异腈单体聚合并进行聚合物的组装，组装成理想的形态，形成非常稳定的刚性螺旋构象，并能稳定的存在于溶液、本体、以及基材表面。
因此结合以上的论述，本领域的技术人员致力于开发一种具有快速穿透细胞膜以及胞内环境响应性的比率型荧光成像的高分子基纳米载体，用来实现药物的负载、输运及可控释放；同时在细胞成像方面也有很好的应用。
发明内容
本发明的目的在于：提供一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体及其制备和应用
为了实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体，所述的纳米载体呈球形胶束结构，是由含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物通过自组装而成的，其中，含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物的结构式如下：
其中，x＝80-100，y＝100-200，R1为含有生色团TPE的基团，R2为左手螺旋的PEG亲水链。
优选地，R1的结构式如下：
R2的结构式如下：
优选地，一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体的制备：首先，由含有甲氧基的钯作为引发剂通过一锅法合成含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物，即同时引发五氟苯酚异腈单体、四苯乙烯基官能化的苯异腈单体、L型亲水苯异腈单体三种单体的聚合，形成两亲性的嵌段共聚物，再利用胱胺作为交联剂，实现两亲性嵌段共聚物的交联，得到的含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物；然后，再由含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物通过自组装得到产物。
优选地，一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体的制备，按以下步骤操作：
(1)具有生色团TPE的苯异腈单体的合成，按以下步骤操作：
a、含一个羟基的四苯乙烯基衍生物与对硝基苯甲酸反应，分离、洗涤并干燥后得到产物Ⅰ，其结构式为：
b、产物Ⅰ与氢气反应，分离、洗涤并干燥后得到产物Ⅱ，其结构式为：
c、产物Ⅱ与甲酸/乙酸酐反应，分离、洗涤并干燥后得到产物Ⅲ，其结构式为：
d、产物Ⅲ与三光气反应，分离、洗涤并干燥后得到单体Ⅰ，具有生色团TPE的苯异腈单体，其结构式为：
(2)含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物的合成，按以下步骤操作:
a、在聚合瓶中加入对甲氧基苯基的钯引发剂、单体Ⅰ和五氟苯酚异腈单体，即钯引发剂引发五氟苯酚异腈以及含有生色团TPE的苯异腈进行无规共聚合，期间得到的中间体Ⅰ，其结构式为：
其中，R1为含有生色团TPE的基团，R3为含有被五个氟原子取代的苯基基团；
b、当通过凝胶渗透色谱来追踪中间体Ⅰ达到预定分子量后，再加入左手螺旋的亲水苯异腈单体反应，达到预定的分子量，对产物进行分离、洗涤、干燥后得到两亲性嵌段共聚物，其结构式为：
其中，R1为含有生色团TPE的基团，R2为具有左手螺旋的PEG亲水链，R3为含有被五个氟原子取代的苯基基团；
c、将上述得到的两亲性嵌段共聚物加入到反应瓶中，再加入胱胺作为交联剂，实现上述的共聚物发生分子间的交联，将反应物进行分离、洗涤、干燥得到含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物，其结构式为：
其中R1为含有生色团TPE的基团；R2为手性PEG亲水链；
(3)具有快速穿透细胞膜和胞内环境响应性的比率型荧光成像的高分子基纳米载体的合成
将含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物通过自组装得到具有快速穿透细胞膜和胞内环境响应性的比率型荧光成像的高分子基纳米载体。
优选地，步骤(3)的具体过程如下：
将含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物溶于少量的THF中，将去离子水缓慢滴入到快速搅拌的THF溶液中，滴完后，透析得到具有快速穿透细胞膜和胞内环境响应性的比率型荧光成像的高分子基纳米载体。
优选地，当含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物为10mg时，需要添加的THF溶液的体积为0.45-0.55mL。
一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体的应用，能够用于药物负载，输运和可控释放以及细胞成像、荧光分子探针。
本发明的有益效果在于：
1、纳米载体中含有生色团TPE分子，并且令纳米载体负载药物模型分子尼罗红后，可以根据TPE荧光分子以及尼罗红的荧光强度的比率型变化来追踪纳米载体进入细胞的情况以及进入细胞后对还原性物质的响应性以及作用于肿瘤细胞的情况。更加直观、方便。
2、由于使用交联剂使得高分子纳米载体含有二硫键，所以此高分子纳米载体会对细胞内的还原性物质(例如：GSH)有响应。当载体负载药物模型分子尼罗红时，对于GSH的响应性直观表现就是TPE以及尼罗红荧光强度比率型变化：TPE的荧光强度(蓝色)逐渐增强；尼罗红的荧光强度(红色)逐渐减弱。从两种荧光强度的比率型变化，可以更为实时、精准地跟踪纳米载体的载药以及释放的过程。
3、纳米载体的外层为具有左手螺旋结构的聚苯异腈亲水链，在水中能保持很好的螺旋结构，模拟细胞穿膜肽，与细胞膜相互作用更强，促进纳米载体更快、更高效地进入细胞；
4、纳米载体的外层的亲水链为PEG修饰，具有良好的生物相容性；
5、设计的聚合物自组装形成球状的胶束纳米载体后，可以负载药物，且在体内可以被降解，达到治疗肿瘤细胞的目的；
6、聚合过程可控，得到的聚合物分子量均一，分子量分布窄。
附图说明
图1为本发明实施实例1中的含有生色团TPE的苯异腈单体的合成路线；
图2为本发明实施实例1中的含有生色团TPE的苯异腈单体合成过程中的每步1HNMR(CDCl3，600M Hz)，相应的化学位移已在图中标出；
图3为本发明实施实例1中的含有生色团TPE的苯异腈单体的13C NMR(CDCl3，600MHz)；
图4为本发明实施实例1中的含有生色团TPE的苯异腈单体的红外谱图，相应特征基团的波数已标出；
图5为本发明实施实例2中的两亲性交联嵌段共聚物的合成路线；
图6为本发明实施实例2中的含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物的凝胶渗透色谱(GPC)图(Mn＝34.5kDa,PDI＝1.18)；
图7为本发明实施实例2中的含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物的1HNMR(CDCl3，600M Hz)，相应的化学位移已在图中标出；
图8为本发明实施实例2中的含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物的红外谱图，相应特征基团的波数已标出；
图9为本发明具体实例4中的细胞实验图，为了探究负载药物模型分子尼罗红的高分子纳米载体进入细胞的速度。将高分子纳米载体的溶液与细胞共培养。追踪了共培养0-6小时的尼罗红的荧光强度的变化。由细胞实验图可以看出，共培养1小时时，可以看出细胞已经有尼罗红微弱的红色荧光，随着共培养时间的延长，尼罗红的红色荧光逐渐增强，当时间为6小时时，红色的荧光已经特别强。表明负载药物模型分子尼罗红的高分子纳米载体成功、充分的穿过细胞膜进入了细胞。
图10为本发明实施实例5中的两亲性交联嵌段共聚物的体外对于还原剂(DTT)的响应性比率型荧光实验图，加入DTT后追踪TPE以及尼罗红的荧光强度对于DTT随着时间的变化，通过图片可以很清晰的发现：加入DTT，0-4小时的时候，TPE的蓝色荧光很微弱，随着时间的延长，8小时后蓝色荧光增强，24小时的时候TPE的荧光强度是特别亮的蓝光，与刚加入DTT时荧光形成鲜明的对比；发红色荧光的尼罗红在刚加入DTT时红色荧光最强，随着时间的延长，到加入DTT 12小时时，尼罗红的红色荧光明显变暗。当追踪到36小时时，尼罗红的红光已经基本看不到了。通过TPE以及尼罗红荧光强度比率型变化可以得出负载药物模型分子的高分子纳米载体在体外对于还原性物质有一个很好的响应性。
图11为本发明实施实例5中细胞实验图，为了探究负载药物模型分子尼罗红的高分子纳米载体对于细胞内还原性物质的响应性。当高分子纳米载体进入细胞后，追踪TPE以及尼罗红的同一时间荧光强度的变化。由细胞荧光成像图可以看出，当负载药物模型分子尼罗红的纳米粒子进入细胞0小时时，尼罗红的红色荧光很强，TPE的蓝色荧光很弱。随着进入细胞时间的延长，尼罗红的红色荧光逐渐减弱，到48小时后，尼罗红的红色荧光已经很弱，相反TPE的蓝色荧光已经变得特别强。通过以上的TPE以及尼罗红的荧光强度的明显的比率型变化证明该纳米载体将药物输送到细胞内部，并对细胞内的还原性物质有很好的比率型的荧光响应性。
具体实施方式
实施实例1：含有四苯乙烯基(TPE)基团的苯异腈单体的合成
4-羟基-二苯甲酮(1eq)，二苯甲酮(1eq)，锌粉(4.2eq)，无水THF，加入两口烧瓶中，抽真空-充氮气，氮气氛围下，在-20℃下缓慢加入TiCl4，反应半小时，温度上升至55℃，过夜回流反应。TLC跟踪反应结束，用10％碳酸钾溶液加无水乙醚进行萃取，得到的有机相用盐水萃取，无水硫酸钠干燥旋干。过硅胶柱(洗脱剂为二氯甲烷:石油醚＝4：1)，收集产物，旋干后真空干燥至恒重，得到含有一个羟基的四苯乙烯基衍生物。
对硝基苯甲酸(1.1eq)、EDCI(1.2eq)、DMAP(0.5eq)加入双口瓶中，二氯甲烷为溶剂，进行氮气保护，在氮气的环境下，加入用二氯甲烷溶解的含有一个羟基的四苯乙烯基衍生物(1eq)。0℃反应半小时再转到室温反应，TLC跟踪反应结束后，水洗，饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和氯化钠溶液洗，收集有机相，加无水硫酸钠干燥，抽滤除去无水硫酸钠，旋蒸除去溶剂，过硅胶柱提纯(洗脱剂为二氯甲烷)，收集产物，除去溶剂，真空干燥至恒重。得到产物Ⅰ，其结构式为：
产物Ⅰ、Pd/C按质量比1：0.1的比例加入双口瓶中，加入乙醇：二氯甲烷(v:v＝1:1)，先置换氮气，然后置换为氢气，常温反应，TLC跟踪反应至完全，抽滤除去Pd/C，旋蒸除去溶剂，真空干燥至恒重。得产物Ⅱ，其结构式为：
产物Ⅱ(1eq)用乙酸乙酯(EA)溶解，加入双口瓶中，抽真空-充氮气重复3-5次，甲酸(12.5eq)、乙酸酐(2.5eq)按体积比2:1混合搅拌后，冰浴、氮气氛围下，逐滴滴入到反应液中，滴加完毕后转移至室温反应，TLC跟踪反应结束后，用水洗，饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和氯化钠溶液洗，收集有机相，加无水硫酸钠干燥，抽滤除去无水硫酸钠，旋蒸除去溶剂，过硅胶柱提纯(洗脱剂为二氯甲烷)，收集产物，除去溶剂，真空干燥至恒重。得到产物Ⅲ，其结构式为：
产物Ⅲ用二氯甲烷溶解，加入双口瓶中，抽真空-充氮气，冰浴条件下加入三乙胺，搅拌，称量好的三光气用二氯甲烷溶解，冰浴、氮气氛围下，逐滴滴入到反应液中，TLC跟踪反应结束后，用水洗，饱和碳酸氢钠溶液洗，饱和氯化钠溶液洗，收集有机相，加无水硫酸钠干燥，抽滤除去无水硫酸钠，旋蒸除去溶剂，过硅胶柱提纯(洗脱剂为石油醚：二氯甲烷＝1：1)，收集产物，除去溶剂，真空干燥至恒重。分离、洗涤并干燥后得到单体Ⅰ，其结构式为：
含有生色团TPE的苯基异腈单体的合成路线如图1所示。
实施实例2：含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物的合成
在聚合瓶中加入含甲氧基苯基的钯引发剂：含有生色团TPE分子的苯基异腈单体：五氟苯酚异腈单体摩尔比为1：10：70，抽真空-充氮气，氮气氛围下加入无水THF，55℃反应，反应过夜，通过凝胶渗透色谱(GPC)追踪，至分子量不再增加，可以得到疏水部分聚合物中间体Ⅰ，结构式为：
其中，R1为含有生色团TPE的基团，R3为含有被五个氟原子取代的苯基基团；
待上述反应物的分子量不再有变化时，往聚合瓶中加入手性亲水苯异腈单体(50eq)，55℃反应，反应过夜，至分子量不再增加，用无水乙醚沉淀，真空干燥至恒重，得到两亲性嵌段共聚物，结构式为：
其中，R1为含有生色团TPE的基团，R2为具有左手螺旋的PEG亲水链，R3为含有被五个氟原子取代的苯基基团；
将上述得到的两亲性二嵌段共聚物(1eq)加入到聚合瓶中，在氮气的环境下，再加入胱胺(0.00075eq)作为交联剂，55℃下反应6小时。实现合成的两亲性二嵌段共聚物发生分子间的交联，将反应物进行分离、洗涤、干燥得到最终的交联的两亲性二嵌段共聚物，其结构式为：
其中R1为含有生色团TPE的基团；R2为手性PEG亲水链；
含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物的合成路线如图5所示。
实施实例3：球形胶束结构的纳米载体的合成
取实施实例2中的含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物溶于少量THF中，将去离子水缓慢缓慢滴入到剧烈搅拌的聚合物溶液中(转速：1400-1600rpm，1h滴完)。去离子水滴完后，保持高速(转速为1400-1600rpm)搅拌25-35min，之后低速(转速为300-500rpm)搅拌2-3h，转移到透析袋中用去离子水透析8-12h(间隔2h换一次去离子水)，得到球形纳米载体胶束。
实施实例4：纳米载体穿过细胞膜的特性
将本发明所合成的交联两亲性二嵌段聚合物与疏水性荧光分子尼罗红(抗癌药物模型分子)共组装，(组装方法如实施例3所示)，形成含有荧光分子的疏水内核和具有亲水性左手螺旋结构外壳球形胶束。与细胞共培养，通过荧光共聚焦显微镜观察纳米载体进入细胞内的时间，发现在1小时左右能观察到胶束内部由尼罗红发出的红色荧光，证明该纳米载体已进入细胞内并且把药物模型分子输运至细胞内部。
纳米载体穿过细胞膜特性的细胞实验如图9所示。
实施实例5：纳米载体对细胞内还原型酶的响应性来释放药物，作用于肿瘤细胞的特性
将本发明所合成的交联嵌段共聚物与疏水性荧光分子尼罗红(抗癌药物模型分子)共组装，(组装方法如实施例3所示)，形成含有荧光分子的疏水内核和具有亲水性左手螺旋结构外壳的球形胶束。由细胞荧光成像图可以看出，当负载药物模型分子尼罗红的纳米粒子进入细胞0小时时，尼罗红的红色荧光很强，TPE的蓝色荧光很弱。随着进入细胞时间的延长，尼罗红的红色荧光逐渐减弱，到48小时后，尼罗红的红色荧光已经很弱，相反TPE的蓝色荧光已经变得特别强。通过以上的TPE以及尼罗红的荧光强度的明显的比率型变化证明该纳米载体将药物输送到细胞内部，并对细胞内的还原性物质有很好的比率型的荧光响应性。而且对于细胞有一个很好的比率型的荧光成像。
纳米载体进入细胞后对于胞内还原性物质的响应性比率型的荧光成像如图11所示。
以上详细描述了本发明的较佳具体实施例。应当理解，本领域的普通技术无需创造性劳动就可以根据本发明的构思做出诸多修改和变化。因此，凡本技术领域中技术人员依本发明的构思在现有技术的基础上通过逻辑分析、推理或者有限的实验可以得到的技术方案，皆应在本发明的保护范围内。

Claims (6)

1.一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体，其特征在于：所述的纳米载体呈球形胶束结构，是由含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物通过自组装而成的，其中，含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物的结构式如下：
其中，x＝80-100，y＝100-200，R1为含有生色团TPE的基团，R2为左手螺旋的PEG亲水链。
2.根据权利要求1所述的一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体，其特征在于：
R1的结构式如下：
R2的结构式如下：
3.一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体的制备，特征在于：首先，由含有甲氧基的钯作为引发剂通过一锅法合成含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物，即同时引发五氟苯酚异腈单体、四苯乙烯基官能化的苯异腈单体、L型亲水苯异腈单体三种单体的聚合，形成两亲性的嵌段共聚物，再利用胱胺作为交联剂，实现两亲性嵌段共聚物的交联，得到的含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物；然后，再由含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物通过自组装得到产物。
4.根据权利要求3所述的一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体的制备，特征在于：按以下步骤操作：
(1)具有生色团TPE的苯异腈单体的合成，按以下步骤操作：
a、含一个羟基的四苯乙烯基衍生物与对硝基苯甲酸反应，分离、洗涤并干燥后得到产物Ⅰ，其结构式为：
b、产物Ⅰ与氢气反应，分离、洗涤并干燥后得到产物Ⅱ，其结构式为：
c、产物Ⅱ与甲酸/乙酸酐反应，分离、洗涤并干燥后得到产物Ⅲ，其结构式为：
d、产物Ⅲ与三光气反应，分离、洗涤并干燥后得到单体Ⅰ，具有生色团TPE的苯异腈单体，其结构式为：
(2)含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物的合成，按以下步骤操作:
a、在聚合瓶中加入对甲氧基苯基的钯引发剂、单体Ⅰ和五氟苯酚异腈单体，即钯引发剂引发五氟苯酚异腈以及含有生色团TPE的苯异腈进行无规共聚合，期间得到的中间体Ⅰ，其结构式为：
其中，R1为含有生色团TPE的基团，R3为含有被五个氟原子取代的苯基基团；
b、当通过凝胶渗透色谱(GPC)来追踪中间体Ⅰ达到预定分子量后，再加入左手螺旋的亲水苯异腈单体反应，达到预定的分子量，对产物进行分离、洗涤、干燥后得到两亲性嵌段共聚物，其结构式为：
其中，R1为含有生色团TPE的基团，R2为具有左手螺旋的PEG亲水链，R3为含有被五个氟原子取代的苯基基团；
c、将上述得到的两亲性嵌段共聚物加入到反应瓶中，再加入胱胺作为交联剂，实现上述的共聚物发生分子间的交联，将反应物进行分离、洗涤、干燥得到含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物，其结构式为：
其中R1为含有生色团TPE的基团；R2为手性PEG亲水链；
(3)具有快速穿透细胞膜和胞内环境响应性的比率型荧光成像的高分子基纳米载体的合成
将含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物通过自组装得到具有快速穿透细胞膜和胞内环境响应性的比率型荧光成像的高分子基纳米载体。
5.根据权利要求4所述的一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体的制备，特征在于：
步骤(3)的具体过程如下：
将含有生色团的胞内环境响应性的两亲性嵌段共聚物溶于少量的THF中，将去离子水缓慢滴入到快速搅拌的THF溶液中，滴完后，透析得到具有快速穿透细胞膜和胞内环境响应性的比率型荧光成像的高分子基纳米载体。
6.一种快速穿透细胞膜及胞内环境响应性的比率型荧光成像高分子纳米载体的应用，其特征在于：能够用于药物负载，输运和可控释放以及细胞成像、荧光分子探针。
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