CN107271601B - 一种赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法，采用随行药材的水溶性成分直接对照，对其配方颗粒进行专属性薄层鉴别，此方法比以往分析方法更加精准、专属性更强、操作更简便；还包括对赤芍、白芍配方颗粒的差异性鉴别，对赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒采用甲醇‑乙醇与丙酮混合溶液进行前处理，然后利用薄层色谱进行比对，结果白芍色谱板多出一个明显颜色的斑点，进而对二者进行了区分。

Description

一种赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法
技术领域
本发明属于中药鉴别技术领域，尤其涉及一种赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法。
背景技术
白芍、赤芍，常用的中药材，均为毛茛科植物芍药，其主要活性成分为以芍药苷为代表的单萜苷类成分，五没食子酰葡萄糖为代表的没食子酸类成分等。芍药苷主要有效成分具有许多重要性的药理活性，如：抗炎、抗氧化、神经保护、抗肿瘤、止痛等作用。
然而，以现代中药药理认识而论，白芍和赤芍是两种截然不同的中药材；从植物学的角度来看，白芍与赤芍又同属一科植物即毛茛科，且几乎是同种。白芍和赤芍从外观上易于分辨，但赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒从外观特征上难于分辨。随着中国中药产业的不断发展，中药各种剂型也相应得到广泛推广，中药药品质量保证问题也愈来愈受到药品生产企业的重视，中药鉴别无疑是保证药品质量的一项重要手段，在显微鉴别、红外鉴别、指纹图谱鉴别等多种中药鉴别技术当中，薄层鉴别是一种重要的中药鉴别手段，具有高效、快速、准确的突出优点。
针对配方颗粒鉴别中，还没有赤芍、白芍配方颗粒鉴别方法，本发明采用薄层色谱方法对赤芍、白芍配方颗粒的专属性和差异性进行鉴别，解决了相近中药配方颗粒的无法区分的难题，同时弥补了赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒鉴别技术领域的一项空缺，可作为一种赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的专属鉴别和差异性鉴别的方法。
发明内容
本发明为了解决现阶段仅使用芍药苷无法鉴别赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的现状，提供了一种赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法，同时使用对照品和对照药材进行对照，其中对照药材处理方法与配方颗粒制法中的药材提取方法保持一致，即赤芍或白芍对照药材，加水煎煮，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇-乙醇和丙酮混合溶液超声溶解。赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒利用薄层色谱直接比对，进行二者区分。
所述药材处理方法包括如下步骤：
1)随行药材经加水煎煮，过滤，滤液蒸干后的残渣，加甲醇-乙醇和丙酮的混合溶液超声溶解；
2)赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒经特定浓度的乙醇超声溶解处理。
具体的，所述赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法，包括如下步骤：
(1)对照药材溶液的制备：分别取赤芍、白芍各2g，分别加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干残渣加2ml甲醇、乙醇和丙酮溶解；
(2)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加特殊溶剂2ml溶解,作为对照品；
(3)点样、展开、显色：吸取对照药材溶液、供试品溶液、芍药苷溶液10μl，分别点于同一薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂，在105℃下加热至有色斑点显色清晰。
优选的，所述赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法，
(1)所述的甲醇-乙醇和丙酮的混合溶液，组分比例为【(0:1)～(1:0)】；
(2)所述的甲醇-乙醇中乙醇浓度(40％～100％)；
(3)所述的展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸，展开剂各组分比例为【(20～40):(5～10):(8～12)：(0.1～0.3)】，所述显色剂为5％香草醛硫酸溶液；
(4)所述薄层板为硅胶G薄层板。
进一步，所述赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法：
(1)赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒与芍药苷溶液在薄层色谱Rf值为0.5的对应位置具有相同的紫色斑点；
(2)赤芍配方颗粒薄层色谱图(1a)与赤芍药材薄层色谱图(1)相应Rf位置上斑点一一对应，可用于赤芍配方颗粒的定性，所述的斑点个数均为8个，所述斑点的颜色从上往下依次为第1-3斑点为灰色，第4斑点为棕红色，第5斑点为紫色，第6斑点为紫色，第7-8斑点为灰色；
(3)白芍配方颗粒薄层色谱图(2a)相比于白芍药材薄层色谱图(2)、赤芍配方颗粒薄层色谱图(1a)在Rf值为0.5～0.7处多出一个红色斑点；
(4)白芍配方颗粒薄层色谱图(2a)与白芍药材薄层色谱图(2)在相应Rf位置有八个斑点能够一一对应。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明鉴别方法中包括对照药材溶液的制备，即同时以芍药苷、赤芍药材和白芍药材为对照品，且对照药材的处理方法与配方颗粒制法中的提取方法保持高度一致，均用水煎煮提取，相比于使用乙醇提取制得的对照药材溶液，采用水煎煮提取制得的对照药材溶液,其薄层色谱与赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒薄层色谱对比分析时更加准确，专属性更强；
(2)本发明中对照药材的处理方法与配方颗粒生产工艺保持高度一致，通过分析白芍配方颗粒供试品色谱相比于白芍药材对照品色谱、赤芍配方颗粒供试品色谱在Rf值为0.5～0.7处是否多出一个斑点，进而针对性地鉴别赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒是否按照配方颗粒标准工艺生产；
(3)本发明同时以芍药苷、赤芍药材和白芍药材为对照品，先对赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒定性，然后对照赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒的薄层色谱差异作进一步鉴别，弥补了赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒鉴别技术领域的一项空缺，可作为赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的专属鉴别方法；
(4)本发明操作简便、高效，适用于同科近源药材制剂的真伪鉴别。
附图说明
下面结合附图和实施例对本发明进一步说明：
图1：实施例1中的薄层色谱图(1为赤芍药材薄层色谱图、2为白芍药材薄层色谱图、1a赤芍配方颗粒薄层色谱图、2a白芍配方颗粒薄层色谱图、3为芍药苷薄层色谱图)。
具体实施方式
下面结合附图和实施例对本发明作进一步的说明：
实施例1
(1)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加乙醇制成2mg/ml的溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取对照药材2g，加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干，残渣加2ml甲醇-乙醇和丙酮(1:0)混合溶液溶解，其中乙醇在甲醇-乙醇中的百分比浓度为40％；
(3)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇-乙醇和丙酮(1:0)混合溶液2ml溶解；
(4)点样、展开、显色：吸取对照品溶液4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(20:8:10:0.3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。
实施例2
(1)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加乙醇制成2mg/ml的溶液；
(2)对照药材溶液的制备：取对照药材2g，加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干，残渣加2ml甲醇-乙醇和丙酮(1:0.1)混合溶液溶解，其中乙醇在甲醇-乙醇中的百分比浓度为50％；
(3)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇-乙醇和丙酮(1:0.1)混合溶液2ml溶解；
(4)点样、展开、显色：吸取对照品溶液4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。
实施例3
(1)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加乙醇制成2mg/ml的溶液
(2)对照药材溶液的制备：取对照药材2g，加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干，残渣加2ml甲醇-乙醇和丙酮(1:0.5)混合溶液溶解，其中乙醇在甲醇-乙醇中的百分比浓度为60％；
(3)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇-乙醇和丙酮(1:0.5)混合溶液2ml溶解；
(4)点样、展开、显色：吸取对照品溶液4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(30:6:15:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。
实施例4
(1)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加乙醇制成2mg/ml的溶液
(2)对照药材溶液的制备：取对照药材2g，加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干，残渣加2ml甲醇-乙醇和丙酮(1:1)混合溶液溶解，其中乙醇在甲醇-乙醇中的百分比浓度为70％；
(3)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇-乙醇和丙酮(1:1)混合溶液2ml溶解；
(4)点样、展开、显色：吸取对照品溶液4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(30:8:5:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。
实施例5
(1)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加乙醇制成2mg/ml的溶液
(2)对照药材溶液的制备：取对照药材2g，加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干，残渣加2ml甲醇-乙醇和丙酮(0.5:1)混合溶液溶解，其中乙醇在甲醇-乙醇中的百分比浓度为80％；
(3)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇-乙醇和丙酮(0.5:1)混合溶液2ml溶解；
(4)点样、展开、显色：吸取对照品溶液4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(30:8:5:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。
实施例6
(1)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加乙醇制成2mg/ml的溶液
(2)对照药材溶液的制备：取对照药材2g，加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干，残渣加2ml甲醇-乙醇和丙酮(0.1:1)混合溶液溶解，其中乙醇在甲醇-乙醇中的百分比浓度为90％；
(3)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇-乙醇和丙酮(0.1:1)混合溶液2ml溶解；
(4)点样、展开、显色：吸取对照品溶液4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(30:8:5:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。
实施例7
(1)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加乙醇制成2mg/ml的溶液
(2)对照药材溶液的制备：取对照药材2g，加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干，残渣加2ml甲醇-乙醇和丙酮(0:1)混合溶液溶解；
(3)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加甲醇-乙醇和丙酮(0:1)混合溶液2ml溶解；
(4)点样、展开、显色：吸取对照品溶液4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(30:8:5:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。
实施例8
(1)对照品溶液的制备：取芍药苷对照品适量，加乙醇制成2mg/ml的溶液
(2)对照药材溶液的制备：取对照药材2g，加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干，残渣加2ml乙醇和丙酮(1:1)混合溶液溶解，其中乙醇在甲醇-乙醇中的百分比浓度为100％；
(3)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇和丙酮(1:1)混合溶液2ml溶解；
(4)点样、展开、显色：吸取对照品溶液4μl，供试品溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(30:8:5:0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，在105℃下加热至斑点显色清晰。
本发明通过实施例中的薄层色谱方法，可以鉴别赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的差别，如图1所示，1为赤芍药材薄层色谱图、2为白芍药材薄层色谱图、1a为赤芍配方颗粒薄层色谱图、2a为白芍配方颗粒薄层色谱图、3为芍药苷薄层色谱图。
分析对比图1中各色谱图：(1)赤芍药材薄层色谱图1与白芍药材薄层色谱图2、赤芍配方颗粒薄层色谱图1a、白芍配方颗粒薄层色谱图2a、芍药苷薄层色谱图3相应的位置上显相同颜色的斑点，故供试品中都含有芍药苷成分；(2)赤芍配方颗粒薄层色谱图1a与赤芍药材薄层色谱图1相应位置上斑点一一对应，可用于赤芍配方颗粒的定性；(3)白芍配方颗粒供试品色谱相比于白芍药材对照品色谱、赤芍配方颗粒供试品色谱在在Rf值为0.5～0.7处多出一个斑点上，即在虚线位置出现未知a点，明显不同于赤芍配方颗粒，故通过硅胶G板可以快速鉴别赤芍和白芍配方颗粒。
以上实施例并非仅限于本发明的保护范围，所有基于本发明的基本思想而进行的修改或变动都属于本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法，其特征在于：1)赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒、药材水溶性成分的随行对照方法；2)赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒利用薄层色谱直接比对，进行二者区分；
具体包括如下步骤：
(1)对照药材溶液的制备：分别取赤芍、白芍各2g，分别加水50ml，回流提取1小时，过滤，蒸干残渣加2ml甲醇、乙醇和丙酮溶解；
(2)供试品溶液的制备：取赤芍配方颗粒、白芍配方颗粒各2g，分别用40ml的95％乙醇超声20分钟，过滤，滤液蒸干，残渣加特殊溶剂2ml溶解，作为对照品；
(3)点样、展开、显色：吸取对照药材溶液、供试品溶液、芍药苷溶液10μl，分别点于同一薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，喷以显色剂，在105℃下加热至有色斑点显色清晰；
其中，所述的甲醇-乙醇和丙酮的混合溶液，组分比例为0:1～1:0；而甲醇-乙醇中乙醇浓度40％～100％；所述的展开剂为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸，展开剂各组分比例为20～40：5～10：8～12：0.1～0.3，所述显色剂为5％香草醛硫酸溶液；所述薄层板为硅胶G薄层板。
2.根据权利要求1所述赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒的鉴别方法，其特征在于：
(1)赤芍配方颗粒和白芍配方颗粒与芍药苷溶液在薄层色谱Rf值为0.5的对应位置具有相同的紫色斑点；
(2)赤芍配方颗粒薄层色谱图(1a)与赤芍药材薄层色谱图(1)相应Rf位置上斑点一一对应，可用于赤芍配方颗粒的定性，所述的斑点个数均为8个，所述斑点的颜色从上往下依次为第1-3斑点为灰色，第4斑点为棕红色，第5斑点为紫色，第6斑点为紫色，第7-8斑点为灰色；
(3)白芍配方颗粒薄层色谱图(2a)相比于白芍药材薄层色谱图(2)、赤芍配方颗粒薄层色谱图(1a)在Rf值为0.5～0.7处多出一个红色斑点；
(4)白芍配方颗粒薄层色谱图(2a)与白芍药材薄层色谱图(2)在相应Rf位置有八个斑点能够一一对应。
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