CN107255635A - 咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸及用前述探针检测卵巢癌标记物浓度的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸及用前述探针检测卵巢癌标记物浓度的方法，属于卵巢癌的检测领域。本发明利用聚丁二炔纳米薄膜独特的物理化学性质，结合卵巢癌特异性靶标溶血磷脂酸的特性，设计出咪唑功能化的聚丁二炔纳米探针，通过LPA诱导PDA探针颜色的变化，实现对LPA检测分析，进而开发出相应的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸。本发明提供的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，能够实现对卵巢癌快速、灵敏、经济和准确地诊断。本发明提供的用咪唑功能化的聚丁二炔探针检测卵巢癌标记物浓度的方法，首次实现通过咪唑功能化的聚丁二炔探针紫外可见光吸收谱的变化测得样品的LPA浓度值。

Description

咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸及用前述探针检测卵巢癌标 记物浓度的方法
技术领域
本发明涉及卵巢癌的检测，具体涉及一种咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸及用前述探针检测卵巢癌标记物浓度的方法。
背景技术
卵巢癌的死亡率高居妇科癌症首位，超过宫颈癌及子宫内膜癌之和，是严重威胁妇女健康的最大疾患。由于卵巢癌早期缺少症状，即使有症状也不特异，筛查的作用又有限，因此早期诊断比较困难，就诊时60％～70％已为晚期，而晚期病例又疗效不佳。因此，虽然卵巢癌的发病率低于宫颈癌和子宫内膜癌居妇科恶性肿瘤的第三位，但死亡率却超过宫颈癌及子宫内膜癌之和，高居妇科癌症首位，是严重威胁妇女健康的最大疾患，故卵巢癌素有“沉默杀手”的恶名。如果能实现卵巢癌早期诊断，能极大地提高患者的生存概率，很大程度能够治愈。例如早期的卵巢癌如果仅限于局部，那么患者诊断后的5年生存率可以高达94％。因此实现对卵巢癌快速、灵敏、经济和准确地诊断具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种能够实现对卵巢癌快速、灵敏、经济和准确地诊断的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸及用前述探针检测卵巢癌标记物浓度的方法。
为了解决上述技术问题，本发明的技术方案具体如下：
一种咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，所述试纸用于检测卵巢癌；
包括：
试纸基地，其材料为硝酸纤维素膜材料；
设置在试纸基地一端上的吸附区，所述吸附区的材料为吸水材料，用于吸收检测过程中的水分；所述试纸基地另一端为样品区；
设置在试纸基地近中间位置的对照线；
设置在对照线右侧的测试线；
其特征在于，
所述对照线为通过在其下方沉积咪唑功能化的聚丁二炔探针和溶血磷脂酸形成的红色对照线；
所述测试线为通过在其下方沉积咪唑功能化的聚丁二炔探针形成的蓝色测试线。
在上述技术方案中，所述咪唑功能化的聚丁二炔探针是由下述方法制备得到的：
将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于二氯甲烷中，加入丁二炔酸(PCDA)，通入氮气，搅拌过夜；过滤除去沉淀物质，蒸发溶剂，通过硅胶柱提纯得到PCDA-NHS；将1-(3-氨基丙基)咪唑(1-(3-Am inopropyl)imidazole)溶于二氯甲烷，然后加入PCDA-NHS，搅拌1-48小时，然后抽干溶剂，用硅胶树脂提纯；将提纯后的产物，加入到碘甲烷的乙腈溶液中，反应1-48小时，蒸干溶剂，得到咪唑功能化的丁二炔衍生物，再将其超声溶解在水中，紫外聚合得到咪唑功能化的聚丁二炔探针。
在上述技术方案中，所述吸附区的横截面为长方形，宽为试纸基地宽度的三分之二，长为宽的2倍，所述吸附区的厚度为2mm。
在上述技术方案中，所述吸附区的材料为海绵。
在上述技术方案中，所述试纸基地的样品区上面还设置有吸附材料。
在上述技术方案中，所述吸附材料的横截面为正方形，边长为试纸基地宽度的三分之二，所述吸附区的宽度为1mm。
在上述技术方案中，所述吸附材料为海绵。
用咪唑功能化的聚丁二炔探针检测卵巢癌标记物浓度的方法，包括以下步骤：
步骤1、合成咪唑功能化的聚丁二炔探针
将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于二氯甲烷中，加入丁二炔酸(PCDA)，通入氮气，搅拌过夜；过滤除去沉淀物质，蒸发溶剂，通过硅胶柱提纯得到PCDA-NHS；将1-(3-氨基丙基)咪唑(1-(3-Am inopropyl)imidazole)溶于二氯甲烷，然后加入PCDA-NHS，搅拌1-48小时，然后抽干溶剂，用硅胶树脂提纯；将提纯后的产物，加入到碘甲烷的乙腈溶液中，反应1-48小时，蒸干溶剂，得到咪唑功能化的丁二炔衍生物，再将其超声溶解在水中，紫外聚合得到咪唑功能化的聚丁二炔探针；
步骤2、提取血清中的溶血磷脂酸(LPA)
人全血分别4000rpm离心5分钟、1000rpm离心5分钟，得到人血浆；将人血浆样品和甲醇、三氯甲烷混合溶剂混合，震动30秒，然后在4摄氏度冰箱里抚育 20分钟，取出，待样品温度恢复到室温后，2000rpm离心10分钟；取上清液加入磷酸缓冲溶液中，震动30秒，水相用三氯甲烷洗涤三次，用磷酸酸化，得到的酸化产物用固相萃取柱提纯，用氮气吹干后，溶入水中，得到LPA样品；
步骤3：紫外可见吸收测定LPA浓度
(1)测定在加入LPA样品前咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入LPA样品前吸收比例值B0；
(2)测定在加入LPA样品后咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入 LPA样品后吸收比例值B1；
(3)将B1和B1代入公式1，测量出LPA的浓度CR；
CR＝[(B0–B1)/B0]*100 (公式1)。
本发明的有益效果是：
本发明提供的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，能够实现对卵巢癌快速、灵敏、经济和准确地诊断。
本发明提供的用咪唑功能化的聚丁二炔探针检测卵巢癌标记物浓度的方法，首次实现通过咪唑功能化的聚丁二炔探针紫外可见光吸收谱的变化测得样品的LPA浓度值。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1为本发明提供的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸结构示意图。
图2为咪唑功能化的聚丁二炔探针紫外可见光吸收谱图，其中A)为不同LPA 浓度的加入引起聚丁二炔探针紫外可见光吸收谱的变化图；B)为通过聚丁二炔探针紫外可见光吸收谱的变化得到样品中的LPA浓度图。
图3为用咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸检测健康人血样和癌症患者血样的示意图。
图中的附图标记表示为：
1-试纸基地，2-吸附区，3-对照线，4-测试线，5-吸附材料。
具体实施方式
本发明的发明思想为：
本发明选择溶血磷脂酸(Lysophosphatidic Acid，LPA)作为卵巢癌标记物。溶血磷脂酸作为促细胞分裂剂在腹水中被确认，它能够诱导卵巢癌细胞增殖、存活、侵袭和抗化学治疗，但是正常的卵巢上皮细胞对LPA没有反应。这表明在卵巢癌的发生、发展中LPA具有重要作用。LPA是一个非常具有前景的指标。据报道，98％卵巢癌患者血清LPA浓度升高，其中卵巢癌早期患者(I期患者)阳性率也可高达为90％。而且LPA是一种脂类物质，很容易从血液、腹水、唾液等中进行提取。
聚丁二炔(PDA)是由丁二炔衍生物在紫外光诱导下聚合形成蓝色的聚合物。PDA具有很多优良的光学性质。例如，当目标物质插入聚丁二炔的支链中，可引起PDA的颜色变化。其原理是当目标物质插入支链时，通过干扰支链而引起聚合物主链上的共轭电子能级发生变化，进而导致聚合物颜色的改变。此外， PDA本身是一种高分子材料，很容易进行功能化修饰，并与POCT相关的试纸进行相应嫁接。
在这里，我们利用聚丁二炔纳米薄膜独特的物理化学性质，结合卵巢癌特异性靶标溶血磷脂酸的特性，设计相应的聚丁二炔纳米探针，该探针为可视化探针，通过LPA诱导PDA探针颜色的变化，实现对LPA检测分析，进而开发出相应的POCT卵巢癌检测试纸，实现对卵巢癌快速、灵敏、经济和准确地诊断。
下面结合附图对本发明做以详细说明。
参见图1：一种咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，所述试纸用于检测卵巢癌；
包括：
试纸基地1，其材料为硝酸纤维素膜材料；
设置在试纸基地1一端上的吸附区2，所述吸附区2的材料为吸水材料，用于吸收检测过程中的水分；所述试纸基地1另一端为样品区；
设置在试纸基地1近中间位置的对照线3；
设置在对照线3右侧的测试线4；
其特征在于，
所述对照线3为通过在其下方沉积咪唑功能化的聚丁二炔探针和溶血磷脂酸形成的红色对照线；
所述测试线4为通过在其下方沉积咪唑功能化的聚丁二炔探针形成的蓝色测试线；
将从卵巢癌患者血清中提取的溶血磷脂酸样品滴加至试纸基地1的样品区，所述溶血磷脂酸样品会渗透至测试线4处，与所述测试线4下方沉积的咪唑功能化的聚丁二炔探针结合，5分钟后观察：如果所述测试线4会从原本的蓝色转变为与对照线3相同的红色，便可判断存在卵巢癌；如果测试线4仍为蓝色，便可判断为不存在卵巢癌(参见图3)。
所述咪唑功能化的聚丁二炔探针是由下述方法制备得到的：
将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于二氯甲烷中，加入丁二炔酸(PCDA)，通入氮气，搅拌过夜；过滤除去沉淀物质，蒸发溶剂，通过硅胶柱提纯得到PCDA-NHS；将1-(3-氨基丙基)咪唑(1-(3-Am inopropyl)imidazole)溶于二氯甲烷，然后加入PCDA-NHS，搅拌1-48小时，然后抽干溶剂，用硅胶树脂提纯；将提纯后的产物，加入到碘甲烷的乙腈溶液中，反应1-48小时，蒸干溶剂，得到咪唑功能化的丁二炔衍生物，再将其超声溶解在水中，紫外聚合得到咪唑功能化的聚丁二炔探针。
所述吸附区(2)的横截面为长方形，宽为试纸基地(1)宽度的三分之二，长为宽的2倍，所述吸附区(2)的厚度为2mm。所述吸附区(2)的材料为海绵。所述试纸基地(1)的样品区上面还设置有吸附材料(5)。所述吸附材料(5) 的横截面为正方形，边长为试纸基地(1)宽度的三分之二，所述吸附区(2) 的宽度为1mm。所述吸附材料为海绵。
用聚丁二炔探针检测卵巢癌标记物浓度的方法，包括以下步骤：
步骤1：合成咪唑功能化的聚丁二炔探针
将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于20mL二氯甲烷中，加入丁二炔酸(PCDA)，通入氮气，搅拌过夜。过滤除去沉淀物质，蒸发溶剂，通过硅胶柱提纯得到PCDA-NHS。1-(3-氨基丙基)咪唑(1-(3-Am inopropyl)imidazole)溶于10mL二氯甲烷，然后加入PCDA-NHS，搅拌1-48小时，然后抽干溶剂，用硅胶树脂提纯。将提纯后的产物，加入到碘甲烷的乙腈溶液中，反应1-48小时，蒸干溶剂，得到咪唑功能化的丁二炔衍生物。超声溶解在水中，紫外聚合得到咪唑功能化的聚丁二炔探针。
步骤2：提取血清中的LPA
人全血分别4000rpm离心5分钟、1000rpm离心5分钟，得到人血浆。将人血浆样品和甲醇、三氯甲烷混合溶剂混合，震动30秒，然后在4摄氏度冰箱里抚育 20分钟，取出，待样品温度恢复到室温后，2000rpm离心10分钟。取上清液加入磷酸缓冲溶液中，震动30秒，水相用三氯甲烷洗涤三次，用磷酸酸化，得到的酸化产物用固相萃取柱提纯，用氮气吹干后，溶入水中，得到LPA样品。
步骤3：紫外可见吸收测定LPA浓度
参见图2可知：咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm处有强的吸收，当加入 LPA时，625nm处的吸收降低，而540nm和505nm处的吸收增加，因此可以通过咪唑功能化的聚丁二炔探针紫外可见光吸收谱的变化得到样品的LPA浓度值。
具体检测方法如下：。
(1)测定在加入LPA样品前咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入 LPA样品前吸收比例值B0；
(2)测定在加入LPA样品后咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入 LPA样品后吸收比例值B1；
(3)将B1和B1代入公式1，定量测量出样品中LPA的浓度CR；
CR＝[(B0–B1)/B0]*100 (公式1)。
实施例1
步骤1：合成咪唑功能化的聚丁二炔探针
将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于20mL二氯甲烷中，加入丁二炔酸(PCDA)，通入氮气，搅拌过夜。过滤除去沉淀物质，蒸发溶剂，通过硅胶柱提纯得到PCDA-NHS。1-(3-氨基丙基)咪唑(1-(3-Am inopropyl)imidazole)溶于10mL二氯甲烷，然后加入PCDA-NHS，搅拌1小时，然后抽干溶剂，用硅胶树脂提纯。将提纯后的产物，加入到碘甲烷的乙腈溶液中，反应1小时，蒸干溶剂，得到咪唑功能化的丁二炔衍生物。超声溶解在水中，紫外聚合得到咪唑功能化的聚丁二炔探针。
步骤2：提取血清中的LPA
取卵巢癌一期病人的全血样品，全血样品分别4000rpm离心5分钟、1000rpm 离心5分钟，得到人血浆。将人血浆样品和甲醇、三氯甲烷混合溶剂混合，震动 30秒，然后在4摄氏度冰箱里抚育20分钟，取出，待样品温度恢复到室温后， 2000rpm离心10分钟。取上清液加入磷酸缓冲溶液中，震动30秒，水相用三氯甲烷洗涤三次，用磷酸酸化，得到的酸化产物用固相萃取柱提纯，用氮气吹干后，溶入水中，得到LPA样品。
步骤3：紫外可见吸收测定LPA浓度
(1)测定在加入LPA样品前咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入 LPA样品前吸收比例值B0；
(2)测定在加入LPA样品后咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入 LPA样品后吸收比例值B1；
(3)将B1和B1代入公式1，定量测量出样品中LPA的浓度CR；
CR＝[(B0–B1)/B0]*100 (公式1)。
将步骤2提取的LPA样品滴入至咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸的样品区， 5分钟后，根据测试线颜色判断是否存在卵巢癌。
实施例2
步骤1：合成咪唑功能化的聚丁二炔探针
将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于20mL二氯甲烷中，加入丁二炔酸(PCDA)，通入氮气，搅拌过夜。过滤除去沉淀物质，蒸发溶剂，通过硅胶柱提纯得到PCDA-NHS。1-(3-氨基丙基)咪唑(1-(3-Am inopropyl)imidazole)溶于10mL二氯甲烷，然后加入PCDA-NHS，搅拌48小时，然后抽干溶剂，用硅胶树脂提纯。将提纯后的产物，加入到碘甲烷的乙腈溶液中，反应48小时，蒸干溶剂，得到咪唑功能化的丁二炔衍生物。超声溶解在水中，紫外聚合得到咪唑功能化的聚丁二炔探针。
步骤2：提取血清中的LPA
取卵巢癌二期病人的全血样品，全血样品分别4000rpm离心5分钟、1000rpm 离心5分钟，得到人血浆。将人血浆样品和甲醇、三氯甲烷混合溶剂混合，震动 30秒，然后在4摄氏度冰箱里抚育20分钟，取出，待样品温度恢复到室温后， 2000rpm离心10分钟。取上清液加入磷酸缓冲溶液中，震动30秒，水相用三氯甲烷洗涤三次，用磷酸酸化，得到的酸化产物用固相萃取柱提纯，用氮气吹干后，溶入水中，得到LPA样品。
步骤3：紫外可见吸收测定LPA浓度
(1)测定在加入LPA样品前咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入 LPA样品前吸收比例值B0；
(2)测定在加入LPA样品后咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入 LPA样品后吸收比例值B1；
(3)将B1和B1代入公式1，定量测量出样品中LPA的浓度CR；
CR＝[(B0–B1)/B0]*100 (公式1)。
将步骤2提取的LPA样品滴入至咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸的样品区，5 分钟后，根据测试线颜色判断是否存在卵巢癌。
实施例3
步骤1：合成咪唑功能化的聚丁二炔探针
将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于20mL二氯甲烷中，加入丁二炔酸(PCDA)，通入氮气，搅拌过夜。过滤除去沉淀物质，蒸发溶剂，通过硅胶柱提纯得到PCDA-NHS。1-(3-氨基丙基)咪唑(1-(3-Am inopropyl)imidazole)溶于10mL二氯甲烷，然后加入PCDA-NHS，搅拌24小时，然后抽干溶剂，用硅胶树脂提纯。将提纯后的产物，加入到碘甲烷的乙腈溶液中，反应24小时，蒸干溶剂，得到咪唑功能化的丁二炔衍生物。超声溶解在水中，紫外聚合得到咪唑功能化的聚丁二炔探针。
步骤2：提取血清中的LPA
取卵巢癌三期病人的全血样品，全血样品分别4000rpm离心5分钟、1000rpm 离心5分钟，得到人血浆。将人血浆样品和甲醇、三氯甲烷混合溶剂混合，震动 30秒，然后在4摄氏度冰箱里抚育20分钟，取出，待样品温度恢复到室温后， 2000rpm离心10分钟。取上清液加入磷酸缓冲溶液中，震动30秒，水相用三氯甲烷洗涤三次，用磷酸酸化，得到的酸化产物用固相萃取柱提纯，用氮气吹干后，溶入水中，得到LPA样品。
步骤3：紫外可见吸收测定LPA浓度
(1)测定在加入LPA样品前咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入 LPA样品前吸收比例值B0；
(2)测定在加入LPA样品后咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm 处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入 LPA样品后吸收比例值B1；
(3)将B1和B1代入公式1，定量测量出样品中LPA的浓度CR；
CR＝[(B0–B1)/B0]*100 (公式1)。
将步骤2提取的LPA样品滴入至咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸的样品区，5 分钟后，根据测试线颜色判断是否存在卵巢癌。
实施例4
取卵巢癌四期病人的全血样品，其他步骤均同实施例1。
实施例5
取女性乳腺癌病人的全血样品，其他步骤均同实施例1。
实施例6
取女性肺癌病人的全血样品，其他步骤均同实施例1。
实施例7
取健康女性的全血样品，其他步骤均同实施例1。
表1：实施例1-7的LPA浓度值和测试线颜色
由表1可知：本发明提供的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，能够实现对卵巢癌快速、灵敏、经济和准确地诊断。通过咪唑功能化的聚丁二炔探针紫外可见光吸收谱的变化可以测得样品的LPA浓度值。
显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的举例，而并非对实施方式的限定。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而由此所引伸出的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之中。

Claims (8)

1.一种咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，所述试纸用于检测卵巢癌；
包括：
试纸基地(1)，其材料为硝酸纤维素膜材料；
设置在试纸基地(1)一端上的吸附区(2)，所述吸附区(2)的材料为吸水材料，用于吸收检测过程中的水分；所述试纸基地(1)另一端为样品区；
设置在试纸基地(1)近中间位置的对照线(3)；
设置在对照线(3)右侧的测试线(4)；
其特征在于，
所述对照线(3)为通过在其下方沉积咪唑功能化的聚丁二炔探针和溶血磷脂酸形成的红色对照线；
所述测试线(4)为通过在其下方沉积咪唑功能化的聚丁二炔探针形成的蓝色测试线。
2.根据权利要求1所述的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，其特征在于，所述咪唑功能化的聚丁二炔探针是由下述方法制备得到的：
将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于二氯甲烷中，加入丁二炔酸(PCDA)，通入氮气，搅拌过夜；过滤除去沉淀物质，蒸发溶剂，通过硅胶柱提纯得到PCDA-NHS；将1-(3-氨基丙基)咪唑(1-(3-Am inopropyl)imidazole)溶于二氯甲烷，然后加入PCDA-NHS，搅拌1-48小时，然后抽干溶剂，用硅胶树脂提纯；将提纯后的产物，加入到碘甲烷的乙腈溶液中，反应1-48小时，蒸干溶剂，得到咪唑功能化的丁二炔衍生物，再将其超声溶解在水中，紫外聚合得到咪唑功能化的聚丁二炔探针。
3.根据权利要求1所述的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，其特征在于，所述吸附区(2)的横截面为长方形，宽为试纸基地(1)宽度的三分之二，长为宽的2倍，所述吸附区(2)的厚度为2mm。
4.根据权利要求1所述的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，其特征在于，所述吸附区(2)的材料为海绵。
5.根据权利要求1所述的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，其特征在于，所述试纸基地(1)的样品区上面还设置有吸附材料(5)。
6.根据权利要求5所述的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，其特征在于，所述吸附材料(5)的横截面为正方形，边长为试纸基地(1)宽度的三分之二，所述吸附区(2)的宽度为1mm。
7.根据权利要求5所述的咪唑功能化的聚丁二炔探针试纸，其特征在于，所述吸附材料为海绵。
8.用咪唑功能化的聚丁二炔探针检测卵巢癌标记物浓度的方法，其特征在于，包括以下步骤：
步骤1、合成咪唑功能化的聚丁二炔探针
将N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)和二环己基碳二亚胺(DCC)溶解于二氯甲烷中，加入丁二炔酸(PCDA)，通入氮气，搅拌过夜；过滤除去沉淀物质，蒸发溶剂，通过硅胶柱提纯得到PCDA-NHS；将1-(3-氨基丙基)咪唑(1-(3-Am inopropyl)imidazole)溶于二氯甲烷，然后加入PCDA-NHS，搅拌1-48小时，然后抽干溶剂，用硅胶树脂提纯；将提纯后的产物，加入到碘甲烷的乙腈溶液中，反应1-48小时，蒸干溶剂，得到咪唑功能化的丁二炔衍生物，再将其超声溶解在水中，紫外聚合得到咪唑功能化的聚丁二炔探针；
步骤2、提取血清中的溶血磷脂酸(LPA)
人全血分别4000rpm离心5分钟、1000rpm离心5分钟，得到人血浆；将人血浆样品和甲醇、三氯甲烷混合溶剂混合，震动30秒，然后在4摄氏度冰箱里抚育20分钟，取出，待样品温度恢复到室温后，2000rpm离心10分钟；取上清液加入磷酸缓冲溶液中，震动30秒，水相用三氯甲烷洗涤三次，用磷酸酸化，得到的酸化产物用固相萃取柱提纯，用氮气吹干后，溶入水中，得到LPA样品；
步骤3：紫外可见吸收测定LPA浓度
(1)测定在加入LPA样品前咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入LPA样品前吸收比例值B0；
(2)测定在加入LPA样品后咪唑功能化的聚丁二炔探针在625nm和540nm处的吸收值I625和I540；
然后根据测得的吸收值I625和I540及公式B＝I625/(I625+I540)，计算得到加入LPA样品后吸收比例值B1；
(3)将B1和B1代入公式1，测量出LPA的浓度CR；
CR＝[(B0–B1)/B0]*100 (公式1)。
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