CN107213452A - 一种包含map30蛋白的脂质体的制备及包载方法 - Google Patents

一种包含map30蛋白的脂质体的制备及包载方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107213452A
CN107213452A CN201710084298.2A CN201710084298A CN107213452A CN 107213452 A CN107213452 A CN 107213452A CN 201710084298 A CN201710084298 A CN 201710084298A CN 107213452 A CN107213452 A CN 107213452A
Authority
CN
China
Prior art keywords
liposome
map30
protein
preparation
chloroform
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710084298.2A
Other languages
English (en)
Inventor
张培影
韩从辉
吕茜
郝林
刘颖
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xuzhou Central Hospital
Original Assignee
Xuzhou Central Hospital
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xuzhou Central Hospital filed Critical Xuzhou Central Hospital
Priority to CN201710084298.2A priority Critical patent/CN107213452A/zh
Publication of CN107213452A publication Critical patent/CN107213452A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/168—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/24—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing atoms other than carbon, hydrogen, oxygen, halogen, nitrogen or sulfur, e.g. cyclomethicone or phospholipids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/28—Steroids, e.g. cholesterol, bile acids or glycyrrhetinic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/10—Dispersions; Emulsions
    • A61K9/127—Liposomes
    • A61K9/1271—Non-conventional liposomes, e.g. PEGylated liposomes, liposomes coated with polymers

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

本发明提供一种包含MAP30的脂质体的制备及包载方法，采用薄膜水化法制备，具体包括以下步骤：取10 mg二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC、1 mg胆固醇、1 mg二硬脂酰磷脂酰乙酰胺‑甲氧基聚乙二醇2000DSPE‑mPEG2000溶于氯仿中，减压旋转蒸发成均匀的薄膜，真空过夜彻底挥发掉残留的氯仿，加入1ml含蛋白的2mg ml‑1的PBS溶液，冰浴超声20min使脂质体膜脱落，在振荡器上震荡5min充分水化，形成浊液，然后将浊液转移到EP管中，用探头超声15％的功率135W超声30min，得到透明均一的蓝色脂质体悬液。本发明工艺简单，条件温和，重复性高，脂质体结构稳定，蛋白吸附容量大，脂质体粒径比较均匀，包封率高达78%。

Description

一种包含MAP30蛋白的脂质体的制备及包载方法
技术领域
本发明涉及一种包含MAP30蛋白的脂质体的制备及包载方法。
背景技术
MAP30即苦瓜Ⅰ型核糖体失活蛋白，是苦瓜中相对分子质量为30000的抗获得性免疫缺陷综合征病毒的蛋白质，它属于单链I型核糖体失活蛋白( ribosome inhibitingprotein, RIP)家族，具有抗病毒、抗肿瘤、抗菌等多种生物活性，近年已成为抗癌药物研究的热点。Ⅰ型核糖体失活蛋白为单链蛋白，不能进入正常细胞，MAP30是一个毒性较大的蛋白，在其未进入细胞前就会对细胞包括正常细胞产生细胞毒性。
上述问题是在脂质体的制备及包载过程中应当予以考虑并解决的问题。
发明内容
本发明的目的是提供一种包含MAP30蛋白的脂质体的制备及包载方法解决现有技术中存在的Ⅰ型核糖体失活蛋白为单链蛋白，不能进入正常细胞，MAP30是一个毒性较大的蛋白，在其未进入细胞前就会对细胞包括正常细胞产生细胞毒性的问题。
本发明的技术解决方案是：
一种包含MAP30的脂质体的制备及包载方法，采用薄膜水化法制备，具体包括以下步骤：取10 mg二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC、1 mg胆固醇、1 mg二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇2000DSPE-mPEG2000溶于氯仿中，减压旋转蒸发成均匀的薄膜，真空过夜彻底挥发掉残留的氯仿，加入1ml含蛋白的2mg ml-1的PBS溶液，冰浴超声20min使脂质体膜脱落，在振荡器上震荡5min充分水化，形成浊液，然后将浊液转移到EP管中，用探头超声15％的功率135W超声30min，得到透明均一的蓝色脂质体悬液。
进一步地，用10kD的超滤管以12000 g的转速4℃超滤，每五分钟取出吹打一次并补充PBS洗去游离蛋白，收集滤液以及脂质体悬液，280紫外吸收测定滤液中的蛋白浓度以及加入的蛋白原液原始浓度，计算包封率：包封率=1-（滤液中蛋白含量-初始液蛋白含量）％。
本发明的有益效果是：该种包含MAP30蛋白的脂质体的制备及包载方法，采用薄膜水化法制备脂质体并对MAP30蛋白进行包载，工艺简单，条件温和，重复性高，脂质体的制备采用纳米技术，将MAP30蛋白载入纳米级别的脂质体内，脂质体由二棕榈酰磷脂酰胆碱、胆固醇、二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇2000DSPE-mPEG2000组成；可以提高MAP30蛋白的溶解度和吸收或靶向性，脂质体结构稳定，蛋白吸附容量大，脂质体粒径比较均匀，包封率高达78%。
附图说明
图1是本发明实施例中脂质体粒径扫描示意图。
图2是实施例中脂质体粒径分布示意图。
具体实施方式
下面结合附图详细说明本发明的优选实施例。
实施例
一种包含MAP30的脂质体的制备及包载方法，采用薄膜水化法制备，具体包括以下步骤：取10 mg二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC、1 mg胆固醇、1 mg二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇2000DSPE-mPEG2000溶于氯仿中，减压旋转蒸发成均匀的薄膜，真空过夜彻底挥发掉残留的氯仿，加入1ml含蛋白的2mg ml-1的PBS溶液，冰浴超声20min使脂质体膜脱落，在振荡器上震荡5min充分水化，形成浊液，然后将浊液转移到EP管中，用探头超声15％的功率135W超声30min，得到透明均一的蓝色脂质体悬液。
该种包含MAP30蛋白的脂质体的制备及包载方法，采用薄膜水化法制备，工艺简单、条件温和、重复性高，蛋白质吸附容量大，脂质体结构稳定。
实施例可以提高MAP30蛋白的溶解度和吸收或靶向性。为了提高Ⅰ型核糖体失活蛋白膜的通透性；对其采用纳米级的脂质体包裹能够使得该蛋白在胞外不产生细胞毒性，顺利地导入肿瘤细胞，降低map30蛋白的胞外毒性，增加其胞内毒性，增加MAP30的肿瘤细胞靶向作用，待转运至肿瘤细胞胞内后再产生细胞毒性，从而高效地杀伤靶细胞。
用10kD的超滤管以12000 g的转速4℃超滤，每五分钟取出吹打一次并补充PBS洗去游离蛋白，收集滤液以及脂质体悬液，280紫外吸收测定滤液中的蛋白浓度以及加入的蛋白原液原始浓度，计算包封率：包封率=1-（滤液中蛋白含量-初始液蛋白含量）％。
实验结果及表征
脂质体制备结果及表征
如图1和图2中，透射电镜结果显示所制备的脂质体粒径比较均一，动态光散射结果表明脂质体的水合粒径约为132.6nm。
MAP30蛋白包封率测定
将脂质体进行MAP30蛋白的包载，通过测定超滤后滤液中的蛋白计算包封率，实验结果如表1所示，包封率约为78％。
表1 测定超滤后滤液中的蛋白计算包封率的结果
原液 滤液
A280 0.987 0.0737
体积（ml） 1 2.95
包封率=（1-0.0737×2.95/0.987）×100％=78%。
实施例的保存条件为：液态，-20℃保存。

Claims (2)

1.一种包含MAP30的脂质体的制备及包载方法，其特征在于，采用薄膜水化法制备，具体包括以下步骤：取10 mg二棕榈酰磷脂酰胆碱DPPC、1 mg胆固醇、1 mg二硬脂酰磷脂酰乙酰胺-甲氧基聚乙二醇2000DSPE-mPEG2000溶于氯仿中，减压旋转蒸发成均匀的薄膜，真空过夜彻底挥发掉残留的氯仿，加入1ml含蛋白的2mg ml-1的PBS溶液，冰浴超声20min使脂质体膜脱落，在振荡器上震荡5min充分水化，形成浊液，然后将浊液转移到EP管中，用探头超声15％的功率135W超声30min，得到透明均一的蓝色脂质体悬液。
2.如权利要求1所述的一种包含MAP30的脂质体的制备及包载方法，其特征在于：用10kD的超滤管以12000 g的转速4℃超滤，每五分钟取出吹打一次并补充PBS洗去游离蛋白，收集滤液以及脂质体悬液，280紫外吸收测定滤液中的蛋白浓度以及加入的蛋白原液原始浓度，计算包封率：包封率=1-（滤液中蛋白含量-初始液蛋白含量）％。
CN201710084298.2A 2017-02-16 2017-02-16 一种包含map30蛋白的脂质体的制备及包载方法 Pending CN107213452A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710084298.2A CN107213452A (zh) 2017-02-16 2017-02-16 一种包含map30蛋白的脂质体的制备及包载方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710084298.2A CN107213452A (zh) 2017-02-16 2017-02-16 一种包含map30蛋白的脂质体的制备及包载方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107213452A true CN107213452A (zh) 2017-09-29

Family

ID=59928110

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710084298.2A Pending CN107213452A (zh) 2017-02-16 2017-02-16 一种包含map30蛋白的脂质体的制备及包载方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107213452A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115025223A (zh) * 2021-01-15 2022-09-09 浙江大学 一种用于激活休眠肿瘤细胞的setd4蛋白抑制剂的投递蛋白

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007048019A2 (en) * 2005-10-20 2007-04-26 The Penn State Research Foundation Delivery system for diagnostic and therapeutic agents
CN102370620A (zh) * 2010-08-26 2012-03-14 同济大学附属上海市肺科医院 一种肺靶向性的免疫纳米脂质体及其制备方法
CN102552145A (zh) * 2012-02-02 2012-07-11 吕梁学院 一种人工脂质体的制备方法
CN103494773A (zh) * 2013-10-12 2014-01-08 南京医科大学 一种zl006脂质体及其制备方法
CN105030673A (zh) * 2015-05-28 2015-11-11 中国药科大学 一种预防药物泄露的高载药量的新型Asulacrine脂质体
CN105616354A (zh) * 2014-11-07 2016-06-01 安徽中医药大学 一种新藤黄酸脂质体注射剂及其制备方法
CN106075444A (zh) * 2016-07-18 2016-11-09 苏州大学 一种脂质体制剂及其制备方法与应用

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2007048019A2 (en) * 2005-10-20 2007-04-26 The Penn State Research Foundation Delivery system for diagnostic and therapeutic agents
CN102370620A (zh) * 2010-08-26 2012-03-14 同济大学附属上海市肺科医院 一种肺靶向性的免疫纳米脂质体及其制备方法
CN102552145A (zh) * 2012-02-02 2012-07-11 吕梁学院 一种人工脂质体的制备方法
CN103494773A (zh) * 2013-10-12 2014-01-08 南京医科大学 一种zl006脂质体及其制备方法
CN105616354A (zh) * 2014-11-07 2016-06-01 安徽中医药大学 一种新藤黄酸脂质体注射剂及其制备方法
CN105030673A (zh) * 2015-05-28 2015-11-11 中国药科大学 一种预防药物泄露的高载药量的新型Asulacrine脂质体
CN106075444A (zh) * 2016-07-18 2016-11-09 苏州大学 一种脂质体制剂及其制备方法与应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
朱斌 等: "薄膜水化法制备辅酶Q10脂质体", 《食品与机械》 *
杨明 主编: "《中药药剂学》", 31 July 2016 *
郝林 等: "苦瓜MAP30基因克隆与鉴定", 《中国医药指南》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115025223A (zh) * 2021-01-15 2022-09-09 浙江大学 一种用于激活休眠肿瘤细胞的setd4蛋白抑制剂的投递蛋白
CN115025223B (zh) * 2021-01-15 2023-11-21 浙江大学 一种用于激活休眠肿瘤细胞的setd4蛋白抑制剂的投递蛋白

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN102114246B (zh) 生物体病灶部位特异性释药的两亲性多糖衍生物载体及其药学组合物的制备和应用
CN108329404B (zh) 一种ir-780碘化物-壳聚糖硬脂酸嫁接物及制备与应用
CN107213452A (zh) 一种包含map30蛋白的脂质体的制备及包载方法
CN109568271B (zh) 一种pH敏感的肿瘤靶向的重组高密度脂蛋白、制备方法及应用
CN104434792B (zh) 聚合物胶束及其制备方法和抗肿瘤药物组合物、制剂及其制备方法
CN109381429B (zh) 一种白细胞膜修饰的紫杉醇靶向缓释脂质体及其制备方法
CN110123754A (zh) 一种靶向作用于树突细胞的苍耳亭纳米胶束及制备方法和应用
CN118005772A (zh) 一种具有骨修复活性ⅱ型胶原蛋白肽组装体的制备方法
CN104324007B (zh) 一种天然重组纳米脂质载体制备技术与应用
CN107412783B (zh) 一种包裹有难溶于水药物的蛋白质颗粒的制备方法
CN108339125A (zh) 一种高效、靶向载药纳米胶束及制备方法与应用
RU2446822C2 (ru) Иммуностимулирующий комплекс, способ его получения и применение
CN108576779B (zh) 魔芋葡甘聚糖-脂质体复合纳米食品递送系统及其制备方法和应用
CN102532533B (zh) 一种聚(天冬氨酸-co-乳酸)-磷脂酰乙醇胺接枝聚合物及其制备方法和应用
CN104984350A (zh) 一种增加紫杉醇溶解度的方法
CN114748425A (zh) 一种人参皂苷Rb1脂质体及其制备方法
CN111214441B (zh) 一种古罗糖醛酸低聚糖脂质体及其制备方法
KR20230119117A (ko) 태아 지지 조직의 처리 방법
CN114159393A (zh) 一种载汉防己甲素的杂化纳米粒子、载汉防己甲素的可溶性微针递药系统及其制备方法
CN113413328A (zh) 一种抗衰老胶原蛋白肽透明质酸钠口服饮的制备方法
CN112159527A (zh) 一种含有透明质酸基团的聚甘油脂肪酸酯衍生物及其合成方法和其在药物制剂中的应用
CN1813689A (zh) 细辛脑脂肪乳剂及制备方法
CN108478792A (zh) 一种可渗透粘液的pH响应性高分子金纳米胶束及其制备方法
US20240350941A1 (en) Process and composition for production of organic submicrometric particles from whole biological matter
Lluisa Sagrista et al. Photodynamic inactivation of viruses by immobilized chlorin-containing liposomes

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170929