KR20230119117A - 태아 지지 조직의 처리 방법 - Google Patents

태아 지지 조직의 처리 방법 Download PDF

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KR20230119117A
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셰퍼 트셍
에크 기아 탄
로레인 츄아
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바이오티슈 홀딩스 인코포레이티드
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Abstract

특정 실시양태에서, 태아 지지 조직을 냉동분쇄 또는 균질화하는 단계, 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 부형제에서 추출하는 단계, 및 추출물을 멸균하는 단계를 포함하는, 태아 지지 조직 산물을 제조하는 방법이 본원에 개시된다. 또한, 상기 태아 지지 조직 산물을 포함하는 약제학적 조성물 및 상처, 척추 병태 및 관절염을 치료하기 위해 상기 태아 지지 조직 산물을 사용하는 방법이 본원에 개시된다.

Description

태아 지지 조직의 처리 방법
상호 참조
본 출원은 2020년 10월 26일에 출원된 미국 출원 번호 63/105,770의 이익을 주장하며, 이는 전체가 참조로 본원에 포함된다.
요약
(a) 태아 지지 조직을 냉동분쇄(cryopulverizing)하여 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 생성하는 단계; (b) 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 부형제에서 추출하여 추출물을 생성하는 단계; 및 (c) 추출물을 약 0.6 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용한 후 약 0.4 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 여과에 의해 멸균하는 단계를 포함하고; 태아 지지 조직 산물이 생성되는, 태아 지지 조직 산물을 제조하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 여과에 의한 멸균은 약 0.45 μm의 공극 크기를 갖는 막을 사용한 후 약 0.2 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용하는 것이다. 일부 실시양태에서, 냉동분쇄는 태아 지지 조직을 액체 질소에서 분쇄하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 냉동분쇄는 태아 지지 조직을 미세 분말로 분쇄하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 태반, 탯줄, 태반 양막 탯줄 양막, 융모막, 또는 양막-융모막, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 탯줄 및 태반 양막을 포함한다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수, 주사용수(WFI), 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수이다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직을 원심분리하는 단계 c)를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 원심분리 속도는 약 14,000 상대 원심력(rcf) 이상이다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직을 원심분리 후 부형제로 희석하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI 또는 식염수이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 적어도 약 1.5배, 2.0배, 또는 2.5배의 배율(계수)로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 약 1.5배 내지 약 3배의 배율, 약 3배 내지 약 5배의 배율, 또는 약 5배 내지 10배의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 5배 초과의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 10배 초과의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 약 2배의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 희석된 태아 지지 조직은 약 1 μg/ml 내지 약 150 μg/ml의 히알루로난(HA)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 항염증, 항흉터, 항혈관형성, 항유착이거나 상처 치유를 촉진한다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직 산물을 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물과 함께 풀링하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물은 2 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물은 5 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물은 15 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물은 45 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직 산물을 용기에 충전하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 용기를 밀봉하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 충전 및 밀봉은 무균적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 충전 및 밀봉은 인간 개입 없이 무균적으로 및 단일 연속 공정으로 수행된다.
특정 실시양태에서, (a) 태아 지지 조직을 균질화하여 균질화된 태아 지지 조직을 생성하는 단계; (b) 균질화된 태아 지지 조직을 부형제에서 추출하여 추출물을 생성하는 단계; 및 (c) 추출물을 감마선 조사 또는 전자 빔 멸균을 사용하여 멸균하는 단계를 포함하고, 태아 지지 조직 산물이 생성되는, 태아 지지 조직 산물을 제조하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 균질화는 태아 지지 조직을 미세 분말로 분쇄하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 태반, 탯줄, 태반 양막 탯줄 양막, 융모막, 또는 양막-융모막, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 탯줄 및 태반 양막을 포함한다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수, 주사용수(WFI), 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수이다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직을 원심분리하는 단계 c)를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 원심분리 속도는 약 14,000 상대 원심력(rcf) 이상이다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직을 원심분리 후 부형제로 희석하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI 또는 식염수이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 적어도 약 1.5배, 2.0배, 또는 2.5배의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 약 1.5배 내지 약 3배의 배율, 약 3배 내지 약 5배의 배율, 또는 약 5배 내지 10배의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 5배 초과의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 10배 초과의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 약 2배의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 희석된 태아 지지 조직은 약 1 μg/ml 내지 약 150 μg/ml의 히알루로난(HA)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 항염증, 항흉터, 항혈관형성, 항유착이거나 상처 치유를 촉진한다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직 산물을 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물과 함께 풀링하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물은 2 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물은 5 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물은 15 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물은 45 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직 산물을 용기에 충전하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 용기를 밀봉하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 충전 및 밀봉은 무균적으로 수행된다. 일부 실시양태에서, 충전 및 밀봉은 인간 개입 없이 무균적으로 및 단일 연속 공정으로 수행된다.
특정 실시양태에서, (a) 본원에 개시된 임의의 방법에 의해 제조된 태아 지지 조직 산물, 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 약제학적으로 허용되는 담체는 카르보머, 셀룰로스, 콜라겐, 글리세린, 헥실렌 글리콜, 히알루론산, 히드록시프로필 셀룰로스, 인산, 폴리소르베이트 80, 프로필렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 스테아레이트, 식염수, 수산화나트륨, 인산나트륨, 소르비탈, 물, 잔탄 검, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 분말 산물은 크림, 로션, 연고, 안과 용액, 스프레이, 페이스트, 겔, 필름, 또는 페인트로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 항염증, 항흉터, 항혈관형성, 항유착이거나 상처 치유를 촉진한다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 약제학적 조성물을 상처를 치료하기에 충분한 기간 동안 상처에 투여하는 단계를 포함하는, 상처 치료를 필요로 하는 개체에서 상처를 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 상처는 각막 상피 상처이다. 일부 실시양태에서, 각막 상피 상처는 광절제 치료에 의해 유발되었다. 일부 실시양태에서, 상처는 피부 화상 또는 흉터로부터 선택되는 피부과적 병태이다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 약제학적 조성물을 척추 병태를 치료하기에 충분한 기간 동안 척추 병태의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 척추 병태를 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 척추 병태는 탈출된 디스크, 척추 유착, 후관절 골관절염, 신경근병증, 또는 추간판염으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서 척추 병태는 척수 부상이다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 약제학적 조성물을 관절염 병태를 치료하기에 충분한 기간 동안 관절염 병태의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 관절염 병태를 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 관절염 병태는 골관절염, 류마티스 관절염, 패혈성 관절염, 강직성 척추염, 또는 척추증으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 임의의 약제학적 조성물을 뼈, 조직 또는 연골을 재생하거나 복구하기에 충부한 기간 동안 뼈, 조직 또는 연골의 재생 또는 복구를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 뼈, 조직 또는 연골을 재생하거나 복구하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 패치로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 상처 드레싱으로서 투여되거나 제공된다.
도 1은 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 생성하는 방법의 예를 예시하는 흐름도를 나타낸다.
도 2a - 2d는 추출 1시간 후 냉동분쇄된 태아 지지 조직의 순차적 식염수 및 GnHCl 추출물의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다.
도 3a - 3b는 식염수에서 추출되고 상이한 원심분리 속도로 원심분리된 태아 지지 조직의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다.
도 4는 냉동분쇄된 태아 지지 조직의 순차적 식염수, 주사용수("WFI") 또는 멸균수("SW") 및 GnHCl 추출물의 아가로스 겔 분석을 나타낸다.
도 5a - 5b는 냉동분쇄된 태아 지지 조직의 순차적 식염수, WFI 또는 SW 및 GnHCl 추출물의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다.
도 6은 감마선 조사 처리 후 태아 지지 조직 산물의 아가로스 겔 분석을 나타낸다.
도 7a - 7b는 감마선 조사 처리 후 태아 지지 조직 산물의 쿠마시 블루 분석을 나타낸다.
도 8a - 8d는 감마선 조사 후 태아 지지 조직 추출물의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다.
도 9는 여과 멸균 및 희석 후 태아 지지 조직 추출물의 아가로스 겔 분석을 나타낸다.
도 10a - 10d는 여과 멸균 및 희석 후 태아 지지 조직 추출물의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다.
도 11a - 11c는 3가지의 효능 검정 - (1) TRAP 검정; (2) M2 검정; 및 (3) WST-1 검정에서 히알루로난("HA") 농도의 용량 의존적 선형성 분석을 나타낸다.
도 12는 태아 지지 조직 산물의 저장, 운송 및 최종 멸균을 예시하는 흐름도를 나타낸다.
도 13a - 13f는 감마선 조사와 함께 또는 없이 다양한 부형제에서 생성된 태아 지지 조직 산물의 아가로스 겔 분석을 나타낸다.
도 14a - 14b는 감마선 조사와 함께 또는 없이 다양한 부형제에서 생성된 태아 지지 조직 산물의 쿠마시 블루 염색 분석을 나타낸다.
도 15a - 15j는 감마선 조사와 함께 또는 없이 다양한 부형제에서 생성된 태아 지지 조직 산물의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다.
도 16a - 16b는 감마선 조사와 함께 또는 없이 다양한 부형제에서 생성된 태아 지지 조직 산물의 세포 형태 이미지를 나타낸다.
도 17a - 17e는 감마선 조사와 함께 또는 없이 다양한 부형제에서 생성된 태아 지지 조직 산물의 TRAP 분석을 나타낸다.
도 18a - 18b는 태아 지지 조직 산물의 아가로스 겔 분석을 나타낸다.
도 19a - 19d는 태아 지지 조직 산물의 웨스턴 블롯 분석을 나타낸다.
도 20a - 20b는 태아 지지 조직 산물의 세포 형태 분석 및 ODITRAP 검정을 나타낸다.
도 21a - 21b는 태아 지지 조직 산물의 세포 형태 분석 및 M2 검정을 나타낸다.
도 22a - 22b는 태아 지지 조직 산물의 세포 형태 분석 및 NO 검정을 나타낸다.
도 23은 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 생성하는 방법의 예를 예시하는 흐름도를 나타낸다.
도 24a - 24c는 본원에 개시된 수율을 증가시키기 위해 다수의 공여자를 풀링하여 태아 지지 조직 산물을 생성하는 방법의 예를 예시하는 흐름도이다.
양막 및 탯줄은 상처 치유 및 염증 및 흉터 감소를 포함한 다수의 목적에 유용한 여러 선천적 생물학적 인자를 함유한다. HC-HA/PTX3 복합체 - 인터-α-트립신 억제제로부터의 중쇄(HC) 1과 공유적으로 연결되고 펜트락신3(PTX3)과 추가로 복합화된 고분자량(HMW) 히알루로난(HA) - 는 상처 치유 효과를 담당하는 탯줄 및 양막의 하나의 중요한 활성 성분이다. 따라서, 고수율의 HC-HA/PTX3, HA 및 다른 관심 단백질을 갖는 태아 지지 조직 산물(예컨대, 상처 치유에 사용하기 위한 양막 및 탯줄 추출물)의 생성이 필요하다. HC-HA/PTX3 복합체 및 다른 관심 단백질의 분해를 감소시키거나 방지하는 공정을 이용하는 태아 지지 조직 산물의 생성이 또한 필요하다. HA 및 다른 관심 단백질의 분해를 방지하는 것은 이러한 단백질의 분해가 태아 지지 조직 산물을, 예컨대 각막 표면(분해에 의해 생성되는 더 작은 미립자가 흐릿한 시력을 초래할 수 있음)에 사용하기에 부적합하게 만들 수 있기 때문에 중요하다.
특정 실시양태에서, (a) 태아 지지 조직을 냉동분쇄하여 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 생성하는 단계; (b) 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 부형제에서 추출하여 추출물을 생성하는 단계; 및 (c) 약 0.6 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용한 후 0.3 μm 이하의 공극을 갖는 막을 사용하여 추출물을 여과에 의해 멸균하는 단계를 포함하는, 태아 지지 조직 산물을 제조하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 태반 양막(PAM), 또는 실질적으로 단리된 PAM, 탯줄 양막(UCAM) 또는 실질적으로 단리된 UCAM, 융모막 또는 실질적으로 단리된 융모막, 양막-융모막 또는 실질적으로 단리된 양막-융모막, 태반 또는 실질적으로 단리된 태반, 탯줄 또는 실질적으로 단리된 탯줄, 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 냉동분쇄는 태아 지지 조직을 액체 질소에서 분쇄하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 냉동분쇄는 태아 지지 조직을 미세 분말로 분쇄하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수, 주사용수(WFI), 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직을 원심분리하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 원심분리 속도는 약 14,000 상대 원심력(rcf) 이상이다. 일부 실시양태에서, 방법은 태아 지지 조직을 원심분리 후 부형제로 희석하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI 또는 식염수이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 적어도 약 1.5배, 2.0배 또는 2.5배의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 약 1.5배 내지 약 3배의 배율, 약 3배 내지 약 5배의 배율, 또는 약 5배 내지 10배의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 5배 초과의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 10배 초과의 배율로 희석된다. 일부 실시양태에서, 희석된 태아 지지 조직은 약 1 μg/mL 내지 약 150 μg/mL의 히알루로난(HA)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 희석된 태아 지지 조직은 약 1 μg/mL 내지 약 90 μg/mL의 HA를 포함한다. 일부 실시양태에서, 희석된 태아 지지 조직은 약 90 μg/ml 내지 약 150 μg/ml의 HA를 포함한다. 일부 실시양태에서, 희석된 태아 지지 조직은 약 1-10 μg/mL의 HA, 약 10-20 μg/mL의 HA, 약 20-30 μg/mL의 HA, 약 30-40 μg/mL의 HA, 약 40-50 μg/mL의 HA, 약 50-60 μg/mL의 HA, 약 60-70 μg/mL의 HA, 약 70-80 μg/mL의 HA, 약 80-90 μg/mL의 HA, 약 90-100 μg/mL의 HA, 약 100-110 μg/mL의 HA, 약 110-120 μg/mL의 HA, 약 120-130 μg/mL의 HA, 약 130-140 μg/mL의 HA, 또는 약 140-150 μg/mL의 HA를 포함한다.
일부 경우에서, 태아 지지 조직의 냉동분쇄는 다른 균질화 기술을 이용하는 생성 방법과 비교할 때 더 높은 수율의 HC-HA/PTX3 및 다른 단백질을 갖는 태아 지지 조직 산물을 생성한다. 일부 경우에서, 태아 지지 조직의 냉동분쇄는 다른 균질화 기술을 이용하는 생성 방법과 비교할 때 HC-HA/PTX3 및 다른 관심 단백질의 분해를 덜 초래한다. 일부 경우에서, 태아 지지 조직의 냉동분쇄는, 예컨대 OODI-TRAP 검정, M2 검정, 산화질소(NO) 검정, 및/또는 WST-1 검정으로 결정되는 바와 같이, 다른 균질화 기술을 이용하는 생성 방법과 비교할 때 더 높은 효능의 태아 지지 조직 산물을 생성한다. 일부 경우에서, 여과에 의한 멸균은 태아 지지 조직 산물이 감마선 조사에 의해 멸균되는 생성 방법과 비교할 때 HC-HA/PTX3, HA 및 다른 관심 단백질의 분해를 덜 초래한다. 일부 경우에서, 여과에 의한 멸균은 태아 지지 조직 산물로부터 특정 제형(예컨대, 각막 표면에 사용하기 위한 태아 지지 조직을 포함하는 겔)에서 바람직하지 않을 수 있는 더 작은 입자를 제거한다. 일부 경우에서, 태아 지지 조직을 희석하면 희석 단계를 포함하지 않는 공정과 비교할 때 HC-HA/PTX3 및 다른 관심 단백질의 더 빠른 여과 및 더 우수한 회수를 초래한다. 일부 경우에서, 주사용수를 부형제로 사용하면 구조화된 물과 같은 상이한 부형제를 사용하는 공정과 비교할 때 HC-HA/PTX3 및 다른 관심 단백질의 더 빠른 여과 및 더 우수한 회수를 초래한다.
특정 실시양태에서, (a) 태아 지지 조직을 냉동분쇄하여 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 생성하는 단계; (b) 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 부형제에서 추출하여 추출물을 생성하는 단계; 및 (c) 추출물을 약 0.6 μm의 공극 크기를 갖는 막을 사용한 후 약 0.4 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 여과에 의해 멸균하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 태아 지지 조직 산물이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 태반 양막(PAM), 또는 실질적으로 단리된 PAM, 탯줄 양막(UCAM) 또는 실질적으로 단리된 UCAM, 융모막 또는 실질적으로 단리된 융모막, 양막-융모막 또는 실질적으로 단리된 양막-융모막, 태반 또는 실질적으로 단리된 태반, 탯줄 또는 실질적으로 단리된 탯줄, 또는 이들의 임의의 조합이다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 약제학적으로 허용되는 담체는 카르보머, 셀룰로스, 콜라겐, 글리세린, 헥실렌 글리콜, 히알루론산, 히드록시프로필 셀룰로스, 인산, 폴리소르베이트 80, 프로필렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 스테아레이트, 식염수, 수산화나트륨, 인산나트륨, 소르비탈, 물, 잔탄 검, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 크림, 로션, 연고, 안과 용액, 스프레이, 페이스트, 겔, 필름, 또는 페인트로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 항염증, 항흉터, 항혈관형성, 항유착이거나 상처 치유를 촉진한다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 경막외 투여, 척수강내 투여, 흡입 투여, 정맥내 투여, 또는 이들의 조합을 위해 제형화된다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 약제학적 조성물을 상처를 치료하기에 충분한 기간 동안 상처에 투여하는 단계를 포함하는, 상처 치료를 필요로 하는 개체에서 상처를 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 상처는 피부 화상 또는 흉터로부터 선택되는 피부과적 병태이다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 패치로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 상처 드레싱으로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 주사를 위해 제형화된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사를 위해 제형화된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 경막외 투여, 척수강내 투여, 흡입 투여, 정맥내 투여, 또는 이들의 조합을 위해 제형화된다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 약제학적 조성물을 척추 병태를 치료하기에 충분한 기간 동안 척추 병태의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 척추 병태를 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 척추 병태는 탈출된 디스크, 척추 유착, 후관절 골관절염, 신경근병증, 또는 추간판염으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 척추 병태는 척수 부상이다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 패치로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 상처 드레싱으로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 주사를 위해 제형화된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사를 위해 제형화된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 경막외 투여, 척수강내 투여, 흡입 투여, 정맥내 투여, 또는 이들의 조합을 위해 제형화된다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 약제학적 조성물을 관절염 병태를 치료하기에 충분한 기간 동안 관절염 병태의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 관절염 병태를 치료하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 관절염 병태는 골관절염, 류마티스 관절염, 패혈성 관절염, 강직성 척추염, 또는 척추증으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 패치로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 상처 드레싱으로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 주사를 위해 제형화된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사를 위해 제형화된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 경막외 투여, 척수강내 투여, 흡입 투여, 정맥내 투여, 또는 이들의 조합을 위해 제형화된다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 약제학적 조성물을 뼈, 조직 또는 연골을 재생하거나 복구하기에 충분한 기간 동안 뼈, 조직 또는 연골의 재생 또는 복구를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 뼈, 조직 또는 연골을 재생하거나 복구하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 패치로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 상처 드레싱으로서 투여되거나 제공된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 주사를 위해 제형화된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사를 위해 제형화된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 경막외 투여, 척수강내 투여, 흡입 투여, 정맥내 투여, 또는 이들의 조합을 위해 제형화된다.
태아 지지 조직 산물의 제조
초기 처리
태아 지지 조직은 임의의 적합한 공급원(예컨대, 병원 또는 조직 은행)으로부터 수득된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 인간, 비인간 영장류, 소 또는 돼지와 같은 임의의 포유동물로부터 수득된다.
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 공여자 및 표본 적격성이 결정될 때까지 (예컨대, 0℃ 이하에서) 동결된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 동결시키는 것은 태아 지지 조직에서 발견되는 실질적으로 모든 세포를 사멸시킨다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 동결시키는 것은 신선한(즉, 비동결된) 태아 지지 조직에 비해 태아 지지 조직의 생물학적 활성을 유지 또는 증가시키면서 태아 지지 조직에서 발견되는 실질적으로 모든 세포를 사멸시킨다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 동결시키는 것은 태아 지지 조직에서 발견되는 실질적으로 모든 세포에서 대사 활성의 손실을 초래한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 동결시키는 것은 신선한(즉, 비동결된) 태아 지지 조직에 비해 태아 지지 조직의 생물학적 활성(예컨대, 항염증, 항흉터, 항항원, 및 항유착 특성)을 유지 또는 증가시키면서 태아 지지 조직에서 발견되는 실질적으로 모든 세포에서 대사 활성의 손실을 초래한다.
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 동결되지 않는다. 태아 지지 조직이 동결되지 않은 경우 바로 하기에 기재되는 바와 같이 처리된다.
일부 실시양태에서, 처리는 오염물이 태아 지지 조직 분말 산물에 도입되지 않도록 보장하기 위해 우수 조직 관리기준(Good tissue Practices: GTP)에 따라 수행된다.
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 FDA 허가를 받은 스크리닝 시험을 이용하여 HIV-1, HIV-2, HTLV-1, B형 및 C형 간염, 웨스트 나일 바이러스, 시토메갈로바이러스, 인간 전염성 해면상 뇌병증(예컨대, 크로이츠펠트-야콥 질환) 및 메독균에 대해 시험된다. 일부 실시양태에서, 조직이 HIV-1, HIV-2, HTLV-1, B형 및 C형 간염, 웨스트 나일 바이러스 또는 시토메갈로바이러스로 오염되었다는 임의의 표시는 조직 표본의 즉각적인 격리 및 후속 파괴를 초래한다.
일부 실시양태에서, B형 간염, C형 간염 또는 HIV 감염에 대한 위험 인자 및 임상적 증거에 대해 공여자의 의료 기록을 조사한다. 일부 실시양태에서, 공여자가 HIV-1, HIV-2, HTLV-1, B형 및 C형 간염, 웨스트 나일 바이러스, 시토메갈로바이러스, 인간 전염성 해면상 뇌병증(예컨대, 크로이츠펠트-야콥 질환) 및 메독균으로의 감염에 대한 위험 인자 및/또는 임상적 증거를 갖는다는 임의의 표시는 조직 표본의 즉각적인 격리 및 후속 파괴를 초래한다.
일부 실시양태에서, 실질적으로 모든 혈액이 태아 지지 조직으로부터 제거된다. 일부 실시양태에서, 실질적으로 모든 혈액이 태아 지지 조직이 동결되기 전에 태아 지지 조직으로부터 제거된다.
일부 실시양태에서, 혈액은 태아 지지 조직으로부터 제거되지 않는다. 일부 실시양태에서, 혈액은 태아 지지 조직이 동결되기 전에 태아 지지 조직으로부터 제거되지 않는다.
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 등장성 버퍼와 접촉된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 식염수, PBS, PBS 1X, 링거 용액, 하트만 용액, TRIS 완충된 식염수, HEPES 완충된 식염수, EBSS, HBSS, 티로드(Tyrode) 용액, 게이(Gey) 균형 염 용액, DMEM, EMEM, GMEM, RPMI, 또는 이들의 임의의 조합과 접촉된다.
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 교반하면서 버퍼로 세척하여 과잉 혈액 및 조직을 제거한다. 일부 실시양태에서, 교반하면서 세척하는 것은 세척 시간을 줄인다.
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 태반 양막(PAM), 또는 실질적으로 단리된 PAM, 탯줄 양막(UCAM) 또는 실질적으로 단리된 UCAM, 융모막 또는 실질적으로 단리된 융모막, 양막-융모막 또는 실질적으로 단리된 양막-융모막, 태반 또는 실질적으로 단리된 태반, 탯줄 또는 실질적으로 단리된 탯줄, 또는 이들의 임의의 조합이다.
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 탯줄 또는 탯줄 양막이다. 일부 실시양태에서, 와튼 젤리(Wharton's Jelly)는 탯줄 또는 탯줄 양막으로부터 제거되지 않는다. 일부 실시양태에서, 와튼 젤리의 일부 또는 전부는 탯줄 또는 탯줄 양막으로부터 제거된다.
탯줄은 2개의 동맥(배꼽 동맥) 및 1개의 정맥(배꼽 정맥)을 포함한다. 특정 경우에서, 정맥 및 동맥은 와튼 젤리 내에 둘러싸여 있다 (또는 매달려 있거나 묻혀 있다). 일부 실시양태에서, 정맥 및 동맥은 탯줄로부터 제거되지 않는다. 일부 실시양태에서, 정맥 및 동맥은 탯줄로부터 제거된다. 일부 실시양태에서, 정맥 및 동맥은 와튼 젤리의 제거와 동시에 제거된다.
그라인딩/냉동분쇄
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 임의의 적합한 방법에 의해 그라인딩된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 그라인딩하는 것은 태아 지지 조직을 냉동분쇄하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 냉동분쇄하는 것은 태아 지지 조직이 동결된 상태(예컨대, 0℃, -20℃, -40℃, -50℃, -60℃, -70℃, -75℃, -80℃, -90℃, -100℃ 미만의 온도에 노출됨) 또는 냉각된 상태에 있는 동안 태아 지지 조직을 분쇄, 균질화 또는 달리 단편화하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 냉동분쇄하는 것은 극저온 제어 환경에서 태아 지지 조직을 분쇄 또는 균질화하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 냉동분쇄하는 것은 태아 지지 조직이 액체 질소에 (예컨대, 직접적으로 또는 간접적으로) 침지되거나 노출된 후 태아 지지 조직을 분쇄하거나 균질화하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 냉동분쇄하는 것은 태아 지지 조직이 액체 질소에 (예컨대, 직접적으로 또는 간접적으로) 침지되거나 노출되는 동안 태아 지지 조직을 분쇄하거나 균질화하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 냉동분쇄하는 것은 태아 지지 조직을 그라인딩 용기에 위치시키고 그라인딩 용기를 그라인딩 전에 액체 질소에 침지시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 그라인딩 용기는 그라인딩 공정의 적어도 1분 동안 액체 질소에 침지된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 냉동분쇄하는 것은 동결된 태아 지지 조직을 해머 또는 회전 블레이드에 노출시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직을 냉동분쇄하는 것은 동결된 태아 지지 조직을 임팩터에 노출시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 임팩터는 전자석에 의해 구동된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 프리저밀(FreezerMill)을 사용하여 냉동분쇄된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 막자사발 및 막자를 사용하여 냉동분쇄된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 블렌더를 사용하여 냉동분쇄된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 바이오플버라이저(BioPulverizer)를 사용하여 냉동분쇄된다. 일부 실시양태에서, 액체 질소에서 태아 지지 조직을 냉동분쇄하는 것은 동결되지 않은 태아 지지 조직을 그라인딩하는 것과 비교하여 태아 지지 조직 산물에서 단백질 및 히알루로난을 분해할 수 있는 태아 지지 조직 중의 프로테아제 및/또는 히알루로니다제를 활성화시키는 것을 방지한다.
일부 실시양태에서, 냉동분쇄는 태아 지지 조직을 분말로 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 분말을 포함하는 입자는 균일한 크기 분포를 갖는다. 일부 실시양태에서, 분말을 포함하는 입자는 균일한 크기 분포가 아니다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 약 1000 μm, 500 μm, 400 μm, 300 μm, 200 μm, 100 μm, 50 μm, 40 μm, 30 μm, 20 μm, 10 μm, 5 μm, 1 μm, 0.5 μm, 0.4 μm, 0.3 μm, 0.2 μm, 또는 0.1 μm 미만의 입자 크기로 감소된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 500 μm 미만의 입자 크기로 감소된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 약 0.5 μm 미만의 입자 크기로 감소된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 0.3 μm 미만의 입자 크기로 감소된다.
추출 및 원심분리
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직에서 추출이 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 태아 지지 조직의 다른 성분으로부터 관심 단백질을 분리하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 추출은 냉동분쇄된 태아 지지 조직에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 냉동분쇄된 태아 지지 조직의 다른 성분으로부터 관심 단백질을 분리하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 관심 단백질은 단백질, 글리칸, 단백질-글리칸 복합체(예컨대, 히알루로난과 IαI의 중쇄와 PTX3의 복합체) 및 조직 복구를 촉진하는 효소를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 관심 단백질은 히알루로난과 IαI의 중쇄와 PTX3의 복합체("HC-HA/PTX"), 히알루로난, 고분자량 히알루로난 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 관심 단백질은 히알루로난을 포함한다.
일부 실시양태에서, 추출물은 부형제에서 추출함으로써 제조된다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수, 물, 구조화된 물, 주사용수(WFI) 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI이다. 일부 실시양태에서, 부형제로서 WFI의 사용은 식염수 또는 구조화된 물에 비해 HA 및 총 단백질의 더 높은 회수율을 초래한다. 일부 실시양태에서, 식염수 또는 WFI에서의 추출은 대부분의 관심 단백질(예컨대, HC-HA/PTX3)을 추출한다.
일부 실시양태에서, 추출은 약 0 내지 1시간, 약 1 내지 2시간, 약 2 내지 3시간, 약 3 내지 4시간, 약 4 내지 5시간, 약 5 내지 6시간, 약 6 내지 12시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 24시간 내지 48시간 또는 약 48시간 내지 72시간 동안 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 1시간 동안 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 0 내지 1시간, 약 1 내지 2시간, 약 2 내지 3시간, 약 3 내지 4시간, 약 4 내지 5시간, 약 5 내지 6시간, 약 6 내지 12시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 24시간 내지 48시간 또는 약 48시간 내지 72시간 동안 WFI에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 1시간 동안 WFI에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 0 내지 1시간, 약 1 내지 2시간, 약 2 내지 3시간, 약 3 내지 4시간, 약 4 내지 5시간, 약 5 내지 6시간, 약 6 내지 12시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 24시간 내지 48시간 또는 약 48시간 내지 72시간 동안 식염수에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 1시간 동안 식염수에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 추출은 약 4℃의 온도에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 3℃, 4℃, 5℃, 또는 6℃의 온도에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 3℃, 4℃, 5℃ 또는 6℃의 온도에서 WFI에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 4℃의 온도에서 WFI에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 4℃의 온도에서 약 1시간 동안 WFI에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 0 내지 1시간, 약 1 내지 2시간, 약 2 내지 3시간, 약 3 내지 4시간, 약 4 내지 5시간, 약 5 내지 6시간, 약 6 내지 12시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 24시간 내지 48시간 또는 약 48시간 내지 72시간 동안 WFI에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 3℃, 4℃, 5℃, 또는 6℃의 온도에서 식염수에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 4℃의 온도에서 식염수에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 0 내지 1시간, 약 1 내지 2시간, 약 2 내지 3시간, 약 3 내지 4시간, 약 4 내지 5시간, 약 5 내지 6시간, 약 6 내지 12시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 24시간 내지 48시간 또는 약 48시간 내지 72시간 동안 약 4℃의 온도에서 식염수에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 4℃의 온도에서 약 1시간 동안 식염수에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 대 추출 부형제의 비율은 약 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 1:0.75, 1:0.5, 또는 1:0.25(중량:부피)이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 대 추출 부형제의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 0.75:1, 0.5:1, 또는 0.25:1(중량:부피)이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 대 추출 부형제의 비율은 약 1:4이다. 일부 실시양태에서, 추출은 WFI 또는 식염수에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 WFI에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 0 내지 1시간, 약 1 내지 2시간, 약 2 내지 3시간, 약 3 내지 4시간, 약 4 내지 5시간, 약 5 내지 6시간, 약 6 내지 12시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 24시간 내지 48시간 또는 약 48시간 내지 72시간 동안 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 1시간 동안 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 3℃, 4℃, 5℃, 또는 6℃의 온도에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 4℃의 온도에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 1:4의 태아 지지 조직 대 부형제의 비율로 약 4℃의 온도에서 약 1시간 동안 WFI에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 1:4의 태아 지지 조직 대 부형제의 비율로 약 4℃의 온도에서 약 1시간 동안 식염수에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 추출은 튜브 회전기를 사용하여 수행된다. 일부 실시양태에서, 튜브 회전기는 약 5-10 rpm, 10-20 rpm, 20-30 rpm, 30-40 rpm, 또는 40-50 rpm의 속도 범위로 회전한다. 일부 실시양태에서, 튜브 회전기는 약 20 rpm의 속도로 회전한다. 일부 실시양태에서, 튜브 회전기는 약 0 내지 1시간, 약 1 내지 2시간, 약 2 내지 3시간, 약 3 내지 4시간, 약 4 내지 5시간, 약 5 내지 6시간, 약 6 내지 12시간, 약 12시간 내지 24시간, 약 24시간 내지 48시간 또는 약 48시간 내지 72시간 동안 회전한다. 일부 실시양태에서, 튜브 회전기는 약 1시간 동안 회전한다. 일부 실시양태에서, 튜브 회전기는 약 3℃, 4℃, 5℃ 또는 6℃의 온도에서 회전한다. 일부 실시양태에서, 튜브 회전기는 약 4℃의 온도에서 회전한다. 일부 실시양태에서, 사용되는 부형제는 식염수 또는 WFI이다. 일부 실시양태에서, 사용되는 부형제는 WFI이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 대 추출 부형제의 비율은 약 1:6, 1:5, 1:4, 1:3, 1:2, 1:1, 1:0.75, 1:0.5, 또는 1:0.25(중량:부피)이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 대 추출 부형제의 비율은 약 1:4이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 대 추출 부형제의 비율은 약 6:1, 5:1, 4:1, 3:1, 2:1, 1:1, 0.75:1, 0.5:1, 또는 0.25:1(중량:부피)이다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 20 rpm의 속도로 튜브 회전기를 사용하여 약 4℃의 온도에서 약 1시간 동안 WFI에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출은 약 20 rpm의 속도로 튜브 회전기를 사용하여 약 4℃의 온도에서 약 1시간 동안 식염수에서 수행된다.
일부 실시양태에서, 추출 단계에 의해 생성된 추출물에 대해 원심분리가 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출물은 약 5 내지 10분, 약 10 내지 15분, 약 15 내지 20분, 약 20 내지 30분, 약 30분 내지 1시간, 또는 약 1 내지 2시간 동안 원심분리된다. 일부 실시양태에서, 추출물은 약 30분 동안 원심분리된다. 일부 실시양태에서, 추출물은 약 3,200 rcf 내지 10,000 rcf, 약 10,000 내지 14,000 rcf, 약 14,000 내지 32,000 rcf, 또는 약 32,000 내지 약 48,000 rcf의 속도로 원심분리된다. 일부 실시양태에서, 추출물은 약 14,000 rcf 이상의 속도로 원심분리된다. 일부 실시양태에서, 추출물은 약 14,000 rcf의 속도로 원심분리된다. 일부 실시양태에서, 추출물은 약 30분 동안 약 14,000 rcf의 속도로 원심분리된다. 일부 실시양태에서, 원심분리는 추출물 중의 관심 단백질의 함량에 영향을 미치지 않거나 최소한으로 영향을 미친다.
일부 실시양태에서, 추출은 관심 단백질(예컨대, 히알루로난 또는 히알루로난과 IαI의 중쇄와 PTX3의 복합체)을 포함하는 추출물을 생성한다. 일부 실시양태에서, 대부분의 HC-HA/PTX3은 추출물에 존재한다. 일부 실시양태에서, 대부분의 HA는 추출물에 존재한다. 일부 실시양태에서, 식염수 또는 WFI에서의 추출은 상이한 부형제, 예컨대 구조화된 물을 사용하는 추출보다 HC-HA/PTX3 복합체에 대한 손상을 덜 초래한다. 일부 실시양태에서, 식염수 또는 WFI에서의 추출은 상이한 부형제, 예컨대 구조화된 물을 사용하는 추출보다 HA 또는 HC-HA/PTX3 복합체의 더 큰 수율을 초래한다. 일부 실시양태에서, 추출물은 추출물(습윤)에 대해 약 900 μg/g 초과의 HA를 함유한다. 일부 실시양태에서, 추출물은 추출물(습윤)에 대해 약 1000 μg/g 초과의 HA를 함유한다. 일부 실시양태에서, 추출물은 추출물(습윤)에 대해 약 1100 μg/g 초과의 HA를 함유한다. 일부 실시양태에서, 추출물은 추출물(습윤)에 대해 약 1200 μg/g 초과의 HA를 함유한다.
희석
특정 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물을 처리하는 방법이 본원에 기재되며, 방법은 희석 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 희석 단계는 추출 및 원심분리 단계를 거친 후 태아 지지 조직에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 희석 단계는 추출 및 원심분리 단계를 거친 후 멸균에 의해 여과되기 전에 태아 지지 조직에서 수행된다. 일부 실시양태에서, 추출물을 희석하는 것(예컨대, 추출물에서 관심 단백질의 농도를 감소시키는 것)은 추출물을 부형제와 혼합함으로써 달성된다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수, 물, 구조화된 물, 주사용수(WFI) 또는 이들의 조합이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI이다. 일부 실시양태에서, 추출물은 약 1 내지 1.5, 약 1.5 내지 2, 약 2 내지 2.5, 약 2.5 내지 3, 약 3-3.5 약 3.5 내지 4, 약 4 내지 5, 약 5 내지 6, 약 6 내지 7, 약 7 내지 8, 약 8 내지 9, 또는 약 9 내지 10의 희석 배율로 부형제와 혼합된다. 일부 실시양태에서, 희석 배율은 5 초과이다. 일부 실시양태에서, 희석 배율은 10 초과이다. 일부 실시양태에서, 희석 배율은 약 2이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 WFI이고 희석 배율은 2이다. 일부 실시양태에서, 부형제는 식염수이고 희석 배율은 2이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 추출물과 부형제를 약 10 내지 30분, 약 30분 내지 1시간, 또는 약 1시간 내지 2시간 동안 혼합하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 추출물 및 부형제는 약 30분 동안 혼합된다. 일부 실시양태에서, 추출물 및 부형제는 약 5-10 rpm, 10-20 rpm, 20-30 rpm, 30-40 rpm, 또는 40-50 rpm의 속도로 혼합된다. 일부 실시양태에서, 추출물 및 부형제는 약 20 rpm의 속도로 혼합된다. 일부 실시양태에서, 추출물 및 부형제는 약 1시간 동안 약 20 rpm의 속도로 혼합된다. 일부 실시양태에서, 추출물 및 부형제는 약 4℃의 온도에서 혼합된다. 일부 실시양태에서, 추출물 및 부형제는 약 4℃에서 약 1시간 동안 약 20 rpm의 속도로 혼합된다. 일부 실시양태에서, 추출물은 여과 단계 전에 희석된다. 일부 실시양태에서, 추출물은 여과 단계 후에 희석된다.
일부 실시양태에서, 희석은 동일한 태아 지지 조직 및 부형제를 포함하는 희석되지 않은 추출물과 비교하여 여과 속도 또는 여과 후 하나 이상의 관심 단백질의 회수율, 하나 이상의 관심 단백질의 회수율, 또는 추출물의 효능(예컨대, ODI-TRAP 검정, M2 검정, NO 검정 및/또는 WST-1 검정으로 측정됨), 또는 이들의 조합을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 희석된 태아 지지 조직은 약 1 μg/ml 내지 약 150 μg/ml의 히알루로난(HA)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 희석된 태아 지지 조직은 약 1 μg/ml 내지 약 90 μg/ml의 히알루로난(HA)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 희석된 태아 지지 조직은 약 90 μg/ml 내지 약 150 μg/ml의 히알루로난(HA)을 포함한다.
다수의 공여자의 풀링
특정 실시양태에서, 풀링된 태아 지지 조직 산물을 생성하는 방법이 본원에 제공된다. 일부 경우에서, 풀링된 태아 지지 조직 산물을 생성하는 방법은 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물을 생성하는 임의의 방법 및 풀링 단계를 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 다수의 대상체로부터 유래된 태아 지지 조직을 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 풀링된 조성물(예컨대, 풀링된 원료 의약품)을 생성하기 위해 다수의 대상체로부터 유래된 태아 지지 조직 산물을 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 태아 지지 조직 산물은 (a) 태아 지지 조직을 냉동분쇄하여 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 생성하는 단계; (b) 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 부형제에서 추출하여 추출물을 생성하는 단계; 및 (c) 추출물을 여과에 의해 멸균하여 태아 지지 조직 산물을 생성하는 단계를 포함할 수 있는 본원에 기재된 방법에 의해 생성된다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 풀링된 조성물(예컨대, 풀링된 원료 의약품)을 생성하기 위해 다수의 공여자 로트로부터 유래된 태아 지지 조직 산물을 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 공여자 로트는 단일 대상체로부터의 인입 태반이다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 풀링된 조성물을 생성하기 위해 적어도 15명의 대상체로부터(예컨대, 유래된) 태아 지지 조직(예컨대, 태아 지지 조직 산물)을 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 풀링된 조성물을 생성하기 위해 적어도 30명의 대상체로부터 태아 지지 조직(예컨대, 태아 지지 조직 산물)을 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 풀링된 조성물을 생성하기 위해 적어도 45명의 대상체로부터 태아 지지 조직(예컨대, 태아 지지 조직 산물)을 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 풀링된 조성물을 생성하기 위해 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100명, 또는 100명 초과의 대상체로부터 태아 지지 조직(예컨대, 태아 지지 조직 산물)을 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 최대 5명의 대상체로부터 태아 지지 조직(예컨대, 태아 지지 조직 산물)을 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 최대 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2명의 대상체로부터 태아 지지 조직(예컨대, 태아 지지 조직 산물)을 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 풀링된 조성물을 생성하기 위해 태아 지지 조직 산물의 다수의 배치를 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 또는 15개의 배치를 풀링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링된 조성물을 생성하기 위해 3개 이하의 배치가 풀링된다. 일부 경우에서, 배치는 다수의 대상체로부터 유래된 태아 지지 조직 산물로부터 풀링된 태아 지지 조직 조성물이다. 일부 경우에서, 배치는 15명의 대상체로부터 유래된 태아 지지 조직 산물을 포함한다. 일부 경우에서, 배치는 적어도 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100명, 또는 100명 초과의 대상체로부터 풀링된다. 일부 경우에서, 배치는 최대 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3 또는 2명의 대상체로부터 풀링된다. 일부 경우에서, 풀링은 3개의 배치를 풀링하는 것을 포함하고, 각각의 배치는 15명의 대상체로부터의 태아 지지 조직을 포함한다.
일부 경우에서, 풀링 단계는 다수의 공여자로부터의 태아 지지 조직(예컨대, 태아 지지 조직 산물)을 흔들거나 혼합하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 혼합은 용기 내에서 발생한다. 일부 경우에서, 셰이커를 사용하여 용기를 혼합한다. 일부 경우에서, 용기는 약 1-40 RPM, 40-400 RPM, 또는 400-800 RPM의 속도 범위로 회전한다. 일부 경우에서, 셰이커는 약 0 - 40 RPM, 약 40 - 80 RPM, 약 80 - 120 RPM, 약 120 - 160 RPM, 약 160 - 200 RPM, 약 200 - 240 RPM, 약 240 - 280 RPM, 약 2800 - 320 RPM, 약 320 - 360 RPM, 약 360 - 400 RPM, 약 4000 - 440 RPM, 약 440 - 480 RPM, 약 480 - 520 RPM, 약 520 - 560 RPM, 약 560 - 600 RPM, 약 600 - 640 RPM, 약 640 - 680 RPM, 약 680 - 720 RPM, 약 720 - 760 RPM, 또는 약 760 - 800 RPM의 속도 범위로 회전한다. 일부 경우에서, 용기는 약 40-400 RPM의 속도 범위로 회전한다. 일부 경우에서, 혼합은 약 0 - 5분, 5 - 10분, 10 - 15분, 15 - 20분, 20 - 25분, 25 - 30분, 30 - 35분, 35 - 40분, 40 - 45분, 45 - 50분, 50 - 55분, 또는 55 - 60분 동안 일어난다. 일부 경우에서, 혼합은 약 1분, 2분, 3분, 4분, 5분, 6분, 7분, 8분, 9분, 10분, 11분, 12분, 13분, 14분, 15분, 16분, 17분, 18분, 19분, 또는 20분 동안 일어난다. 일부 경우에서, 혼합은 15분 동안 일어난다. 일부 경우에서, 혼합은 약 0℃, 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 10℃, 11℃, 12℃, 13℃, 14℃ 또는 15℃의 온도에서 일어난다. 일부 경우에서, 혼합은 약 4℃의 온도에서 일어난다. 일부 경우에서, 혼합은 0℃ - 5℃ 또는 5℃ - 10℃의 온도에서 일어난다. 일부 경우에서, 혼합은 냉장고 내에서 일어난다. 일부 경우에서, 약 4℃의 온도에서 약 15분 동안 약 40-400 RPM의 속도 범위로 회전하는 셰이커가 있는 용기에서 혼합함으로써 다수의 공여자, 배치, 로트 또는 이들의 조합이 함께 풀링된다.
일부 경우에서, 풀링 단계는 체질 단계를 포함한다. 일부 경우에서, 체질 단계는 풀링된 조성물(예컨대, 벌크 원료 의약품)의 최대 입자 크기를 제어한다. 일부 경우에서, 체는 약 0.1 - 0.2 μm 이하, 0.2 - 0.3 μm 이하, 0.3 - 0.4 μm 이하, 0.4 - 0.5 μm 이하, 0.5 - 0.6 μm 이하, 0.6 - 0.7 μm 이하, 0.7 - 0.8 μm 이하, 0.8 - 0.9 μm 이하, 0.9 - 1 μm 이하, 1 - 2 μm 이하, 2 - 3 μm 이하, 3 -4 μm 이하, 4 - 5 μm 이하, 5 - 10 μm 이하, 10 - 20 μm 이하, 20 - 30 μm 이하, 30 - 40 μm 이하, 40 - 50 μm 이하, 50 - 100 μm 이하, 100 - 150 μm 이하, 150 - 200 μm 이하, 200 - 250 μm 이하, 또는 250 - 300 μm 이하의 평균 공극 크기를 갖는다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 배치, 로트 또는 태아 지지 조직 산물을 풀링하기 위해 배치, 로트 또는 태아 지지 조직 산물을 바이러스 시험하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 풀링 단계는 동일한 방법으로 생성되지만 풀링 단계를 거치지 않은 조성물과 비교하여 HC-HA/PTX3, HA 및 다른 관심 단백질의 높은 수율, 개선된 안정성, 감소된 가변성, 개선된 효능 또는 이들의 조합을 갖는 조성물을 생성한다.
멸균
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 임의의 적합한 방법에 의해 멸균된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 조사, 화학적 멸균제에 대한 노출, 열, 여과, 에틸렌 옥사이드 가스에 대한 노출, 또는 태아 지지 조직 산물을 살아있는 미생물에 의한 오염으로부터 자유롭게 만드는 임의의 공정에 의해 멸균된다.
일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 여과에 의해 멸균된다. 일부 실시양태에서, 여과에 의해 태아 지지 조직을 멸균하는 것은 필터를 통해 태아 지지 조직을 통과시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 필터 공극 크기는 박테리아, 효모, 곰팡이 또는 바이러스가 필터를 통과하는 것을 방지하도록 선택된다. 일부 실시양태에서, 필터는 약 0.1 - 0.2 μm 이하, 0.2 - 0.3 μm 이하, 0.3 - 0.4 μm 이하, 0.4 - 0.5 μm 이하, 0.5 - 0.6 μm 이하, 0.6 - 0.7 μm 이하, 0.7 - 0.8 μm 이하, 0.8 - 0.9 μm 이하, 0.9 - 1 μm 이하, 1 - 2 μm 이하, 2 - 3 μm 이하, 3 -4 μm 이하, 4 - 5 μm 이하, 5 - 10 μm 이하, 10 - 20 μm 이하, 20 - 30 μm 이하, 30 - 40 μm 이하, 40 - 50 μm 이하, 50 - 100 μm 이하, 100 - 150 μm 이하, 150 - 200 μm 이하, 200 - 250 μm 이하, 또는 250 - 300 μm 이하의 평균 크기를 갖는 공극을 포함한다. 일부 실시양태에서, 필터는 약 0.05 - 0.2 μm의 평균 공극 크기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 필터는 약 0.4 μm 이하의 평균 크기를 갖는 공극을 포함한다. 일부 실시양태에서, 필터는 약 0.3 μm 이하의 평균 크기를 갖는 공극을 포함한다. 일부 실시양태에서, 필터는 약 0.2 μm 이하의 평균 크기를 갖는 공극을 포함한다. 일부 실시양태에서, 필터는 약 0.2 μm의 평균 크기를 갖는 공극을 포함한다. 일부 실시양태에서, 여과에 의한 멸균은 제1 필터 및 제2 필터를 통해 태아 지지 조직을 통과시키는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 필터는 제2 필터의 평균 공극 크기보다 큰 평균 공극 크기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 또는 제2 필터는 약 0.1 - 0.2 μm 이하, 0.2 - 0.3 μm 이하, 0.3 - 0.4 μm 이하, 0.4 - 0.5 μm 이하, 0.5 - 0.6 μm 이하, 0.6 - 0.7 μm 이하, 0.7 - 0.8 μm 이하, 0.8 - 0.9 μm 이하, 0.9 - 1 μm 이하, 1 - 2 μm 이하, 2 - 3 μm 이하, 3-4 μm 이하, 4 - 5 μm 이하, 5 - 10 μm 이하의 평균 공극 크기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 각각의 제1 및 제2 필터는 약 0.05 - 0.2 μm의 평균 공극 크기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제1 필터는 약 0.6 μm 이하의 평균 공극 크기를 갖고 제2 필터는 약 0.4 μm 이하의 평균 공극 크기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제1 필터는 약 0.5 μm 이하의 평균 공극 크기를 갖고 제2 필터는 약 0.3 μm 이하의 평균 공극 크기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제1 필터는 약 0.45 μm 이하의 평균 공극 크기를 갖고 제2 필터는 약 0.2 μm 이하의 평균 공극 크기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 제1 필터는 약 0.45 μm의 평균 공극 크기를 갖고 제2 필터는 약 0.2 μm의 평균 공극 크기를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 필터는 멸균 유닛에 수용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 필터는 폴리에테르술폰(PES), 폴리비닐리덴 플루오라이드(PVDF), 폴리테트라플루오르에틸렌(PTFE), 폴리프로필렌, 폴리에틸렌, 폴리아미드, 셀룰로스, 셀룰로스 니트레이트, 나일론 또는 이들의 조합을 포함하는 막이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 필터는 감마선 조사에 의해 멸균되었다. 일부 실시양태에서, 여과 동안의 여과 압력은 약 0-10 psi, 약 10-20 psi, 약 20-30 psi, 약 30-40 psi, 약 40-50 psi, 약 50-60 psi, 약 60-70 psi, 약 70-80 psi, 약 80-90 psi 또는 약 90-100 psi이다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 임의의 필터의 유효 여과 면적은 약 0-20 cm2, 약 20-40 cm2, 약 40-60 cm2, 약 60-80 cm2, 약 80-100 cm2, 약 100-120 cm2, 약 120-140 cm2, 약 140-160 cm2, 약 160-180 cm2, 또는 약 180-200 cm2이다. 일부 실시양태에서, 필터의 전체 직경은 약 0-10 mm, 약 20-20 mm, 약 20-30 mm, 약 30-40 mm, 약 40-50 mm, 약 50-60 mm , 약 60-70 mm, 약 70-80 mm, 약 80-90 mm, 약 90-100 mm, 약 100-200 mm, 약 200-300 mm, 약 300-400 mm, 약 400-500 mm, 약 500-600 mm, 약 600-700 mm, 약 700-800 mm, 약 800-900 mm, 또는 약 900-1000 mm이다. 일부 실시양태에서, 필터의 전체 직경은 약 67 mm이다. 일부 실시양태에서, 필터의 전체 직경은 약 68 mm이다. 일부 실시양태에서, 필터의 전체 높이는 약 0-10 mm, 약 20-20 mm, 약 20-30 mm, 약 30-40 mm, 약 40-50 mm, 약 50-60 mm , 약 60-70 mm, 약 70-80 mm, 약 80-90 mm, 약 90-100 mm, 약 100-200 mm, 약 200-300 mm, 약 300-400 mm, 약 400-500 mm, 약 500-600 mm, 약 600-700 mm, 약 700-800 mm, 약 800-900 mm, 또는 약 900-1000 mm이다. 일부 실시양태에서, 필터의 전체 높이는 약 82 mm이다. 일부 실시양태에서, 필터의 전체 높이는 약 83 mm이다. 일부 실시양태에서, 필터는 제조 순방향 흐름 시험을 성공적으로 통과하였다. 일부 실시양태에서, 필터에 대한 순방향 유속 한계는 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 또는 1.0 mL/분 초과이다. 일부 실시양태에서, 필터에 대한 순방향 유속 한계는 물로 완전히 습윤되었을 때 약 2400, 2450, 2500, 2550, 2600, 2650, 2700, 2750, 2800, 2850, 2900, 또는 2900 mbar 초과의 시험 압력에서 약 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1.0, 또는 1.0 mL/분 초과이다. 일부 실시양태에서, 필터에 대한 순방향 흐름 한계는 물로 완전히 습윤되었을 때 약 2760 mbar의 시험 압력에서 약 0.58 mL/분이다. 일부 실시양태에서, 필터에 대한 순방향 흐름 한계는 물로 완전히 습윤되었을 때 약 2700 - 2800 mbar의 시험 압력에서 약 0.40 - 0.50 mL/분, 0.50 - 0.60 mL/분, 또는 0.60 - 0.70 mL/분이다. 일부 실시양태에서, 순방향 흐름 시험 한계는 순방향 흐름 한계와 미생물학적 챌린지 시험의 상관관계에 의해 박테리아 제거에 대해 검증되었다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 적용 가능한 식품 및 약물 투여 지침에 따른 절차를 이용하여 필터의 박테리아 보유를 검증하기 위해 허용되는 챌린지 미생물의 보유에 대한 시험이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 임의의 적합한(예컨대, 의학적으로 허용되는) 방법에 의해 최종 멸균된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 감마 방사선에 노출된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 태아 지지 조직 분말 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 10 내지 약 75 킬로그레이(kGy)의 감마 방사선에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 태아 지지 조직 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 10 내지 약 30 kGy의 감마 방사선에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 태아 지지 조직 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 15 내지 약 30 kGy의 감마 방사선에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 태아 지지 조직 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 25 kGy의 감마 방사선에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 태아 지지 조직 분말 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 17.5 kGy의 감마 방사선에 노출된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 전자 빔(E-빔) 멸균된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 태아 지지 조직 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 10 내지 약 75 킬로그레이의 E-빔 방사선에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 태아 지지 조직 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 10 내지 약 30 kGy의 E-빔 방사선에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 태아 지지 조직 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 15 내지 약 30 kGy의 E-빔 방사선에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 태아 지지 조직 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 25 kGy의 E-빔 방사선에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 태아 지지 조직 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 약 17.5 kGy의 E-빔 방사선에 노출된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 태아 지지 조직 분말 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 전자 빔에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 태아 지지 조직 분말 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 X-선 방사선에 노출된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 분말 산물은 태아 지지 조직 분말 산물을 멸균하기에 충분한 기간 동안 UV 방사선에 노출된다.
특정 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물을 제조하는 방법이 본원에 제공되며, 방법은 회수된 HA의 개선된 백분율을 초래한다. 일부 실시양태에서, 적어도 또는 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과의 HA가 회수된다. 일부 실시양태에서, HA는 HMW HA이다. 일부 실시양태에서, 방법은 HC-HA/PTX3의 개선된 백분율을 초래한다. 일부 실시양태에서, 적어도 또는 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과의 HC-HA/PTX3이 회수된다.
본원에 기재된 바와 같은 방법은 특정 실시양태에서 미립자 또는 분해물을 제거한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법으로 적어도 또는 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과의 미립자 또는 분해물이 제거된다. 일부 실시양태에서, 미립자 또는 분해물은 클로라이드를 포함한다.
충전 및 밀봉
특정 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물을 처리하는 방법이 본원에 기재되며, 방법은 충전 단계, 밀봉 단계 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 경우에서, 충전 단계는 태아 지지 조직을 용기(예컨대, 바이알, 밀봉 가능한 백, 밀봉 가능한 패킷, 밀봉 가능한 파우치 등)에 파일링(filing)하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 충전 단계는 태아 지지 조직 산물 또는 풀링된 벌크 원료 의약품을 용기(예컨대, 바이알, 밀봉 가능한 백, 밀봉 가능한 패킷, 밀봉 가능한 파우치 등)에 파일링하는 것을 포함한다. 일부 경우에서, 태아 지지 조직 산물 또는 풀링된 벌크 원료 의약품은 용기의 목표 충전 중량에 도달할 때까지 용기에 충전된다. 일부 경우에서, 태아 지지 조직 산물 또는 풀링된 벌크 원료 의약품은 충전 전에 멸균된다. 일부 경우에서, 충전 및 밀봉은 (예컨대, 공기 공급, 재료, 장비, 직원 또는 이들의 조합이 멸균성을 유지하도록 규제되는 제어된 환경에서) 무균적으로 수행된다. 일부 경우에서, 멸균 환경에서 인간 개입 없이 용기를 형성하고 충전하고 밀봉한다. 일부 경우에서, 용기는 즉시 성형되고 태아 지지 조직 산물 또는 풀링된 벌크 원료 의약품으로 충전되고 어떠한 외부 인간 개입도 없이 멸균 환경에서 단일 공정으로 밀봉된다. 일부 경우에서, 멸균 산물은 블로우 충전 밀봉(BFS) 장비를 사용하여 용기에 충전 및 밀봉된다. 일부 경우에서, 용기는 멸균 가능하다(예컨대, 오토클레이빙으로 멸균될 수 있음). 일부 경우에서, 본원의 방법은 용기를 오토클레이빙하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 경우에서, 밀봉은 히트 실러를 사용한 밀봉을 포함한다. 일부 경우에서, 용기는 약 0.01 ml 내지 0.50 ml, 0.51 ml 내지 3.0 ml, 3.1 ml 내지 6.0 ml, 6.1 ml 내지 15 ml, 15 ml 내지 20 ml, 20 ml 내지 25 ml, 또는 25 ml 내지 30 ml의 태아 지지 조직 산물 또는 풀링된 벌크 원료 의약품을 함유하도록 충전된다. 일부 경우에서, 용기는 약 1 ml, 약 1.5 ml, 약 2 ml, 약 2.5 ml, 약 3 ml, 약 3.5 ml, 약 4 ml, 약 4.5 ml, 약 5 ml, 약 5.5 ml, 약 6 ml, 약 6.5 ml, 약 7 ml, 약 7.5 ml, 약 8 ml, 약 8.5 ml, 약 9 ml, 약 9.5 ml, 약 10 ml, 약 10.5 ml, 약 11 ml, 약 11.5 ml, 약 12 ml, 약 12.5 ml, 약 13 ml, 약 13.5 ml, 약 14 ml, 약 14.5 ml, 약 15 ml, 약 15.5 ml, 약 16 ml, 약 16.5 ml, 약 17 ml, 약 17.5 ml, 약 18 ml, 약 18.5 ml, 약 19 ml, 약 19.5 ml, 또는 약 20 ml의 태아 지지 조직 산물 또는 풀링된 벌크 원료 의약품을 함유하도록 충전된다.
태아 지지 조직 산물 제형
특정 실시양태에서, (a) 태아 지지 조직을 냉동분쇄하여 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 생성하는 단계; (b) 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 부형제에서 추출하여 추출물을 생성하는 단계; 및 (c) 추출물을 약 0.6 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용한 후 약 0.4 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 여과에 의해 멸균하는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 태아 지지 조직 산물이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 태반 양막(PAM), 또는 실질적으로 단리된 PAM, 탯줄 양막(UCAM) 또는 실질적으로 단리된 UCAM, 융모막 또는 실질적으로 단리된 융모막, 양막-융모막 또는 실질적으로 단리된 양막-융모막, 태반 또는 실질적으로 단리된 태반, 탯줄 또는 실질적으로 단리된 탯줄, 또는 이들의 임의의 조합이다.
본원에 기재된 방법에 의해 생성된 태아 지지 조직 산물은 특정 실시양태에서 개선된 안정성을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 높은 백분율의 HA를 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 적어도 또는 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과의 HA를 포함한다. 일부 실시양태에서, HA는 HMW HA이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 더 높은 백분율의 HC-HA/PTX3을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 적어도 또는 약 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%, 또는 99% 초과의 HC-HA/PTX3을 포함한다.
본원에 기재된 방법에 의해 생성된 태아 지지 조직 산물은 특정 실시양태에서 미립자 또는 분해물을 실질적으로 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최대 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 15%, 또는 15% 초과의 미립자 또는 분해물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 미립자 또는 분해물은 클로라이드를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 용액, 현탁액 또는 에멀젼으로 제형화된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 국소 투여용으로 제형화된다.
본원에 개시된 약제학적 제형은 임의의 적합한 방식으로 제형화된다. 임의의 적합한 기술, 담체 및/또는 부형제가 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물과 함께 사용하기 위해 고려된다.
크림 및 로션
특정 실시양태에서, 크림 형태인 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형이 본원에 개시된다. 특정 경우에서, 크림은 수중유 에멀젼 또는 유중수 에멀젼에 분산된 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 포함하는 반고체(예컨대, 부드러운 고체 또는 걸쭉한 액체) 제형이다.
특정 실시양태에서, 로션 형태인 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형이 본원에 개시된다. 특정 경우에서, 로션은 유체 에멀젼(예컨대, 수중유 에멀젼 또는 유중수 에멀젼)이다. 일부 실시양태에서, 로션 및/또는 크림의 소수성 성분은 동물(예컨대, 라놀린, 대구 간유 및 앰버그리스), 식물(예컨대, 홍화유, 피마자유, 코코넛유, 면실유, 멘헤이든유, 팜핵유, 팜유, 땅콩유, 대두유, 평지씨유, 아마인유, 미강유, 송유, 호마유, 해바라기씨유), 또는 석유(예컨대, 광유 또는 바셀린)으로부터 유래된다.
연고
특정 실시양태에서, 연고 형태인 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형이 본원에 개시된다. 특정 경우에서, 연고는 체온에서 연화되거나 용융되는 반고체 제제이다.
페이스트
특정 실시양태에서, 페이스트 형태인 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형이 본원에 개시된다. 특정 경우에서, 페이스트는 적어도 20%의 고체를 함유한다. 특정 경우에서, 페이스트는 체온에서 유동하지 않는 연고이다.
겔 및 필름
특정 실시양태에서, 겔 형태인 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형이 본원에 개시된다. 특정 경우에서, 겔은 액체에 분산된 큰 유기 분자의 분산액으로 이루어진 반고체 (또는 반강체) 시스템이다. 일부 경우에서, 겔은 수용성이며 따뜻한 물 또는 식염수를 사용하여 제거된다.
특정 경우에서, 피부 병변의 치료에서, 병변을 드레싱과 접촉시키는 것은 종종 손상된 조직을 방해할 수 있다. 피부의 상당한 면적을 포함하는 화상 표면 병변과 같은 상처에 대한 많은 드레싱의 제거는 상당한 통증을 유발할 수 있으며, 종종 부분적으로 치유된 상처의 적어도 일부를 다시 열 수 있다. 일부 경우에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형은 환부에 액체로서 적용되고, 액체 겔은 환부에 필름으로서 적용된다. 일부 경우에서, 필름은 수용성 필름이며, 물 또는 순한 수성 세제로 제거되어 상처 드레싱 제거와 관련된 통증 및 불편함을 방지할 수 있다. 특정 경우에서, 본원에 기재된 국소 제형은 폴리알킬옥사졸린으로 제조된 가요성 필름을 포함하는 피부 필름이다. 일부 경우에서, 필름은 폴리알킬옥사졸린으로 제조된 구조층 및 필름을 제 위치에 유지시키는 감압 접착층을 갖는다.
스틱
특정 실시양태에서, 스틱 형태인 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형이 본원에 개시된다. 특정 경우에서, 스틱은 체온에서 용융되는 고체 투여 형태이다. 일부 실시양태에서, 스틱은 왁스, 중합체, 수지, 단단한 매쓰로 융합된 건조 고체, 및/또는 융합된 결정을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형은 수렴성 펜슬(즉, (1) 결정이 결정화수를 잃고 용융될 때까지 결정을 가열하고, (2) 용융된 결정을 주형에 붓고 경화시켜 제조된 스틱)의 형태이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형은 왁스를 포함하는 스틱 형태이다(예컨대, 왁스는 용융되고 스틱 형태로 고형화되는 적절한 몰드에 부어짐).
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형은 용융 베이스(즉, 체온에서 연화되는 베이스)를 포함하는 스틱 형태이다. 용융 베이스의 예는 왁스, 오일, 중합체 및 겔을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형은 습윤 베이스(즉, 수분 첨가에 의해 활성화되는 베이스)를 포함하는 스틱 형태이다.
패치
특정 실시양태에서, 패치를 통해 투여되는 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형은 중합체 또는 접착제에 용해 및/또는 분산된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 필름, 패치는 태아 지지 조직 산물의 연속적, 박동성 또는 주문형 전달을 위해 구성된다.
상처 드레싱
특정 실시양태에서, 상처 드레싱과 함께 (또는 이를 통해) 투여되는 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 국소 제형이 개시된다. 상처 드레싱은 거즈, 투명 필름 드레싱, 히드로겔, 폴리우레탄 폼 드레싱, 히드로콜로이드 및 알기네이트를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 경우에서, 상처 드레싱은 상처 치유를 촉진한다. 일부 경우에서, 상처 드레싱은 비정상적인 상처 치유를 감소시키거나 억제한다.
임플란트/보철물
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 포함하는 임플란트 또는 보철물이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 보철물은 인공 관절이다. 일부 실시양태에서, 임플란트는 스텐트이다.
일부 실시양태에서, 보철물은 인공 고관절이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 인공 고관절의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 인공 고관절로부터 주위 조직으로 용출된다.
일부 실시양태에서, 보철물은 인공 무릎이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 인공 무릎의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 인공 무릎으로부터 주위 조직으로 용출된다.
일부 실시양태에서, 보철물은 인공 상완와 관절이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 인공 상완와 관절의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 인공 상완와 관절로부터 주위 조직으로 용출된다.
일부 실시양태에서, 보철물은 인공 발목이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 인공 발목의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 인공 발목으로부터 주위 조직으로 용출된다.
일부 실시양태에서, 임플란트는 관상 스텐트이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트로부터 주변 심장 조직으로 용출된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 임플란트는 요관 스텐트이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트로부터 주위 조직으로 용출된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 임플란트는 요도 또는 전립선 스텐트이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트로부터 주위 조직으로 용출된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 임플란트는 식도 스텐트이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트로부터 주위 조직으로 용출된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 임플란트는 뼈 임플란트이다. 일부 실시양태에서, 뼈 임플란트는 골유착 임플란트이다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "골유착성 임플란트"는 조골세포 및 지지 결합 조직이 이동할 수 있는 공극을 함유하는 3차원 임플란트를 의미한다. 일부 실시양태에서, 뼈 임플란트는 본원에 기재된 조성물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 뼈 임플란트는 치과 임플란트이다. 일부 실시양태에서, 뼈 임플란트는 무릎 또는 관절 대체에 사용된다. 일부 실시양태에서, 뼈 임플란트는 두개안면 보철물(예컨대, 인공 귀, 안와 보철물, 코 보철물)이다.
일부 실시양태에서, 임플란트는 뼈 스텐트이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 스텐트로부터 주위 뼈로 용출된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈의 척수내 관으로 삽입된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 족근동에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 무릎 또는 관절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 임플란트는 K-와이어 또는 덴함(Denham) 핀이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 K-와이어 또는 덴함 핀의 외부에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 K-와이어 또는 덴함 핀으로부터 주위 뼈로 용출된다.
기타 제형
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 피부 페인트로서 투여된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 페인트(필름 형성제로도 공지됨)는 용매, 단량체 또는 중합체, 활성제 및 임의적으로 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제로 구성된 용액이다. 용매는 조직에 적용된 후 증발하여 단량체 또는 중합체 및 활성제로 구성된 얇은 코팅을 남긴다. 코팅은 활성제를 보호하고 적용 부위에서 고정된 상태로 유지한다. 이는 손실될 수 있는 활성제의 양을 감소시키고 이에 따라 개체 피부의 환부에 전달되는 양을 증가시킨다. 비제한적 예로서, 페인트는 콜로디온(예컨대, 플렉시블 콜로디온(Flexible Collodion), USP), 및 당류 실록산 공중합체 및 가교제를 포함하는 용액을 포함한다. 콜로디온은 피록실린(니트로셀룰로스)을 함유하는 에틸 에테르/에탄올 용액이다. 에틸 에테르/에탄올 용액은 적용 후 증발하여 피록실린의 박막을 남긴다. 당류 실록산 공중합체를 포함하는 용액에서, 당류 실록산 공중합체는 용매의 증발이 당류 실록산 공중합체의 가교를 개시한 후 코팅을 형성한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 제어 방출 입자, 지질 복합체, 리포좀, 나노입자, 미소구, 마이크로입자, 나노캡슐 또는 피부로의 국소 전달을 향상시키거나 용이하게 하는 다른 작용제 내에 임의적으로 혼입된다. 약제학적 제제를 위한 통상적인 마이크로캡슐화 공정의 예는 미국 특허 번호 3,737,337(이러한 개시내용을 위해 본원에 참조로 포함됨)에 나타나 있다.
일부 경우에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 리포좀 제형이다. 인지질과 유기 용매의 혼합물에 수성 버퍼를 도입하여 리포좀을 제조하고 이어서 유기 용매를 감압 하에서 증발시켜 제거한다. 리포좀 제제의 예는 문헌(Proc. Natl. Acad. Sci. 1978, 75, 4194-98, 이러한 개시내용을 위해 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 리포좀은 크기 배제 크로마토그래피(SEC)에 의해 입자 크기에 따라 분류된다. 리포좀의 하위 분획은 입자 크기에 대해 광자 상관관계 분광학(PCS)에 의해 추가로 크기 조정된다. 효소 검정(예컨대, 포스파티딜콜린(PC) 검정)은 리포좀의 지질 함량을 분석하는 데 이용된다.
피부과용 부형제
특정 실시양태에서, 담체를 포함하는 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 제형이 본원에 개시된다. 적합한 담체는 카르보머, 셀룰로스, 콜라겐, 에탄올, 글리세린, 헥실렌 글리콜, 히알루론산, 히드록시프로필 셀룰로스, 인산, 폴리올 (프로필렌글리콜, 폴리에틸렌-글리콜, 글리세롤, 크레모포르 등), 폴리소르베이트 80, 식염수, 수산화나트륨, 인산나트륨, 소르비탈, 물, 잔탄 검 식물성유(예컨대, 올리브유), 주사 가능한 유기 에스테르(예컨대, 에틸 올레에이트), 지방유(예컨대, 호마유), 및 합성 지방산 에스테르(예컨대, 에틸 올레에이트 또는 트리글리세라이드)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
침투 증강제
특정 실시양태에서, 침투 증강제를 포함하는 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 제형이 본원에 개시된다. 침투 증강제는 나트륨 라우릴 술페이트, 나트륨 라우레이트, 폴리옥시에틸렌-20-세틸 에테르, 라우레스-9, 나트륨 도데실술페이트, 디옥틸 나트륨 술포숙시네이트, 폴리옥시에틸렌-9-라우릴 에테르(PLE), 트윈(Tween) 80, 노닐페녹시폴리에틸렌(NP-POE), 폴리소르베이트, 나트륨 글리코콜레이트, 나트륨 데옥시콜레이트, 나트륨 타우로콜레이트, 나트륨 타우로디히드로푸시데이트, 나트륨 글리코디히드로푸시데이트, 올레산, 카프릴산, 모노 및 디글리세라이드, 라우르산, 아실콜린, 카프릴산, 아실카르니틴, 나트륨 카프레이트, EDTA, 시트르산, 살리실레이트, DMSO, 데실메틸 술폭사이드, 에탄올, 이소프로판올, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세롤, 프로판디올 및 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 본원에 기재된 국소 제형은 최소의 전신 노출을 위해 설계되고, 예컨대 소량의 침투 증강제를 포함한다.
겔화제
특정 실시양태에서, 겔화제 (또는 증점제)를 포함하는 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 제형이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 제형은 약 0.1% 내지 약 5%, 약 0.1% 내지 약 3%, 또는 약 0.25% 내지 약 2%의 겔화제를 추가로 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 개시된 제형의 점도는 약 100 내지 약 500,000 cP, 약 100 cP 내지 약 1,000 cP, 약 500 cP 내지 약 1500 cP, 약 1000 cP 내지 약 3000 cP, 약 2000 cP 내지 약 8,000 cP, 약 4,000 cP 내지 약 10,000 cP, 약 10,000 cP 내지 약 50,000 cP의 범위이다. 겔 제형의 제조에 사용하기에 적합한 겔화제는 셀룰로스, 셀룰로스 유도체, 셀룰로스 에테르(예컨대, 카르복시메틸셀룰로스, 에틸셀룰로스, 히드록시에틸셀룰로스, 히드록시메틸셀룰로스, 히드록시프로필메틸셀룰로스, 히드록시프로필셀룰로스, 메틸셀룰로스), 구아 검, 잔탄 검, 로커스트콩 검, 알기네이트(예컨대, 알긴산), 실리케이트, 전분, 트라가칸트, 카르복시비닐 중합체, 카라기난, 파라핀, 바셀린, 아카시아(아라비아 검), 한천, 알루미늄 마그네슘 실리케이트, 나트륨 알기네이트, 나트륨 스테아레이트, 블래더랙, 벤토나이트, 카르보머, 카라기난, 카르보폴, 크산탄, 셀룰로스, 미정질 셀룰로스(MCC), 세라토니아, 콘드루스, 덱스트로스, 푸셀라란, 젤라틴, 가티 검, 구아 검, 헥토라이트, 락토스, 슈크로스, 말토덱스트린, 만니톨, 소르비톨, 꿀, 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분, 감자 전분, 젤라틴, 스테쿨리아 검, 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG 200-4500), 검 트라가칸트, 에틸 셀룰로스, 에틸히드록시에틸 셀룰로스, 에틸메틸 셀룰로스, 메틸 셀룰로스, 히드록시에틸 셀룰로스, 히드록시에틸메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스, 폴리(히드록시에틸 메타크릴레이트), 옥시폴리젤라틴, 펙틴, 폴리겔린, 포비돈, 프로필렌 카르보네이트, 메틸 비닐 에테르/말레산 무수물 공중합체(PVM/MA), 폴리(메톡시에틸 메타크릴레이트), 폴리(메톡시에톡시에틸 메타크릴레이트), 히드록시프로필 셀룰로스, 히드록시프로필메틸-셀룰로스(HPMC), 나트륨 카르복시메틸-셀룰로스(CMC), 이산화규소, 폴리비닐피롤리돈(PVP: 포비돈), 또는 이들의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
겔은 단상 또는 2상 시스템을 포함한다. 단상 겔은 분산된 거대분자와 액체 사이에 명백한 경계가 존재하지 않는 방식으로 액체 전체에 균일하게 분포된 유기 거대분자로 이루어진다. 일부 단상 겔은 합성 거대분자(예컨대, 카르보머) 또는 천연 검(예컨대, 트라가칸트)으로부터 제조된다. 일부 실시양태에서, 단상 겔은 일반적으로 수성이지만 또한 알콜 및 오일을 사용하여 제조될 것이다. 2상 겔은 작은 개별 입자의 네트워크로 이루어진다.
겔은 또한 소수성 또는 친수성으로 분류될 수 있다. 특정 실시양태에서, 소수성 겔의 베이스는 폴리에틸렌 또는 콜로이드 실리카, 또는 알루미늄 또는 아연 비누로 겔화된 지방유를 갖는 액체 파라핀으로 이루어진다. 대조적으로, 소수성 겔의 베이스는 일반적으로 물, 글리세롤 또는 적절한 겔화제(예컨대, 트라가칸트, 전분, 셀룰로스 유도체, 카르복시비닐중합체 및 마그네슘-알루미늄 실리케이트)로 겔화된 프로필렌 글리콜로 이루어진다.
필름으로 피부에 적용 시 액체 및 겔로서 적용되는 제형에 사용하기에 적합한 작용제는 수용액에 혼입될 때 열가역성 겔을 형성하는 것으로 공지된 폴리옥시프로필렌 및 폴리옥시에틸렌으로 구성된 중합체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 이러한 중합체는 체온에 가까운 온도에서 액체 상태로부터 겔 상태로 변하는 능력이 있으므로 환부에 겔 및/또는 필름으로 적용되는 유용한 제형을 가능하게 한다. 체온에서 겔화되고 본원에 기재된 겔 및/또는 필름에 사용되는 중합체의 예는 폴록사머(예컨대, 에틸렌 옥사이드와 프로필렌 옥사이드의 블록 공중합체인 PLURONICS F68®, F88®, F108® 및 F127®)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 액체 상태에서 겔 상태로의 상 전이는 중합체 농도 및 용액 중의 성분에 따라 달라진다.
접착제
일부 경우에서, 본원에 기재된 제형은 감압 접착제(예컨대, 폴리알킬옥사졸린 중합체)를 포함하고 피부의 환부에 접착 필름을 적용할 수 있게 한다.
연화제
특정 실시양태에서, 연화제를 포함하는 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 제형이 본원에 개시된다. 연화제는 피마자유 에스테르, 코코아 버터 에스테르, 홍화유 에스테르, 면실유 에스테르, 옥수수유 에스테르, 올리브유 에스테르, 대구 간유 에스테르, 아몬드유 에스테르, 아보카도유 에스테르, 팜유 에스테르, 호마유에스테르, 스쿠알렌 에스테르, 기쿠이유 에스테르, 대두유 에스테르, 아세틸화된 모노글리세라이드, 에톡실화된 글리세릴 모노스테아레이트, 헥실 라우레이트, 이소헥실 라우레이트, 이소헥실 팔미테이트, 이소프로필 팔미테이트, 메틸 팔미테이트, 데실올레이트, 이소데실 올레에이트, 헥사데실 스테아레이트 데실스테아레이트, 이소프로필 이소스테아레이트, 메틸 이소스테아레이트, 디이소프로필 아디페이트, 디이소헥실 아디페이트, 디헥실데실 아디페이트, 디이소프로필 세바케이트, 라우릴 락테이트, 미리스틸 락테이트, 및 세틸 락테이트, 올레일 미리스테이트, 올레일 스테아레이트, 및 올레일 올레이트, 펠라르곤산, 라우르산, 미리스트산, 팔미트산, 스테아르산, 이소스테아르산, 히드록시스테아르산, 올레산, 리놀레산, 리시놀레산, 아라키드산, 베헨산, 에루크산, 라우릴 알콜, 미리스틸 알콜, 세틸 알콜, 헥사데실 알콜, 스테아릴 알콜, 이소스테아릴 알콜, 히드록시스테아릴 알콜, 올레일 알콜, 리시놀레일 알콜, 베헤닐 알콜, 에루실 알콜, 2-옥틸 도데카닐 알콜, 라놀린 및 라놀린 유도체, 밀랍, 경랍, 미리스틸 미리스테이트, 스테아릴 스테아레이트, 카르나우바 왁스, 칸데릴라 왁스, 레시틴 및 콜레스테롤을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
기타 부형제
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 포함하는 제형은, 예컨대 연마제, 흡수제, 고화 방지제, 수렴제, 정유, 방향제, 피부 컨디셔닝제, 피부 치유제, 피부 보호제(예컨대, 선스크린, 또는 자외선 흡수 또는 산란제), 피부 진정제, 또는 이들의 조합과 같은 추가 부형제를 포함한다.
사용 방법
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 방법에 의해 생성된 태아 지지 조직 산물을 사용하는 방법이 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직은 태반 양막(PAM), 또는 실질적으로 단리된 PAM, 탯줄 양막(UCAM) 또는 실질적으로 단리된 UCAM, 융모막 또는 실질적으로 단리된 융모막, 양막-융모막 또는 실질적으로 단리된 양막-융모막, 태반 또는 실질적으로 단리된 태반, 탯줄 또는 실질적으로 단리된 탯줄, 또는 이들의 임의의 조합이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 방법에 의해 생성된 태아 지지 조직 산물은 태아 지지 조직 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 국소 투여 또는 주사에 의한 투여를 위해 제형화된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 용액, 현탁액 또는 에멀젼으로 제형화된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 흉터, 염증, 유착 및 혈관형성 중 적어도 하나를 억제하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 상처 치유를 촉진하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용이다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 덮개(예컨대, 상처 덮개)로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 상처 복구를 촉진하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 유착에 대한 장벽으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 단백질, 글리칸, 단백질-글리칸 복합체(예컨대, 히알루론산과 IαI 및 PTX3의 중쇄의 복합체) 및 조직 복구를 촉진하는 효소를 포함한다. 예컨대, AM의 간질은 성장 인자, 항혈관형성 및 항염증 단백질 뿐만 아니라 다양한 프로테아제에 대한 천연 억제제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물에서 발견되는 단백질 및 효소는 태아 지지 조직 산물 밖으로 및 주위 조직으로 확산된다.
손상된 조직 복구 및 보충
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 상처 덮개로서 사용되거나 상처 복구를 촉진하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용(예컨대, 기능적으로 상동적인 사용 또는 구조적으로 상동적인 사용)이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 조직은 부상(예컨대, 화상; 외과적 절개; 감염, 외상 또는 독소로 인한 괴사 영역; 열상)으로 인해 손상, 약화 또는 손실되었다. 일부 실시양태에서, 조직은 화상으로 인해 손상, 약화 또는 손실되었다. 일부 실시양태에서, 조직은 상처(예컨대, 절개, 열상, 찰과상)로 인해 손상, 약화 또는 손실되었다. 일부 실시양태에서, 조직은 괴사로 인해 손상, 타협 또는 소실되었다. 일부 실시양태에서, 조직은 궤양으로 인해 손상, 약화 또는 손실되었다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통해) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 단백질, 글리칸, 단백질-글리칸 복합체(예컨대, 히알루론산과 IαI 및 PTX3의 중쇄의 복합체) 및 조직 복구를 촉진하는 효소를 포함한다. 예컨대, AM의 간질은 성장 인자, 항혈관형성 및 항염증 단백질 뿐만 아니라 다양한 프로테아제에 대한 천연 억제제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물에서 발견되는 단백질 및 효소는 태아 지지 조직 산물 밖으로 및 주위 조직으로 확산된다.
화상
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 화상에 적용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 1도 화상에 적용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 2도 화상에 적용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 3도 화상에 적용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 화상에 배치하기 전에 기재에 적용된다.
상처
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 피부의 상처(예컨대, 절개, 열상, 찰과상, 궤양, 자창, 관통)에 적용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 상처에 배치되기 전에 기재에 적용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통해) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기관(예컨대, 피부, 뇌, 위, 신장, 간, 장, 폐, 방광, 기관, 식도, 질, 요관, 및 혈관벽)의 절개에 적용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 외과적 절개에 적용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 결장 절제 부위에 적용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 위절제 부위에 적용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 유방 수술(예컨대, 유방 축소 수술, 유방 확대 수술 및 유방 절제) 부위에 적용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 상처에 배치되기 전에 기재에 적용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 피부의 절개(예컨대, 표피, 진피 및/또는 피하조직에 대한 절개) 위의 덮개로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 치질 수술 후 피부를 복구하거나 보충하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 상처에 배치되기 전에 기재에 적용된다.
괴사
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 감염으로부터) 괴사 조직 부위 위의 보호 이식편으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 괴사 피부 부위 위의 보호 이식편으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 괴사 조직 부위에 배치된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 괴사 조직에 배치되기 전에 기재에 적용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통해) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
궤양
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 궤양 위의 보호 덮개로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 궤양에 배치되기 전에 기재에 적용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통해) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 궤양은 족부 궤양(예컨대, 당뇨병성 족부 궤양 또는 동맥 부전 궤양)이다. 일부 실시양태에서, 족부 궤양을 치료하는 것은 (a) 상처를 준비하는 것(예컨대, 상처의 괴사조직을 제거); 및 (b) 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 상처에 배치하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 족부 궤양을 치료하는 것은 (a) 상처를 준비하는 것(예컨대, 상처의 괴사조직 제거); (b) 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 상처에 배치하는 단계; 및 (c) 태아 지지 조직 산물을 보호 장벽(예컨대, 실버셀 드레싱, 메티펠, 거즈 또는 붕대)으로 덮는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 궤양에 배치되기 전에 기재에 적용된다.
일부 실시양태에서, 궤양은 정맥 울혈(VS) 궤양이다. 일부 실시양태에서, VS 궤양을 치료하는 것은 (a) 상처를 준비하는 것(예컨대, 상처의 괴사조직을 제거); 및 (b) 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 상처에 배치하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, VS 궤양을 치료하는 것은 (a) 상처를 준비하는 것(예컨대, 상처의 괴사조직을 제거); (b) 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 상처에 배치하는 것; 및 (c) 태아 지지 조직 산물을 보호 장벽(예컨대, 상처 베일, 항미생물 드레싱, 거즈 또는 붕대)으로 덮는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 상처에 배치되기 전에 기재에 적용된다.
일부 실시양태에서, 궤양은 각막 궤양(즉, 궤양성 각막염)이다. 일부 실시양태에서, 각막 궤양을 치료하는 것은 (a) 상처를 준비하는 것(예컨대, 상처의 괴사조직을 제거); 및 (b) 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 상처에 배치하는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 각막 궤양을 치료하는 것은 (a) 상처를 준비하는 것(예컨대, 상처의 괴사조직을 제거); (b) 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물을 상처에 배치하는 것; 및 (c) 태아 지지 조직 산물을 보호 장벽(예컨대, 콘택트 렌즈 또는 붕대)으로 덮는 것을 포함한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 상처에 배치되기 전에 기재에 적용된다.
연조직 용도
특정 실시양태에서, 수용자의 손상, 약화 또는 소실된 연조직(예컨대, 힘줄)을 복구, 재건, 대체 또는 보충하기 위한 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 용도가 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 단백질, 글리칸, 단백질-글리칸 복합체(예컨대, 히알루론산과 IαI 및 PTX3의 중쇄의 복합체) 및 조직 복구를 촉진하는 효소를 포함한다. 예컨대, AM의 간질은 성장 인자, 항혈관형성 및 항염증 단백질 뿐만 아니라 다양한 프로테아제에 대한 천연 억제제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물에서 발견되는 단백질 및 효소는 태아 지지 조직 산물 밖으로 및 주위 조직으로 확산된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 연조직(예컨대, 눈꺼풀은 연조직의 상이한 층들 사이에서 조직면을 형성함)의 절개 위의 덮개로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용된 후 연조직(예컨대, 눈꺼풀은 연조직의 상이한 층들 사이에서 조직면을 형성함)의 절개 위의 덮개로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통해) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 연조직에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 관절 또는 힘줄 복구에서 유착을 방지한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 힘줄 또는 관절 복구(예컨대, 회전근개 복구, 손 힘줄 복구)에 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 힘줄 또는 관절을 강화하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 주위 조직, 힘줄 또는 관절에 대한 치유 힘줄의 유착을 방지하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 힘줄 상의 흉터 조직의 형성을 방지하기 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 후방 경골 힘줄, 퍼스닐(personneal) 힘줄, 굴근 및 신근 힘줄, 측면 발목 복합체의 인대를 포함하는 족부 및 발목의 더 작은 힘줄 및 인대를 증강하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 무릎을 둘러싸는 사두근 및 슬개건의 일차 복구를 강화하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 관절 대체에서 뼈 이식편을 위한 골막 패치로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 전체 관절 교정 수술 후 결함이 있는 엉덩이 및 무릎 캡슐 조직을 증강하기 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 찢어진 회전근개의 복구에 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 회전근개 근육 또는 힘줄(예컨대, 극상근 힘줄) 위의 패치로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 회전근개 근육 또는 힘줄(예컨대, 극상근 힘줄)을 재건하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 회전근개 근육 또는 힘줄(예컨대, 극상근 힘줄)을 증강하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 회전근개 근육 또는 힘줄(예컨대, 극상근 힘줄)을 강화하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 회전근개 근육 또는 힘줄(예컨대, 극상근 힘줄)에 대한 연조직의 유착을 방지하기 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 치은 복구에 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 치은 퇴축의 복구에 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 치은 위의 패치로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 노출된 치근 표면 위의 패치로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 치은을 재건하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 치은을 증강하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 치은을 강화하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 치은에 대한 연조직의 유착을 방지하기 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 근막의 절개 또는 열창 위의 보호 이식편으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 근막의 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 근막에 대한 대체물 또는 보충물로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 탈장을 복구하기 위해(예컨대, 근막을 복구하기 위해) 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 서혜부 탈장을 복구하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 대퇴부 탈장을 복구하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 배꼽 탈장을 복구하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 절개 탈장을 복구하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 횡격막 탈장을 복구하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 상기 기재/태아 지지 조직 산물은 쿠퍼 탈장, 상복부 탈장, 열공 탈장, 리트레 탈장, 요추 탈장, 메이들(maydl) 탈장, 폐색 탈장, 판탈롱 탈장, 식도곁 탈장, 탯줄옆 탈장, 회음부 탈장, 복막곁 탈장, 리히터 탈장, 활주성 탈장, 좌골 탈장, 스피겔 탈장, 스포츠 탈장, 벨포 탈장, 또는 아미앤드(Amyand) 탈장을 복구하기 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 척추 디스크 탈출증을 복구하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 척추 디스크의 절개 또는 열창 위의 보호 이식편으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 섬유테의 절개 또는 열창 위의 보호 이식편으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 척추 디스크의 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 섬유테의 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 척수 디스크에 대한 대체물 또는 보충물로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 척추 디스크의 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 섬유테에 대한 대체물 또는 보충물로서 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 뇌 또는 뇌막(즉, 경막, 연막 및/또는 거미막) 중 하나 (또는 모두)의 절개 위에 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 뇌막(즉, 경막, 연막, 및/또는 거미막) 중 하나 (또는 모두)에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 뇌막(즉, 경막, 연막, 및/또는 거미막) 중 하나 (또는 모두)에 대한 대체물로서 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 폐 또는 흉막의 절개 위에 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 흉막에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 흉막에 대한 대체물로서 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 고막의 절개 위에 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 고막에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 고막에 대한 대체물로서 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 심장 또는 심장막의 절개 위의 보호 이식편으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 심장막에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 심장막에 대한 대체물로서 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 복막 절개 위의 보호 이식편으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 복막에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 복막에 대한 대체물로서 사용된다.
안과 용도
특정 실시양태에서, 수용자의 손상, 약화된 또는 소실된 눈 조직을 복구, 재건, 대체 또는 보충하기 위한 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 용도가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 단백질, 글리칸, 단백질-글리칸 복합체(예컨대, 히알루론산과 IαI 및 PTX3의 중쇄의 복합체) 및 조직 복구를 촉진하는 효소를 포함한다. 예컨대, AM의 간질은 성장 인자, 항혈관형성 및 항염증 단백질 뿐만 아니라 다양한 프로테아제에 대한 천연 억제제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물에서 발견되는 단백질 및 효소는 태아 지지 조직 산물 밖으로 및 주위 조직으로 확산된다.
녹내장의 치료
본원에서 사용되는 바와 같이, "녹내장"은 시신경에서 망막 신경절 세포의 손실을 특징으로 하는 장애를 의미한다. 특정 경우에서, 녹내장은 부분적으로 또는 완전히 전방(AC)의 안압 증가로 인해 발생한다. 안압은 눈의 섬모 과정에 의한 액체 방수의 생성 및 섬유주대를 통한 방수의 배액에 따라 달라진다.
녹내장 배액 장치(GDD)는 방수가 배액되는 대체 경로를 제공함으로써 안압을 완화하기 위해 눈에 이식되는 의료 장치이다. 덮지 않은 상태로 두면 GDD 튜브가 침식되어 눈은 안내 감염에 취약한 상태가 된다. 따라서, GDD 튜브를 덮어야 한다. 현재, GDD 튜브를 덮는 데 사용되는 패치는 심장막, 공막 및 각막으로 제조된다. 이러한 패치는 약 400-550 마이크론 두께이다. 이러한 패치는 얇기 때문에 2년 내에 25%까지 녹아 잠재적으로 션트 튜브가 다시 노출된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 GDD 튜브를 덮기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 기재/태아 지지 조직 산물은 300-600 마이크론 두께이다. 일부 실시양태에서, 기재/태아 지지 조직 산물은 2년 내에 25%까지 녹지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
눈 궤양의 치료
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 눈의 지속적인 상피 결함 및/또는 궤양을 덮기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 궤양의 기부는 외과용 스폰지로 괴사조직이 제거되고 궤양의 가장자리에 인접한 불량하게 유착된 상피는 제거된다(예컨대, 상피가 상당히 유착된 눈의 섹션). 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 수용자의 눈으로 전달된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 이어서 기재/태아 지지 조직 산물은 봉합에 의해 눈에 고정되고(예컨대, 단속 10-0 나일론 봉합 또는 러닝 10-0 나일론 봉합) 봉합 매듭은 묻힌다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 피브린 아교를 사용하여 눈에 고정된다. 일부 실시양태에서, 보호층은 태아 지지 조직 산물/기재 또는 전체 눈(예컨대, 콘택트 렌즈) 위에 적용된다. 일부 실시양태에서, 기재/태아 지지 조직 산물은 항생제(예컨대, 네오마이신, 폴리믹신 b 술페이트 및 덱사메타손)를 추가로 포함한다.
결막, 공막, 눈꺼풀 및 안와연 표면 재건
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 결막, 공막, 눈꺼풀 및 안와연 표면 재건에 사용된다. 일부 실시양태에서, 결막 표면에 대한 손상은 검구유착 용해; 종양, 병변 및/또는 흉터 조직의 외과적 제거; 엑시머 레이저 광굴절 각막절제술 및 치료적 각막절제술; 또는 이들의 조합으로부터 초래된다.
관상 용도
특정 실시양태에서, 수용자의 손상, 약화된 또는 소실된 관상 조직을 복구, 재건, 대체 또는 보충하기 위한 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 용도가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, AM은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 단백질, 글리칸, 단백질-글리칸 복합체(예컨대, 히알루론산과 IαI 및 PTX3의 중쇄의 복합체) 및 조직 복구를 촉진하는 효소를 포함한다. 예컨대, AM의 간질은 성장 인자, 항혈관형성 및 항염증 단백질 뿐만 아니라 다양한 프로테아제에 대한 천연 억제제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물에서 발견되는 단백질 및 효소는 태아 지지 조직 산물 밖으로 및 주위 조직으로 확산된다.
관상 동맥 우회
관상 동맥 우회 수술에서 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물의 용도가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 죽상동맥경화증을 특징으로 하는 동맥의 섹션을 우회하기 위해 관상 동맥에 이식된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
심장 판막
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 심장 판막 위에 적용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 심장 판막에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 심장 판막의 대체물로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
정맥 및 동맥
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 정맥 또는 동맥에 적용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 정맥 또는 동맥에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
신경 용도
특정 실시양태에서, 수용자의 손상, 약화된 또는 소실된 신경 조직을 복구, 재건, 대체 또는 보충하기 위한 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 용도가 본원에 개시된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 단백질, 글리칸, 단백질-글리칸 복합체(예컨대, 히알루론산과 IαI 및 PTX3의 중쇄의 복합체) 및 조직 복구를 촉진하는 효소를 포함한다. 예컨대, AM의 간질은 성장 인자, 항혈관형성 및 항염증 단백질 뿐만 아니라 다양한 프로테아제에 대한 천연 억제제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물에서 발견되는 단백질 및 효소는 태아 지지 조직 산물 밖으로 및 주위 조직으로 확산된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 신경(예컨대, 말초 신경) 위의 덮개로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 신경 이식편, 신경 전달 또는 복구된 신경 위의 덮개로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기판에 적용되고 기판/태아 지지 조직 산물은 신경(예컨대, 말초 신경)의 절개 위의 덮개로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 신경(예컨대, 말초 신경)에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 신경 복구에서 유착을 방지한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 손상된 신경을 위한 비수축 포위물로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 흉터 형성, 캡슐화, 만성 압박, 신경 테더링 및 신경 포착을 방지하거나 최소화한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 신경종 형성을 방지하거나 최소화한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 신경 복구 동안 존재하는 내인성 성장 인자(즉, 신경 성장 인자)의 이동을 방지하거나 최소화한다.
척추 용도
특정 실시양태에서, 척추 수술 동안 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물의 용도가 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 추궁절제 동안 사용된다. 일부 실시양태에서, 사용은 상동적인 사용이다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 최소한으로 조작된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 물, 결정질, 또는 멸균제, 보존제 또는 저장제를 제외한 또 다른 물품을 포함하지 않는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 전신 효과를 갖지 않으며 이의 주요 기능을 위해 살아있는 세포의 대사 활성에 의존하지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 단백질, 글리칸, 단백질-글리칸 복합체(예컨대, 히알루론산과 IαI 및 PTX3의 중쇄의 복합체) 및 조직 복구를 촉진하는 효소를 포함한다. 예컨대, AM의 간질은 성장 인자, 항혈관형성 및 항염증 단백질 뿐만 아니라 다양한 프로테아제에 대한 천연 억제제를 함유한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물에서 발견되는 단백질 및 효소는 태아 지지 조직 산물 밖으로 및 주위 조직으로 확산된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 척추 수술(예컨대, 추궁절제) 후 경막외 섬유증 및/또는 흉터 유착을 감소시키거나 방지하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 척추 수술(예컨대, 추궁절제) 후 경막과 피개 조직 사이에 이식된다. 일부 실시양태에서, 척추 수술(예컨대, 추궁절제) 후 경막과 피개 조직 사이에 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물을 이식하는 것은 섬유모세포의 경막으로의 이동 및 경막 상의 콜라겐 침착을 감소시키거나 방지한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 척추 수술(예컨대, 추궁절제) 후 증식성 흉터의 발생을 감소시키거나 방지하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 수술후(예컨대, 추궁절제후) 경막외/경막주위/신경주위 흉터의 발생을 감소시키거나 방지하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 척추 수술(예컨대, 추궁절제) 후 증식성 흉터의 발생을 감소시키거나 방지하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 추궁절제후 막의 발달을 감소시키거나 방지하기 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 척추 수술(예컨대, 추궁절제) 후 경막외 압박 또는 경막 테더링의 발생을 감소시키거나 방지하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 척추 수술(예컨대, 추궁절제) 후 테더링된 신경근의 발생을 감소시키거나 방지하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 태아 지지 조직 산물은 척추 수술(예컨대, 추궁절제) 후 거미막염의 발병을 감소시키거나 방지하기 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 세편화된 뼈 조직을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 세편화된 뼈 조직을 포함하는 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 척추 융합 시술 동안 사용된다. 일부 실시양태에서, 세편화된 뼈 조직을 포함하는 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 인접한 척추뼈 사이에 이식된다. 일부 실시양태에서, 2개의 인접한 척추뼈 사이에 세편화된 뼈 조직을 포함하는 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물의 이식은 척추뼈의 융합을 촉진한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 경막의 절개 위의 보호 이식편으로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 경막에 대한 구조적(구축적) 지지체로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 기재에 적용되고 기재/태아 지지 조직 산물은 경막의 대체물로서 사용된다.
태아 지지 조직 산물의 기타 용도
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 패치 또는 상처 드레싱에 적용된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 동맥내, 심장내, 피부내, 십이지장내, 척수내, 근육내, 뼈내, 복강내, 척수강내, 혈관내, 정맥내, 유리체내, 경막외, 및/또는 피하를 포함한 주사 또는 주입을 통한) 비경구 주사로 투여된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 경막외로, 척수강내로, 흡입을 통해, 정맥내로, 또는 이들의 조합으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 피부 필러로서 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 피하 안면 조직에 주사된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 얼굴의 주름 및 노화 선(예컨대, 예컨대, 코입술 주름, 멜로멘탈(melomental) 주름, "눈가의 잔주름" 및 이마 주름) 아래에 주사된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 입술 확대를 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 입술에 주사된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 관절염(예컨대, 골관절염, 류마티스 관절염, 패혈성 관절염, 강직성 척추염, 척추증)을 치료하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 관절염 관절(예컨대, 무릎)에 주사된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 골 재흡수의 억제를 필요로 하는 개체에서 골 재흡수를 억제하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 개체는 관절염, 골다공증, 치조골 분해, 파제트 질환 또는 뼈 종양을 갖는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 관절에 주사된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 상처 드레싱 또는 붕대를 사용하여) 뼈와 접촉된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 뼈 스텐트, 뼈 임플란트 또는 뼈 보철물(예컨대, 골유착성 임플란트)을 코팅한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "골유착성 임플란트"는 조골세포 및 지지 결합 조직이 이동할 수 있는 공극을 함유하는 3차원 임플란트를 의미한다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈의 척수내 관에 삽입된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 족근동에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 무릎 또는 관절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 골 형성의 촉진 또는 유도를 필요로 하는 개체에서 골 형성을 촉진하거나 유도하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 개체는 관절염, 골다공증, 치조골 분해, 파제트 질환 또는 뼈 종양을 갖는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 관절에 주사된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 상처 드레싱 또는 붕대를 사용하여) 뼈와 접촉된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 뼈 스텐트, 뼈 임플란트 또는 뼈 보철물(예컨대, 골유착성 임플란트)을 코팅한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "골유착성 임플란트"는 조골세포 및 지지 결합 조직이 이동할 수 있는 공극을 함유하는 3차원 임플란트를 의미한다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈의 척수내 관에 삽입된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 족근동에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 무릎 또는 관절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 파골세포 분화를 억제하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 개체는 관절염, 골다공증, 치조골 분해, 파제트 질환 또는 뼈 종양을 갖는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 관절에 주사된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 상처 드레싱 또는 붕대를 사용하여) 뼈와 접촉된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 뼈 스텐트, 뼈 임플란트 또는 뼈 보철물(예컨대, 골유착성 임플란트)을 코팅한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "골유착성 임플란트"는 조골세포 및 지지 결합 조직이 이동할 수 있는 공극을 함유하는 3차원 임플란트를 의미한다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈의 척수내 관에 삽입된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 족근동에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 무릎 또는 관절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 조골세포에 의한 무기질화의 촉진을 필요로 하는 개체에서 조골세포에 의한 무기질화를 촉진하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 개체는 관절염, 골다공증, 치조골 분해, 파제트 질환 또는 뼈 종양을 갖는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 관절에 주사된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 상처 드레싱 또는 붕대를 사용하여) 뼈와 접촉된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 뼈 스텐트, 뼈 임플란트 또는 뼈 보철물(예컨대, 골유착성 임플란트)을 코팅한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "골유착성 임플란트"는 조골세포 및 지지 결합 조직이 이동할 수 있는 공극을 함유하는 3차원 임플란트를 의미한다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈의 척수내 관에 삽입된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 족근동에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 무릎 또는 관절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 골 재흡수 및 골 형성의 균형을 맞추는 것을 필요로 하는 개체에서 골 재흡수 및 골 형성의 균형을 맞추기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 개체는 관절염, 골다공증, 치조골 분해, 파제트 질환 또는 뼈 종양을 갖는다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 관절에 주사된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 (예컨대, 상처 드레싱 또는 붕대를 사용하여) 뼈와 접촉된다. 일부 실시양태에서, 태아 지지 조직 산물은 뼈 스텐트, 뼈 임플란트 또는 뼈 보철물(예컨대, 골유착성 임플란트)을 코팅한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, "골유착성 임플란트"는 조골세포 및 지지 결합 조직이 이동할 수 있는 공극을 함유하는 3차원 임플란트를 의미한다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈의 척수내 관에 삽입된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 족근동에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 무릎 또는 관절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 뼈 골절에 배치된다. 일부 실시양태에서, 뼈 스텐트는 확장 가능하거나 수축 가능하다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 치과교정 또는 치주 병태를 치료하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 치주 병태는 치은염, 치은 퇴축 또는 치주염으로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 항염증제로서 사용되거나 골유착 또는 치유를 촉진하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 임플란트 골유착, 항염증 및 치유를 촉진하기 위해 치과 임플란트와 함께 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 쉰 목소리 또는 음성 장애를 치료하기 위해 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 성대를 복구하기 위한 후두성형술 주사를 위해 사용된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 태아 지지 조직 산물은 의료용 임플란트(예컨대, 스텐트) 상에 코팅된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 의료용 임플란트/태아 지지 조직 산물은 이를 필요로 하는 개체에게 이식되며, 태아 지지 조직 산물은 개체로 부분적으로 또는 완전히 방출된다. 일부 실시양태에서, 의료용 임플란트는 스텐트(예컨대, 뼈 스텐트 또는 관상 스텐트)이다. 일부 실시양태에서, 의료용 임플란트는 뼈 스텐트이다. 일부 실시양태에서, 의료용 임플란트는 관상 스텐트이다.
조합 치료
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 조성물 및 방법은 치료되는 병태에 대한 특정 유용성에 대해 선택된 다른 널리 공지된 치료 시약과 함께 사용된다. 일반적으로, 본원에 기재된 조성물 및 조합 요법이 사용되는 실시양태에서, 다른 작용제는 동일한 조성물로 투여될 필요가 없으며, 상이한 물리적 및 화학적 특징으로 인해 상이한 경로로 투여되어야 할 수 있다. 가능한 경우, 동일한 조성물에서 투여 방식 및 투여의 타당성을 결정하는 것은 숙련된 임상의의 지식 범위 내에 있다. 초기 투여는 당업계에 공지된 확립된 프로토콜에 따라 수행될 수 있고, 이어서 관찰된 효과에 기초하여 용량, 투여 방식 및 투여 시간은 숙련된 임상의에 의해 변형될 수 있다.
사용되는 화합물의 특정 선택은 주치의의 진단 및 환자 상태에 대한 이들의 판단 및 적절한 치료 프로토콜에 따라 달라질 것이다. 일부 실시양태에서, 화합물은 질환, 장애 또는 병태의 특성, 환자의 상태, 및 사용되는 화합물의 실제 선택에 따라 공동으로(예컨대, 동시에, 본질적으로 동시에 또는 동일한 치료 프로토콜 내에서) 또는 순차적으로 투여된다. 치료 프로토콜 동안 각각의 치료제의 투여 순서 및 투여 반복 횟수의 결정은 치료될 질환 및 환자의 상태를 평가한 후 숙련된 의사의 지식 범위 내에 있다.
약물이 치료 조합으로 사용되는 경우 치료 유효 용량이 달라질 수 있다는 것은 당업자에게 공지되어 있다. 조합 치료 레지먼에 사용하기 위한 약물 및 다른 작용제의 치료 유효 용량을 실험적으로 결정하는 방법은 문헌에 기재되어 있다. 예컨대, 규칙적인 용량의 사용, 즉 독성 부작용을 최소화하기 위해 더 자주, 더 낮은 용량을 제공하는 것은 문헌에 광범위하게 기재되어 있다. 조합 치료는 환자의 임상 관리를 돕기 위해 다양한 시간에 시작하고 중단하는 주기적인 치료를 추가로 포함한다.
본원에 기재된 조합 요법의 경우, 동시 투여되는 화합물의 용량은 물론 사용되는 공동 약물의 유형, 사용되는 특정 약물, 치료되는 질환 또는 병태 등에 따라 달라질 것이다. 또한, 일부 실시양태에서, 하나 이상의 생물학적 활성제와 함께 공동 투여되는 경우, 본원에 제공된 화합물은 생물학적 활성제(들)와 동시에 또는 순차적으로 투여된다. 순차적으로 투여되는 경우, 주치의는 생물학적 활성제(들)와 조합하여 단백질을 투여하는 적절한 순서를 결정할 것이다.
일부 실시양태에서, 다수의 치료제는 임의의 순서로 또는 심지어 동시에 투여된다. 동시에 투여되는 경우, 일부 실시양태에서, 다수의 치료제는 (단지 예로서, 단일 알약 또는 2개의 개별 알약으로서) 단일, 통합된 형태 또는 다중 형태로 제공된다. 일부 실시양태에서, 치료제 중 하나는 다수의 용량으로 제공되거나 둘 다 다수의 용량으로 제공된다. 동시에 투여되지 않는 경우, 일부 실시양태에서, 다수의 용량 사이의 시기는 0주 초과에서 4주 미만까지 다양하다. 또한, 조합 방법, 조성물 및 제형은 단지 2가지 작용제의 사용에 제한되지 않으며; 다수의 치료학적 조합의 사용이 또한 구상된다.
경감이 필요한 병태(들)를 치료하거나 개선하기 위한 투여 레지먼은 다양한 인자에 따라 변경될 수 있음이 이해된다. 이러한 인자는 대상체가 앓고 있는 장애뿐만 아니라 대상체의 연령, 체중, 성별, 식이 및 의학적 상태를 포함한다. 따라서, 실제로 사용되는 투여 레지먼은 광범위하게 변할 수 있어 본원에 기재된 투여 레지먼으로부터 벗어날 수 있다.
키트/제조 물품
본원에 기재된 치료 적용에 사용하기 위해, 키트 및 제조 물품이 또한 본원에 기재된다. 이러한 키트는 바이알, 튜브 등과 같은 하나 이상의 용기를 수용하도록 구획화된 캐리어, 패키지 또는 용기를 포함할 수 있으며, 각각의 용기(들)는 본원에 기재된 방법에 사용되는 개별 요소 중 하나를 포함한다. 적합한 용기는, 예컨대 병, 바이알, 주사기 및 시험관을 포함한다. 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다.
본원에 제공된 제조 물품은 포장재를 함유한다. 약제학적 제품 포장에 사용하기 위한 포장재는 당업자에게 널리 공지되어 있다. 예컨대, 미국 특허 번호 5,323,907, 5,052,558 및 5,033,252를 참조한다. 약제학적 포장재의 예는 블리스터 팩, 병, 튜브, 흡입기, 펌프, 백, 바이알, 용기, 병 및 선택된 제형 및 의도된 투여 및 치료 방식에 적합한 임의의 포장재를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 임의의 질환, 장애 또는 병태에 대한 다양한 치료가 있으므로 본원에 제공된 화합물 및 조성물의 광범위한 제형이 고려된다.
예컨대, 용기(들)는 임의적으로 조성물 내에 또는 본원에 개시된 바와 같은 또 다른 작용제와 조합하여 본원에 기재된 하나 이상의 UCAM 조성물을 포함할 수 있다. 용기(들)는 임의적으로 멸균 액세스 포트를 갖는다(예컨대, 용기는 정맥내 용액 백 또는 피부밑 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 바이알일 수 있음). 이러한 키트는 임의적으로 본원에 기재된 방법에서의 사용과 관련된 확인 설명 또는 라벨 또는 지침과 함께 화합물을 포함한다.
키트는 전형적으로 본원에 기재된 조성물의 사용에 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 하나 이상의 다양한 물질(예컨대, 임의적으로 농축된 형태의 시약 및/또는 장치)을 각각 갖는 하나 이상의 추가 용기를 포함할 것이다. 이러한 물질의 비제한적 예는 버퍼, 희석제, 필터, 바늘, 주사기; 내용물 및/또는 사용 지침을 나열한 캐리어, 패키지, 용기, 바이알 및/또는 튜브 라벨, 및 사용 지침을 갖는 패키지 삽입물을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 전형적으로 일련의 지침도 포함될 것이다.
라벨은 용기 상에 있거나 용기와 연합될 수 있다. 라벨을 형성하는 문자, 숫자 또는 다른 기호가 용기 자체에 부착, 몰딩 또는 에칭될 때 라벨은 용기 상에 있을 수 있고; 라벨은, 예컨대 패키지 삽입물로서 용기를 보유하는 리셉터클 또는 캐리어 내에 존재할 때 용기와 연합될 수 있다. 내용물이 특정 치료 적용을 위해 사용된다는 것을 표시하기 위해 라벨을 사용할 수 있다. 라벨은 또한 본원에 기재된 방법에서와 같이 내용물 사용에 대한 안내를 나타낼 수 있다.
특정 실시양태에서, 조성물은 본원에 제공된 화합물을 함유하는 하나 이상의 단위 투여 형태를 함유할 수 있는 팩 또는 디스펜서 장치로 제시될 수 있다. 팩은, 예컨대 블리스터 팩과 같은 금속 또는 플라스틱 호일을 함유할 수 있다. 팩 또는 디스펜서 장치에는 투여 지침이 수반될 수 있다. 팩 또는 디스펜서에는 또한 의약품의 제조, 사용 또는 판매를 규제하는 정부 기관에 의해 규정된 형태에 용기와 관련된 통지가 수반될 수 있으며, 이 통지는 인간 또는 가축 투여를 위한 약물 형태의 기관에 의한 승인을 반영한다. 예컨대, 이러한 통지는 처방 약물에 대해 미국 식품의약국에 의해 승인된 라벨링 또는 승인된 제품 삽입물일 수 있다. 적합한 담체에 제형화된 본원에 제공된 화합물을 함유하는 조성물이 또한 제조되고, 적절한 용기에 배치되고, 지시된 병태의 치료를 위해 라벨링될 수 있다.
특정 용어
본원에서 사용되는 바와 같이, "태아 지지 조직"은 태아 발달을 지지하기 위해 사용되는 조직을 의미한다. 태아 지지 조직의 예는 태반 양막(PAM), 또는 실질적으로 단리된 PAM, 탯줄 양막(UCAM) 또는 실질적으로 단리된 UCAM, 융모막 또는 실질적으로 단리된 융모막, 양막-융모막 또는 실질적으로 단리된 양막-융모막, 태반 또는 실질적으로 단리된 태반, 탯줄 또는 실질적으로 단리된 탯줄, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "태아 지지 조직 산물"은 태아 지지 조직을 그라인딩하여 생성되는 모든 산물을 의미한다. 태아 지지 조직의 예는 태반 양막(PAM), 또는 실질적으로 단리된 PAM, 탯줄 양막(UCAM) 또는 실질적으로 단리된 UCAM, 융모막 또는 실질적으로 단리된 융모막, 양막-융모막 또는 실질적으로 단리된 양막-융모막, 태반 또는 실질적으로 단리된 태반, 탯줄 또는 실질적으로 단리된 탯줄, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "분말"은 미세 건조 입자 형태의 물질을 의미한다. 일부 실시양태에서, 입자는 크기가 균일하지 않다. 일부 실시양태에서, 입자는 크기가 실질적으로 균일하다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "그라인딩"은 태아 지지 조직을 작은 입자 또는 분말로 감소시키는 임의의 방법을 의미한다. 용어 그라인딩은 분쇄, 균질화, 파일링, 밀링, 그레이팅, 파운딩, 및 파쇄를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "태반"은 모체 혈액 공급을 통한 영양 흡수, 노폐물 제거 및 가스 교환을 가능하게 하기 위해 발달 중인 태아를 모체 자궁벽에 연결하는 기관을 의미한다. 태반은 3개의 층으로 구성되어 있다. 태아를 둘러싸고 있는 가장 안쪽 태반층을 양막이라고 한다. 요막은 태반의 중간층이고(배아 후장에서 유래됨); 배꼽에서 기원하는 혈관은 이 막을 가로지른다. 태반의 가장 바깥쪽 층인 융모막은 자궁내막과 접촉하게 된다. 융모막 및 요막이 융합하여 융모막요막을 형성한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "융모막"은 배외 중배엽 및 영양막의 2개 층에 의해 형성된 막을 의미한다. 융모막 융모는 융모막에서 나와 자궁내막을 침범하고 모체 혈액에서 태아 혈액으로 영양물을 전달한다. 융모막은 2개의 층: 영양막에 의해 형성된 외부 및 체세포 중배엽에 의해 형성된 내부로 이루어지고; 양막은 후자와 접촉한다. 영양막은 정육면체 또는 프리즘 세포의 내부 층인 세포영양막 또는 랑그한스 (Langhans) 층, 및 세포 경계가 없는 풍부한 유핵 원형질의 외부 층인 융합세포영양막으로 구성된다. 무혈성 양막은 융모막의 내층에 부착되어 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "양막-융모막"은 양막 및 융모막을 포함하는 산물을 의미한다. 일부 실시양태에서, 양막 및 융모막은 분리되지 않는다(즉, 양막은 자연적으로 융모막의 내층에 부착됨). 일부 실시양태에서, 양막은 초기에 융모막으로부터 분리되고 나중에 처리 동안 융모막과 조합된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "탯줄"은 발달 중인 태아를 태반에 연결하는 기관을 의미한다. 탯줄은 주로 뮤코다당류로 제조된 젤라틴 물질인 와튼 젤리로 구성된다. 이는 산소가 공급되고 영양물이 풍부한 혈액을 태아에게 운반하는 하나의 정맥 및 탈산소화되고 영양물이 고갈된 혈액을 멀리 운반하는 2개의 동맥을 함유한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "태반 양막"(PAM)은 태반으로부터 유래된 양막을 의미한다. 일부 실시양태에서, PAM은 실질적으로 단리된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "탯줄 양막"(UCAM)은 탯줄로부터 유래된 양막을 의미한다. UCAM은 반투명 막이다. UCAM은 상피층, 기저막; 치밀 층; 섬유모세포층; 및 스폰지층의 다중층을 갖는다. 이는 혈관 또는 직접적 혈액 공급이 결여되어 있다. 일부 실시양태에서, UCAM은 실질적으로 단리된다. 일부 실시양태에서, UCAM은 와튼 젤리를 포함한다. 일부 실시양태에서, UCAM은 혈관 및/또는 동맥을 포함한다. 일부 실시양태에서, UCAM은 와튼 젤리 및 혈관 및/또는 동맥을 포함한다.
"실질적으로 단리된" 또는 "단리된"은 태아 지지 조직 산물이 원래 공급원 유기체로부터 유래된 바람직하지 않은 물질(예컨대, 적혈구, 혈관 및 동맥)로부터 분리되었음을 의미한다. 순도, 또는 "단리"는 표준 방법에 의해 검정될 수 있고, 통상적으로 적어도 약 10% 순수, 보다 통상적으로 적어도 약 20% 순수, 일반적으로 적어도 약 30% 순수, 보다 일반적으로 적어도 약 40% 순수; 추가 실시양태에서 적어도 약 50% 순수, 또는 더 자주 적어도 약 60% 순수; 또 다른 실시양태에서, 적어도 약 95% 순수할 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같이, "생물학적 활성"은 폴리펩티드 및 다당류의 활성을 의미한다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드 및 다당류의 활성은 탯줄 (및 실질적으로 단리된 탯줄), UCAM (및 실질적으로 단리된 UCAM), 태반 (및 실질적으로 단리된 태반), PAM (및 실질적으로 단리된 PAM), 융모막(및 실질적으로 단리된 융모막), 또는 양막-융모막(및 실질적으로 단리된 양막-융모막)에서 발견되었다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 생물학적 활성 또는 구조적 무결성의 실질적 보존은 비처리된 조직의 생물학적 활성 및 구조적 무결성과 비교할 때 태아 지지 조직 산물의 생물학적 활성 및 구조적 무결성이 단지 약 5%, 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 50%, 약 60% 감소한다는 것을 의미한다.
용어 "신선한"은 출생 후 10일 미만이고 출생 후와 실질적으로 동일한 형태인 조직을 지칭한다.
용어 "대상체" 및 "개체"는 상호교환적으로 사용된다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 두 용어 모두 임의의 동물, 바람직하게는 인간 또는 비인간을 포함하는 포유동물을 의미한다. 용어 환자, 대상체 및 개체는 상호교환적으로 사용된다. 어떠한 용어도 의료 전문가(예컨대, 의사, 간호사, 의사 조수, 간호조무사, 호스피스 종사자)의 감독을 필요로 하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 예방적으로 및/또는 치유적으로 질환 또는 병태 증상을 완화, 경감 또는 개선하는 것, 추가의 증상을 방지하는 것, 증상의 근본적인 대사 원인을 개선 또는 방지하는 것, 질환 또는 병태를 억제하는 것, 예컨대 질환 또는 병태의 진행을 저지하는 것, 질환 또는 병태를 완화하는 것, 질환 또는 병태의 퇴행을 유발하는 것, 질환 또는 병태에 의해 유발되는 병태를 완화하는 것, 또는 질환 또는 병태의 증상을 중지시키는 것을 포함한다.
실시예
실시예 1. 처리 방법
도 1은 본원에 개시된 태아 지지 조직을 처리하는 방법의 예를 예시하는 흐름도를 나타낸다. 태아 지지 조직 - 양막 및 탯줄 - 을 공여자로부터 수거하고 세정한다. 세정된 양막 및 탯줄은 추출을 위해 프리저밀로 냉동분쇄된다. 냉동분쇄된 양막 및 탯줄은 주사용수에서 추출된다. 추출물을 원심분리하여 큰 조직 입자를 제거한다. 이어서, 양막 및 탯줄은 4℃에서 30분 동안 20 rpm으로 혼합함으로써 2의 희석 배율로 주사용수로 희석된다. 이어서, 식염수에서 희석된 추출물은 0.45 μm 필터에 이어 0.2 μm 필터로 여과된다.
실시예 2. 단백질 회수에 대한 추출 시간 효과
냉동분쇄된 양막("AM") 및 탯줄("UC") 조직을 식염수에서 각각 1시간(h), 2 h 또는 3 h 동안 순차적으로 추출하고, 각각의 펠릿을 6 M GnHCl/PBS로 24시간 동안 추출하였다.
공여자로부터의 AM 및 UC를 처리하고 냉동분쇄하였다. 냉동분쇄된 AM/UC를 1, 2 또는 3 h 동안 4℃에서 20 rpm으로 튜브 회전기를 사용하여 1:4(w/v, g/ml) 비율로 식염수에서 추출하여(n=2) MAU/식염수 추출물을 생성하였다. MAU/식염수 추출물을 4℃에서 30분 동안 48,000 g에서 원심분리한 후 상층액에서 수집하였다. 남은 펠릿을 식염수(식염수 10 ml/펠릿 1g)로 2회 세척하고, 24 h 동안 4℃에서 20 rpm으로 1:4(w/v, g/ml)의 비율로 PI(10 mM EDTA, 2 mM PMSF)를 갖는 6 M GnHCl/PBS로 추출하였다. GnHCl 추출물을 4℃에서 30분 동안 48,000 g에서 원심분리한 후 수집하였다. MAU/식염수 추출물 및 6 M GnHCl 추출물 둘 다를 HA 함량에 대해 HA 검정, 총 단백질에 대해 BCA 검정 및 HC-HA/PTX3 함량에 대해 웨스턴 블롯 분석으로 시험하였다. 상기 추출의 효율은 MAU/식염수 추출물에서 수득될 수 있는 것 및/또는 6 M GnHCl 추출물에 남는 것에 따라 결정되었다.
표 1은 HA 및 총 단백질의 전체 회수율을 요약한다. 결과는 회수율이 1 h 후 82.8 ± 0.7%의 총 HA를 달성하였으며 추출 시간이 2 h 또는 3 h로 추가로 증가함에 따라 증가하지 않음을 나타내었다(모두 1 h 대비 p > 0.05 ). 1 h 동안 식염수에서의 추출은 9.5 ± 0.1%의 총 단백질의 회수율을 달성하였으며, 이는 추출 시간이 더 증가해도 증가하지 않았다(모두 1 h 대비 p > 0.05 ). 따라서, 식염수의 추출 시간은 1시간에서 최적화된다.
결과는 식염수 추출물은 HAase에 의한 HA 분해 후 로딩 웰에 유지된 HMW HC-HA/PTX3로부터 방출된 강한 80 kDa HC1 및 HMW PTX3 스미어(smear)를 나타내는 반면, GnHCl 추출물은 로딩 웰에 HMW HC-HA/PTX3 없이 HAase 분해 후 단지 약한 HC1 및 PTX3 스미어를 나타낸다는 것을 보여주었다(도 2a - 2b). 이 결과는 대부분의 HC-HA/PTX3가 1 h 후에 식염수로 추출되었음을 강력하게 시사하였다.
실시예 3. 단백질 회수에 대한 원심분리 시간 효과
냉동분쇄된 AM/UC 조직을 식염수에서 1 h 동안 추출하고, 상이한 속도로 원심분리하였다(즉, 14,000 rcf, 10,000 rcf, 3200 rcf, 및 48,000 rcf(대조군)).
결과는 표 2에 나타나 있다. 3200 rcf에서 원심분리 시 용액에 현탁된 눈에 보이는 입자가 산출되었고 30분 후에 침전되었다. 10,000 rcf에서 원심분리 시 또한 유사한 눈에 보이는 입자가 발견되었으나 더 적은 양이었고, 14,000 rcf 및 48,000 rcf에서는 그렇지 않았다. 펠릿을 식염수로 2회 세척한 다음, 4℃에서 24 h 동안 1:4 (w/v, g/ml)의 6 M GnHCl/PBS(1:4(w/v, g/ml))로 추출하고; 분석을 위해 4℃에서 30분 동안 48,000 g에서 원심분리한 후 상층액을 수집하였다. 두 상층액을 웨스턴 블롯 분석에 대해 시험하였다. 상기 원심분리의 효율은 식염수 추출물에서 수득될 수 있는 것 및/또는 6 M GnHCl 추출물에 남아있는 것에 의해 결정되었다.
결과는 14,000 rcf 이상에서의 원심분리가 탯줄/양막 태아 지지 조직 산물("MAU")의 추가 제조를 위한 상층액을 제조하기 위해 사용될 수 있음을 시사한다. 이 생각은, 상이한 속도에서의 원심분리가 추출물에서 HA, 단백질 및 HC-HA/PTX3의 함량에 영향을 끼치지 않는다는 것을 나타내는, 표 2에 요약된 HA 및 단백질의 생화학적 정량화 및 HC-HA/PTX3에 대한 웨스턴 블롯 분석에 의해 추가로 뒷받침되었다(도 3a - 3b).
실시예 4. 단백질 회수에 대한 부형제 효과
냉동분쇄된 MAU를 준비하고 3가지 다른 부형제에서 추출하였다. 표 3은 3가지 상이한 부형제, 즉 MAU/식염수, MAU/WFI 및 MAU/SW에서 제조된 MAU에 대한 HA 및 총 단백질의 생화학적 정량화 데이터를 요약한다. WFI는 단백질을 검출할 수 없는 식염수(p >0.05)로 추출한 것과 유사한 HA를 추출하였다. 펠릿에 남아 있는 HA 및 단백질은 여전히 GnHCl에 의해 추출될 수 있었다. 대조적으로, SW는 단백질을 검출할 수 없는 식염수 및 WFI(둘 다 p < 0.05)에 비해 적은 HA를 추출하였다. 이러한 결과는 SW가 MAU 제제를 위한 부형제로 허용되지 않는다는 것을 시사한다.
HA 크기 분포에 대한 아가로스 겔 분석은 WFI는 식염수와 유사한 양 및 크기의 HA를 추출하였지만, SW는 식염수 및 WFI에 비해 더 적은 HA를 추출했을 뿐만 아니라 더 낮은 MW HA를 추출하였음을 입증하였다(도 4). HC-HA/PTX3의 무결성을 반정량화하고 평가하기 위해 사용된 웨스턴 블롯을 이용한 추가 분석은, WFI는 식염수와 같이 대부분의 HC-HA/PTX3을 성공적으로 추출하였으나; SW는 일부는 분해된 소수의 HC-HA/PTX3만을 추출하였다는 것을 나타내었다(도 5a - 5b). 이 결과는 WFI가 식염수에 필적하게 HC-HA/PTX3를 추출하지만 SW는 덜 추출하고 HC-HA/PTX3을 손상시킨다는 것을 시사하였다. 종합적으로, 상기 데이터로부터 식염수 및 WFI 모두는 MAU에 대해 허용 가능한 부형제이지만 SW는 허용 가능하지 않다는 결론을 내릴 수 있다.
실시예 5. 단백질 회수에 대한 최종 멸균 방법 효과
최종 멸균이 γ-조사에 의해 수행될 수 있는지 여부를 결정하기 위해, 태아 지지 조직 - 양막 및 탯줄 - 을 식염수, WFI 또는 SW에서 준비하고, 드라이아이스에서 최종 멸균하여 γ-조사에 대해 공지된 잠재적 악영향을 감소시켰다. AM 및 UC를 1:4(w/v) 비율로 식염수, WIF 또는 SW에서 실온에서 블렌딩 (블렌딩 속도는 총 6회의 고속/저속 사이클에 대해 15초 동안의 고속에 이어 15초 동안의 저속으로 설정됨)하고, 3,200 g에서 30분 동안 4℃에서 원심분리하고, 200 μm 메쉬로 여과하여 각각의 상층액을 MAU/식염수, MAU/WIF 또는 MAU/SW로 수집하였다.
MAU/식염수, MAU/WIF 및 MAU/SW에 드라이아이스의 존재 또는 부재하에 25 ± 10% kGy의 선량으로 γ-조사하였다. 멸균되지 않은 샘플 및 멸균된 샘플을 HA 검정, BCA 검정, 아가로스 겔 분석, 쿠마시 블루 분석 및 웨스턴 블롯 분석에 대해 시험하였다.
표 4는 MAU/식염수, MAU/WFI 및 MAU/SW에 대한 HA 및 총 단백질의 생화학적 정량화를 요약한다. 결과는 드라이아이스의 존재 또는 부재하에 γ-조사 후 MAU/식염수 및 MAU/WFI에서 HA는 γ-조사가 없는 경우에 비해 검출할 수 없거나 매우 낮은 수준(p < 0.05)으로 극적으로 감소하였다는 것을 나타내었다. 3개의 MAU에서 총 단백질은 특히 드라이아이스의 부재하에 γ-조사 후 극적으로 증가하였다. 증가된 단백질 수준은 γ-조사에 의한 분해 후 단백질 단편으로부터 유래될 수 있다(도 7a - 7b 쿠마시 블루 분석 참조). 이 결과는 γ-조사가 MAU에서 HA 및 단백질에 손상을 유발한다는 것을 나타낸다. 이 발견은 HA 크기 분포에 대한 아가로즈 겔 분석(도 6) 및 단백질 분포에 대한 쿠마시 블루 분석(도 7a - 7b)에 의해 확인되었으며, 이는 각각 γ-조사 후 HA 또는 단백질의 완전한(드라이아이스 부재) 분해 또는 불완전한(드라이아이스 존재) 분해를 나타내었다.
MAU에서 HC-HA/PTX3이 γ-조사에 의해 분해되는지 여부를 결정하기 위해, MAU/식염수 및 MAU/WFI로 웨스턴 블롯 분석을 수행하였다. 결과는 γ-조사 후 MAU에 HC-HA/PTX3 복합체가 존재하지 않는다는 것을 나타내었고(도 8a - 8d), 이는 γ-조사가 또한 두 MAU 모두에서 HC-HA/PTX3의 손상을 유도하였다는 것을 시사한다. 결론적으로, MAU/식염수, MAU/WFI, 및 MAU/SW에서 HA, 단백질, HC-HA/PTX3의 분해 때문에 γ-조사에 의한 최종 멸균은 MAU에 적용할 수 없다.
실시예 6. 단백질 회수에 대한 여과 멸균 및 희석 효과
태아 지지 조직 산물을 0.45 μm 필터에 이어 0.2 μm 필터를 통한 사전 여과로 막 여과 멸균하였다. 필터의 막힘을 줄이고 MAU의 회수율을 높이기 위해, 본 발명자들은 또한 여과 전 희석되지 않은 MAU 및 연속 희석된 MAU를 비교하였다. 희석되거나 희석되지 않은 여과되지 않은 MAU(대조군) 및 모든 여과된 MAU에 대해 상기 검정을 수행하여 비교하였다..
AM 및 UC를 냉동분쇄하고, 1:4(w/v) 비율로 식염수 또는 WFI에서 4℃에서 1 h 동안 추출하고, 48,000 g에서 30분 동안 4℃에서 원심분리하고, 각각의 상층액을 수집하였다. MAU/식염수 및 MAU/WIF를 4℃에서 30분 동안 20 rpm으로 혼합함으로써 1.5, 2.0 또는 2.5의 희석 배율로 각각의 식염수 또는 WFI로 희석하였다. 희석되거나 희석되지 않은 MAU/식염수 및 MAU/WIF를 0.45 μm 필터에 이어 0.2 μm 필터로 여과하였다. 희석되거나 희석되지 않은 여과되지 않은 MAU/식염수 및 MAU/WIF 및 여과된 MAU/식염수 및 MAU/WIF를 HA 검정, BCA 검정, 아가로스 겔 분석 및 웨스턴 블롯 분석에 대해 시험하였다.
표 5는 0.45 μm 및 0.2 μm 필터로 순차적 여과한 후 MAU/식염수 및 MAU/WFI에 대한 HA 및 총 단백질의 생화학적 정량화를 요약한다. 결과는 희석이 없는 MAU/식염수 및 MAU/WFI 여과는 HA 및 총 단백질의 회수율이 각각 91% 및 83%(MAU/식염수) 또는 96% 및 72%(MAU/WFI)였고, MAU/식염수 또는 MAU/WFI를 1.5배, 2배 또는 2.5배로 희석해도 희석되지 않은 것과 비교하여 HA 및 총 단백질의 회수율에 어떠한 차이도 없음(모두 p>0.05)을 나타내었다. 이 결과는 희석되거나 희석되지 않은 MAU/식염수 및 MAU/WFI의 여과가 HA 또는 총 단백질의 회수율에 영향을 미치지 않으며, HA 및 총 단백질의 회수가 MAU 제제에 허용 가능하다는 것을 시사한다. 그러나, 예상대로, 희석 배수가 증가함에 따라 여과 속도가 증가함으로써 희석된 MAU가 희석되지 않은 MAU보다 우수하다.
Figure pct00005
여과 후 희석되거나 희석되지 않은 MAU의 아가로스 겔 분석은 여과되지 않은 MAU와 비교하여 모든 여과된 MAU 및 희석된 MAU(1.5배 내지 3배)에 유사한 양의 HMW HA가 존재한다는 것을 나타내었고(도 9), 이는 HMW HA가 여과 및 희석(1.5배 내지 3배) 후 MAU에서 보존된다는 것을 시사한다. 유사하게, 희석되거나 희석되지 않은 MAU의 웨스턴 블롯 분석은 모든 여과된 MAU에서 HC-HA/PTX3의 존재를 나타내었고 희석 후 증가하였으며(도 10a - 10d), 이는 HC-HA/PTX3이 또한 여과 후 보존되고 희석 후 증가된다는 것을 시사한다. 총체적으로, 여과 멸균은 MAU 최종 멸균에 적합하다. 2배 내지 2.5배 희석된 MAU의 여과는 HA 및 총 단백질의 회수율에 영향을 미치지 않으면서 HMW HA 및 HC-HA/PTX3의 속도 및 회수를 증가시킴으로써 희석되지 않은 MAU의 여과보다 더 우수하다.
실시예 7. 단백질 회수에 대한 여과 멸균 및 희석 효과
MAU는 ODI-TRAP에 적합한 더 높은 농도의 HA를 수득하기 위해 동결건조를 필요로 하기 때문에, TRAP 검정을 방해하는 염을 제거하기 위해 MAU/식염수에 대한 방법 적합성을 위한 단계로서 물에 대한 투석이 필요하다. 이전 데이터는 48 h 동안 0.5 mM PMSF가 있거나 없는 물에 대한 MAU/식염수의 투석이 염을 완전히 제거할 수 있음을 나타내었다. 그러나, 더 긴 투석 시간은 아가로즈 및 웨스턴 블롯 분석에 의해 제안되는 바와 같이 PMSF 유무에 관계없이 HA 및 HC-HA/PTX3의 분해를 유발할 수 있다.
한 공여자로부터의 AM 및 UC를 냉동분쇄하고, 1:4(w/v) 비율로 식염수로 4℃에서 1 h 동안 추출하고, 48,000 g에서 30분 동안 4℃에서 원심분리하고, 상층액을 MAU/식염수로서 수집하였다.
MAU/식염수를 식염수로 희석(2배)하였다. 희석되지 않은 MAU/식염수 및 희석된 MAU/식염수 모두 0.45 μm 필터 및 0.2 μm 필터로 순차적으로 여과되었다.
희석되거나 희석되지 않은 여과된 MAU/식염수를 샘플 부피의 ≥ 200배의 부피의 투석 버퍼(물)를 사용하고 24 h 동안 밤새도록 1시간마다 물을 교체하면서 PMSF 없이 1, 3, 6, 또는 24 h 동안 4℃에서 물에 대해 3.5k MWCO Slide-A-Lyzer G2 투석 카세트로 투석하였다. 투석에 의한 염 제거 효율을 결정하기 위해 투석된 MAU/식염수를 클로라이드 검정으로 시험하였다.
표 6은 상이한 투석 시간에서 투석에 의한 염 제거 정도를 요약한다. 결과는 3 h 동안의 투석은 희석되지 않은 MAU/식염수 및 희석된 MAU/식염수 모두에서 99% 클로라이드를 제거한 반면, 6 h 동안의 투석은 24 h 동안의 투석과 동일한 탈염 효과에 도달하였음을 나타내었다. 따라서, 투석 시간을 3 h로 단축할 수 있으며 3-6 h 동안의 투석이 MAU/식염수의 효과적인 탈염을 위해 허용 가능한 것으로 결정되었다.
2배 희석되거나 희석되지 않은 MAU/물 또는 MAU/식염수에 대한 방법 적합성을 3가지 효능 검정(들), 즉 ODI-TRAP 검정, M2 검정, NO 검정 및/또는 WST-1 검정에서 비교하였다.
동일한 공여자로부터의 AM 및 UC를 냉동분쇄하고, 1:4(w/v) 비율의 식염수 또는 WFI에서 4℃에서 1시간 동안 추출하고, 48,000 g에서 30분 동안 4℃에서 원심분리하고, 상층액을 MAU/식염수 및 MAU/WFI로 수집하였다. MAU/식염수 및 MAU/WFI를 희석하지 않거나 각각의 부형제로 희석(2배)하고, 0.45 μm 필터 및 0.2 μm 필터로 순차적으로 여과하였다. 여과된 MAU/식염수를 투석하지 않거나 염을 제거하기 위해 4℃에서 3 - 6 h 동안 물에 대해 투석하였다.
모든 MAU/식염수 및 MAU/WFI 샘플을 HA 검정에 대해 시험하였다. MAU/식염수 및 MAU/WFI를 동결건조하거나 동결건조하지 않고, ODI-TRAP 검정, M2 검정, NO 검정 및/또는 WST-1 검정으로 시험하고, 세포 배양 배지의 부피는 3가지 검정 모두에 대해 100 μl로 설정하였다. 세포 형태는 현미경 이미지로 기록되었다. 동결건조된 샘플을 각각의 검정에서 50, 100, 300 및 500 μg/ml의 HA 용량으로 시험하였다. 고용량의 HA(예컨대, ≥ 100 μg/ml)는 100 μl의 불균형적으로 적은 배양 배지 부피를 초래하여 세포 검정이 무효화되기 때문에, 동결건조되지 않은 샘플은 50 μg/ml의 하나의 HA 용량에서만 시험될 수 있었다.
표 7은 3가지 검정에 대해 용량 의존적 선형성을 나타내는 샘플을 요약하고, 도 12는 3가지 검정에 대한 용량 의존적 선형성을 예시한다. 결과는 하기를 시사하였다:
1. 동결건조 없이 시험될 수 있는 HA의 최고 농도는 50 ug/ml이며, 이는 여전히 세포 손상을 초래하므로 여전히 3가지 검정 모두에 적합하지 않다.
2. 투석 없이는 세포가 모든 3가지 검정에서 높은 염으로 인해 형태 변화 및 세포 독성을 나타내기 때문에 MAU/식염수의 투석이 필요하다.
3. 최저 검출 용량은 하기와 같다: a. TRAP: ≥ 300 μg/ml HA, 희석되거나 희석되지 않은 투석된 MAU/식염수 및 MAU/WFI. b. WST-1: ≥ 100 μg/ml HA, 희석되거나 희석되지 않은 투석된 MAU/식염수 및 MAU/WFIb. c. M2: ≥ 300 μg/ml HA, 희석되거나 희석되지 않은 MAU/WFI. M2는 투석된 MAU/식염수에 대해 적합하지 않다.
4. 희석되거나 희석되지 않은 MAU/WFI는 3가지 검정 모두에서 MAU/식염수보다 더 강력하여, 즉 동일한 용량의 HA에서 TRAP, WST-1 및 IL-12p40에 대해 더 큰 정도의 억제 또는 IL-10에 대한 촉진을 발휘하고 더 나은 선형성을 나타낸다.
5. 희석된 MAU/WFI는 WST-1 및 M2에서 더 나은 선형성으로 희석되지 않은 것보다 우수하게 수행되었다. 희석된 것은 TRAP에서 유사한 선형성으로 희석되지 않은 것과 동등하게 수행되었다. 투석된 MAU/식염수의 경우, 희석되지 않은 것은 TRAP에서 더 나은 선형성으로 희석되지 않은 것보다 우수하게 수행되었고, 희석되지 않은 것은 WST-1에서 유사한 선형성으로 희석된 것과 동등하게 수행되었다.
6. 희석되거나 희석되지 않은 MAU/WFI의 경우, 가장 낮은 검출 용량에서 WST-1은 M2와 동등하게 수행된 TRAP보다 우수하게 수행되었다. 선형성에서 희석된 것의 WST-1은 TRAP 보다 우수하게 수행된 M2와 동등하게 수행되었다. 희석되지 않은 것의 경우, WST-1은 TRAP 및 M2와 동등하게 수행되었다. 희석되거나 희석되지 않은 투석된 MAU/식염수의 경우, 가장 낮은 검출 용량 및 선형성에서 WST-1은 TRAP보다 우수하게 수행되었다.
실시예 8: 태아 지지 조직 산물에 대한 처리 파라미터의 효과
세편화된 양막 및 탯줄 태아 지지 조직 산물을 생성하기 위한 하기 공정 파라미터를 시험하는 연구가 수행되었다: 1) 저장 온도; 2) 저장 시간 3) 세편화용 부형제, 즉 식염수 또는 WFI; 및 4) 최종 멸균(드라이아이스의 존재 또는 부재하에 감마선 조사).
방법
하기 공정 제어가 적용되었다: (1) 사용된 태반 - 양막(AM) 및 탯줄(UC) -공여자는 USP <61> 획득 배양이 0 콜로니 형성 단위(CFU)를 보고하는 인간 이식 가능한 등급이었고; (2) 물품은 교차 오염이 없음을 확실히 하기 위해 일회용이었고 멸균되었으며; (3) 사용된 부형제는 오로지 새로운 시약이었고 사용 전에 캡의 밀봉이 온전한지를 확실히 하였으며; (4) 최종 산물 용기는 저장 동안 오염 가능성을 제거하기 위해 멸균되었고, RNase/DNase가 없었으며; (5) 충전 및 라벨링 완료 시, 기준선 산물에 미생물이 없음을 확실히 하기 위해 최종 산물 샘플을 USP <71> 멸균성 시험에 보냈다.
2명의 공여자로부터의 조직(AM 및 UC, 별도)을 2가지의 부형제, 즉 식염수 또는 WFI에 따라 습윤 중량에 의해 2개의 그룹(A 및 B, 표 8 참조)으로 동일하게 세분하였다. 새로운 블렌더 컵, 원추형 튜브, 200 μm 필터, 멸균 용기 및 관련 부형제를 사용하여 각각의 그룹에 대해 하기 순서의 공정 단계를 개별적으로 수행하였다: 부형제에서 세편화, 원심분리, 여과, 제형화, 분배를 위한 포장, 및 최종 멸균. 원심분리는 실온 및 3095 rcf(4000 rpm)에서 30분 동안 수행되었다. 모든 샘플은 표 8에 따라 저장되었다.
각각의 그룹(A 및 B)에서 샘플을 취하고, t=0에서 멸균성 USP <71> 시험을 위해 별도의 멸균 15 mL 스크류 캡 튜브에 NLT(적어도) 0.6 ml를 충전하였다. 각각의 그룹(A 및 B)에서 분취량을 취하여 4개의 하위 그룹(A1-4 및 B1-4, 표 8 참조)을 생성하여 하위 그룹당 적어도 13개의 샘플을 생성하였으며(하위 그룹당 13개의 샘플 x 4개의 하위 그룹 x 2개의 그룹 = 총 104개 샘플), 각각의 샘플은 15 mL 스크류 캡 튜브에 충전된 4.6 ml의 최소 부피를 가졌다. 전체 MAU 제제(즉, 13개 초과의 튜브)를 사용하여 튜브당 5 ml를 충전하였다. 사용된 라벨은 내후성이었고, 샘플 ID 및 제조 날짜가 함유되었다. 또한, 모든 샘플은 표 8에 따라 저장되었다. 도 12는 사용된 저장, 운송 및 최종 멸균 단계를 자세히 설명하는 흐름도를 제공한다.
Figure pct00008
기준선(t=0)에서 3개의 멸균성 USP <71> 샘플을 시험을 위해 계약 실험실 VRL로 배송하였다. 샘플은 얼음 팩으로 충전된 VRL 시퍼에 담아 배송되었다. 그룹 A3 및 B3의 경우, 샘플을 48 내지 92시간 동안 8℃를 유지하는 것으로 검증된 나노쿨(Nanocool) 시퍼에 포장하였다. 그룹 A4 및 B4의 경우, 샘플을 NLT 30 lb의 드라이아이스(외부) 및 코어팩(Corepack)을 갖는 써모세이프 시퍼(Thermosafe Shipper)에 포장하였다. 상기 샘플은 계약 운송업체(예컨대, FedEx)에 의해 배달되었다. 유지되는 온도를 모니터링하기 위해 데이터 로거를 그룹 A3 및 B3의 배송 용기에 배치하였다. 조사 동안 데이터 로거를 꺼내고 조사 후 배송 용기에 다시 넣었다. 배송 동안 온도를 나타내기 위해 데이터 로거로부터의 데이터를 분석하였다. 드라이아이스는 -78.5℃에서 승화하므로, 그룹 A4 및 B4의 경우, 샘플에 대한 -80℃ 온도 제어는 드라이아이스의 존재에 대해 육안 검사로 판단하고, 배송 후 잔류 드라이아이스의 중량을 참고용으로만 측정하였다. 감마선 조사는 하기 일정에 따라 25 ± 10% kGy의 선량으로 스테리게닉스(Sterigenics)에 의해 수행되었다.
ㆍ 월요일 - 샘플 배송
ㆍ 화요일 - 배송 접수 및 감마선 조사 공정
ㆍ 수요일 - 감마선 조사 완료 및 반환을 위한 공정 서류 작업
ㆍ 목요일 - 샘플 반환
샘플에 대해 멸균성 USP <71> 시험을 포함하는 분석 시험을 수행하였으며, 그룹(A 및 B)당 하나의 샘플을 제조 직후 저장 전에, 즉 t=0에 시험하였다. 샘플에 대해 BCA, HA, 아가로스 겔 분석, 웨스턴 블롯 및 ODI-TRAP 시험을 수행하였다. A 및 B의 각각의 하위 그룹(n=3)으부터의 3개의 샘플에 대해 t=0에서 이러한 시험을 수행하였고, A1/A2 및 B1/B2의 각각의 하위 그룹(n=3)으로부터의 3개의 샘플에 대해 t=1, 3 및 6개월에서 이러한 시험을 수행하였다. 또한, 각각의 하위 그룹(n=3)으로부터의 3개 샘플에 대해 하위 그룹 A3/A4 및 B3/B4에 의해 지정된 바와 같이 샘플을 조사하고 반송하고 상관 온도에서 저장한 후 t=1, 3 및 6개월에서 이러한 시험을 수행하였다.
결과
멸균성 USP <71> 시험은 하기 결과를 나타내었다:
ㆍ 그룹 A <71> 성장 없음-최종.
ㆍ 그룹 B <71> 성장 없음-최종.
HA 검정과 관련하여, 그룹 A(식염수)의 경우, t=3m에서 A1 및 A2(각각 4℃ 또는 -80℃, 대조군, 감마선 조사 없음)는 기준선과 비교하여 서로 간에 HA 농도에서 차이를 나타내지 않았으나, A4(드라이아이스의 존재하에 감마선 조사 후)는 t=1개월에서 보여지는 바와 같이 HA 농도를 검출할 수 없었다(표 9). 그룹 B(WFI)의 경우, B1 및 B2(각각 4℃ 또는 -80℃, 대조군, 감마선 조사 없음)는 기준선과 비교하여 서로 간에 HA 농도에서 차이를 나타내지 않았으나, B4(드라이아이스의 존재하에 감마선 조사 후)는 기준선과 비교하고 대조군(B2, 표 9)과 비교하여 상당한 감소를 나타내었으며, 이는 t=1m에서 보여지는 감소 경향과 일치한다.
총 단백질 분석과 관련하여: 그룹 A(식염수)의 경우, t=3m에서 A1 및 A2(각각 4℃ 또는 -80℃, 대조군, 감마선 조사 없음) 둘 다에서 단백질 농도를 검출할 수 없었지만, t=1m 및 기준선에서 농도를 검출할 수 있었다(표 9). A4(드라이아이스의 존재하에 감마선 조사 후)는 기준선과 비교하여 통계적 차이가 없었다. 그룹 B(WFI)의 경우, B1 및 B2(각각 4℃ 또는 -80℃, 대조군, 감마선 조사 없음)는 t=1m 및 기준선에서 보여지는 바와 같이 검출할 수 없었다. 샘플 B4(드라이아이스의 존재하에 감마선 조사 후)는 t=1m에서 보여지는 바와 같이 단백질을 검출할 수 없었다(표 9).
아가로스 겔 분석(도 13a-13f)과 관련하여, A1, A2, B1 및 B2 샘플의 각각의 레인에 대해 동일한 양의 10 μg HA를 로딩하였다. A4 및 B4 샘플의 각각의 레인에 대해 A4 및 B4 HA 농도가 낮기 때문에 각각 10 μg HA의 A1 또는 B1과 동일한 부피를 로딩하였다. 레인 1은 50 및 601 kDa 마커를 갖고, 레인 17은 12 kDa 마커를 가졌다(50 및 12 kDa는 더 명확한 구별을 위해 분리됨)(도 13c). 그룹 A(식염수, 투석되지 않음) 및 B(WFI) 모두 t=3m에서 대조군 샘플(감마선 조사 없음)(A1, A2 및 B1, B2, 도 13f, 각각 레인 3-6 및 레인 9-12)은 이들의 상관 기준선 샘플(도 13e, 그룹 A 및 B에 대해 각각 레인 3-5 및 레인 6-8)에서 보여지는 바와 같이 동일한 HA 분포 패턴을 나타내었고, 드라이아이스의 존재하에 감마선 조사한 샘플(A4 및 B4)은 상관 샘플(도 13b 및 13e, 그룹 A 및 B, 각각 레인 9-10 및 레인 17-18)로 t=1개월에서 보여지는 바와 같이 동일한 HA 패턴(도 13f, 그룹 A 및 B, 각각 레인 7-8 및 레인 13-14)을 나타내었다. 전반적으로, T=3에서 HA 강도는 T=1에서보다 더 약하였다. 이것이 HA 분포 변화 때문인지 겔 염색 차이 때문인지는 미지로 남아 있다.
쿠마시 블루 염색 분석(도 14a - 14b)에 대해, 그룹 A(식염수, 도 14a)의 경우, 측정 가능한 HA가 있는지의 여부에 따라 20 μg HA 또는 동일한 부피를 각각의 로딩 웰에 로딩하였다. 그룹 B(WFI, 도 14b)의 경우, 40 μg HA 또는 동일한 부피를 로딩하였다. 그룹 A의 대조군 샘플(A1 및 A2)과 그룹 B의 대조군 샘플(B1 및 B2)을 비교할 때, 둘 다 유사한 패턴을 나타내었으며 HAase 분해 후에도 동일하였다. HAase 및 DTT 처리 후, 두 그룹 모두 레인 하단까지 50 kDa 아래 레인 하단까지 스미어를 가졌다. 두 그룹 모두에 대해 저장 온도(4℃ vs -80℃)의 차이는 나타나지 않았다. 드라이아이스의 부재하에 감마선 조사 후(A3 및 B3)는 37 및 20 kDa에서 2개의 밴드를 나타내었다. 처리 없이 드라이아이스의 존재하에 감마선 조사 후(A4 및 B4)는 둘 다에 대해 겔 상단에서 ~30 kDa까지 스미어를 나타내었다. HAase 분해 후, 두 그룹 모두 20 kDa 37 kDa에서 2개의 밴드를 나타내었으며(놀랍게도 그룹 B에서 더 두드러짐) 겔 상단으로 희미한 스미어가 나타났다. HAase 및 DTT 처리 후, 두 그룹 모두 20 kDa 밴드를 나타내었다. 일관되게 그룹 B 스미어는 A보다 더 희미하였다.
웨스턴 블롯 분석(도 15a-15j)과 관련하여, A1, A2, B1 및 B2의 샘플은 각각의 로딩 웰에 10 μg HA로 로딩하고, A4 및 B4의 샘플은 각각 10 μg HA의 A1 또는 B1와 동일한 부피로 로딩하였다. HAase 또는 HAase/DTT 처리가 있거나 없는 감마선 조사가 없는 샘플 그룹 A 및 B(A1, A2, B1 및 B2)는 각각 기준선에서 상관 샘플(도 15a 및 15b)과 비교하여 동일한 HC1(도 15g 및 15h) 및 PTX3(도 15i 및 15j) 패턴을 나타내었다. HAase 또는 HAase/DTT 처리가 있거나 없는 감마선 조사를 갖는 샘플 그룹 A 및 B(A4 및 B4)는 각각 t=1m에서 상관 샘플(도 15c, 15d, 15e 및 15f)과 비교하여 동일한 HC1(도 15g 및 15h) 및 PTX3(도 15i 및 15j) 패턴을 나타내었다.
도 16a는 기준선(t=0)에서 MAU 그룹 A(식염수) 및 B(WFI)에 대한 세포 형태를 나타낸다. 도 16b는 t = 1개월에서 MAU 그룹 A 및 B에 대한 세포 형태를 나타낸다. 양성 대조군은 음성 대조군과 비교하여 다핵 파골세포 형성을 나타내었다. 다핵 파골세포의 형성은 5 μg/ml HA로 로딩된 참조 표준(RS)에 의해 억제되었다(도 16a 및 16b). 기준선(도 16a) 및 t=1개월(도 16b)에서 MAU 그룹 A 및 B는 300 및 500 μg/ml HA에서 다핵 파골세포 형성을 상당히 억제하였다.
도 17a - 17e는 TRAP 검정 결과를 나타낸다. 양성 대조군은 음성 대조군과 비교하여 높은 TRAP 활성을 나타내었고(p ≤ 0.05), 5 μg/ml HA로 로딩된 참조 물질(RM)은 TRAP 활성을 상당히 억제하였으며(p ≤ 0.05), 이는 검정을 검증한다(도 17a- 17e). 도 17a, PMSF와 함께 또는 없이 투석된 MAU(식염수)는 모든 농도에서 TRAP 활성을 상당히 억제한 반면(p ≤ 0.05), PMSF와 함께 또는 없이 투석된 식염수 단독은 TRAP 활성에 영향을 미치지 않았으며, 이는 투석에 의한 염 제거를 입증한다. 도 17b, PMSF 없이 투석된 MAU(식염수)는 TRAP 활성 억제를 나타내었지만(p ≤ 0.05), 두 공여자로부터의 PMSF로 투석된 경우 TRAP 활성 촉진을 나타내었다(p ≤ 0.05). 도 17c, MAU 그룹 A(식염수)는 활성 억제 없이 100 및/또는 300 μg/ml HA로 TRAP 활성 촉진을 나타낸 반면(p ≤ 0.05), MAU 그룹 B(WFI)는 촉진 없이 용량 의존적으로 TRAP 활성의 상당한 억제를 나타내었다(p ≤ 0.05). 도 17d, 4℃(A1) 또는 -80℃(A2)에서 저장된 MAU 그룹 A(식염수)는 활성 억제 없이 300 및/또는 500 μg/ml HA로 TRAP 활성 촉진을 나타내었다(p≤0.05). 드라이아이스의 부재하에 감마선 조사된 MAU 그룹 A(A3)는 TRAP 활성 억제를 나타내었으나(p≤0.05), 드라이아이스의 존재하에 감마선 조사된 그룹(A4)은 억제 활성 없이 TRAP 활성 촉진을 나타내었다. 도 17e, 4℃(B1) 또는 -80℃(B2)에서 저장되거나(B3) 드라이아이스의 부재(B3) 또는 드라이아이스의 존재(B4)하에 감마선 조사된 MAU 그룹 B(WFI)는 모두 300 및/또는 500 μg/ml HA로 TRAP 활성 억제를 나타내었고(p = 0.05), B1, B2 및 B4에서 100 μg/ml HA로 TRAP 활성 촉진을 나타내었다(p ≤ 0.05). *p ≤ 0.05 vs 양성 대조군, TRAP 억제. #p ≤ 0.05 vs 양성 대조군, TRAP 촉진.
결과 분석
4℃ vs -80℃에서의 저장과 관련하여, 하기를 제외하고는 그룹 A(A1 및 A2) 및 그룹 B(B1 및 B2)의 대조군 샘플에 대한 HA(양 및 품질) 및 HC-HA/PTX3 복합체와 관련하여 안정성이 있었다: HA 농도는 t=1m에서 그룹 B에서 나타난 HA 농도의 증가 없이 그룹 A 및 B에서 안정적이었다. HA는 기준선 및 t=1m에서 보여지는 바와 같이 그룹 A에서는 콘드로이틴 술페이트를 동반했지만 그룹 B에서는 동반하지 않았다. 이러한 결과는 HA가 샘플 저장 동안 3개월 동안 유지되었으며 저장 온도(4℃ vs -80℃) 간에 차이가 없다는 것을 시사한다. 아가로스 겔 결과는 그룹 A 및 B 모두에서 HA MW 분포가 4℃ 또는 -80℃에서 최대 3개월 동안의 저장으로 변화되지 않았다는 것을 시사하며, 이는 HA 검정 결과와 일치한다. 그룹 A의 단백질은 4℃ 및 -80℃에서 검출할 수 없었다. 그룹 A의 경우 t=3m 결과는 t=1m 및 기준선과 일치하지 않지만, 그룹 B의 경우 검출되지 않은 단백질 농도는 t=1m 및 기준선 결과와 일치하였다. 그룹 A 및 B는 기준선에서 보여진 상관 처리에 따라 HA, HC-HA, HC1 및 PTX3 패턴을 유지하였으며, 이는 3개월 내 안정성을 지지하고 HC-HA/PTX3 복합체의 존재를 나타낸다.
감마선 조사와 관련하여, 드라이아이스의 부재(A3 및 B3), 단백질 밴드(t=1m에서 시험됨)는 쿠마시 블루에 의해 분석된 바와 같이 현저하게 감소되었다. 샘플의 아가로스 겔은 어떠한 HA도 나타내지 않았으며, 이는 (대조군과 비교하여) 감마선 조사에 의한 HA의 완전한 분해를 시사한다. 또한, 웨스턴 블롯은 HC1 또는 PTX3을 나타내지 않았으며, 이는 HC-HA/PTX3 복합체가 보존되지 않았음을 나타낸다. 드라이아이스를 사용하는 경우, 식염수(A4)는 HA는 검출되지 않았으나 단백질 농도는 t=1m에서 보여지는 바와 같이 농도를 유지하였음을 나타낸다. WFI(B4) HA 농도는 기준선과 비교하여 87.2% 감소되었으며, 단백질 농도는 t=1m 및 기준선에서 보여지는 바와 같이 여전히 검출할 수 없다. 감마선 조사 후 아가로스 겔 결과는 t=1개월에서 상관 샘플과 일치하며, 이는 안정성을 나타낸다. 웨스턴 블롯 샘플(A4 및 B4, t=3m)을 t=1m에서의 샘플과 비교하면, 두 경우 모두 상관 처리로 HC-HA, HC1 및 HMW PTX3가 검출되지 않았으며, 이는 t=1m 결과를 준수하는 샘플에서 HC-HA/PTX3 복합체가 없음을 시사한다.
TRAP 검정과 관련하여, t=1m에서 감마선 조사가 없는 식염수 샘플(A1 및 A2)은 기준선에서 보여지는 바와 같이 TRAP 촉진 활성을 나타내었다. 드라이아이스의 존재 또는 부재하에 감마선 조사 후(A3 및 A4)는 기준선에서 보여지지 않는 억제 활성을 나타내었다. t=1m에서 감마선 조사가 없는 WFI 샘플(B1 및 B2)은 대조군 및 기준선에서 보여지는 바와 같이 TRAP 억제 활성을 나타내었다. 그룹 B의 경우, 다항식 4 계산의 사용은 기준선(이전에 보이지 않음) 및 t=3m에서 단백질 농도가 나타났지만 t=1m에서는 그렇지 않았다.
따라서, 대조군 샘플(A1, A2, B1 및 B2)은 t=1m 및 기준선에서 보여지는 바와 같이 t=3m에서 HC-HA/PTX 복합체를 보존한다는 결론을 내릴 수 있다. (드라이아이스 존재) 감마선 멸균 후 샘플(A4 및 B4)은 t=1m에서 보여지는 바와 같이 t=3m에서 HC-HA/PTX 복합체를 보존하지 않았다. 감마 후 샘플(A3, A4, B3 및 B4)은 처리 없이 HC-HA 또는 HAase 및 DTT 환원 후 HC1을 나타내지 않았지만, A4에서 HMW PTX3을 나타내었으며, 이는 HC-HA/PTX 복합체가 t=1m에서 보존되지 않았음을 나타낸다.
실시예 9: MAU 산물의 안정성 시험
MAU는 하기에 기재되고 도 23에 예시된 하기 공정을 이용하여 제조되었다. 최종 산물은 HA, ODI-TRAP, WST-1, NO 및 M2 검정을 이용하여 안정성에 대해 시험되었다.
단계 1: 규제 출발 물질
접수부터 규제 출발 물질까지 조직 처리. 규제 출발 물질에 대한 조직 준비 공정은 세정, 절단 및 침지 단계를 포함하였다.
단계 2: 원료 의약품(Drug Substance)
냉동분쇄. AM 및 UC 조직은 이전에 저장된 경우 해동되었다. 조직의 중량을 재고, 프리저 밀 바이알로 옮겼다. 밀폐된 바이알을 조직이 냉동분쇄되는 프리저 밀로 옮겼다. 사이클이 완료되면 분쇄된 조직을 멸균된 병(추출병)으로 옮겼다. 총 분쇄 조직의 중량을 쟀다.
추출. WFI(주사용수)를 1:4 w/v 조직(그램):WFI(밀리리터) 비율로 분쇄된 조직을 함유하는 병에 첨가하였다. 충전된 병을 밀봉하고, 추출을 위해 2-8℃ 냉장고 내부에 위치된 병 회전기로 옮겼다. 추출은 12±6 rpm에서 60±5분 동안 실행될 것이다.
원심분리. 추출 직후, 용액을 원심분리를 위해 원심분리기 튜브에 충전하였다. 원심분리기를 14,000 g에서 30분 동안 작동시켰다. 상층액을 수집하고 펠릿을 버렸다.
희석. 원심분리로부터 수집된 상층액을 WFI로 500 ml의 최종 부피로 희석하였다. 500 ml 희석 용액을 갖는 용기를 밀봉하고, 2-8℃ 냉장고 내부에 위치된 튜브 회전기로 옮겼다. 용액을 12±6 rpm에서 30±3분 동안 혼합하였다.
멸균 여과. 연동 펌프 및 여과 어셈블리를 사용하여 멸균 여과를 수행하였다. 여과 어셈블리는 감마 방사선으로 멸균되었다. 희석된 상층액을 NMT 18 psi에서 여과 병으로부터 여과 어셈블리의 일부인 멸균 여과액 백(폐쇄 시스템)으로 상류측에 0.65 마이크론 제거 등급 비대칭 층 및 하류측에 0.2 마이크론 제거 등급 대칭층이 장착된 캡슐 필터를 사용하여 여과하였다.
단계 3: 완제 의약품(Drug Product)
충전, 밀봉, 라벨링, 포장 및 저장. 이 공정은 여과된 원료 의약품을 최종 산물 튜브에 충전하고 밀봉하고, 라벨링하고 최종 산물을 저장하는 것을 포함한다.
또한, 어셈블리는 하기를 위해 구현되는 통상적인 공정 중 제어의 일부로서 시스템 무결성(압력 쇠퇴), 시각적 외관 및 유체 경로 청결도에 대해 시험될 것이다.
단위 용량 튜브는 밀봉될 것이다. UDT 밀봉 후, 클린룸 외부에서 튜브 라벨링, 2차 포장 및 밀봉이 이루어질 제어된 비분류실로 이동될 것이다.
일단 충전되고 밀봉된 튜브가 누출 시험에 의해 허용 가능한 것으로 확인되면 완성된 완제 의약품(FDP) 배치 번호와 함께 라벨링되고 포장된다. 라벨은 시각적 결함 및 정확성을 위해 육안으로 검사되고 조정된다. 멸균성, 내독소, 동일성, 순도 및 효능, 총 충전 부피 및 적하 균일성 시험을 포함하는 산물 출시 시험을 위해 대표 샘플링이 수행될 것이다.
최종 산물을 3개의 로트로 분리하였다. USP <71> 멸균성 시험 결과는 하기와 같다:
- D1 - TGEA19I010 - 결과는 성장 없음이었다.
- D2 - GJ19C018RBI - 결과는 성장 없음이었다.
- D3 - TGED19I007 - 결과는 성장 없음이었다.
표 10은 각각의 공여자에 대해 측정된 HA 농도를 나타낸다. 공여자 사이에서 HA 농도는 t-시험을 이용할 때 상당히 상이한 것으로 나타났으며(p<0.05), D1 및 D2는 D3과 비교하여 더 낮은 HA 농도를 가졌다는 것을 나타낸다.
결과
아가로스 겔 분석(도 18a - 18b)은 HMW HA가 모든 샘플에 존재한다는 것을 나타내며, D2 및 D3에서는 HMW > 8000 kDa이고 D1에서는 6000 kDa이다. 보라색의 LMW 밴드(< 30.6 kDa)는 주로 D3보다 D2에 더 많이 존재하고 D1에서는 매우 약하게 존재하며 이전 MAU/WFI에서는 나타나지 않는다(도 18b, 레인 9-14).
HCl에 대한 웨스턴 블롯 분석(도 19a-19d)은 처리 전 및 HAase 처리 후 유리 HC1의 풍부한 존재로 인해 HC-HA의 해리를 나타내지 않았다. 모든 샘플은 HMW PTX3를 갖는 것으로 나타났으며, HAase 처리에 의한 이의 해리는 아마도 풍부한 존재로 인해 명백하지 않다.
ODI-TRAP 검정(도 20a - 20b)과 관련하여, IRM(HC-HA/PTX3)(25 μg/ml)은 세포 사멸 유도와 함께 TRAP 활성을 억제하였다. 또한, 3명의 공여자 모두로부터의 샘플(t=0)은 500 μg/ml에서 세포 사멸과 함께 TRAP 활성을 억제하였다.
WST-1 검정(도 21a - 21b)과 관련하여, IRM(25 μg/ml)은 세포 대사 활성을 억제하였고, D1 및 D3는 500 μg/ml에서 세포 대사 활성을 억제하였다. D2 억제 효과는 음의 OD를 초래하여 편차가 시작되었다.
M2 검정(도 22a - 22b)과 관련하여, IRM(20 μg/ml)은 IL-12 p40 생성을 하향 조절하였고, 3명의 공여자는 500 μg/ml에서 IL-12 p40 생성을 하향 조절하였다.
NO 검정(도 23a - 23b)과 관련하여, IRM(20 μg/ml)은 NO 생성을 억제하였고, 3명의 공여자는 500 μg/ml에서 NO 생성을 억제하였고, 공여자 2 및 3은 세포 사멸을 유도하였다.
분석
IRM(HC-HA/PTX3)과 유사하게, 3명의 TTBT01 공여자 모두는 500 μg/ml의 HA의 로딩 용량에서 ODI-TRAP 검정, WST-1 검정, M2 편광 IL-12 검정 및 NO 검정에서 억제를 나타내었다.
실시예 10: MAU 산물의 후속 안정성 시험
실시예 9에 따라 제조된 MAU 샘플에 대해 표 11에 예시되는 바와 같이 t=1, 2, 및 3 시점에서 반복된 HA, ODI-TRAP, WST-1 및 M2 검정을 수행한다. 이어서, 데이터는 풀(pull) 시점에서 변화 백분율을 결정하기 위해 추적된다. 모든 배치는 안정성 연구 동안 동일한 방식으로 분석될 것이다.
실시예 12: MAU의 스케일 업 제조
MAU는 하기에 기재되고 도 24에 예시된 하기 공정을 이용하여 제조된다.
단계 1: 규제 출발 물질에 대한 원료. 이 단계는 조직 원료(즉, 인간 기원 조직)의 획득부터 개별 공여자로부터의 인간 양막(AM) 및 탯줄(UC) 조직으로 이루어진 규제 출발 물질(RSM)의 생성까지를 다룬다. 이 단계는 RSM을 생성하기 위해 공여자 스크리닝, 조달, 접수 및 검사, 공여자 적격성 결정, 조직 세정, 절단 및 침지로 이루어진다.
단계 2: 원료 의약품. 단일 공여자 공정 및 다수 공여자 공정. 이 단계는 개별 공여자에 대한 냉동분쇄, 추출, 원심분리 및 목표 충전 부피로 이루어진다. 충분한 수의 공여자가 달성된 후, 다수의 공여자는 혼합기에서 함께 풀링되어 풀링된 원료 의약품을 생성하며, 이는 원료 의약품(DS)을 생성하기 위해 상이한 제형으로 더 희석될 수 있다.
단계 3: 완제 의약품. 블로우 충전 밀봉(BFS) 장비에서 충전 및 밀봉과 함께 멸균 여과. 이 단계는 바이알에 DS를 멸균 여과, 충전 및 밀봉하는 것으로 시작한다. DS를 바이알당 2.0 mL의 목표 충전 중량으로 바이알에 충전한다. 밀봉된 모든 바이알을 결함에 대해 육안으로 검사하고, 라벨링 전에 누출 시험에 의한 용기 폐쇄 무결성을 위해 샘플링한다. 대표 바이알을 샘플링하고 출시를 위해 시험한다.
실시예 13: 상처 치료 방법
실시예 1의 태아 지지 조직 산물을 패치에 적용한다. 패치는 상처를 치료하기에 충분한 기간 동안 상처에 직접적으로 적용된다.
실시예 14: 탈출된 디스크 치료 방법
실시예 1의 태아 지지 조직 산물은 주사제로 제형화된다. 제형은 탈출된 디스크 부위에 주사된다. 치료 효과가 관찰될 때까지 치료를 계속한다.
실시예 15: 골관절염 치료 방법
실시예 1의 태아 지지 조직 산물은 주사제로 제형화된다. 제형은 관절염 관절에 주사된다. 치료 효과가 관찰될 때까지 치료를 계속한다.

Claims (44)

  1. 태아 지지 조직 산물을 제조하는 방법으로서,
    (a) 태아 지지 조직을 냉동분쇄하여 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 생성하는 단계;
    (b) 냉동분쇄된 태아 지지 조직을 부형제에서 추출하여 추출물을 생성하는 단계; 및
    (c) 추출물을 약 0.6 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용한 후 약 0.4 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용하여 여과에 의해 멸균하는 단계
    를 포함하고;
    태아 지지 조직 산물이 생성되는, 태아 지지 조직 산물을 제조하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 여과에 의한 멸균이 약 0.45 μm의 공극 크기를 갖는 막을 사용한 후 약 0.2 μm 이하의 공극 크기를 갖는 막을 사용하는 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서, 냉동분쇄가 태아 지지 조직을 액체 질소에서 분쇄하는 것을 포함하는 것인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 냉동분쇄가 태아 지지 조직을 미세 분말로 분쇄하는 것을 포함하는 것인 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 태아 지지 조직이 태반, 탯줄, 태반 양막 탯줄 양막, 융모막, 또는 양막-융모막, 또는 이들의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 태아 지지 조직이 탯줄 및 태반 양막을 포함하는 것인 방법.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 부형제가 식염수, 주사용수(WFI) 또는 이들의 임의의 조합인 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 부형제가 WFI인 방법.
  9. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 부형제가 식염수인 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 태아 지지 조직을 원심분리하는 단계 c)를 추가로 포함하는 방법.
  11. 제10항에 있어서, 원심분리 속도가 약 14,000 상대 원심력(rcf) 이상인 방법.
  12. 제10항 또는 제11항에 있어서, 태아 지지 조직을 원심분리 후 부형제로 희석하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  13. 제12항에 있어서, 부형제가 WFI 또는 식염수인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 부형제가 WFI인 방법.
  15. 제13항에 있어서, 부형제가 식염수인 방법.
  16. 제12항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 태아 지지 조직이 적어도 약 1.5배, 2.0배 또는 2.5배의 배율로 희석되는 것인 방법.
  17. 제12항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 태아 지지 조직이 약 1.5배 내지 약 3배의 배율로 희석되는 것인 방법.
  18. 제12항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 태아 지지 조직이 약 2배의 배율로 희석되는 것인 방법.
  19. 제12항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 희석된 태아 지지 조직이 약 1 μg/ml 내지 약 150 μg/ml의 히알루로난(HA)을 포함하는 것인 방법.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 태아 지지 조직 산물이 항염증, 항흉터, 항혈관형성, 항유착이거나 상처 치유를 촉진하는 것인 방법.
  21. (a) 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조된 태아 지지 조직 산물, 및 (b) 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  22. 제21항에 있어서, 약제학적으로 허용되는 담체가 카르보머, 셀룰로스, 콜라겐, 글리세린, 헥실렌 글리콜, 히알루론산, 히드록시프로필 셀룰로스, 인산, 폴리소르베이트 80, 프로필렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 스테아레이트, 식염수, 수산화나트륨, 인산나트륨, 소르비탈, 물, 잔탄 검, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택되는 것인 약제학적 조성물.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 태아 지지 조직 분말 산물이 크림, 로션, 연고, 안과 용액, 스프레이, 페이스트, 겔, 필름, 또는 페인트로서 투여되거나 제공되는 것인 약제학적 조성물.
  24. 제21항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 약제학적 조성물이 항염증, 항흉터, 항혈관형성, 항유착이거나 상처 치유를 촉진하는 것인 약제학적 조성물.
  25. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 상처를 치료하기에 충분한 기간 동안 상처에 투여하는 단계를 포함하는, 상처 치료를 필요로 하는 개체에서 상처를 치료하는 방법.
  26. 제25항에 있어서, 상처가 각막 상피 상처인 방법.
  27. 제26항에 있어서, 각막 상피 상처가 광절제 치료에 의해 유발된 것인 방법.
  28. 제24항 또는 제25항에 있어서, 상처가 피부 화상 또는 흉터로부터 선택되는 피부과적 병태인 방법.
  29. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 척추 병태를 치료하기에 충분한 기간 동안 척추 병태의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 척추 병태를 치료하는 방법.
  30. 제29항에 있어서, 척추 병태가 탈출된 디스크, 척추 유착, 후관절 골관절염, 신경근병증, 척수 부상, 또는 추간판염으로부터 선택되는 것인 방법.
  31. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 관절염 병태를 치료하기에 충분한 기간 동안 관절염 병태의 치료를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 관절염 병태를 치료하는 방법.
  32. 제31항에 있어서, 관절염 병태가 골관절염, 류마티스 관절염, 패혈성 관절염, 강직성 척추염, 또는 척추증으로부터 선택되는 것인 방법.
  33. 제21항 내지 제24항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 뼈, 조직 또는 연골을 재생하거나 복구하기에 충분한 기간 동안 뼈, 조직 또는 연골의 재생 또는 복구를 필요로 하는 개체에게 투여하거나 제공하는 단계를 포함하는, 상기 개체에서 뼈, 조직 또는 연골을 재생하거나 복구하는 방법.
  34. 제33항에 있어서, 약제학적 조성물이 패치로서 투여되거나 제공되는 것인 방법.
  35. 제33항에 있어서, 약제학적 조성물이 상처 드레싱으로서 투여되거나 제공되는 것인 방법.
  36. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 태아 지지 조직 산물을 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물과 함께 풀링하는 단계를 포함하는 방법.
  37. 제36항에 있어서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물이 2 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함하는 것인 방법.
  38. 제36항에 있어서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물이 5 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함하는 것인 방법.
  39. 제36항에 있어서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물이 15 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함하는 것인 방법.
  40. 제36항에 있어서, 태아 지지 조직 산물 및 적어도 하나의 추가 태아 지지 조직 산물이 45 이상의 상이한 대상체로부터 유래되는 태아 지지 조직을 포함하는 것인 방법.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 태아 지지 조직 산물을 용기에 충전하는 단계를 포함하는 방법.
  42. 제41항에 있어서, 용기를 밀봉하는 단계를 포함하는 방법.
  43. 제41항 또는 제42항에 있어서, 충전 및 밀봉이 무균적으로 수행되는 것인 방법.
  44. 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 충전 및 밀봉이 인간 개입 없이 무균적으로 및 단일 연속 공정으로 수행되는 것인 방법.
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