TW202231287A - 處理胎兒扶持組織之方法 - Google Patents

Abstract

在某些實施例中，本文揭示製備胎兒扶持組織產物之方法，該等方法包含：將胎兒扶持組織低溫粉碎或均質化；在賦形劑中提取經低溫粉碎之胎兒扶持組織；及對提取物進行滅菌。本文亦揭示包含該胎兒扶持組織產物之醫藥組合物及使用該胎兒扶持組織產物治療傷口、脊椎病況及關節炎之方法。

Description

處理胎兒扶持組織之方法

本文揭示製備胎兒扶持組織產物之方法，其包含：(a)低溫粉碎該胎兒扶持組織以產生經低溫粉碎之胎兒扶持組織；(b)在賦形劑中提取經低溫粉碎之胎兒扶持組織以產生提取物；及(c)藉由使用孔徑為約0.6 µm或更小之薄膜，隨後使用孔徑為約0.4 µm或更小之薄膜過濾該提取物來滅菌；其中產生該胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，藉由過濾來滅菌係使用孔徑為約0.45 µm之薄膜，隨後使用孔徑為約0.2 µm或更小之薄膜。在一些實施例中，該低溫粉碎包含在液氮中粉碎該胎兒扶持組織。在一些實施例中，低溫粉碎包含將胎兒扶持組織粉碎為細粉。在一些實施例中，該胎兒扶持組織包含胎盤、臍帶、胎盤羊膜、臍帶羊膜、絨毛膜或羊膜-絨毛膜，或其任何組合。在一些實施例中，胎兒扶持組織包含臍帶及胎盤羊膜。在一些實施例中，賦形劑為鹽水、注射用水(WFI)或其任何組合。在一些實施例中，賦形劑為WFI。在一些實施例中，賦形劑為鹽水。在一些實施例中，方法進一步包含以下步驟c)：將胎兒扶持組織離心。在一些實施例中，離心速度為約14,000相對離心力(rcf)或更高。在一些實施例中，方法進一步包含在離心之後用賦形劑稀釋胎兒扶持組織。在一些實施例中，賦形劑為WFI或鹽水。在一些實施例中，賦形劑為WFI。在一些實施例中，賦形劑為鹽水。在一些實施例中，胎兒扶持組織稀釋至少約1.5倍、2.0倍或2.5倍之因子。在一些實施例中，胎兒扶持組織稀釋約1.5倍至約3倍之間的因子、約3倍至約5倍之間的因子或約5倍至10倍之間的因子。在一些實施例中，胎兒扶持組織以大於5倍之因子稀釋。在一些實施例中，胎兒扶持組織以大於10倍之因子稀釋。在一些實施例中，胎兒扶持組織稀釋約2倍之因子。在一些實施例中，經稀釋之胎兒扶持組織包含約1 µg/ml至約150 µg/ml之玻尿酸(HA)。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物抗發炎、抗瘢痕形成、抗血管生成、抗黏連或促進傷口癒合。在一些實施例中，方法包含合併該胎兒扶持組織產物與至少一種額外胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物及至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少2名不同個體之胎兒扶持組織。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物及至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少5名不同個體之胎兒扶持組織。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物及至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少15名不同個體之胎兒扶持組織。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物及至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少45名不同個體之胎兒扶持組織。在一些實施例中，方法包含將胎兒扶持組織產物填充至容器中。在一些實施例中，方法包含密封容器。在一些實施例中，填充及密封係無菌進行。在一些實施例中，填充及密封係在無人工干預之情況下以單一連續程序無菌進行。

在某些實施例中，本文揭示一種製備胎兒扶持組織產物之方法，其包含：(a)均質化該胎兒扶持組織以產生經均質化胎兒扶持組織；(b)在賦形劑中提取經均質化胎兒扶持組織以產生提取物；及(c)使用γ照射或電子束滅菌對該提取物進行滅菌，其中產生該胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，均質化包含將胎兒扶持組織粉碎為細粉。在一些實施例中，該胎兒扶持組織包含胎盤、臍帶、胎盤羊膜臍帶羊膜、絨毛膜或羊膜-絨毛膜，或其任何組合。在一些實施例中，胎兒扶持組織包含臍帶及胎盤羊膜。在一些實施例中，賦形劑為鹽水、注射用水(WFI)或其任何組合。在一些實施例中，賦形劑為WFI。在一些實施例中，賦形劑為鹽水。在一些實施例中，方法在步驟c)後進一步包含：將胎兒扶持組織離心。在一些實施例中，離心速度為約14,000相對離心力(rcf)或更高。在一些實施例中，方法進一步包含在離心之後用賦形劑稀釋胎兒扶持組織。在一些實施例中，賦形劑為WFI或鹽水。在一些實施例中，賦形劑為WFI。在一些實施例中，賦形劑為鹽水。在一些實施例中，胎兒扶持組織稀釋至少約1.5倍、2.0倍或2.5倍之因子。在一些實施例中，胎兒扶持組織稀釋約1.5倍至約3倍之間的因子、約3倍至約5倍之間的因子或約5倍至10倍之間的因子。在一些實施例中，胎兒扶持組織以大於5倍之因子稀釋。在一些實施例中，胎兒扶持組織以大於10倍之因子稀釋。在一些實施例中，胎兒扶持組織稀釋約2倍之因子。在一些實施例中，經稀釋之胎兒扶持組織包含約1 µg/ml至約150 µg/ml之玻尿酸(HA)。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物抗發炎、抗瘢痕形成、抗血管生成、抗黏連或促進傷口癒合。在一些實施例中，方法包含合併該胎兒扶持組織產物與至少一種額外胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物及至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少2名不同個體之胎兒扶持組織。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物及至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少5名不同個體之胎兒扶持組織。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物及至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少15名不同個體之胎兒扶持組織。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物及至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少45名不同個體之胎兒扶持組織。在一些實施例中，方法包含將胎兒扶持組織產物填充至容器中。在一些實施例中，方法包含密封容器。在一些實施例中，填充及密封係無菌進行。在一些實施例中，填充及密封係在無人工干預之情況下以單一連續程序無菌進行。

在某些實施例中，本文揭示一種醫藥組合物，其包含(a)藉由本文所揭示之方法中之任一者製備的胎兒扶持組織產物，及(b)醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑選自：卡波姆(carbomer)、纖維素、膠原蛋白、甘油、己二醇、玻尿酸、羥丙基纖維素、磷酸、聚山梨醇酯80、丙二醇、丙二醇硬脂酸酯、鹽水、氫氧化鈉、磷酸鈉、山梨糖醇、水、三仙膠或其任何組合。在一些實施例中，胎兒扶持組織粉末產物係以乳膏、乳劑、軟膏、眼用溶液、噴霧劑、糊劑、凝膠劑、膜劑或塗料形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物抗發炎、抗瘢痕形成、抗血管生成、抗黏連或促進傷口癒合。

在某些實施例中，本文揭示一種治療有需要之個體之傷口的方法，其包含向傷口投與本文所揭示之醫藥組合物中之任一者，持續足以治療傷口的時段。在一些實施例中，傷口為角膜上皮傷口。在一些實施例中，角膜上皮傷口係由光消融治療引起。在一些實施例中，傷口為選自皮膚燒傷或瘢痕之皮膚病況。

在某些實施例中，本文揭示一種治療有需要之個體之脊椎病況的方法，其包含向該個體投與本文所揭示之醫藥組合物中之任一者，持續足以治療該脊椎病況的時段。在一些實施例中，脊椎病況係選自椎間盤突出、脊椎黏連、面關節骨關節炎、神經根病變或椎間盤炎。在一些實施例中，脊椎病況為脊髓損傷。

在某些實施例中，本文揭示一種治療有需要之個體之關節炎病況之方法，其包含向該個體投與本文所揭示之醫藥組合物中之任一者，持續足以治療關節炎病況之時段。在一些實施例中，關節炎病況係選自骨關節炎、類風濕性關節炎、敗血性關節炎、關節黏連性脊椎炎或椎關節黏連。

在某些實施例中，本文揭示一種再生或修復有需要之個體中的骨骼、組織或軟骨之方法，其包含向該個體投與或提供本文所揭示之醫藥組合物中之任一者，持續足以再生或修復骨骼、組織或軟骨的時段。在一些實施例中，醫藥組合物以貼片形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物係以傷口敷料形式投與或提供。

交叉申請

本申請案主張2020年10月26日提交之美國申請案第63/105,770號之權益，其以全文引用之方式併入本文中。

羊膜及臍帶含有若干先天生物因子，適用於多種目的，包括傷口癒合及減少發炎及疤痕。HC-HA/PTX3複合物-高分子量(HMW)玻尿酸(HA)與來自間-α-胰蛋白酶抑制劑之重鏈(HC)1共價連接，並進一步與pentraxin3 (PTX3)複合-係臍帶及羊膜之負責傷口癒合效果的一個關鍵活性組分。因此，需要產生具有高產率HC-HA/PTX3、HA及其他所關注蛋白質之胎兒扶持組織產物(例如用於傷口癒合之羊膜及臍帶提取物)。亦需要使用減少或防止HC-HA/PTX3複合物及其他所關注蛋白質降解之方法產生胎兒扶持組織產物。防止HA及其他所關注蛋白質降解為重要的，因為此類蛋白質之降解可能會使得胎兒扶持組織產物不適用於角膜表面上，其中降解產生之較小微粒可能導致視力模糊。

在某些實施例中，本文揭示製備胎兒扶持組織產物之方法，其包含：(a)低溫粉碎胎兒扶持組織以產生經低溫粉碎之胎兒扶持組織；(b)在賦形劑中提取經低溫粉碎之胎兒扶持組織以產生提取物；及(c)藉由使用孔徑為約0.6 µm或更小之薄膜，隨後使用孔徑為約0.3 µm或更小之薄膜過濾該提取物來滅菌。在一些實施例中，胎兒扶持組織為胎盤羊膜(PAM)或實質上經分離之PAM、臍帶羊膜(UCAM)或實質上經分離之UCAM、絨毛膜或實質上經分離之絨毛膜、羊膜-絨毛膜或實質上經分離之羊膜-絨毛膜、胎盤或實質上經分離之胎盤、臍帶或實質上經分離之臍帶，或其任何組合。在一些實施例中，低溫粉碎包含在液氮中粉碎胎兒扶持組織。在一些實施例中，低溫粉碎包含將胎兒扶持組織粉碎為細粉。在一些實施例中，賦形劑為鹽水、注射用水(WFI)或其任何組合。在一些實施例中，方法進一步包含將胎兒扶持組織離心。在一些實施例中，離心速度為約14,000相對離心力(rcf)或更高。在一些實施例中，方法進一步包含在離心之後用賦形劑稀釋胎兒扶持組織。在一些實施例中，賦形劑為WFI或鹽水。在一些實施例中，胎兒扶持組織稀釋至少約1.5倍、2.0倍或2.5倍之因子。在一些實施例中，胎兒扶持組織稀釋約1.5倍至約3倍之間的因子、約3倍至約5倍之間的因子或約5倍至10倍之間的因子。在一些實施例中，胎兒扶持組織以大於5倍之因子稀釋。在一些實施例中，胎兒扶持組織以大於10倍之因子稀釋。在一些實施例中，經稀釋之胎兒扶持組織包含約1 µg/ml至約150 µg/ml之玻尿酸(HA)。在一些實施例中，經稀釋之胎兒扶持組織包含約1 µg/ml至約90 µg/ml之HA。在一些實施例中，經稀釋之胎兒扶持組織包含約90 µg/ml至約150 µg/ml之HA。在一些實施例中，經稀釋之胎兒扶持組織包含約1-10 µg/mL之HA、約10-20 µg/mL之HA、約20-30 µg/mL之HA、約30-40 µg/mL之HA、約40-50 µg/mL之HA、約50-60 µg/mL之HA、約60-70 µg/mL之HA、約70-80 µg/mL之HA、約80-90 µg/mL之HA、約90-100 µg/mL之HA、約100-110 µg/mL之HA、約110-120 µg/mL之HA、約120-130 µg/mL之HA、約130-140 µg/mL之HA，或約140-150 µg/mL之HA。

在一些情況下，與使用其他均質化技術之生產方法相比，胎兒扶持組織之低溫粉碎產生具有更高產率HC-HA/PTX3及其他蛋白質之胎兒扶持組織產物。在一些情況下，與使用其他均質化技術之生產方法相比，胎兒扶持組織之低溫粉碎導致HC-HA/PTX3及其他所關注蛋白質之降解較少。在一些情況下，與使用其他均質化技術之生產方法相比，胎兒扶持組織之低溫粉碎產生具有較高效價之胎兒扶持組織產物，例如藉由ODI-TRAP分析、M2分析、氧化氮(NO)分析及/或WST-1分析所測定。在一些情況下，與藉由γ照射對胎兒扶持組織產物進行滅菌之生產方法相比，藉由過濾滅菌導致HC-HA/PTX3、HA及其他所關注蛋白質之降解較少。在一些情況下，藉由過濾滅菌自胎兒扶持組織產物移除較小粒子，其在某些調配物(例如用於角膜表面上之包含胎兒扶持組織的凝膠)中可為不合需要的。在一些情況下，與不包括稀釋步驟之方法相比，稀釋胎兒扶持組織導致HC-HA/PTX3及其他所關注蛋白質之較快過濾及較好回收。在一些情況下，與使用不同賦形劑(諸如結構化水)之方法相比，使用注射用水作為賦形劑導致HC-HA/PTX3及其他所關注蛋白質之較快過濾及較好回收。

在某些實施例中，本文揭示藉由包含以下步驟之方法製備之胎兒扶持組織產物：(a)低溫粉碎胎兒扶持組織以產生經低溫粉碎之胎兒扶持組織；(b)在賦形劑中提取經低溫粉碎之胎兒扶持組織以產生提取物；及(c)藉由使用孔徑為約0.6 µm之薄膜，隨後使用孔徑為約0.4 µm或更小之薄膜過濾該提取物來滅菌。在一些實施例中，胎兒扶持組織為胎盤羊膜(PAM)或實質上經分離之PAM、臍帶羊膜(UCAM)或實質上經分離之UCAM、絨毛膜或實質上經分離之絨毛膜、羊膜-絨毛膜或實質上經分離之羊膜-絨毛膜、胎盤或實質上經分離之胎盤、臍帶或實質上經分離之臍帶，或其任何組合。

在某些實施例中，本文揭示一種醫藥組合物，其包含本文所揭示之胎兒扶持組織產物及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，醫藥學上可接受之載劑選自卡波姆、纖維素、膠原蛋白、甘油、己二醇、玻尿酸、羥丙基纖維素、磷酸、聚山梨醇酯80、丙二醇、丙二醇硬脂酸酯、鹽水、氫氧化鈉、磷酸鈉、山梨糖醇、水、三仙膠或其任何組合。在一些實施例中，醫藥組合物係以乳膏、乳劑、軟膏、眼用溶液、噴霧劑、糊劑、凝膠劑、膜劑或塗料形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物抗發炎、抗瘢痕形成、抗血管生成、抗黏連或促進傷口癒合。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於硬膜外投與、鞘內投與、吸入投與、靜脈內投與或其組合。

在某些實施例中，本文揭示治療有需要之個體之傷口的方法，其包含向該傷口投與本文所揭示之醫藥組合物，持續足以治療該傷口的時段。在一些實施例中，傷口為選自皮膚燒傷或瘢痕之皮膚病況。在一些實施例中，醫藥組合物以貼片形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物係以傷口敷料形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物經調配以便注射。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於硬膜外投與、鞘內投與、吸入投與、靜脈內投與或其組合。

在某些實施例中，本文揭示治療有需要之個體之脊椎病況的方法，其包含向該個體投與本文所揭示之醫藥組合物，持續足以治療該脊椎病況的時段。在一些實施例中，脊椎病況係選自椎間盤突出、脊椎黏連、面關節骨關節炎、神經根病變或椎間盤炎。在一些實施例中，脊椎病況為脊髓損傷。在一些實施例中，醫藥組合物以貼片形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物係以傷口敷料形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物經調配以便注射。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於硬膜外投與、鞘內投與、吸入投與、靜脈內投與或其組合。

在某些實施例中，本文揭示治療有需要之個體之關節炎病況之方法，其包含向該個體投與本文所揭示之醫藥組合物，持續足以治療該關節炎病況之時段。在一些實施例中，關節炎病況係選自骨關節炎、類風濕性關節炎、敗血性關節炎、關節黏連性脊椎炎或椎關節黏連。在一些實施例中，醫藥組合物以貼片形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物係以傷口敷料形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物經調配以便注射。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於硬膜外投與、鞘內投與、吸入投與、靜脈內投與或其組合。在某些實施例中，本文揭示再生或修復有需要之個體中的骨骼、組織或軟骨之方法，其包含向該個體投與或提供本文所揭示之醫藥組合物，持續足以再生或修復骨骼、組織或軟骨的時段。在一些實施例中，醫藥組合物以貼片形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物係以傷口敷料形式投與或提供。在一些實施例中，醫藥組合物經調配以便注射。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)。在一些實施例中，醫藥組合物經調配用於硬膜外投與、鞘內投與、吸入投與、靜脈內投與或其組合。 胎兒扶持組織產物之製備 初始處理

胎兒扶持組織係獲自任何適合之來源(例如，醫院或組織庫)。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係獲自任何哺乳動物，諸如人類、非人類靈長類動物、母牛或豬。

在一些實施例中，將胎兒扶持組織冷凍(例如處於0℃或低於0℃)直至已確定供體及試樣合格。在一些實施例中，冷凍胎兒扶持組織實質上殺滅胎兒扶持組織中發現之所有細胞。在一些實施例中，冷凍胎兒扶持組織實質上殺滅胎兒扶持組織中發現之所有細胞，同時維持或增加胎兒扶持組織相對於新鮮(亦即非冷凍)胎兒扶持組織之生物活性。在一些實施例中，冷凍胎兒扶持組織導致胎兒扶持組織中發現之實質上所有細胞的代謝活性損失。在一些實施例中，冷凍胎兒扶持組織導致胎兒扶持組織中發現之實質上所有細胞之代謝活性損失，同時維持或增加胎兒扶持組織相對於新鮮(亦即非冷凍)胎兒扶持組織之生物活性(例如其抗發炎、抗瘢痕形成、抗血管生成及抗黏連特性)。

在一些實施例中，不冷凍胎兒扶持組織。若不冷凍胎兒扶持組織，則緊接著如下文所述進行處理。

在一些實施例中，遵循人體組織良好操作規範(GTP)進行處理以確保無污染物引入至胎兒扶持組織粉末產物中。

使用FDA特許篩選測試針對HIV-1、HIV-2、HTLV-1、B型肝炎及C型肝炎、西尼羅河病毒(West Nile virus)、細胞巨大病毒、人類傳染性海綿狀腦病(例如，庫賈氏病(Creutzfeldt-Jakob disease))及梅毒螺旋體測試胎兒扶持組織。在一些實施例中，組織被HIV-1、HIV-2、HTLV-1、B型肝炎及C型肝炎、西尼羅河病毒或細胞巨大病毒污染之任何指示導致立即隔離且隨後破壞組織試樣。

在一些實施例中，針對B型肝炎、C型肝炎或HIV感染之風險因素及臨床跡象檢查供體醫療記錄。在一些實施例中，供體具有感染HIV-1、HIV-2、HTLV-1、B型肝炎及C型肝炎、西尼羅河病毒、細胞巨大病毒、人類傳染性海綿狀腦病(例如，庫賈氏病)及梅毒螺旋體之風險因素及/或臨床跡象的任何指示導致立即隔離且隨後破壞組織試樣。

在一些實施例中，自胎兒扶持組織移除實質上所有血液。在一些實施例中，在冷凍胎兒扶持組織之前自胎兒扶持組織移除實質上所有血液。

在一些實施例中，不自胎兒扶持組織移除血液。在一些實施例中，在冷凍胎兒扶持組織之前不自胎兒扶持組織移除血液。

在一些實施例中，使胎兒扶持組織與等張緩衝液接觸。在一些實施例中，使胎兒扶持組織與鹽水、PBS、PBS 1X、林格氏溶液(Ringer's solution)、哈特曼氏溶液(Hartmann's solution)、TRIS-緩衝鹽水、HEPES-緩衝鹽水、EBSS、HBSS、台氏鹽溶液(Tyrode's salt Solution)、格氏平衡鹽溶液(Gey's Balanced Salt Solution)、DMEM、EMEM、GMEM、RPMI或其任何組合接觸。

在一些實施例中，在攪拌下用緩衝液洗滌胎兒扶持組織以移除過量血液及組織。在一些實施例中，在攪拌下洗滌會減少洗滌時間。

在一些實施例中，胎兒扶持組織為胎盤羊膜(PAM)或實質上經分離之PAM、臍帶羊膜(UCAM)或實質上經分離之UCAM、絨毛膜或實質上經分離之絨毛膜、羊膜-絨毛膜或實質上經分離之羊膜-絨毛膜、胎盤或實質上經分離之胎盤、臍帶或實質上經分離之臍帶，或其任何組合。

在一些實施例中，胎兒扶持組織為臍帶或臍帶羊膜。在一些實施例中，不自臍帶或臍帶羊膜移除花頓氏膠(Wharton's Jelly)。在一些實施例中，自臍帶或臍帶羊膜移除部分或所有花頓氏膠。

臍帶包含兩個動脈(臍動脈)及一個靜脈(臍靜脈)。在某些情況下，靜脈及動脈在花頓氏膠內環繞(或懸浮或內埋)。在一些實施例中，不自臍帶移除靜脈及動脈。在一些實施例中，自臍帶移除靜脈及動脈。在一些實施例中，移除靜脈及動脈同時移除花頓氏膠。 研磨 / 低溫粉碎

在一些實施例中，藉由任何適合方法研磨胎兒扶持組織。在一些實施例中，研磨胎兒扶持組織包含使胎兒扶持組織低溫粉碎。在一些實施例中，低溫粉碎胎兒扶持組織包含使胎兒扶持組織粉碎、均質化或以其他方式分裂，同時胎兒扶持組織呈冷凍(例如暴露於低於0℃、-20℃、-40℃、-50℃、-60℃、-70℃、-75℃、-80℃、-90℃、-100℃之溫度)或冷卻狀態。在一些實施例中，低溫粉碎胎兒扶持組織包含在低溫控制環境中粉碎或均質化胎兒扶持組織。在一些實施例中，低溫粉碎胎兒扶持組織包含在胎兒扶持組織已浸沒於液氮中或暴露於液氮(例如直接地或間接地)之後粉碎或均質化胎兒扶持組織。在一些實施例中，低溫粉碎胎兒扶持組織包含粉碎或均質化胎兒扶持組織，同時使胎兒扶持組織浸沒於液氮中或暴露於液氮(例如直接地或間接地)。在一些實施例中，低溫粉碎胎兒扶持組織包含將胎兒扶持組織置放於研磨容器中，且將研磨容器浸沒於液氮中，然後研磨。在一些實施例中，研磨容器浸沒於液氮中持續至少1分鐘之研磨製程。在一些實施例中，低溫粉碎胎兒扶持組織包含使冷凍胎兒扶持組織暴露於錘或旋轉刀片。在一些實施例中，低溫粉碎胎兒扶持組織包含將冷凍胎兒扶持組織暴露於撞擊器。在一些實施例中，撞擊器由電磁體驅動。在一些實施例中，藉由使用FreezerMill使胎兒扶持組織低溫粉碎。在一些實施例中，藉由使用研缽及研杵使胎兒扶持組織低溫粉碎。在一些實施例中，藉由使用摻合器使胎兒扶持組織低溫粉碎。在一些實施例中，藉由使用BioPulverizer使胎兒扶持組織低溫粉碎。在一些實施例中，與研磨尚未冷凍之胎兒扶持組織相比，在液氮中低溫粉碎胎兒扶持組織避免在胎兒扶持組織蛋白酶及/或玻尿酸酶中活化，其可能使胎兒扶持組織產物中之蛋白質及玻尿酸降解。在一些實施例中，低溫粉碎將胎兒扶持組織減少為粉末。在一些實施例中，包含粉末之粒子具有均勻的尺寸分佈。在一些實施例中，包括粉末之粒子不具有均勻的尺寸分佈。在一些實施例中，胎兒扶持組織減小至小於約1000 μm、500 μm、400 μm、300 μm、200 μm、100 μm、50 μm、40 μm、30 μm、20 μm、10 μm、5 μm、1 μm、0.5 μm、0.4 μm、0.3 μm、0.2 μm或0.1 μm之粒度。在一些實施例中，胎兒扶持組織減小至小於500 μm之粒度。在一些實施例中，胎兒扶持組織減小至小於約0.5 μm之粒度。在一些實施例中，胎兒扶持組織減小至小於0.3 μm之粒度。 提取及離心

在一些實施例中，對胎兒扶持組織進行提取。在一些實施例中，提取包含將所關注蛋白質與胎兒扶持組織之其他組分分離。在一些實施例中，對經低溫粉碎之胎兒扶持組織進行提取。在一些實施例中，提取包含將所關注蛋白質與經低溫粉碎之胎兒扶持組織之其他組分分離。在一些實施例中，此類所關注蛋白質包含蛋白質、聚糖、蛋白質-聚糖複合物(例如，玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈的複合物)及促進組織修復之酶。在一些實施例中，此類所關注蛋白質包含玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈之複合物(「HC-HA/PTX」)、玻尿酸、高分子量玻尿酸或其組合。在一些實施例中，此類所關注蛋白質包含玻尿酸。

在一些實施例中，藉由在賦形劑中提取來製備提取物。在一些實施例中，賦形劑為鹽水、水、結構化水、注射用水(WFI)或其組合。在一些實施例中，賦形劑為WFI。在一些實施例中，與鹽水或結構化水相比，使用WFI作為賦形劑產生較高之HA及總蛋白質回收率。在一些實施例中，在鹽水或WFI中提取可提取大部分所關注蛋白質(例如HC-HA/PTX3)。

在一些實施例中，提取進行約0至1小時、約1至2小時、約2至3小時、約3至4小時、約4至5小時、約5至6小時、約6至12小時、約12小時至24小時、約24小時至48小時或約48小時至72小時。在一些實施例中，提取進行約1小時。在一些實施例中，提取在WFI中進行約0小時至1小時、約1小時至2小時、約2小時至3小時、約3小時至4小時、約4小時至5小時、約5小時至6小時、約6小時至12小時、約12小時至24小時、約24小時至48小時或約48小時至72小時。在一些實施例中，提取在WFI中進行約1小時。在一些實施例中，提取在鹽水中進行約0至1小時、約1至2小時、約2至3小時、約3至4小時、約4至5小時、約5至6小時、約6至12小時、約12小時至24小時、約24小時至48小時或約48小時至72小時。在一些實施例中，提取在鹽水中進行約1小時。

在一些實施例中，提取係在約4℃之溫度下進行。在一些實施例中，提取係在約3℃、4℃、5℃或6℃之溫度下進行。在一些實施例中，在WFI中在約3℃、4℃、5℃或6℃之溫度下進行提取。在一些實施例中，在WFI中在約4℃之溫度下進行提取。在一些實施例中，在約4℃之溫度下提取在WFI中進行約1小時。在一些實施例中，在約4℃的溫度下提取在WFI中進行約0小時至1小時、約1小時至2小時、約2小時至3小時、約3小時至4小時、約4小時至5小時、約5小時至6小時、約6小時至12小時、約12小時至24小時、約24小時至48小時或約48小時至72小時。在一些實施例中，在鹽水中在約3℃、4℃、5℃或6℃之溫度下進行提取。在一些實施例中，提取係在約4℃之溫度下在鹽水中進行。在一些實施例中，提取在約4℃之溫度下在鹽水中進行約0小時至1小時、約1小時至2小時、約2小時至3小時、約3小時至4小時、約4小時至5小時、約5小時至6小時、約6小時至12小時、約12小時至24小時、約24小時至48小時或約48小時至72小時。在一些實施例中，提取在約4℃之溫度下在鹽水中進行約1小時。

在一些實施例中，胎兒扶持組織與提取賦形劑之比率為約1: 6、1: 5、1: 4、1: 3、1: 2、1: 1、1: 0.75、1: 0.5或1: 0.25(重量:體積)。在一些實施例中，胎兒扶持組織與提取賦形劑之比率為約6: 1、5: 1、4: 1、3: 1、2: 1、1: 1、0.75: 1、0.5: 1或0.25: 1(重量:體積)。在一些實施例中，胎兒扶持組織與提取賦形劑之比率為約1: 4。在一些實施例中，在WFI或鹽水中進行提取。在一些實施例中，在WFI中進行提取。在一些實施例中，提取進行約0至1小時、約1至2小時、約2至3小時、約3至4小時、約4至5小時、約5至6小時、約6至12小時、約12小時至24小時、約24小時至48小時或約48小時至72小時。在一些實施例中，提取進行約1小時。在一些實施例中，提取在約3℃、4℃、5℃或6℃之溫度下進行。在一些實施例中，萃取係在約4℃之溫度下進行。在一些實施例中，以約1: 4之胎兒扶持組織與賦形劑之比率在約4℃之溫度下在WFI中進行萃取約1小時。在一些實施例中，以約1: 4之胎兒扶持組織與賦形劑之比率在約4℃之溫度下在鹽水中進行萃取約1小時。

在一些實施例中，使用管旋轉器進行萃取。在一些實施例中，管旋轉器以約5至10 rpm、10至20 rpm、20至30 rpm、30至40 rpm或40至50 rpm之速度範圍旋轉。在一些實施例中，管旋轉器以約20 rpm之速度旋轉。在一些實施例中，管旋轉器旋轉約0至1小時、約1至2小時、約2至3小時、約3至4小時、約4至5小時、約5至6小時、約6至12小時、約12小時至24小時、約24小時至48小時或約48小時至72小時。在一些實施例中，管旋轉器旋轉約1小時。在一些實施例中，管旋轉器在約3℃、4℃、5℃或6℃之溫度下旋轉。在一些實施例中，管旋轉器在約4℃之溫度下旋轉。在一些實施例中，所用賦形劑為鹽水或WFI。在一些實施例中，所用賦形劑為WFI。在一些實施例中，胎兒扶持組織與提取賦形劑之比率為約1: 6、1: 5、1: 4、1: 3、1: 2、1: 1、1: 0.75、1: 0.5或1: 0.25(重量:體積)。在一些實施例中，胎兒扶持組織與提取賦形劑之比率為約1: 4。在一些實施例中，胎兒扶持組織與提取賦形劑之比率為約6: 1、5: 1、4: 1、3: 1、2: 1、1: 1、0.75: 1、0.5: 1或0.25: 1(重量:體積)。在一些實施例中，在約4℃之溫度下，以約20 rpm之速度使用管旋轉器在WFI中進行萃取約1小時。在一些實施例中，在約4℃之溫度下，以約20 rpm之速度使用管旋轉器在鹽水中進行萃取約1小時。

在一些實施例中，對藉由萃取步驟產生之提取物進行離心。在一些實施例中，萃取物經離心約5至10分鐘、約10至15分鐘、約15至20分鐘、約20至30分鐘、約30分鐘至1小時或約1至2小時。在一些實施例中，萃取物經離心約30分鐘。在一些實施例中，提取物以約3,200 rcf至10,000 rcf、約10,000至14,000 rcf、約14,000至32,000 rcf或約32,000至約48,000 rcf之速度離心。在一些實施例中，提取物以約14,000 rcf或更高之速度離心。在一些實施例中，提取物以約14,000 rcf之速度離心。在一些實施例中，提取物以約14,000 rcf之速度離心約30分鐘。在一些實施例中，離心不影響或最低限度地影響萃取物中所關注蛋白質之含量。

在一些實施例中，提取產生包含所關注蛋白質(例如玻尿酸或玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈之複合物)之提取物。在一些實施例中，大部分HC-HA/PTX3存在於提取物中。在一些實施例中，大部分HA存在於提取物中。在一些實施例中，與使用不同賦形劑(例如結構化水)之萃取相比，在鹽水或WFI中萃取對HC-HA/PTX3複合物產生較少損傷。在一些實施例中，與使用不同賦形劑(例如結構化水)之提取相比，在鹽水或WFI中提取產生更高之HA或HC-HA/PTX3複合物產率。在一些實施例中，提取物含有大於約900 μg/g HA以提取(濕潤)。在一些實施例中，提取物含有大於約1000 μg/g HA以提取(濕潤)。在一些實施例中，提取物含有大於約1100 μg/g HA以提取(濕潤)。在一些實施例中，提取物含有大於約1200 μg/g HA以提取(濕潤)。 稀釋

在某些實施例中，本文描述用於處理胎兒扶持組織產物之方法，其中該等方法包含稀釋步驟。在一些實施例中，稀釋步驟係在胎兒扶持組織已經歷萃取及離心步驟之後對其進行。在一些實施例中，稀釋步驟係在胎兒扶持組織已經歷萃取及離心步驟之後且藉由滅菌來過濾之前對其進行。在一些實施例中，稀釋萃取物(例如降低萃取物中所關注蛋白質之濃度)係藉由將萃取物與賦形劑混合來達成。在一些實施例中，賦形劑為鹽水、水、結構化水、注射用水(WFI)或其組合。在一些實施例中，賦形劑為WFI。在一些實施例中，提取物以約1至1.5、約1.5至2、約2至2.5、約2.5至3、約3至3.5約3.5至4、約4至5、約5至6、約6至7、約7至8、約8至9或約9至10之稀釋因子與賦形劑混合。在一些實施例中，稀釋因子大於5。在一些實施例中，稀釋因子大於10。在一些實施例中，稀釋因子為約2。在一些實施例中，賦形劑為WFI且稀釋因子為2。在一些實施例中，賦形劑為鹽水且稀釋因子為2。在一些實施例中，本文所描述之方法進一步包含將提取物與賦形劑混合約10至30分鐘、約30分鐘至1小時或約1小時至2小時。在一些實施例中，將提取物及賦形劑混合約30分鐘。在一些實施例中，萃取物及賦形劑以約5至10 rpm、10至20 rpm、20至30 rpm、30至40 rpm或40至50 rpm之速度混合。在一些實施例中，提取物及賦形劑以約20 rpm之速度混合。在一些實施例中，萃取物及賦形劑以約20 rpm之速度混合約1小時。在一些實施例中，萃取物及賦形劑在約4℃之溫度下混合。在一些實施例中，萃取物及賦形劑在約4℃下以約20 rpm之速度混合約1小時。在一些實施例中，萃取物在過濾步驟之前稀釋。在一些實施例中，萃取物在過濾步驟之後稀釋。

在一些實施例中，與包含相同胎兒扶持組織及賦形劑之非經稀釋提取物相比，稀釋使一或多種所關注蛋白質之過濾速度或過濾後之回收率，一或多種所關注蛋白質之回收率或提取物之效價(例如藉由ODI-TRAP分析、M2分析、NO分析及/或WST-1分析所量測)或其組合增加。在一些實施例中，經稀釋之胎兒扶持組織包含約1 µg/ml至約150 µg/ml之玻尿酸(HA)。在一些實施例中，經稀釋之胎兒扶持組織包含約1 µg/ml至約90 µg/ml之玻尿酸(HA)。在一些實施例中，經稀釋之胎兒扶持組織包含約90 µg/ml至約150 µg/ml之玻尿酸(HA)。 多個供體之合併

在某些實施例中，本文提供產生合併之胎兒扶持組織產物之方法。在一些情況下，產生合併之胎兒扶持組織產物之方法包含產生本文所述之胎兒扶持組織產物之任何方法及合併步驟。在一些情況下，合併步驟包含合併源於多名個體之胎兒扶持組織。在一些情況下，合併步驟包含合併源於多名個體之胎兒扶持組織產物，以產生合併之組合物(例如合併之原料藥)。在一些情況下，藉由本文所描述之方法產生胎兒扶持組織產物，其可包含(a)低溫粉碎胎兒扶持組織以產生經低溫粉碎之胎兒扶持組織；(b)在賦形劑中萃取經低溫粉碎之胎兒扶持組織以產生提取物；及(c)藉由過濾該提取物來滅菌以產生胎兒扶持組織。在一些情況下，合併步驟包含合併源於多個供體批料之胎兒扶持組織產物，以產生合併之組合物(例如合併之原料藥)。在一些情況下，供體批次為來自單一個體之胎盤。在一些情況下，合併步驟包含合併來自(例如，源於)至少15名個體之胎兒扶持組織(例如，胎兒扶持組織產物)以產生合併之組合物。在一些情況下，合併步驟包含合併來自至少30名個體之胎兒扶持組織(例如胎兒扶持組織產物)以產生合併之組合物。在一些情況下，合併步驟包含合併來自至少45名個體之胎兒扶持組織(例如胎兒扶持組織產物)以產生合併之組合物。在一些情況下，合併步驟包含合併來自至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或超過100名個體之胎兒扶持組織(例如胎兒扶持組織產物)以產生合併之組合物。在一些情況下，合併步驟包含合併來自至多5名個體之胎兒扶持組織(例如胎兒扶持組織產物)。在一些情況下，合併步驟包含合併來自至多9、8、7、6、5、4、3或2名個體之胎兒扶持組織(例如胎兒扶持組織產物)。在一些情況下，合併步驟包含合併多個批次之胎兒扶持組織產物以產生合併之組合物。在一些情況下，合併步驟包含合併2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或15個批次。在一些情況下，合併不超過三個批次以產生合併之組合物。在一些情況下，批次為自源於多名個體之胎兒扶持組織產物合併之胎兒扶持組織組合物。在一些情況下，批次包含源於15名個體之胎兒扶持組織產物。在一些情況下，自至少10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100或超過100名個體合併批次。在一些情況下，自至多9、8、7、6、5、4、3或2名個體合併批次。在一些情況下，合併包含合併三個批次，且各批次包含來自15名個體之胎兒扶持組織。

在一些情況下，合併步驟包含搖動或混合來自多個供體之胎兒扶持組織(例如胎兒扶持組織產物)。在一些情況下，混合在容器中進行。在一些情況下，使用搖動器混合容器。在一些情況下，容器以約1至40 RPM、40至400 RPM或400至800 RPM之速度範圍旋轉。在一些情況下，搖動器以約0至40RPM、約40至80 RPM、約80至120 RPM、約120至160 RPM、約160至200 RPM、約200至240 RPM、約240至280 RPM、約280至320 RPM、約320至360 RPM、約360至400 RPM、約400至440 RPM、約440至480 RPM、約480至520 RPM、約520至560 RPM、約560至600 RPM、約600至640 RPM、約640至680 RPM、約680至720 RPM、約720至760 RPM或約760至800 RPM之速度範圍旋轉。在一些情況下，容器以約40至400 RPM之速度範圍旋轉。在一些情況下，混合進行約0至5分鐘、5至10分鐘、10至15分鐘、15至20分鐘、20至25分鐘、25至30分鐘、30至35分鐘、35至40分鐘、40至45分鐘、45至50分鐘、50至55分鐘或55至60分鐘。在一些情況下，混合進行約1分鐘、2分鐘、3分鐘、4分鐘、5分鐘、6分鐘、7分鐘、8分鐘、9分鐘、10分鐘、11分鐘、12分鐘、13分鐘、14分鐘、15分鐘、16分鐘、17分鐘、18分鐘、19分鐘或20分鐘。在一些實施例中，混合進行約15分鐘。在一些情況下，混合在約0℃、1℃、2℃、3℃、4℃、5℃、6℃、7℃、8℃、9℃、10℃、11℃、12℃、13℃、14℃或15℃之溫度下進行。在一些情況下，混合在約4℃之溫度下進行。在一些情況下，混合在0℃至5℃或5℃至10℃之間的溫度下進行。在一些情況下，混合在冰箱中。在一些情況下，多個供體、批次、批料或其組合係藉由用搖動器在容器中混合而合併在一起，該搖動器在約4℃之溫度下以約40至400 RPM之速度範圍旋轉約15分鐘。

在一些情況下，合併步驟包含篩分步驟。在一些情況下，篩分步驟控制合併之組合物(例如散裝原料藥)之最大粒度。在一些情況下，篩平均孔徑為約0.1 - 0.2 µm或更小、0.2 - 0.3 µm或更小、0.3 - 0.4 µm或更小、0.4 - 0.5 µm或更小、0.5 - 0.6 µm或更小、0.6 - 0.7 µm或更小、0.7 - 0.8 µm或更小、0.8 - 0.9 µm或更小、0.9 - 1 µm或更小、1 - 2 µm或更小、2 - 3 µm或更小、3 -4 µm或更小、4 - 5 µm或更小、5 - 10 µm或更小、10 - 20 µm或更小、20 - 30 µm或更小、30 - 40 µm或更小、40 - 50 µm或更小、50 - 100 µm或更小、100 - 150 µm或更小、150 - 200 µm或更小、200 - 250 µm或更小或250 - 300 µm或更小。在一些情況下，合併步驟包含病毒測試批次、批料或胎兒扶持組織產物以合併批次、批料或胎兒扶持組織產物。在一些情況下，與藉由相同方法但不經歷合併步驟產生之組合物相比，合併步驟產生具有高產量之HC-HA/PTX3、HA及其他所關注蛋白質、改良之穩定性、減少之變化性、改良之效價或其組合的組合物。 滅菌

在一些實施例中，藉由任何適合方法使胎兒扶持組織經歷滅菌。在一些實施例中，藉由照射、藉由暴露於化學滅菌劑、藉由熱、藉由過濾、藉由暴露於環氧乙烷氣體或藉由使胎兒扶持組織產物不受活微生物污染之任何方法來對胎兒扶持組織產物進行滅菌。

在一些實施例中，藉由過濾對胎兒扶持組織進行滅菌。在一些實施例中，藉由過濾對胎兒扶持組織進行滅菌包含使胎兒扶持組織穿過過濾器。在一些實施例中，選擇過濾器孔徑以防止細菌、酵母、黴菌或病毒穿過過濾器。在一些實施例中，過濾器包含平均尺寸為約0.1 - 0.2 µm或更小、0.2 - 0.3 µm或更小、0.3 - 0.4 µm或更小、0.4 - 0.5 µm或更小、0.5 - 0.6 µm或更小、0.6 - 0.7 µm或更小、0.7 - 0.8 µm或更小、0.8 - 0.9 µm或更小、0.9 - 1 µm或更小、1 - 2 µm或更小、2 - 3 µm或更小、3 -4 µm或更小、4 - 5 µm或更小、5 - 10 µm或更小、10 - 20 µm或更小、20 - 30 µm或更小、30 - 40 µm或更小、40 - 50 µm或更小、50 - 100 µm或更小、100 - 150 µm或更小、150 - 200 µm或更小、200 - 250 µm或更小或250 - 300 µm或更小的孔。在一些實施例中，過濾器具有約.05至0.2 µm之平均孔徑。在一些實施例中，過濾器包含平均尺寸為約0.4 µm或更小的孔。在一些實施例中，過濾器包含平均尺寸為約0.3 µm或更小的孔。在一些實施例中，過濾器包含平均尺寸為約0.2 µm或更小的孔。在一些實施例中，過濾器包含平均尺寸為約0.2 µm的孔。在一些實施例中，藉由過濾滅菌包含使胎兒扶持組織穿過第一過濾器及第二過濾器。在一些實施例中，第一過濾器之平均孔徑大於第二過濾器之平均孔徑。在一些實施例中，第一或第二過濾器之平均孔徑為約0.1 - 0.2 µm或更小、0.2 - 0.3 µm或更小、0.3 - 0.4 µm或更小、0.4 - 0.5 µm或更小、0.5 - 0.6 µm或更小、0.6 - 0.7 µm或更小、0.7 - 0.8 µm或更小、0.8 - 0.9 µm或更小、0.9 - 1 µm或更小、1 - 2 µm或更小、2 - 3 µm或更小、3-4 µm或更小、4 - 5 µm或更小、5 - 10 µm或更小。在一些實施例中，第一及第二過濾器各自具有約0.05-0.2 µm之平均孔徑。在一些實施例中，第一過濾器之平均孔徑為約0.6 µm或更小且第二過濾器之平均孔徑為約0.4 µm或更小。在一些實施例中，第一過濾器之平均孔徑為約0.5 µm或更小且第二過濾器之平均孔徑為約0.3 µm或更小。在一些實施例中，第一過濾器之平均孔徑為約0.45 µm或更小且第二過濾器之平均孔徑為約0.2 µm或更小。在一些實施例中，第一過濾器之平均孔徑為約0.45 µm且第二過濾器之平均孔徑為約0.2 µm。

在一些實施例中，本文所述之任一過濾器容納於滅菌單元中。在一些實施例中，本文中所描述之任一過濾器為包含聚醚碸(PES)、聚偏二氟乙烯(PVDF)、聚四氟乙烯(PTFE)、聚丙烯、聚乙烯、聚醯胺、纖維素、硝酸纖維素、耐綸或其組合的薄膜。在一些實施例中，本文所述之任一過濾器已藉由γ照射滅菌。在一些實施例中，過濾期間之過濾壓力為約0-10 psi、約10-20 psi、約20-30 psi、約30-40 psi、約40-50 psi、約50-60 psi、約60-70 psi、約70-80 psi、約80-90 psi或約90-100 psi。在一些實施例中，本文所述之任一過濾器之有效過濾面積為約0-20 cm ²、約20-40 cm ²、約40-60 cm ²、約60-80 cm ²、約80-100 cm ²、約100-120 cm ²、約120-140 cm ²、約140-160 cm ²、約160-180 cm ²，或約180-200 cm ²。在一些實施例中，過濾器之總直徑為約0-10 mm、約20-20 mm、約20-30 mm、約30-40 mm、約40-50 mm、約50-60 mm、約60-70 mm、約70-80 mm、約80-90 mm、約90-100 mm、約100-200 mm、約200-300 mm、約300-400 mm、約400-500 mm、約500-600 mm、約600-700 mm、約700-800 mm、約800-900 mm或約900-1000 mm。在一些實施例中，過濾器之總直徑為約67 mm。在一些實施例中，過濾器之總直徑為約68 mm。在一些實施例中，過濾器之總高度為約0-10 mm、約20-20 mm、約20-30 mm、約30-40 mm、約40-50 mm、約50-60 mm、約60-70 mm、約70-80 mm、約80-90 mm、約90-100 mm、約100-200 mm、約200-300 mm、約300-400 mm、約400-500 mm、約500-600 mm、約600-700 mm、約700-800 mm、約800-900 mm，或約900-1000 mm。在一些實施例中，過濾器之總高度為約82 mm。在一些實施例中，過濾器之總高度為約83 mm。在一些實施例中，過濾器已成功地通過製造順流測試。在一些實施例中，過濾器之順流速率極限為約0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0或超過1.0 mL/min。在一些實施例中，當用水完全潤濕時，過濾器之順流速率極限在約2400、2450、2500、2550、2600、2650、2700、2750、2800、2850、2900或大於2900毫巴之測試壓力下為約0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9、1.0或大於1.0 mL/min。在一些實施例中，當用水完全潤濕時，在約2760毫巴之測試壓力下，過濾器之順流極限為約0.58 mL/min。在一些實施例中，當用水完全潤濕時，過濾器之順流極限在約2700-2800毫巴之測試壓力下為約0.40-0.50 mL/min、0.50-0.60 mL/min或0.60-0.70 mL/min。在一些實施例中，藉由順流極限與微生物攻擊測試之相關性驗證細菌移除之順流測試極限。在一些實施例中，使用符合適用食品及藥物管理局指導原則之程序測試胎兒扶持組織產物之可接受攻擊微生物的保留以驗證過濾器之細菌保留。

在一些實施例中，藉由任何適合(例如，醫學上可接受)方法使胎兒扶持組織粉末產物經歷終端滅菌。在一些實施例中，使本文揭示之胎兒扶持組織粉末產物暴露於γ輻射，持續足以使本文揭示之胎兒扶持組織粉末產物滅菌之時段。

在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織粉末產物曝露於約10至約75千戈雷(kGy)下之γ輻射，持續足以使胎兒扶持組織粉末產物滅菌之時段。在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織粉末產物暴露於約10至約30 kGy下之γ輻射，持續足以使胎兒扶持組織產物滅菌之時段。在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織粉末產物暴露於約15至約30 kGy下之γ輻射，持續足以使胎兒扶持組織產物滅菌之時段。在一些實施例中，使在本文中揭示之胎兒扶持組織粉末產物暴露於約25 kGy下之γ輻射，持續足以使胎兒扶持組織產物滅菌之時段。在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織粉末產物暴露於約17.5 kGy下之γ輻射，持續足以使胎兒扶持組織粉末產物滅菌之時段。

在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織粉末產物經歷電子束(E-束)滅菌。在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織產物暴露於約10至約75千戈雷下之電子束輻射，持續足以使胎兒扶持組織產物滅菌之時段。在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織產物暴露於約10至約30 kGy下之電子束輻射，持續足以使胎兒扶持組織產物滅菌之時段。在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織產物暴露於約15至約30 kGy下之電子束輻射，持續足以使胎兒扶持組織產物滅菌之時段。在一些實施例中，使在本文中揭示之胎兒扶持組織產物暴露於約25 kGy下之電子束輻射，持續足以使胎兒扶持組織產物滅菌之時段。在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織產物暴露於約17.5 kGy下之電子束輻射，持續足以使胎兒扶持組織產物滅菌之時段。

在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織粉末產物暴露於電子束，持續足以使胎兒扶持組織粉末產物滅菌之時段。在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織粉末產物暴露於X射線輻射，持續足以使胎兒扶持組織粉末產物滅菌之時段。在一些實施例中，使本文所揭示之胎兒扶持組織粉末產物暴露於UV輻射，持續足以使胎兒扶持組織粉末產物滅菌之時段。

在某些實施例中，本文提供用於製備胎兒扶持組織產物之方法，其中該等方法導致經回收之HA百分比提高。在一些實施例中，回收至少或約75%、80%、85%、90%、95%、99%或超過99% HA。在一些實施例中，HA為HMW HA。在一些實施例中，方法導致HC-HA/PTX3之百分比提高。在一些實施例中，回收至少或約75%、80%、85%、90%、95%、99%或超過99%之HC-HA/PTX3。

在某些實施例中，如本文所描述之方法導致微粒或降解物之移除。在一些實施例中，本文所描述之方法導致移除至少或約75%、80%、85%、90%、95%、99%或超過99%之微粒或降解物。在一些實施例中，微粒或降解物包含氯化物。 填充及密封

在某些實施例中，本文描述用於處理胎兒扶持組織產物之方法，其中該等方法包含填充步驟、密封步驟或其組合。在一些情況下，填充步驟包含將胎兒扶持組織填充至容器(例如小瓶、可密封袋、可密封包、可密封小袋等)中。在一些情況下，填充步驟包含將胎兒扶持組織產物或合併之散裝原料藥填充至容器(例如小瓶、可密封袋、可密封包、可密封小袋等)中。在一些情況下，將胎兒扶持組織產物或合併之散裝原料藥填充至容器中直至達到容器之目標填充重量為止。在一些情況下，胎兒扶持組織產物或合併之散裝原料藥在填充之前為無菌的。在一些情況下，無菌進行填充及密封(例如在調節空氣供應、材料、設備、人員或其組合以維持無菌性之受控環境中)。在一些情況下，容器在無菌環境中在無人工干預之情況下形成、填充及密封。在一些情況下，容器在無任何外部人工干預之情況下且在無菌環境中以單一程序立即模製，用胎兒扶持組織產物或合併之散裝原料藥填充且密封。在一些情況下，使用吹灌封(BFS)設備將無菌產物填充及密封在容器中。在一些情況下，容器可滅菌(例如可藉由高壓處理來滅菌)。在一些情況下，本文中之方法進一步包含高壓處理容器。在一些情況下，密封包含使用熱封機來密封。在一些情況下，容器經填充以容納約0.01 ml至0.50 ml、0.51 ml至3.0 ml、3.1 ml至6.0 ml、6.1 ml至15 ml、15 ml至20 ml、20 ml至25 ml或25 ml至30 ml胎兒扶持組織產物或合併之散裝原料藥。在一些情況下，填充容器以容納約1 ml、約1.5 ml、約2 ml、約2.5 ml、約3 ml、約3.5 ml、約4 ml、約4.5 ml、約5 ml、約5.5 ml、約6 ml、約6.5 ml、約7 ml、約7.5 ml、約8 ml、約8.5 ml、約9 ml、約9.5 ml、約10 ml、約10.5 ml、約11 ml、約11.5 ml、約12 ml、約12.5 ml、約13 ml、約13.5 ml、約14 ml、約14.5 ml、約15 ml、約15.5 ml、約16 ml、約16.5 ml、約17 ml、約17.5 ml、約18 ml、約18.5 ml、約19 ml、約19.5 ml或約20 ml胎兒扶持組織產物或合併之散裝原料藥。 胎兒扶持組織產物調配物

在某些實施例中，本文揭示藉由包含以下之方法製備的胎兒扶持組織產物：(a)低溫粉碎胎兒扶持組織以產生經低溫粉碎之胎兒扶持組織；(b)在賦形劑中提取經低溫粉碎之胎兒扶持組織以產生提取物；及(c)藉由使用孔徑為約0.6 µm之薄膜，之後使用孔徑為約0.4 µm或更小之薄膜過濾提取物來滅菌。在一些實施例中，胎兒扶持組織為胎盤羊膜(PAM)或實質上經分離之PAM、臍帶羊膜(UCAM)或實質上經分離之UCAM、絨毛膜或實質上經分離之絨毛膜、羊膜-絨毛膜或實質上經分離之羊膜-絨毛膜、胎盤或實質上經分離之胎盤、臍帶或實質上經分離之臍帶，或其任何組合。

在某些實施例中，藉由本文所描述之方法產生之胎兒扶持組織產物包含改良之穩定性。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物包含高百分比之HA。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物包含至少或約75%、80%、85%、90%、95%、99%或超過99%之HA。在一些實施例中，HA為HMW HA。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物包含較高百分比之HC-HA/PTX3。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物包含至少或約75%、80%、85%、90%、95%、99%或超過99%之HC-HA/PTX3。

在某些實施例中，藉由本文所描述之方法產生之胎兒扶持組織產物實質上不包含微粒或降解物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物包含至多約1%、2%、3%、4%、5%、6%、7%、8%、9%、10%、15%或超過15%微粒或降解物。在一些實施例中，微粒或降解物包含氯化物。

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物調配成溶液、懸浮液或乳液。在一些實施例中，調配本文所揭示之胎兒扶持組織產物以用於局部投與。

以任何適合方式調配本文所揭示之醫藥調配物。預期任何適合之技術、載劑及/或賦形劑與本文所揭示之胎兒扶持組織產物一起使用。 乳膏及乳劑

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物，其中該局部調配物呈乳膏形式。在某些情況下，乳膏為半固體(例如軟固體或濃稠液體)調配物，其包括分散於油水包油乳液或油包水乳液中之本文所揭示之胎兒扶持組織產物。

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物，其中該局部調配物呈乳劑形式。在某些情況下，乳劑為流體乳液(例如水包油乳液或油包水乳液)。在一些實施例中，乳劑及/或乳膏之疏水性組分源於動物(例如羊毛蠟、魚肝油及龍涎香)、植物(例如紅花油、蓖麻油、椰子油、棉籽油、鯡魚油、棕櫚仁油、棕櫚油、花生油、大豆油、菜籽油、亞麻籽油、米糠油、松油、芝麻油或葵花籽油)或石油(例如礦物油或石油膏)。 軟膏

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物，其中該局部調配物呈軟膏形式。在某些情況下，軟膏係在體溫下軟化或熔化之半固體製劑。 糊劑

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物，其中該局部調配物呈糊劑形式。在某些情況下，糊劑含有至少20%固體。在某些情況下，糊劑係在體溫下不流動之軟膏。 凝膠及膜

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物，其中該局部調配物呈凝膠形式。在某些情況下，凝膠為由較大有機分子分散於液體中之分散液組成之半固體(或半剛性)系統。在某些情況下，凝膠為水溶性的且使用溫水或鹽水移除。

在某些情況下，在治療皮膚病灶時，敷料接觸病灶往往會干擾受損組織。移除傷口之許多敷料，諸如涉及大面積皮膚之燒傷表面病灶，會導致明顯疼痛且通常可再次打開部分癒合傷口之至少部分。在一些情況下，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物作為液體施用於受影響區域且液體凝膠作為膜施用於受影響區域上。在一些情況下，膜為水溶性膜且可用水或溫和的水性清潔劑移除，避免與移除傷口敷料相關的疼痛及不適。在某些情況下，本文所描述之局部調配物為皮膚膜，其包含由聚烷基㗁唑啉製成之可撓性膜。在一些情況下，膜具有由聚烷基㗁唑啉製成之結構層及使所述膜保持就位之壓敏黏著層。 棒

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物，其中該局部調配物呈棒形式。在某些情況下，棒為在體溫下熔化之固體劑型。在一些實施例中，棒包含蠟、聚合物、樹脂、融合成堅硬塊狀物之乾燥固體及/或融合晶體。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物呈止血筆(亦即，藉由(1)加熱晶體直至其失去其結晶水且變得熔化，及(2)將熔融晶體傾倒至模具中且使其硬化而製備之棒)形式。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物呈棒形式，其中該棒包含蠟(例如，使該蠟熔化且倒入適當模具中，在該等模具中其固化成棒形式)。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物呈棒形式，其中該棒包含熔化基質(亦即在體溫下軟化之基質)。熔化基質之實例包括但不限於蠟、油、聚合物及凝膠。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物呈棒形式，其中該棒包含濕潤基質(亦即藉由添加水分而活化的基質)。 貼片

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物，其中該局部調配物經由貼片投與。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物溶解及/或分散於聚合物或黏著劑中。在一些實施例中，構築本文所揭示之膜、貼片以用於連續、脈衝式或按需遞送胎兒扶持組織產物。 傷口敷料

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之局部調配物，其中該局部調配物用(或經由)傷口敷料投與。傷口敷料包括但不限於紗布、透明膜敷料、水凝膠、聚胺酯泡沫敷料、親水膠體及海藻酸鹽。在某些情況下，傷口敷料促進傷口癒合。在一些情況下，傷口敷料減少或抑制異常傷口癒合。 植入物 / 假體

在某些實施例中，本文揭示一種包含本文所揭示之胎兒扶持組織產物之植入物或假體。在一些實施例中，假體為人工關節。在一些實施例中，植入物為支架。

在一些實施例中，假體為人工髖關節。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至人工髖關節外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自人工髖溶離至周圍組織中。

在一些實施例中，假體為人工膝。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至人工膝外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自人工膝溶離至周圍組織中。

在一些實施例中，假體為人工盂肱關節。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至人工盂肱關節外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自人工盂肱關節溶離至周圍組織中。

在一些實施例中，假體為人工踝。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至人工踝外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自人工踝溶離至周圍組織中。

在一些實施例中，植入物為冠狀動脈支架。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至支架外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自支架溶離至周圍心臟組織中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，植入物為尿道支架。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至支架外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自支架溶離至周圍組織中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，植入物為尿道或前列腺支架。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至支架外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自支架溶離至周圍組織中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，植入物為食道支架。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至支架外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自支架溶離至周圍組織中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，植入物為骨植入物。在一些實施例中，骨植入物為骨整合植入物。如本文所用，「骨整合植入物」意謂含有孔之三維植入物，成骨細胞及支撐結締組織可遷移至孔中。在一些實施例中，骨植入物包含本文所描述之組合物。在一些實施例中，骨植入物為牙植入物。在一些實施例中，骨植入物用於膝部或關節置換。在一些實施例中，骨植入物為顱面假體(例如，人工耳、眼眶假體、鼻假體)。

在一些實施例中，植入物為骨支架。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至支架外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自支架溶離至周圍骨骼中。在一些實施例中，將骨支架插入至骨之髓腔中。在一些實施例中，將骨支架置放於鼻竇中。在一些實施例中，將骨支架置放於膝或關節中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，植入物為克氏針(K-wire)或德納姆針(Denham pin)。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物塗佈至克氏針或德納姆針外部上。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物自克氏針或德納姆針溶離至周圍骨骼中。 混雜調配物

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物以皮膚塗料形式投與。如本文所用，塗料(亦稱為成膜劑)為由溶劑、單體或聚合物、活性劑及視情況一或多種醫藥學上可接受之賦形劑構成的溶液。在施加至組織之後，溶劑蒸發，留下由單體或聚合物及活性劑構成之薄塗層。塗層保護活性劑且使其在施加部位維持固定狀態。此減少可能損失之活性劑之量，且相應地增加遞送至個體皮膚之受影響區域的量。作為非限制性實例，塗料包括膠棉(例如彈性膠棉，USP)，及包含醣矽氧烷共聚物及交聯劑之溶液。膠棉為含有火棉膠(硝化纖維素)之乙醚/乙醇溶液。在施用之後，乙醚/乙醇溶液蒸發，留下火棉膠之薄膜。在包含醣矽氧烷共聚物之溶液中，在溶劑蒸發引發醣矽氧烷共聚物交聯之後，醣矽氧烷共聚物形成塗層。

在某些實施例中，本文所描述之胎兒扶持組織產物視情況併入控制釋放粒子、脂質複合物、脂質體、奈米粒子、微球體、微粒子、奈米膠囊或增強或促進局部遞送至皮膚之其他試劑內。醫藥製劑之習知微膠囊化方法之實例展示於美國專利第3,737,337號中，該專利以引用的方式併入本文中用於此類揭示內容。

在一些情況下，本文所描述之胎兒扶持組織產物為脂質體調配物。脂質體係藉由將水性緩衝劑引入至磷脂與有機溶劑之混合物中來製備，且有機溶劑隨後係藉由在減壓下蒸發來移除。脂質體製備之實例描述於Proc. Natl. Acad. Sci. 1978, 75, 4194-98中，其以引用之方式併入本文中用於此類揭示內容。脂質體根據其粒度藉由尺寸排阻層析法(SEC)分級。脂質體之子部分進一步藉由光子相關光譜法(PCS)對其粒度設定大小。酶促分析(例如磷脂醯膽鹼(PC)分析)用於分析脂質體之脂質含量。 皮膚賦形劑

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之調配物，其中該等調配物包含載劑。適合載劑包括但不限於卡波姆(carbomer)、纖維素、膠原蛋白、乙醇、甘油、己二醇、玻尿酸、羥丙基纖維素、磷酸、多元醇(丙二醇、聚乙二醇、甘油、十六醇聚氧乙烯醚及其類似物)、聚山梨醇酯80、鹽水、氫氧化鈉、磷酸鈉、山梨糖醇、水、三仙膠植物油(諸如橄欖油)、可注射有機酯(例如油酸乙酯)、脂肪油(例如芝麻油)及合成脂肪酸酯(例如油酸乙酯或甘油三酯)。 滲透增強劑

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之調配物，其中該等調配物包含滲透增強劑。滲透增強劑包括但不限於月桂基硫酸鈉、月桂酸鈉、聚氧乙烯-20-十六基醚、月桂醇醚-9、十二烷基硫酸鈉、磺琥珀酸鈉二辛酯、聚氧乙烯-9-月桂基醚(PLE)、Tween 80、壬基苯氧基聚乙烯(NP-POE)、聚山梨醇酯、甘膽酸鈉、去氧膽酸鈉、牛磺膽酸鈉、牛磺二氫夫西地酸鈉、二醇二氫褐酶酸鈉、油酸、辛酸、單甘油酯及二甘油酯、月桂酸、醯基膽鹼、辛酸、醯基肉鹼、癸酸鈉、EDTA、檸檬酸、水楊酸鹽、DMSO、癸基甲基亞碸、 乙醇、異丙醇、丙二醇、聚乙二醇、甘油、丙二醇及二乙二醇單乙醚。在某些實施例中，本文所描述之局部調配物經設計以用於最少全身暴露且包括例如較低量之滲透增強劑。 膠凝劑

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之調配物，其中該等調配物包含膠凝(或增稠)劑。在一些實施例中，本文所揭示之調配物進一步包含約0.1%至約5%、約0.1%至約3%或約0.25%至約2%之膠凝劑。在某些實施例中，本文揭示之調配物的黏度在約100至約500,000 cP、約100 cP至約1,000 cP、約500 cP至約1500 cP、約1000 cP至約3000 cP、約2000 cP至約8,000 cP、約4,000 cP至約10,000 cP、約10,000 cP至約50,000 cP範圍內。適用於製備凝膠調配物之膠凝劑包括但不限於纖維素、纖維素衍生物、纖維素醚(例如羧甲基纖維素、乙基纖維素、羥乙基纖維素、羥甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、甲基纖維素)、瓜爾豆膠、三仙膠、刺槐豆膠、 海藻酸鹽(例如海藻酸)、矽酸鹽、澱粉、黃芪膠、羧乙烯基聚合物、角叉菜膠、石蠟、石蠟脂、阿拉伯膠(阿拉伯樹膠)、瓊脂、矽酸鎂鋁、海藻酸鈉、硬脂酸鈉、墨角藻(bladderwrack)、膨潤土、卡波姆、角叉菜膠、卡波莫(carbopol)、黃原膠、纖維素、微晶纖維素(MCC)、 角豆膠(ceratonia)、鹿角菜膠、右旋糖、富塞蘭藻膠(furcellaran)、明膠、茄替膠(ghatti gum)、瓜爾豆膠、鋰膨潤石(hectorite)、乳糖、蔗糖、麥芽糊精、甘露糖醇、山梨糖醇、蜂蜜、玉米澱粉、小麥澱粉、米澱粉、馬鈴薯澱粉、明膠、梧桐樹膠(sterculia gum)、聚乙二醇(例如PEG 200-4500)、黃蓍膠、乙基纖維素、 乙基羥乙基纖維素、乙基甲基纖維素、甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥乙基甲基纖維素、羥丙基纖維素、聚(甲基丙烯酸羥乙酯)、氧基聚明膠、果膠、聚明膠肽(polygeline)、聚維酮、碳酸伸丙酯、甲基乙烯基醚/順丁烯二酸酐共聚物(PVM/MA)、聚(甲基丙烯酸甲氧基乙酯)、聚(甲基丙烯酸甲氧基乙氧基乙酯)、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、羧甲基纖維素鈉(CMC)、二氧化矽、聚乙烯吡咯啶酮(PVP:普維酮)或其組合。

凝膠包括單相或雙相系統。單相凝膠由均勻地分佈在整個液體中的有機大分小組成，其方式使得所分散大分子與液體之間不存在明顯邊界。一些單相凝膠由合成大分子(例如卡波姆)或天然樹膠(例如黃蓍膠)製備。在一些實施例中，單相凝膠通常為含水的，但亦將使用醇及油製成。兩相凝膠由小離散粒子之網路組成。

凝膠亦可分類為疏水性或親水性的。在某些實施例中，疏水性凝膠之基質由具有聚乙烯之液體石蠟或用膠態二氧化矽膠凝化之脂肪油或鋁或鋅皂組成。相比之下，親水性凝膠之基質通常由用適合之膠凝劑(例如黃蓍膠、澱粉、纖維素衍生物、羧基乙烯基聚合物及矽酸鋁鎂)膠凝化的水、甘油或丙二醇組成。

適用於以液體形式施加之調配物中且在施加至皮膚時膠凝成為膜之試劑包括但不限於由聚氧化丙烯及聚氧乙烯構成之聚合物，已知該等聚合物當併入至水溶液中時形成熱可逆性凝膠。此等聚合物有能力在接近體溫之溫度下自液態變為凝膠狀態，因此允許適用調配物以凝膠及/或膜形式施加至受影響區域。在體溫下膠凝且用於本文所描述之凝膠及/或膜之聚合物之實例包括且不限於泊洛沙姆(poloxamer)(例如PLURONICSF 68®、F88®、F108®及F127®，其為環氧乙烷及環氧丙烷之嵌段共聚物)。液態至凝膠狀態的相變取決於溶液中之聚合物濃度及成分。 黏著劑

在一些情況下，本文所描述之調配物包含壓敏黏著劑(例如聚烷基㗁唑啉聚合物)且允許將黏著劑薄膜施加至皮膚之受影響區域。 潤膚劑

在某些實施例中，本文揭示本文所揭示之胎兒扶持組織產物之調配物，其中該等調配物包含潤膚劑。潤膚劑包括但不限於蓖麻油酯、可可豆油酯、紅花油酯、棉籽油酯、玉米油酯、橄欖油酯、魚肝油酯、杏仁油酯、鱷梨油酯、棕櫚油酯、芝麻油酯、角鯊烯酯、菊葵(kikui)油酯、大豆油酯、乙醯化單甘油酸酯、 乙氧基化單硬脂酸甘油酯、月桂酸己酯、月桂酸異己酯、棕櫚酸異己酯、棕櫚酸異丙酯、棕櫚酸甲酯、油酸癸酯、油酸異癸酯、硬脂酸十六烷基酯、硬脂酸癸酯、異硬脂酸異丙酯、異硬脂酸甲酯、己二酸二異丙酯、己二酸二異己酯、己二酸二己基癸酯、癸二酸二異丙酯、乳酸月桂酯、乳酸肉豆蔻酯及乳酸鯨蠟酯、 肉荳蔻酸油酯、硬脂酸油酯及油酸油酯、天竺葵酸、月桂酸、肉豆蔻酸、棕櫚酸、硬脂酸、異硬脂酸、羥硬脂酸、油酸、亞麻油酸、蓖麻油酸、花生酸、二十二酸、芥子酸、月桂醇、肉豆寇醇、鯨蠟醇、十六醇、 十八醇、異十八醇、羥基十八醇、油醇、蓖麻油醇、二十二醇、二十二烯醇(erucyl alcohol)、2-辛基十二醇、羊毛脂及羊毛脂衍生物、蜂蠟、鯨蠟、肉豆蔻酸肉豆蔻基酯、硬脂酸硬脂基酯、巴西棕櫚蠟、小燭樹蠟、卵磷脂及膽固醇。 混雜賦形劑

在某些實施例中，包含本文所揭示之胎兒扶持組織產物之調配物包含額外賦形劑，作為舉例諸如研磨劑、吸附劑、防結塊劑、收斂劑、精油、芳香劑、皮膚調節劑、皮膚癒合劑、皮膚保護劑(例如防曬劑或紫外光吸收劑或散射劑)、皮膚舒緩劑或其組合。 使用方法

在某些實施例中，本文揭示使用藉由本文所描述之方法產生之胎兒扶持組織產物的方法。在一些實施例中，胎兒扶持組織為胎盤羊膜(PAM)或實質上經分離之PAM、臍帶羊膜(UCAM)或實質上經分離之UCAM、絨毛膜或實質上經分離之絨毛膜、羊膜-絨毛膜或實質上經分離之羊膜-絨毛膜、胎盤或實質上經分離之胎盤、臍帶或實質上經分離之臍帶，或其任何組合。在一些實施例中，藉由本文所揭示之方法產生之胎兒扶持組織產物包含胎兒扶持組織及醫藥學上可接受之載劑。在一些實施例中，調配本文所揭示之胎兒扶持組織產物以用於藉由局部投與或注射來投與。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物調配成溶液、懸浮液或乳液。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於抑制以下中之至少一者：疤痕、發炎、黏連及血管生成。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於促進傷口癒合。在一些實施例中，使用為同源使用。在一些實施例中，最低限度地操控本文所揭示之胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，本文中所揭示之胎兒扶持組織產物不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用作覆蓋物(例如，傷口覆蓋物)。在一些實施例中，使用為同源使用。在一些實施例中，最低限度地操控胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於促進傷口修復。在一些實施例中，使用為同源使用。在一些實施例中，最低限度地操控胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用作黏連之障壁。在一些實施例中，使用為同源使用。在一些實施例中，最低限度地操控胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，本文揭示之胎兒扶持組織產物包含蛋白質、聚糖、蛋白質-聚糖複合物(例如，玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈的複合物)及促進組織修復之酶。舉例而言，AM之基質含有生長因子、抗血管生成及抗發炎蛋白質以及各種蛋白酶之天然抑制劑。在一些實施例中，可見於本文所揭示之胎兒扶持組織產物中的蛋白質及酶自胎兒扶持組織產物擴散出來且擴散至周圍組織中。 受損傷組織之修復及補充

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用作傷口覆蓋物或用於促進傷口修復。在一些實施例中，使用為同源使用(例如，功能性同源使用或結構性同源使用)。在一些實施例中，最低限度地操控胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，組織由於損傷(例如燒傷；手術切口；由感染、創傷或毒素引起之壞死區域；裂傷)而受到破壞、受到損害或受到損失。在一些實施例中，組織由於燒傷而受到破壞、受到損害或受到損失。在一些實施例中，組織由於傷口(例如切口、裂傷、擦傷)而受到破壞、受到損害或受到損失。在一些實施例中，組織由於壞死而受到破壞、受到損害或受到損失。在一些實施例中，組織由於潰爛而受到破壞、受到損害或受到損失。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，本文揭示之胎兒扶持組織產物包含蛋白質、聚糖、蛋白質-聚糖複合物(例如，玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈的複合物)及促進組織修復之酶。舉例而言，AM之基質含有生長因子、抗血管生成及抗發炎蛋白質以及各種蛋白酶之天然抑制劑。在一些實施例中，可見於本文所揭示之胎兒扶持組織產物中的蛋白質及酶自胎兒扶持組織產物擴散出來且擴散至周圍組織中。 燒傷

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至燒傷。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至一度燒傷。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至二度燒傷。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至三度燒傷。在一些實施例中，在將胎兒扶持組織產物置放於燒傷上之前施加至基材。 傷口

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至皮膚中之傷口(例如，切口、裂傷、擦傷、潰瘍、穿刺、穿透)。在一些實施例中，在將胎兒扶持組織產物置放於傷口上之前施加至基材。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至器官(例如皮膚、腦、胃、腎、肝臟、腸、肺、膀胱、氣管、食道、陰道、尿管及血管壁)中之切口。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至手術切口。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至結腸切除部位。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至胃切除部位。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至乳房手術(例如縮胸手術、豐胸手術及乳房切除術)部位。在一些實施例中，在將胎兒扶持組織產物置放於傷口上之前施加至基材。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用作皮膚切口(例如表皮、真皮及/或皮下組織之切口)上方的覆蓋物。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於在痔瘡手術後修復或補充皮膚。在一些實施例中，在將胎兒扶持組織產物置放於傷口上之前施加至基材。 壞死

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用作壞死組織區域上的保護性移植物(例如以防感染)。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用作壞死皮膚區域上之保護性移植物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物置放於壞死組織之區域上。在一些實施例中，在將胎兒扶持組織產物置放於壞死組織上之前施加至基材。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。 潰瘍

在一些實施例中，本文中所揭示之胎兒扶持組織產物用作潰瘍上之保護性覆蓋物。在一些實施例中，在將胎兒扶持組織產物置放於潰瘍上之前施加至基材。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，潰瘍為足潰瘍(例如糖尿病足潰瘍或動脈供血不足潰瘍)。在一些實施例中，治療足潰瘍包含(a)準備傷口(例如，清創傷口)；及(b)將本文所揭示之胎兒扶持組織產物置放於傷口上。在一些實施例中，治療足潰瘍包含(a)準備傷口(例如，清創傷口)；(b)將本文中所揭示之胎兒扶持組織產物置放於傷口上；及(c)用防護障壁(例如，silvercell敷料、metipel、紗布或繃帶)覆蓋胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，在將胎兒扶持組織產物置放於潰瘍上之前施加至基材。

在一些實施例中，潰瘍為靜脈淤滯(VS)潰瘍。在一些實施例中，治療VS潰瘍包含(a)準備傷口(例如，清創傷口)；及(b)將本文所揭示之胎兒扶持組織產物置放於傷口上。在一些實施例中，治療VS潰瘍包含(a)準備傷口(例如，清創傷口)；(b)將本文中所揭示之胎兒扶持組織產物置放於傷口上；及(c)用防護障壁(例如，傷口紗、抗菌敷料、紗布或繃帶)覆蓋胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，在將胎兒扶持組織產物置放於傷口上之前施加至基材。

在一些實施例中，潰瘍為角膜潰瘍(亦即潰瘍性角膜炎)。在一些實施例中，治療角膜潰瘍包含(a)準備傷口(例如，清創傷口)；及(b)將本文所揭示之胎兒扶持組織產物置放於傷口上。在一些實施例中，治療角膜潰瘍包含(a)準備傷口(例如，清創傷口)；(b)將本文中所揭示之胎兒扶持組織產物置放於傷口上；及(c)用防護障壁(例如，隱形眼鏡或繃帶)覆蓋胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，在將胎兒扶持組織產物置放於傷口上之前施加至基材。 軟組織使用

在某些實施例中，本文揭示使用本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於修復、重構、替代或補充接受者的破壞、損害或缺失之軟組織(例如肌腱)。

在一些實施例中，使用為同源使用。在一些實施例中，最低限度地操控胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，本文揭示之胎兒扶持組織產物包含蛋白質、聚糖、蛋白質-聚糖複合物(例如，玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈的複合物)及促進組織修復之酶。舉例而言，AM之基質含有生長因子、抗血管生成及抗發炎蛋白質以及各種蛋白酶之天然抑制劑。在一些實施例中，可見於本文所揭示之胎兒扶持組織產物中的蛋白質及酶自胎兒扶持組織產物擴散出來且擴散至周圍組織中。

在一些實施例中，本文所描述之本文揭示的胎兒扶持組織產物用作軟組織切口上方的覆蓋物(例如眼瞼形成不同軟組織層之間的組織平面)。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物施加至基材且接著用作軟組織切口上方的覆蓋物(例如眼瞼在不同軟組織層之間形成組織平面)。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用作軟組織之結構(構造)扶持物。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物防止關節或肌腱修復中之黏連。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於修復肌腱或關節(諸如旋轉肌袖修復、手肌腱修復)。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於強化肌腱或關節。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物係用於防止癒合肌腱黏連至周圍組織、肌腱或關節。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物係用於防止在肌腱上形成疤痕組織。

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材，且使用該基材/胎兒扶持組織產物來增強足部及踝之較小肌腱及韌帶，包括後脛骨肌腱、腓骨肌腱(personneal tendon)、屈肌腱及伸肌腱，及側踝關節複合體之韌帶。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且使用基材/胎兒扶持組織產物來強化四頭肌及膝部周圍之髕骨肌腱的主要修復。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作關節置換中骨移植之骨膜貼片。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且該基材/胎兒扶持組織產物用於在全關節修復手術之後增強有缺陷的髖關節及膝關節囊組織。

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於修復撕裂的旋轉肌袖。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且該基材/胎兒扶持組織產物用作旋轉肌袖肌肉或肌腱(例如，棘上肌肌腱)上之貼片。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且該基材/胎兒扶持組織產物用於重構旋轉肌袖肌肉或肌腱(例如，棘上肌肌腱)。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且該基材/胎兒扶持組織產物用於增強旋轉肌袖肌肉或肌腱(例如，棘上肌肌腱)。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且該基材/胎兒扶持組織產物用於加強旋轉肌袖肌肉或肌腱(例如，棘上肌肌腱)。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且該基材/胎兒扶持組織產物用於防止軟組織黏連至旋轉肌袖肌肉或肌腱(例如，棘上肌肌腱)。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於修復牙齦。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於修復牙齦萎縮。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且用作牙齦上之貼片。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且用作暴露的齒根表面上之貼片。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於重構牙齦。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於增強牙齦。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於加強牙齦。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於防止軟組織黏連至牙齦。

在一些實施例中，將本文所述之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作筋膜切口或撕裂處的保護性移植物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作筋膜之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作筋膜之替代物或補充物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於修復疝氣(例如修復筋膜)。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於修復腹股溝疝氣。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於修復股疝氣。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於修復臍疝氣。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於修復切口疝氣。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於修復隔膜疝氣。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材，且該基材/胎兒扶持組織產物用於修復古柏氏疝氣(Cooper's hernia)、上腹疝氣、食管裂孔疝氣、利特雷氏疝氣(Littre's hernia)、腰部疝氣、梅德耳氏疝氣(maydl hernia)、閉孔疝氣、馬鞍疝氣(pantaloon hernia)、食管旁疝氣、臍旁疝氣、會陰疝氣、腹膜前疝氣、里希特疝氣(Richter's hernia)、滑脫性疝氣、坐骨疝氣、半月線疝氣、運動疝氣、維耳波氏疝氣(Velpeau hernia)或艾氏疝氣(Amyand's hernia)。

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於修復椎間盤突出症。在一些實施例中，將本文所述之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作椎間盤切口或撕裂處的保護性移植物。在一些實施例中，將本文所述之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作纖維環切口或撕裂處的保護性移植物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作椎間盤之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作纖維環之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作椎間盤之替代物或補充物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作椎間盤之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作纖維環之替代物或補充物。

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物在腦中或一種(或全部)腦膜(亦即，硬腦膜、軟腦膜及/或蛛網膜)中之切口上方使用。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作一種(或全部)腦膜(亦即，硬腦膜、軟腦膜及/或蛛網膜)之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作一種(或全部)腦膜(亦即，硬腦膜、軟腦膜及/或蛛網膜)之替代物。

在一些實施例中，將本文所述之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物在肺或胸膜中切口處使用。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作胸膜之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作胸膜之替代物。

在一些實施例中，將本文所述之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物在鼓膜中切口處使用。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作鼓膜之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作鼓膜之替代物。

在一些實施例中，將本文所述之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作心臟或心包中切口處的保護性移植物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作心包之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作心包之替代物。

在一些實施例中，將本文所述之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作腹膜中切口處的保護性移植物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作腹膜之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作腹膜之替代物。 眼科使用

在某些實施例中，本文揭示使用本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於修復、重構、替代或補充接受者的破壞、損害或缺失之眼部組織。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，使用為同源使用。在一些實施例中，最低限度地操控胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，本文揭示之胎兒扶持組織產物包含蛋白質、聚糖、蛋白質-聚糖複合物(例如，玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈的複合物)及促進組織修復之酶。舉例而言，AM之基質含有生長因子、抗血管生成及抗發炎蛋白質以及各種蛋白酶之天然抑制劑。在一些實施例中，可見於本文所揭示之胎兒扶持組織產物中的蛋白質及酶自胎兒扶持組織產物擴散出來且擴散至周圍組織中。 青光眼之治療

如本文中所使用，「青光眼」意謂以視神經中視網膜神經節細胞損失為特徵的病症。在某些情況下，青光眼部分或完全由前房(AC)中之眼內壓升高而產生。眼內壓之變化取決於眼之睫狀突產生液體水狀液及經由小樑網排出水狀液。

青光眼引流裝置(GDD)為植入眼中藉由提供將水狀液引流之旁路途徑來緩解眼內壓的醫療裝置。若保持未覆蓋，則GDD管將會腐蝕且使眼睛容易受到眼內感染。因此，需要覆蓋GDD管。當前，用於覆蓋GDD管之貼片由心包、鞏膜及角膜製成。此等貼片之厚度為約400至550微米。此等貼片很薄，導致其在2年內熔化25%，可能會使分流管再次暴露。

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於覆蓋GDD管。在一些實施例中，基材/胎兒扶持組織產物為300至600微米厚。在一些實施例中，基材/胎兒扶持組織產物在2年內不會熔化25%。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。 眼部潰瘍之治療

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於覆蓋眼睛中之持續性上皮缺陷及/或潰瘍。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，潰瘍的基部用手術海綿清創且移除與潰瘍邊緣相鄰之黏連不良的上皮(例如，去除上皮變得非常黏連的眼睛部分)。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且將基材/胎兒扶持組織產物傳遞至接受者眼睛。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材上，且隨後藉由縫合線(例如間斷的10-0耐綸縫合線或運行的10-0耐綸縫合線)將基材/胎兒扶持組織產物固定到眼睛上，其中埋入縫合線結點。在一些實施例中，將本文揭示之胎兒扶持組織產物施用至基板且藉由使用纖維蛋白膠將基材/胎兒扶持組織產物固定至眼睛。在一些實施例中，將保護層施加於胎兒扶持組織產物/基材或整個眼睛(例如隱形眼鏡)上。在一些實施例中，基材/胎兒扶持組織產物進一步包含抗生素(例如新黴素(neomycin)、硫酸多黏菌素b(polymyxin b sulfate)及地塞米松(dexamethasone)。

結膜、鞏膜、眼瞼及眼眶邊緣表面重構

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用於結膜、鞏膜、眼瞼及眼眶邊緣表面重構。在一些實施例中，結膜表面之破壞由瞼球黏連裂解；腫瘤、病灶及/或瘢痕組織之手術移除；準分子雷射屈光性角膜切除術及治療性角膜切除術；或其組合產生。 冠狀動脈使用

在某些實施例中，本文揭示使用本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於修復、重構、替代或補充接受者的破壞、損害或缺失之冠狀動脈組織。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，使用為同源使用。在一些實施例中，最低限度地操控胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，AM不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，本文揭示之胎兒扶持組織產物包含蛋白質、聚糖、蛋白質-聚糖複合物(例如，玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈的複合物)及促進組織修復之酶。舉例而言，AM之基質含有生長因子、抗血管生成及抗發炎蛋白質以及各種蛋白酶之天然抑制劑。在一些實施例中，可見於胎兒扶持組織產物中的蛋白質及酶自胎兒扶持組織產物擴散出來且擴散至周圍組織中。 冠狀動脈旁路

本文揭示在冠狀動脈旁路手術中使用本文所述之胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且將基材/胎兒扶持組織產物移植至冠狀動脈上以繞過特徵在於動脈粥樣硬化之動脈部分。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。 心臟瓣膜

在一些實施例中，將本文所述之胎兒扶持組織產物施加至基材且將基材/胎兒扶持組織產物施加至心臟瓣膜上。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作心臟瓣膜之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作心臟瓣膜之替代物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。 靜脈及動脈

在一些實施例中，將本文所述之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物施加至靜脈或動脈。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作靜脈或動脈之結構(構造)扶持。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。 神經使用

在某些實施例中，本文揭示使用本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於修復、重構、替代或補充接受者的破壞、損害或缺失之神經組織。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，使用為同源使用。在一些實施例中，最低限度地操控胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，本文揭示之胎兒扶持組織產物包含蛋白質、聚糖、蛋白質-聚糖複合物(例如，玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈的複合物)及促進組織修復之酶。舉例而言，AM之基質含有生長因子、抗血管生成及抗發炎蛋白質以及各種蛋白酶之天然抑制劑。在一些實施例中，可見於本文所揭示之胎兒扶持組織產物中的蛋白質及酶自胎兒扶持組織產物擴散出來且擴散至周圍組織中。

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作神經(例如周邊神經)上之覆蓋物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作神經移植物、神經轉移物或修復神經上之覆蓋物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作神經(例如周邊神經)切口上之覆蓋物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作神經(例如周邊神經)之結構(構造)扶持。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物防止神經修復中之黏連。

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作受損傷神經之非收縮外殼膜。在一些實施例中，本文所描述之胎兒扶持組織產物防止或最大程度地減少疤痕形成、包裹、慢性壓迫、神經繫栓及神經卡壓。在一些實施例中，本文所描述之胎兒扶持組織產物防止或最大程度地減少神經瘤形成。在一些實施例中，本文所述之胎兒扶持組織產物防止或最大程度地減少神經修復期間存在之內源性生長因子(亦即神經生長因子)之遷移。 脊椎使用

本文揭示在脊椎手術中使用本文所述之胎兒扶持組織產物。

在一些實施例中，在椎板切除術期間使用本文所描述之胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，使用為同源使用。在一些實施例中，最低限度地操控胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不包含除水、類晶體或滅菌劑、保藏劑或儲存劑之外的另一製品。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物不具有全身性效應且其主要功能不依賴於活細胞之代謝活性。

在一些實施例中，本文揭示之胎兒扶持組織產物包含蛋白質、聚糖、蛋白質-聚糖複合物(例如，玻尿酸與IαI及PTX3之重鏈的複合物)及促進組織修復之酶。舉例而言，AM之基質含有生長因子、抗血管生成及抗發炎蛋白質以及各種蛋白酶之天然抑制劑。在一些實施例中，可見於本文所揭示之胎兒扶持組織產物中的蛋白質及酶自胎兒扶持組織產物擴散出來且擴散至周圍組織中。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，本文所述之胎兒扶持組織產物用於減少或防止在脊椎手術(例如椎板切除術)之後的硬膜外纖維化及/或瘢痕黏連。在一些實施例中，在脊椎手術(例如椎板切除術)之後，將本文所描述之胎兒扶持組織產物植入硬腦膜與上覆組織之間。在一些實施例中，在脊椎手術(例如椎板切除術)之後，將本文所描述之胎兒扶持組織產物植入硬腦膜與上覆組織之間減少或防止成纖維細胞遷移至硬腦膜及硬腦膜上的膠原蛋白沈積。

在一些實施例中，本文所述之胎兒扶持組織產物用於減少或防止脊椎手術(例如椎板切除術)之後產生增生性疤痕。在一些實施例中，本文中所描述之胎兒扶持組織產物用於減少或防止產生手術後(例如，椎板切除術後)硬膜外/硬膜周圍/神經周圍疤痕。在一些實施例中，本文所述之胎兒扶持組織產物用於減少或防止脊椎手術(例如椎板切除術)之後產生增生性疤痕。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於減少或防止產生椎板切除術後膜。

在一些實施例中，本文所述之胎兒扶持組織產物用於減少或防止脊椎手術(例如椎板切除術)之後產生硬膜外壓迫或硬膜繫栓。在一些實施例中，本文所述之胎兒扶持組織產物用於減少或防止脊椎手術(例如椎板切除術)之後產生繫栓之神經根。在一些實施例中，本文所述之胎兒扶持組織產物用於減少或防止脊椎手術(例如椎板切除術)之後產生蜘蛛膜炎。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物進一步包含顆粒化骨組織。在一些實施例中，在脊椎融合程序期間使用本文所揭示之包含顆粒化骨組織之胎兒扶持組織產物。在一些實施例中，本文所揭示之包含顆粒化骨組織之胎兒扶持組織產物植入鄰近脊椎骨之間。在一些實施例中，植入本文所揭示之在兩個鄰近脊椎骨之間包含顆粒化骨組織的胎兒扶持組織產物促進脊椎骨之融合。

在一些實施例中，本文中所揭示之胎兒扶持組織產物用作硬腦膜切口上之保護性移植物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作硬腦膜之結構(構造)扶持。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至基材且基材/胎兒扶持組織產物用作硬腦膜之替代物。 胎兒扶持組織產物之雜項使用

在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物施加至貼片或傷口敷料。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係藉由非經腸注射(例如經由注射或輸注，包括動脈內、心內、皮內、十二指腸內、髓內、肌內、骨內、腹膜內、鞘內、血管內、靜脈內、玻璃體內、硬膜外及/或皮下)來投與。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物係經硬膜外、鞘內、經由吸入、靜脈內或其組合來投與。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用作皮膚填充物。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物注射至皮下面部組織中。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物注射於面部皺紋及老化線(例如，鼻唇溝、嘴角溝、「魚尾紋(crow's feet)」及前額皺紋)下。在一些實施例中，本文揭示之胎兒扶持組織產物用於豐唇。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物注射至嘴唇中。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於治療關節炎(例如骨關節炎、類風濕性關節炎、敗血性關節炎、關節黏連性脊椎炎、椎關節黏連)。在一些實施例中，將本文所揭示之胎兒扶持組織產物注射至關節炎關節(例如，膝部)中。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於抑制有需要之個體之骨骼再吸收。在一些實施例中，個體患有關節炎、骨質疏鬆、牙槽骨退化、佩吉特氏病(Paget's disease)或骨腫瘤。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物注射至關節中。在一些實施例中，使胎兒扶持組織產物與骨骼接觸(例如藉由使用傷口敷料或繃帶)。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物塗佈骨支架、骨植入物或骨假體(例如骨整合植入物)。如本文所用，「骨整合植入物」意謂含有孔之三維植入物，成骨細胞及支撐結締組織可遷移至孔中。在一些實施例中，將骨支架插入至骨之髓腔中。在一些實施例中，將骨支架置放於鼻竇中。在一些實施例中，將骨支架置放於膝或關節中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於促進或誘導有需要之個體中之骨骼形成。在一些實施例中，個體患有關節炎、骨質疏鬆、牙槽骨退化、佩吉特氏病或骨腫瘤。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物注射至關節中。在一些實施例中，使胎兒扶持組織產物與骨骼接觸(例如藉由使用傷口敷料或繃帶)。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物塗佈骨支架、骨植入物或骨假體(例如骨整合植入物)。如本文所用，「骨整合植入物」意謂含有孔之三維植入物，成骨細胞及支撐結締組織可遷移至孔中。在一些實施例中，將骨支架插入至骨之髓腔中。在一些實施例中，將骨支架置放於鼻竇中。在一些實施例中，將骨支架置放於膝或關節中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於抑制破骨細胞分化。在一些實施例中，個體患有關節炎、骨質疏鬆、牙槽骨退化、佩吉特氏病或骨腫瘤。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物注射至關節中。在一些實施例中，使胎兒扶持組織產物與骨骼接觸(例如藉由使用傷口敷料或繃帶)。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物塗佈骨支架、骨植入物或骨假體(例如骨整合植入物)。如本文所用，「骨整合植入物」意謂含有孔之三維植入物，成骨細胞及支撐結締組織可遷移至孔中。在一些實施例中，將骨支架插入至骨之髓腔中。在一些實施例中，將骨支架置放於鼻竇中。在一些實施例中，將骨支架置放於膝或關節中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於在有需要之個體中促進成骨細胞之礦化。在一些實施例中，個體患有關節炎、骨質疏鬆、牙槽骨退化、佩吉特氏病或骨腫瘤。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物注射至關節中。在一些實施例中，使胎兒扶持組織產物與骨骼接觸(例如藉由使用傷口敷料或繃帶)。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物塗佈骨支架、骨植入物或骨假體(例如骨整合植入物)。如本文所用，「骨整合植入物」意謂含有孔之三維植入物，成骨細胞及支撐結締組織可遷移至孔中。在一些實施例中，將骨支架插入至骨之髓腔中。在一些實施例中，將骨支架置放於鼻竇中。在一些實施例中，將骨支架置放於膝或關節中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於在有需要之個體中平衡骨骼再吸收及骨形成。在一些實施例中，個體患有關節炎、骨質疏鬆、牙槽骨退化、佩吉特氏病或骨腫瘤。在一些實施例中，將胎兒扶持組織產物注射至關節中。在一些實施例中，使胎兒扶持組織產物與骨骼接觸(例如藉由使用傷口敷料或繃帶)。在一些實施例中，胎兒扶持組織產物塗佈骨支架、骨植入物或骨假體(例如骨整合植入物)。如本文所用，「骨整合植入物」意謂含有孔之三維植入物，成骨細胞及支撐結締組織可遷移至孔中。在一些實施例中，將骨支架插入至骨之髓腔中。在一些實施例中，將骨支架置放於鼻竇中。在一些實施例中，將骨支架置放於膝或關節中。在一些實施例中，將骨支架置放於骨折中。在一些實施例中，骨支架為可擴張或收縮的。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於治療畸齒矯正或牙周病況。在一些實施例中，牙周病況係選自牙齦炎、牙齦萎縮或齒根骨膜炎。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用作抗發炎劑或用於促進骨整合或癒合。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物與牙科植入物組合使用以促進植入物骨整合、抗發炎及癒合。

在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於治療嘶啞或聲音障礙。在一些實施例中，本文所揭示之胎兒扶持組織產物用於注射喉成形術以修復聲帶。

在一些實施例中，將本文揭示之胎兒扶持組織產物塗佈至醫療植入物(例如支架)上。在一些實施例中，將本文所揭示之醫療植入物/胎兒扶持組織產物植入有需要之個體中，其中將胎兒扶持組織產物部分或全部釋放至個體中。在一些實施例中，醫療植入物為支架(例如骨支架或冠狀動脈支架)。在一些實施例中，醫療植入物為骨支架。在一些實施例中，醫療植入物為冠狀動脈支架。 組合治療

在一些實施例中，本文中描述之組合物及方法與因對所治療之病況特別有用而選擇的其他熟知治療劑結合使用。一般而言，在採用組合療法之實施例中，本文中所述之組合物與其他藥劑不必以相同組合物形式投藥，且可能由於不同物理及化學特徵而必須藉由不同途徑投與。投藥模式之確定及(可能時)以相同組合物形式投藥之合理性完全在熟練臨床醫師之知識範圍內。初始投藥可根據此項技術中已知之確立方案進行，且隨後基於所觀測之作用，熟練臨床醫師可對劑量、投藥模式及投藥時間進行修改。

所用化合物之特定選擇將取決於主治醫師之診斷及其對患者之病況及適當治療方案之判斷。在一些實施例中，化合物並行(例如同時、基本上同時或在相同治療方案內)或依序投與，視疾病、病症或病況性質、患者病況及所用化合物之實際選擇而定。投藥次序及各治療劑在治療方案期間之投藥重複次數的確定，在評價受治療之疾病及患者之病況之後完全在熟練醫師之知識內。

熟習此項技術者已知，當藥物以治療組合形式使用時，治療有效劑量可能不同。用於以實驗方式測定用於組合治療方案中之藥物及其他藥劑之治療有效劑量的方法描述於文獻中。舉例而言，文獻中已廣泛地描述使用節拍式給藥，亦即提供更頻繁之較低劑量以使毒副作用降至最低。組合治療進一步包括在各個時間開始及結束之週期性治療以協助患者之臨床管理。

就本文中所述之組合治療而言，共同投與之化合物的劑量當然將視所用共同藥物之類型、所用特定藥物、所治療疾病或病況等等而不同。另外，在一些實施例中，當與一或多種生物活性劑共同投與時，本文所提供之化合物可與生物活性劑同時或依序投與。若依次投與，則主治醫師將決定與生物活性劑組合之蛋白質投與的適當次序。

在一些實施例中，多種治療劑以任何次序或甚至同時投與。在一些實施例中，若同時，則多種治療劑以單一統一形式或以多種形式(僅舉例而言，以單一丸劑形式或以兩種獨立丸劑形式)提供。在一些實施例中，以多次劑量提供治療劑中之一者或以多次劑量形式提供兩者。在一些實施例中，若不同時，則多次劑量之間的時序在大於零週至小於四週範圍內改變。另外，組合方法、組合物及調配物不限於僅使用兩種藥劑；亦設想使用多種治療組合。

應瞭解，治療或改善尋求緩解之病況的給藥方案可以根據多種因素加以修改。此等因素包括個體所患病症以及個體之年齡、體重、性別、飲食及醫學病況。因此，實際上所用之給藥方案可能廣泛變化，且因此可背離本文中所闡述之給藥方案。 套組 / 製品

本文亦描述用於本文所述之治療性應用中的套組及製品。此類套組可包括載劑、包裝或經分隔以收容一或多個容器(諸如小瓶、管及其類似物)之容器，一或多個容器中之每一者包括待用於本文所述方法之分開的元件中之一者。適合的容器包括(例如)瓶子、小瓶、注射器及試管。容器可由諸如玻璃或塑膠之多種材料形成。

本文所提供之製品含有包裝材料。用於包裝醫藥產品之包裝材料為熟習此項技術者所熟知。參見例如，美國專利第5,323,907號、第5,052,558號及第5,033,252號。醫藥包裝材料之實例包括但不限於泡殼包裝、瓶子、管、吸入器、泵、袋、小瓶、容器、瓶子及適於所選調配物及預定投藥及治療模式的任何包裝材料。本文提供之化合物及組合物的廣泛多種調配物預期作為任何疾病、病症或病況之各種治療劑。

舉例而言，容器可包括一或多種本文所述之UCAM組合物，視情況在組合物中或與如本文所揭示之另一藥劑組合。一或多個容器視情況具有無菌接取口(例如容器可為靜脈內溶液袋或塞子可藉由皮下注射針刺穿之小瓶)。此類套組視情況包含具有識別描述或標籤或與其在本文所描述之方法中之使用相關之說明書的化合物。

套組通常將包括一或多個額外容器，其各自具有自使用本文所描述之組合物之商業及使用者觀點來看所需之多種材料(諸如試劑，視情況呈濃縮形式，及/或裝置)中之一或多者。此類材料之非限制性實例包括但不限於緩衝劑、稀釋劑、過濾器、針、注射器；載劑、包裝、容器、小瓶及/或管列出內含物之標籤及/或使用說明書，及具有使用說明書之包裝插頁。通常亦包括一組說明書。

標籤可在容器上或與容器關聯。當形成標籤之字母、數字或其他字元附著、模製或蝕刻於容器自身中時，標籤可位於容器之上；當標籤存在於亦固持容器之收容器或載體內時，例如呈包裝插頁形式，標籤可與容器關聯。標籤可用以指示該等內含物用於特定治療應用。標籤亦可指示該等內含物諸如在本文所述方法中之使用指南。

在某些實施例中，組合物可在包裝或分配裝置中呈現，該包裝或分配裝置可含有一或多個容納本文所提供化合物之單位劑型。包裝可例如含有金屬或塑膠箔片，諸如泡殼包裝。包裝或分配裝置可附有投藥說明書。包裝或分配器亦可附有與容器關聯之注意事項，其呈管製醫藥品之製造、使用或銷售之政府機構指定的形式，該注意事項反映該機構批准該藥物形式用於人類或獸醫投與。此類注意事項例如可為經美國食品藥物管理局(U.S. Food and Drug Administration)關於處方藥物批准之標籤或經批准之產品插頁。亦可製備於相容的載劑中調配之含有本文所提供之化合物之組合物，將其置放於適當的容器中且貼標籤以用於治療所指示之病況。 特定術語

如本文所用，「胎兒扶持組織」意謂用於扶持胎兒發育之組織。胎兒扶持組織的實例包括但不限於胎盤羊膜(PAM)或實質上經分離之PAM、臍帶羊膜(UCAM)或實質上經分離之UCAM、絨毛膜或實質上經分離之絨毛膜、羊膜-絨毛膜或實質上經分離之羊膜-絨毛膜、胎盤或實質上經分離之胎盤、臍帶或實質上經分離之臍帶，或其任何組合。

如本文所用，「胎兒扶持組織產物」意謂由研磨胎兒扶持組織產生之任何產物。胎兒扶持組織的實例包括但不限於胎盤羊膜(PAM)或實質上經分離之PAM、臍帶羊膜(UCAM)或實質上經分離之UCAM、絨毛膜或實質上經分離之絨毛膜、羊膜-絨毛膜或實質上經分離之羊膜-絨毛膜、胎盤或實質上經分離之胎盤、臍帶或實質上經分離之臍帶，或其任何組合。

如本文所用，「粉末」意謂呈精細乾燥粒子形式之物質。在一些實施例中，粒子尺寸不均勻。在一些實施例中，粒子尺寸實質上均勻。

如本文所用，「研磨」意謂將胎兒扶持組織減小成較小粒子或粉末之任何方法。術語研磨包括粉碎、均質化、銼削、碾磨、磨碎、搗碎及壓碎。

如本文所用，「胎盤」意謂將發育胎兒與母體子宮壁連接以允許經由母體血液供應來進行營養吸收、廢物排泄及氣體交換之器官。胎盤由三層構成。包圍胎兒之最內胎盤層稱作羊膜。尿膜為胎盤之中間層(源於胚胎後腸)；源自臍部之血管跨越此膜。胎盤之最外層，絨毛膜，與子宮內膜接觸。絨毛膜及尿膜融合形成絨毛膜尿囊膜。

如本文所用，「絨毛膜」意謂由胚外中胚層及兩層滋胚層形成之膜。絨毛膜絨毛自絨毛膜顯現，侵入子宮內膜，且允許營養物自母體血液轉移至胎兒血液。絨毛膜由兩層組成：由滋胚層形成之外層，及由體細胞中胚層形成之內層；羊膜與後者接觸。滋胚層由以下構成：立方形或方形細胞之內層、細胞營養層或郎罕氏(Langhans)層及不含細胞邊界之富含核的原生質外層(融合細胞滋養層)。無血管羊膜黏著於絨毛膜之內層。

如本文所用，「羊膜-絨毛膜」意謂包含羊膜及絨毛膜之產物。在一些實施例中，羊膜與絨毛膜並未分離(亦即，羊膜天然黏著於絨毛膜之內層)。在一些實施例中，羊膜最初與絨毛膜分離且稍後在處理期間與絨毛膜合併。

如本文所用，「臍帶」意謂將發育胎兒與胎盤連接之器官。臍帶由花頓氏膠(Wharton's jelly)構成，花頓氏膠為基本上由黏多醣製成之膠狀物質。其含有一個將含氧、富含營養物之血液攜帶至胎兒的靜脈及兩個帶走經脫氧、缺乏營養物之血液的動脈。

如本文所用，「胎盤羊膜」(PAM)意謂源於胎盤之羊膜。在一些實施例中，PAM實質上經分離。

如本文所用，「臍帶羊膜」(UCAM)意謂源於臍帶之羊膜。UCAM為半透明膜。UCAM具有多層：上皮層；基底膜；緻密層；成纖維細胞層；及海綿層。其缺乏血管或直接血液供應。在一些實施例中，UCAM實質上經分離。在一些實施例中，UCAM包含花頓氏膠。在一些實施例中，UCAM包含血管及/或動脈。在一些實施例中，UCAM包含花頓氏膠及血管及/或動脈。

「實質上經分離」或「經分離」意謂胎兒扶持組織產物已與源於原始來源生物體之非所需物質(例如紅血球、血管及動脈)分離。純度或「分離」可藉由標準方法來分析，且將通常為至少約10%純，更通常至少約20%純，一般至少約30%純，且更一般至少約40%純；在其他實施例中至少約50%純，或更常至少約60%純；在其他實施例中，至少約95%純。

如本文所用，「生物活性」意謂多肽及多醣之活性。在一些實施例中，多肽及多醣之活性可見於臍帶(及實質上經分離之臍帶)、UCAM (及實質上經分離之UCAM)、胎盤(及實質上經分離之胎盤)、PAM (及實質上經分離之PAM)、絨毛膜(及實質上經分離之絨毛膜)或羊膜-絨毛膜(及實質上經分離之羊膜-絨毛膜)中。

如本文所用，生物活性或結構完整性之實質性保存意謂當與未經處理組織之生物活性及結構完整性相比時，胎兒扶持組織產物之生物活性及結構完整性僅降低約5%、約10%、約15%、約20%、約25%、約30%、約35%、約40%、約50%、約60%。

術語「新鮮」係指出生後不到10天之組織，且與出生後的形態實質上相同。

術語「個體(subject)」及「個體(individual)」可互換使用。如本文所用，兩個術語意謂任何動物，較佳哺乳動物，包括人類或非人類。術語患者、個體及個體可互換使用。任一術語都不應解釋為需要醫學專業人員(例如醫生、護士、醫師助理、護理員、臨終關懷工作者)之監督。

如本文所用，術語「治療(treat)」、「治療(treating)」或「治療(treatment)」包括緩解、緩和或改善疾病或病況症狀；預防其他症狀；改善或預防症狀之根本代謝原因；抑制疾病或病況，例如阻止疾病或病況之發展；減輕疾病或病況；引起疾病或病況消退；減輕疾病或病況所引起之病況；或預防性及/或治療性遏止疾病或病況之症狀。 實例 實例 1 . 處理方法

圖 1展示流程圖，說明處理本文所揭示之胎兒扶持組織之方法的實例。自供體採集胎兒扶持組織-羊膜及臍帶-且清潔。清潔後之羊膜及臍帶用FreezerMill低溫粉碎用於提取。經低溫粉碎羊膜及臍帶在注射用水中提取。將提取物離心以移除大的組織粒子。隨後藉由在4℃下以20 rpm混合30 min，以2之稀釋因子用注射用水稀釋羊膜及臍帶。接著，在鹽水中稀釋之提取物用0.45 µm過濾器，隨後0.2 µm過濾器過濾。 實例 2 . 提取時間對蛋白質回收之作用

分別在鹽水中依序提取經低溫粉碎之羊膜(「AM」)及臍帶(「UC」)組織持續1小時(h)、2 h或3 h，且將相應集結粒用6M GnHCl/PBS提取24小時。

處理且低溫粉碎來自供體之AM及UC。使用管旋轉器以20 rpm在4℃下以1: 4(w/v，g/ml)之比率在鹽水中提取經低溫粉碎之AM/UC持續1、2或3 h(n=2)以產生MAU/鹽水提取物。在4℃下以48,000 g離心30分鐘之後，自上清液收集MAU/鹽水提取物。剩餘集結粒用鹽水(10 ml鹽水/1 g集結粒)洗滌2次且以20 rpm在4℃下以1: 4(w/v，g/ml)比率用6M GnHCl/PBS與PI(10 mM EDTA，2 mM PMSF)提取24 h。在4℃下以48,000 g離心30 min之後收集GnHCl提取物。用HA分析測試MAU/鹽水提取物及6M GnHCl提取物兩者之HA含量、用BCA分析測試總蛋白質且用西方墨點分析測試HC-HA/PTX3含量。以上提取中之效率藉由可在MAU/鹽水提取物中獲得之物質及/或在6 M GnHCl提取物中留下之物質來測定。

表1概述HA及總蛋白質之總回收率。結果顯示，回收率在1 h之後達成82.8±0.7%總HA且隨著提取時間進一步增加至2 h或3 h未增加(所有p＞0.05相對於1h)。在鹽水中提取1 h亦達成總蛋白質之9.5±0.1%回收率，其不會隨提取時間之進一步增加而增加(所有p＞0.05相對於1 h)。因此，鹽水中之提取時間最佳化為1小時。 表 1.具有不同提取時間之提取物中之總HA及蛋白質

HA	MAU/ 鹽水 (n=2)	MAU/GnHCl (n=2)
HA (µg/g潤濕)	總計 %	HA (µg/g潤濕)	總計 %
1	鹽水1 h	1051 ± 123	82.8 ± 0.7	217 ± 14	17.2 ± 0.7
2	鹽水2 h	1022 ± 66	83.1 ± 1.9	207 ± 15	16.9 ± 1.9
3	鹽水3 h	1105 ± 250	82.9 ± 2.5	224 ±12	17.1 ± 2.5
蛋白質	蛋白質 (µg/g濕潤)	總計 %	蛋白質 (µg/g濕潤)	總計 %
1	鹽水1 h	137 ± 2	9.5 ± 0.1	1305 ± 7	90.5 ± 0.1
2	鹽水2 h	128 ± 40	8.5 ± 3.1	1389 ± 117	91.5 ± 3.1
3	鹽水3 h	130 ± 1	9.1 ± 0.9	1303 ± 132	90.9 ± 0.9

結果展示，鹽水提取物示出在藉由HA酶消化HA之後自保留在加載孔(loading well)中的HMW HC-HA/PTX3釋放之強80 kDa HC1及HMW PTX3塗片，而GnHCl提取物在加載孔中在不含HMW HC-HA/PTX3之情況下HA酶消化之後僅示出弱HC1及PTX3塗片( 圖 2A 至 2B)。此結果強有力地表明大部分HC-HA/PTX3在1 h之後由鹽水提取。 實例 3 . 離心時間對蛋白質回收之作用

在鹽水中提取經低溫粉碎AM/UC組織1 h且以不同速率離心(亦即14,000 rcf、10,000 rcf、3200 rcf及48,000 rcf(作為對照))。

結果展示於表2中。在3200 rcf下離心產生懸浮於溶液中之可見粒子且在30 min之後沈降。在10,000 rcf下離心亦注意到類似可見粒子，但量較少，而在14,000 rcf及48,000 rcf下未注意到。集結粒在鹽水中洗滌2次且接著在4℃下用6 M GnHCl/PBS以1: 4(w/v，g/ml)提取24 h；在4℃下以48,000 g離心30 min之後收集上清液用於分析。測試兩種上清液用於西方墨點分析。以上離心中之效率藉由可在鹽水提取物中獲得之物質及/或在6 M GnHCl提取物中留下之物質來測定。

結果表明，以14,000 rcf或更高速度進行離心可用於製備上清液用於進一步製備臍帶/羊膜胎兒扶持組織產物(「MAU」)。概述於表2中之HA及蛋白質之生物化學定量及對HC-HA/PTX3之西方墨點分析( 圖 3A 至 3B)進一步支持此觀點，其展示在不同速度下離心不影響提取物中HA、蛋白質及HC-HA/PTX3之含量。 表 2.具有不同離心速度之提取物中之總HA及蛋白質

HA	MAU/ 鹽水 (n=2)	MAU/GnHCI (n=2)
HA (µg/g 濕潤 )	總計 %	p 值相對於對照	HA (µg/g 濕潤 )	總計 %	p 值相對於對照
鹽水 48,000 rcf(對照 )	1280 ± 116	88 ± 0.4	N/A	167 ± 50	12 ± 0.04	N/A
鹽水 14,000 rcf	1296 ± 30	88 ± 0.002	0.882	180 ± 8	12 ± 0.002	0.773
鹽水 10,000 rcf	1261 ± 55	87 ± 0.001	0.856	182 ± 8	13 ± 0.001	0.744
鹽水 3,200 rcf	1293 ± 155	90 ± 0.02	0.93	147 ± 7	10 ± 0.02	0.677
蛋白質	蛋白質 (µg/g 濕潤 )	總計 %	p 值相對於對照	蛋白質 (µg/g 濕潤 )	總計 %	p 值相對於對照
鹽水 48,000 rcf ( 對照 )	279 ± 9	15 ± 0.1	N/A	1598 ± 183	85 ± 0.02	N/A
鹽水 14,000 rcf	322 ± 18	16 ± 0.003	0.134	1657 ± 125	84 ± 0.002	0.746
鹽水 10,000 rcf	318 ± 15	16 ± 0.01	0.109	1706 ± 54	84 ± 0.01	0.555
鹽水 3,200 rcf	374 ± 18	20 ± 0.003	0.045	1530 ± 105	80 ± 0.003	0.702

實例 4 . 賦形劑對蛋白質回收之作用

製備經低溫粉碎之MAU且在三種不同賦形劑中提取。表3概述在三種不同賦形劑中製備之MAU，亦即MAU/鹽水、MAU/WFI及MAU/SW的HA及總蛋白質之生物化學定量資料。WFI提取之HA與鹽水提取之HA相當(p ＞ 0.05)，蛋白質檢測不到。留在集結粒中之HA及蛋白質可仍藉由GnHCl提取。相比之下，與鹽水及WFI(兩者p ＜ 0.05)相比，SW提取之HA較少，蛋白質檢測不到。此等結果表明，SW作為MAU製備之賦形劑不可接受。

HA尺寸分佈之瓊脂糖凝膠分析證實WFI提取之HA量及尺寸與鹽水類似，但與鹽水及WFI相比，SW不僅提取更少HA且亦提取更低MW HA( 圖 4)。使用西方墨點法進一步分析，其用於半定量且評估HC-HA/PTX3之完整性，展示與鹽水一樣，WFI成功地提取大部分HC-HA/PTX3；然而，SW僅提取少數HC-HA/PTX3，其中一些降解( 圖 5A 至 5B)。此結果表明WFI提取可與鹽水類似的HC-HA/PTX3，但SW提取更少且破壞之HC-HA/PTX3。總體而言，可自以上資料得出結論，鹽水及WFI兩者為MAU之可接受賦形劑，但SW不可接受。 表 3 .依序鹽水、WFI或SW及GnHCl提取物中之總HA及蛋白質

HA	MAU (n=2)	GnHCI (n=2)	總計 HA (µg/g 濕潤 )	p 值相對於鹽水 (vs WFI)
HA (µg/g 濕潤 )	總計 %	p 值相對於鹽水 (vs WFI)	HA (µg/g 濕潤 )	總計 %	p 值相對於鹽水 (vs WFI)
鹽水	1240 ± 2	90 ± 0.001	N/A	139 ± 6	10 ± 0.003	N/A	1379 ± 4	N/A
WFI	1139 ± 58	81 ± 0.01	0.243	265 ± 4	19 ± 0.01	0.003	1404 ± 53	0.627
SW	251 ± 20		0.009 (0.016)	842 ± 0.2	77 ± 0.01	0.001 (0.002)	1086 ± 30	0.042 (0.033)
蛋白質	蛋白質 (µg/g 濕潤 )	總計 %	p 值相對於鹽水 (vs WFI)	蛋白質 (µg/g 濕潤 )	總計 %	p 值相對於鹽水 (vs WFI)	蛋白質 (µg/g 濕潤 )	p 值相對於鹽水 (vs WFI)
鹽水	130 ± 9	8 ± 0.01	N/A	1514 ± 68	92 ± 0.03	N/A	1645 ± 41	N/A
WFI	不可偵測	0 ± 0	N/A	1950 ± 21	100 ± 0	0.051	1950 ± 21	0.06
SW	不可偵測	0 ± 0	N/A	1938 ± 89	100 ± 0	0.038 (0.88)	1938 ± 89	0.075 (0.88)

實例 5 . 終端滅菌方法對蛋白質回收之作用

為確定是否可藉由γ照射進行終端滅菌，在鹽水、WFI或SW中製備胎兒扶持組織-羊膜及臍帶-且在乾冰中進行終端滅菌以減少已知γ照射之潛在不良作用。在室溫下以1: 4(w/v)比率將AM及UC在鹽水、WIF或SW中摻合，其中摻合速度設定為高速15秒隨後低速15秒，總共六個高速/低速循環，在4℃下以3,200 g離心30分鐘，且用200 µm篩網過濾以收集相應上清液，分別為MAU/鹽水、MAU/WIF或MAU/SW。

在有或沒有乾冰的情況下，以25±10% kGy之劑量對MAU/鹽水、MAU/WIF及MAU/SW進行γ照射。測試未滅菌及滅菌樣品用於HA分析、BCA分析、瓊脂糖凝膠分析、考馬斯藍分析及西方墨點分析。

表4概述MAU/鹽水、MAU/WFI及MAU/SW之HA及總蛋白質之生物化學定量。結果展示，在有或沒有乾冰的情況下γ照射之後，相比於無γ照射，MAU/鹽水及MAU/WFI中之HA顯著降低至不可偵測或極低水準(p＜0.05)。三種MAU中之總蛋白質在γ照射之後，尤其在沒有乾冰的情況下大大增加。增加之蛋白質水準可源於藉由γ照射降解後之蛋白質片段(參見 圖 7A 至 7B考馬斯藍分析)。此結果指示γ照射誘發MAU中HA及蛋白質之破壞。此研究結果係藉由用於HA尺寸分佈之瓊脂糖凝膠分析( 圖 6)及用於蛋白質分佈之考馬斯藍分析( 圖 7A 至 7B)證實，其分別展示在γ照射之後HA或蛋白質之完全(沒有乾冰)或不完全(有乾冰)降解。 表 4. γ照射之後MAU中之HA及蛋白質含量A1、B1及C1，儲存在4℃下。A2、B2及C2，儲存在-80℃下。

MAU	HA (µg/ml)	p 值 相對於A1 、B1 或C1	蛋白質 (µg/ml)	p 值 相對於A1 、B1 、C1
MAU/鹽水(A)	A1	215.0 ± 21.2	N/A	69.1 ± 0.6	N/A
A2	215.3 ± 8.0	0.493	79.6 ± 8.7	0.115
A3	不可偵測	N/A	621.6 ± 94.0	0.007
A4	不可偵測	N/A	107.5 ± 1.5	0.0004
MAU/WFI (B)	B1	246.7 ± 0.07	N/A	不可偵測	N/A
B2	261.6 ± 7.5	0.054	不可偵測
B3	不可偵測	N/A	481.3 ± 63.0	N/A
B4	47.7 ± 4.0	0.0001	不可偵測	N/A
MAU/SW (C)	C1	不可偵測	N/A	不可偵測	N/A
C2	不可偵測	不可偵測
C3	不可偵測	97.4 ± 66.3	N/A
C4	不可偵測	0.79 ± 4.0	N/A

為確定MAU中之HC-HA/PTX3是否藉由γ照射降解，用MAU/鹽水及MAU/WFI進行西方墨點分析。結果顯示在γ照射之後無HC-HA/PTX3複合物存在於MAU中( 圖 8A 至 8D)，表明γ照射亦在兩種MAU中誘發HC-HA/PTX3之破壞。總之，由於MAU/鹽水、MAU/WFI及MAU/SW中HA、蛋白質及HC-HA/PTX3之降解，藉由γ照射進行之終端滅菌無法應用於MAU。 實例 6 . 過濾滅菌及稀釋對蛋白質回收之作用

藉由經由0.45 µm過濾器預過濾，隨後0.2 µm過濾器，使胎兒扶持組織產物經歷膜過濾滅菌。為了減少過濾器堵塞且增加MAU之回收率，吾等亦比較過濾之前未稀釋及連續稀釋之MAU。藉由進行以上分析來比較稀釋或無稀釋之未經過濾(作為對照)及所有經過濾MAU。

使AM及UC低溫粉碎，在4℃下以1: 4(w/v)比率在鹽水或WFI中提取1 h，在4℃下以48,000 g離心30 min且收集相應上清液。藉由在4℃下以20 rpm混合30 min用相應鹽水或WFI以1.5、2.0或2.5之稀釋因子稀釋MAU/鹽水及MAU/WIF。用0.45 µm過濾器，隨後0.2 µm過濾器過濾有或沒有稀釋之MAU/鹽水及MAU/WIF。測試有或沒有稀釋之未經過濾及經過濾MAU/鹽水及MAU/WIF用於HA分析、BCA分析、瓊脂糖凝膠分析及西方墨點分析。

表5概述在用0.45 µm及0.2 µm過濾器依序過濾之後，MAU/鹽水及MAU/WFI之HA及總蛋白質之生物化學定量。結果展示無稀釋之MAU/鹽水及MAU/WFI之過濾分別具有91%及83% (MAU/鹽水)或96%及72% (MAU/WFI)之HA及總蛋白質之回收率，且MAU/鹽水或MAU/WFI稀釋1.5倍、2倍或2.5倍與未經稀釋的相比，HA及總蛋白質之回收率未展示任何差異(所有p＞0.05)。此結果表明，過濾有或沒有稀釋之MAU/鹽水及MAU/WFI對HA或總蛋白質之回收率沒有影響，且HA及總蛋白質之回收對於MAU製備為可接受的。然而，如所預期，藉由增加稀釋倍數來增加過濾速度，經稀釋之MAU優於未經稀釋之MAU。 表 5 .過濾之後MAU/鹽水及MAU/WFI中HA及蛋白質之回收

樣品	稀釋因子	預過濾	後過濾
HA (µg/m)	蛋白質 (µg/ml)	HA (µg/ml)	蛋白質(µg/ml)	回收(%)
HA	p相對於未經稀釋	蛋白質	p相對於未經稀釋
MAU / 鹽水	未經稀釋	-	273 ± 61	84 ±13	246 ±39	69 ± 2	91 ± 6	N/A	83 ± 10	N/A
經稀釋	1.5	182 ± 41	56 ± 9	150 ± 25	46 ± 3	83 ± 5	0.278	83 ± 8	0.958
2.0	136 ± 30	42 ± 7	146 ± 29	35 ± 3	100 ± 2	0.058	85 ± 6	0.847
2.5	109 ± 24	34 ± 5	106 ± 1	29 ± 5	99 ± 21	0.337	87 ± 1	0.627
MAU/ WFI	未經稀釋	-	225 ± 35	54 ± 5	215 ± 0.4	39 ± 6	96 ± 1	N/A	72 ± 3	N/A
經稀釋	1.5	150 ± 23	36 ± 4	140 ± 16	27 ± 6	93 ± 10	0.811	77 ± 8	0.605
2.0	112 ± 18	27 ± 3	106 ± 4	24 ± 6	95 ± 4	0.792	89 ± 10	0.283
2.5	90 ± 14	22 ± 2	87 ± 9	22 ± 6	96 ± 11	0.939	100 ±14	0.238

過濾後稀釋或未稀釋之MAU的瓊脂糖凝膠分析表明，與未經過濾之MAU相比，所有過濾之MAU及稀釋之MAU(1.5至3倍)中存在相似量的HMW HA( 圖 9)，表明HMW HA在過濾與稀釋(1.5至3倍)後保存在MAU中。類似地，稀釋或未稀釋之MAU的西方墨點分析展示在所有經過濾之MAU中存在HC-HA/PTX3且在稀釋後增加( 圖 10A 至 10D)，表明HC-HA/PTX3在過濾之後亦保存且在稀釋後增加。總體而言，過濾滅菌對於MAU終端滅菌為可行的。過濾稀釋2倍至2.5倍之MAU比過濾未經稀釋之MAU更好，增加HMW HA及HC-HA/PTX3之速度及回收但不影響HA及總蛋白質之回收率。 實例 7 . 過濾滅菌及稀釋對蛋白質回收之作用

因為MAU需要凍乾以獲得更高濃度HA，隨後適合於ODI-TRAP，所以針對水進行透析作為適用於MAU/鹽水以移除鹽之方法的一個步驟為必要的，鹽會干擾TRAP分析。先前資料展示在存在或不存在0.5 mM PMSF下針對水透析MAU/鹽水48 h可完全移除鹽。然而，如瓊脂糖及西方墨點分析所表明，較長透析時間可在PMSF存在或不存在下引起HA及HC-HA/PTX3降解。

使來自一個供體的AM及UC低溫粉碎，在4℃下以1: 4(w/v)比率用鹽水提取1 h，在4℃下以48,000 g離心30 min且收集上清液作為MAU/鹽水。

用鹽水稀釋MAU/鹽水(2倍)。未經稀釋及經稀釋之MAU/鹽水均經0.45 µm過濾器及0.2 µm過濾器依序過濾。

使用≥200倍樣品體積之透析緩衝液(水)體積且每一小時換水直至隔夜持續24 h，在不存在PMSF下用3.5k MWCO Slide-A-Lyzer G2透析卡匣在4℃下針對水透析稀釋或未稀釋之過濾MAU/鹽水持續1、3、6或24 h。用氯化物分析測試經透析MAU/鹽水以測定藉由透析移除鹽之效率。

表6概述在不同透析時間藉由透析移除鹽之程度。結果展示，透析3 h自非經稀釋及經稀釋之MAU/鹽水移除99%氯化物，而透析6 h達到與透析24 h相同之脫鹽作用。因此，可以確定透析時間可減少至3 h且3至6 h之透析對於MAU/鹽水之有效脫鹽為可接受的。 表 6 .透析之前及之後MAU/鹽水中之氯化物濃度

MAU/ 鹽水	未經稀釋之 MAU/ 鹽水	經稀釋之 MAU/ 鹽水
氯化物(mg/dl)	氯化物之移除(%)	p值相對於24 h	氯化物(mg/dl)	氯化物之移除(%)	p值相對於24 h
未經透析	548.8 ± 26	/	/	500.5 ± 17	/	/
經透析	1 h	22.7 ± 1.9	95.9	0.039	32.3 ± 2.1	93.5	0.028
3 h	4.2 ± 0.4	99.2	0.026	4.6 ± 0.1	99.1	0.005
6 h	1.2 ± 0.2	99.8	0.189	1.3 ± 0.03	99.7	0.210
24 h	0.8 ± 0.1	99.9	/	0.9 ± 0.2	99.8	/

在三個效價分析，亦即ODI-TRAP分析、M2分析、NO分析及/或WST-1分析中比較適於稀釋或不稀釋2倍的MAU/水或MAU/鹽水之方法。

使來自相同供體的AM及UC低溫粉碎，在4℃下以1: 4(w/v)比率在鹽水中提取1 h，在4℃下以48,000 g離心30 min且收集上清液作為MAU/鹽水及MAU/WFI。MAU/鹽水及MAU/WFI不稀釋或用相應賦形劑稀釋(2倍)，且依序用0.45 µm過濾器及0.2 µm過濾器過濾。經過濾之MAU/鹽水在4℃下未經透析或針對水透析3至6 h以移除鹽。

測試所有MAU/鹽水及MAU/WFI樣品用於HA分析。將MAU/鹽水及MAU/WFI凍乾或未凍乾且在ODI-TRAP分析、M2分析、NO分析及/或WST-1分析中測試，其中所有三個分析之細胞培養基體積設定在100 µl。藉由顯微圖像記錄細胞形態。在各分析中，在50、100、300及500 µg/ml之HA劑量下測試凍乾樣品。未凍乾樣品只能在50 µg/ml之HA劑量下進行測試，因為較高劑量之HA(例如，≥ 100 µg/ml)會導致100 µl的培養基體積不成比例地減少，從而使細胞分析無效。

表7概述針對三個分析展現劑量依賴性線性之樣品，而 圖 12說明針對三個分析之劑量依賴性線性。結果表明：

1. 在不凍乾之情況下，可測試之最高HA濃度為50 μg/mL，其仍導致細胞破壞，因此仍不適用於所有三個分析。

2.  MAU/鹽水之透析為必需的，因為在不透析之情況下，在所有三個分析中細胞由於高鹽而展現形態變化及細胞毒性。

3. 最低偵測劑量為：a.  TRAP：對於稀釋或未稀釋之透析MAU/鹽水及MAU/WFI為≥300 µg/ml HA。b.  WST-1：對於稀釋或未稀釋之透析MAU/鹽水及MAU/WFI為≥100 µg /ml HA。c. M2：對於稀釋或未稀釋之MAU/WFI為≥300 µg/ml HA。M2不適用於透析MAU/鹽水。

4. 在所有三個分析中，稀釋或未稀釋之MAU/WFI比MAU/鹽水更有效，亦即在相同HA劑量下對TRAP、WST-1及IL-12p40發揮更大程度之抑制或對IL-10促進且展現更好的線性。

5. 經稀釋之MAU/WFI在WST-1及M2中的表現比非經稀釋的更好，具有更好線性。經稀釋與未經稀釋在TRAP中之表現等效，具有類似線性。對於經透析MAU/鹽水，未經稀釋比經稀釋在TRAP中表現更好，具有更好的線性，且未經稀釋與經稀釋在WST-1中之表現等效，具有類似線性。

6. 對於稀釋或未稀釋之MAU/WFI，在最低偵測劑量下，WST-1表現得比TRAP好，TRAP與M2表現等效。關於線性，WST-1在稀釋之情況下表現與M2等效，M2表現得比TRAP好。對於未經稀釋之情況，WST-1表現與TRAP及M2等效。對於稀釋或未稀釋之MAU/鹽水，關於最低偵測劑量及線性，WST-1表現得比TRAP好。 表 7 .在三個效價分析中比較呈現劑量依賴性線性之MAU樣品

樣品	相關係數 (R 2)/ 最低偵測劑量 (LDD)	分析之優越性
TRAP	WST-1	M2 (IL-12 p40)
未經稀釋之透析MAU/鹽水	0.9108 / 300 µg/ml	0.974 / 100 µg/ml	/	線性及LDD：WST-1 ＞ TRAP
經稀釋之透析MAU/鹽水	0.8664 / 300 µg/ml	0.9768 / 100 µg/ml	/	線性及LDD：WST-1 ＞ TRAP
未經稀釋之MAU/WFI	0.9586 / 300 µg/ml	0.9527 / 100 µg/ml	0.9434 / 300 µg/ml	線性：WST-1 = TRAP = M2 LDD：WST-1 ＞ TRAP = M2
經稀釋之MAU/WFI	0.9292 / 300 µg/ml	0.9866 / 100 µg/ml	0.9749 / 300 µg/ml	線性：WST-1 = M2 ＞ TRAP LDD：WST-1 ＞ TRAP = M2

實例 8 ： 處理參數對胎兒扶持組織產物之作用

進行一項研究，測試了以下用於產生顆粒狀羊膜及臍帶胎兒扶持組織胎兒扶持組織產物之製程參數：1)儲存溫度；2)儲存時間；3)用於顆粒化之賦形劑，即鹽水或WFI；及4)終端滅菌(在有或沒有乾冰之情況下γ照射)。

方法

應用了以下製程控制：(1)所使用的胎盤-羊膜(AM)及臍帶(UC)-供體為USP＜61＞獲得培養物報告0集落形成單位(CFU)之人類可移植等級；(2)耗材一次性使用且無菌以確保無交叉污染；(3)所用賦形劑均為新試劑，確保蓋子在使用前密封完好；(4)最終產品容器無菌且不含RNA酶/DNA酶，以消除儲存期間污染之可能性；(5)完成填充及貼標籤後，將最終產品樣品送去進行USP＜71＞無菌測試，以確保基線產物中沒有微生物。

根據兩種賦形劑(亦即，鹽水或WFI)，將來自兩個供體(分別為AM及UC)之組織以濕重再等分成兩組(A及B，參見表8)。針對各組分別用新的摻合杯、錐形管、200 µm過濾器、無菌容器及相關賦形劑進行以下有序的製程步驟：在賦形劑中顆粒化、離心、過濾、調配、分發包裝及終端滅菌。在室溫及3095 rcf(4000 rpm)下離心30 min。所有樣品根據表8儲存。

自各組(A及B)獲取樣品且在t=0時用不少於(No Less Than；NLT)0.6 ml填充至另一獨立無菌15 mL螺帽試管中以便進行無菌性USP＜71＞測試。自各組(A及B)獲取等分試樣，產生四個(4)小組(A1-4及B1-4，參見表8)，得到至少13個樣品/小組(每個小組13個樣品×4個小組×2組=總計104個樣品)且各樣品在15 mL螺帽試管中具有最小4.6 ml填充體積。使用整個MAU製備物每管填充5 ml(亦即超過13個試管)。使用之標籤係防風雨的，含有樣品ID及製造日期。此外，根據表8儲存所有樣品。 圖 12提供詳述所使用之儲存、運輸及終端滅菌步驟的流程圖。 表 8 ：樣品儲存方案

小組	用來顆粒化	儲存	在無乾冰的情況下進行運輸及 γ 照射	在有乾冰的情況下進行運輸及 γ 照射	每個小組樣品之總數目
A1	鹽水	4℃	-	-	13
A2	-80℃	-	-
A3	4℃	+	-
A4	4℃	-	+
B1	WFI	4℃	-	-	13
B2	-80℃	-	-
B3	4℃	+	-
B4	4℃	-	+

在基線(t=0)下，將三(3)個無菌USP＜71＞樣品運輸至合約實驗室VRL進行測試。在用冰包填充之VRL運輸器中運輸樣品。對於組A3及B3，將樣品包裝於Nanocool運輸器中，該Nanocool運輸器經驗證可在8℃維持48至92小時。對於A4及B4組，樣品包裝於具有不少於30磅乾冰(外部)及Corepack之Thermosafe運輸器中。以上樣品由合約運輸商(亦即FedEx)遞送。為監測所維持之溫度，將資料記錄器置放於A3及B3組之運輸容器中。資料記錄器在照射期間移出且在照射之後返回至運輸容器。分析來自資料記錄器之資料以展現運輸期間之溫度。乾冰在−78.5℃昇華且因此對於A4及B4組，藉由目視檢驗乾冰之存在來判斷樣品之-80℃溫度控制，且在運輸之後稱重殘餘乾冰，僅供參考。藉由Sterigenics以25±10% kGy之劑量，根據以下排程進行γ照射。 ●  星期一-樣品之裝運 ●  星期二-接收運輸物且γ照射程序 ●  星期三-完成γ照射且處理返回文書 ●  星期四-返回樣品

樣品經歷分析測試，包括無菌性USP＜71＞測試，其中在製造之後立即測試每組(A及B)一個樣品，然後儲存，亦即t=0。樣品經歷BCA、HA、瓊脂糖凝膠分析、西方墨點及ODI-TRAP測試。來自A及B之各小組的三個樣品(n=3)在t=0時經歷此等測試，且來自A1/A2及B1/B2之各小組的三個樣品(n=3)在t=1、3及6個月時經歷此等測試。另外，來自各小組之三個樣品(n=3)在已照射、運回且儲存於相關溫度中之後，在t=1、3及6個月經歷此等測試，如小組A3/A4及B3/B4所詳細說明。

結果

無菌性USP＜71＞測試產生以下結果： ●  A組＜71＞最終不生長。 ●  B組＜71＞最終不生長。

關於HA分析，對於A組(鹽水)，在t=3 m時，A1及A2(分別為4℃或-80℃，對照組，在無γ照射之情況下)顯示HA濃度相較於基線及彼此之間無差異，而A4(在具有乾冰的情況下γ照射後)HA濃度不可偵測，如t=1個月時所見(表9)。對於B組(WFI)，B1及B2(分別為4℃或-80℃，對照組，在無γ照射之情況下)顯示HA濃度相較於基線及彼此之間無差異，而B4(在具有乾冰的情況下γ照射後)顯示相比於基線且相較於對照組(B2，表9)之顯著降低，此與t=1 m時所見之降低趨勢一致。

關於總蛋白質分析：對於A組(鹽水)，在t=3 m時，A1與A2(分別為4℃或-80℃，對照組，在無γ照射之情況下)兩者中之蛋白質濃度不可偵測，而濃度在t=1 m及基線時可偵測(表9)。A4(在具有乾冰的情況下γ照射後)與基線相比無統計學差異。對於B組(WFI)，B1及B2(分別為4℃或-80℃，對照組，在無γ照射之情況下)不可偵測，如t=1 m及基線時所見。樣品B4(在具有乾冰的情況下γ照射後)蛋白質為不可偵測的，如t=1 m時所見(表9)。 表 9：在t=3個月時MAU A組及B組中之HA及蛋白質濃度(平均值±標準差)

MAU A 組	t=0 ( 基線 )	A 小組	t=1 m	t=3 m	p 值相對於 t = 0	p 值相對於 A1
HA (μg/ml)	239.4 ± 16.7(218.5 ± 13.7)	A1	215.0 ± 21.2 (183.2 ± 14.7)	250.6 ± 21.8(227.9 ± 19.3)	0.606 (0.621)	N/A
A2	215.3 ± 8.0 (183.8 ± 4.6)	257.0 ± 16.9(233.6 ± 15.1)	0.358 (0.369)	0.775 (0.776)
A3	不可偵測	[1]	N/A	N/A
A4	不可偵測 (11.7 ± 2.4)	不可偵測(10.4± 1.4)	N/A (0.001)	N/A (0.039)
蛋白質 (μg/ml)	85.7 ± 5.6(86.7 ± 3.6)	A1	69.1 ± 0.6 (82.2 ± 0.4)	不可偵測(73.0 ± 1.0)	N/A (0.015)	N/A
A2	79.6 ± 8.7 (89.0 ± 5.6)	不可偵測(74.9 ± 1.9)	N/A (0.018)	N/A (0.364)
A3	621.6 ± 94.0	[1]	N/A	N/A
A4	107.5 ± 1.5 107.4 ± 1.0	27.2 ± 12.0(95.0 ± 6.9)	0.06 (0.311)	N/A (0.134)
MAU B 組	t=0 (基線)	B小組	t=1 m	t=3 m	p 值相對於 t = 0	p 值相對於B1
HA (μg/ml)	216.0 ± 2.6(199.3 ± 2.2)	B1	246.7 ± 0.07 (220.3 ± 0.1)	160.9 ± 25.3(151.1 ± 19.6)	0.198 (0.176)	N/A
B2	261.6 ± 7.5 (231.4 ± 5.7)	185.3 ± 7.6(170.0 ± 6.0)	0.09 (0.071)	0.392 (0.39)
B3	不可偵測	[1]	N/A	N/A
B4	47.7 ± 4.0 (70.8 ± 2.9)	25.5 ± 8.6(45.7 ± 7.1)	0.014 (0.014)	0.06 (0.029)
蛋白質 (μg/ml)	不可偵測(30.1 ± 1.0)	B1	不可偵測 (不可偵測)	不可偵測(31.0 ± 3.3)	N/A (0.766)	N/A
B2	不可偵測 (不可偵測)	不可偵測(33.2 ± 0.7)	N/A (0.027)	N/A (0.513)
B3	481.3 ± 63.0	[1]	N/A	N/A
B4	不可偵測 (不可偵測)	不可偵測(44.8 ± 1.7)	N/A (0.022)	N/A (0.056)

關於瓊脂糖凝膠分析( 圖 13A 至 13F)，對於A1、A2、B1及B2樣品之每個泳道，加載相同量之10 µg HA。對於A4及B4樣品之每個泳道，由於A4及B4 HA濃度低，分別裝載與10 µg HA A1或B1相同的量。泳道1具有50及601 kDa標記且泳道17具有12 kDa標記(分離50及12 kDa以更清晰區別) ( 圖 13C)。t=3 m時A組(鹽水，未經透析)及B組(WFI)對照樣品(在無γ照射之情況下)(A1、A2及B1、B2， 圖 13F，泳道3至6及泳道9至12)兩者均展示與其相關基線樣品( 圖 13E，對於A組及B組分別為泳道3至5及泳道6至8)中所見相同的HA分佈型態，且γ照射乾冰樣品(A4及B4)展示與在t=1個月時相關樣品( 圖 13B及 13E，A組及B組，分別為泳道9至10及泳道17至18)中所見相同之HA型態( 圖 13F ，A組及B組，分別為泳道7-8及泳道13-14)。總體而言，T=3時之HA強度比T=1時之HA強度弱。此係歸因於HA分佈變化抑或凝膠染色差異仍未知。

對於庫馬斯藍染色分析( 圖 14A 至 14B)，對於A組(鹽水，圖14A)，取決於是否存在可量測HA，在各加載孔中加載20 µg HA或相同量。對於B組(WFI， 圖 14B)，加載40 µg HA或相同量。當比較A組(A1及A2)中之對照樣品與B組(B1及B2)中之對照樣品時，均展示類似型態，在HA酶消化之後亦是如此。在HA酶及DTT處理後，兩組泳道底部都有低於50 kDa的塗片。對於兩組，均未注意到儲存溫度(4℃相對於-80℃)存在差異。在無乾冰之情況下γ照射後(A3及B3)在37及20 kDa處展示兩個條帶。在有乾冰之情況下γ照射後(A4及B4)且不經處理對於兩者展示自凝膠之頂部至約30 kDa的塗片。在HA酶消化之後，兩組均展示20 kDa 37 kDa之兩個條帶(在B組中出人意料地更明顯)，在凝膠頂部具有模糊的塗片。在HA酶及DTT處理後，兩組均展示20 kDa條帶。一致地，B組塗片比A組模糊。

關於西方墨點分析( 圖 15A 至 15J)，A1、A2、B1及B2之樣品以10 µg HA加載於各加載孔中，且A4及B4之樣品分別以與10 µg HA A1或B1相同的量加載。相比於基線處之相關樣品( 圖 15A及 圖 15B)，具有或不具有HA酶或HA酶/DTT處理之在無γ照射之情況下A組及B組之樣品(A1、A2、B1及B2)分別展示相同HC1( 圖 15G及 圖 15H)及PTX3( 圖 15I及 圖 15J)型態。相比於t=1 m時之相關樣品( 圖 15C 、 15D 、 15E及 15F)，具有或不具有HA酶或HA酶/DTT處理之在γ照射之情況下的A組及B組樣品(A4及B4)分別展示相同HC1( 圖 15G及 圖 15H)及PTX3( 圖 15I及 圖 15J)型態。

圖 16A顯示基線(t=0)時之MAU A組(鹽水)及B組(WFI)之細胞形態。 圖 16B展示t=1個月時MAU A組及B組之細胞形態。陽性對照展示與陰性對照相比之多核破骨細胞形成。以5 μg/ml HA加載之參考標準(RS)抑制多核破骨細胞的形成(圖16A及16B)。MAU A組及B組在基線(圖16A)及t=1個月(圖16B)時以300及500 µg/ml HA顯著抑制多核破骨細胞形成。

圖 17A至 17E展示TRAP分析之結果。陽性對照展示與陰性對照相比高的TRAP活性(p ≤0.05)，且以5 µg/ml HA加載之參考物質(RM)顯著抑制TRAP活性(p ≤ 0.05)，由此驗證分析(圖17A至17E)。 圖 17A，在有或沒有PMSF的情況下透析之MAU(鹽水)在所有濃度下顯著抑制TRAP活性(p ≤ 0.05)，而在PMSF存在或不存在下透析之鹽水不影響TRAP活性，從而確認藉由透析移除鹽。 圖 17B，在沒有PMSF的情況下透析之MAU(鹽水)展示TRAP活性之抑制(p ≤ 0.05)，但當自兩個供體在有PMSF的情況下透析時展示TRAP活性之促進(p ≤ 0.05)。 圖 17C，MAU A組(鹽水)展示在100及/或300 µg/ml HA下TRAP活性之促進(p ≤ 0.05)但沒有抑制活性，而MAU B組(WFI)展示TRAP活性的劑量依賴性顯著抑制(p ≤ 0.05)但沒有促進。 圖 17D，儲存在4℃(A1)或-80℃(A2)之MAU A組(鹽水)展示在300及/或500 µg/ml HA下促進TRAP活性(p ≤ 0.05)但沒有抑制活性。在無乾冰之情況下γ照射的MAU A組(A3)展示TRAP活性之抑制(p ≤ 0.05)，但在有乾冰的情況下γ照射(A4)展示TRAP活性之促進但沒有抑制活性。 圖 17E，儲存在4℃(B1)或-80℃(B2)或在無乾冰之情況下γ照射(B3)或在有乾冰之情況下γ照射(B4)之MAU B組(WFI)均展示在300及/或500 µg/ml HA(p ≤ 0.05)下TRAP活性之抑制，其中在B1、B2及B4中在100 µg/ml HA下促進TRAP活性(p ≤ 0.05)。*p ≤ 0.05 相對於陽性對照，TRAP抑制。#p  ≤ 0.05相對於陽性對照，TRAP促進。 結果分析

關於在4℃下相對於在-80℃下之儲存，A組(A1及A2)及B組(B1及B2)之對照樣品關於HA(數量及品質)及HC-HA/PTX3複合物存在穩定性，除了以下例外：HA濃度在A組及B組中穩定，沒有在t=1 m時組B中所見之HA濃度增加。HA在A組而非B組中伴隨著硫酸軟骨素，如基線及t=1 m時所見。此等結果表明HA在樣品儲存期間維持3個月，且在儲存溫度之間不存在差異(4℃相對-80℃)。瓊脂糖凝膠結果表明，A組及B組中之HA MW分佈在4℃或-80℃下儲存長達3個月的情況下無變化，此與HA分析結果一致。A組中之蛋白質在4℃及-80℃下不可偵測。對於A組，t=3 m結果與t=1 m及基線不一致，但對於B組，不可偵測之蛋白質濃度與t=1 m及基線結果一致。根據基線可見之相關處理，組A及B維持HA、HC-HA、HC1及PTX3型態，支持三個月之穩定性且指示HC-HA/PTX3複合物之存在。

關於γ照射，在無乾冰之情況下(A3及B3)，如藉由考馬斯藍分析，蛋白質條帶(在t=1 m測試)明顯減少。樣品之瓊脂糖凝膠未展示任何HA，表明HA由γ照射完全降解(相比於對照)。另外，西方墨點法未展示HC1或PTX3，指示HC-HA/PTX3複合物未保存。使用乾冰，鹽水(A4)展示HA不可偵測，但蛋白質濃度保持如t=1 m時所見之濃度。WFI(B4)HA濃度與基線相比降低87.2%，且蛋白質濃度保持如t=1 m及基線所見不可偵測。γ照射後結果瓊脂糖凝膠結果與t=1個月時之相關樣品一致，指示穩定性。比較西方墨點樣品(A4及B4，t=3 m)與t=1 m時之樣品，在兩種情況下在相關處理的情況下皆未偵測到HC-HA、HC1及HMW PTX3，表明樣品中無HC-HA/PTX3複合物，與t=1 m結果一致。

關於TRAP分析，在t=1 m時，在無γ照射之情況下鹽水樣品(A1及A2)展示出TRAP促進活性，如基線時所見。在有或沒有乾冰的情況下進行γ照射(A3及A4)之後展示出在基線時未見的抑制活性。在t=1 m時，在無γ照射之情況下的WFI樣品(B1及B2)展示出TRAP抑制活性，如對照及基線時所見。對於組B，使用多項式4計算顯示基線(之前未看到)及t=3 m但並非t=1 m時之蛋白質濃度。

因此，可得出結論，對照樣品(A1、A2、B1及B2)在t=3 m時且如t=1 m及基線時所見保存HC-HA/PTX複合物。γ滅菌後(有乾冰)樣品(A4及B4)在t=3 m時不保存HC-HA/PTX複合物，如t=1 m時所見。γ滅菌後樣品(A3、A4、B3及B4)在未處理之情況下不展示HC-HA或在HA酶及DTT還原之後不展示HC1，但在A4中展示HMW PTX3，指示HC-HA/PTX複合物在t=1 m時未保存。 實例 9 ： MAU 產物之穩定性測試

使用下文所描述及 圖 23中所說明之以下製程製造MAU。使用HA、ODI-TRAP、WST-1、NO及M2分析測試最終產物之穩定性。

步驟 1 ：法規起始物質

將來自接收物之組織處理成法規起始物質。用於法規起始物質之組織製備程序包括清潔、切割及浸泡步驟。

步驟 2 ：原料藥

低溫粉碎。若AM及UC組織先前儲存，則將其解凍。對組織進行稱重且轉移至冷凍研磨瓶中。將封閉小瓶轉移至冷凍磨機，其中將組織低溫粉碎。循環完成後，將粉碎之組織轉移至無菌瓶(提取瓶)。稱重全部粉碎的組織。

提取。以1: 4 w/v組織(公克):注射用水(WFI)(毫升)比率將WFI添加至容納粉碎組織的瓶中。密封充滿的瓶子且轉移至位於2℃至8℃冰箱內部之瓶子旋轉器以提取。提取將在12±6 rpm下進行60±5分鐘。

離心。在提取之後立即將溶液填充至離心管中以用於離心。在14,000 g下使離心機運轉30分鐘。收集上清液且丟棄集結粒。

稀釋。自離心收集之上清液用WFI稀釋至500 ml之最終體積。密封具有500 ml稀溶液之容器且轉移至位於2至8℃冰箱內部之管旋轉器。將溶液在12±6 rpm下混合30±3分鐘。

無菌過濾。使用蠕動泵及過濾總成進行無菌過濾。藉由γ輻射對過濾總成進行滅菌。使用膠囊過濾器在NMT 18 psi下將經稀釋之上清液自稀釋瓶過濾至無菌濾液袋(封閉系統)，其為過濾總成之一部分，該膠囊過濾器在上游側配備有0.65微米移除等級不對稱層且在下游側配備有0.2微米移除等級對稱層。

步驟 3 ： 藥品

填充、密封、標記、包裝及儲存。此程序包括將經過濾原料藥填充至最終產物試管中、密封、貼標籤及儲存最終產物。

此外，總成將進行系統完整性(壓力衰減)、視覺外觀及流體路徑清潔度測試作為實施之常規製程中控制的一部分

單位劑量管經密封。密封UDT之後，其將移出潔淨室，移至受控、非分類房間，其中將管貼標籤及二級包裝及密封。

一旦已藉由漏泄測試發現填充及密封管可接受，則用成品藥品(FDP)批號貼標籤且包裝。目視檢驗標記之視覺缺陷及準確度且調整標籤。產品放行測試將會進行代表抽樣，包括無菌性、內毒素、身分、純度及效價、總填充量及液滴均一性測試。

將最終產物分成三個批次。USP＜71＞無菌測試之結果如下： ●  D1-TGEA19I010-結果為不生長。 ●  D2-GJ19C018RBI-結果為不生長。 ●  D3-TGED19I007-結果為不生長。

表10展示針對供體中之每一者所量測之HA濃度。當使用t檢驗時，展示供體之間的HA濃度具有顯著差異(p＜0.05)，顯示與D3相比，D1及D2具有較低HA濃度。 表 10 ：供體HA濃度

TTBT01	D1	D2	D3
HA (µg/ml)	32.6 ± 1.2	15.2 ± 0.6	48.3 ± 0.9
p 值 相對於供體 3	1.4425E-10	2.00123E-13	N/A

結果

瓊脂糖凝膠分析( 圖 18A 至 18B)展示存在於所有樣品中之HMW HA，其中在D2及D3中HMW＞8000 kDa且在D1中HMW為6000 kDa。紫色LMW條帶(＜30.6 kDa)主要存在於D2中超過D3，但在D1中非常弱，其在先前MAU/WFI中沒有注意到( 圖 18B，泳道9-14)。

HC1之西方墨點分析( 圖 19A 至 19D)未展示HC-HA之解離，此係因為處理之前及HA酶處理之後存在大量游離HC1。所有樣品展示具有HMW PTX3，藉由HA酶處理之解離不明顯，可能由於大量存在。

關於ODI-TRAP分析( 圖 20A 至 20B)，IRM(HC-HA/PTX3)(25 µg/ml)抑制TRAP活性且誘導細胞死亡。另外，來自所有3個供體之樣品(t=0)以500 µg/ml抑制TRAP活性且導致細胞死亡。

關於WST -1分析( 圖 21A 至 21B)，IRM(25 µg/ml)抑制細胞代謝活性且D1及D3以500 µg/ml抑制細胞代謝活性。D2抑制作用產生陰性OD，因此引發偏差。

關於M2分析( 圖 22A 至 22B)，IRM(20 µg/ml)下調IL-12 p40產生，且3個供體以500 µg/ml下調IL-12 p40產生。

關於NO分析( 圖 23A 至 23B)，IRM(20 µg/ml)抑制NO產生，且3個供體以500 µg/ml抑制NO產生，其中供體2及3誘發細胞死亡。

分析

類似於IRM(HC-HA/PTX3)，所有三個TTBT01供體在500 µg/ml HA之負載劑量下展示對ODI-TRAP分析、WST -1分析、M2極化IL-12分析及NO分析之抑制。 實例 10 ： MAU 產物之後繼穩定性測試

使根據實例9製造之MAU樣品經歷重複HA、ODI-TRAP、WST-1及M2分析及t=1、2及3個時間點，如表11中所說明。接著追蹤資料以確定在拉動(pull)時間點之變化百分比。所有批次將在穩定性研究期間以相同方式進行分析。 表 11 ：三個時間點MAU調配物之分析策略

測試	接受準則	-20 ℃ 冷凍器 ( 維持在 - 25 ℃ 至 -10 ℃ 之間)	冰箱 ( 維持在 2 ℃至 8 ℃之間)
初始(T=0)	1	2	3	預留	1	2	3	預留
HA分析	待基於初始T=0資料建立 2	36 mL	36 mL	36 mL	36 mL	2 x 36 mL	36 mL	36 mL	36 mL	2 x 36 mL
ODI-TRAP	待基於初始T=0資料建立 2
M2 (IL-12 p40)	N/A (報告為實驗值 3)
WST-1	N/A (報告為實驗值 3)
瓊脂糖凝膠 5	N/A (報告為實驗值 3)
西方墨點法 5	N/A (報告為實驗值 3)
氧化氮(NO) 5	N/A (報告為實驗值 3)
無菌性	不生長 4	1 mL	0	0	1 mL	2 x 1 mL	0	0	1 mL	2 x 1 mL

實例 12 ：擴大 MAU 之製造規模

使用下文所描述及 圖 24中所說明之以下製程製造MAU。

步驟1：原料至法規起始物質。此步驟涵蓋自組織原料(亦即人類出生組織)之獲取至法規起始物質(RSM)之產生，其由來自單個供體的人羊膜(AM)及臍帶(UC)組織組成。此步驟由供體篩選、採購、接收及檢驗、供體合格性測定、組織清潔、切割及浸泡組成，以產生RSM。

步驟2：原料藥。單一供體之程序與多個供體之程序。此步驟由低溫粉碎、提取、離心及單個供體之目標填充量組成。在實現足夠數目的供體之後，將多個供體共同合併在混合器中以產生合併之原料藥，其可進一步稀釋至不同調配物中以產生原料藥(DS)。

步驟3：藥品。無菌過濾，其中在吹填密封(BFS)設備中進行填充及密封。此步驟以無菌過濾，填充且密封DS至小瓶中開始。將DS以每小瓶2.0 mL之目標填充重量填充至小瓶中。所有密封小瓶都經過目視檢驗是否有缺陷，且在貼標籤前藉由洩漏測試對容器封閉完整性進行取樣。對代表性小瓶進行取樣且測試，以放行。 實例 13 ：治療傷口之方法

將實例1之胎兒扶持組織產物施加至貼片。貼片直接施加至傷口，持續足以治療該傷口的時段。 實例 14 ：治療椎間盤突出之方法

將實例1之胎兒扶持組織產物調配為注射劑。在椎間盤突出部位注入調配物。繼續治療直至觀測到治療效果為止 實例 15 ：治療骨關節炎之方法

將實例1之胎兒扶持組織產物調配為注射劑。將調配物注入至關節炎關節中。繼續治療直至觀測到治療效果為止。

圖1展示流程圖，其說明產生本文所揭示之胎兒扶持組織產物之方法之實例。

圖2A至2D展示在1小時提取之後，經低溫粉碎之胎兒扶持組織之依序鹽水及GnHCl提取物之西方墨點分析。

圖3A至3B展示在食鹽水中提取且以不同離心速度離心之胎兒扶持組織的西方墨點分析。

圖4展示經低溫粉碎之胎兒扶持組織之依序鹽水、注射用水(「WFI」)或無菌水(「SW」)及GnHCl提取物之瓊脂糖凝膠分析。

圖5A至5B展示經低溫粉碎之胎兒扶持組織之依序鹽水、WFI或SW及GnHCl提取物之西方墨點分析。

圖6展示胎兒扶持組織產物在γ照射處理後之瓊脂糖凝膠分析。

圖7A至7B展示胎兒扶持組織產物在γ照射處理後之考馬斯藍(Coomassie blue)分析。

圖8A至8D展示胎兒扶持組織提取物在γ照射後之西方墨點分析。

圖9展示胎兒扶持組織提取物在過濾滅菌及稀釋後之瓊脂糖凝膠分析。

圖10A至10D展示胎兒扶持組織提取物在過濾滅菌及稀釋後之西方墨點分析。

圖11A至11C展示在以下三種效價分析中進行之玻尿酸(「HA」)濃度的劑量依賴性線性分析：(1) TRAP分析；(2) M2分析；及(3) WST-1分析。

圖12展示流程圖，其說明胎兒扶持組織產物之儲存、運輸及終端滅菌。

圖13A至13F展示在存在及不存在γ照射下，對在變化賦形劑中產生之胎兒扶持組織產物的瓊脂糖凝膠分析。

圖14A至14B展示在存在及不存在γ照射下，在不同賦形劑中產生之胎兒扶持組織產物之庫馬斯藍染色分析。

圖15A至15J展示在存在及不存在γ照射下，對在變化賦形劑中產生之胎兒扶持組織產物的西方墨點分析。

圖16A至16B展示在存在及不存在γ照射下，在變化賦形劑中產生之胎兒扶持組織產物的細胞形態圖像。

圖17A至17E展示在存在及不存在γ照射下，對在變化賦形劑中產生之胎兒扶持組織產物的TRAP分析。

圖18A至18B展示胎兒扶持組織產物之瓊脂糖凝膠分析。

圖19A至19D展示胎兒扶持組織產物之西方墨點分析。

圖20A至20B展示胎兒扶持組織產物之細胞形態分析及ODITRAP分析。

圖21A至21B展示胎兒扶持組織產物之細胞形態分析及M2分析。

圖22A至22B展示胎兒扶持組織產物之細胞形態分析及NO分析。

圖23展示流程圖，其說明產生本文所揭示之胎兒扶持組織產物之方法之實例。

圖24A至24C展示流程圖，其說明本文所揭示之藉由合併多個供體來產生胎兒扶持組織產物以增加產率之方法之實例。

Claims (44)

1. 一種製備胎兒扶持組織產物之方法，其包含： (a)低溫粉碎該胎兒扶持組織以產生經低溫粉碎之胎兒扶持組織； (b)在賦形劑中提取該經低溫粉碎之胎兒扶持組織以產生提取物；及 (c)藉由使用孔徑為約0.6 µm或更小之薄膜，隨後使用孔徑為約0.4 µm或更小之薄膜過濾該提取物來滅菌； 其中產生該胎兒扶持組織產物。
2. 如請求項1之方法，其中藉由過濾來滅菌係使用孔徑為約0.45 µm之薄膜，隨後使用孔徑為約0.2 µm或更小之薄膜進行。
3. 如請求項1之方法，其中該低溫粉碎包含在液氮中粉碎該胎兒扶持組織。
4. 如請求項1至3中任一項之方法，其中該低溫粉碎包含將該胎兒扶持組織粉碎為細粉。
5. 如請求項1至4中任一項之方法，其中該胎兒扶持組織包含胎盤、臍帶、胎盤羊膜、臍帶羊膜、絨毛膜或羊膜-絨毛膜，或其任何組合。
6. 如請求項1至5中任一項之方法，其中該胎兒扶持組織包含臍帶及胎盤羊膜。
7. 如請求項1至6中任一項之方法，其中該賦形劑為鹽水、注射用水(WFI)或其任何組合。
8. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該賦形劑為WFI。
9. 如請求項1至7中任一項之方法，其中該賦形劑為鹽水。
10. 如請求項1至9中任一項之方法，其進一步包含在步驟c)後，將該胎兒扶持組織離心。
11. 如請求項10之方法，其中離心速度為約14,000相對離心力(rcf)或更高。
12. 如請求項10至11中任一項之方法，其進一步包含在離心之後，用賦形劑稀釋該胎兒扶持組織。
13. 如請求項12之方法，其中該賦形劑為WFI或鹽水。
14. 如請求項13之方法，其中該賦形劑為WFI。
15. 如請求項13之方法，其中該賦形劑為鹽水。
16. 如請求項12至14中任一項之方法，其中將該胎兒扶持組織稀釋至少約1.5倍、2.0倍或2.5倍之因子。
17. 如請求項12至16中任一項之方法，其中將該胎兒扶持組織稀釋在約1.5倍至約3倍之間的因子。
18. 如請求項12至17中任一項之方法，其中將該胎兒扶持組織稀釋約2倍之因子。
19. 如請求項12至18中任一項之方法，其中經稀釋之胎兒扶持組織包含約1 µg/ml至約150 µg/ml之玻尿酸(HA)。
20. 如請求項1至19中任一項之方法，其中該胎兒扶持組織產物抗發炎、抗瘢痕形成、抗血管生成、抗黏連或促進傷口癒合。
21. 一種醫藥組合物，其包含(a)藉由如請求項1至20中任一項之方法製得的胎兒扶持組織產物，及(b)醫藥學上可接受之載劑。
22. 如請求項21之醫藥組合物，其中該醫藥學上可接受之載劑係選自：卡波姆(carbomer)、纖維素、膠原蛋白、甘油、己二醇、玻尿酸、羥丙基纖維素、磷酸、聚山梨醇酯80、丙二醇、丙二醇硬脂酸酯、鹽水、氫氧化鈉、磷酸鈉、山梨糖醇、水、三仙膠或其任何組合。
23. 如請求項21或22之醫藥組合物，其中該胎兒扶持組織粉末產物係以乳膏、乳劑、軟膏、眼用溶液、噴霧劑、糊劑、凝膠劑、膜劑或塗料形式投與或提供。
24. 如請求項21至23中任一項之醫藥組合物，其中該醫藥組合物抗發炎、抗瘢痕形成、抗血管生成、抗黏連或促進傷口癒合。
25. 一種治療有需要之個體之傷口的方法，其包含向該傷口投與如請求項21至24中任一項之醫藥組合物，持續足以治療該傷口的時段。
26. 如請求項25之方法，其中該傷口為角膜上皮傷口。
27. 如請求項26之方法，其中該角膜上皮傷口係由光消融治療引起。
28. 如請求項24至25中任一項之方法，其中該傷口為選自皮膚燒傷或瘢痕之皮膚病況。
29. 一種治療有需要之個體之脊椎病況的方法，其包含向該個體投與如請求項21至24中任一項之醫藥組合物，持續足以治療該脊椎病況的時段。
30. 如請求項29之方法，其中該脊椎病況係選自椎間盤突出、脊椎黏連、面關節骨關節炎、神經根病變、脊髓損傷或椎間盤炎。
31. 一種治療有需要之個體之關節炎病況的方法，其包含向該個體投與如請求項21至24中任一項之醫藥組合物，持續足以治療該關節炎病況的時段。
32. 如請求項31之方法，其中該關節炎病況係選自骨關節炎、類風濕性關節炎、敗血性關節炎、關節黏連性脊椎炎或椎關節黏連。
33. 一種再生或修復有需要之個體的骨骼、組織或軟骨之方法，其包含向該個體投與或提供如請求項21至24中任一項之醫藥組合物，持續足以再生或修復骨骼、組織或軟骨的時段。
34. 如請求項33之方法，其中該醫藥組合物係以貼片形式投與或提供。
35. 如請求項33之方法，其中該醫藥組合物係以傷口敷料形式投與或提供。
36. 如請求項1至35中任一項之方法，其包含合併該胎兒扶持組織產物與至少一種額外胎兒扶持組織產物。
37. 如請求項36之方法，其中該胎兒扶持組織產物及該至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少2名不同個體之胎兒扶持組織。
38. 如請求項36之方法，其中該胎兒扶持組織產物及該至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少5名不同個體之胎兒扶持組織。
39. 如請求項36之方法，其中該胎兒扶持組織產物及該至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少15名不同個體之胎兒扶持組織。
40. 如請求項36之方法，其中該胎兒扶持組織產物及該至少一種額外胎兒扶持組織產物包含源自至少45名不同個體之胎兒扶持組織。
41. 如請求項1至40中任一項之方法，其包含將該胎兒扶持組織產物填充至容器中。
42. 如請求項41之方法，其包含密封該容器。
43. 如請求項41或42之方法，其中該填充及密封係無菌進行。
44. 如請求項41至43中任一項之方法，其中該填充及該密封係在無人工干預之情況下以單一連續程序無菌進行。

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