CN107201325B - 假单胞菌菌株及其培养方法和应用 - Google Patents

假单胞菌菌株及其培养方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107201325B
CN107201325B CN201710304219.4A CN201710304219A CN107201325B CN 107201325 B CN107201325 B CN 107201325B CN 201710304219 A CN201710304219 A CN 201710304219A CN 107201325 B CN107201325 B CN 107201325B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pseudomonas
culture
phenol
medium
application
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201710304219.4A
Other languages
English (en)
Other versions
CN107201325A (zh
Inventor
唐晓声
李海建
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanda Environmental Restoration Co ltd
Original Assignee
Shanda Environmental Restoration Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanda Environmental Restoration Co ltd filed Critical Shanda Environmental Restoration Co ltd
Priority to CN201710304219.4A priority Critical patent/CN107201325B/zh
Publication of CN107201325A publication Critical patent/CN107201325A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN107201325B publication Critical patent/CN107201325B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/38—Pseudomonas
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/02—Aerobic processes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F3/00—Biological treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F3/34—Biological treatment of water, waste water, or sewage characterised by the microorganisms used
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C02—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F—TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2101/00—Nature of the contaminant
    • C02F2101/30—Organic compounds
    • C02F2101/34—Organic compounds containing oxygen
    • C02F2101/345—Phenols
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02W—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W10/00—Technologies for wastewater treatment
    • Y02W10/10—Biological treatment of water, waste water, or sewage

Abstract

本发明公开了一种假单胞菌(Pseudomonas sp.)及其培养方法和应用，所述假单胞菌(Pseudomonas sp.)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、保藏编号为CGMCC No.13433。培养方法为将固体培养基上保存的假单胞菌接种于富集培养基中，在30℃、200rpm条件下恒温振荡培养12h。该假单胞菌的应用包括在污水生物脱氮中的应用和在降解苯酚中的应用。该假单胞菌CGMCC No.13433在工农业及地下水的氨氮超标兼苯酚污染的水处理或治理中有非常好的应用前景。

Description

假单胞菌菌株及其培养方法和应用
技术领域
本发明属于环境微生物技术领域，涉及一株假单胞菌菌株及其培养方法和应用。
背景技术
工农业的迅速发展加剧了对周边环境的污染排放，国家对环境排污和治理的重视将有望改变这种现状。目前水环境污染中的一个主要问题是氮元素超标，它可引起水体富营养化，危及水生生物和人类健康，其中主要是无机氮(氨氮，硝态氮和亚硝态氮)和有机氮(如蛋白质，氨基酸等)。污染水体中大多为氨氮超标，会造成水体富营养化，引发藻类繁殖甚至爆发；降低水体溶氧至水体发黑，影响其它水生物的生长和水体自净功能。生物脱氮技术是一种有效的传统方法，主要通过好氧自养微生物将有机氮转化为氨氮，再经硝化菌的硝化作用和反硝化菌的反硝化作用，最终释放为氮气完成氮循环。异养硝化和好氧反硝化菌的发现使硝化和反硝化在同一反应器中完成，简化了微生物的组成，在优化的发酵中，可以获得比混合微生物高得多的生物脱氮功能，因此分离获取具有高性能生物脱氮功能的异养硝化功能和好氧反硝化细菌，是兼具基础研究及应用科学的重要任务。
苯酚毒性很强、生物体遭污染后降解和处理困难，但其工业用途广泛，许多产业，如纺织、石化、造纸等均产生大量苯酚污染物之一，这是工业污染废水中的主要成分之一，如不彻底脱除，将对原生态的水环境安全有很大的威胁。但近年来发现不少环境微生物可以生物降解苯酚，这种经济高效且无二次污染的生物降解方式越来越受到业界内外的广泛关注。
目前，尚无兼具高效生物脱氮和高效苯酚降解的细菌的报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一种高异养硝化-好氧反硝化能力兼高效苯酚降解功能的假单胞菌(Pseudomonas sp.)菌株及其培养方法和应用。
为解决上述技术问题，本发明提出以下技术方案：
一种假单胞菌(Pseudomonas sp.)，所述假单胞菌(Pseudomonas sp.)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心、保藏编号为CGMCC No.13433。
上述的假单胞菌，优选的，所述假单胞菌CGMCC No.13433的s2rDNA基因序列为：
AGCCAATGCGGCAGCTACCATGCAGTCGAGCGGATGACGGGAGCTTGCTCCTTGAT TCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTT CGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCC TTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAATGGCTCACCAAG GCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATC CAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGG AAGGGCAGTAAGTTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTA ACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGG CGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGG GAACTGCATCCAAAACTGGCAAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGT AGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGAC TGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTA GTCCACGCCGTAAACGATGTCAACTAGCCGTTGGAATCCTTGAGATTTTAGTGGCGCAG CTAACGCATTAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAAT TGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAA CCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAAC TCTGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTC CCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTTATGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTT ACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAGAGGGTTGCCAAGCCGCGAG GTGGAGCTAATCTCACAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCG TGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGAATCAGAATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGGGC CTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCACCAGAAGTAGCTAGTCTAACCTCGGAGGACGTACCACGTGATTGTTCCCC；
上述s2rDNA基因序列的长度为1437个核苷酸。
作为一个总的发明构思，本发明还提供一种上述的假单胞菌的培养方法，将固体培养基上保存的假单胞菌接种于富集培养基中，在30℃、200rpm条件下恒温振荡培养12h；所述的富集培养基为：葡萄糖6g，酵母粉12g，MgSO4·7H2O 2.5g，CaCl2 0.5g，KH2PO4 2.5g，水1L，pH 7.0。
作为一个总的发明构思，本发明还提供一种上述的假单胞菌在污水生物脱氮中的应用。
上述的应用，优选的，所述氮源包括氨氮、亚硝酸盐或硝酸盐。
上述的应用，优选的，所述脱氮方式为异养硝化和/或好氧反硝化。
上述的应用，优选的，所述应用包括以下步骤：将假单胞菌菌液加入序批式活性污泥反应器中，室温下曝气培养。
上述的应用，优选的，假单胞菌的细胞浓度为0.2～2.0x109个/ml，所述假单胞菌菌液的投加体积为序批式活性污泥反应器容积的4％～10％，所述曝气培养时间为6h～9h。
作为一个总的发明构思，本发明还提供一种上述的假单胞菌菌株在降解苯酚中的应用。
上述的应用，优选的，所述应用包括以下步骤：将假单胞菌菌液加入含苯酚的硝化培养基中，在30℃，200rpm摇瓶培养1天；所述含苯酚的硝化培养基为：(NH4)2SO4 0.945g，柠檬酸钠16.34g，MgSO4·7H2O 1g，KH2PO4 0.2g，Na2HPO4 0.3g，苯酚100～300mg，水1L。
与现有技术相比，本发明的优点在于：
本发明的假单胞菌CGMCC No.13433，是一种高效的异养硝化-好氧反硝化菌株，且兼具高效的苯酚降解性能。异养硝化性能测定结果表明，该菌株对于氨氮具有很高的去除率，且中间产物硝酸盐和亚硝酸盐积累量极少；好氧反硝化性能测定结果表明，该菌株在有氧条件下能够将硝态氮和亚硝态氮很好的去除，且中间产物累积量极少，无二次污染。同时，菌株扩大培养后应用于SBR(序批式活性污泥法)工艺，对生活污水中氨氮、总氮和COD均有较高的去除率，在生活污水以及其他各种污染水体治理中具有很高的应用价值。苯酚降解性能研究结果表明，苯酚浓度为0-100mg/L区间，去除率可以达到95％以上，100-200mg/L区间，一步去除率也可以达到80％左右，因此，该菌株在工农业及地下水的氨氮超标兼苯酚污染的水处理或治理中有非常好的应用前景。抗生素耐受性实验表明，该菌株具有抗生素amp、cm、sm和tc耐受性。氨氮耐受性实验表明，菌株PS02能耐受1g/L以内的氨氮废水。
生物材料保藏信息
本发明的假单胞菌(Pseudomonas sp.)，已于2016年12月7日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC 13433)，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编：100101。该菌株的名称是：蒙氏假单胞菌PS02，分类命名为(Pseudomonas monteilii PS02)，保藏编号为：CGMCC No.13433。
附图说明：
图1为假单胞菌CGMCC No.13433对氨氮的去除效果图。
图2为假单胞菌CGMCC No.13433对硝酸盐的去除效果图。
图3为假单胞菌CGMCC No.13433在SBR反应器中的脱氮效果图。
图4为假单胞菌CGMCC No.13433的苯酚去除效果图。
具体实施方式
以下结合说明书附图和具体优选的实施例对本发明作进一步描述，但并不因此而限制本发明的保护范围。
一种本发明的假单胞菌，其保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (CGMCC)，保藏编号为：CGMCC No.13433。
经检测，本发明的假单胞菌CGMCC No.13433是一种高效的异养硝化-好氧反硝化细菌，且兼具苯酚高效降解生物性能。其为革兰氏阴性菌，菌体大小为(0.5～1)×(1.5～4)μm。可分别利用铵盐、亚硝酸盐和硝酸盐为唯一氮源生长代谢。
实施例1：假单胞菌CGMCC No.13433的筛选及性能测定
活性污泥取至某工厂污水处理池，从该活性污泥中取5mL泥水混合液至45mL灭菌的异养硝化培养基中。异养硝化培养基的配方为：(NH4)2SO4 0.945g/L，柠檬酸钠6.536g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，NaCl 0.12g/L，MnSO4·H2O 0.01g/L，FeSO4·7H2O 0.02g/L，KH2PO4 0.2g/L，Na2HPO4 0.3g/L，pH 7.0～7.5。然后置于30℃，200rpm的气浴摇床富集培养12h。将富集液进行梯度稀释后，均匀涂布于异养硝化固体培养基(琼脂20g/L，其余成分同异养硝化培养基)。在30℃恒温培养箱中培养1d后，挑取形态大小不同的单克隆，划线纯化后编号保藏，经初筛共得到10余株菌株。
将以上初筛菌株接种到溴百里酚蓝(BTB)分离培养基。BTB培养基的配方为：KNO3g/L，琥珀酸钠8.5g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，CaCl2 0.15g/L，FeSO4·7H2O 0.05g/L，KH2PO40.25 g/L，Na2HPO4 0.3g/L，1％BTB 1mL，琼脂20g/L，pH 7.0～7.5。1g BTB溶于100ml无水乙醇即得1％BTB乙醇溶液。在30℃恒温培养箱中培养1d后，挑取周围培养基出现蓝色晕圈的菌株至BTB培养基，划线纯化并编号保藏。
从平板挑取菌落至富集培养基，富集培养基的配方为：葡萄糖6g/L，酵母粉12g/L，MgSO4·7H2O 2.5g/L，CaCl2 0.5g/L，KH2PO4 2.5g/L，pH 7.0。30℃气浴摇床200rpm培养12h，取1％(体积比)菌液离心洗涤，接种至硝化培养基。硝化培养基的配方为：(NH4)2SO40.945g/L，柠檬酸钠16.34g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，KH2PO4 0.2g/L，Na2HPO4 0.3g/L。30℃，200rpm摇瓶培养，定期取样测定氨氮(NH4 +-N)、硝酸盐(NO3 --N)和亚硝酸盐(NO2 --N) 的浓度，通过分析总氮(TN)的去除率来判断菌株的异养硝化性能。图1为假单胞菌CGMCCNo.13433对氨氮的去除效果图，由图1可以看出，假单胞菌CGMCC No.13433具备很好的脱氮性能，24h时对总氮去除率达到98.7％，并且作为中间产物的硝态氮和亚硝态氮极少积累，累积量在0.02mg/L左右。
挑取硝化性能好的菌落至富集培养基，30℃气浴摇床200rpm培养12h，取1％(体积比) 菌液离心洗涤，接种至反硝化培养基。反硝化培养基配方为：KNO3 0.722g/L，柠檬酸钠6.128 g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，KH2PO4 0.25g/L，Na2HPO4 0.3g/L。30℃，200rpm摇瓶培养，定期取样测定氨氮(NH4 +-N)、硝酸盐(NO3 --N)和亚硝酸盐(NO2 --N)的浓度，通过分析总氮(TN)的去除率来判断菌株的好氧反硝化性能。图2为假单胞菌CGMCC No.13433对硝酸盐的去除效果图，由图2可以看出，假单胞菌CGMCC No.13433具有良好的脱氮性能，在以硝酸盐为唯一氮源时，其脱氮率达到99.7％。
实施例2：菌株的分子生物学鉴定
菌株鉴定采用16S rDNA序列比对法。提取假单胞菌CGMCC No.13433总DNA，利用一对通用引物扩增菌株16S rDNA。上游引物为8f(5`-AGAGTTTGATCCTGGCTCA-3`)，下游引物为1492r(5`-GGTTACCTTGTTACGACTT-3`)。PCR反应体系(50μL)：模板DNA 1μL， PCR Taqmix 25μL，上下游引物各1.5μL，DMSO 2μL，加ddH2O至反应体系为50μL。PCR 程序：94℃5min，94℃30s、55℃30s、72℃1min 30s循环30次，72℃10min，4℃5 min。由美吉生物医药科技有限公司进行PCR产物的纯化和测序。在NCBI提交通过测序获得的16S rDNA序列，通过软件Blast与GenBank进行同源性序列比对分析，并应用MEGA6.06 软件构建该菌株系统发育树，以确定所分离菌株的种类。
假单胞菌CGMCC No.13433的基因有效序列长度为1437bp，基因序列表如下：
AGCCAATGCGGCAGCTACCATGCAGTCGAGCGGATGACGGGAGCTTGCTCCTTGAT TCAGCGGCGGACGGGTGAGTAATGCCTAGGAATCTGCCTGGTAGTGGGGGACAACGTTT CGAAAGGAACGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAGCAGGGGACCTTCGGGCC TTGCGCTATCAGATGAGCCTAGGTCGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAATGGCTCACCAAG GCGACGATCCGTAACTGGTCTGAGAGGATGATCAGTCACACTGGAACTGAGACACGGTCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGCGAAAGCCTGATC CAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGCACTTTAAGTTGGGAGG AAGGGCAGTAAGTTAATACCTTGCTGTTTTGACGTTACCGACAGAATAAGCACCGGCTA ACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGAATTACTGGG CGTAAAGCGCGCGTAGGTGGTTTGTTAAGTTGGATGTGAAAGCCCCGGGCTCAACCTGG GAACTGCATCCAAAACTGGCAAGCTAGAGTACGGTAGAGGGTGGTGGAATTTCCTGTGT AGCGGTGAAATGCGTAGATATAGGAAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGACCACCTGGAC TGATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCGTGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTA GTCCACGCCGTAAACGATGTCAACTAGCCGTTGGAATCCTTGAGATTTTAGTGGCGCAG CTAACGCATTAAGTTGACCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGTTAAAACTCAAATGAAT TGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAA CCTTACCAGGCCTTGACATGCAGAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAAC TCTGACACAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTC CCGTAACGAGCGCAACCCTTGTCCTTAGTTACCAGCACGTTATGGTGGGCACTCTAAGGAGACTGCCGGTGACAAACCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAAGTCATCATGGCCCTT ACGGCCTGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAGAGGGTTGCCAAGCCGCGAG GTGGAGCTAATCTCACAAAACCGATCGTAGTCCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCG TGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGAATCAGAATGTCGCGGTGAATACGTTCCCGGGC CTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTGGGTTGCACCAGAAGTAGCTAGTCTAACCTCGGAGGACGTACCACGTGATTGTTCCCC；
经过比对，该序列与NCBI数据库的Pseudomonas monteilii strain JC3(NCBI登录号为：KF263567.1)同源性达98％，属于假单胞菌属中的蒙氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)。
实施例3：菌株的抗性研究
配制带有常见抗性的LB平板，LB培养基配方为：蛋白胨10g/L，酵母粉5g/L，NaCl10g/L，琼脂20g/L。抗生素选择常见抗性，包括卡那(kan)、氨苄(amp)、氯霉素(cm)、链霉素(sm)和四环素(tc)，按1∶1000的比例将抗生素加入LB培养基。挑取菌株涂布于抗性平板，置于30℃恒温箱培养。1天后观察菌株生长情况，如表1所示，假单胞菌CGMCC No.13433可耐amp、cm、sm和tc，不耐kan。
表1假单胞菌CGMCC No.13433的抗性结果表
kan amp cm sm tc
- + + + +
表中，“+”表示阳性；“-”表示阴性。
实施例4：假单胞菌CGMCC No.13433在序批式活性污泥(SBR)反应器的脱氮效果
取小区生活污水，pH为7.0，氨氮35mg/L，总氮48mg/L，COD 312mg/L。将生活污水引入SBR反应器，其中反应器水力停留时间为12h，曝气时间8h，溶解氧浓度维持在2mg/L 左右。
从固体培养基取假单胞菌CGMCC No.13433菌体接种于富集培养基，配方为：葡萄糖 6g/L，酵母粉12g/L，MgSO4·7H2O 2.5g/L，CaCl2 0.5g/L，KH2PO4 2.5g/L，pH 7.0；30℃气浴摇床200rpm培养12h。按照菌液与生活污水的体积比为5％将处于对数生长期菌液离心洗涤后投加至SBR反应器，室温下(约25℃)曝气培养8h，每隔2h测定水样中氨氮(NH4 +-N)，总氮(TN)及化学需氧量(COD)。如图3所示为菌株8h内对生活污水的氨氮、总氮及COD 的去除情况，最终出水氨氮和COD的去除率均达到98％以上，总氮去除率达到92％，取得了较好的脱氮及COD去除效果。
实施例5：菌株的苯酚降解性能
将假单胞菌CGMCC No.13433接种到液体的富集培养基中，配方为：葡萄糖6g/L，酵母粉12g/L，MgSO4·7H2O 2.5g/L，CaCl2 0.5g/L，KH2PO4 2.5g/L，pH 7.0；30℃气浴摇床200rpm培养12h，按照菌液与含苯酚硝化培养基的体积比为1％，取菌液离心洗涤，接种至含有不同浓度的苯酚的硝化培养基中，培养基的配方为：(NH4)2SO4 0.945g/L，柠檬酸钠16.34g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，KH2PO4 0.2g/L，Na2HPO4 0.3g/L，苯酚100-300mg/L，30℃，200 rpm摇瓶培养，培养1d后测定培养基中的氨氮(NH4 +-N)和苯酚残余物浓度，结果如图4所示。由图4可知，初始苯酚浓度分别为100、150、200及300mg/L，苯酚去除率分别为 95.4％，94.2％，89.2％和84.5％，其对应的OD600分别是4.56，4.82，4.20和4.54，显示假单胞菌CGMCCNo.13433在不同浓度的苯酚培养液中的生长均很好。苯酚浓度为0-100mg/L 区间，去除率可以达到95％以上，100-200mg/L区间，一步去除率也可以达到80％左右，因此，假单胞菌CGMCC No.13433在工农业及地下水的氨氮超标兼苯酚污染的水处理或治理中有非常好的应用前景。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，本发明的保护范围并不仅局限于上述实施例。凡属于本发明思路下的技术方案均属于本发明的保护范围。应该指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下的改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
<110> 上田环境修复股份有限公司
<120> 假单胞菌菌株及其培养方法和应用
<160> 3
<210> 1
<211> 19bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
agagtttgat cctggctca 19
<210> 2
<211> 19bp
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
ggttaccttg ttacgactt 19
<210> 3
<211> 1437 bp
<212> DNA
<213> Pseudomonas sp.
<400> 3
agccaatgcg gcagctacca tgcagtcgag cggatgacgg gagcttgctc cttgattcag 60
cggcggacgg gtgagtaatg cctaggaatc tgcctggtag tgggggacaa cgtttcgaaa 120
ggaacgctaa taccgcatac gtcctacggg agaaagcagg ggaccttcgg gccttgcgct 180
atcagatgag cctaggtcgg attagctagt tggtggggta atggctcacc aaggcgacga 240
tccgtaactg gtctgagagg atgatcagtc acactggaac tgagacacgg tccagactcc 300
tacgggaggc agcagtgggg aatattggac aatgggcgaa agcctgatcc agccatgccg 360
cgtgtgtgaa gaaggtcttc ggattgtaaa gcactttaag ttgggaggaa gggcagtaag 420
ttaatacctt gctgttttga cgttaccgac agaataagca ccggctaact ctgtgccagc 480
agccgcggta atacagaggg tgcaagcgtt aatcggaatt actgggcgta aagcgcgcgt 540
aggtggtttg ttaagttgga tgtgaaagcc ccgggctcaa cctgggaact gcatccaaaa 600
ctggcaagct agagtacggt agagggtggt ggaatttcctg tgtagcggtg aaatgcgta 660
gatataggaa ggaacaccag tggcgaaggc gaccacctgg actgatactg acactgaggt 720
gcgaaagcgt ggggagcaaa caggattaga taccctggta gtccacgccg taaacgatgt 780
caactagccg ttggaatcct tgagatttta gtggcgcagc taacgcatta agttgaccgc 840
ctggggagta cggccgcaag gttaaaactc aaatgaattg acgggggccc gcacaagcgg 900
tggagcatgt ggtttaattc gaagcaacgc gaagaacctt accaggcctt gacatgcaga 960
gaactttcca gagatggatt ggtgccttcg ggaactctga cacaggtgct gcatggctgt 1020
cgtcagctcg tgtcgtgaga tgttgggtta agtcccgtaa cgagcgcaac ccttgtcctt 1080
agttaccagc acgttatggt gggcactcta aggagactgc cggtgacaaa ccggaggaag 1140
gtggggatga cgtcaagtca tcatggccct tacggcctgg gctacacacg tgctacaatg 1200
gtcggtacag agggttgcca agccgcgagg tggagctaat ctcacaaaac cgatcgtagt 1260
ccggatcgca gtctgcaact cgactgcgtg aagtcggaat cgctagtaat cgcgaatcag 1320
aatgtcgcgg tgaatacgtt cccgggcctt gtacacaccg cccgtcacac catgggagtg 1380
ggttgcacca gaagtagcta gtctaacctc ggaggacgta ccacgtgatt gttcccc 1437

Claims (9)

1.一种假单胞菌(Pseudomonas sp.) ，其特征在于：所述假单胞菌(Pseudomonas sp.)保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No. 13433。
2.一种权利要求1所述的假单胞菌的培养方法，其特征在于，将固体培养基上保存的假单胞菌接种于富集培养基中，在30℃、200rpm条件下恒温振荡培养12h；所述的富集培养基为：葡萄糖6g，酵母粉12g，MgSO4•7H2O 2.5g，CaCl2 0.5g，KH2PO4 2.5g，水1L，pH7.0。
3.一种如权利要求1所述的假单胞菌在污水生物脱氮中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，生物脱氮中氮源包括氨氮、亚硝酸盐或硝酸盐。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述脱氮方式为异养硝化和/或好氧反硝化。
6.根据权利要求3～5任一项所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：将假单胞菌菌液加入序批式活性污泥反应器中，室温下曝气培养。
7.根据权利要求6所述应用，其特征在于，假单胞菌菌液中，假单胞菌的细胞浓度为0.2~2.0×109个/ml，所述假单胞菌菌液的投加体积为序批式活性污泥反应器容积的4%～10%，所述曝气培养时间为6～9h。
8.一种如权利要求1所述的假单胞菌菌株在降解苯酚中的应用。
9.根据权利要求8所述的应用，其特征在于，所述应用包括以下步骤：将假单胞菌菌液加入含苯酚的硝化培养基中，在30℃，200rpm摇瓶培养1天；所述含苯酚的硝化培养基为：(NH4)2SO4 0.945g，柠檬酸钠16.34g，MgSO4•7H2O 1g，KH2PO4 0.2g，Na2HPO4 0.3g，苯酚100～300mg，水1L。
CN201710304219.4A 2017-05-03 2017-05-03 假单胞菌菌株及其培养方法和应用 Active CN107201325B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710304219.4A CN107201325B (zh) 2017-05-03 2017-05-03 假单胞菌菌株及其培养方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710304219.4A CN107201325B (zh) 2017-05-03 2017-05-03 假单胞菌菌株及其培养方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN107201325A CN107201325A (zh) 2017-09-26
CN107201325B true CN107201325B (zh) 2021-03-02

Family

ID=59905602

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710304219.4A Active CN107201325B (zh) 2017-05-03 2017-05-03 假单胞菌菌株及其培养方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107201325B (zh)

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113016984B (zh) * 2018-01-26 2022-08-26 山东省花生研究所 蒙氏假单胞菌的应用
CN108373981B (zh) * 2018-02-02 2020-07-17 中国科学院城市环境研究所 一种好氧反硝化菌及其应用
CN108624529B (zh) * 2018-05-14 2019-04-19 大江环境股份有限公司 一种包含蒙氏假单胞菌的菌剂在净化含氯废气中的应用
CN108619900B (zh) * 2018-05-14 2019-09-06 清华大学 一种包含蒙氏假单胞菌的生物活性填料的制备方法
CN108913631B (zh) * 2018-08-03 2021-09-07 青岛海洋生物医药研究院股份有限公司 一株高效降氮的蒙氏假单胞菌株cy06及其微生态制剂和应用
CN109439575B (zh) * 2018-11-09 2020-02-14 华南农业大学 一种假单胞菌株及其在降解水体硝酸盐中的应用
CN109486721B (zh) * 2018-12-18 2020-12-22 广东海洋大学 一种恶臭假单胞菌及其应用
CN109402029B (zh) * 2018-12-20 2020-11-10 北京本农科技发展有限公司 氨氮降解菌的分离纯化方法、氨氮降解菌种及应用
CN109943497B (zh) * 2019-01-25 2021-02-12 浙江省农业科学院 一株具有好氧反硝化功能的施氏假单胞菌及其用途
CN110499264B (zh) * 2019-07-16 2022-03-22 威海科尼利合环保科技有限公司 一株降解油脂的蒙氏假单胞菌及其应用
CN110527649A (zh) * 2019-09-10 2019-12-03 深圳市长隆科技有限公司 一种蒙特利氏假单胞菌ys-3菌制剂、应用方法及筛选方法
CN111117914B (zh) * 2019-12-28 2021-07-30 北京翰祺环境技术有限公司 一种耐盐异养好氧硝化细菌菌株、培养方法、菌液及应用
CN110951658B (zh) * 2020-01-15 2022-11-18 广州市微生物研究所有限公司 一株假单胞菌及其应用
CN111925955A (zh) * 2020-07-02 2020-11-13 河海大学 由自养、异养反硝化菌群制备的复合固体颗粒及制备方法
CN111909885A (zh) * 2020-09-23 2020-11-10 苏州道源华智环保科技有限公司 一种耐盐降cod菌种、培养方法及应用
CN112625942B (zh) * 2020-12-01 2022-06-14 华南理工大学 一种好氧反硝化菌及其应用
CN114836355B (zh) * 2022-05-30 2024-04-02 沈阳风景园林股份有限公司 一种假单胞菌dt04及其在污水脱氮的应用
CN117384791A (zh) * 2023-10-18 2024-01-12 小菌主环境科技(武汉)有限公司 一株促进厌氧铁氨氧化过程的假单胞菌及其在处理污水中的应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102888374A (zh) * 2012-09-26 2013-01-23 闫家怡 一种处理工业污水的生物菌剂及制备方法和应用
CN104609574A (zh) * 2015-02-05 2015-05-13 苏州大学 用于降解苯酚的微生物与纳米粒子复合体系的制备方法
CN105733998A (zh) * 2016-04-28 2016-07-06 中国科学院上海高等研究院 一株兼具异养硝化和好氧反硝化能力的高效脱氮菌株

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US7815801B2 (en) * 2007-12-17 2010-10-19 APT Water, Inc. Removal of selenium in contaminated wastewater streams

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102888374A (zh) * 2012-09-26 2013-01-23 闫家怡 一种处理工业污水的生物菌剂及制备方法和应用
CN104609574A (zh) * 2015-02-05 2015-05-13 苏州大学 用于降解苯酚的微生物与纳米粒子复合体系的制备方法
CN105733998A (zh) * 2016-04-28 2016-07-06 中国科学院上海高等研究院 一株兼具异养硝化和好氧反硝化能力的高效脱氮菌株

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
假单胞菌降解间甲酚和好氧反硝化特性;贾子龙;《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》;20150915(第09期);摘要，第22页第2.3节，第23页第2.5.1节，第30页第3.2节，第31页第1-2段，第32页第3.3.1节，图3-5至图3-7 *
恶臭假单胞菌降解苯酚的动力学研究;唐春燕等;《环境工程学报》;20111031;第5卷(第10期);第2364-2368页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN107201325A (zh) 2017-09-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN107201325B (zh) 假单胞菌菌株及其培养方法和应用
CN104673738B (zh) 一种异养硝化好氧反硝化细菌的驯化与筛选方法
CN105733998B (zh) 一株兼具异养硝化和好氧反硝化能力的高效脱氮菌株
CN107460141B (zh) 一种异养硝化好氧反硝化柠檬酸杆菌及其应用
CN107988125B (zh) 一株耐低温硝化细菌及其应用
CN112625942B (zh) 一种好氧反硝化菌及其应用
CN110217895B (zh) 一种用于水环境治理的复合微生物菌剂及其应用
CN106676038B (zh) 一种脱氨氮的复合微生物菌剂及其应用
CN113249254A (zh) 一株硝基还原假单胞菌菌株及其应用
CN111268810B (zh) 一种脱氮除磷的微生物菌群及其应用
CN112852658A (zh) 一株假单胞菌dnf-23及提高假单胞菌脱氮效率的方法
CN114890555B (zh) 一种用于治理农村黑臭水体的固体微生物制剂及其制备方法与应用
CN104611279B (zh) 一种红城红球菌lh‑n13及其微生物菌剂与用途
KR20090126917A (ko) 질산염제거 기능을 가지는 새로운 지오바실러스디모디니트리피컨스 ｓｇ-01 균주 및 그의 이용방법
CN113234626A (zh) 一种具有异养硝化-好氧反硝化功能的菌株及其应用
CN109161513B (zh) 一株鞘氨醇杆菌及其应用
CN112266885A (zh) 一种异养硝化好氧反硝化菌y16及其应用
CN115386520B (zh) 一株嗜吡啶红球菌rl-gz01菌株及其应用
CN111979138A (zh) 一种异养硝化好氧反硝化菌y15及其应用
CN107189974B (zh) 一株贫营养低温脱氮菌及其应用
CN106929448B (zh) 一株降解不同形态氮的不动杆菌cz1701菌株及其用途
CN113151063B (zh) 弗氏柠檬酸杆菌as11及其在污水处理中的应用
CN113215027B (zh) 水生产碱杆菌as1及其在污水处理中的应用
CN109652330B (zh) 香矛醇假单胞菌wxp-4及其在脱氮中的应用
CN110407338B (zh) 一株低温脱氮除磷菌及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
CB02 Change of applicant information
CB02 Change of applicant information

Address after: 213000 2188 Longcheng Road, Zhong Lou District, Changzhou, Jiangsu

Applicant after: Shanda Environmental Restoration Co., Ltd.

Address before: 213000 No. 2188 Longcheng Avenue, Zhonglou District, Changzhou City, Jiangsu Province

Applicant before: SUNTIME ENVIRONMENTAL REMEDIATION CO., LTD.

GR01 Patent grant
GR01 Patent grant