CN110527649A - 一种蒙特利氏假单胞菌ys-3菌制剂、应用方法及筛选方法 - Google Patents

一种蒙特利氏假单胞菌ys-3菌制剂、应用方法及筛选方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及污水处理领域，一种蒙特利氏假单胞菌YS‑3菌制剂，采用蒙特利氏假单胞菌YS‑3通过营养培养基制备，所述营养培养基为自牛肉膏蛋白胨培养基、LB营养培养基、以及添加有碳源的无机盐培养基中的任意一种；所述牛肉膏蛋白胨培养基的成分及含量为：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0‑8.0；LB营养培养基的成分及含量为：酵母粉5.0g/L、氯化钠10.0g/L、蛋白胨10.0g/L，pH＝7.2‑7.6；无机盐培养基的成分及含量为：硝酸钠10g/L、钼酸钠0.08g/L、七水合硫酸亚铁0.12g/L、七水合硫酸镁0.2g/L、氯化钙0.12g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二胺1g/L，pH＝7.2‑7.6。

Description

一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂、应用方法及筛选方法
技术领域
本发明涉及污水处理领域，本发明是关于蒙特利氏假单胞菌及其应用，具体地说，是关于冬季北方污水处理处理废水中含氮化合物的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3的其相关应用。
背景技术
近年来，随着人们生活水平的提高以及经济的快速发展，排放到水体中的氮含量日益增加，而污水中氮素的污染也日益严峻。而氮素的治理工作也越来越受到重视。在废水脱氮的众多方法中，生物脱氮技术因其绿色环保、行之有效等特点受到普遍应用。生物脱氮是以反硝化细菌为主，在兼性厌氧条件下，将硝酸盐及亚硝酸盐作为电子受体生成氮气的过程，但在高纬度地区，低温对生物脱氮技术有很大的影响。这是因为亚硝化菌的最佳生长温度为35℃，硝化细菌的最佳温度35～42℃，反硝化细菌的最佳温度是25～35℃。当温度小于10℃时，硝化和反硝化进程受到强烈抑制。而我国北方冬季气温通常低于10℃，低温反硝化成为冬季生物反硝化脱氮的限制因素。因此从环境中分离出能在较低温度下生长、具有反硝化细菌菌株成为强化生物脱氮的关键。
发明内容
为解决上述问题，本发明提出一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂，蒙特利氏假单胞菌，用于降解冬天北方污水处理厂出水氮化合物，优选用于降解市政处理废水、养殖废水、制药废水、石化废水、化肥废水、景观水、食品废水、大豆蛋白废水中的氮化合物。本发明还提该菌制剂应用及筛选方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
在第一个技术方案中，一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂，采用蒙特利氏假单胞菌YS-3通过营养培养基制备，所述营养培养基为自牛肉膏蛋白胨培养基、LB营养培养基、以及添加有碳源的无机盐培养基中的任意一种；
所述牛肉膏蛋白胨培养基的成分及含量为：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0-8.0；
LB营养培养基的成分及含量为：酵母粉5.0g/L、氯化钠10.0g/L、蛋白胨10.0g/L，pH＝7.2-7.6；
无机盐培养基的成分及含量为：硝酸钠10g/L、钼酸钠0.08g/L、七水合硫酸亚铁0.12g/L、七水合硫酸镁0.2g/L、氯化钙0.12g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二胺1g/L，pH＝7.2-7.6。
在第二个技术方案中，一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂的应用方法，包括如下步骤：
步骤a、将如在第一个技术方案中所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂与待净化污水混合；蒙特利氏假单胞菌添加量为添加量占废水处理体系总体积的1.5％-40％，废水处理体系中的碳氮比为4-15；蒙特利氏假单胞菌或菌制剂与待处理市政污水混合后，混合体系中活菌数为1X105～1X108cell/mL。
步骤b、混合后投加三水合乙酸钠0.26-0.92g/L作为碳源，然后放置于5-30℃，优选8℃，160rpm的水浴摇床中反应，反应一定时间后取样，污水pH值为7-9。
在第二个技术方案中，作为优选的，在步骤1中，蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂添加量为废水体积的20％-40％，废水处理体系中的碳氮比为8-12。
在第二个技术方案中，作为优选的，所述市政处理水的硝态氮浓度为15-30mg/L。
在第三个技术方案中，一种蒙特利氏假单胞菌YS-3的筛选方法，包括如下步骤：
步骤1、取活性污泥；
步骤2、将5g的活性污泥接种至硝态氮体积分数为0.5％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第一菌液；
步骤3、吸取步骤2中5％第一菌液转接至硝态氮体积分数为1.5％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第二菌液；
步骤4、吸取步骤3中5％的第二菌液转接至硝态氮体积分数为2.0％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第三菌液；
步骤5、吸取步骤4中的5％的第三菌液涂布于硝态氮体积分数为2.0％的无机盐固体培养基中，在温度为8℃的培养箱培养3天，获得单菌落；
步骤6、挑取步骤5中的单菌落置于离心管中，与体积分数30％的甘油1:1体积混合，制成菌液，并于-80℃超低温冰箱中保存。
在第三个技术方案中，作为优选的，在步骤6后进行步骤7，对菌种进行鉴定：
取步骤5得到的菌液中获得单菌落提取DNA，并对菌种进行DNA测序，其16S rRNA基因序列如标准测定的蒙特利氏假单胞菌YS-316S rRNA基因序列对比。
使用本发明的有益效果是：本发明的有益效果在于，对市政污水中硝态氮有很好的去除效果，对环境无污染，是优选的除氮选择。
附图说明
图1为本发明实施例2中蒙特利氏假单胞菌YS-3的菌落形态图；
图2为本发明实施例3中蒙特利氏假单胞菌YS-3及同时筛选得到的HW-1、YS-2分别对市政污水的硝态氮去除情况；
图3为本发明实施例4提供YS-3菌株的不同碳氮比处理市政处理水的硝态氮去除情况；
图4为本发明实施例5中蒙特利氏假单胞菌YS-3处理市政污水不同反应时间的硝态氮去除情况；
图5为本发明实施例6提供YS-3菌株的不同添加量处理市政处理水的硝态氮去除情况。
图6为本发明实施例6提供YS-3菌株的不同pH处理市政处理水的硝态氮去除情况。
具体实施方式
为使本技术方案的目的、技术方案和优点更加清楚明了，下面结合具体实施方式，对本技术方案进一步详细说明。应该理解，这些描述只是示例性的，而不是要限制本技术方案的范围。
本发明的目的之一在于提供一种蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3，蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)。
本发明的第二目的是提供上述的蒙特利氏假单胞菌YS-3的应用，所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3用于降解冬天北方污水处理厂出水氮化合物，优选用于降解市政处理废水、养殖废水、制药废水、石化废水、化肥废水、景观水、食品废水、大豆蛋白废水中的氮化合物。
本发明提供的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3可以以硝态氮化合物作为唯一氮源进行生长繁殖。
优选的，所述的氮化合物为硝态氮和亚硝态氮。
优选的，应用蒙特利氏假单胞菌YS-3降解氮化合物可以在好氧环境下进行。也可以在兼氧条件下降解硝态氮化合物。
本发明提供的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3可以以硝态氮化合物作为唯一氮源进行生长繁殖。
一种菌制剂，所述的菌制剂采用上述的蒙特利氏假单胞菌YS-3制备而成，该菌制剂也用于降解氮化合物，同时所述的菌制剂还包括有营养培养基。营养培养基选自牛肉膏蛋白胨培养基、LB营养培养基、以及添加有碳源的无机盐培养基中的任意一种，其中，碳源优选为乙酸钠。
牛肉膏蛋白胨培养基的成分及含量为：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0-8.0，优选pH＝7.4-7.6。
LB营养培养基的成分及含量为：酵母粉5.0g/L、氯化钠10.0g/L、蛋白胨10.0g/L，pH＝7.2-7.6。
无机盐培养基的成分及含量为：硝酸钠10g/L、钼酸钠0.08g/L、七水合硫酸亚铁0.12g/L、七水合硫酸镁0.2g/L、氯化钙0.12g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二胺1g/L，pH＝7.2-7.6。
本发明提供了所述的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3或菌制剂在降解市政污水中的应用，其应用步骤如下：
a)、将所述的蒙特利氏假单胞菌或菌制剂与待处理市政污水混合；蒙特利氏假单胞菌添加量为添加量占废水处理体系总体积的1.5％-40％，废水处理体系中的碳氮比为4-15。优选的，添加量为废水体积的20％-40％，废水处理体系中的碳氮比为8-12。
蒙特利氏假单胞菌或菌制剂与待处理市政污水混合后，混合体系中活菌数为1X105～1X108cell/mL。
b)、混合后投加三水合乙酸钠0.26-0.92g/L作为碳源，然后放置于5-30℃，优选8℃，160rpm的水浴摇床中反应，反应一定时间后取样；
pH值为7-9，优选为7.5-8.5，更优选为8，有利于蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3在市政处理水中生长繁殖，从而加快对市政处理水中的硝态氮化合物的降解。
优选的，市政处理水的硝态氮浓度为15-30mg/L。
以下通过实施例说明本技术方案。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的实验材料，如无特殊说明，均为常规生化试剂，均可通过商购获得。
实施例1
筛选获取蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3，其筛选过程如下：
步骤1)、从哈尔滨一市政污水厂A/A/O处理工艺A池出口取活性污泥；
步骤2)、将5g的活性污泥接种至硝态氮体积分数为0.5％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第一菌液；
步骤3)、吸取步骤2)中5％第一菌液转接至硝态氮体积分数为1.5％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第二菌液；
步骤4)、吸取步骤3)中5％的第二菌液转接至硝态氮体积分数为2.0％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第三菌液；
步骤5)、吸取步骤4)中的5％的第三菌液涂布于硝态氮体积分数为2.0％的无机盐固体培养基中，在温度为8℃培养箱上培养3天，获得单菌落；
步骤6)、挑取步骤5)中的单菌落置于离心管中，与甘油(体积分数30％)1:1体积混合，制成菌液，并于-80℃超低温冰箱中保存。
实施例2
对实施例1筛选的菌种进行鉴定。
本发明的实施例1中，筛选到三株菌，本发明中分别命名为HW-1、YS-2、YS-3。其中，经鉴定，YS-3为蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)。
蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3在琼脂平板培养基上生长良好，如图1所示，菌落呈规则形状，白色扁平，大小统一，直径2～4mm，表面褶皱，边缘平整，革兰氏染色为阴性，具有运动性，兼氧生长。菌株生长温度为10～20℃，pH 7～9，最适生长条件：生长温度为30℃，pH 8。
对实施例1中的步骤5)获得的单菌落提取DNA，并对菌种进行DNA测序，其16S rRNA基因序列如SEQ ID No.1所示。本发明中亦称该菌为蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3。
实施例3
对实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3菌的氮化合物物降解能力进行测定。具体步骤如下：
步骤1)、取实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3及同时筛选得到的HW-1、YS-2的菌液，于4000转/分钟离心10分钟，弃上清，向沉淀中加入实际水重新悬浮，得到蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3、HW-1、YS-2；
步骤2)、将分别取30mL的蒙特利氏假单胞菌以及同时筛选到的HW-1、YS-2按照步骤1离心后分别加入到编号2,3,4的测试瓶中，编号1为不加菌的对照组。并向每个测试瓶中加入硝态氮为25.83mg/L的市政处理水及三水合乙酸钠(碳氮比为10)至总体积均为100mL，编号1的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓为0，体积分数分别为0。编号2、3、4中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3以及同时筛选到HW-1、YS-2原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数分别为30％、30％、30％。；
步骤3)、将步骤2)中的测量系统置于摇床中，于8℃下，150转/分钟培养16h，测得16h处理后的硝态氮，并计算处理后的市政处理水的硝态氮去除率。
结果详见表1和图2。
表1不同菌株低温下处理市政污水的硝态氮浓度及去除率
如表1所示，3株脱氮菌选择添加量为30％，处理时间为16h时，YS-3菌以在好氧环境中，对市政污水处理16h时的硝态氮脱除效率达到85.75％，此时硝态氮浓度为3.68mg/L。而YS-2菌与HW-1菌低温下反硝化性能显著低于YS-3菌，硝态氮处理效率分别为55.05％和33.48％。因此，YS-3菌的脱氮效果更优，选择YS-3菌做后续的研究。从图2中可以看出，YS-3菌的脱氮效果和YS-2菌与HW-1菌相比，其效果要好于YS-2菌与HW-1菌。
实施例4
对实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3菌的不同碳氮比条件下的氮化合物降解能力进行测定。具体步骤如下：
步骤1)、取实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3，于4000转/分钟离心10分钟，弃上清，向沉淀中加入实际水重新悬浮，得到蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3；
步骤2)、将0mL、30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3分别加入编号为1、2的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为24.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为2)至总体积均为100mL，编号1(对照)的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓为0，体积分数为0。编号2中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤3)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为3的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为24.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为4)至总体积均为100mL，编号3中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤4)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为4的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为24.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为10)至总体积均为100mL，编号4中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤5)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为5的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为24.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为7)至总体积均为100mL，编号5中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤6)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为6的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为24.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为10)至总体积均为100mL，编号6中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤7)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为7的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为24.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为12)至总体积均为50mL，编号7中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤7)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为8的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为24.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为14)至总体积均为50mL，编号8中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤8)、将步骤2)，步骤3)，步骤4)，步骤5)，步骤6)，步骤7)中的测量系统置于摇床中，于8℃,下，150转/分钟培养16h，测得16h处理后的硝态氮，并计算处理后的市政处理水的硝态氮的去除率。
结果详见表2，图3。
表2YS-3菌株处理市政污水不同碳氮浓度及去除率
如表2所示，在YS-3菌株添加量为30％，反应时间为16h条件下，分别对碳氮比为2、4、6、8、10、12、14的硝态氮去除效果进行考察，随着碳氮比的增加，硝态氮去除率也逐渐增加。碳氮比为2、4、6、8、10、12、14、18处理后的硝态氮浓度分别为：18.45mg/L，14.15mg/L，8.36mg/L，5.34mg/L、3.31mg/L，3.28mg/L，3.02mg/L。YS-3菌利用NO2 -和NO3 -为呼吸作用的最终电子受体，把硝酸还原成氮(N2)，其脱氮作用过程为：NO3 -→NO2 -→N2↑。反硝化细菌多为异养型细菌，异养反硝化细菌可以以有机物为碳源，硝态氮为能源进行反硝化作用，其生化过程为：5CH3COOH+8NO3 —→6H2O+10CO2↑+4N2↑+8OH—+能量。碳源浓度的高低影响着反硝化作用的进程。碳氮比为2，4，6，8时，碳源相对不足，硝态氮浓度相对较高，硝态氮无法完全脱除。碳氮比为10时，碳源浓度适宜，此时硝态氮脱除效率达到86.56％，碳氮比为12、14时，碳源过量，成本较高。
实施例5
对实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3菌的不同反应时间的氮化合物物降解能力进行测定。
具体步骤如下：
步骤1)、取实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3，于4000转/分钟离心10分钟，弃上清，向沉淀中加入实际水重新悬浮，得到蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3；
步骤2)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为2、3、4、5、6、7、8的测试瓶中，将0mL的蒙利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3的对照组加入编号1的测试瓶，并向每个测试瓶中加入硝态氮为23.95mg/L的市政处理水及三水合乙酸钠(碳氮比为10)至总体积均为100mL，编号1的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3原菌液的菌浓为0，体积分数为0。编号2、3、4、5、6、7、8中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108cell/mL，体积分数分别为30％、30％、30％、30％、30％、30％、30％；
步骤3)、将步骤2)中的测量系统置于摇床中，于8℃下，150转/分钟培养0h，3h，6h，9h，12h，16h，20h，测得每个时间点处理后的硝态氮，并计算处理后的市政处理水的硝态氮和的去除率。
结果详见表3和图3。
表3 YS-3菌株不同反应时间处理市政污水的硝态氮浓度的去除
如表3所示，在YS-3菌株添加量为30％条件下分别对0h，3h，6h，9h，12h,16h，20h的硝态氮变化考察，结果表明随着处理时间的增加，硝态氮浓度持续下降的趋势。其中，处理时间为16h时，YS-3菌脱氮效率最高，且为87.81％，此时硝态氮浓度为2.93mg/L。当处理时间少于16h时，菌株反硝化进程进行得不完全，脱氮效率较低。当处理时间大于16h时，由于体系中碳源或氮源缺乏，微生物菌体活性下降，造成一部分菌体死亡，会增加水中的硝态氮含量。由以上硝态氮处理结果表明，反应时间选择16h最佳，从图4也可以得出相同的结论。
实施例6
对实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3菌的不同添加量的含氮化合物降解能力进行测定。具体步骤如下：
步骤1)、取实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3菌液，分别取5mL、10mL、20mL、30mL和40mL的菌液，于4000转/分钟离心10分钟，弃上清，向沉淀中加入实际水重新悬浮，得到蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3；
步骤2)、将0mL、5mL、10mL、20mL、30mL和40mL的菌液的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3菌体分别加入编号为1、2、3、4、5、6的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为23.95mg/L市政污水和对应的三水合乙酸钠(配成碳氮比为10)至总体积均为100mL，编号1的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓为0，体积分数为0。编号2、3、4、5、6中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数分别为5％、10％、20％、30％和40％；
步骤3)、将步骤2)中的测量系统置于摇床中，于8℃下，150转/分钟培养16h，测得16h处理后的硝态氮，并计算处理后的市政污水的硝态氮的去除率。结果详见表4和图5。
表4 YS-3处理市政污水不同添加量硝态氮浓度及去除率
如表4所示，碳氮比为10.0，以体积比分别投加菌液0、5％、10％、20％、30％和40％对市政污水处理16h。结果表明，当菌株添加量为5％-40％时，菌株投加量越大，硝态氮脱除效率越高；当菌株添加量为30％时，YS-3菌脱氮效率最高为87.22％，此时硝态氮浓度为3.06mg/L，从图5也可以得出相同的结论。
实施例7
对实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3菌的不同碳氮比条件下的氮化合物物降解能力进行测定。具体步骤如下：
步骤1)、取实施例1获得的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3，于4000转/分钟离心10分钟，弃上清，向沉淀中加入实际水重新悬浮，得到蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3；
步骤2)、将0mL、30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3分别加入编号为1、2的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为23.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为10)至总体积均为100mL，pH调节为5，编号1的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3原菌液的菌浓0，体积分数为0。编号2中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤3)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为3的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为23.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为10)至总体积均为100mL，pH调节为6，编号3中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤4)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为4的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为23.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为10.0)至总体积均为100mL，pH调节为7，编号4中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数为30％；
步骤5)、将30.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为5的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为23.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为10)至总体积均为100mL，pH调节为8，编号5中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数bv+为30％；
步骤6)、将20.00mL的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonas monteilii)YS-3分别加入编号为6的测试瓶中，并向每个测试瓶中加入硝态氮为23.63mg/L的市政处理水和三水合乙酸钠(碳氮比为10)至总体积均为100mL，pH调节为9，编号6中的蒙特利氏假单胞菌(Pseudomonasmonteilii)YS-3原菌液的菌浓在8.1X107～6.4X108 cell/mL，体积分数分别为30％；
步骤6)、将步骤2)，步骤3)，步骤4)，步骤5)中的测量系统置于摇床中，于8℃,下，150转/分钟培养16h，测得16h处理后的硝态氮，并计算处理后的市政处理水的硝态氮的去除率。
结果详见表5和图5。
表5 YS-3处理市政污水不同pH硝态氮浓度及去除率
如表5所示，以pH为5，6，7，8，9，碳氮比为10，体积比30％投加菌液对市政污水处理16h。结果表明，当菌pH为8，硝态氮脱除效率越高，为83.03％。
以上内容仅为本发明的较佳实施例，对于本领域的普通技术人员，依据本技术内容的思想，在具体实施方式及应用范围上可以作出许多变化，只要这些变化未脱离本发明的构思，均属于本专利的保护范围。

Claims (6)

1.一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂，其特征在于：采用蒙特利氏假单胞菌YS-3通过营养培养基制备，所述营养培养基为自牛肉膏蛋白胨培养基、LB营养培养基、以及添加有碳源的无机盐培养基中的任意一种；
所述牛肉膏蛋白胨培养基的成分及含量为：牛肉膏3g/L、蛋白胨10g/L、氯化钠5g/L，pH＝7.0-8.0；
LB营养培养基的成分及含量为：酵母粉5.0g/L、氯化钠10.0g/L、蛋白胨10.0g/L，pH＝7.2-7.6；
无机盐培养基的成分及含量为：硝酸钠10g/L、钼酸钠0.08g/L、七水合硫酸亚铁0.12g/L、七水合硫酸镁0.2g/L、氯化钙0.12g/L、磷酸二氢钾1g/L、磷酸氢二胺1g/L，pH＝7.2-7.6。
2.一种蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂的应用方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤a、将如权利要求1所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂与待净化污水混合；蒙特利氏假单胞菌添加量为添加量占废水处理体系总体积的1.5％-40％，废水处理体系中的碳氮比为4-15；蒙特利氏假单胞菌或菌制剂与待处理市政污水混合后，混合体系中活菌数为1X105～1X108cell/mL。
步骤b、混合后投加三水合乙酸钠0.26-0.92g/L作为碳源，然后放置于5-30℃，优选8℃，160rpm的水浴摇床中反应，反应一定时间后取样，污水pH值为7-9。
3.根据权利要求2所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂的应用方法，其特征在于：在步骤1中，蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂添加量为废水体积的20％-40％，废水处理体系中的碳氮比为8-12。
4.根据权利要求2所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3菌制剂的应用方法，其特征在于：所述市政处理水的硝态氮浓度为15-30mg/L。
5.一种蒙特利氏假单胞菌YS-3的筛选方法，其特征在于：包括如下步骤：
步骤1、取活性污泥；
步骤2、将5g的活性污泥接种至硝态氮体积分数为0.5％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第一菌液；
步骤3、吸取步骤2中5％第一菌液转接至硝态氮体积分数为1.5％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第二菌液；
步骤4、吸取步骤3中5％的第二菌液转接至硝态氮体积分数为2.0％的无机盐培养基中，在温度为8℃、转速为150转/分钟的摇床上培养3天，得到第三菌液；
步骤5、吸取步骤4中的5％的第三菌液涂布于硝态氮体积分数为2.0％的无机盐固体培养基中，在温度为8℃的培养箱培养3天，获得单菌落；
步骤6、挑取步骤5中的单菌落置于离心管中，与体积分数30％的甘油1:1体积混合，制成菌液，并于-80℃超低温冰箱中保存。
6.根据权利要求5所述的蒙特利氏假单胞菌YS-3的筛选方法，其特征在于：在步骤6后进行步骤7，对菌种进行鉴定：
取步骤5得到的菌液中获得单菌落提取DNA，并对菌种进行DNA测序，其16S rRNA基因序列如标准测定的蒙特利氏假单胞菌YS-316S rRNA基因序列对比。
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