CN107184848A - 脑震宁制剂的制药新用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及脑震宁制剂的制药新用途。脑震宁作为传统中药制剂，广泛应用于临床脑震荡患者的治疗。本发明发现，将脑震宁应用于小鼠创伤性脑损伤模型上，其皮层和海马体内的细胞死亡均少于空白组，且皮层缺损程度轻于空白组。同时，脑震宁对损伤后皮层轴突有保护作用，对树突分支和树突分支总长度也有一定程度上的保护。试验显示，脑震宁对创伤性脑损伤具有神经保护作用。

Description

脑震宁制剂的制药新用途
技术领域
本发明涉及一种药物的新的医药用途，特别是涉及上市药品脑震宁制剂的新的医药用途。
背景技术
创伤性脑损伤(Traumatic Brain Injury，TBI)是导致45岁以下人群残疾的重要病因。在北美和欧洲，每年创伤性脑损伤的发生率约为500/100000人。世界卫生组织预测从2000年到2020年，死于道路交通事故的人数(其中多数是由于创伤性脑损伤造成)将增加一倍，而且还会持续增加，并且主要集中在低-中等收入国家的交通事故中。到2020年，创伤性脑损伤将会成为全球致残致死的第三大病因(WHO，2009)。
另一方面，与青少年运动造成的脑震荡有关的急性和慢性高危因素也值得关注。越来越多的证据表明，有多次轻微脑损伤病史的患者更易患早发性痴呆，后期也更容易并发物质使用障碍以及精神疾病。
创伤性脑损伤不仅造成患者神经精神上的疾患，同时也给患者本人及其家庭的社会生活和经济带来了极大负担，更是给整个社会增加了经济负担。2000年，美国因创伤性脑损伤造成的支出将近600亿美金。据Bilmes和Stiglitz研究室估计，在2015年，伊拉克战场归来的脑损伤患者治疗所耗费的政府支出约为140亿美金。据Wittchen实验室估计，欧洲每年脑损伤的医疗费用高达330亿欧元。由此可见，创伤性脑损伤是一个严重的社会性问题。
创伤性脑损伤不仅是由物理撞击造成的原发性损伤，更进一步会引发继发性损伤，包括细胞兴奋性毒性损伤，弥散性轴突、树突损伤，神经炎症，神经血管破坏所致的微血管性缺血。这些损伤可影响脑内大片区域。而在这些损伤中，细胞死亡是最为显著的问题之一。
神经元死亡及神经退行性病变破坏了大脑的内在连接网络。根据受损区域的不同，神经元缺失可导致神经通路的连接受损，从而引发肢体运动、认知或情绪的异常。目前尚未发现有效的手段能减少脑损伤后的细胞死亡。因此，急需一种针对细胞死亡的神经保护药物或者神经修复手段。
尽管已经有大量的尝试和研究致力于研发神经保护性药物，但成功通过临床试验的药物却寥寥无几。到目前为止，尚未有FDA批准的能减少脑损伤后细胞死亡的药物。
中药疗法起源于中国，有两千多年的悠久发展历史。中药疗法现今已被广泛接受，是传统疗法的重要组成部分。脑震宁是专门治疗脑震荡、脑外伤后综合征的唯一药品，从1985年起被广泛用于治疗脑损伤患者，已逾百万例。临床数据表明，它可以改善自主神经功能障碍，缓解头痛，改善睡眠以及减轻精神症状。
发明内容
本发明的目的是提供脑震宁制剂的新用途，具体是在制药中的新用途。
本发明所涉及的脑震宁制剂是依据ZL 931007410公开的处方制成的颗粒剂、胶囊、片剂、软胶囊、口服液等各种适宜剂型，用于预防和治疗脑震荡、脑外伤后综合征、神经外科术后恢复，是山西振东安特生物制药有限公司的独家品种。
脑震宁颗粒收录于《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂(第十七册)》第230页(WS3-B-3312-98)，其处方为：当归200g、地黄200g、牡丹皮150g、川芎150g、地龙150g、丹参375g、茯苓250g、陈皮250g、竹茹250g、酸枣仁(炒)250g、柏子仁250g；制法为：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5h，合并煎液，虑过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35～1.38(55℃)的清膏，加入适量蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成1000g。功能凉血活血，化瘀通络，益血安神，宁心定智，除烦止呕。用于治疗脑外伤引起的头痛，头晕，烦躁失眠，健忘惊悸，恶心呕吐。
根据上述脑震宁颗粒改进而成的脑震宁无糖颗粒，其标准(WS3-B-3312-98-1)由国家食品药品监督管理局发布，处方为当归333.4g、地黄333.4g、牡丹皮250g、川芎250g、地龙250g、丹参625g、茯苓416.7g、陈皮416.7g、竹茹416.7g、酸枣仁(炒)416.7g、柏子仁416.7g；功能、主治与脑震宁颗粒相同，只是制法略有区分，具体为：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5h，合并煎液，虑过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35～1.38(55℃)的清膏，以糊精为辅料，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成1000g，即得。
具体地，本发明涉及脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤的药物中的应用。
本发明还涉及脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致继发性损伤的药物中的应用。
进一步地，本发明还涉及脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致皮层组织缺损的药物中的应用。
还涉及脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致皮层细胞死亡的药物中的应用。
还涉及脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致海马体细胞死亡的药物中的应用。
还涉及脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致皮层神经元轴突损伤的药物中的应用。
还涉及脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致皮层神经元树突损伤的药物中的应用。
为了更好的理解本发明的实质，下面将通过脑震宁制剂的药理试验及结果来说明其在制药领域的新用途。
脑震宁颗粒为山西振东安特生物制药有限公生产，由11味中药组成：当归200g、地黄200g、牡丹皮150g、川芎150g、地龙150g、丹参375g、茯苓250g、陈皮250g、竹茹250g、酸枣仁(炒)250g、柏子仁250g。制备步骤如下：1、提取当归、牡丹皮、川芎和陈皮四味中药的挥发油(I)；2、加入剩余7味中药进行水提获得粗提物(II)；3、精炼粗提物(II)获得精制提取物(III)；4、在精制提取物(III)中加入辅料，并将之制成颗粒；5、将挥发油(I)喷洒在颗粒上。以上制备的脑震宁颗粒，每1g颗粒中含有4.125g的处方量。
一、试验动物和药物
1、动物管理
本研究采用8周龄的雄性C57BL/6小鼠。所有步骤均通过印第安纳大学动物管理与应用委员会(Indiana University’s Animal Care and Use Committee，IACUC)许可。
2、可控性皮层撞击(Controlled Cortical Impact)脑损伤模型
取8周龄小鼠(n＝80)接受中度CCI造模。CCI模型所用仪器为电磁冲击器(ImpactOneTM，Stereotactic Impactor for CCI，Leica Microsystem，Illinois，USA)，冲击速度设定为3.5m/s，冲击深度1mm，此参数可造成中度损伤。造模术后，缝合头部皮肤。
3、脑震宁颗粒处理
术后，80只脑损伤模型小鼠被随机分配入纯水处理组或脑震宁处理组。
脑震宁颗粒溶于纯水中，终浓度0.2g/mL。
脑震宁处理组小鼠按每公斤体重6.25g脑震宁颗粒给药，颗粒溶于400～500μL纯水中(水量取决于体重)灌胃给药，一日两次直至取材。
空白组小鼠同样一日两次伺服等量纯水。
术后1天、3天、5天、7天，分别取每组5只小鼠进行取材，评估皮层组织缺损、细胞死亡、轴突损伤和树突损伤。
二、试验内容
1、组织收集
小鼠均由Avertin深度麻醉，用冷盐水经心脏灌流，随后用冷的4％多聚甲醛固定。脑组织取出后在多聚甲醛中固定过夜，经30％蔗糖脱水处理后进行冰冻切片。冰冻切片使用Leica CM 1950冰冻切片机，取连续切片，切片厚度30μm。切片保存于-20℃，组织病理分析时取用。
2、尼氏染色
将冰冻切片贴在防脱载玻片(Fisher Scientific，Pittsburgh，PA，USA)上，干燥后以焦油紫染色20min。染色结束后快速在纯水中清洗两次，用95％乙醇分色2min。随后将玻片在100％乙醇中脱水两次(每次5min)，最后在100％二甲苯中透明两次(每次2min)。切片晾干封片后，即可用于图像采集。
3、皮层组织缺损面积测量
为量化挫伤程度，需测量损伤皮层的百分比。具体步骤为：大脑连续切片(每片30μm厚)，每隔六片取一片(即两片之间相隔180μm)，以焦油紫染色后可显示未缺损皮层。用AxioVision软件(version 4.8，Zeiss，Thornwood，NY，USA)分别勾勒出健侧皮层和患侧未缺损的皮层轮廓。轮廓内体积即为所勾勒皮层的体积，皮层缺损百分比计算公式为：缺损百分比＝(健侧皮层体积-患侧皮层体积)/健侧皮层体积×100％。
4、Fluoro-Jade B染色
0.0004％Fluoro-Jade B(FJB)溶液：取4mL 0.01％FJB储存液加入96mL纯水中配制而成，使用前加入0.1％冰醋酸。
将冰冻切片贴在防脱载玻片(Fisher Scientific)上。染色时，先将玻片置于纯水中2min复水，随后将玻片转移至0.06％高锰酸钾溶液中氧化20min。氧化结束后，漂洗两次(每次2min)，置于0.0004％Fluoro-Jade B(FJB)溶液中20min。染色结束后，玻片漂洗两次，晾干封片。
5、皮层挫伤处临近区域的死亡神经元计数
对TBI后皮层挫伤处的临近区域的FJB阳性细胞进行计数，计数采用盲目定量组织学分析，每个时间点有5只小鼠。每只小鼠取3片最靠近损伤中心的脑组织切片，挫伤处临近区域的细胞死亡数皆被纳入计数，结果以密度表示。那些虽有组织残留，其上却未见阳性染色的不纳入计算范围。
在Axio Imager M2显微镜5×物镜下，用Stereo Investigator software(MicroBrightfield Inc.，Williston，VT)软件划出可见死亡细胞的边界。FJB阳性神经元以在划定区域内系统抽样的方式进行计数，计数在40×物镜进行。划定区域被划分成300×300μm2的数格，每一格取一100×100μm2的小格，对其内阳性细胞进行计数，阳性细胞根据细胞形态和荧光强度来识别。
在获得估算的FJB阳性细胞总数和划定区域体积后，便可以通过计算得出FJB阳性细胞的密度。
计算公式：细胞密度＝估算的细胞总数/[划定区域体积(mm3)×100000000(μm3/mm3)]。
6、海马体中的死亡神经元计数
对损伤后海马体内各个区域的FJB阳性细胞总数进行评估，计数采用盲目定量组织学分析(每个时间点5只小鼠)。连续切片后，包含所有海马结构的切片依次每隔6片取1片进行FJB染色。20×物镜下，可识别所有的FJB阳性细胞并计数。最后，将所有切片上海马体内的FJB阳性细胞相加并计算得到总数。
7、免疫荧光染色
切片在PBS中漂洗3次(每次5min)后，室温封闭1h(封闭液成分：0.1％Triton X-100，1％牛血清白蛋白和5％山羊血清)。随后，切片在一抗中4℃孵育过夜。用PBS漂洗3次(每次5min)后，室温下孵育二抗1h，用4′，6-Diamidino-2-phenylindole(DAPI)染核2min。最后PBS漂洗3次(每次5min)，干燥后，用Fluoromount G(Southern Biotech，Birmingham，AL，USA)封片。
染色所用一抗及终浓度如下：β-APP antibody(1∶1000，rabbit，Invitrogen)；GFAP antibody(1∶1000，mouse，Sigma，USA)；Ibal(1∶200，goat，Abcam，USA)；NG2(1∶200，rabbit，Millipore，USA)；synaptophysinantibody(1∶1000，mouse，Millipore，USA)。
染色所用二抗均来自ImmunoResearch Laboratories Inc.，浓度1∶1000。染色后，使用倒置显微镜(Zeiss，Axiovert 200M)及数码相机(Zeiss，Axio Cam MRc5)在10×、40×和63×倍镜下进行图像采集。
8、高尔基染色
以FD Rapid Golgi Stain试剂盒(FD NeuroTechnologies)按供应商提供方法进行高尔基染色。步骤如下：新鲜取材的脑组织置于浸渍液(A溶液与B溶液等量混合而成)中，避光室温下静置2周，再转移至C溶液，4℃下浸泡48h(避光)。随后，脑组织用滑动切片机切片，切片厚度150μm，切片后进行高尔基染色。
9、树突形态分析
按如下标准筛选出需要分析的锥体神经元：位于皮层II/III层、高尔基染色着色、顶树突能延伸至皮层表面。
使用电动显微镜(Zeiss Imager M2)及Neurolucida软件(Microbrightfield，VT)，在20×镜下重建神经元树突上的所有分支。重建后，使用NeuroExplorer软件(Microbrightfield)对重建的3D模型进行分析。
本实验中每个实验组4只小鼠，每只小鼠至少有10个神经元被重建分析，同一只小鼠所得数据取平均值。
为观察树突形态的整体变化，从不同角度进行分析：树突分支的总长度，树突分支的平均长度以及树突的分支数目。所得数据用One-way ANOVA进行组间比较。
三、统计分析
所有数据均以“平均值±标准误”形式表现。组间差异以One-way ANOVA或者t检验进行分析，统计学差异以p＜0.05为标准。
四、结果
1、脑震宁显著减少了损伤所致皮层组织缺损
创伤性脑损伤后高发的神经功能障碍乃至死亡，很大程度上由皮层大量的继发性细胞死亡导致。
为了评估脑震宁在损伤后对皮层组织缺损的影响，小鼠(每组10只)接受CCI造模，术后，按照6.25g/kg给予脑震宁颗粒(溶于纯水中)或者纯水处理，一日两次，连续给药7天后取材进行组织学分析。
取材后，脑组织切片经尼氏染色可用于分析组织缺损。通过测量残余皮层的体积，可计算并评估皮层组织缺损和保护的情况。具体见图1，图中：(a)脑损伤后空白组小鼠大脑皮层组织。(b)脑损伤后脑震宁组小鼠大脑皮层组织。(c)脑损伤区域皮层组织损伤率的定量测定(p＜0.05)，差异有统计学意义。
结果显示：纯水处理组小鼠，其患侧皮层组织缺损率为16.4±1.3％(图1a)，然而，在脑震宁组，其皮层组织缺损率只有12.0±1.1％(图1b)。相较纯水组，脑震宁组减少了34.9％的组织缺损率，且统计学上有显著性。这个结果表明，脑震宁在小鼠CCI模型中能有效减少损伤造成的皮层组织缺损。
2、脑震宁减少了中度脑损伤后的皮层细胞死亡
使用FJB染色来评估皮层的细胞死亡，具体如图2。图中，(a)脑损伤后空白组小鼠皮层神经细胞死亡。(b)脑损伤后脑震宁颗粒组小鼠皮层神经细胞死亡。(c)皮层组织神经细胞死亡的定量测定(p＜0.05)。
在FJB染色后，死亡神经元的胞体可被染成绿色(图2a和b)，有些神经元甚至可见树突的主干(图2a和b)，说明FJB在神经元死亡发生的早期即可标记。
在皮层挫伤处临近的区域，纯水处理组的FJB阳性神经元密度(纯水处理组：48366±1929/μm3，图2a和c)与脑震宁组(37271±3589/μm3，图2b)有显著差异，且统计学有意义。此结果表明，脑震宁的术后处理可有效减少中度脑损伤引起的皮层神经元死亡。
3、脑震宁减少了中度脑损伤后海马的细胞死亡
脑损伤不仅造成皮层的神经元死亡，同时也造成海马中大量的细胞死亡。为了评估海马中的细胞死亡，用FJB染色来标识海马中死亡的细胞。在海马中，FJB阳性细胞主要集中于齿状回(图3a和c)。
图3中，(a)脑损伤后空白组小鼠齿状回神经细胞死亡。(b)白色框中选定区域FJB-阳性细胞的放大画面。(c)脑损伤后脑震宁组小鼠齿状回神经细胞死亡。(d)白色框中选定区域FJB-阳性细胞的放大画面。(e)海马神经细胞死亡的定量测定(p＜0.05)。
在空白组中，海马内的FJB阳性细胞总数为6168±2331/μm3(图3a和b)，而在脑震宁组中，FJB阳性细胞总数只有3978±663/μm3(图3c和d)。相较空白组(图3e)，脑震宁组的FJB阳性细胞总数有所减少。结果表明，脑震宁在一定程度上减少了海马中损伤引起的神经元死亡。
4、脑震宁减轻了中度脑损伤后皮层的轴突损伤
由于脑损伤还常引起轴突损伤，因此，需要进一步评估脑震宁是否对损伤后的轴突有保护作用。
CCI造模术后，小鼠分别于术后1h和术后12h给予两次脑震宁伺服。取材于术后24h进行。
取材后，以β-淀粉样蛋白前体蛋白(β-Amyloid Precursor Protein，APP)进行染色以检测早期的轴突损伤情况，图4给出了代表区域表达了β-淀粉样前体蛋白(β-APP)标记的脑损伤后皮层挫伤处临近区域和胼胝体损伤的轴突。其中：(a)对照组在皮层受到中度脑损伤后显示了大量β-APP染色。(b)图(a)中β-APP染色的中度脑损伤后皮层挫伤处临近区域的放大图像。(c)图(a)中β-APP染色的中度脑损伤后皮层胼胝体的放大图像。(d)脑震宁组在皮层受到中度脑损伤后显示了大量β-APP染色。(e)图(d)中减少β-APP染色的中度脑损伤后皮层挫伤处临近区域的放大图像。(f)图(d)中显著减少β-APP染色的中度脑损伤后皮层胼胝体的放大图像。
术后24h，空白组(图4a-c)和脑震宁组(图4d-f)中均可见大量的APP阳性反应，主要集中于皮层挫伤处临近区域以及胼胝体。从放大图中，皮层挫伤处临近区域可见APP染色呈串珠状分布，在脑震宁组(图4e)中，APP阳性信号的密度小于空白组(图4c)。在胼胝体中，轴突束的APP染色呈纤维状，并伴有串珠状膨大，且脑震宁组(图4f)的绿色串珠样膨大比空白组(图4c)有所减少。上述结果表明，脑震宁对损伤后皮层的轴突有保护作用。
5、脑震宁对中度脑损伤72h后的皮层神经元树突形态有保护作用
树突分支是神经元一个重要组成部分，其为树突棘的形成提供了广阔的表面，因此具有举足轻重的意义。
通过高尔基染色来检测神经元的树突形态(图5)，评估脑震宁是否对中度脑损伤后的神经元树突有保护作用。
高尔基染色是一种高敏可靠的染色方法，常用于神经元微细结构的形态学研究，尤其是树突棘。通过高尔基染色，可见空白组(图5a)和脑震宁组(图5b)的皮层内锥体神经元及其树突。前期研究显示，中度脑损伤造成的神经元树突损伤，高峰期发生于术后72h，因此，本实验也在术后72h进行评估。
从空白组(图5a)和处理组(图5b)的皮层中选取符合前述条件的II/III层锥体神经元(n＝100)，并对其进行树突重建，进而评估其树突形态的复杂性是否在损伤后有所削弱。
在脑震宁组，损伤后顶树突的树突分支数从6.0±1.06增加至6.64±0.53(p＝0.05)，而基树突分支数从7.07±0.86增加至8.18±0.62(p＝0.05)(图5c)。树突分支的总长度从813.17±90.16μm增长至1006.36±93.31μm(p＝0.05，图5c)。树突分支的平均长度也略有增长。结果表明，在中度脑损伤模型中，脑震宁对皮层中神经元树突有一定程度上的保护作用。
五、结论
脑震宁为山西振东安特生物制药有限公司的专利药物，以丹参、当归、川芎、地龙、丹皮为主要有效成分。其中丹参活血化瘀，当归补血止痛，川芎顺气活血，地龙通经止痛，丹皮凉血滋阴生津。酸枣仁、柏子仁、茯苓养心补肝、安神定志，陈皮温中止呕，竹茹和胃止吐。在小鼠的药理毒理学研究中，药物具有镇静、镇痛、止吐的作用，同时降低了小鼠的自主活动，并增强了戊巴比妥钠的抑制效果。不仅如此，它还提高了小鼠在热板实验中的痛阈，以及改善了小鼠的学习记忆功能。该药在阿扑吗啡导致家犬呕吐的实验中也表现出了缓解作用。早在1985年，脑震宁颗粒就开始应用于临床治疗中，服用脑震宁的患者多为脑震荡、脑损伤综合征和手术后康复患者。临床观察显示此药对多种症状，如头痛、头晕、烦躁、失眠、健忘、心悸、恶心呕吐等均有改善效果。
本实验将脑震宁应用于小鼠的中度脑损伤模型中，结果表明，脑震宁对创伤性脑损伤具有神经保护作用。
附图说明
图1是脑震宁制剂对中度脑损伤后皮层组织缺损情况的影响(a空白组，b脑震宁组，c皮层组织损伤率)。
图2是脑震宁制剂对中度脑损伤后皮层细胞死亡的影响(a空白组，b脑震宁组，cFJB染色细胞死亡密度)。
图3是脑震宁制剂对中度脑损伤后海马细胞的影响(a空白组，b脑震宁组，c FJB染色细胞数)。
图4是脑震宁制剂对中度脑损伤后皮层轴突的影响(a、b、c空白组，d、e、f脑震宁组)。
图5是脑震宁制剂对中度脑损伤72小时后皮层神经元树突形态的影响(a空白组，b脑震宁组，c树突分支数、总长度和平均长度)。
具体实施方式
下述实施例仅为本发明的优选技术方案，并不用于对本发明进行任何限制。对于本领域技术人员而言，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
实施例1：脑震宁提取物
脑震宁提取物是依据专利号为931007410的专利公开的处方制成的精制物。
处方：当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹250g，炒酸枣仁250g，柏子仁250g。
制法：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，滤过，浓缩成稠膏状即得脑震宁提取物。
实施例2：脑震宁颗粒
根据标准WS3-B-3312-98-1制备不含蔗糖的脑震宁颗粒。
处方：当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹250g，炒酸枣仁250g，柏子仁250g。
以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5h，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度为1.35～1.38(55℃)的清膏，加入适量的蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成1000g；即得脑震宁有糖颗粒；或者加入适量的糊精，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成600g，即得脑震宁无糖颗粒。
实施例3：脑震宁胶囊
处方：当归220g，地黄210g，牡丹皮160g，川芎140g，地龙130g，丹参330g，茯苓260g，陈皮260g，竹茹260g，炒酸枣仁160g，柏子仁160g。
制法：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用80％的乙醇醇沉2次，浓缩成稠膏状，加入适量的淀粉混匀、制粒、干燥整粒、加入所得挥发油，搅拌均匀，制得脑震宁胶囊200粒，每粒胶囊装0.4g。
实施例4：脑震宁片剂
处方：当归175g，地黄175g，牡丹皮150g，川芎75g，地龙75g，丹参300g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹150g，炒酸枣仁150g，柏子仁150g。
制法：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用70％乙醇醇沉2次，浓缩成稠膏状，加入适量的淀粉、羧甲基淀粉钠混匀、制粒、干燥整粒，再加入所得挥发油，搅拌均匀，压片。制得脑震宁片200片，每片重0.5g。
实施例5：脑震宁软胶囊
处方：当归300g，地黄300g，牡丹皮275g，川芎250g，地龙250g，丹参500g，茯苓275g，陈皮375g，竹茹275g，炒酸枣仁275g，柏子仁275g。
制法：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用80％的乙醇醇沉2次，浓缩成稠膏状，以滴制法制得脑震宁软胶囊300粒，每片粒0.5g。
实施例6：脑震宁分散片
处方：当归250g，地黄220g，牡丹皮200g，川芎100g，地龙100g，丹参400g，茯苓330g，陈皮300g，竹茹200g，炒酸枣仁190g，柏子仁220g。
制法：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用70％的乙醇醇沉2次，浓缩成稠膏状，加入适量的羧甲基淀粉钠、微晶纤维素、微粉硅胶、用乙醇制粒、干燥、整粒，再加入所得挥发油，混匀后，压片。制得脑震宁分散片200片，每片重0.65g。
实施例7：脑震宁口服液
处方：当归210g，地黄210g，牡丹皮140g，川芎140g，地龙140g，丹参350g，茯苓260g，陈皮280g，竹茹240g，炒酸枣仁230g，柏子仁230g。
制法：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，再加入其他药材水提，水提取后，用70％的乙醇醇沉2次，加入蜂蜜、聚山梨酯80、苯甲酸钠适量，用枸橼酸调节pH值至4.5～5.5，搅匀，滤过，得脑震宁口服液1000mL，5mL/支。
实施例8：小儿脑震宁颗粒
处方：当归200g，地黄200g，牡丹皮150g，川芎150g，地龙150g，丹参375g，茯苓250g，陈皮250g，竹茹250g，炒酸枣仁250g，柏子仁250g。
制法：以上十一味，当归、牡丹皮、川芎、陈皮蒸馏提取挥发油，蒸馏后水溶液另器收集；药渣与其余丹参等七味加水煎煮二次，每次1.5h，合并煎液，滤过，滤液与上述水溶液合并，浓缩至相对密度1.35～1.38(55℃)的清膏，加入适量蔗糖和糊精，制粒，干燥，加入上述挥发油，混匀，制成1000g，即得。

Claims (7)

1.脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤的药物中的应用。
2.脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致继发性损伤的药物中的应用。
3.脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致皮层组织缺损的药物中的应用。
4.脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致皮层细胞死亡的药物中的应用。
5.脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致海马体细胞死亡的药物中的应用。
6.脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致皮层神经元轴突损伤的药物中的应用。
7.脑震宁制剂在制备治疗创伤性脑损伤所致皮层神经元树突损伤的药物中的应用。
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