CN107179358A - 动物毛发中瘦肉精残留的检测方法 - Google Patents

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方志成
阙小峰
高岳
吴晨奇
余雁
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Abstract

本发明公开了一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，包括以下步骤：将动物毛发用清洗液清洗干净，剪碎（优选长度不超过2cm），干燥；将干燥后的毛发放入弱碱溶液中，然后在10‑15atm压力中搅拌1‑2.5h，然后泄压，加入有机溶剂，超声10‑20min，静置分层，取上层清液为提取液；将提取液过WCX柱或MCX柱净化；用超高效液相色谱‑电喷雾串联质谱测定提取液中瘦肉精含量。本发明对动物毛发处理干净，提取效果好，对检测过程干扰少，检测准确度高，大大避免了假阳性检测的出现，且瘦肉精回收率高。

Description

动物毛发中瘦肉精残留的检测方法
技术领域
本发明涉及一种兽药残留检测，具体涉及一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法。
背景技术
瘦肉精又称盐酸克伦特罗，是一种能够起到促进瘦肉生长、抑制肥肉生长的药物，大量试验已证明盐酸克伦特罗在动物体内的残留主要集中在眼睛、毛发、肺、肝、肾及肌肉和脂肪组织。其中眼睛的视网膜和脉络膜、毛发中残留最高，是因为其消除最慢；其次是肺、肝和肾；肌肉组织和脂肪组织中的残留情况大致相当，约为肝脏中的1/5，现有技术中对瘦肉精进行检测时多采用动物的尿液或肌肉组织，这类原料检测时容易造成假阳性，检测准确度不高。毛发中残留量多，且假阳性判断可能性会大大降低，但由于毛发脏污严重，提取较难，容易降低瘦肉精回收率，检测准确度有待提高。
发明内容
本发明要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷，提供一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，更主要具体涉及的是对毛发的前处理阶段，该方法回收率高，应用前景好。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，包括以下步骤：
（1）将动物毛发用清洗液清洗干净，剪碎（优选长度不超过2cm），干燥；
（2）将干燥后的毛发放入弱碱溶液中，然后在10-15atm压力中搅拌1-2.5h，然后泄压，加入有机溶剂，超声10-20min，静置分层，取上层清液为提取液；
（4）将提取液过WCX柱或MCX柱净化；
（5）用超高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定提取液中瘦肉精含量。
优选的，步骤（2）中先在3-5 atm压力下搅拌0.5h，然后升压至10-15atm继续搅拌，搅拌温度为30-45℃。
优选的，步骤（1）中清洗液是质量比为1:1的：5% 吐温80和混合剂的混合液，所述混合剂为疏水性溶剂-亲水性溶剂的混合溶剂。
优选的，疏水性溶剂-亲水性溶剂为正己烷-丙酮的混合溶剂，其中正己烷-丙酮的摩尔比为1:0.1-1:0.5。
优选的，所述弱碱溶液中的弱碱选自：氨水、碳酸钠或碳酸钾中的一种或一种以上的混合物。
优选的，所有机溶剂为甲醇、乙醇或乙酸乙酯。
优选的，弱碱溶液浓度为1.0-2.5mol/L，每一克干燥毛发用量为2-15ml。
本发明动物毛发包括但不限于：猪毛、羊毛、牛毛、鸡毛、鸭毛、鹅毛等常见禽畜类。
本发明步骤（5）中使用超高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定瘦肉精含量时，可采用现有技术测量，或在现有技术基础上做参数的适当调整，但本发明优选的仪器测试参数如下：
超高效液相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司生产的Agilent1290型号高效液相色谱仪和美国AB SCIEX公司生产的AP15500质谱仪连用）：
色谱柱：Eclipse Plus C18(规格为2 .1×100mm，1 .8μm)。流动相A 为0.08％甲酸水溶液；B 为甲醇。梯度洗脱程序：0 ～5.0min，1％～3％ B ；5.0～10.0min，3％～50％ B ；10.0～15.0min，50％ B～95％ ，B ；15.0～20.0min，95％ B～5％，20.0-25.0min，维持5％B。流速0.25mL/min ；柱温30℃ ；进样体积：5.0μL。
质谱条件：电喷雾离子源，喷雾电压（IS）：2.6V；离子化温度350℃，雾化器流量1000L/Hr；锥孔气流量50L/Hr；碰撞气流量为0.20mL/min，碰撞气氮气，驻留时间110ms。
本发明所达到的有益效果：
本发明对动物毛发处理干净，提取效果好，对检测过程干扰少，检测准确度高，大大避免了假阳性检测的出现，且瘦肉精回收率高；相对现有技术中使用强酸、强碱等其他方法对毛发中瘦肉精的提取，本发明使用弱碱加高压的条件，进一步提高了对瘦肉精的回收率，且所用试剂对环境更加友好，对提取液净化时使用极性较弱的WCX色谱柱（弱阳离子交换柱）也能达到较高的回收率。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。
实施例1
（1）取猪身上不同部位的毛发10g用清洗液清洗干净20mL×3次，剪碎，长度约为0.5cm，干燥；清洗液是质量比为1:1的：5% 吐温80和混合剂的混合液，混合剂为为正己烷-丙酮的混合溶剂，其中正己烷-丙酮的摩尔比为1:0.1；
（2）将干燥后的毛发放入10mL，2mol/L的碳酸钠溶液中，然后先在3atm压力下搅拌0.5h，然后升压至10atm继续搅拌1h，搅拌温度为40℃。随后泄压，加入乙酸乙酯，超声15min，静置分层，取上层清液为提取液；
（4）将提取液过WCX色谱柱净化；
（5）用超高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定提取液中瘦肉精含量。仪器测试参数如下：
超高效液相色谱-质谱联用仪（美国Agilent公司生产的Agilent1290型号高效液相色谱仪和美国AB SCIEX公司生产的AP15500质谱仪连用）：
色谱柱：Eclipse Plus C18(规格为2 .1×100mm，1 .8μm)。流动相A 为0.08％甲酸水溶液；B 为甲醇。梯度洗脱程序：0 ～5.0min，1％～3％ B ；5.0～10.0min，3％～50％ B ；10.0～15.0min，50％ B～95％ ，B ；15.0～20.0min，95％ B～5％，20.0-25.0min，维持5％B。流速0.25mL/min ；柱温30℃ ；进样体积：5.0μL。
质谱条件：电喷雾离子源，喷雾电压（IS）：2.6V；离子化温度350℃，雾化器流量1000L/Hr；锥孔气流量50L/Hr；碰撞气流量为0.20mL/min，碰撞气氮气，驻留时间110ms。
经配标准溶液，线性回归，计算瘦肉精含量及加标回收率等检测后，本实施例中瘦肉精加标回收率为99.5%。
实施例2
（1）取牛不同部位的毛发8g用清洗液（20mL×3次）清洗干净，剪碎，剪过后毛发长度约为1cm，干燥；清洗液是质量比为1:1的：5% 吐温80和混合剂的混合液，混合剂为为正己烷-丙酮的混合溶剂，其中正己烷-丙酮的摩尔比为1:0.4；
（2）将干燥后的毛发放入20mL，1.5mol/L碳酸钾溶液中，然后先在5atm压力下搅拌0.5h，然后升压至13atm继续搅拌0.5h，搅拌温度为30℃。随后泄压，加入甲醇，超声20min，静置分层，取上层清液为提取液；
（4）将提取液过MCX色谱柱净化；
（5）用超高效液相色谱-电喷雾串联质谱测定提取液中瘦肉精含量。
优选的，步骤（1）中清洗液是质量比为1:1的：5% 吐温80和混合剂的混合液，所述混合剂为疏水性溶剂-亲水性溶剂的混合溶剂。
优选的，疏水性溶剂-亲水性溶剂为正己烷-丙酮的混合溶剂，其中正己烷-丙酮的摩尔比为1:0.1-1:0.5。
本发实施例使用超高效液相色谱-质谱联用仪：美国Agilent公司生产的Agilent1290型号高效液相色谱仪和美国AB SCIEX公司生产的AP15500质谱仪连用。
经配标准溶液，线性回归，计算瘦肉精含量及加标回收率等检测后，本实施例中瘦肉精加标回收率为98.5%。
对比例1
本对比例中使用氢氧化钠或氢氧化钾等强碱水溶液代替实施例1中的碳酸钠水溶液，同时不使用高压环境，其余均与实施例1相同。
经配标准溶液，线性回归，计算瘦肉精含量及加标回收率等检测后，本实施例中瘦肉精加标回收率为80.5%。
对比例2
本对比例中使用强酸：0.1mol/L氯化氢水溶液代替实施例1中的碳酸钠水溶液，同时不使用高压环境，其余均与实施例1相同。
经配标准溶液，线性回归，计算瘦肉精含量及加标回收率等检测后，本实施例中瘦肉精加标回收率为88.3%。
由以上结果可知，使用本发明方法测得的回收率要远大于使用强酸或强碱的回收率。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明技术原理的前提下，还可以做出若干改进和变形，这些改进和变形也应视为本发明的保护范围。

Claims (7)

1.一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将动物毛发用清洗液清洗干净，剪碎，干燥；
（2）将干燥后的毛发放入弱碱溶液中，然后在10-15atm压力中搅拌1-2.5h，然后泄压，加入有机溶剂，超声10-20min，静置分层，取上层清液为提取液；
（4）将提取液过WCX柱或MCX柱净化；
（5）用液相色谱-串联质谱测定提取液中瘦肉精含量。
2.根据权利要求1所述的一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，其特征在于，步骤（2）中先在3-5 atm压力下搅拌0.5h，然后升压至10-15atm继续搅拌，搅拌温度为30-45℃。
3.根据权利要求2所述的一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，其特征在于，步骤（1）中清洗液是质量比为1:1的：5% 吐温80和混合剂的混合液，所述混合剂为疏水性溶剂-亲水性溶剂的混合溶剂。
4.根据权利要求2所述的一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，其特征在于，疏水性溶剂-亲水性溶剂为正己烷-丙酮的混合溶剂，其中正己烷-丙酮的摩尔比为1:0.1-1:0.5。
5.根据权利要求1-4任一项所述的一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，其特征在于，所述弱碱溶液中的弱碱选自：氨水、碳酸钠或碳酸钾中的一种或一种以上的混合物。
6.根据权利要求1-4任一项所述的一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，其特征在于，所有机溶剂为甲醇、乙醇或乙酸乙酯。
7.根据权利要求1所述的一种动物毛发中瘦肉精残留的检测方法，其特征在于，弱碱溶液浓度为1.0-2.5mol/L，每一克干燥毛发用量为2-15ml。
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