CN107163134B - 一种胸腺法新聚乙二醇聚合物、包含其的药物组合物及应用 - Google Patents

一种胸腺法新聚乙二醇聚合物、包含其的药物组合物及应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种胸腺法新聚乙二醇聚合物、包含其的药物组合物及应用。该胸腺法新聚乙二醇聚合物具有以下通式：

Description

一种胸腺法新聚乙二醇聚合物、包含其的药物组合物及应用
技术领域
本发明属于制药领域，具体涉及一种胸腺法新聚乙二醇聚合物、包含其的药物组合物及应用。
背景技术
胸腺法新(简称Tɑ1)是Goldstein等最早从牛胸腺素组分5(TF5)中分离出来的一种28肽，其相对分子量为3108.3，等电点为4.2左右，临床使用的胸腺法新均为氮末端乙酰化的产品，本发明中所使用到的胸腺法新均指未乙酰化的胸腺法新。Tɑ1广泛分布于哺乳动物的多种器官，以胸腺组织中的浓度分布最高。Tɑ1在各种组织器官中的蛋白质结构均相同。人Tɑ1序列与猪、牛、鼠等动物的Tɑ1具有很高的同源性。利用NCBI、PIR及SWISS-PROT等蛋白质数据库，对已知的Tɑ1进行蛋白质序列联配，发现从大肠杆菌到哺乳动物，来自不同种属的Tɑ1其氨基酸组成均高度保守。
Tɑ1作为一种广谱免疫调节剂，临床结果显示其对乙型肝炎和丙型肝炎有显著疗效，对肿瘤和艾滋病也有一定疗效。对此，Tɑ1还可以用作免疫辅助药剂，以增强免疫机能衰弱的患者对疫苗的应答能力，其应用前景极为广泛。
但Tɑ1是一种生物活性小肽，在体内很容易降解而造成生物稳定性差，体内半衰期短。临床数据表明，用Tɑ1治疗乙型肝炎的患者，每周需两次皮下注射1.6mg，一个疗程持续6个月，长期的注射给患者带来痛苦或使患者不愿意接受。因此迫切需要研制生物半衰期长、生物活性不发生显著降低的Tɑ1衍生物或者聚合物。
对多肽类药物进行聚乙二醇修饰，以提高其在体内的稳定性和延长药物的半衰期。聚乙二醇(PEG)共价修饰蛋白质药物，在蛋白表面形成空间位阻，可以作为屏障挡住蛋白质分子表面的抗原决定簇，从而减少免疫原性，减少体内清除率。PEG的屏障作用还可以保护蛋白质不易被蛋白酶水解。蛋白质PEG化的上述特点均有利于延长蛋白药物的半衰期。目前来说，对于Tɑ1的PEG修饰化，主要存在下述难点：(1)Tɑ1本身不存在与PEG进行偶联反应的特异性位点，采用赖氨酸ε-NH2和末端氨基进行非特异性PEG修饰，易产生多种混合物，难以分离纯化，不利于产品质量控制；(2)通过固相合成，采用半胱氨酸替代Tɑ1序列中的某个氨基酸，然后与PEG进行特异性偶联，此法改变了Tɑ1的原有氨基酸序列，生物学活性难以得到保障。
专利US 2009/0221487通过固相合成，采用半胱氨酸替代Tɑ1中特位点氨基酸，然后与聚乙二醇马来酰亚胺进行偶联，制备Tɑ1衍生物。鉴于Tɑ1序列的保守性，采用半胱氨酸替代Tɑ1势必对Tɑ1原有的生物学活性造成改变。此外，该发明人同样通过对Tɑ1的末端偶联了半胱氨酸，然后与聚乙二醇马来酰亚胺进行偶联，制备Tɑ1的聚合物，但研究结果表明该聚合物的半衰期小于其它位点的偶联物。
发明内容
本发明的目的在于提供一种胸腺法新聚乙二醇聚合物、包含其的药用组合物及应用。
本发明所采取的技术方案是：
一种胸腺法新聚乙二醇聚合物或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药，该胸腺法新聚乙二醇聚合物具有以下通式：
Figure BDA0001330821990000021
其中R1、R2、R3各自独立选自H，F，Cl，Br，I，羟基，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，氰基，C1-6烷氧基，3至8元碳环基，3-8元杂环基或者3至8元杂环基氧基；n1、n2、n3为0至11。
优选的，n1、n2和n3之和不超过11。
优选的，n1、n2和n3之和为2、3、4、5、6。
优选的，巯基聚乙二醇的分子量范围为1000-40000。
优选的，聚乙二醇为单巯基聚乙二醇，分子量范围为5000-20000。
优选的，胸腺法新聚乙二醇聚合物具体选自下列结构式中的至少一种：
Figure BDA0001330821990000031
Figure BDA0001330821990000041
一种药物组合物，包含上述任一项所述的胸腺法新聚乙二醇聚合物或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药。
优选的，药物组合物的制剂形式是注射液、注射用粉针；该注射液或注射用粉针溶解后每1ml溶液含有胸腺法新聚乙二醇聚合物1-32mg、甘露醇35-75mg。
优选的，药物组合物的制剂形式是注射液、注射用粉针；该注射液或注射用粉针溶解后每1ml溶液含有胸腺法新聚乙二醇聚合物2-10mg，甘露醇45-60mg。
上述任一项所述的胸腺法新聚乙二醇聚合物的制备方法，采用固相合成法合成胸腺法新，胸腺法新肽链合成完成后脱Fmoc保护，将最后一步的乙酰化转变为加入马来酰亚胺基团的羧酸衍生物进行缩合反应得到多肽衍生物树脂，加入切割试剂将多肽衍生物切割下来，多肽衍生物进一步和聚乙二醇巯基反应得到胸腺法新聚乙二醇聚合物。
优选的，马来酰亚胺基团的羧酸衍生物包括马来酰亚胺基-X-COOH，X表示连接马来酰亚胺基与羧基的碳链。
优选的，马来酰亚胺基团的羧酸衍生物包括乙酸马来酰亚胺、丙酸马来酰亚胺、丁酸马来酰亚胺、己酸马来酰亚胺、戊酸马来酰亚胺。
优选的，缩合反应所用的缩合剂为6-氯-1-羟基苯并三氮唑和N,N-二异丙基碳二亚胺。
优选的，切割试剂为三氟乙酸溶液。
优选的，多肽衍生物与聚乙二醇巯基按照1：0.5～1:30的摩尔比混合，室温反应，得到胸腺法新聚乙二醇聚合物。
优选的，多肽衍生物与聚乙二醇巯基按照1：0.5～1:10的摩尔比混合，室温反应，得到胸腺法新聚乙二醇聚合物。
优选的，多肽衍生物与聚乙二醇巯基按照1：1～1：5的摩尔比混合，室温反应，得到胸腺法新聚乙二醇聚合物。
优选的，巯基聚乙二醇的分子量范围为1000～40000。
优选的，聚乙二醇为单巯基聚乙二醇，分子量范围为5000～20000。
优选的，所述制备方法具体包括下列步骤：采用固相合成法合成胸腺法新，脱树脂Fmoc保护基后，加入含马来酰亚胺基团的羧酸衍生物(1mmol)和缩合剂(1.1ml的8％的Cl-HOBt和DIC DMF溶液)室温振荡反应，离心，依次用DCM、甲醇、DMF、DCM洗涤，并抽干。加入切割试剂(TFA 10ml；苯甲迷0.5ml；苯酚0.5g；Tis 0.5ml；水0.5ml)室温下反应，过滤反应液至50ml离心管中，向离心管中加入无水乙醚至50ml以上，与冰水中冷却30min沉淀多肽衍生物。取多肽衍生物0.31mmol，加入纯化水或pH 3-8的磷酸钠缓冲液1ml，加入0.31mmol～9mmol的聚乙二醇巯基，室温反应4小时即得胸腺法新聚乙二醇聚合物。
优选的，胸腺法新聚乙二醇聚合物，进一步纯化，其纯化过程如下：
1)平衡：采用20mmol pH 6.8磷酸盐缓冲液洗脱5个柱体积；
2)上样：聚合物反应液采用阴离子交换柱(BioRAD NuviaTM或类似柱)直接上样，上样后采用20mmol pH 6.8磷酸盐缓冲液洗脱5个柱体积；
3)洗脱：采用含有200mmol的氯化钠的20mmol pH 6.8的磷酸盐洗脱液洗脱，接收洗脱液；将上述洗脱液采用制备色谱进行分离，收集聚合物色谱峰即可。
上述任一项所述的胸腺法新聚乙二醇聚合物或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药或上述所述的药物组合物在制备治疗提高或维持机体免疫力的药物中的运用。
本发明的有益效果是：
本发明采用常规的固相合成法合成Tɑ1，将最后一步乙酰化转变为引入马来酰亚胺基活性基团，可特异性与单巯基聚乙二醇室温偶联得到聚合物。本发明方法工艺简单，易于工业化，反应条件温和，摩尔收率大于95％，具有良好的市场前景。
本发明通过固相合成将马来酰亚胺基引入Tɑ1氮末端，然后与PEG-SH在室温下进行特异性偶联获得胸腺法新聚乙二醇聚合物，所述胸腺法新聚乙二醇聚合物不改变胸腺法新的生物结构，对胸腺法新的生物学活性没有造成改变，并显著提高了聚合物的半衰期。本发明意外的发现，改用本发明实施例1制备的胸腺法新聚乙二醇聚合物(PEG-Mal-Ta1)其半衰期是US 2009/0221487中的末端引入半胱氨酸形成的聚合物(PEG-Cys-Ta1)的2.5倍，该聚合物半衰期是普通胸腺法新а1半衰期的8倍左右，有效的延长了药物的半衰期。
附图说明
图1为聚合物的平均分子量测定；
图2为聚合物半衰期的测定结果。
具体实施方式
临床使用的胸腺法新均为氮末端乙酰化的产品，但是，本专利以及实施例中所使用到的胸腺法新均指未乙酰化的胸腺法新。
本发明通过固相合成Tɑ1及其N-末端马来酰亚胺衍生物，然后与PEG-SH进行偶联获得该胸腺法新聚乙二醇聚合物，或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药；包含其的药物组合物及其在提高人体免疫上的用途；以便为提高或维持机体免疫力，治疗乙肝、丙肝等相关疾病提供更多更优的药物选择途径。
本发明提供一种胸腺法新聚乙二醇聚合物或其药学上可以接受的盐、水合物、溶剂化物、多晶型物、互变异构体或前药，该胸腺法新聚乙二醇聚合物具有以下通式：
Figure BDA0001330821990000061
其中R1、R2、R3各自独立选自H，F，Cl，Br，I，羟基，C1-6烷基，C2-6烯基，C2-6炔基，氰基，C1-6烷氧基，3至8元碳环基，3-8元杂环基或者3至8元杂环基氧基。n1、n2、n3为0至11。n1、n2和n3之和优选为2、3、4、5、6。
采用固相合成法合成Tɑ1，将最后一步乙酰化转变为加入含马来酰亚胺基团羧酸衍生物和偶联试剂。包括下列步骤：25％哌啶溶液4ml混匀，室温振荡15min脱树脂Fmoc保护基(树脂0.1mmol)，过滤后换新的哌啶溶液重复一次，依次使用DMF、甲醇、DCM洗涤树脂各3次后抽干，加入含马来酰亚胺基团的羧酸衍生物(1mmol)和缩合剂(1.1ml的8％的Cl-HOBt和DIC DMF溶液)室温振荡2小时，离心，依次用DCM、甲醇、DMF、DCM各洗涤2次，并抽干。加入切割试剂(TFA 10ml；苯甲迷0.5ml；苯酚0.5g；Tis 0.5ml；水0.5ml)室温下反应2小时，过滤反应液至50ml离心管中，用少量的TFA洗涤树脂，合并滤液，向离心管中加入无水乙醚至50ml以上，与冰水中冷却30min沉淀多肽衍生物。取多肽衍生物0.31mmol，加入纯化水或pH3-8的磷酸钠缓冲液1ml，加入0.31mmol～9mmol的聚乙二醇巯基，室温反应4小时即得聚合物。
上述聚合物，其纯化过程如下：1)平衡：采用20mmol pH 6.8磷酸盐缓冲液洗脱5个柱体积；2)上样：聚合物反应液采用阴离子交换柱(BioRAD NuviaTM或类似柱)直接上样，上样后采用20mmol pH 6.8磷酸盐缓冲液洗脱5个柱体积；3)洗脱：采用含有200mmol的氯化钠的20mmol pH 6.8的磷酸盐洗脱液洗脱，接收洗脱液；将上述洗脱液采用制备色谱进行分离，收集聚合物色谱峰即可。
下面结合实施例对本发明做进一步的说明，但不限于此。
实施例1：
采用固相合成法合成Tɑ1，将最后一步乙酰化转变为加入含马来酰亚胺基团羧酸衍生物和偶联试剂，具体包括下列步骤：25％哌啶溶液4ml混匀，室温振荡15min脱树脂Fmoc保护基(树脂0.1mmol)，过滤后换新的哌啶溶液重复一次，依次使用DMF，甲醇，DCM洗涤树脂各3次后抽干，加入含3-马来酰亚胺基丙酸(1mmol)和缩合剂(1.1ml的8％的Cl-HOBt和DICDMF溶液)室温振荡2小时，离心，依次用DCM，甲醇，DMF，DCM各洗涤2次，并抽干。加入切割试剂(TFA 10ml；苯甲迷0.5ml；苯酚0.5g；Tis 0.5ml；水0.5ml)室温下反应2小时，过滤反应液至50ml离心管中，用少量的TFA洗涤树脂，合并滤液，向离心管中加入无水乙醚至50ml，与冰水中冷却30min沉淀多肽衍生物。通过LC-MS对Tɑ1马来酰亚胺衍生物分子量进行了测定，分子量为3217.4，与目标分子量一致。
取Tɑ1衍生物0.31mmol，加入纯化水或pH 3-8的磷酸钠缓冲液1ml，加入0.31mmol～9mmol的聚乙二醇巯基(5kDa，n平均值约为124)，室温反应4小时，制备得到胸腺法新聚乙二醇聚合物。其合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000081
取上述胸腺法新聚乙二醇聚合物反应液进行纯化，其纯化过程如下：1)平衡：采用20mmol pH 6.8磷酸盐缓冲液洗脱5个柱体积；2)上样：取聚合物反应液采用阴离子交换柱(BioRAD NuviaTM或类似柱)直接上样，然后用20mmol pH 6.8磷酸盐缓冲液洗脱5个柱体积；3)洗脱：采用含有200mmol的氯化钠20mmol pH 6.8的磷酸盐洗脱液洗脱，接收洗脱液。
将接收的洗脱液浓缩后采用制备色谱进行分离，色谱分离条件如下：采用HPLC进行制备分离，以ZORBAX 300-SB-C8(5μm,dimensions 9.4mm×250mm id,Agilent；LN-WSB1156002)色谱柱为固定相；流动相A为0.1％的TFA水溶液，流动相B为含0.1％TFA的80％的乙腈水溶液，按表1进行梯度洗脱；检测波长220nm，流速为2.0ml/min，进样量为1ml。
表1HPLC洗脱梯度
时间(min) A相 B相
0 80％ 20％
20 20％ 80％
20.1 80％ 20％
30 80％ 20％
收集聚合物色谱峰，37℃旋转蒸发后冷冻干燥，冷冻干燥工序如下：
(1)预冻：1小时左右由室温降低至-40℃，维持2小时；(2)第一次干燥：5小时由-40℃升温至-30℃，维持5小时；2小时由-30℃升温至-20℃，维持2小时；1小时由-20℃升温至-10℃，维持2小时；(3)第二次干燥：2小时由-10℃升温至0℃，维持1小时；2小时内由0℃升温至20℃，然后2小时内升温至25℃。
通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，实验结果见图1。图1中，聚合物的平均分子量为8kDa，与目标分子量一致。
Tɑ1衍生物保持不变，聚乙二醇巯基平均分子量分别为10kDa、20kDa、40kDa时，反应结果基本相同。
对实施例1制备的胸腺法新聚乙二醇聚合物(记为PEG-Mal-Ta1)进行半衰期的测定，结果见图2。此外，PEG-Mal-Tα1and PEG-Cys-Tα1在体内的药代动力学参数结果见表2。
表2PEG-Mal-Tα1and PEG-Cys-Tα1在体内的药代动力学参数
参数 PEG-Cys-Tα1(Mean±SD,n＝4) PEG-Mal-Tα1(Mean±SD,n＝4)
t<sub>1/2α</sub>(h) 0.507±0.301 0.468±0.074
t<sub>1/2β</sub>(h) 8.175±1.052 20.345±4.064
V1(L/kg) 0.114±0.028 0.127±0.007
CL(L/h/kg) 0.022±0.001 0.008±0.003
AUC<sub>(0-t)</sub>(mg/L*h) 17.461±1.252 32.549±2.459
AUC<sub>(0-∞)</sub>(mg/L*h) 20.641±0.86 65.753±22.304
表2结果显示，本发明的聚合物，其半衰期(t1/2β20.344h)是US 2009/0221487中的末端引入半胱氨酸形成的聚合物(记为PEG-Cys-Ta1)的2.5倍。该聚合物半衰期是普通Ta1半衰期(约2.5小时)的8倍左右。此外，由于本偶联方法是通过对Ta1的氮末端进行偶联，与文献报道的US 2009/0221487氮末端偶联物应具有相似的生物学活性，均不影响Ta1的活性，但本品的体内半衰期长，因此体内活性理论上应该优于文献报道方法。
实施例2：
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000091
通过LC-MS对胸腺法新聚乙二醇聚合物分子量进行了测定，分子量为3259.3，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.1kDa，与目标分子量一致。
实施例3：
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入11-马来酰亚胺基十一酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000101
通过LC-MS对胸腺法新聚乙二醇聚合物分子量进行了测定，分子量为3329.4，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.2kDa，与目标分子量一致。
实施例4
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入6-氟-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000102
通过LC-MS对胸腺法新聚乙二醇聚合物分子量进行了测定，分子量为3277.5，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.1kDa，与目标分子量一致。
实施例5
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入6-马来酰亚胺基庚酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000111
通过LC-MS对胸腺法新聚乙二醇聚合物分子量进行了测定，分子量为3273.5，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.1kDa，与目标分子量一致。
实施例6
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2甲基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000112
通过LC-MS对胸腺法新聚乙二醇聚合物分子量进行了测定，分子量为3273.5，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.1kDa，与目标分子量一致。
实施例7
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2,3-二甲基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000121
通过LC-MS对胸腺法新聚乙二醇聚合物分子量进行了测定，分子量为3287.3，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.1kDa，与目标分子量一致。
实施例8
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入化合物2-(4-马来酰亚胺丁基)-辛酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000122
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3343.5，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.2kDa，与目标分子量一致。
实施例9
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2-(4-甲氧基丁基)-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000131
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3345.4，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，通过MALID-TOF-MS对纯化后聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.2kDa，与目标分子量一致。
实施例10
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2-戊氧基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000132
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3345.4，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.2kDa，与目标分子量一致。
实施例11
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2-乙烯基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000142
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3285.4，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.2kDa，与目标分子量一致。
实施例12
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2-丙烯基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000151
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3299.5，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.2kDa，与目标分子量一致。
实施例13
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2-丙炔基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000152
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3297.5，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.2kDa，与目标分子量一致。
实施例14
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入4乙炔基-2-丙炔基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000161
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3322.5，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.3kDa，与目标分子量一致。
实施例15
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2-环己烷基-5-环丙基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000162
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3381.6，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.3kDa，与目标分子量一致。
实施例16
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2-4吡喃基-5-环丙基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000171
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3383.6，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.3kDa，与目标分子量一致。
实施例17
采用固相合成法合成Tɑ1，在脱保、护切割之前加入2-哌啶基-6-马来酰亚胺基己酸和偶联试剂。其合成方法同实施例1，合成路线如下所示：
Figure BDA0001330821990000172
通过LC-MS测定胸腺法新聚乙二醇聚合物的分子量，分子量为3342.3，与目标分子量一致。纯化工艺同实施例1，纯化后通过MALID-TOF-MS对聚合物的平均分子量进行了测定，聚合物的平均分子量为8.3kDa，与目标分子量一致。
实施例18药物组合物注射液
取实施例1制备得到的Tɑ1聚合物按照表3的配方制备胸腺法新聚乙二醇聚合物注射液。
表3药物组合物注射液配方
Figure BDA0001330821990000181
制备方法包括下列步骤：按照表3的配方，取胸腺法新聚乙二醇聚合物，加入一定量的甘露醇，然后用pH5.5-7.5的磷酸盐缓冲液1ml溶解，过0.45μm无菌滤膜，充氮保护后密封2-8度保存。
实施例19药物组合物注射用粉针
配方同实施例18，制备得到胸腺法新聚乙二醇聚合物注射液，无菌率过后，冷冻干燥。
冷冻干燥工艺如下：(1)预冻：1小时左右由室温降低至-40℃，维持2小时；(2)第一次干燥：5小时由-40℃升温至-30℃，维持5小时；2小时由-30℃升温至-20℃，维持2小时；1小时由-20℃升温至-10℃，维持2小时；(3)第二次干燥：2小时由-10℃升温至0℃，维持1小时；2小时内由0℃升温至20℃，然后2小时内升温至25℃。干燥后压盖，至2-8度保存。
以上仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种胸腺法新聚乙二醇聚合物或其药学上可以接受的盐，其特征在于：该胸腺法新聚乙二醇聚合物具有以下通式：
Figure FDA0002851604980000011
其中R1、R2、R3均为H；n1、n2、n3之和为2。
2.根据权利要求1所述的一种胸腺法新聚乙二醇聚合物或其药学上可以接受的盐，其特征在于：巯基聚乙二醇的分子量范围为1000～40000。
3.根据权利要求1或2所述的一种胸腺法新聚乙二醇聚合物或其药学上可以接受的盐，其特征在于：聚乙二醇为单巯基聚乙二醇，分子量范围为5000-20000。
4.一种药物组合物，其特征在于：包含权利要求1-3任一项所述的胸腺法新聚乙二醇聚合物或其药学上可以接受的盐。
5.权利要求1-3任一项所述的胸腺法新聚乙二醇聚合物的制备方法，其特征在于：采用固相合成法合成胸腺法新，胸腺法新肽链合成完成后脱Fmoc保护，加入马来酰亚胺基团的羧酸衍生物进行缩合反应得到多肽衍生物树脂，加入切割试剂将多肽衍生物切割下来，多肽衍生物和聚乙二醇巯基反应得到胸腺法新聚乙二醇聚合物。
6.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：马来酰亚胺基团的羧酸衍生物包括马来酰亚胺基-X-COOH，X表示连接马来酰亚胺基与羧基的碳链。
7.根据权利要求5所述的制备方法，其特征在于：多肽衍生物与聚乙二醇巯基按照1：0.5～1:30的摩尔比混合，室温反应，得到胸腺法新聚乙二醇聚合物。
8.权利要求1-3任一项所述的胸腺法新聚乙二醇聚合物或其药学上可以接受的盐或权利要求4所述的药物组合物在制备提高或维持机体免疫力的药物中的运用。
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