CN107132307A - 一种侧柏叶tlc鉴别方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种侧柏叶TLC鉴别方法,取待测样品粉末,加甲醇,超声30min,过滤,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇溶解,作为供试品溶液;采用薄层色谱法,紫外光灯下检视。具有快速、简便、重现性好,色谱清晰,各斑点分离良好,节约药材等优点。
Description
技术领域
本发明属于药物分析技术领域,具体涉及一种侧柏叶TLC鉴别方法。
背景技术
侧柏叶又名柏叶、丛柏叶、扁柏、云片柏等,是医家所重视的治血良药。中医认为侧柏叶味苦,性微寒,无毒,入心、肝、大肠经。具有凉血、止血、祛内湿、散肿毒之功。可治吐血、鼻出血、尿血、血痢、崩 漏、风湿痛、咳嗽、烫伤等症。根据科学研究表明,侧柏叶含大量的挥发油,油中主要成分为侧柏烯、小茴香酮等,叶中还含有钾、钠、磷、氮、钙、镁、锰和锌等多种微量元素。药理实验表明,侧柏叶煎剂能够明显的缩短出血时间及凝血时间,除此以外,还有镇咳、平喘、祛痰、镇静等作用。相关实验表明,侧柏叶对金黄色葡萄球菌、痢疾杆菌、卡他球菌、白喉杆菌、伤寒杆菌等均有很好的抑制作用,有乌须发、止血、止咳喘的功效。
目前,对中药材的理化鉴别方法,主要包括荧光法,微量升华法,显色,沉淀、泡沫反应,钙盐、钠盐等鉴别反应,薄层色谱法(TLC)等。 其中,由于TLC法处理简单,成本低,可同时对多个成分进行一个比较,不需使用复杂仪器,应用范围最为广泛。如2015版中国药典侧柏叶项下收载了目前法定的侧柏叶TLC鉴别方法,但由于该法中采用的索氏提取步骤,至少需6小时,加热回流步骤也需要1小时,操作繁琐,操作时间长、有机试剂用量多导致成本较高等缺点,无法满足实际应用中快速、简便的需求。因此,建立一种快速、准确,高效的侧柏叶TLC鉴别方法是很有必要的。
发明内容
本发明针对现有技术中存在的上述问题,提供一种侧柏叶TLC鉴别方法,具有专属性强、操作简单、快速、准确,高效、成本低廉、重现性好等优点,可用于对侧柏叶药材及饮片质量快速检测。
本发明技术方案如下:
一种侧柏叶TLC鉴别方法,步骤包括:
(1)取待测样品粉末 0.5~1.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇 10~30mL,超声30min,过滤,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇2ml溶解,作为供试品溶液;
(2)取槲皮苷标准品,加乙醇配制为 0.05~0.15mg/mL的溶液,作为对照品溶液;
(3)薄层色谱法试验,吸取供试品溶液和对照品溶液各 2~4μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为(10:1:1)~ (14:1:1)的乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂展开,取出,晾干,喷以1wt%的三氯化铝-乙醇溶液,置紫外光灯365nm下检视。
优选地,步骤(1)中,各原料用量为待测样品粉末1g、70%甲醇20mL。
优选地,步骤(2)中,取槲皮苷标准品,加乙醇配制为0.1mg/mL的溶液。
优选地,步骤(3)中,吸取供试品溶液和对照品溶液各 3μL,展开剂乙酸乙酯-甲酸-水的体积比为12:1:1。
优选地,步骤(3)中,所述的薄层色谱法试验为2015年版中国药典四部0502薄层色谱法。
所述的侧柏叶TLC鉴别方法,供试品色谱中,在与对照品色谱相对应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,则待测样品为侧柏叶。
侧柏叶的止血有效成分通常认为是槲皮素和鞣质,实际上,本发明通过实验表明侧柏叶中没有槲皮素,只有槲皮苷,现有检测方法中,也都是将槲皮苷水解成槲皮素后进行鉴定。现有技术中,以药典的鉴别方法为例,是将侧柏叶叶绿素成分进行提取后,再对其所含黄酮类成分槲皮苷进行酸水解,水解成槲皮素,再用乙酸乙酯萃取,水洗,浓缩后进行鉴定。由于其样品制备过程涉及索氏提取,耗时至少6h,且以乙醚为提取液,操作具一定的危险性,黄酮类成分提取、水解共计耗时1.5h。由于侧柏叶中含有的是槲皮苷等黄酮类成分,本发明改变以往采用槲皮素为对照品的通用方法,不通过水解、索氏提取等步骤,在最优条件下,直接将槲皮苷提取出来进行鉴定,经实验验证,本发明方法操作简单,便捷,有效,且能发映出侧柏叶自身的特点,可快速准确用于对侧柏叶进行TLC鉴定。
本发明技术方案相对于现有技术有益效果为:
1、快速、简便、重现性好:①节约时间:该法较药典法省去药典中索氏提取(至少6小时)、加热回流1小时、酸水解等步骤,整体可将鉴定时间缩短90%。②节省试剂:上述步骤中的有机试剂均可节省,尤其是减少了乙醚的使用,减少操作过程的不适性和危险性。③重现性好:该法较为简单、易操作,重现性好。
2、以槲皮苷为对照更适宜于鉴别侧柏叶:因侧柏叶中含有槲皮苷不含槲皮素成分,因此更适于侧柏叶的鉴别。
3、色谱清晰,各斑点分离良好:该方法所得图谱的斑点清晰,分离良好,重现性好。
4、节约药材:与药典方法相比,鉴别用侧柏叶由3g降到1g,明显节约了药材用量。
附图说明
图1为实施例1侧柏叶TLC鉴别图谱,图中1-5,6-9均为侧柏叶,5-槲皮苷对照品;
图2为实施例2侧柏叶TLC鉴别图谱,图中1-4,6-9均为侧柏叶,5-槲皮苷对照品;
图3为实施例3侧柏叶TLC鉴别图谱,图中1-4,6-9均为侧柏叶,5-槲皮苷对照品;
图4为对比例1侧柏叶TLC鉴别图谱,图中1-5,7-10均为侧柏叶,6-槲皮素对照品;
图5为对比例2侧柏叶TLC鉴别图谱,图中1-4,6-9均为侧柏叶,5-槲皮苷对照品;
图6为对比例3侧柏叶TLC鉴别图谱,图中1-4,6-9均为侧柏叶,5-槲皮素对照品。
具体实施方式
下面通过具体实施例来进一步说明本发明方案及有益效果。
实施例1
一种侧柏叶TLC鉴别方法,步骤包括:
(1)取待测样品粉末1g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇20ml,超声30min,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇2ml溶解,作为供试品溶液;
(2)取槲皮苷标准品,加乙醇配制为0.1mg/mL的溶液,作为对照品溶液;
(3)照2015年版中国药典四部0502薄层色谱法试验,吸取供试品溶液和对照品溶液各3μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为 12:1:1的乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂展开,取出,晾干,喷以1wt%的三氯化铝-乙醇溶液,置紫外光灯365nm下检视。
供试品色谱中,在与对照品色谱相对应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,TLC薄层图谱见图1,待测样品为侧柏叶。由图1可见,8批侧柏叶中均检出槲皮苷,且斑点清晰,分离度良好。
实施例2
一种侧柏叶TLC鉴别方法,步骤包括:
(1)取待测样品粉末0.5g,置具塞锥形瓶中,,加70%甲醇10ml,超声30min,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇2ml溶解,作为供试品溶液;
(2)取槲皮苷标准品,加乙醇配制为0.05mg/mL的溶液,作为对照品溶液;
(3)照2015年版中国药典四部0502薄层色谱法试验,吸取供试品溶液和对照品溶液各2μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为 10:1:1的乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂展开,取出,晾干,喷以1 wt%的三氯化铝-乙醇溶液,置紫外光灯365nm下检视。
供试品色谱中,在与对照品色谱相对应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,TLC薄层图谱见图2,待测样品为侧柏叶。由图2可见,8批侧柏叶中均检出槲皮苷,且斑点清晰,分离度良好。
实施例3
一种侧柏叶TLC鉴别方法,步骤包括:
(1)取待测样品粉末1.5g,置具塞锥形瓶中,,加70%甲醇30ml,超声30min,滤过,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇2ml溶解,作为供试品溶液;
(2)取槲皮苷标准品,加乙醇配制为0.15mg/mL的溶液,作为对照品溶液;
(3)照中国药典四部0502薄层色谱法试验,吸取供试品溶液和对照品溶液各4μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为 14:1:1的乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂展开,取出,晾干,喷以1wt%的三氯化铝-乙醇溶液,置紫外光灯365nm下检视。
供试品色谱中,在与对照品色谱相对应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,TLC薄层图谱见图3,待测样品为侧柏叶。由图3可见,8批侧柏叶中均检出槲皮苷,且斑点清晰,分离度良好。
对比例1:2015版中国药典
取样品(同实施例1)粉末3g,置索氏提取器中,加乙醚适量,加热,回流至提取液无色,弃去乙醚液,药渣挥干乙醚,加70%乙醇50mL,加热回流1小时,趁热滤过,滤液蒸干,残渣加水25mL使溶解,加盐酸3mL,加热水解30分钟,立即冷却,用乙酸乙酯振摇提取2次,每次20mL,合并乙酸乙酯液,用水洗涤3次,每次10mL。水浴蒸干,残渣加甲醇5mL溶解作为供试品溶液。另取槲皮素对照品,加乙醇制成每1mL含0.1mg的溶液,作为对照品溶液。照薄层色谱法(2015年版中国药典四部通则0502)试验,吸取上述供试品溶液和对照品溶液3μl,分别点于同一硅胶G薄层板上,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(5:2:1)的上层溶液为展开剂,展开,取出,晾干,喷以1%三氯化铝乙醇溶液,置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的荧光斑点。TLC薄层图谱见图4。由图4可见,9批侧柏叶中均检出槲皮素,且斑点清晰,分离度良好。
对比例2
将步骤(2)对照品槲皮苷替换为槲皮素,其余步骤同实施例1;TLC薄层图谱见图5。由图5可见,8批侧柏叶在槲皮素相应位置均未检出相同颜色的荧光斑点,因此可以断定侧柏叶中不含槲皮素成分。
对比例3
将步骤(1)70%甲醇20ml替换为乙醇20 mL,其余步骤同实施例1;TLC薄层图谱见图6。由图6可见,8批侧柏叶在槲皮苷相应位置均检出相同颜色的荧光斑点。因此认为改法中甲醇和乙醇均可作为提取溶剂。
结果分析
由实施例1-3可见,本发明方法快速、简便、耗时短,易操作,受影响因素小,重现性好;有效减少了有机试剂的用量,一方面减少危险性,另一方面节约了成本。采用HPLC法对该方法进行验证发现,侧柏叶中含有槲皮苷成分,不含槲皮素成分,因此本方法建立的以槲皮苷为对照品用于侧柏叶的TLC鉴定合理可行。
实施例及对比例结果分析:(1)新建方法与药典法比较可见,并未影响槲皮苷的鉴别,新建方法的斑点清晰,分离良好。
(2)与药典法比较,采用槲皮苷为对照品进行鉴别更适宜于鉴别侧柏叶,因侧柏叶中含有槲皮苷不含槲皮素成分,从理论上讲更适于侧柏叶的鉴别,因此专属性更强。
(3)该法与药典法比较,所用侧柏叶样品由3g降到1g,明显节约了侧柏叶用量。
综上所述,本发明方法具有现有侧柏叶鉴别方法不可比拟的突出优点,可用于替代现行药典法等用于侧柏叶的TLC鉴别。
Claims (6)
1.一种侧柏叶TLC鉴别方法,其特征在于,步骤包括:
(1)取待测样品粉末 0.5~1.5g,置具塞锥形瓶中,加70%甲醇 10~30mL,超声30min,过滤,滤液水浴蒸干,残渣加甲醇2ml溶解,作为供试品溶液;
(2)取槲皮苷标准品,加乙醇配制为 0.05~0.15mg/mL的溶液,作为对照品溶液;
(3)薄层色谱法试验,吸取供试品溶液和对照品溶液各 2~4μL,分别点于同一硅胶G薄层板上,以体积比为(10:1:1)~ (14:1:1)的乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂展开,取出,晾干,喷以1wt%的三氯化铝-乙醇溶液,置紫外光灯365nm下检视。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(1)中,各原料用量为待测样品粉末1g、70%甲醇20mL。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(2)中,取槲皮苷标准品,加乙醇配制为0.1mg/mL的溶液。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(3)中,吸取供试品溶液和对照品溶液各 3μL,展开剂乙酸乙酯-甲酸-水的体积比为12:1:1。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:步骤(3)中,所述的薄层色谱法试验为2015年版中国药典四部0502薄层色谱法。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述的侧柏叶TLC鉴别方法,供试品色谱中,在与对照品色谱相对应的位置上,显相同颜色的荧光斑点,则待测样品为侧柏叶。
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