CN1361422A - 心血管药物保心宁的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明是心血管药物保心宁的检测方法,将无糖衣的待检测药物制备成细粉后用乙醚溶解提取并过滤,滤液除尽乙醚后的残渣,以薄层层析方法,分别用19∶1的苯－乙酸乙酯为展开剂对其中的丹参酮IIA进行鉴别;用15∶40∶22∶10的氯仿－乙酸乙酯－甲醇－水为展开剂,以斑点的直接显色和紫外光下的荧光反应,对三七药材斑点进行鉴别。本发明检测方法具有专属性强,不易受外界因素干扰,检测结果准确性高的特点。

Description

心血管药物保心宁的检测方法

本发明涉及的是对心血管药物保心宁的检测方法，具体讲是对该药物中的丹参酮IIA和三七药材斑点以薄层层析方法进行鉴别检测的方法。

心血管病治疗药物保心宁是一种由丹参、当归、枳壳、生姜和三七粉等天然药物成分制备而成的药物。对其有效成分的检测，目前主要是对其中的丹参酮IIA和三七药材对照物采用荧光法进行的，其专属性较差，而且检测结果易受外界因素的干扰。

鉴于此，本发明的目的是提供一种以薄层层析方法对保心宁药物中的丹参酮IIA和三七药材斑点进行鉴别检测的方法。

本发明对心血管药物保心宁的检测方法，是先将无糖衣的待检测药物制备成细粉后，用乙醚充分溶解提取并过滤，滤液除尽乙醚取残渣，然后按以下操作以薄层层析方法分别对其中的丹参酮IIA和三七药材斑点进行鉴别检测，其中：

(1)将上述除尽乙醚的残渣用乙酸乙酯溶解后，与用同样的乙酸乙酯溶解的丹参酮IIA对照样品溶液分别点样于同一硅胶G薄层层析板上，以体积比为19∶1的苯-乙酸乙酯推进剂展开后晾干，检查被测药物样品在与对照品色谱板的相同位置处是否有同样的红色斑点；

(2)将上述除尽乙醚的残渣用体积比为39％-41％的常规氨溶液和水饱和的正丁醇溶液充分溶解后过滤，滤液用同样的氨试液洗涤，弃去氨溶液再以水饱和的正丁醇溶液洗涤，弃去水液并将其除尽正丁醇后的残渣用乙醚洗涤，除尽乙醚后的残渣再用甲醇溶解为待测样品，另取已将对照用的三七药材粉末加水混匀并以同样的水饱和正丁醇溶液浸泡静置过夜的对照品过滤，滤液以同样方法用水饱和的正丁醇溶液洗涤并除尽正丁醇后，残渣以甲醇溶解为对照样品，将其与待测样品分别点样于同一硅胶G薄层层析板上，以体积比为15∶40∶22∶10的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水并经低于10℃放置过夜处理的混合溶液下层液体为推进剂展开并晾干，喷以含有10％体积硫酸的乙醇溶液后于105℃显色检查被测药物样品在与对照品色谱板的相同位置处是否有同样颜色的斑点，以及在365纳米紫外光下是否有相同的荧光斑点。

为加速被测药物制备成细粉后用乙醚充分溶解提取的速度，可以用常规的超声波处理方法处理该乙醚提取液。

试验表明，对制备成细粉的待测药物用乙醚充分溶解提取时，所用的待检测药物的取样量一般可以为15片，溶解提取用的乙醚一般为30毫升即可。检测丹参酮IIA时，对除去乙醚后的待测药物提取残渣可以用1毫升乙酸乙酯溶解；丹参酮IIA对照样品点样溶液中的丹参酮IIA含量为每毫升对照样品溶液中含2毫克即可。检测三七药材斑点时，对除去乙醚后的待测药物残渣可以用氨试液2毫升混合均匀后，再加用水饱和的正丁醇溶液40充分溶解后过滤；对照用的三七药材粉末取0.5克并先加水约5滴混合后在加以水饱和的正丁醇溶液10毫升充分混合后浸泡放置过夜。供薄层层析点样用的待测药物与对照用的三七药材提取物点样液可以分别都用1毫升甲醇溶解其各自前步所得到的提取物残渣。

上述检测方法中，在所说的硅胶G薄层层析板上各样品溶液的点样量以使用5-10微升为宜。

与上述传统检测方法相比，由于本发明采用了相对准确性和专属性更高，且不易受外界因素干扰的薄层层析对照方法进行检测，因此能有更好的检测效果。

以下通过具体的实施例对本发明的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于下述的实例。

取正常生产使用的糖衣片剂型的保心宁15片，剥去外包糖衣层后研成细粉，加乙醚30毫升，用超声波处理20分钟后过滤，滤液挥干乙醚取残渣，然后按以下操作分别对其中的丹参酮IIA和三七药材斑点进行鉴别检测：

(1)丹参酮IIA的鉴别检测：上述挥干乙醚的残渣加乙酸乙酯1毫升溶解，作为供薄层层析点样用的待检测药物样品。另取丹参酮IIA对照品加乙酸乙酯制成每毫升含2毫克的对照品溶液。按照中国药典2000版规定的薄层层析试验方法，吸取上述待检测药物样品和对照品点样液各5-10微升，分别点于同一硅胶G薄层层析板上，以体积比为19∶1的苯-乙酸乙酯为展开剂推进展开后晾干，检查被测药物样品在与对照品色谱板的相同位置处是否有同样的红色斑点。

(2)三七药材斑点的鉴别检测：上述挥于乙醚的残渣中加2毫升40％(v/v)的常规氨溶液混匀，再加水饱和的正丁醇溶液40毫升振摇约10分钟使其充分溶解后过滤，滤液用同样的氨试液洗涤2次。弃去氨溶液再以水饱和的正丁醇溶液洗涤2次，每次40毫升。弃去水液，取正丁醇层，将蒸干后的残渣用乙醚5毫升洗涤3次；除尽乙醚后的残渣用1毫升甲醇溶解为待检测药物供薄层层析点样用样品。另取对照用的三七药材粉末0.5克加水约5滴混匀，再加入同样以水饱和的正丁醇溶液10毫升振摇约10分钟后，浸泡静置过夜。然后过滤，滤液以30毫升水饱和的正丁醇溶液洗涤后，正丁醇溶液挥干(必要时可用离心处理)，残渣加1毫升甲醇溶解为对照样品点样液。同样按中国药典2000版规定的薄层层析试验方法，吸取上述待检测药物点样样品和对照品点样液各5微升，分别点于同一硅胶G薄层层析板上，以体积比为15∶40∶22∶10的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水混合溶液经低于10℃放置过夜的下层液体为展开剂推进展开后晾干，再喷以含有10％体积硫酸的乙醇溶液后于105℃烘至斑点显色清晰，该含有10％体积硫酸的乙醇溶液为98％浓硫酸与95％乙醇按体积1∶9的比例混合而成。检查被测药物样品在与对照品色谱板的相同位置处是否有同样颜色的斑点；在365纳米紫外光下检测是否有相同的荧光斑点。对上述同一受检药物样品用本发明检测方法和用传统荧光检测法进行的平行对比检测试验结果如表1所示：

          表1不同检测方法的平行对比检测试验结果

试验批次	荧光法的检测结果	本发明方法的丹参酮IIA斑点	本发明方法的三七药材斑点
				1	未见黄绿色荧光	丹参酮IIA斑点明显	三七药材斑点明显
2	未见黄绿色荧光	丹参酮IIA斑点明显	三七药材斑点明显
				3	未见黄绿色荧光	丹参酮IIA斑点明显	三七药材斑点明显

Claims (7)

1.心血管药物保心宁的检测方法，其特征在于将无糖衣的待检测药物制备成细粉后，用乙醚充分溶解提取并过滤，滤液除尽乙醚取残渣，然后按以下操作以薄层层析方法分别对其中的丹参酮IIA和三七药材斑点进行鉴别检测，其中：

(1)将上述除尽乙醚的残渣用乙酸乙酯溶解后，与用同样的乙酸乙酯溶解的丹参酮IIA对照样品溶液分别点样于同一硅胶G薄层层析板上，以体积比为19∶1的苯-乙酸乙酯推进剂展开后晾干，检查被测药物样品在与对照品色谱板的相同位置处是否有同样的红色斑点；

(2)将上述除尽乙醚的残渣用体积比为39％-41％的氨溶液和水饱和的正丁醇溶液充分溶解后过滤，滤液用同样的氨试液洗涤，弃去氨溶液再以水饱和的正丁醇溶液洗涤，弃去水液，将除尽正丁醇溶剂后的残渣用乙醚洗涤并除尽乙醚后的残渣用甲醇溶解为待测样品，另取已将对照用的三七药材粉末加水混匀并以同样的水饱和正丁醇溶液浸泡静置过夜的对照品过滤，滤液以同样方法用水饱和的正丁醇溶液洗涤并除尽正丁醇后，残渣以甲醇溶解为对照样品，将其与待测样品分别点样于同一硅胶G薄层层析板上，以体积比为15∶40∶22∶10的氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水并经低于10℃放置过夜处理的混合溶液下层液体为推进剂展开并晾干，喷以含有10％体积硫酸的乙醇溶液后于105℃显色检查被测药物样品在与对照品色谱板的相同位置处是否有同样颜色的斑点，以及在365纳米紫外光下是否有相同的荧光斑点。

2.如权利要求1所述的心血管药物保心宁的检测方法，其特征在于对所说的被测药物制备成细粉后用乙醚充分溶解提取时用超声波处理以加速溶解。

3.如权利要求1所述的心血管药物保心宁的检测方法，其特征在于对所说的被测药物制备成细粉后用乙醚充分溶解提取时的待测药物取样量为15片，溶解提取用的乙醚为30毫升。

4.如权利要求3所述的心血管药物保心宁的检测方法，其特征在于检测丹参酮IIA时，对除去乙醚后的待测药物提取残渣用1毫升乙酸乙酯溶解，对照样品溶液的含量为每毫升对照样品溶液中含2毫克丹参酮IIA。

5.如权利要求3所述的心血管药物保心宁的检测方法，其特征在于检测三七药材斑点时，对除去乙醚后的待测药物残渣用氨试液2毫升混合均匀后再加用水饱和的正丁醇溶液40充分溶解后过滤，对照用的三七药材粉末取0.5克并先加水约5滴混合后在加以水饱和的正丁醇溶液10毫升充分混合后浸泡放置过夜。

6.如权利要求5所述的心血管药物保心宁的检测方法，其特征在于所说的供薄层层析点样用的待测药物与对照用的三七药材提取物分别均用1毫升甲醇溶解其各自前步所得到的全部提取物残渣。

7.如权利要求1至6之一所述的心血管药物保心宁的检测方法，其特征在于所说的各样品在硅胶G薄层层析板上的点样量为5-10微升。