CN107907623A - 一种侧柏叶炮制“炒炭存性”的快速判断方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种侧柏叶炮制“炒炭存性”的快速判断方法，采用TLC同时鉴定槲皮苷和槲皮素的方法，作为侧柏叶“炒炭存性”的衡量依据，是在同一薄层板上采用二次展开的方法，同时鉴定出槲皮苷和槲皮素两种成分，则代表符合侧柏叶“炒炭存性”的要求。该方法可实现在同一薄层板上同时鉴定出槲皮苷和槲皮素两种代表侧柏叶“炒炭存性”的成分，可作为侧柏叶“炒炭存性”的判断依据。鉴定时间短，且方法准确、稳定、可行，能够实现侧柏炭中槲皮苷和槲皮素成分的有效分离，且分离后斑点清晰。

Description

一种侧柏叶炮制“炒炭存性”的快速判断方法
技术领域
本发明属于中药技术领域，涉及一种中药炮制判断方法，具体涉及一种侧柏叶炮制“炒炭存性”的快速判断方法。
背景技术
侧柏叶为柏科植物侧柏Platycladus orientalis （L.）Franco的枝梢及叶。侧柏叶生品以清热凉血，止咳祛痰力胜，用于血热妄行的各种出血症，咳嗽痰多，湿热带下及脱发。炒炭后寒凉之性趋于平和，专于收涩止血。
目前炭药“炒炭存性”多根据的性状、颜色、气味来辨别，带有很大主观性。由于市售炭药普遍存在炒制不及或炒制太过的现象，为了提高“炒炭存性”的鉴别准确性，现代主要是通过对炭药的药理及其化学成分进行研究，制定出鉴定“炒炭存性”的定量依据，但这些方法操作复杂，检测时间长，且需要用到显微镜、色谱仪、光谱仪等精密仪器，适用范围小。因此，亟需建立一种能够简单快速地判断侧柏叶“炒炭存性”的方法。
发明内容
本发明针对现有技术中存在上述不足，建立一种侧柏叶炮制“炒炭存性”的快速判断方法。
本发明技术方案如下：
一种侧柏叶炮制“炒炭存性”的快速判断方法，采用TLC同时鉴定槲皮苷和槲皮素的方法，作为侧柏叶“炒炭存性”的衡量依据。
所述的快速判断方法，是在同一薄层板上采用二次展开的方法，同时鉴定出槲皮苷和槲皮素两种成分，则代表符合侧柏叶“炒炭存性”的要求。
所述的二次展开的方法，是先以100:17:13的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，再以4.5:4.5:1的水饱和甲苯-甲酸乙酯-甲酸为展开剂。
一种侧柏叶炮制“炒炭存性”的快速判断方法，步骤包括：
1）取待测样品粉末1g，加甲醇水溶液20mL溶解，超声30min，过滤，取滤液水浴蒸干后，加甲醇2ml溶解，得供试品溶液；
优选地，步骤1）中，甲醇水溶液浓度为70％（W/V）。
2）取槲皮苷标准品，加乙醇配制为0.1mg/ml的溶液，得槲皮苷对照品溶液；取槲皮素标准品，加乙醇配制为0.1mg/ml的溶液，得槲皮素对照品溶液；
3）薄层色谱展开：取供试品溶液、槲皮苷对照品溶液和槲皮素对照品溶液各 3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以100:17:13的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展至2.5-3.5cm，取出硅胶G薄层板，晾干；
优选地，步骤3）中，展至3cm时，取出硅胶G薄层板。
4）二次展开：将步骤3）的硅胶G薄层板再以4.5:4.5:1的水饱和甲苯-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出晾干后，喷1%三氯化铝试液，然后100℃加热5min，置365nm紫外光灯下检视；
优选地，步骤4）中，展至8cm时，取出硅胶G薄层板。
5）根据展开结果是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，判断侧柏叶“炒炭存性”。
本发明在侧柏叶“炒炭存性”的研究过程中，发现槲皮苷为侧柏叶生品中所含化学成分，而槲皮素为其炒炭后新产生的化学成分，因此，规范炮制得到的侧柏炭饮片应同时检测出槲皮苷和槲皮素，目前，可以采用高效液相色谱法同时对侧柏炭中槲皮苷和槲皮素含量进行测定，但该方法需要使用大型精密仪器，操作复杂，成本高，针对该缺点，本发明建立了一种采用TLC同时鉴定槲皮苷和槲皮素的方法，无须使用精密仪器设备，操作简便，快速，准确，一般实验室均可使用。采用本发明方法试验时，侧柏叶生品中未有槲皮素成分，仅含有槲皮苷成分，随着炒炭程度的加重，出现了槲皮素成分，因此可以用槲皮苷成分代表侧柏叶炒炭过程中的“存性”，槲皮素代表侧柏叶的“炒炭”指标，当炒炭程度适中时，可发现侧柏炭中槲皮素和槲皮苷的斑点均较为清晰。且由TLC图版（见图1）结果表明，炒炭程度适中的样品，各斑点分离较好，槲皮素、槲皮苷斑点显色清晰，证明用该方法可快速、准确鉴别侧柏炭是否存在“炒炭存性”。
本发明技术方案有益效果为：
（1）采用二次展开的方法，该方法可实现在同一薄层板上同时鉴定出槲皮苷和槲皮素两种代表侧柏叶“炒炭存性”的成分，可作为侧柏叶“炒炭存性”的判断依据。
（2）鉴定时间短（全部过程2h内可完成），且方法准确、稳定、可行，能够实现侧柏炭中槲皮苷和槲皮素成分的有效分离，且分离后斑点清晰。
附图说明
图1为实施例1侧柏叶和不同炒制程度侧柏炭TLC色谱图（365nm）；图中，1-侧柏叶，2、3-侧柏炭（轻＋）4，5-侧柏炭（轻），6-槲皮苷，7-槲皮素，8，9-侧柏炭（适中）10，11-侧柏炭（重）；
图2为对比例1侧柏叶和不同炒制程度侧柏炭TLC色谱图（365nm）；图中，1、2-侧柏炭（轻＋）， 3、4-侧柏炭（轻），5-槲皮苷，6-槲皮素，7、8-侧柏炭（适中）9、10-侧柏炭（重），11-侧柏叶；
图3为对比例2侧柏叶和不同炒制程度侧柏炭TLC色谱图（365nm）；图中，1-侧柏叶，2、3-侧柏炭（轻＋），4、5-侧柏炭（轻），6-槲皮苷，7-槲皮素，8、9-侧柏炭（适中），10、11-侧柏炭（重）；
图4为对比例3侧柏叶和不同炒制程度侧柏炭TLC色谱图（365nm）；图中，1-侧柏叶，2、3-侧柏炭（轻＋），4、5-侧柏炭（轻），6-槲皮苷，7-槲皮素，8、9-侧柏炭（适中），10、11-侧柏炭（重）；
图5为对比例4侧柏炭和槲皮素和槲皮苷薄层色谱图；图中，1-侧柏叶，2、3-侧柏炭（轻＋），4、5-侧柏炭（轻），6-槲皮苷，7-槲皮素，8、9-侧柏炭（适中），10、11-侧柏炭（重）；
图6为对比例5侧柏炭和槲皮素和槲皮苷薄层色谱图；图中，1-侧柏叶，2、3-侧柏炭（轻＋），4、5-侧柏炭（轻），6-槲皮苷，7-槲皮素，8、9-侧柏炭（适中），10、11-侧柏炭（重）；
图7为对比例6侧柏炭和槲皮素和槲皮苷薄层色谱图；图中，1-侧柏叶，2、3-侧柏炭（轻＋），4、5-侧柏炭（轻），6-槲皮苷，7-槲皮素，8、9-侧柏炭（适中），10、11-侧柏炭（重）；
图8为对比例7侧柏炭和槲皮素和槲皮苷薄层色谱图；图中，1-侧柏叶，2、3-侧柏炭（轻＋），4、5-侧柏炭（轻），6-槲皮苷，7-槲皮素，8、9-侧柏炭（适中），10、11-侧柏炭（重）。
具体实施方式
通过结合具体实施例描述本发明，在不脱离本发明上述技术思想情况下，根据本领域普通技术知识和惯用手段做出的各种替换或变更，均包括在本发明的范围内。
下述实施例及对比例采用的待测样品包括侧柏叶生品及不同炒炭程度的侧柏炭样品，可较为形象的说明槲皮素和槲皮苷在侧柏叶炒炭过程中的变化，即侧柏叶生品中不含槲皮素，仅含槲皮苷，随着炒炭程度的加重，出现了槲皮素，当炒炭适中时，槲皮素量最多，但若炒炭过重，槲皮素和槲皮苷两种成分的含量均下降，甚至消失殆尽。因此对上述样品进行测定可有效反映侧柏叶的“炒炭存性”。
实施例1
一种侧柏叶炮制“炒炭存性”的快速判断方法，步骤包括：
1）取待测样品（炒炭适中）粉末1g，加70％（W/V）甲醇水溶液20mL溶解，超声30min，过滤，取滤液水浴蒸干后，加甲醇2ml溶解，得供试品溶液；
2）取槲皮苷标准品，加乙醇配制为0.1mg/ml的溶液，得槲皮苷对照品溶液；取槲皮素标准品，加乙醇配制为0.1mg/ml的溶液，得槲皮素对照品溶液；
3）薄层色谱展开（药典四部通则0502）：取供试品溶液、槲皮苷对照品溶液和槲皮素对照品溶液各 3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-甲醇-水（100:17:13）为展开剂，展至3cm，取出硅胶G薄层板，晾干；
4）二次展开：将步骤3）的硅胶G薄层板再以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（4.5:4.5:1）为展开剂，展开至8cm时，取出晾干后，喷1%三氯化铝试液，然后100℃加热5min，置365nm紫外光灯下检视；
5）根据展开结果是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，判断侧柏叶“炒炭存性”。
由实施例1的TLC图版（图1）结果表明，供试品中各斑点分离效果好，槲皮素、槲皮苷斑点显色清晰、分离完全，证明该样品炒炭程度适中，侧柏叶炮制“炒炭存性”符合要求。
可见，通过实施例1方法得到的判断结果与选取的待测样品“炒炭存性”相符合，结果一致，证明用该方法可快速、准确鉴别侧柏叶炮制的“炒炭存性”。
此外，图1 TLC色谱图中，还包含了侧柏叶和不同炒制程度侧柏炭的对比，该图可有效说明侧柏叶炒炭过程中槲皮苷和槲皮素成分的变化过程，从图1中可以看出侧柏叶生品中未有槲皮素成分，仅含有槲皮苷成分，随着炒炭程度的加重，出现了槲皮素成分，因此可以用槲皮苷成分代表侧柏叶炒炭过程中的“存性”，槲皮素代表侧柏叶的“炒炭”指标，当炒炭程度适中时，可发现侧柏炭中槲皮素和槲皮苷的斑点均较为清晰，而炒过的侧柏炭中槲皮素和槲皮苷成分均被破坏，消失殆尽。
对比例1（一次展开）
取待测样品粉末1g，加70％甲醇水溶液20mL，超声30min，过滤，滤液水浴蒸干，加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取槲皮苷和槲皮素标准品，加乙醇配制为0.1mg/mL的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各 3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为（12:1:1）的乙酸乙酯-甲酸-水为展开剂展开，取出，晾干，喷以1％的三氯化铝-乙醇溶液，紫外光灯365nm下检视。TLC图谱分见图2，结果表明，槲皮苷斑点显色清晰、分离完全，但槲皮素被推至最前沿，由于槲皮素未明显检出，不能判断是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，该方法不适用于判断侧柏叶“炒炭存性”。
对比例2：（一次展开）
分别取待测样品粉末1g，加70％甲醇20mL，超声30min，过滤，滤液水浴蒸干，加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取槲皮苷和槲皮素标准品，加乙醇配制为0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各 3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸-水（4.5:4.5:1:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝试液，100℃加热5分钟，置紫外光灯（365nm）下检视。TLC图版见图3，结果表明，槲皮素斑点显色清晰、分离完全，但槲皮苷未明显检出，由于该方法未检出待测样品中的槲皮苷，不能判断是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，进而判断侧柏叶“炒炭存性”。
对比例3：（一次展开）
分别取待测样品粉末1g，加70％甲醇20mL，超声30min，过滤，滤液水浴蒸干，加甲醇2ml溶解，作为供试品溶液；另取槲皮苷和槲皮素标准品，加乙醇配制为0.1mg/ml的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法（通则0502）试验，吸取供试品溶液和对照品溶液各 3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯（水饱和）-甲酸乙酯-甲酸（4.5:4.5:1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝试液，100℃加热5分钟，置紫外光灯（365nm）下检视。TLC图版见图4，结果表明，虽达到了同时鉴定槲皮苷和槲皮素的效果，但仅槲皮素斑点显色清晰、分离完全，槲皮苷未达到完全分离，由于该方法未有效分离待测样品中的槲皮苷，不能判断是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，进而判断侧柏叶“炒炭存性”。
对比例4：
与实施例1不同之处在于：步骤4）二次展开中以甲苯-乙酸乙酯-甲酸（5:2:1）为展开剂；如图5，结果表明，槲皮苷和槲皮素均存在不同程度的拖尾现象，且槲皮苷并未实现完全分离，不能用于明确判断是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，进而判断侧柏叶“炒炭存性”。
对比例5
与实施例1不同之处在于：步骤4）二次展开：将步骤3）的硅胶G薄层板再以甲苯（水饱和）-乙酸乙酯-甲酸（4.5:4.5:1）为展开剂。如图6，槲皮苷和槲皮素均存在不同程度的拖尾现象，图谱不符合薄层色谱展开要求，其结果不能用于准确判断是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，进而判断侧柏叶“炒炭存性”。
对比例6
与实施例1不同之处在于：步骤3）薄层色谱展开中，以乙酸乙酯-甲醇-水（10:1:1）为展开剂；如图7，结果，槲皮素斑点没有分离完全；槲皮苷显色不甚清晰，图谱不甚符合薄层色谱展开要求，其结果不能用于准确判断是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，进而判断侧柏叶“炒炭存性”。
对比例7
与实施例1不同之处在于：步骤3）薄层色谱展开：以乙酸乙酯-甲醇-水（10:1:1）为展开剂；步骤4）二次展开：以甲苯（水饱和）-乙酸乙酯-甲酸（4.5:4.5:1）为展开剂。如图8，结果槲皮素斑点显色清晰、但没有分离完全；槲皮苷斑点有拖尾现象，图谱不符合薄层色谱展开要求，其结果不能用于准确判断是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，进而判断侧柏叶“炒炭存性”。

Claims (7)

1.一种侧柏叶炮制“炒炭存性”的快速判断方法，其特征在于：采用TLC同时鉴定槲皮苷和槲皮素的方法，作为侧柏叶“炒炭存性”的衡量依据。
2.根据权利要求1所述的快速判断方法，其特征在于：是在同一薄层板上采用二次展开的方法，同时鉴定出槲皮苷和槲皮素两种成分，则代表符合侧柏叶“炒炭存性”的要求。
3.根据权利要求2所述的快速判断方法，其特征在于：所述的二次展开的方法，是先以100:17:13的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，再以4.5:4.5:1的水饱和甲苯-甲酸乙酯-甲酸为展开剂。
4.根据权利要求1-3任一项所述的快速判断方法，其特征在于，步骤包括：
1）取待测样品粉末1g，加甲醇水溶液20mL溶解，超声30min，过滤，取滤液水浴蒸干后，加甲醇2ml溶解，得供试品溶液；
2）取槲皮苷标准品，加乙醇配制为0.1mg/ml的溶液，得槲皮苷对照品溶液；取槲皮素标准品，加乙醇配制为0.1mg/ml的溶液，得槲皮素对照品溶液；
3）薄层色谱展开：取供试品溶液、槲皮苷对照品溶液和槲皮素对照品溶液各 3μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以100:17:13的乙酸乙酯-甲醇-水为展开剂，展至2.5-3.5cm，取出硅胶G薄层板，晾干；
4）二次展开：将步骤3）的硅胶G薄层板再以4.5:4.5:1的水饱和甲苯-甲酸乙酯-甲酸为展开剂，展开，取出晾干后，喷1%三氯化铝试液，然后100℃加热5min，置365nm紫外光灯下检视；
5）根据展开结果是否同时存在槲皮苷和槲皮素两种成分，判断侧柏叶“炒炭存性”。
5.根据权利要求4所述的快速判断方法，其特征在于：步骤1）中，甲醇水溶液浓度为70％（W/V）。
6.根据权利要求4所述的快速判断方法，其特征在于：步骤3）中，展至3cm时，取出硅胶G薄层板。
7.根据权利要求4所述的快速判断方法，其特征在于：步骤4）中，展至8cm时，取出硅胶G薄层板。
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