CN107130042A - 一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用 - Google Patents

一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用 Download PDF

Info

Publication number
CN107130042A
CN107130042A CN201710457793.3A CN201710457793A CN107130042A CN 107130042 A CN107130042 A CN 107130042A CN 201710457793 A CN201710457793 A CN 201710457793A CN 107130042 A CN107130042 A CN 107130042A
Authority
CN
China
Prior art keywords
pcr
pneumococcus
molecular labeling
seq
resistant genes
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710457793.3A
Other languages
English (en)
Inventor
吕少波
李苏杨
李卓才
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Suzhou Jonathan New Materials Technology Co Ltd
Original Assignee
Suzhou Jonathan New Materials Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Suzhou Jonathan New Materials Technology Co Ltd filed Critical Suzhou Jonathan New Materials Technology Co Ltd
Priority to CN201710457793.3A priority Critical patent/CN107130042A/zh
Publication of CN107130042A publication Critical patent/CN107130042A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
    • C12Q1/6888—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms
    • C12Q1/689—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for detection or identification of organisms for bacteria
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用，所述分子标记及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。(1)本发明所述分子标记特异性好、检测灵敏度高、稳定性良好；(2)本发明所述分子标记检测结果重复性良好；(3)本发明所述试剂盒易于保存，且保存期限延长至8～15个月。

Description

一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记 及其应用
技术领域
本发明属于分子生物学领域，涉及一种采用分子生物学手段检测微生物耐药基因的方法，具体为一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用。
背景技术
氨基糖苷类药物主要通过抑制细菌蛋白质的合成而产生抑菌作用。作为一类广谱抗生素，在临床上主要应用于治疗肠道细菌感染，尤其是链霉素、卡那霉素、庆大霉素常用于治疗革兰氏阴性细菌如：沙门氏菌、志贺氏菌、肺炎球菌等引起的感染。但是随着应用的增多，这些细菌对这类药物也产生了广泛的耐药性。
猪场分离的细菌对氨基糖苷类抗生素的耐药率非常高，猪场若长期持续存在抗生素的选择性压力，耐药率可高达97％。
国内外耐药性检测试剂盒的研究刚刚起步，并且主要是集中在对人类危害严重的几种病原生物(肿瘤病毒、乙肝病毒、结核分枝杆菌)耐药性的研究上，我国已经有相应的耐药性检测试剂盒的研究和应用。但是这些试剂盒的核心技术都不是多种PCR检测，而是以应用核酸杂交和基因芯片为主要技术。如：乙型肝炎病毒核酸及拉米夫定耐药检测试剂盒、结核分枝杆菌耐药基因检测试剂盒、G+细菌菌种鉴定与耐药检测芯片试剂盒等。同时，国内外已经有较多的利用多重PCR技术检测病原微生物的研究和相应试剂盒的研究报道，如：人乳头瘤病毒的诊断与分型多重PCR试剂盒，脑膜炎病原体多重PCR检测试剂盒、禽流感病毒多重PCR快速检测试剂盒、马铃薯病毒分型检测试剂盒、烟草花叶病毒分型检测试剂盒等。
但是目前还没有细菌耐药性PCR检测试剂盒的产品报道。
发明内容
本发明的目的是：为了克服现有技术的缺陷，获得一种检测灵敏度高、稳定性良好、易保存的检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的产品，本发明公开了一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用。
技术方案：一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记，所述分子标记及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
优选的，所述分子标记P1、P2和P3的上游引物5’端进行氨基化修饰并附加10个碱基T。
表1分子标记序列
名称 序列(5’-3’) SEQ ID NO.
P1-F NH2-T(10)CTGACCTTGCGATGCTCTATGA 1
P1-R CGACTGCCTGGCGTGTTT 2
P2-F NH2-T(10)ACCCTACGAGGAGACTCTGACTG 3
P2-R CCAAGCATCGGCATCTCATA 4
P3-F NH2-T(10)GTCTGGCTATCTTGCTGACA 5
P3-R GGTGACGGGCTGATACTGG 6
所述分子标记在制备检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因试剂盒中的应用。
优选的，所述试剂盒的组分包括：分子标记、dNTP、LA Taq、PCR反应缓冲液、MgCl2、双蒸水。
优选的，所述试剂盒检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的步骤包括：
(1)取样：选取纯化后的肺炎球菌，划线接种培养基，形成单个菌落，向无菌EP管中加入20～60μL 60％的甘油，用接种针挑取单菌落于甘油中洗涤数次，-20℃保存；
(2)以步骤(1)收集的菌体作为PCR模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释50～300倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释10～100倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
优选的，所述PCR扩增的体系为25μL：模板2μL、PCR反应缓冲液2.5μL、dNTP 2μL、LATaq 2μL、分子标记1μL、双蒸水15.5μL。
优选的，所述第一轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
优选的，所述第二轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，45s，35个循环；72℃，5min。
优选的，所述第三轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，35s，35个循环；72℃，4min。
有益效果：(1)本发明所述分子标记特异性好、检测灵敏度高、稳定性良好；(2)本发明所述分子标记检测结果重复性良好；(3)本发明所述试剂盒易于保存，且保存期限延长至8～15个月。
附图说明
图1是实施例1～3检测结果图；
其中，1为分子量为1500bp的Maker；3为实施例1PCR产物电泳结果；4为实施例2PCR产物电泳结果；5为实施例3PCR产物电泳结果。
具体实施方式
实施例1
一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记，所述分子标记及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
所述分子标记P1、P2和P3的上游引物5’端进行氨基化修饰并附加10个碱基T。
所述分子标记在制备检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因试剂盒中的应用。
所述试剂盒的组分包括：分子标记、dNTP、LA Taq、PCR反应缓冲液、MgCl2、双蒸水。
所述试剂盒检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的步骤包括：
(1)取样：选取纯化后的肺炎球菌，划线接种培养基，形成单个菌落，向无菌EP管中加入20μL60％的甘油，用接种针挑取单菌落于甘油中洗涤数次，-20℃保存；
(2)以步骤(1)收集的菌体作为PCR模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释50倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释100倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
所述PCR扩增的体系为25μL：模板2μL、PCR反应缓冲液2.5μL、dNTP 2μL、LA Taq 2μL、分子标记1μL、双蒸水15.5μL。
所述第一轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
所述第二轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，45s，35个循环；72℃，5min。
所述第三轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，35s，35个循环；72℃，4min。
实施例2
一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记，所述分子标记及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
所述分子标记P1、P2和P3的上游引物5’端进行氨基化修饰并附加10个碱基T。
所述分子标记在制备检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因试剂盒中的应用。
所述试剂盒的组分包括：分子标记、dNTP、LA Taq、PCR反应缓冲液、MgCl2、双蒸水。
所述试剂盒检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的步骤包括：
(1)取样：选取纯化后的肺炎球菌，划线接种培养基，形成单个菌落，向无菌EP管中加入40μL60％的甘油，用接种针挑取单菌落于甘油中洗涤数次，-20℃保存；
(2)以步骤(1)收集的菌体作为PCR模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释200倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释50倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
所述PCR扩增的体系为25μL：模板2μL、PCR反应缓冲液2.5μL、dNTP 2μL、LA Taq 2μL、分子标记1μL、双蒸水15.5μL。
所述第一轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
所述第二轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，45s，35个循环；72℃，5min。
所述第三轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，35s，35个循环；72℃，4min。
实施例3
一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记，所述分子标记及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
所述分子标记P1、P2和P3的上游引物5’端进行氨基化修饰并附加10个碱基T。
所述分子标记在制备检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因试剂盒中的应用。
所述试剂盒的组分包括：分子标记、dNTP、LA Taq、PCR反应缓冲液、MgCl2、双蒸水。
所述试剂盒检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的步骤包括：
(1)取样：选取纯化后的肺炎球菌，划线接种培养基，形成单个菌落，向无菌EP管中加入60μL60％的甘油，用接种针挑取单菌落于甘油中洗涤数次，-20℃保存；
(2)以步骤(1)收集的菌体作为PCR模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释300倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释10倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
所述PCR扩增的体系为25μL：模板2μL、PCR反应缓冲液2.5μL、dNTP 2μL、LA Taq 2μL、分子标记1μL、双蒸水15.5μL。
所述第一轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
所述第二轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，45s，35个循环；72℃，5min。
所述第三轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，35s，35个循环；72℃，4min。
SEQUENCE LISTING
<110> 苏州乔纳森新材料科技有限公司
<120> 一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用
<130>
<160> 6
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 1
ctgaccttgc gatgctctat ga 22
<210> 2
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 2
cgactgcctg gcgtgttt 18
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 3
accctacgag gagactctga ctg 23
<210> 4
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 4
ccaagcatcg gcatctcata 20
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 5
gtctggctat cttgctgaca 20
<210> 6
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<400> 6
ggtgacgggc tgatactgg 19

Claims (9)

1.一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记，其特征在于，所述分子标记及其序列为：P1，SEQ ID NO.1～2；P2，SEQ ID NO.3～4；P3，SEQ ID NO.5～6。
2.根据权利要求1所述的一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记，其特征在于，所述分子标记P1、P2和P3的上游引物5，端进行氨基化修饰并附加10个碱基T。
3.权利要求1或2所述分子标记在制备检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因试剂盒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒的组分包括：分子标记、dNTP、LATaq、PCR反应缓冲液、MgCl2、双蒸水。
5.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述试剂盒检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的步骤包括：
(1)取样：选取纯化后的肺炎球菌，划线接种培养基，形成单个菌落，向无菌EP管中加入20～60μL 60％的甘油，用接种针挑取单菌落于甘油中洗涤数次，-20℃保存；
(2)以步骤(1)收集的菌体作为PCR模板，以P1为特异性引物，进行第一轮PCR扩增；
(3)取步骤(2)的扩增产物，稀释50～300倍后作为第二轮PCR的模板，以P2作为特异性引物，进行第二轮PCR扩增；
(4)取第二轮PCR扩增的产物，稀释10～100倍后作为第三轮PCR的模板，以P3作为特异性引物，进行第三轮PCR扩增；
(5)收集第三轮PCR扩增的产物，并采用琼脂糖凝胶电泳检测。
6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述PCR扩增的体系为25μL：模板2μL、PCR反应缓冲液2.5μL、dNTP 2μL、LATaq 2μL、分子标记1μL、双蒸水15.5μL。
7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述第一轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，52℃，30s，72℃，55s，35个循环；72℃，7min。
8.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述第二轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，45s，35个循环；72℃，5min。
9.根据权利要求5所述的应用，其特征在于，所述第三轮PCR扩增的程序为：95℃，2min；95℃，30s，55℃，30s，72℃，35s，35个循环；72℃，4min。
CN201710457793.3A 2017-06-16 2017-06-16 一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用 Pending CN107130042A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710457793.3A CN107130042A (zh) 2017-06-16 2017-06-16 一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710457793.3A CN107130042A (zh) 2017-06-16 2017-06-16 一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107130042A true CN107130042A (zh) 2017-09-05

Family

ID=59734643

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710457793.3A Pending CN107130042A (zh) 2017-06-16 2017-06-16 一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107130042A (zh)

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561340A (zh) * 2015-01-23 2015-04-29 杭州迪安医学检验中心有限公司 一种检测细菌氨基糖苷类耐药基因的引物及试剂盒
CN105950732A (zh) * 2016-05-25 2016-09-21 中国农业大学 动物源食品致病菌鉴定及其耐药和毒力基因检测复合芯片
CN106544445A (zh) * 2017-01-11 2017-03-29 博奥生物集团有限公司 用于检测耐氨基糖苷类抗生素的两种耐药基因的lamp引物组合及其应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104561340A (zh) * 2015-01-23 2015-04-29 杭州迪安医学检验中心有限公司 一种检测细菌氨基糖苷类耐药基因的引物及试剂盒
CN105950732A (zh) * 2016-05-25 2016-09-21 中国农业大学 动物源食品致病菌鉴定及其耐药和毒力基因检测复合芯片
CN106544445A (zh) * 2017-01-11 2017-03-29 博奥生物集团有限公司 用于检测耐氨基糖苷类抗生素的两种耐药基因的lamp引物组合及其应用

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
张安云等: "用四重PCR方法检测野生动物分离细菌对氨基糖苷类药物的耐药基因", 《中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会论文集》 *
王利勤等: "鸡源致病性大肠埃希菌中氨基糖苷类抗生素耐药基因的检测", 《动物医学进展》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN105734164B (zh) 一种检测细菌性脑膜炎病原体的多重pcr试剂盒
CN105802985B (zh) 一种快速实现地衣芽孢杆菌基因敲除的方法
CN105441543B (zh) 一种鉴定尖孢镰刀菌西瓜专化型生理小种的引物及其应用
CN110669852A (zh) 用于检测高毒力非粘液型肺炎克雷伯菌的试剂盒
CN101469326B (zh) 一种对奇异变形杆菌的its特异的核苷酸及其应用
CN103834745B (zh) 大曲微生物群落中乳酸菌和芽孢杆菌的定量分析方法
CN102628042B (zh) 对嗜肺军团菌O9型的wzm基因特异的核苷酸及其应用
Ahmed et al. Molecular and phenotypical characterization of mannheimia haemolytica isolated from goats in Baghdad province
CN102424862A (zh) 嗜肺军团菌的基因分型芯片及检测用试剂盒
CN115747361B (zh) 检测海豚链球菌的实时荧光mira和mira-lfd引物组及检测方法
CN107130042A (zh) 一种用于检测肺炎球菌氨基糖苷类药物耐药基因的分子标记及其应用
CN103160587A (zh) 10种常见致病军团菌的基因分型芯片及检测用试剂盒
CN110669853A (zh) 一种检测非粘液型肺炎克雷伯菌毒力的方法
CN110699471A (zh) 一种快速检测支原体的引物对和试剂盒及其应用
CN107236800A (zh) 一种用于检测葡萄球菌磺胺类药物耐药基因的分子标记及其应用
CN103571950B (zh) 一种舒伯特气单胞菌快速检测试剂盒及其检测方法
CN102676678B (zh) 用于区分五种贝类饵料微藻的pcr引物组
CN112029877B (zh) 一种多重pcr引物筛选方法及应用
CN107164504A (zh) 一种用于检测粪肠球菌庆大霉素耐药基因的分子标记及其应用
Ampe Design and evaluation of a Lactobacillus manihotivorans species-specific rRNA-targeted hybridization probe and its application to the study of sour cassava fermentation
CN112176080A (zh) 特异性检测剑麻紫色卷叶病植原体的巢式pcr引物组、试剂盒及检测方法
KR101413121B1 (ko) 엑시도보락스 시트룰리 검출 방법
CN107130044A (zh) 一种用于检测鸭疫里默氏杆菌红霉素耐药基因的分子标记及其应用
CN104762392A (zh) 大肠杆菌、肺炎克雷伯氏菌和不动杆菌的三重荧光定量pcr检测方法
CN102604945B (zh) 对嗜肺军团菌O5型的wzt基因特异的核苷酸及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20170905