CN107095061B - 提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了饲料加工技术领域的提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法及其应用，其具体步骤如下：S1：复方中药制备；S2：制备发酵菌液；S3：饲料原料处理；S4：混料并发酵，本发明能够改善肠道菌群和肠道屏障功能，健脾胃、益气补肾和消湿养血，提高育肥猪肠道消化吸收能力，降低猪的发病率和饲养成本，通过复方中药的合用可以消除引起肥猪肠黏膜屏障功能障碍的诱因，提高机体免疫力，降低育肥猪的发病率和磷的排放率，一方面复方中药中的皂苷等成分也可以促进枯草芽抱杆菌等益生菌的生长繁殖，也有利于益生菌发挥作用；另一方面经过发酵处理，有利于育肥猪对中药的消化吸收，从而提高药效。

Description

提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及饲料加工技术领域，具体为提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法及其应用。
背景技术
猪的肠道不仅具有消化吸收饲料营养的功能，还具有能阻止肠腔内细菌等病原体和有害物质侵入体内的屏障作用。消化道不仅是提高饲料消化利用率的重要器官，也是病原微生物和有害物质侵入体内的主要途径，肠道结构的完整程度直接决定猪病的发生率和肠道屏障功能主要是通过肠黏膜屏障来实现的，肠黏膜屏障功能的好坏直接影响其抗病力和消化吸收功能，对养猪效益具有重要影响。
发酵饲料是指在人为条件下，利用微生物的代谢将饲料中的大分子物质和抗营养因子分解或转化，产生更有利于动物采食和利用的富含高活性益生菌及其代谢产物的饲料或原料。但正常饲料经过微生物发酵处理后，虽然提高了畜禽对饲料的利用率，降低废弃物的排泄量，对降低饲料成本和保护生态环境具有一定作用，但单纯微生物发酵饲料对提高畜禽抵抗力尚有一定缺陷。为此，我们提出了提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法及其应用投入使用，以解决上述问题。
发明内容
本发明的目的在于提供提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法及其应用，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法，包括复方中药制备、制备发酵菌液、饲料原料处理和混料并发酵的步骤，该提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法的具体步骤如下：
S1：复方中药制备：将黄芪30-20份、白术20-15份、炙甘草20-15份、陈皮30-20份、何首乌10-5份、山楂30-20份、丹参15-10份、蒲公英5-10 份、麦冬15-10份和刺五加5-10份粉碎，过40目筛，备用；
S2：制备发酵菌液：将植物乳酸杆菌液1×108cfu/ml和枯草杆菌菌液 1×108cfu/ml按等体积混合，备用；
S3：饲料原料处理：将玉米、黄豆、麸皮、秸秆粉、预混料按65:19:10:2： 4比例配制，然后粉碎，粉碎粒度为＜2mm；
S4：混料并发酵：将处理的饲料原料与5‰复方中药混合均匀，再按2‰比例添加发酵菌液，混合均匀后，置于发酵池中，常温发酵7天后即可使用。
优选的，所述步骤S2中，发酵菌液的提取步骤如下：
S21：从屠宰的农家散养猪的肠道内取内容物，利用MRS培养基1％，分离乳酸菌，再采用16SrDNA序列分析鉴定出植物乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌；
S22：将植物乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌的菌种接种到0.8g/ml的MRS培养基(1％碳酸钙)，培养48h；将菌种如此反复多次接种，最后保留菌种；
S23：将植物乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌按1:1配置成液体。
优选的，所述步骤S3中，秸秆份为大豆秸秆份和花生秸秆份的混合物。
优选的，提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料的应用，所述该提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料用于饲喂育肥猪，改善肠道菌群和肠道屏障功能，健脾胃、益气补肾和消湿养血，提高育肥猪肠道消化吸收能力，降低猪的发病率和饲养成本。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明能够改善肠道菌群和肠道屏障功能，健脾胃、益气补肾和消湿养血，提高育肥猪肠道消化吸收能力，降低猪的发病率和饲养成本，通过复方中药的合用可以消除引起肥猪肠黏膜屏障功能障碍的诱因，提高机体免疫力，降低育肥猪的发病率和磷的排放率，一方面复方中药中的皂苷等成分也可以促进枯草芽抱杆菌等益生菌的生长繁殖，也有利于益生菌发挥作用；另一方面经过发酵处理，有利于育肥猪对中药的消化吸收，从而提高药效。
附图说明
图1为本发明工作流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1，本发明提供一种技术方案：提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法，包括复方中药制备、制备发酵菌液、饲料原料处理和混料并发酵的步骤，该提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法的具体步骤如下：
S1：复方中药制备：将黄芪30-20份、白术20-15份、炙甘草20-15份、陈皮30-20份、何首乌10-5份、山楂30-20份、丹参15-10份、蒲公英5-10 份、麦冬15-10份和刺五加5-10份粉碎，过40目筛，备用，黄芪、白术、炙甘草能补气、健脾、燥湿健脾；何首乌、陈皮具有补肝肾、益精血作用；山楂具有消积食功效；丹参、蒲公英能散瘀血、凉血消痈，麦冬具有养阴生津；刺五加益气补肾，诸药合用可以消除引起肠黏膜屏障功能障碍的诱因，提高机体免疫力，降低育肥猪的发病率和磷的排放率；
S2：制备发酵菌液：将植物乳酸杆菌液1×108cfu/ml和枯草杆菌菌液 1×108cfu/ml按等体积混合，备用，益生菌在动物肠道内定植后能发挥免疫激活作用，刺激肠道免疫组织的生长，提高机体内抗体水平和巨噬细胞的活性，增强机体的免疫功能和抗病力，植物乳酸杆菌在饲料发酵过程中可以促进饲料中氮磷化合物的分解，抑制霉菌等真菌引起的饲料变质，同时抑制肠道病原菌的繁育，枯草芽抱杆菌通过与有害菌竞争消化道上皮的附着位点、产生抑菌物质、与有害菌竞争营养物质、生物夺氧等机制从而有利于建立消化道正常的微生物菌群，其中发酵菌液的提取步骤如下：
S21：从屠宰的农家散养猪的肠道内取内容物，利用MRS培养基1％，分离乳酸菌，再采用16SrDNA序列分析鉴定出植物乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌；
S22：将植物乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌的菌种接种到0.8g/ml的MRS培养基(1％碳酸钙)，培养48h；将菌种如此反复多次接种，最后保留菌种；
S23：将植物乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌按1:1配置成液体；
S3：饲料原料处理：将玉米、黄豆、麸皮、秸秆粉、预混料按65:19:10:2： 4比例配制，然后粉碎，粉碎粒度为＜2mm，秸秆份为大豆秸秆份和花生秸秆份的混合物；
S4：混料并发酵：将处理的饲料原料与5‰复方中药混合均匀，再按2‰比例添加发酵菌液，混合均匀后，置于发酵池中，常温发酵7天后即可使用。
本发明还提供了提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料的应用，所述该提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料用于饲喂育肥猪，改善肠道菌群和肠道屏障功能，健脾胃、益气补肾和消湿养血，提高育肥猪肠道消化吸收能力，降低猪的发病率和饲养成本。
发酵饲料的主要原料是玉米、豆粕、麸皮，60kg以内的育肥猪饲料配方为玉米33.5kg、大豆13kg、麸皮1.5kg，天津正大4％预混料2kg；60kg以外的育肥猪饲料配方为玉米33.5kg、大豆10kg、麸皮4.5kg，天津正大4％预混料2kg。将玉米、豆粕、麸皮粉碎后，按5‰的比例加入复方中药，再按2‰的比例将植物乳酸杆菌、枯草芽抱杆菌(1：1)液体与饲料混合，置于发酵池中，常温发酵7天后，与天津正大4％预混料混合即可使用。
随机选择品种为杜长大、日龄相近且体重为21-24kg育肥猪54头。常规圈养和接种疫苗。将54头育肥猪随机分成Ⅰ、Ⅱ两组，每组27头，每组分为3个重复。Ⅱ组育肥猪饲喂发酵饲料，Ⅰ组为空白对照组，饲喂同样配方但饲料未经发酵处理，其它饲养管理方式均与Ⅱ组相同。整个育肥期，每天观察有无腹泻等异常临床症状，统计出栏猪的料肉比、腹泻率、病死率。
不同浓度复方中药水提物对乳酸杆菌体外培养的影响：①制备含有不同浓度复方中药的培养剂，接种乳酸杆菌后培养24h，按琼脂10倍稀释法测定乳酸杆菌数，具体的中药水提取物的具体步骤为将配方中药粉碎物，水浸泡 30分钟，温火熬制两次，合并，浓缩，过滤，冰箱冷藏保存，浓度以生药计 (1g/ml)；
②发酵饲料中将处理的饲料原料与5‰复方中药混合均匀，再按2‰比例添加发酵菌液，混合均匀后，置于发酵池中，常温发酵7天，参照GB/T 13092-2006饲料中霉菌总数测定方法，按琼脂10倍稀释法测定饲料中乳酸菌数；
③饲喂试验进行30天时，每重复随机选择2头猪，进行前腔静脉采血 10ml/头，置室温下析出血清；出栏前1周随机新鲜粪便样品，每头猪取粪便的重量约为30g，每个重复取2-3头，连续取5天。出栏屠宰时，用线结扎，取其十二指肠5-6cm，然后取其肠道内容物，将样品置于-40℃冰箱中保存；
④按试剂盒说明检测血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷光甘肽过氧化物酶、免疫球蛋白G、总蛋白，无菌称取猪十二指肠食糜，参照sIgA试剂盒要求检测肠道sIgA水平；同时按琼脂10倍稀释法测定十二指内容物中大肠杆菌、乳酸菌含量，取饲料和猪的粪便样品，采用GB/T6432方法测定粗蛋白质含量，采用GB/T 6437方法测定总磷含量。请参阅表1，不同浓度复方中药水提物对乳酸杆菌繁育有促进作用。
表1不同浓度复方中药水提物对乳酸杆菌体外培养的影响
Figure BDA0001311418170000051
Figure BDA0001311418170000061
表2饲料发酵前后霉菌、乳酸菌数量变化
Figure BDA0001311418170000062
请参阅表2，饲料经发酵处理后，霉菌数量明显下降，血清中的超氧化物歧化酶、谷光甘肽过氧化物酶可有效抑止自由基的氧化反应，维持机体健康。 SOD是消除机体新陈代谢有害物质，具有抗衰老、抗肿瘤和提高免疫力作用效果，谷光甘肽过氧化物酶清除机体内的自由基，减少机体受到损伤，防止脂质过氧化物产生，其含量变化与机体健康有着密切联系，被作为评价机体抗氧化重要指标。
表3发酵饲料对育肥猪血清超歧化酶、谷光甘肽过氧化物酶、免疫球蛋白G、总蛋白含量影响
Figure BDA0001311418170000063
表4发酵饲料对育肥猪肠道乳酸菌、大肠杆菌数量影响
Figure BDA0001311418170000071
请参阅表3和表4，育肥猪饲喂发酵饲料后，血清超歧化酶、谷光甘肽过氧化物酶、免疫球蛋白G、肠道乳酸菌和大肠杆菌数量均发生显著变化；血清总蛋白含量和肠道SIgA水平也有了升高，这表明机体消除自由基等有害代谢产物和肠道抵抗细菌等病原微生物感染的能力增强。
表5发酵饲料对育肥猪腹泻率、料肉比、病死率影响
Figure BDA0001311418170000072
请参阅表5，饲喂发酵饲料的育肥猪腹泻率、料肉比、病死率明显降低，具有显著的经济效益。
表6发酵饲料对育肥猪粪便氮、磷排放量影响
Figure BDA0001311418170000073
请参阅表6，饲喂发酵饲料的育肥猪粪便氮、磷排放量明显降低。这表明本技术具有良好的经济和社会效益。
经过临床实验表明，室温下饲料在池内堆积发酵处理后，与未添加乳酸菌的饲料相比，霉菌数量显著减少(P<0.05)，乳酸菌数量显著增加(P<0.05)。将其饲喂育肥猪时，肠道大肠杆菌数、乳酸菌数均发生显著性变化(P<0.05)，肠sIgA的分泌量升高0.2ng/μg，血清总超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、免疫球蛋白G均发生显著性变化(P<0.05)，但血清总蛋白尽管没有显著性变化，但试验组的血清总蛋白含量增加。出栏病死率降低3.54％(P<0.05)，腹泻率、料肉比分别降低1.43％(P<0.05)、0.13％(P<0.05)，氮、磷排放量分别降低了26.37％(P<0.05)、24.62％(P<0.05)，因此本发明具有很高的推广价值。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。

Claims (1)

1.提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法，包括复方中药制备、制备发酵菌液、饲料原料处理和混料并发酵的步骤，其特征在于：该提高育肥猪肠道屏障功能的发酵饲料制备方法的具体步骤如下：
S1：复方中药制备：将黄芪30-20 份、白术20-15 份、炙甘草20-15 份、陈皮30-20 份、何首乌10-5 份、山楂30-20 份、丹参15-10 份、蒲公英5-10份、麦冬15-10 份和刺五加5-10份粉碎，过40 目筛，备用；
S2：制备发酵菌液：将植物乳酸杆菌液1×108 cfu/ml 和枯草杆菌菌液1×108 cfu/ml按等体积混合，备用；
S3：饲料原料处理：将玉米、黄豆、麸皮、秸秆粉、预混料按65:19:10:2：4 比例配制，然后粉碎，粉碎粒度为＜2mm；
S4：混料并发酵：将处理的饲料原料与5‰复方中药混合均匀，再按2‰比例添加发酵菌液，混合均匀后，置于发酵池中，常温发酵7 天后即可使用；
所述步骤S2 中，发酵菌液的提取步骤如下：
S21：从屠宰的农家散养猪的肠道内取内容物，加入到MRS 培养基中，内容物占比为1%，分离乳酸菌，再采用16SrDNA 序列分析鉴定出植物乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌；
S22：将植物乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌的菌种接种到含有1%碳酸钙MRS 培养基中，培养48h；将菌种如此反复多次接种，最后保留菌种；
S23：将植物乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌按1:1 配制 成液体；
所述步骤S3中，秸秆粉为大豆秸秆粉和花生秸秆粉的混合物。
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