CN107090435A - 一种耐卡铂卵巢癌细胞系及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种耐卡铂卵巢癌细胞系及其应用。本发明通过细致观测细胞生长形态来决定药物诱导的干预时机，建立了一株耐卡铂卵巢癌细胞系，保藏号为CCTCC NO∶C201736，其耐药性显著高于同期建立的其他细胞系，并且表现出极稳定的耐药性，可作为探索卵巢癌耐药发生发展机制的可靠生物学模型，寻找卵巢癌耐药后的治疗方法。

Description

一种耐卡铂卵巢癌细胞系及其应用
技术领域
本发明涉及耐药细胞系的建立，具体地说，涉及一种耐卡铂(carboplatin，CBP)卵巢癌细胞系及其应用。
背景技术
卵巢癌是致女性死亡的首位生殖道恶性肿瘤，临床上，其主要治疗方式是在肿瘤细胞减灭术的基础上铂类联合紫杉醇的化疗方案，化疗初始治疗效果好，但易发生耐药，耐药后治疗效果差。普通卵巢癌细胞株在研究卵巢癌耐药机制中存在局限性，而卡铂耐药细胞株将更能模拟临床卵巢癌耐药的发生。
中国专利文献ZL201410708515.7，授权公告日：2017年1月25日，公开了一种耐紫杉醇卵巢癌细胞模型，具体建立方法为：分别用PTX干预OVCAR-3细胞和SK-OV-3细胞，然后换无PTX培养基，至细胞生长恢复正常即细胞稳定生长、形态饱满、无漂浮死细胞、传代密度为30％的情况下3至5天可长至90％后再开始正常传代并提高PTX的浓度，每次干预时间为24小时，最终获得保藏号为CCTCC C2014203和CCTCC C2014204的耐紫杉醇卵巢癌细胞模型。
中国期刊文献《中华临床医师杂志》，2016年5月第10卷第10期刊出的论文“卡铂诱导卵巢癌耐药特性的体外研究”，模仿临床卵巢癌化疗模型，采用中等剂量、间歇作用法，建立了卵巢癌SKOV3细胞对卡铂耐药的细胞系SKOV3/CBP，并进一步研究了其耐药特性及耐药后吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)的表达，初步探讨了耐药与IDO的关系，进一步明确了耐药卵巢癌转移或复发的机制。
然而目前未见耐卡铂的OVCAR-3细胞系。而新的耐药细胞系将有助于进一步探讨耐药机制或佐证已有的研究结果，尤其是耐药指数高、耐药稳定性好的细胞系，将为耐药机制的研究提供很大的便利，也为实验结果的准确性奠定基础。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种耐卡铂卵巢癌细胞系。
本发明的再一的目的是，提供所述的耐卡铂卵巢癌细胞系的用途。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
一种耐卡铂卵巢癌细胞系，所述的耐卡铂卵巢癌细胞系保藏号为CCTCC NO∶C201736。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：
所述的耐卡铂卵巢癌细胞系在研究卵巢癌耐药发生发展机制、寻找卵巢癌耐药逆转的靶点或筛选卵巢癌药物中的应用。
本发明优点在于：
本发明通过细致观测细胞生长形态来决定药物诱导的干预时机，建立了一株耐卡铂卵巢癌细胞系，保藏号为CCTCC NO∶C201736，其耐药性显著高于同期建立的其他细胞系，并且表现出极稳定的耐药性，可作为探索卵巢癌耐药发生发展机制的可靠生物学模型，寻找卵巢癌耐药后的治疗方法，如耐药逆转或药物增敏等。
具体实施方式
实施例1
一、材料
OVCAR-3细胞购自美国ATCC公司。
卡铂(CBP)注射液购自齐鲁制药有限公司：50mg/10ml/支。
卡铂工作液用细胞培养基(RPMI-1640+10％FBS，购自美国Gibco公司)配制。
二、建株步骤
1)OVCAR-3细胞用RPMI-1640+10％FBS+100U/ml青霉素+0.1mg/ml链霉素培养。
2)OVCAR-3细胞用CBP起始浓度为30μM开始干预，给予CBP 24小时后换无药培养基(RPMI-1640+10％胎牛血清)。
3)因卡铂作用于DNA，细胞加药后并不即刻出现死亡，一次加药后细胞需要一个月左右的时间才可恢复正常状态。待细胞稳定生长、形态饱满、无漂浮死细胞后再开始正常传代(P)。加5次卡铂30μM后提高卡铂的浓度至60μM。卡铂共加药10次，其中5次30μM，5次60μM。历时1年的时间。待细胞生长良好，液氮罐储存。
4)计算半抑制浓度(IC50)和耐药系数
耐药细胞建成后采用WST-1法(美国Roche公司)检测细胞存活率。每孔12000个OVCAR-3，OV3R-CBP细胞分别接种至96孔培养板，24小时后给予不同浓度的卡铂工作液(0，1，10，50，100，200，500，1000μM)干预，48小时后更换无血清培养基并每孔加10μL WST-1试剂，在培养箱中37℃继续培养1小时，然后用酶标仪检测450nm波长的吸光度。通过GraphpadPrism软件计算IC50。耐药系数(RI)＝耐药株IC50/敏感株IC50。此外，耐药细胞建成后放液氮罐储存，自耐药细胞建成时6个月、18个月后复苏，再次检测耐药系数以确定其耐药的稳定性。
三、结果
本发明共建立了10株细胞系，发现其中一株细胞系的耐药系数和稳定性十分突出，已于2017年4月12日保藏于中国典型培养物保藏中心(中国武汉大学，430072)，保藏号为CCTCC NO∶C201736，培养物名称(分类命名)：人卵巢癌耐卡铂细胞株OV3R-CBP，实验代号为OV3R-CBP 2-1。
现选择其中一部分较佳细胞系的实验结果示例如下。耐药细胞建成时卡铂对各细胞系的IC50见表1，耐药细胞建成时各细胞系的耐药系数见表2，6个月、18个月后各细胞系的耐药系数见表3。结果表明，OV3R-CBP 2-1的耐药系数显著高于其他各细胞系(P<0.05)，且在冻存了6个月、18个月后仍然保持其耐药性，稳定性很高。因此该细胞系可作为探索卵巢癌耐药发生发展机制的良好生物学模型，以寻找卵巢癌耐药后的治疗方法。
表1耐药细胞建成时卡铂对各细胞系的IC50
细胞株 CBP IC50(μM)
OVCAR-3 72.94
OV3R-CBP 1-1 233.41
OV3R-CBP 1-2 193.29
OV3R-CBP 2-1 329.69
OV3R-CBP 2-5 217.36
OV3R-CBP 2-10 250.22
表2耐药细胞建成时各细胞系的耐药系数
表3 6个月、18个月后各细胞系的耐药系数
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。

Claims (2)

1.一种耐卡铂卵巢癌细胞系，其特征在于，所述的耐卡铂卵巢癌细胞系保藏号为CCTCCNO:C201736。
2.权利要求1所述的耐卡铂卵巢癌细胞系在研究卵巢癌耐药发生发展机制、寻找卵巢癌耐药逆转的靶点或筛选卵巢癌药物中的应用。
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