CN107075518B - 用于结合生长分化因子11的核酸化合物 - Google Patents

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Abstract

本文描述了能够结合至生长分化因子11(GDF11)蛋白的适体；包含GDF11结合适体与GDF11蛋白的组合物；以及制备和使用它们的方法。

Description

用于结合生长分化因子11的核酸化合物
相关申请的交叉引用
本申请要求2014年11月24日提交的美国临时申请No.62/083,592和2015年2月9日提交的美国临时申请No.62/113,864的优先权权益，所述临时申请各自出于任何目的以引用的方式整体并入本文。
序列表
本申请与序列表一起以电子格式提交。序列表提供为在2015年11月23日创建的名称为“2015-11-23_01137-0011-00PCT_ST25.txt”的文件，所述文件的大小为122,816字节。电子格式的序列表中的信息以引用的方式整体并入本文。
领域
本公开总体上涉及核酸领域，并且更具体地涉及能够结合至生长分化因子11(GDF11)蛋白的适体；包含GDF11结合适体与GDF11蛋白的组合物；以及制备和使用它们的方法。
背景
生长分化因子11(GDF11)或骨形态发生蛋白11(BMP-11)属于通过调控Hox基因的表达在发育期间控制前-后图案化的转化生长因子β超家族。已经显示GDF11在调控心肌细胞增殖、肾脏器官发生、胰腺发育中起作用，充当神经发生和软骨形成的负调节因子。
GDF11与肌肉生长抑制素(myostatin)(GDF8)密切相关，肌肉生长抑制素是肌肉生长的负调节因子。像GDF11，肌肉生长抑制素参与心肌细胞增殖的调控。GDF11与肌肉生长抑制素之间的相似性意味着在肌肉和神经发育期间使用相同的调控机制来控制组织大小的可能性。机制上，GDF11的行为可能通过WFIKKN2调控，WFIKKN2是一种由卵泡抑素、免疫球蛋白、蛋白酶抑制剂和NTR结构域组成的细胞外多结构域大蛋白。WFIKKN2对GDF11具有高亲和力，并且先前已被发现抑制肌肉生长抑制素的生物活性。
GDF11和GDF8(肌肉生长抑制素)两者均在发育过程中以及在成体组织中的细胞生长和分化的调控中起重要作用。定位和/或测量这两种蛋白质的能力对于进一步理解和区分它们在发育和成体组织(例如心肌和骨骼肌)中的作用是重要的。然而，由于它们的同源性，难以区分这些蛋白质与当前蛋白质结合试剂(例如抗体)的存在和/或水平。因此，需要能够区分蛋白质GDF11和GDF8的蛋白质结合试剂。本公开通过提供对GDF11蛋白具有结合特异性的适体来满足此类需求。
概要
本公开描述能够结合生长分化因子11(GDF11)蛋白的适体。在一些实施方案中，提供以小于100nM的平衡结合常数(Kd)结合GDF11的适体。另一方面，Kd是约0.1nM至约100nM(或约0.1nM至约50nM、或约0.1nM至约10nM、或约0.5nM至约10nM、或约0.5nM至约5nM)。
在一些实施方案中，提供以小于10nM的亲和力结合GDF11的适体。在一些实施方案中，所述适体以小于10nM的亲和力结合GDF11，并且在相同条件下，所述适体以比对GDF11的亲和力弱至少10倍的亲和力结合GDF8。在一些实施方案中，所述适体不结合GDF8。在一些实施方案中，所述适体以比对GDF11的亲和力弱至少20倍、或弱至少30倍、或弱至少50倍的亲和力结合GDF8。在一些实施方案中，所述适体以大于50nM、或大于100nM、或大于150nM、或大于200nM、或大于250nM、或大于300nM的亲和力结合GDF8。在一些实施方案中，所述适体以小于8nM、或小于7nM、或小于6nM、或小于5nM、或小于4nM、或小于3nM、或小于2nM、或小于1nM的亲和力结合GDF11。在一些实施方案中，使用包含聚阴离子抑制剂的结合测定来测定亲和力。在一些实施方案中，聚阴离子抑制剂选自硫酸葡聚糖、肝素、Z-嵌段、聚-dI/dC、超声处理或剪接的鲑鱼精子DNA、小牛胸腺DNA和dNTP。在一些实施方案中，所述适体包含序列5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO:110)或5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGS-3’(SEQ ID NO:151)，其中：
每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶；
R是A或G；
每个W独立地且每次出现时是A、T或U；
每个M独立地且每次出现时是A或C；
每个S独立地且每次出现时是G或C；
每个n独立地且每次出现时是0或1；以及
每个m独立地且每次出现时是0或1。
在一些实施方案中，提供结合GDF11的适体，其中所述适体包含序列5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO:110)或5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGS-3’(SEQ ID NO:151)，其中：
每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶；
R是A或G；
每个W独立地且每次出现时是A、T或U；
每个M独立地且每次出现时是A或C；
每个S独立地且每次出现时是G或C；
每个n独立地且每次出现时是0或1；以及
每个m独立地且每次出现时是0或1。
在一些实施方案中，结合GDF11的适体包含选自以下的序列：
a)5′-RWnACnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO：111)；
b)5′-RWnACnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGS-3’(SEQ ID NO：152)；
c)5′-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmGWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO：112)；
d)5′-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmGWnPPGnPASnGS-3’(SEQ ID NO：153)；
e)5′-RMCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPPASnGC-3’(SEQ TD NO：113)；以及f)RMCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPPASnGS-3’(SEQ ID NO：154)。
在上述序列的一些实施方案中，如果R是G，则第一W可以是A，并且其中如果R是A，则第一W可以是C。在一些实施方案中，至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个n是0。在一些实施方案中，每个n是0。在一些实施方案中，至少1个、至少2个、至少3个n是1。在一些实施方案中，至少一个m是0。在一些实施方案中，至少一个m是1。
在一些实施方案中，结合GDF11的适体包含序列5’-CPPGMPPP-3’(SEQ ID NO：114)，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶，并且其中M是C或A。在一些实施方案中，结合GDF11的适体包含序列5’-PPPAGC-3’(SEQ ID NO：115)或5’-PPPAGG-3’(SEQ IDNO:155)，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶。在一些实施方案中，结合GDF11的适体包含序列5’-CPPGMPPPNxPPPAGC-3’(SEQ ID NO:116)或5’-CPPGMPPPNxPPPAGG-3’(SEQ ID NO:160)，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶，其中x是2、3、4或5，其中M是C或A，并且其中每个N独立地且在每次出现时选自A、C、G、T和U。在一些实施方案中，x是3或4。在一些实施方案中，Nx包含序列5’-AAG-3’或5’-ACG-3’或5’-AGG-3’。
在一些实施方案中，结合GDF11的适体包含序列5’-NNCPPGRPPPAMGPPPAGS-3’(SEQID NO:141)，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶，R是A或G；每个N独立地且每次出现时是A、G或C；M是A或C；并且S是G或C。
在一些实施方案中，每个P独立地且在每次出现时选自：
5-(N-苄基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BndU)，
5-(N-苄基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-苄基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-苯乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(PEdU)，
5-(N-苯硫基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(ThdU)，
5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(iBudU)，
5-(N-酪氨酰基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(TyrdU)，
5-(N-3,4-亚甲基二氧基苄基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(MBndU)，
5-(N-4-氟苄基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(FBndU)，
5-(N-3-苯基丙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(PPdU)，
5-(N-咪唑基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(ImdU)，
5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(TrpdU)，
5-(N-R-苏氨酰基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(ThrdU)，
5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-[1-(3-三甲基铵)丙基]甲酰胺)-2'-脱氧尿苷氯化物，
5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)，
5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-[1-(2,3-二羟丙基)]甲酰胺)-2'-脱氧尿苷)，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NapdU)，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NEdU)，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NEdU)，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BFdU)，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BTdU)，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，以及
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2’-氟尿苷。
在一些实施方案中，每个P独立地且在每次出现时选自：
5-(N-1-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)，
5-(N-1-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-1-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NapdU)，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NEdU)，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NEdU)，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BFdU)，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BTdU)，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，以及
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2’-氟尿苷。
在一些实施方案中，至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个P各自独立地选自5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)、5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷和5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷。
在一些实施方案中，所述适体包含选自SEQ ID NO:12、13、15至109以及117至140的序列。在一些实施方案中，所述适体包含选自SEQ ID NO:12、15、26、105至109以及142至150的序列。
在本文所述的任何实施方案中，所述适体可由18至200个核苷酸、或18至150个核苷酸、或18至100个核苷酸、或18至75个核苷酸、或18至50个核苷酸、或20至150个核苷酸、或20至100个核苷酸、或20至75个核苷酸、或20至50个核苷酸组成，其中每个核苷酸可独立地是修饰的或未修饰的核苷酸。在本文所述的任何实施方案中，所述适体可包含可检测的标记。
在一些实施方案中，GDF11是人GDF11，并且GDF8是人GDF8。在一些实施方案中，GDF11是包含SEQ ID NO:118的序列的成熟人GDF11，并且GDF8是包含SEQ ID NO:119的序列的成熟人GDF8。
在一些实施方案中，提供一种检测样品中的GDF11的方法，所述方法包括使来自所述样品的蛋白质与本文所述的适体接触。在一些实施方案中，所述适体以比对GDF11的亲和力弱至少10倍的亲和力结合GDF8。在一些实施方案中，所述适体不结合GDF8。
在一些实施方案中，提供一种确定样品是否包含GDF11的方法，所述方法包括使来自所述样品的蛋白质与本文所述的适体接触。在一些实施方案中，样品包含GDF8。在一些实施方案中，所述方法包括使所述样品与所述适体在严格条件下接触。在一些实施方案中，严格条件包括聚阴离子抑制剂。在一些实施方案中，聚阴离子抑制剂选自硫酸葡聚糖、肝素、Z-嵌段、聚-dI/dC、超声处理或剪接的鲑鱼精子DNA、小牛胸腺DNA和dNTP。
在一些实施方案中，样品是来自人的样品。在一些实施方案中，样品选自血液、血清、血浆、唾液、尿液和组织样品。在一些实施方案中，组织样品选自心肌组织、骨骼肌组织、胰腺组织、软骨组织和神经组织。
在一些实施方案中，蛋白质已经与样品的至少一种其它组分分离。在一些实施方案中，蛋白质未与样品的其它组分分离。
在一些实施方案中，提供包含本文所述的适体和来自样品的蛋白质的组合物。在一些实施方案中，样品包含GDF8。在一些实施方案中，所述组合物包含聚阴离子抑制剂。在一些实施方案中，聚阴离子抑制剂选自硫酸葡聚糖、肝素、Z-嵌段、聚-dI/dC、超声处理或剪接的鲑鱼精子DNA、小牛胸腺DNA和dNTP。在一些实施方案中，样品是来自人的样品。在一些实施方案中，样品选自血液、血清、血浆、唾液、尿液和组织样品。在一些实施方案中，组织样品选自心肌组织、骨骼肌组织、胰腺组织、软骨组织和神经组织。在一些实施方案中，蛋白质已经与样品的至少一种其它组分分离。在一些实施方案中，蛋白质未与样品的其它组分分离。
另一方面，所述适体的长度是至少25个核苷酸。另一方面，所述适体的长度是至少30个核苷酸。另一方面，所述适体的长度是至少40个核苷酸。另一方面，所述适体的长度是约40至约100个核苷酸(或40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、87、88、89、90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100个核苷酸长度)。
本公开还提供一种包含适体和GDF11蛋白的组合物，其中所述适体和所述GDF11蛋白通过非共价相互作用结合。
本发明的前述和其它目的、特征和优点将从以下详细描述变得更加显而易见，所述详细描述参考附图进行。
附图简述
图1示出在存在或不存在聚阴离子抑制剂(Z-嵌段)的情况下，适体克隆12060-28_3对人GDF11蛋白和人肌肉生长抑制素(GDF8)蛋白的结合亲和力的比较。x轴示出对应蛋白质的浓度，并且y轴示出与蛋白质结合的适体的百分比(1.0是100％)。
图2示出在存在或不存在聚阴离子抑制剂(Z-嵌段)的情况下，适体12058-6_3对人GDF11蛋白和人肌肉生长抑制素(GDF8)蛋白的结合亲和力的比较。x轴示出对应蛋白质的浓度，并且y轴示出与蛋白质结合的适体克隆的百分比(1.0是100％)。
图3示出适体克隆12060-28_3(50-聚体序列)的截短分析和每条序列对GDF11的结合亲和力。
详述
I.术语和方法
尽管将结合某些代表性实施方案描述本发明，但将应了解，本发明由权利要求书限定并且不限于那些实施方案。
本领域的技术人员将认识到，与本文所描述的方法和材料类似或等同的许多方法和材料可用于实践本发明。本发明决不限于所述的方法和材料。
除非另外定义，否则本文使用的技术术语和科学术语具有由本发明所属领域中的普通技术人员所通常理解的含义。分子生物学中常见术语的定义可见于Benjamin Lewin,Genes V,Oxford University Press出版,1994(ISBN 0-19-854287-9)；Kendrew等人(编辑),The Encyclopedia of Molecular Biology,Blackwell Science Ltd.出版,1994(ISBN 0-632-02182-9)；以及Robert A.Meyers(编辑),Molecular Biology andBiotechnology:a Comprehensive Desk Reference,VCH Publishers,Inc.出版,1995(ISBN 1-56081-569-8)。尽管与本文描述的那些方法、装置和材料类似或等同的任何方法、装置和材料均可用于实践本发明，但是本文描述了某些方法、装置和材料。
本文所引用的所有出版物、公布的专利文献以及专利申请特此以引用的方式并入，其引用程度就如同具体地并且个别地指示每一单个出版物、公布的专利文献或专利申请是以引用的方式并入。
如本申请(包括所附权利要求书)中所使用，除非上下文另外明确指示，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”包括复数，并且可与“至少一个”和“一个或多个”互换使用。因此，提及“适体”包括适体的混合物，提及“探针”包括探针的混合物等。
如本文所用，术语“包含(comprises)”、“包含(comprising)”、“包括(includes)”、“包括(including)”、“含有(contains)”、“含有(containing)”及其任何变化形式意图涵盖非排他性包括，以使得包含、包括或含有要素或要素列表的过程、方法、产品方法或物质的组合物可包括未明确列出的其它要素。
应进一步理解，针对核酸或多肽给出的所有碱基大小或氨基酸大小以及所有分子量或分子质量值均为近似值，并且提供用于描述。
为了便于审查本公开的各种实施方案，提供对特定术语的以下解释：
适体：如本文所用，“适体”是指对靶分子具有特异性结合亲和力的核酸。应认识到亲和力相互作用是程度的问题；然而，在本上下文中，适体对其靶标的“特异性结合亲和力”是指适体通常以比其结合测试样品中的其它组分高得多的亲和力程度结合其靶标。“适体”是具有特定核苷酸序列的一种类型或种类的核酸分子的一组拷贝。适体可包括任何合适数量的核苷酸，包括任何数量的化学修饰的核苷酸。“适体”是指多于一组这样的分子。不同的适体可具有相同或不同数目的核苷酸。适体可以是DNA或RNA或化学修饰的核酸，并且可以是单链的、双链的或含有双链区，并且可包括更高级的结构。适体也可以是光适体，其中光反应性或化学反应性官能团包括在适体中，以允许其共价连接至其相应靶标。本文公开的任何适体方法可包括使用两个或更多个特异性结合同一靶分子的适体。如下文所进一步描述，适体可包括标签。如果适体包括标签，则所述适体的所有拷贝不需要具有相同标签。此外，如果不同的适体各自包括标签，则这些不同的适体可具有相同的标签或不同的标签。
适体可使用任何已知的方法来鉴定，所述方法包括SELEX方法。一旦鉴别，就可根据任何已知的方法来制备或合成适体，所述方法包括化学合成方法和酶合成方法。
GDF11适体：如本文所用的GDF11适体是指能够结合成熟GDF11蛋白的适体。非限制性示例性成熟人GDF11蛋白在以下示出(UniProtKB/Swiss-Prot：O95390.1的氨基酸299至407)：
L GLDCDEHSSE SRCCRYPLTV DFEAFGWDWI IAPKRYKA NY CSGQCEYMFM QKYPHTHLVQQANPRGSAGP CCTPTKMSP I NMLYFNDKQQ IIYGKIPGMV VDRCGCS(SEQ ID NO:118).
在一些实施方案中，GDF11适体以比对GDF11的亲和力弱至少10倍的亲和力结合GDF8。在一些实施方案中，GDF11适体不结合GDF8。非限制性示例性成熟人GDF8蛋白在以下示出(UniProtKB/Swiss-Prot：O14793.1的氨基酸267至375)：
FGL DCDEHSTESR CCRYPLTVDF EAFGWDWIIA PKRYKA NYCS GECEFVFLQKYPHTHLVHQA NPRGSAGPCC TPTKMSPI NM LYFNGKEQII YGKIPAMVVD RCGCS(SEQ ID NO:119).
抑制：如本文所用的术语“抑制”意指防止或降低肽或多肽的表达至所述肽或多肽不再具有可测量的活性或生物活性的程度；或降低肽或多肽的稳定性和/或降低或防止肽或多肽的活性至所述肽或多肽不再具有可测量的活性或生物活性的程度。如本文所述，可被抑制的蛋白质是GDF11。
核酸：如本文所用，“核酸”、“寡核苷酸”和“多核苷酸”可互换使用来指核苷酸的聚合物，并且包括DNA、RNA、DNA/RNA杂合体和这些种类的核酸、寡核苷酸和多核苷酸的修饰，其中包括各种实体或部分与任何位置的核苷酸单元的连接。术语“多核苷酸”、“寡核苷酸”和“核酸”包括双链或单链分子以及三螺旋分子。核酸、寡核苷酸和多核苷酸是比术语适体更广义的术语，且因此术语核酸、寡核苷酸和多核苷酸包括为适体的核苷酸的聚合物，但术语核酸、寡核苷酸和多核苷酸不限于适体。
修饰的：如本文所用，当用于提及寡核苷酸时，术语“修饰(modify)”、“修饰的(modified)”、“修饰(modification)”及其任何变化形式意指寡核苷酸的四种组成性核苷酸碱基(即A、G、T/U和C)中的至少一种是天然存在的核苷酸的类似物或酯。在一些实施方案中，修饰的核苷酸赋予寡核苷酸核酸酶抗性。在一些实施方案中，修饰的核苷酸导致适体与蛋白质靶标的主要疏水相互作用，从而产生高结合效率和稳定的共晶体复合物。在C-5位置具有取代的嘧啶是修饰的核苷酸的实例。修饰可包括主链修饰、甲基化、不寻常的碱基配对组合，如异碱基异胞苷和异胍等。修饰还可包括3'和5'修饰，如加帽。其它修饰可包括：用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸，核苷酸间修饰，例如像，具有不带电荷的键(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺酯(phosphoamidate)、氨基甲酸酯等)的那些和具有带电荷的键(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些、具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些、含有烷化剂(alkylator)的那些以及具有修饰的键(例如，α端基异构核酸等)的那些。此外，任何通常存在于核苷酸的糖上的任何羟基均可被膦酸酯基团或磷酸酯基团置换；被标准的保护基团保护；或被活化以制备与另外核苷酸或与固体载体的另外键。5′和3′末端OH基团可被磷酸化或被胺、约1至约20个碳原子的有机加帽基团部分、在一些实施方案中约10至约80kDa范围内的聚乙二醇(PEG)聚合物、在一些实施方案中约20至约60kDa范围内的PEG聚合物或其它亲水性或疏水性生物或合成聚合物取代。在一个实施方案中，修饰是嘧啶的C-5位置。这些修饰可通过直接在C-5位置的酰胺键或通过其它类型的键产生。
多核苷酸还可包含本领域众所周知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括2'-O-甲基-、2'-O-烯丙基、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、α-端基异构糖、差向异构糖(如阿拉伯糖、木糖或来苏糖)、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、无环类似物以及无碱基核苷类似物(如甲基核苷)。如上所述，一个或多个磷酸二酯键可被替代连接基团置换。这些替代连接基团包括其中磷酸酯被P(O)S(“硫代酸酯”)、P(S)S(“二硫代酸酯”)、(O)NR2(“酰胺化物”)、P(O)R、P(O)OR'、CO或CH2(“甲缩醛”)置换的实施方案，其中每个R或R'独立地是H、或任选地含有醚(-O-)键的取代的或未取代的烷基(1-20个C)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基(araldyl)。多核苷酸中并非所有键都需要相同。糖、嘌呤和嘧啶的类似形式的取代在设计最终产物中可能是有利的，例如，替代主链结构如聚酰胺主链也可在设计最终产物中是有利的。
核酸酶：如本文所用，术语“核酸酶”是指能够裂解寡核苷酸的核苷酸亚基之间的磷酸二酯键的酶。如本文所用，术语“核酸内切酶”是指在寡核苷酸内部的位点处裂解一个或多个磷酸二酯键的酶。如本文所用，术语“核酸外切酶”是指裂解连接寡核苷酸的末端核苷酸的一个或多个磷酸二酯键的酶。生物流体通常含有核酸内切酶和核酸外切酶的混合物。
如本文所用，术语“核酸酶抗性的”和“核酸酶抗性”是指寡核苷酸充当核酸内切酶或核酸外切酶的底物的能力降低，使得当与这种酶接触时，所述寡核苷酸与由未修饰的核苷酸组成的寡核苷酸相比不降解或降解更慢。
C-5修饰的嘧啶：如本文所用，术语“C-5修饰的嘧啶”是指在C-5位置具有修饰的嘧啶，包括但不限于本文所示的那些部分。C-5修饰的嘧啶的实例包括在美国专利No.5,719,273和5,945,527中描述的那些。C-5修饰的实例包括用独立地选自以下的取代基取代C-5位置的脱氧尿苷：苄基甲酰胺(或苄基氨基羰基)(Bn)、萘基甲基甲酰胺(或萘基甲基氨基羰基)(Nap)、色氨基甲酰胺(或色氨基羰基)(Trp)、苯乙基甲酰胺(或苯乙基氨基羰基)(Pe)、苯硫基甲基甲酰胺(或苯硫基甲基氨基羰基)(Th)和异丁基甲酰胺(或异丁基氨基羰基)(iBu)，如下文立即所述。
C-5修饰的嘧啶的化学修饰也可单独地或以任何组合与2'-位置糖修饰、在环外胺处的修饰和4-硫代尿苷的取代等组合。
代表性C-5修饰的嘧啶包括：5-(N-苄基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BndU)、5-(N-苄基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷、5-(N-苄基甲酰胺)2'-氟尿苷、5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(iBudU)、5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷、5-(N-苯乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(PedU)、5-(N-苯硫基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(ThdU)、5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-氟尿苷、5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(TrpdU)、5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷、5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-氟尿苷、5-(N-[1-(3-三甲基铵)丙基]甲酰胺)-2'-脱氧尿苷氯化物、5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)、5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷、5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷或5-(N-[1-(2,3-二羟丙基)]甲酰胺)-2'-脱氧尿苷)。
核苷酸可在寡核苷酸合成之前或之后进行修饰。寡核苷酸中的核苷酸的序列可被一种或多种非核苷酸组分中断。修饰的寡核苷酸可在聚合后进一步修饰，例如像通过与任何合适的标记组分缀合。
如本文所用，当提及核酸的修饰时，术语“至少一个嘧啶”是指核酸中的一个、几个或所有嘧啶，从而表明核酸中的C、T或U的任何一者或所有的任何或所有出现都可被修饰或不被修饰。
调节：如本文所用的术语调节意指通过相对于参考表达水平增加或降低肽、蛋白质或多肽的表达水平来改变所述肽、蛋白质或多肽的表达水平，和/或通过相对于参考稳定性和/或活性水平增加或降低肽、蛋白质或多肽的稳定性和/或活性水平来改变所述肽、蛋白质或多肽的稳定性和/或活性。
药学上可接受的：如本文所用，药学上可接受的意指由联邦政府或州政府的监管机构批准的或在美国药典或其它普遍认可的药典中列出的，用于在动物并且更具体地在人体内使用。
药学上可接受的盐：如本文所用，药学上可接受的盐或化合物(例如适体)的盐是指含有离子键并且通常通过使所述化合物与适于施用至个体的酸或碱反应而产生的产物。药学上可接受的盐可包括但不限于酸加成盐，包括盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、烷基磺酸盐、芳基磺酸盐、芳基烷基磺酸盐、乙酸盐、苯甲酸盐、柠檬酸盐、马来酸盐、富马酸盐、琥珀酸盐、乳酸盐和酒石酸盐；碱金属阳离子如Li、Na、K，碱土金属盐如Mg或Ca，或有机胺盐。
药物组合物：如本文所用，药物组合物是指包含呈适合于施用至个体的形式的GDF11适体的制剂。药物组合物通常被配制成与其预期施用途径相容。施用途径的实例包括但不限于口服和胃肠外，例如静脉内、皮内、皮下、吸入、局部、经皮、经粘膜和直肠施用。
SELEX：术语“SELEX”和“SELEX方法”在本文中可互换使用来通常指(1)选择以期望的方式与靶分子相互作用，例如以高亲和力与蛋白质结合的适体，与(2)扩增那些选择的核酸的组合。SELEX方法可用于鉴别对特定靶标或生物标志物具有高亲和力的适体。
序列同一性：在两个或更多个核酸序列的背景下，如本文所用的序列同一性是考虑了缺口的数目以及在这两个或更多条序列的最佳比对中需要引入的每个缺口的长度，由所述序列共有的相同核苷酸位置的数目的函数(即，同一性％＝相同位置的数目/位置的总数目×100)。序列的比较和两个或更多条序列之间的同一性百分比的确定可以使用数学算法(如BLAST和空位BLAST程序)以其默认参数来完成(例如，Altschul等人,J.Mol.Biol.215:403,1990；还参见www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST的BLASTN)。对于序列比较，通常一条序列充当参考序列，测试序列与其进行比较。当使用序列比较算法时，把测试序列和参考序列输入计算机中，必要时指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。然后序列比较算法基于指定的程序参数计算一个或多个测试序列相对于参考序列的序列同一性百分比。可通过以下方法来进行序列的最佳比对以供比较，例如Smith和Waterman,Adv.Appl.Math.,2:482,1981的局部同源性算法；Needleman和Wunsch,J.Mol.Biol.,48:443,1970的同源性比对算法；Pearson和Lipman,Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA 85:2444,1988的相似性搜索法；这些算法的计算机实施(威斯康辛遗传学软件包(Wisconsin GeneticsSoftware Package)中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA，Genetics Computer Group,575Science Dr.,Madison,Wis.)；或目视检查(一般参见Ausubel,F.M.等,CurrentProtocols in Molecular Biology,由Greene Publishing Assoc.and Wiley-Interscience出版(1987))。如本文所用，当描述核酸(如GDF11适体)的同一性百分比，所述核酸的序列与参考核苷酸序列至少(例如)约95％同一时，旨在除所述核酸序列可在每100个参考核酸序列的核苷酸中包括至多五个点突变外，所述核酸序列与参考序列同一。换句话说，为获得所需的核酸序列，即与参考核酸序列至少约95％同一的核酸序列，参考序列中的至多5％核苷酸可缺失或被另一核苷酸取代，或参考序列中总核苷酸数目的至多5％的一定数目的核苷酸可插入参考序列中(在本文称为插入)。参考序列的用于产生所需序列的这些突变可出现在参考核苷酸序列的5'或3'末端位置或介于那些末端位置之间的任何处，并且是单独地散置在参考序列中的核苷酸间或在参考序列内的一个或多个连续群组中。
SOMAmer：如本文所用的术语SOMAmer是指具有改进的解离速率特征的适体。SOMAmer可替代地被称为缓慢解离速率修饰的适体，并且可通过在题为“Method forGenerating Aptamers with Improved Off-Rates”的美国公布No.20090004667中描述的改进的SELEX方法来选择，所述美国公布以引用的方式整体并入。在一些实施方案中，缓慢解离速率适体(包括含有至少一个具有疏水修饰的核苷酸的适体)具有≥2分钟、≥4分钟、≥5分钟、≥8分钟、≥10分钟、≥15分钟、≥30分钟、≥60分钟、≥90分钟、≥120分钟、≥150分钟、≥180分钟、≥210分钟或≥240分钟的解离速率(t1/2)。
靶分子：“靶标”、“靶分子”和“分析物”在本文中可互换使用来指可存在于样品中的任何目标分子。所述术语包括特定分子的任何微小变化，如在蛋白质的情况下，例如氨基酸序列、二硫键形成、糖基化、脂化、乙酰化、磷酸化或任何其它操作或修饰的微小变化，如与标记组分缀合，其基本上不改变分子的身份。“靶分子”、“靶标”或“分析物”是指一种类型或种类的分子或多分子结构的一组拷贝。“靶分子”、“靶标”和“分析物”是指多于一种类型或种类的分子或多分子结构。示例性靶分子包括蛋白质、多肽、核酸、碳水化合物、脂质、多糖、糖蛋白、激素、受体、抗原、抗体、亲和体、抗体模拟物、病毒、病原体、毒性物质、底物、代谢物、转变态类似物、辅因子、抑制剂、药物、染料、营养物、生长因子、细胞、组织和任何前述的任何片段或部分。在一些实施方案中，靶分子是蛋白质，在这种情况下，靶分子可被称为“靶蛋白”。
聚阴离子抑制剂：聚阴离子抑制剂是包含或模拟核酸分子的聚阴离子磷酸主链的抑制剂分子。在一些实施方案中，聚阴离子抑制剂包括在与适体的结合反应中，以增加结合条件的严格性。非限制性示例性聚阴离子抑制剂包括硫酸葡聚糖、肝素、Z-嵌段、聚-dI/dC、超声处理或剪接的鲑鱼精子DNA、小牛胸腺DNA、dNTP等。
Z-嵌段：如本文所用的Z-嵌段是序列5′-(AC-BndU-BndU)7-AC-3′的单链寡核苷酸，其中BndU表示苄基取代的脱氧尿苷残基。可使用常规的亚磷酰胺化学合成Z-嵌段。
本文提供的范围应理解为所述范围内的所有值的速记法。例如，1至50的范围应理解为包括来自以下的任何数字、数字组合或子范围：1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50(以及其分数，除非上下文另外清楚地规定)。除非另外指出，否则任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括列举的范围内的任何整数值，并且当适当时包括其分数(如整数的十分之一和百分之一)。因此，除非另外指出，否则本文列举的涉及任何物理特征(如聚合物亚基、大小或厚度)的任何数字范围应该理解为包括列举的范围内的任何整数。如本文所用，除非另外指出，否则“大约”或“基本上由......组成”意指所指示的范围、值或结构的±20％。如本文所用，术语“包括”和“包含”是开放式的并且同义使用。应理解，如本文所使用的术语“一个/种(a/an)”是指所列举的组分的“一种或多种”。使用替代(例如，“或”)应理解为意指多个替代中的任一、两者或其任何组合。
II.综述
A.生长分化因子11(GDF11)和肌肉生长抑制素(GDF8)蛋白
GDF11和肌肉生长抑制素的天然成熟形式是同源二聚体并且通过序列比对约90％同一，109个中有98个匹配的氨基酸残基。参见GDF11(蛋白质ID 095390；氨基酸1至407；SEQID NO:4)和肌肉生长抑制素(蛋白质ID 014793；氨基酸1至375；SEQ ID NO:5)的氨基酸序列比对，成熟形式由灰色条指示。GDF11和肌肉生长抑制素前肽原的氨基酸序列的比对在以下示出。成熟的蛋白质部分用灰色条突出显示。
Figure BDA0001283973730000201
认为GDF11和GDF8共享共同的祖先和共同的调控机制，但是在它们的组织特异性(分别主要是心脏和肌肉)方面已经偏离。
成熟GDF11在人与小鼠之间是100％同一的，在大鼠中是99％同一的。人、小鼠和大鼠GDF11蛋白(成熟)的氨基酸序列比对在以下示出。人GDF11蛋白ID是O95390；示例性人成熟GDF11在以下示出；SEQ ID NO:6)。小鼠GDF11蛋白ID是Q9Z1W4；示例性小鼠成熟GDF8在以下示出；SEQ ID NO:7)。大鼠GDF11蛋白ID是Q9Z217；示例性大鼠成熟GDF8在以下示出；SEQID NO:8)。
Figure BDA0001283973730000211
肌肉生长抑制素(GDF8)在人、小鼠和大鼠之间是100％同一的。人、小鼠和大鼠肌肉生长抑制素蛋白(成熟)的氨基酸序列比对在以下示出。人肌肉生长抑制素(GDF8)蛋白ID是O14793；示例性人成熟GDF8在以下示出；SEQ ID NO:9)。小鼠GDF8蛋白ID是O08689；示例性小鼠成熟GDF8在以下示出；SEQ ID NO:10)。大鼠GDF11蛋白ID是O35312；示例性大鼠成熟GDF8在以下示出；SEQ ID NO:11)。
Figure BDA0001283973730000212
B.SELEX
SELEX通常包括制备核酸的候选混合物，将所述候选混合物与所需的靶分子结合以形成亲和力复合物，使所述亲和力复合物与未结合的候选核酸分离，从所述亲和力复合物中分离且隔离核酸，纯化所述核酸，并且鉴别特异性适体序列。所述方法可包括多轮，以进一步改善所选择的适体的亲和力。所述方法可包括在所述方法的一个或多个点的扩增步骤。参见，例如，题为“Nucleic Acid Ligands”的美国专利No.5,475,096。SELEX方法可用于产生共价结合其靶标的适体以及非共价结合其靶标的适体。参见，例如，题为“SystematicEvolution of Nucleic Acid Ligands by Exponential Enrichment:Chemi-SELEX.”的美国专利No.5,705,337。
SELEX方法可用于鉴别含有修饰的核苷酸的高亲和力适体，所述修饰的核苷酸赋予适体改善的特性，例如像改善的体内稳定性或改善的递送特性。此类修饰的实例包括在核糖和/或磷酸和/或碱基位置处的化学取代。含有修饰的核苷酸的SELEX方法鉴别的适体描述于题为“High Affinity Nucleic Acid Ligands Containing ModifiedNucleotides”的美国专利No.5,660,985中，其描述了含有在嘧啶的5'-位置和2'-位置处化学修饰的核苷酸衍生物的寡核苷酸。美国专利No.5,580,737(参见上文)描述了含有用2′-氨基(2′—NH2)、2′-氟(2′-F)和/或2′-O-甲基(2′-OMe)修饰的一个或多个核苷酸的高度特异性适体。还参见题为“SELEX and PHOTOSELEX”的美国专利申请公布20090098549，其描述了具有扩展的物理和化学性质的核酸文库及其在SELEX和photoSELEX中的用途。
SELEX也可用于鉴别具有合乎需要的解离速率特征的适体。参见题为“Method forGenerating Aptamers with Improved Off-Rates”的美国专利申请公布20090004667，其描述了用于产生可结合靶分子的适体的改进的SELEX方法。如上所述，这些缓慢解离速率适体被称为“SOMAmer”。描述了用于产生适体或SOMAmer和光适体或具有从它们各自的靶分子以更慢速率解离的SOMAmer的方法。所述方法涉及使候选混合物与靶分子接触，使核酸-靶标复合物的形成发生，并且进行缓慢解离速率富集过程，其中具有快速解离速率的核酸-靶标复合物将解离并且不重新形成，而具有缓慢解离速率的复合物将保持完整。另外，所述方法包括在候选核酸混合物的产生中使用修饰的核苷酸以产生具有提高的解离速率性能的适体或SOMAmer。
这种测定的变化使用包含光反应性官能团的适体，所述官能团使得适体能够共价结合或“光交联”其靶分子。参见例如，题为“Nucleic Acid Ligand Diagnostic Biochip”的美国专利No.6,544,776。这些光反应性适体也称为光适体。参见例如，美国专利No.5,763,177、美国专利No.6,001,577和美国专利No.6,291,184，其各自题为“SystematicEvolution of Nucleic Acid Ligands by Exponential Enrichment:Photoselection ofNucleic Acid Ligands and Solution SELEX”；还参见，例如，题为“Photoselection ofNucleic Acid Ligands”的美国专利No.6,458,539。在微阵列与样品接触并且光适体已经有机会与其靶分子结合之后，光适体被光活化，并且洗涤固体载体以除去任何非特异性结合的分子。可使用苛刻洗涤条件，因为由于由光适体上的光活化官能团产生的共价键，通常不除去与光适体结合的靶分子。
在这两种测定形式中，适体或SOMAmer在与样品接触之前固定在固体载体上。然而，在某些情况下，在与样品接触之前固定适体或SOMAmer可能不提供最佳测定。例如，适体或SOMAmer的预固定可能导致适体或SOMAmer与固体载体表面上的靶分子的低效混合，可能导致长反应时间，并且因此延长孵育期以允许适体或SOMAmer与其靶分子的有效结合。此外，当在测定中使用光适体或光SOMAmer时并且取决于用作固体载体的材料，所述固体载体可能倾向于散射或吸收用于实现光适体或光SOMAmer与其靶分子之间的共价键形成的光。此外，取决于所使用的方法，与其适体或光SOMAmer结合的靶分子的检测可能经受不精确，因为固体载体的表面也可能暴露于任何所使用的标记试剂并受其影响。最后，适体或SOMAmer在固体载体上的固定通常涉及在使适体或SOMAmer暴露于样品之前的适体或SOMAmer制备步骤(即固定)，并且此制备步骤可影响适体或SOMAmer的活性或功能性。
还描述了SOMAmer测定，所述测定允许SOMAmer在溶液中捕获其靶标，且然后采用被设计为在检测前除去SOMAmer-靶标混合物的特定组分的分离步骤(参见题为“Multiplexed Analyses of Test Samples”的美国专利申请公布20090042206)。所描述的SOMAmer测定方法能够通过检测和定量核酸(即SOMAmer)来检测和定量测试样品中的非核酸靶标(例如，蛋白质靶标)。所描述的方法产生用于检测和定量非核酸靶标的核酸替代物(即，SOMAmer)，因此允许广泛多种核酸技术(包括扩增)应用于更广范围的所需靶标，包括蛋白质靶标。
其中靶标是肽的SELEX方法的实施方案描述于题为“Modified SELEX ProcessesWithout Purified Protein”的美国专利No.6,376,190中。在本案中，靶标是GDF11蛋白。
C.化学修饰的适体
适体可包含改善其性质和特性的修饰的核苷酸。此类改善的非限制性实例包括体内稳定性、针对降解的稳定性、对其靶标的结合亲和力和/或改善的递送特性。
此类修饰的实例包括在核苷酸的核糖和/或磷酸和/或碱基位置处的化学取代。含有修饰的核苷酸的SELEX方法鉴别的适体描述于题为“High Affinity Nucleic AcidLigands Containing Modified Nucleo tides”的美国专利No.5,660,985中，其描述了含有在嘧啶的5'-和2'-位置处化学修饰的核苷酸衍生物的寡核苷酸。美国专利No.5,580,737(参见上文)描述了含有一个或多个用2′-氨基(2′—NH2)、2′-氟(2′-F)和/或2′-O-甲基(2′-OMe)修饰的核苷酸的高度特异性适体。还参见题为“SELEX and PHOTOSELEX”的美国专利申请公布No.20090098549，其描述了具有扩展的物理和化学性质的核酸文库及其在SELEX和photoSELEX中的用途。
C-5修饰的具体实例包括在C-5位置用独立地选自以下的取代基取代脱氧尿苷：苄基甲酰胺(或苄基氨基羰基)(Bn)、萘基甲基甲酰胺(或萘基甲基氨基羰基)(Nap)、色氨基甲酰胺(或色氨基羰基)(Trp)和异丁基甲酰胺(或异丁基氨基羰基)(iBu)，如在下文立即说明。
Figure BDA0001283973730000251
C-5修饰的嘧啶的化学修饰也可单独地或以任何组合与2'-位置糖修饰、在环外胺处的修饰和4-硫代尿苷的取代等组合。
代表性C-5修饰的嘧啶包括：5-(N-苄基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BndU)、5-(N-苄基甲酰胺)-2'-0-甲基尿苷、5-(N-苄基甲酰胺)-2'-氟尿苷、5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(iBudU)、5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-0-甲基尿苷、5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-氟尿苷、5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(TrpdU)、5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-0-甲基尿苷、5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-氟尿苷、5-(N-[1-(3-三甲基铵)丙基]甲酰胺)-2'-脱氧尿苷氯化物、5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)、5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-0-甲基尿苷、5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷或5-(N-[1-(2,3-二羟丙基)]甲酰胺)-2'-脱氧尿苷)。
如果存在，可在多核苷酸的组装之前或之后给予对核苷酸结构的修饰。核苷酸的序列可被非核苷酸组分间断。多核苷酸可在聚合之后进行进一步修饰，如通过与标记组分缀合。
可并入本公开的核酸序列中的修饰的核苷酸(例如，C-5修饰的嘧啶)的另外非限制性实例包括以下：
Figure BDA0001283973730000261
碱基＝尿苷(U)或胞苷(C)(连接是至5-位置)
K＝R’基团加(CH2)n连接基团，其中n＝0-3
R’如下定义：
Figure BDA0001283973730000271
并且，R”、R”'和R””定义如下：
其中
R””选自由以下组成的组：支链或直链低级烷基(C1-C20)；卤素(F、Cl、Br、I)；腈(CN)；硼酸(BO2H2)；羧酸(COOH)；羧酸酯(COOR")；伯酰胺(CONH2)；仲酰胺(CONHR”)；叔酰胺(CONR”R”')；磺酰胺(SO2NH2)；N-烷基磺酰胺(SONHR”)。
其中
R”、R”'独立地选自由以下组成的组：支链或直链低级烷基(C1-C2))；苯基(C6H5)；R””取代的苯基环(R””C6H4)；其中R””如上定义；羧酸(COOH)；羧酸酯(COOR””')；其中R””'是支链或直链低级烷基(C1-C20)；以及环烷基；其中R”＝R”'＝(CH2)n；其中n＝2-10。
其它C-5修饰的嘧啶核苷酸包括以下：
Figure BDA0001283973730000281
在一些实施方案中，修饰的核苷酸赋予适体核酸酶抗性。在C-5位置具有取代的嘧啶是修饰的核苷酸的实例。修饰可包括主链修饰、甲基化、不寻常的碱基配对组合，如异碱基异胞苷和异胍等。修饰还可包括3'和5'修饰，如加帽。其它修饰可包括：用类似物取代一个或多个天然存在的核苷酸，核苷酸间修饰，例如像，具有不带电荷的键(例如，膦酸甲酯、磷酸三酯、磷酰胺酯、氨基甲酸酯等)的那些和具有带电荷的键(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些、具有嵌入剂(例如，吖啶、补骨脂素等)的那些、含有螯合剂(例如，金属、放射性金属、硼、氧化金属等)的那些、含有烷化剂的那些以及具有修饰的键(例如，α端基异构核酸等)的那些。此外，任何通常存在于核苷酸的糖上的任何羟基均可被膦酸酯基团或磷酸酯基团置换；被标准的保护基团保护；或被活化以制备与另外核苷酸或与固体载体的另外键。5'和3'末端OH基团可被磷酸化或被胺、约1至约20个碳原子的有机加帽基团部分、在一个实施方案中约10至约80kDa范围内的聚乙二醇(PEG)聚合物、在另一个实施方案中约20至约60kDa范围内的PEG聚合物或其它亲水性或疏水性生物或合成聚合物取代。在一个实施方案中，修饰是嘧啶的C-5位置。这些修饰可通过直接在C-5位置的酰胺键或通过其它类型的键产生。
适体还可包含本领域众所周知的核糖或脱氧核糖的类似形式，包括2'-0-甲基-、2'-0-烯丙基、2'-氟-或2'-叠氮基-核糖、碳环糖类似物、a-端基异构糖、差向异构糖(如阿拉伯糖、木糖或来苏糖)、吡喃糖、呋喃糖、景天庚酮糖、无环类似物以及无碱基核苷类似物(如甲基核苷)。如上所述，一个或多个磷酸二酯键可被替代连接基团置换。这些替代连接基团包括其中磷酸酯被P(0)S(“硫代酸酯”)、P(S)S(“二硫代酸酯”)、(0)NR2(“酰胺化物”)、P(0)R、P(0)OR'、CO或CH2(“甲缩醛”)置换的实施方案，其中每个R或R'独立地是H、或任选地含有醚(-0-)键的取代的或未取代的烷基(1-20个C)、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基。适体中并非所有键都需要相同。糖、嘌呤和嘧啶的类似形式的取代在设计最终产物中可能是有利的，例如，替代主链结构如聚酰胺主链也可在设计最终产物中是有利的。
可包括或并入适体中的C-5修饰的嘧啶的具体实例包括但不限于本文的结构。虽然用于结构的命名约定假设X是-H(即，DNA)，但它们还涵盖其中X可以是-OH(RNA)或本文所述的其它取代基(例如，-OCH3；-O-烯丙基；-F、-OEt；-OPr、-NH2；-叠氮基或-OCH2CH2OCH3)，R'可以是-H；-OAc；-OBz；-OCH2CH2OCH3和-OSiMe2tBu并且R"可以是-H；DMT和三磷酸根(-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)-O-P(O)(OH)2)及其盐的结构。
示例性NapdU结构(5-[N-(1-萘基甲基)甲酰胺]-2’-脱氧尿苷)：
Figure BDA0001283973730000301
示例性2NapdU结构(5-[N-(2-萘基甲基)甲酰胺]-2’-脱氧尿苷)：
Figure BDA0001283973730000302
示例性PPdU结构(5-[N-(苯基-3-丙基)甲酰胺]-2’-脱氧尿苷)：
Figure BDA0001283973730000303
示例性TrpdU结构(5-[N-(3-吲哚-2-乙基)甲酰胺]-2’-脱氧尿苷)：
Figure BDA0001283973730000304
示例性2NEdU结构5-[N-(2-萘基-2-乙基)甲酰胺]-2’-脱氧尿苷)：
Figure BDA0001283973730000311
提供以下实施例以说明某些具体特征和/或实施方案。这些实施例不应被解释为将本公开限制为所描述的特定特征或实施方案。
D.示例性GDF11适体
本文提供结合GDF11的适体。在一些实施方案中，适体以小于10nM的亲和力结合GDF11。在一些此类实施方案中，当在相同的结合条件下测量两种亲和力时，适体以比对GDF11的亲和力弱至少10倍的亲和力结合GDF8。在一些实施方案中，适体以介于0.5nM与10nM之间的亲和力结合GDF11，并且以大于50nM、或大于100nM、或大于150nM、或大于200nM、或大于300nM的亲和力结合GDF8。在一些实施方案中，适体在与适体以小于10nM的亲和力结合GDF11的相同条件下不结合GDF8。在一些实施方案中，适体以小于8nM、或小于7nM、或小于6nM、或小于5nM、或小于4nM、或小于3nM、或小于2nM、或小于1nM；或介于0.1nM与10nM之间、介于0.1nM与8nM之间、或介于0.1nM与5nM之间的亲和力结合GDF11。
在一些实施方案中，使用本文所述的测定来测定亲和力。在一些实施方案中，在聚阴离子抑制剂存在下测定亲和力。本文描述非限制性示例性聚阴离子抑制剂。在一些实施方案中，在Z嵌段存在下测定亲和力。
在一些实施方案中，结合GDF11的适体包含序列：
5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO:110)，其中：
每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶；
R是A或G：
每个W独立地且每次出现时是A、T或U；
每个M独立地且每次出现时是A或C；
S是G或C；
每个n独立地且每次出现时是0或1；以及
每个m独立地且每次出现时是0或1。
在一些实施方案中，结合GDF11的适体包含选自以下的序列：
a)5′-RWnACnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO：111)；
b)5′-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmGWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO：112)；以及
c)5′-RMCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPPASnGC-3’(SEQ ID NO：113)；
其中R、W、P、M、S、n以及m是如上文所定义。
在一些实施方案中，如果R是G，则第一W是A；或者如果R是A，则第一W是C。在一些实施方案中，至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个n是0。在一些实施方案中，每个n是0。在一些实施方案中，至少1个、至少2个、至少3个n是1。在一些实施方案中，至少1个m是1。在一些实施方案中，至少1个m是0。
在一些实施方案中，提供GDF11适体，其中所述适体包含序列5’-CPPGMPPP-3’(SEQID NO：114)，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶，并且其中M是C或A。在一些实施方案中，提供GDF11适体，其中所述适体包含序列5’-PPPAGC-3’(SEQ ID NO:115)，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶。在一些实施方案中，所述适体包含序列5’-CPPGMPPPNxPPPAGC-3’(SEQ ID NO:116)，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶，其中x是2、3、4或5，其中M是C或A，并且其中每个N独立地且在每次出现时选自A、C、G、T和U。在一些此类实施方案中，x是3或4。在一些实施方案中，Nx包含序列5’-AAG-3’或5’-ACG-3’或5’-AGG-3’。
在一些实施方案中，结合GDF11的适体包含序列5’-NNCPPGRPPPAMGPPPAGS-3’(SEQID NO:141)，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶，R是A或G；每个N独立地且每次出现时是A、G或C；M是A或C；并且S是G或C。
在本文所述的任何实施方案中，每个P独立地选自本文所述的C-5修饰的嘧啶。在一些实施方案中，每个P选自5-(N-1-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)，
5-(N-1-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-1-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NapdU)，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NEdU)，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NEdU)，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BFdU)，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BTdU)，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，以及
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2’-氟尿苷。
在一些实施方案中，至少1个、至少2个、至少3个、至少4个、至少5个或至少6个P各自独立地选自5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)、5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷和5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷。
在一些实施方案中，GDF11适体包含选自SEQ ID NO:12、13、15至109以及117至140的序列。在一些实施方案中，GDF11适体包含选自SEQ ID NO:12、15、26、105至109以及142至150的序列。
在一些实施方案中，GDF11适体可包含达约100个核苷酸、达约95个核苷酸、达约90个核苷酸、达约85个核苷酸、达约80个核苷酸、达约75个核苷酸、达约70个核苷酸、达约65个核苷酸、达约60个核苷酸、达约55个核苷酸、达约50个核苷酸、达约45个核苷酸、达约40个核苷酸、达约35个核苷酸、达约30个核苷酸、达约25个核苷酸以及达约20个核苷酸。
在本公开的另一方面，GDF11适体可与SEQ ID NO:1或2中的任一者至少约95％同一、至少约90％同一、至少约85％同一、至少约80％同一、或至少约75％同一。在另一个实施方案中，GDF11适体包含来自SEQ ID NO:1或2中的任一者的序列及其片段。在相关方面，其片段的长度是约25至49个核苷酸(或长度为约25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48或49个核苷酸)。
在本公开的另一方面，GDF11适体对GDF11具有约10nM或更小的解离常数(Kd)。在另一个示例性实施方案中，GDF11适体对GDF11蛋白具有约15nM或更小的解离常数(Kd)。在另一个示例性实施方案中，GDF11适体对GDF11蛋白具有约20nM或更小的解离常数(Kd)。在另一个示例性实施方案中，GDF11适体对GDF11蛋白具有约25nM或更小的解离常数(Kd)。在另一个示例性实施方案中，GDF11适体对GDF11蛋白具有约30nM或更小的解离常数(Kd)。在另一个示例性实施方案中，GDF11适体对GDF11蛋白具有约35nM或更小的解离常数(Kd)。在另一个示例性实施方案中，GDF11适体对GDF11蛋白具有约40nM或更小的解离常数(Kd)。在另一个示例性实施方案中，GDF11适体对GDF11蛋白具有约45nM或更小的解离常数(Kd)。在另一个示例性实施方案中，GDF11适体对GDF11蛋白具有约50nM或更小的解离常数(Kd)。在另一个示例性实施方案中，GDF11适体对GDF11蛋白具有在约3-10nM范围内(或3、4、5、6、7、8、9或10nM)的解离常数(Kd)。合适的解离常数可用结合测定来确定，所述结合测定使用多点滴定并且拟合如本文所述的方程式y＝(最大值–最小值)(蛋白质)/(Kd+蛋白质)+最小值。在其它实施方案中，GDF11适体是具有的Kd小于或等于包含SEQ ID NO:12的序列的适体的Kd的适体。
在一些实施方案中，适体包含可检测的标记。
检测GDF11的方法
在一些实施方案中，提供检测样品中的GDF11的方法，所述方法包括使所述样品与本文所述的适体接触。在一些实施方案中，提供在GDF8存在下检测或定量GDF11的方法，所述方法包括使怀疑含有GDF11和GDF8的样品与本文所述的适体接触。在一些实施方案中，提供区分样品中的GDF11与GDF8的方法，所述方法包括使所述样品与本文所述的适体接触。在一些实施方案中，所述方法包括在聚阴离子抑制剂存在下使所述样品与本文所述的GDF11适体接触。
检测和/或定量由GDF11适体结合的GDF11可使用本领域中的方法和/或本文所述的方法来完成。在一些实施方案中，GDF11适体包含可检测的标记。在一些实施方案中，GDF11适体结合至固体载体，或包含可被捕获在固体载体上的结合对的成员(例如，生物素化适体可结合至包含链霉亲和素的固体载体)。
包括GDF11适体组合物的试剂盒
本公开提供包括本文所述的任何GDF11适体的试剂盒。此类试剂盒可包括：例如，(1)至少一种GDF11适体；和(2)至少一种药学上可接受的载体，如溶剂或溶液。另外的试剂盒部件可任选地包括，例如：(1)本文鉴别的任何药学上可接受的赋形剂，如稳定剂、缓冲液等；(2)用于容纳和/或混合试剂盒组分的至少一个容器、小瓶或类似装置；以及(3)递送装置。
实施例
实施例1：具有GDF11结合特异性的适体的选择和鉴别
此实施例提供用于选择和产生结合成熟GDF11蛋白的适体的代表性方法。
选择对GDF11具有特异性的适体的先前尝试一直是具有挑战性的。使用SELEX方法选择的几种适体对GDF11和肌肉生长抑制素(GDF8)的蛋白质结合亲和力的比较在以下表1中示出。
表1.
Figure BDA0001283973730000371
如表1中所示，经选择以结合GDF11的适体通常也对肌肉生长抑制素具有亲和力。对于每种适体，对GDF11的结合亲和力与对肌生长抑制素的结合亲和力的比率也在表1中示出。所述比率从低于一(1)(即，相较于GDF11，适体对肌肉生长抑制素具有更大亲和力)至约1.6至约6.3(即，相较于肌肉生长抑制素，适体对GDF11具有更大亲和力)的比率变化。然而，这些亲和力差异不足以在蛋白质结合测定中区分GDF11和肌肉生长抑制素。因此，不能区分GDF11和GDF8的存在和/或水平。鉴于鉴别可区分GDF11与肌肉生长抑制素的GDF11适体的挑战，在SELEX方法中引入反选择策略。
使用缓慢解离速率富集方法的适体选择
使用本文所述的SELEX方法进行具有GDF11的SELEX。此外，涉及两种不同类型的反选择的方案修改被应用于选择不结合肌肉生长抑制素或对GDF11比肌肉生长抑制素具有更大亲和力的GDF11适体：被动反选择和主动反选择。
通过在选择期间将呈未标记形式的不想要的靶标(肌肉生长抑制素)添加至PCB(含有凝血酶原、酪蛋白和白蛋白的蛋白质竞争剂缓冲液)中来用所述靶标进行被动反选择，从而除去相较于肌肉生长抑制素缺乏对GDF11的优先的序列。肌肉生长抑制素与GDF11的比率在第一轮中是1:1(各自100pmol)，在第二轮中是2:1(20pmol肌肉生长抑制素和10pmol GDF11)，并且在随后轮的SELEX中随着GDF11靶标浓度降低而增加(20pmol肌肉生长抑制素和0.3pmol GDF11或约67:1)。
用固定在链霉亲和素(SA)珠粒上的生物素化的肌肉生长抑制素进行主动反选择。在每轮SELEX之前，将文库与反选择珠粒在37℃下振荡孵育10分钟。然后回收上清液并移动至用GDF11进行的选择中，从而使结合肌肉生长抑制素后面的序列停留在珠粒。第一轮使用100pmol肌肉生长抑制素来反选择1000pmol文库，每一随后轮使用20pmol肌肉生长抑制素来反选择大约20-50pmol文库。
候选混合物的制备
通过聚合酶延伸退火至生物素化的ssDNA模板的DNA引物(在以下表2中所示)来制备部分随机化的ssDNA寡核苷酸的候选混合物。候选混合物包含含有dATP、dGTP、dCTP和5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷三磷酸(NapdUTP)的40个核苷酸的随机化盒。
表2.模板和引物的序列
Figure BDA0001283973730000381
B'＝生物素
将5毫升的链霉亲和素加UltraLink树脂(Streptavidin Plus UltraLink Resin，PIERCE)的50％浆液用2.5mL的20mM NaOH洗涤一次，用2.5mL的SB18T0.05(用NaOH、102mMNaCl、5mM KCl、5mM MgCl2和0.05％TWEEN 20调节至pH 7.5的40mM HEPES(4-(2-羟乙基)哌嗪-1-乙磺酸)缓冲液)洗涤两次，并且用2.5mL的16mM NaCl洗涤两次。将八十纳摩尔的具有两个生物素残基(在序列中指定为B')和40个随机化位置(在序列中指定为N40)的模板1(SEQID NO:1)添加至洗涤的UltraLink SA珠粒中，并且在37℃下旋转2.5小时。然后将珠粒用16mM NaCl洗涤三次。在每次洗涤之间，通过离心回收珠粒。将现在含有捕获的模板的珠粒悬浮于3.75mL的延伸反应缓冲液中[含有80nmol引物(SEQ ID NO:2)、1X SQ20缓冲液(120mM Tris-HCl(pH7.8)、10mM KCl、7mM MgSO4、6mM(NH4)2SO4、0.001％BSA和0.1％TritonX-100)、470单位的KOD XL DNA聚合酶(EMD MILLIPORE)和各1mM的dATP、dCTP、dGTP和NapdUTP。使珠粒在68℃下旋转孵育2小时。然后将珠粒用SB18T0.01(如上的SB18，但具有0.01％TWEEN-20)洗涤一次，并用16mM NaCl洗涤两次。用2.5mL的40mM NaOH从珠粒洗脱适体文库。将洗脱的文库立即用50μL中和剂(700mM HCl、180mM HEPES、0.45％TWEEN-20)中和。再重复洗脱两次，且汇集洗脱液。将文库用AMICON Ultracel YM-10过滤器浓缩至大约0.4mL，并且通过紫外吸收光谱法测定文库浓度。
人GDF11的生物素标记
将在大肠杆菌中过度表达后以同源二聚体形式纯化的未标记的重组人GDF11-蛋白质(Peprotech，目录号120-11)通过使NHS-PEO4-生物素(PIERCE，EZ-Link NHS-PEG4生物素)共价偶联至含有伯胺的残基进行生物素化。将蛋白质(于80μL中1600pmol)与4倍摩尔过量的NHS-PEG4-生物素混合，并且使反应物在20℃下孵育1小时。在完成反应后，使用ZebaTM自旋脱盐柱(PIERCE)除去未反应的NHS-PEG4-生物素，其中缓冲液已被交换为SB18T0.05。
人肌肉生长抑制素的生物素标记
将在大肠杆菌中过度表达后以同源二聚体形式纯化的未标记的重组人肌肉生长抑制素-蛋白质(Peprotech，目录号120-00)如上所述进行生物素化。
肌肉生长抑制素的固定
通过将珠粒用14mL的20mM NaOH洗涤一次并用14mL的SB18T0.05洗涤两次来制备MYONE-SA顺磁珠粒(MYONE SA,INVITROGEN，或下文称为SA珠粒)。最后，将SA珠粒以10mg/mL悬浮于SB18T0.05中，并且在4℃下储存直到使用。对于所有轮的SELEX，将生物素标记的肌肉生长抑制素-蛋白质(500pmol)固定在上。这通过将SA珠粒(5mgs)与生物素标记的肌肉生长抑制素(500pmol)在振荡下混合30分钟、然后用SB18T0.05洗涤三次来完成。将SA-肌肉生长抑制素珠粒重悬浮于0.5mL SB18T0.05(10mgs/mL珠粒，附着有1μM肌肉生长抑制素)中并储存在4℃下直至使用。
使用缓慢解离速率富集方法的适体选择
使用亲和力和慢解离速率的选择完成总计11轮的SELEX方法。在每轮之前，进行反选择以降低背景并降低获得与蛋白质非特异性结合的适体的可能性。此外，单独类型的反选择应用于不结合密切相关的90％同一的蛋白质肌肉生长抑制素的GDF11适体的强制选择。反选择如下进行。
对于第1轮，将100μL的在SB18T0.05中含有大约1nmol DNA的DNA候选混合物在95℃下加热5分钟，然后冷却至70℃持续5分钟，然后冷却至48℃持续5分钟，然后转移至37℃区块持续5分钟。然后将样品与10μL蛋白质竞争剂混合物和1mg(100μL)反选择珠粒合并，并且在37℃下在混合下孵育10分钟。通过磁性分离除去珠粒。蛋白质竞争剂混合物和反选择珠粒如下组成。标准SELEX使用10μL标准蛋白质竞争剂混合物(在SB18T0.05中0.1％HSA、10μM酪蛋白和10μM凝血酶原)和1mg(100μL)的SA珠粒。使用被动反选择的SELEX使用10μL修饰的蛋白质竞争剂混合物(在SB18T0.05中的0.1％HSA、10μM酪蛋白、10μM凝血酶原和10μM未标记的肌肉生长抑制素)和1mg(100μL)的SA珠粒。使用主动反选择的SELEX使用10μL标准蛋白质竞争剂混合物(在SB18T0.05中0.1％HSA、10μM酪蛋白和10μM凝血酶原)和1mg(100μL)的SA-肌肉生长抑制素珠粒(SA珠粒，附着有1μM肌肉生长抑制素)。
对于第2-11轮，将从前一轮获得的DNA候选混合物的68μL等分试样(68％的从前一轮获得的eDNA)与13μL的5x SB18T0.05混合。将样品加热至95℃持续3分钟，并以0.1℃/秒的速率冷却至37℃。然后将样品与9μL蛋白质竞争剂混合物(在SB18T0.05中0.1％HSA、10μM酪蛋白和10μM凝血酶原)和0.1mg(10μL)的SA珠粒合并，并在37℃下在混合下孵育10分钟(标准SELEX)。如在第1轮中，用10μM未标记的肌肉生长抑制素(使用被动反选择的SELEX)补充蛋白质竞争剂混合物，并且使用SA-肌肉生长抑制素珠粒(SA珠粒，附着有1μM肌肉生长抑制素)代替SA珠粒(使用主动反选择的SELEX)。通过磁性分离除去珠粒。
在第一反选择之后，将靶蛋白质预固定在SA珠粒上以用于第1轮选择过程。为了实现这一点，将0.5mg的SA珠粒与50pmol的生物素标记的靶蛋白质(GDF11同源二聚体)混合，并在37℃下振荡孵育30分钟。通过用SB18T0.05洗涤珠粒两次来除去未结合的靶标。将反选择的DNA候选混合物(100μL)添加至珠粒中，并在37℃下在混合下孵育60分钟。在第一轮中不使用缓慢解离速率富集过程，并且将珠粒用100μL SB18T0.05简单洗涤5次，每次2分钟。在洗涤后，通过添加45μL的8mM NaOH并在37℃下在混合下孵育5分钟来从珠粒中洗脱结合的适体。在珠粒的磁性分离后，将含适体的洗脱液(40μL)转移至新管中。再次用45μL的8mMNaOH重复洗脱，并在37℃下在混合下孵育5分钟。将洗脱液合并(80uL)，且通过添加20μL的32mM HCl和2μL Tris-HCl pH 7.5中和溶液。
对于第2-11轮，如下所述用DNA候选混合物和靶蛋白质进行选择，同时并行地用DNA候选混合物但在没有靶蛋白质的情况下进行相同的选择。将从具有靶蛋白质的样品(信号S)和无靶蛋白质的样品(背景B)的PCR获得的Ct值的比较用作指导以降低下一轮中的靶标浓度。如果ΔCt值大于4但小于8，则在下一轮中将靶蛋白质减少3倍。如果ΔCt值大于8，则在下一轮中将靶标减少10倍。
按照这些方案，在数轮标准SELEX后，GDF11浓度的降低是3倍(第5-6轮)、10倍(第7-8轮)、30倍(第9-10轮)和100倍(第11轮)。对于使用被动反选择的选择，靶标浓度的降低是3倍(第5-6轮)、10倍(第7-10轮)和30倍(第11轮)。对于使用主动反选择的选择，靶标浓度的降低是3倍(第5-6轮)、10倍(第7轮)、30倍(第8-10轮)和100倍(第11轮)。“RX”(其中X是数字)表示SELEX的轮数(例如，R3表示SELEX的第3轮)。
Figure BDA0001283973730000421
对于第2轮，将标记的靶蛋白质(在10μL中5pmol的GDF11同源二聚体)与40μL反选择的DNA候选混合物混合，并在37℃下孵育15分钟。通过添加50μL的10mM硫酸葡聚糖、然后立即添加0.1mg SA珠粒来开始缓慢解离速率富集过程。将其在37℃下在混合下孵育15分钟。然后用100μL的SB18T0.05洗涤珠粒5次。通过添加105μL高氯酸钠洗脱缓冲液(1.8MNaClO4、40mM PIPES pH 6.8、1mM EDTA、0.05％Triton X-100)并在37℃下在混合下孵育10分钟来从珠粒中洗脱适体链。通过磁性分离除去珠粒，并将100μL适体洗脱液转移至含有引物捕获珠粒(25μL的2.5mg/mL SA珠粒，附着有12.5pmol引物2(SEQ ID NO:2))的新管中，并使其在50℃下在混合下孵育30分钟。然后用100μL的SB18T0.05洗涤珠粒三次。通过添加85μL的40mM NaOH来从珠粒中洗脱适体链，并用20μL的160mM HCl和2μL的500mM Tris-HCl pH7.5中和洗脱液(80μL)。
除了在添加珠粒之前添加硫酸葡聚糖15分钟(第3-4轮)、30分钟(第5轮)、45分钟(第6轮)、60分钟(第7轮)、75分钟(第8轮)或90分钟(第9-11轮)外，如针对第2轮所描述进行第3至11轮选择。用0.1mg中性亲和素(Neutravidin)包被的Sera-Mag SpeedBeads(FisherScientific，目录号09-981-155，或下文称为NA珠粒，第3、5、7、9、11轮)或用0.1mg的SA珠粒(第4、6、8、10轮)进行分配。
在11轮SELEX后获得的汇集物显示良好的活性以保证Ion Torrent ePCR和测序(表3)。从每个汇集物中，获得384条序列用于对比序列分析，然后是先导候选物的结合测定。
表3.用标准SELEX以及用具有肌肉生长抑制素的被动或主动反选择获得的GDF11适体汇集物的亲和力数据
Figure BDA0001283973730000431
适体扩增和纯化
通过QPCR扩增和定量来自每轮的选择的适体DNA。将48μL DNA添加至12μL QPCR混合物(10X KOD DNA聚合酶缓冲液；Novagen#71157，稀释至5X，25mM MgCl2，10μM正向PCR引物(引物1，SEQ ID NO:2)，10μM生物素化的反向PCR引物(引物2，SEQ ID NO:3)，5X SYBRGreen I，0.075U/μL KOD XL DNA聚合酶和各1mM dATP、dCTP、dGTP和dTTP)并且在BIO-RADMyIQ QPCR仪器中使用以下方案进行热循环：96℃15秒、55℃10秒和68℃30分钟的1个循环；随后96℃15秒、68℃1分钟的30个循环。用仪器软件进行定量，并且比较所选择的具有和不具有靶蛋白质的DNA拷贝数，以确定信号/背景比。
在扩增后，将PCR产物经由生物素化的反义链捕获在SA珠粒上。将1.25mL SA珠粒(10mg/mL)用14mL 20mM NaOH洗涤一次，用14mL SB18T0.05洗涤两次，重悬浮于1.25mL 3MNaCl+0.05％TWEEN中，并在4℃下储存。将25μL SA珠粒(于3M NaCl中10mg/mL)添加至50μL双链QPCR产物，并在25℃下在混合下孵育5分钟。通过添加100μL的40mM NaOH并在37℃下在混合下孵育5分钟来从珠粒中洗脱“正义”链。丢弃洗脱的链，且将珠粒用SB18T洗涤两次并用16mM NaCl洗涤一次。
通过从固定的反义链进行的引物延伸来制备含有NapdUTP的适体正义链。将珠粒悬浮于40μL引物延伸反应混合物(1X引物延伸缓冲液(120mM Tris-HCl pH 7.8，10mM KCl，7mM MgSO4，6mM(NH4)2SO4，0.1％TRITON X-100和0.001％牛血清白蛋白)，2.5μM正向引物(引物1，SEQ ID NO:2)，各0.5mM dATP、dCTP、dGTP和NapdUTP以及0.015U/μL KOD XL DNA聚合酶)中，并在68℃下在混合下孵育60分钟。将珠粒用SB18T0.05洗涤3次，且通过添加45μL的40mM NaOH并在37℃下在混合下孵育5分钟来从珠粒洗脱适体链。在磁性分离后将40μL适体洗脱液转移至新管中，并用45μL的40mM NaOH再重复洗脱一次，并在37℃下在混合下孵育5分钟。合并洗脱液(80uL)，并将溶液用20μL的160mM HCl中和且用10μL的0.1M HEPES(pH7.5)缓冲。
选择严格性和反馈
根据以下规则，响应于QPCR信号(ΔCt)，每轮降低选择步骤的相对靶蛋白质浓度：
如果ΔCt<4，则[P](i+1)＝[P](i)
如果4≤ΔCt<8，则[P](i+1)＝[P](i)/3.2
如果ΔCt≥8，则[P](i+1)＝[P](i)/10
其中[P]＝蛋白质浓度，且i＝当前轮数。
在每个选择轮次之后，确定富集的DNA混合物的会聚状态(convergence state)。将10μL双链QPCR产物用含有1X SYBR Green I的4mM MgCl2稀释至200μL。使用测量双链寡核苷酸的复合混合物的杂交时间的C0t分析来分析样品的会聚。用以下方案使样品热循环：98℃1分钟、85℃1分钟的3个循环；98℃1分钟、然后85℃30分钟的2个循环。在85℃下30分钟期间，以5秒间隔测量荧光图像。将荧光强度作为时间对数的函数作图，并且观察到随着每个SELEX轮增加的杂交速率，从而表明序列会聚。
富集汇集物测序和适体鉴别
在11轮SELEX后，对会聚汇集物进行测序。如下进行序列制备。使用含有唯一条形码/指数序列(每个汇集物的唯一序列标识符)的SELEX文库特异性引物，通过PCR扩增汇集物。使用Quant-iTTM
Figure BDA0001283973730000451
dsDNA试剂(LIFE TECHNOLOGIES)测定定量单独PCR产物，以等摩尔浓度合并，并且使用AMICON Ultra-0.5离心过滤装置(Amicon Ultra-0.5Centrifugal Filter Device)(MILLIPORE)进行浓缩/缓冲液交换。然后通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)纯化混合物，并且使用Amicon Ultra-0.5离心过滤装置(AmiconUltra-0.5Centrifugal Filter Device)浓缩洗脱液，并通过PAGE可视化以确认最终混合物的尺寸、纯度和产率。将样品提交给SeqWright Genomic Services(GE HEALTHCARE，Houston，TX)用于Ion Torrent PGM测序。从含有超过40,000条序列的序列汇集物中，随机选择384条并且使用测定序列计数/拷贝数且使用局部比对算法鉴别共同会聚模式的定制软件来分析会聚。选择汇集物中具有最大表现度/拷贝数的序列和来自每一会聚模式的至少一条序列以用于进一步表征。值得注意的是，从序列分析和基序鉴别中除去具有“低”序列质量评分(即，Phred质量评分为20或更低)的来自SELEX适体汇集物的那些序列读段。
通过功能测定和通过消减序列分析进行的适体鉴别
最初经由使用GDF11和肌肉生长抑制素的对比结合测定(参见实施例2)从序列12060-28_3(SEQ ID NO:12)和12060-16_3(SEQ ID NO:13)鉴别会聚模式1。序列中的字母“P”表示NapdU。
适体ID 12060-28_3：
5'-ccctgCGCCPPCGGACPPGCPPPAAGPPPAGCCGCPPGCPCACAPcacaa-3'(SEQ ID NO:12)
适体ID 12060-16_3：
5'-ccctgPGAGACPPGAPPPACGPPPAGCPGCPAACAPGGGGAACCAcacaa-3'(SEQ ID NO:13)
并行地，经由对来自用不同SELEX变化形式获得的汇集物的序列的对比和消减序列分析，在计算机中鉴别了会聚模式1。这些包括来自汇集物12058(GDF11标准SELEX)的768条序列、来自汇集物12060(使用被动反选择的GDF11SELEX)的384条序列、来自汇集物12061(使用主动反选择的GDF11SELEX)的384条序列以及来自汇集物12059(肌肉生长抑制素标准SELEX)的384条序列。使用这些合并汇集物中的所有序列的分析和比对来对存在于所有汇集物中的具有共同模式的序列进行去优先化(de-prioritize)，从而指示GDF11和肌肉生长抑制素的非区别性结合(参见表4)。会聚模式1在来自使用被动反选择的GDF11SELEX的汇集物12060中高度富集(15％)，并且在来自GDF11标准SELEX的汇集物12058中具有较低丰度(3％)，并且在来自肌肉生长抑制素标准SELEX的汇集物12059中不存在，从而指示GDF11特异性。
表4.
Figure BDA0001283973730000471
实施例2：结合GDF11的适体的夹心SELEX
通过使用结合GDF11的含2NEdU的适体，使用夹心SELEX测定来鉴别另外的GDF11特异性适体。夹心SELEX描述于WO 2015/048084中。简言之，使用靶标-适体复合物(即，与含有2NEdU的适体复合的GDF11)进行SELEX。据发现在使用夹心SELEX筛选的NapdU汇集物中鉴别的一些适体与适体12060-28相似。那些克隆在下文进一步论述。
实施例3：适体对GDF11蛋白对比肌肉生长抑制素的平衡结合常数(Kd)
此实施例提供适体-GDF11和适体-肌肉生长抑制素蛋白质的蛋白质结合亲和力(Kd)，以及相对于肌肉生长抑制素优先结合GDF11的适体的鉴别。
进一步表征经由反选择SELEX方法和经由本文所述的夹心SELEX方法选择的几种适体克隆，并且针对相对于肌肉生长抑制素优先结合GDF11进行选择(参见表5)。在不存在和存在作为非特异性竞争剂的1μM Z-嵌段(随机寡核苷酸序列)的情况下进行结合测定。具有BndU作为C-5修饰的嘧啶的适体(BndU GDF11适体)，其先前在无反选择步骤的情况下经由SELEX进行选择且用作结合GDF11和肌肉生长抑制素两者的对照。使用BndU GDF11适体的先前结合实验显示其对GDF11和肌肉生长抑制素通常是无差别的。
表5.适体结合亲和力比较：GDF11和肌肉生长抑制素
Figure BDA0001283973730000481
Figure BDA0001283973730000491
通过使用被动反选择的SELEX获得的适体汇集物12060(NapdU适体)含有对GDF11具有亲和力和不同程度的选择性的几种核苷酸序列(参见Kd比率，其中更大的数字表示相较于肌肉生长抑制素对GDF11的更大特异性)。具体地说，当在1μM Z-嵌段存在下测试时，适体克隆12060-16_3(NapdU)显示相对于肌肉生长抑制素，对GDF11的约50倍的差异Kd(即，6.52nM对比>320nM的Kd)，并且当在1μM Z-嵌段存在下测试时，12060-28_3(NapdU)(其构成核苷酸序列的12060适体汇集物的9％)显示相对于肌肉生长抑制素，对GDF11的约100倍的差异Kd(即，1.74nM对比>320nM的Kd)(参见图1)。通过夹心SELEX获得的适体汇集物16139(NapdU)还含有对GDF11具有高亲和力和特异性的几种核苷酸序列。
表5的其它适体克隆显示对GDF11的亲和力，对肌肉生长抑制素具有一定范围的亲和力。例如，来自标准SELEX的适体汇集物12058(NapdU)由序列12058-6占主导地位(17％)。此适体克隆对GDF11具有0.09nM的Kd，但也对肌肉生长抑制素具有0.12nM的Kd(图2)。
实施例4：GDF11适体12060-28的SELEX后截短和分析
此实施例提供SELEX后对12060-28_3适体的截短序列的GDF11结合亲和力和能够结合至GDF11的核心最小序列长度的鉴别。
适体12060-28(NapdU)截短表明20-聚体序列5'-GACPPGCPP PAAGPPPAGCC-3'(适体12060-28_37；SEQ ID NO:156)能够结合GDF11。然而，21-聚体序列5'-GGACPPGCPPPAAGPPPAGCC-3'(适体克隆12060-28_36；SEQ ID NO:157)的活性显示对GDF11的相对更好的结合(4.43E-10的Kd)(参见图3)。这与在与12060-28相关的活性克隆家族中发现的保守基序CPPGCPPPANGPPPAGC(SEQ ID NO:105)一致，即仅40-聚体中心区域(基序序列)的12-24位内的NapdU残基似乎是结合所需的。
实施例5：特异性GDF11适体序列
此实施例提供前导GDF11选择性适体结合子(12060-28_3)与经由SELEX方法选择的其它适体序列的序列比对。这产生经由SELEX选择的序列汇集物中多条序列中的基序序列的鉴别。还提供选择序列的亲和力数据。关于序列比对(50-聚体)和结合亲和力，参见表6。表7提供来自适体汇集物12060和12058的另外序列及其比对。显示表7中的序列在序列(40-聚体)的5'和3'端的每一个上去除五(5)个核苷酸。表6和表7两者提供在序列之间共享的“核心序列”基序的基础。此序列可以是GACPPGAPPPACGPPPAGC(SEQ ID NO:106)；GACPPGAPPPAAGPPPAGC(SEQ ID NO:107)；GACPPGCPPPAAGPPPAGC(SEQ ID NO:108)；GACPPGCPPPACGPPPAGC(SEQ ID NO:109)；GCCPPGAPPPACGPPPAGC(SEQ ID NO:142)；CACPPGAPPPACGPPPAGG(SEQ ID NO:143)；GACPPGGPPPACGPPPAGC(SEQ ID NO:144)；GCCPPGCPPPACGPPPAGC(SEQ ID NO:145)；GCAPPGAPPPACGPPPAGC(SEQ ID NO:146)；GGCPPGCPPPACGPPPAGA(SEQ ID NO:147)；CGCPPGAPPPAAGPPPAGG(SEQ ID NO:148)；AACPPGAPPPAAGPPPAGG(SEQ ID NO:149)；或GACPPGAPPPAGGPPPAGC(SEQ ID NO:150)；其中在每种情况下P是NapdU。在一些实施方案中，保守基序是NNCPPGRPPPAMGPPPAGS(SEQ IDNO:141)，其中在每种情况下P是NapdU，R是A或G；每个N独立地且在每次出现时是A、G或C；M是A或C；并且S是G或C。据发现表6中的含有胞嘧啶代替12060-28中的保守NapdU之一的序列12060-209_3不结合GDF11。
Figure BDA0001283973730000521
Figure BDA0001283973730000531
表7.12060-28(序列中由“P”鉴别的Napd U)和另外相关克隆的序列比对。序列显示为截短的(40-聚体)。基序序列的“x”可以是A或C核苷酸。
Figure BDA0001283973730000541
实施例6：GDF11适体序列
此实施例提供使用前导GDF11选择性适体结合子序列(12060-28_3)对SELEX适体汇集物的BLAST分析的结果。此分析不如实施例5中进行的比对严格，并且产生还含有共有或核心基序的另外适体序列的鉴别。关于序列比对，参见表8。
从表8中的序列的比对可得到几个基序序列，其中每个基序与从实施例3和4中的102060-28_3适体序列的比对中鉴别的基序(或共有序列)保持重叠。
第一基序可如下定义：
5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO:110)，其中每个P独立地且在每次出现时是C-5修饰的嘧啶；R是A或G；每个W独立地且在每次出现时是A、T或U；每个M独立地且在每次出现时是A或C；S是G或C；每个n独立地且在每次出现时是0或1；并且每个m独立地且在每次出现时是0或1。
第二基序可如下定义：
5'-RWnACnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO:111)。第三基序可如下：5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmGWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO:112)。第四基序可如下：5'-RMCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPPASnGC-3’(SEQ ID NO:113)。在所述第二、第三和第四基序中的每个中，每个P独立地且在每次出现时是C-5修饰的嘧啶；R是A或G；每个W独立地且在每次出现时是A、T或U；每个M独立地且在每次出现时是A或C；S是G或C；每个n独立地且在每次出现时是0或1；并且每个m独立地且在每次出现时是0或1。
第一基序可如下定义：
5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGS-3’(SEQ ID NO:151)，其中每个P独立地且在每次出现时是C-5修饰的嘧啶；R是A或G；每个W独立地且在每次出现时是A、T或U；每个M独立地且在每次出现时是A或C；每个S独立地且在每次出现时是G或C；每个n独立地且在每次出现时是0或1；并且每个m独立地且在每次出现时是0或1。
第二基序可如下定义：
5'-RWnACnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGS-3’(SEQ ID NO:152)。第三基序可如下：5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmGWnPPGnPASnGS-3’(SEQ ID NO:153)。第四基序可如下：5'-RMCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPPASnGS-3’(SEQ ID NO:154)。在所述第二、第三和第四基序中的每个中，每个P独立地且在每次出现时是C-5修饰的嘧啶；R是A或G；每个W独立地且在每次出现时是A、T或U；每个M独立地且在每次出现时是A或C；每个S独立地且在每次出现时是G或C；每个n独立地且在每次出现时是0或1；并且每个m独立地且在每次出现时是0或1。
Figure BDA0001283973730000571
序列表
<110> 私募蛋白质体公司（SOMALOGIC, INC.）
<120> 用于结合生长分化因子11的核酸化合物
<130> 01137-0011-00PCT
<150> US 62/083,592
<151> 2014-11-24
<150> US 62/113,864
<151> 2015-02-09
<160> 160
<170> PatentIn 3.5版
<210> 1
<211> 91
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 修饰的_碱基
<222> (1)..(2)
<223> 生物素
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (32)..(71)
<223> n是a、c、g或t
<400> 1
aatttttttt gtctcttgtt cttgtcttgt gnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 60
nnnnnnnnnn ncagggcatc agagcgtttc g 91
<210> 2
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<400> 2
atatatatcg aaacgctctg atgccctg 28
<210> 3
<211> 31
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 修饰的_碱基
<222> (1)..(2)
<223> 生物素
<400> 3
aatttttttt gtctcttgtt cttgtcttgt g 31
<210> 4
<211> 407
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> GDF11 (蛋白质ID 095390)
<400> 4
Met Val Leu Ala Ala Pro Leu Leu Leu Gly Phe Leu Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Glu Leu Arg Pro Arg Gly Glu Ala Ala Glu Gly Pro Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Val Gly Gly Glu Arg Ser
35 40 45
Ser Arg Pro Ala Pro Ser Val Ala Pro Glu Pro Asp Gly Cys Pro Val
50 55 60
Cys Val Trp Arg Gln His Ser Arg Glu Leu Arg Leu Glu Ser Ile Lys
65 70 75 80
Ser Gln Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Lys Glu Ala Pro Asn Ile Ser
85 90 95
Arg Glu Val Val Lys Gln Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Gln Gln
100 105 110
Ile Leu Asp Leu His Asp Phe Gln Gly Asp Ala Leu Gln Pro Glu Asp
115 120 125
Phe Leu Glu Glu Asp Glu Tyr His Ala Thr Thr Glu Thr Val Ile Ser
130 135 140
Met Ala Gln Glu Thr Asp Pro Ala Val Gln Thr Asp Gly Ser Pro Leu
145 150 155 160
Cys Cys His Phe His Phe Ser Pro Lys Val Met Phe Thr Lys Val Leu
165 170 175
Lys Ala Gln Leu Trp Val Tyr Leu Arg Pro Val Pro Arg Pro Ala Thr
180 185 190
Val Tyr Leu Gln Ile Leu Arg Leu Lys Pro Leu Thr Gly Glu Gly Thr
195 200 205
Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg Arg His Ile Arg Ile Arg Ser Leu
210 215 220
Lys Ile Glu Leu His Ser Arg Ser Gly His Trp Gln Ser Ile Asp Phe
225 230 235 240
Lys Gln Val Leu His Ser Trp Phe Arg Gln Pro Gln Ser Asn Trp Gly
245 250 255
Ile Glu Ile Asn Ala Phe Asp Pro Ser Gly Thr Asp Leu Ala Val Thr
260 265 270
Ser Leu Gly Pro Gly Ala Glu Gly Leu His Pro Phe Met Glu Leu Arg
275 280 285
Val Leu Glu Asn Thr Lys Arg Ser Arg Arg Asn Leu Gly Leu Asp Cys
290 295 300
Asp Glu His Ser Ser Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val
305 310 315 320
Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr
325 330 335
Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Gln Cys Glu Tyr Met Phe Met Gln Lys
340 345 350
Tyr Pro His Thr His Leu Val Gln Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala
355 360 365
Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr
370 375 380
Phe Asn Asp Lys Gln Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Gly Met Val
385 390 395 400
Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
405
<210> 5
<211> 375
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 肌肉生长抑制素(蛋白质ID 014793)
<400> 5
Met Gln Lys Leu Gln Leu Cys Val Tyr Ile Tyr Leu Phe Met Leu Ile
1 5 10 15
Val Ala Gly Pro Val Asp Leu Asn Glu Asn Ser Glu Gln Lys Glu Asn
20 25 30
Val Glu Lys Glu Gly Leu Cys Asn Ala Cys Thr Trp Arg Gln Asn Thr
35 40 45
Lys Ser Ser Arg Ile Glu Ala Ile Lys Ile Gln Ile Leu Ser Lys Leu
50 55 60
Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn Ile Ser Lys Asp Val Ile Arg Gln Leu
65 70 75 80
Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val
85 90 95
Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His
100 105 110
Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile Thr Met Pro Thr Glu Ser Asp Phe Leu
115 120 125
Met Gln Val Asp Gly Lys Pro Lys Cys Cys Phe Phe Lys Phe Ser Ser
130 135 140
Lys Ile Gln Tyr Asn Lys Val Val Lys Ala Gln Leu Trp Ile Tyr Leu
145 150 155 160
Arg Pro Val Glu Thr Pro Thr Thr Val Phe Val Gln Ile Leu Arg Leu
165 170 175
Ile Lys Pro Met Lys Asp Gly Thr Arg Tyr Thr Gly Ile Arg Ser Leu
180 185 190
Lys Leu Asp Met Asn Pro Gly Thr Gly Ile Trp Gln Ser Ile Asp Val
195 200 205
Lys Thr Val Leu Gln Asn Trp Leu Lys Gln Pro Glu Ser Asn Leu Gly
210 215 220
Ile Glu Ile Lys Ala Leu Asp Glu Asn Gly His Asp Leu Ala Val Thr
225 230 235 240
Phe Pro Gly Pro Gly Glu Asp Gly Leu Asn Pro Phe Leu Glu Val Lys
245 250 255
Val Thr Asp Thr Pro Lys Arg Ser Arg Arg Asp Phe Gly Leu Asp Cys
260 265 270
Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val
275 280 285
Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr
290 295 300
Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe Leu Gln Lys
305 310 315 320
Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala
325 330 335
Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr
340 345 350
Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Ala Met Val
355 360 365
Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
370 375
<210> 6
<211> 407
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 人GDF11蛋白质ID是O95390；示例性人成熟GDF11
<400> 6
Met Val Leu Ala Ala Pro Leu Leu Leu Gly Phe Leu Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Glu Leu Arg Pro Arg Gly Glu Ala Ala Glu Gly Pro Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Val Gly Gly Glu Arg Ser
35 40 45
Ser Arg Pro Ala Pro Ser Val Ala Pro Glu Pro Asp Gly Cys Pro Val
50 55 60
Cys Val Trp Arg Gln His Ser Arg Glu Leu Arg Leu Glu Ser Ile Lys
65 70 75 80
Ser Gln Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Lys Glu Ala Pro Asn Ile Ser
85 90 95
Arg Glu Val Val Lys Gln Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Gln Gln
100 105 110
Ile Leu Asp Leu His Asp Phe Gln Gly Asp Ala Leu Gln Pro Glu Asp
115 120 125
Phe Leu Glu Glu Asp Glu Tyr His Ala Thr Thr Glu Thr Val Ile Ser
130 135 140
Met Ala Gln Glu Thr Asp Pro Ala Val Gln Thr Asp Gly Ser Pro Leu
145 150 155 160
Cys Cys His Phe His Phe Ser Pro Lys Val Met Phe Thr Lys Val Leu
165 170 175
Lys Ala Gln Leu Trp Val Tyr Leu Arg Pro Val Pro Arg Pro Ala Thr
180 185 190
Val Tyr Leu Gln Ile Leu Arg Leu Lys Pro Leu Thr Gly Glu Gly Thr
195 200 205
Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg Arg His Ile Arg Ile Arg Ser Leu
210 215 220
Lys Ile Glu Leu His Ser Arg Ser Gly His Trp Gln Ser Ile Asp Phe
225 230 235 240
Lys Gln Val Leu His Ser Trp Phe Arg Gln Pro Gln Ser Asn Trp Gly
245 250 255
Ile Glu Ile Asn Ala Phe Asp Pro Ser Gly Thr Asp Leu Ala Val Thr
260 265 270
Ser Leu Gly Pro Gly Ala Glu Gly Leu His Pro Phe Met Glu Leu Arg
275 280 285
Val Leu Glu Asn Thr Lys Arg Ser Arg Arg Asn Leu Gly Leu Asp Cys
290 295 300
Asp Glu His Ser Ser Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val
305 310 315 320
Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr
325 330 335
Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Gln Cys Glu Tyr Met Phe Met Gln Lys
340 345 350
Tyr Pro His Thr His Leu Val Gln Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala
355 360 365
Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr
370 375 380
Phe Asn Asp Lys Gln Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Gly Met Val
385 390 395 400
Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
405
<210> 7
<211> 405
<212> PRT
<213> 小鼠某种
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 小鼠GDF11蛋白质ID是Q9Z1W4；示例性小鼠成熟GDF8
<400> 7
Met Val Leu Ala Ala Pro Leu Leu Leu Gly Phe Leu Leu Leu Ala Leu
1 5 10 15
Glu Leu Arg Pro Arg Gly Glu Ala Ala Glu Gly Pro Ala Ala Ala Ala
20 25 30
Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Gly Val Gly Gly Glu Arg Ser Ser Arg
35 40 45
Pro Ala Pro Ser Ala Pro Pro Glu Pro Asp Gly Cys Pro Val Cys Val
50 55 60
Trp Arg Gln His Ser Arg Glu Leu Arg Leu Glu Ser Ile Lys Ser Gln
65 70 75 80
Ile Leu Ser Lys Leu Arg Leu Lys Glu Ala Pro Asn Ile Ser Arg Glu
85 90 95
Val Val Lys Gln Leu Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Gln Gln Ile Leu
100 105 110
Asp Leu His Asp Phe Gln Gly Asp Ala Leu Gln Pro Glu Asp Phe Leu
115 120 125
Glu Glu Asp Glu Tyr His Ala Thr Thr Glu Thr Val Ile Ser Met Ala
130 135 140
Gln Glu Thr Asp Pro Ala Val Gln Thr Asp Gly Ser Pro Leu Cys Cys
145 150 155 160
His Phe His Phe Ser Pro Lys Val Met Phe Thr Lys Val Leu Lys Ala
165 170 175
Gln Leu Trp Val Tyr Leu Arg Pro Val Pro Arg Pro Ala Thr Val Tyr
180 185 190
Leu Gln Ile Leu Arg Leu Lys Pro Leu Thr Gly Glu Gly Thr Ala Gly
195 200 205
Gly Gly Gly Gly Gly Arg Arg His Ile Arg Ile Arg Ser Leu Lys Ile
210 215 220
Glu Leu His Ser Arg Ser Gly His Trp Gln Ser Ile Asp Phe Lys Gln
225 230 235 240
Val Leu His Ser Trp Phe Arg Gln Pro Gln Ser Asn Trp Gly Ile Glu
245 250 255
Ile Asn Ala Phe Asp Pro Ser Gly Thr Asp Leu Ala Val Thr Ser Leu
260 265 270
Gly Pro Gly Ala Glu Gly Leu His Pro Phe Met Glu Leu Arg Val Leu
275 280 285
Glu Asn Thr Lys Arg Ser Arg Arg Asn Leu Gly Leu Asp Cys Asp Glu
290 295 300
His Ser Ser Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe
305 310 315 320
Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala
325 330 335
Asn Tyr Cys Ser Gly Gln Cys Glu Tyr Met Phe Met Gln Lys Tyr Pro
340 345 350
His Thr His Leu Val Gln Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro
355 360 365
Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr Phe Asn
370 375 380
Asp Lys Gln Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Gly Met Val Val Asp
385 390 395 400
Arg Cys Gly Cys Ser
405
<210> 8
<211> 345
<212> PRT
<213> 大鼠某种
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 大鼠GDF11蛋白质ID是Q9Z217；示例性大鼠成熟GDF8
<400> 8
Pro Glu Pro Asp Gly Cys Pro Val Cys Val Trp Arg Gln His Ser Arg
1 5 10 15
Arg Val Arg Leu Gly Ser Ile Lys Ser Gln Ile Leu Ser Lys Leu Arg
20 25 30
Leu Lys Glu Ala Pro Asn Ile Ser Arg Glu Val Val Lys Gln Leu Leu
35 40 45
Pro Lys Ala Pro Pro Leu Gln Gln Ile Leu Asp Leu His Asp Phe Gln
50 55 60
Gly Asp Ala Leu Gln Pro Glu Asp Phe Leu Glu Glu Asp Glu Tyr His
65 70 75 80
Ala Thr Thr Glu Thr Val Ile Ser Met Ala Gln Glu Thr Asp Pro Ala
85 90 95
Val Gln Thr Asp Gly Ser Pro Leu Cys Cys His Phe His Phe Ser Pro
100 105 110
Lys Val Met Phe Thr Lys Val Leu Lys Ala Gln Leu Trp Val Tyr Leu
115 120 125
Arg Pro Val Pro Arg Pro Ala Thr Val Tyr Leu Gln Ile Leu Arg Leu
130 135 140
Lys Pro Leu Thr Gly Glu Gly Thr Ala Gly Gly Gly Gly Gly Gly Arg
145 150 155 160
Arg His Ile Arg Ile Arg Ser Leu Lys Ile Glu Leu His Ser Arg Ser
165 170 175
Gly His Trp Gln Ser Ile Asp Phe Lys Gln Val Leu His Ser Trp Phe
180 185 190
Arg Gln Pro Gln Ser Asn Trp Gly Ile Glu Ile Asn Ala Phe Asp Pro
195 200 205
Ser Gly Thr Asp Leu Ala Val Thr Ser Leu Gly Pro Gly Ala Glu Gly
210 215 220
Cys His Pro Phe Met Glu Leu Arg Val Leu Glu Asn Thr Lys Arg Ser
225 230 235 240
Arg Arg Asn Leu Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Ser Glu Ser Arg
245 250 255
Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Ser Gly Trp Asp
260 265 270
Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Gln
275 280 285
Cys Glu Tyr Met Phe Met Gln Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val Gln
290 295 300
Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys
305 310 315 320
Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr Phe Asn Asp Lys Gln Gln Ile Ile
325 330 335
Tyr Gly Lys Ile Pro Gly Met Val Val
340 345
<210> 9
<211> 375
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 人肌肉生长抑制素(GDF8)蛋白质ID是O14793；示例性人
成熟GDF8
<400> 9
Met Gln Lys Leu Gln Leu Cys Val Tyr Ile Tyr Leu Phe Met Leu Ile
1 5 10 15
Val Ala Gly Pro Val Asp Leu Asn Glu Asn Ser Glu Gln Lys Glu Asn
20 25 30
Val Glu Lys Glu Gly Leu Cys Asn Ala Cys Thr Trp Arg Gln Asn Thr
35 40 45
Lys Ser Ser Arg Ile Glu Ala Ile Lys Ile Gln Ile Leu Ser Lys Leu
50 55 60
Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn Ile Ser Lys Asp Val Ile Arg Gln Leu
65 70 75 80
Leu Pro Lys Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp Val
85 90 95
Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr His
100 105 110
Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile Thr Met Pro Thr Glu Ser Asp Phe Leu
115 120 125
Met Gln Val Asp Gly Lys Pro Lys Cys Cys Phe Phe Lys Phe Ser Ser
130 135 140
Lys Ile Gln Tyr Asn Lys Val Val Lys Ala Gln Leu Trp Ile Tyr Leu
145 150 155 160
Arg Pro Val Glu Thr Pro Thr Thr Val Phe Val Gln Ile Leu Arg Leu
165 170 175
Ile Lys Pro Met Lys Asp Gly Thr Arg Tyr Thr Gly Ile Arg Ser Leu
180 185 190
Lys Leu Asp Met Asn Pro Gly Thr Gly Ile Trp Gln Ser Ile Asp Val
195 200 205
Lys Thr Val Leu Gln Asn Trp Leu Lys Gln Pro Glu Ser Asn Leu Gly
210 215 220
Ile Glu Ile Lys Ala Leu Asp Glu Asn Gly His Asp Leu Ala Val Thr
225 230 235 240
Phe Pro Gly Pro Gly Glu Asp Gly Leu Asn Pro Phe Leu Glu Val Lys
245 250 255
Val Thr Asp Thr Pro Lys Arg Ser Arg Arg Asp Phe Gly Leu Asp Cys
260 265 270
Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr Val
275 280 285
Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg Tyr
290 295 300
Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe Leu Gln Lys
305 310 315 320
Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser Ala
325 330 335
Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu Tyr
340 345 350
Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Ala Met Val
355 360 365
Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
370 375
<210> 10
<211> 376
<212> PRT
<213> 小鼠某种
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 小鼠GDF8蛋白质ID是O08689；示例性小鼠成熟GDF8
<400> 10
Met Met Gln Lys Leu Gln Met Tyr Val Tyr Ile Tyr Leu Phe Met Leu
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gly Pro Val Asp Leu Asn Glu Gly Ser Glu Arg Glu Glu
20 25 30
Asn Val Glu Lys Glu Gly Leu Cys Asn Ala Cys Ala Trp Arg Gln Asn
35 40 45
Thr Arg Tyr Ser Arg Ile Glu Ala Ile Lys Ile Gln Ile Leu Ser Lys
50 55 60
Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn Ile Ser Lys Asp Ala Ile Arg Gln
65 70 75 80
Leu Leu Pro Arg Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp
85 90 95
Val Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr
100 105 110
His Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile Thr Met Pro Thr Glu Ser Asp Phe
115 120 125
Leu Met Gln Ala Asp Gly Lys Pro Lys Cys Cys Phe Phe Lys Phe Ser
130 135 140
Ser Lys Ile Gln Tyr Asn Lys Val Val Lys Ala Gln Leu Trp Ile Tyr
145 150 155 160
Leu Arg Pro Val Lys Thr Pro Thr Thr Val Phe Val Gln Ile Leu Arg
165 170 175
Leu Ile Lys Pro Met Lys Asp Gly Thr Arg Tyr Thr Gly Ile Arg Ser
180 185 190
Leu Lys Leu Asp Met Ser Pro Gly Thr Gly Ile Trp Gln Ser Ile Asp
195 200 205
Val Lys Thr Val Leu Gln Asn Trp Leu Lys Gln Pro Glu Ser Asn Leu
210 215 220
Gly Ile Glu Ile Lys Ala Leu Asp Glu Asn Gly His Asp Leu Ala Val
225 230 235 240
Thr Phe Pro Gly Pro Gly Glu Asp Gly Leu Asn Pro Phe Leu Glu Val
245 250 255
Lys Val Thr Asp Thr Pro Lys Arg Ser Arg Arg Asp Phe Gly Leu Asp
260 265 270
Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr
275 280 285
Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg
290 295 300
Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe Leu Gln
305 310 315 320
Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser
325 330 335
Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu
340 345 350
Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Ala Met
355 360 365
Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
370 375
<210> 11
<211> 376
<212> PRT
<213> 大鼠某种
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 大鼠GDF11蛋白质ID是O35312；示例性大鼠成熟GDF8
<400> 11
Met Ile Gln Lys Pro Gln Met Tyr Val Tyr Ile Tyr Leu Phe Val Leu
1 5 10 15
Ile Ala Ala Gly Pro Val Asp Leu Asn Glu Asp Ser Glu Arg Glu Ala
20 25 30
Asn Val Glu Lys Glu Gly Leu Cys Asn Ala Cys Ala Trp Arg Gln Asn
35 40 45
Thr Arg Tyr Ser Arg Ile Glu Ala Ile Lys Ile Gln Ile Leu Ser Lys
50 55 60
Leu Arg Leu Glu Thr Ala Pro Asn Ile Ser Lys Asp Ala Ile Arg Gln
65 70 75 80
Leu Leu Pro Arg Ala Pro Pro Leu Arg Glu Leu Ile Asp Gln Tyr Asp
85 90 95
Val Gln Arg Asp Asp Ser Ser Asp Gly Ser Leu Glu Asp Asp Asp Tyr
100 105 110
His Ala Thr Thr Glu Thr Ile Ile Thr Met Pro Thr Glu Ser Asp Phe
115 120 125
Leu Met Gln Ala Asp Gly Lys Pro Lys Cys Cys Phe Phe Lys Phe Ser
130 135 140
Ser Lys Ile Gln Tyr Asn Lys Val Val Lys Ala Gln Leu Trp Ile Tyr
145 150 155 160
Leu Arg Ala Val Lys Thr Pro Thr Thr Val Phe Val Gln Ile Leu Arg
165 170 175
Leu Ile Lys Pro Met Lys Asp Gly Thr Arg Tyr Thr Gly Ile Arg Ser
180 185 190
Leu Lys Leu Asp Met Ser Pro Gly Thr Gly Ile Trp Gln Ser Ile Asp
195 200 205
Val Lys Thr Val Leu Gln Asn Trp Leu Lys Gln Pro Glu Ser Asn Leu
210 215 220
Gly Ile Glu Ile Lys Ala Leu Asp Glu Asn Gly His Asp Leu Ala Val
225 230 235 240
Thr Phe Pro Gly Pro Gly Glu Asp Gly Leu Asn Pro Phe Leu Glu Val
245 250 255
Lys Val Thr Asp Thr Pro Lys Arg Ser Arg Arg Asp Phe Gly Leu Asp
260 265 270
Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg Tyr Pro Leu Thr
275 280 285
Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile Ala Pro Lys Arg
290 295 300
Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe Val Phe Leu Gln
305 310 315 320
Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala Asn Pro Arg Gly Ser
325 330 335
Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro Ile Asn Met Leu
340 345 350
Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly Lys Ile Pro Ala Met
355 360 365
Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
370 375
<210> 12
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 12
ccctgcgccn ncggacnngc nnnaagnnna gccgcnngcn cacancacaa 50
<210> 13
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (28)..(28)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(31)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(36)
<223> n是NapdU
<400> 13
ccctgngaga cnngannnac gnnnagcngc naacangggg aaccacacaa 50
<210> 14
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(22)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 14
ccctgcgccn ncggacnngc nncaagnnna gccgcnngcn cacancacaa 50
<210> 15
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<400> 15
ccctgcgccn ncggacnngc nnnaagnnna gccgcnngcn cacaacacaa 50
<210> 16
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 16
ccctgngccn ncggacnngc nnnaagnnna gccgcnngcn cacancacaa 50
<210> 17
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 17
ccctgngccn ncagacnngc nnnaagnnna gccgcnngcn cacancacaa 50
<210> 18
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<400> 18
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<210> 19
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 19
ccctgcgccn ncggacnngc nnnaagnnna gccgcnngcn cacgncacaa 50
<210> 20
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(41)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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ccctgcgccn ncggacnngc nnnaagnnna gccgcnngcn nacancacaa 50
<210> 21
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 21
ccctgcgccn ncggacnngc nnnacgnnna gccgcnngcn cacancacaa 50
<210> 22
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(36)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 22
ccctgcgccn ncggacnngc nnnaagnnna gccgcncgcn cacancacaa 50
<210> 23
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (39)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 23
ccctgcgccn ncggacnngc nnnaagnnna gccgcnngnn cacancacaa 50
<210> 24
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(25)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (28)..(30)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (34)..(36)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (41)..(41)
<223> n是NapdU
<400> 24
ccctggnnga caaggnacng gacnngannn acgnnnagcc ncaagcacaa 50
<210> 25
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(12)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(19)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (28)..(30)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (37)..(37)
<223> n是NapdU
<400> 25
ccctgangac cnaggacnng cnnnacgnnn agcacgncga acaggcacaa 50
<210> 26
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> n是a或c
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(12)
<223> n是a或c
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 26
gacnngnnnn angnnnagc 19
<210> 27
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(35)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<400> 27
cgccnncgga cnngcnnnaa gnnnagccgc nngcncacan 40
<210> 28
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(17)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(35)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<400> 28
cgccnncgga cnngcnncaa gnnnagccgc nngcncacan 40
<210> 29
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (34)..(35)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<400> 29
cgccnncgga cnngcnnnaa gnnnagccgc nngnncacan 40
<210> 30
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(35)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<400> 30
cgccnncgga cnngcnnnaa gnnnagccgc nngcncacgn 40
<210> 31
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(31)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(35)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<400> 31
cgccnncgga cnngcnnnaa gnnnagccgc ncgcncacan 40
<210> 32
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(36)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<400> 32
cgccnncgga cnngcnnnaa gnnnagccgc nngcnnacan 40
<210> 33
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(35)
<223> n是NapdU
<400> 33
cgccnncgga cnngcnnnaa gnnnagccgc nngcncacaa 40
<210> 34
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(35)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<400> 34
ngccnncgga cnngcnnnaa gnnnagccgc nngcncacan 40
<210> 35
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(35)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<400> 35
ggccnncgga cnngcnnnaa gnnnagccgc nngcncacan 40
<210> 36
<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(35)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
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<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(19)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
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<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
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<220>
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<220>
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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ngagacnnga nnnacgnnna gcngcnaaca nggggaacnc 40
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<211> 40
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(31)
<223> n是NapdU
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ngagacnnga nnnacgnnna gnngcnaaca nggggaacca 40
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
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<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
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<223> n是NapdU
<220>
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<223> n是NapdU
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<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(9)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(16)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
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<223> n是NapdU
<220>
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<220>
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<223> n是NapdU
<220>
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<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(17)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(33)
<223> n是NapdU
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gngcanaagn nccgggngac nngannnaag nnnagccccc a 41
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(28)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (33)..(33)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (37)..(38)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
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<223> n是NapdU
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(12)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(16)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(22)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(28)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (30)..(30)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(41)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (49)..(49)
<223> n是NapdU
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(9)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(28)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(31)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (34)..(34)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(36)
<223> n是NapdU
<400> 65
gngagacnng cnnnaagnnn agccgcnngc ncanan 36
<210> 66
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(14)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(19)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(25)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (32)..(33)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(36)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(14)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(19)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(27)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (34)..(35)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (39)..(39)
<223> n是NapdU
<400> 67
gncgcnacgg acnngannna acgnnnnagc cgcnnacang ggaacca 47
<210> 68
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(15)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(27)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (29)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (32)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (37)..(37)
<223> n是NapdU
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<211> 36
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(14)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(25)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (32)..(33)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(36)
<223> n是NapdU
<400> 69
gcgccnncgg acnngcnnaa agnnnagccg cnngnn 36
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(12)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(16)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(28)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(36)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 70
gncgccnncg gnacnngcnn naccgnnnag ccacnnaacn cacan 45
<210> 71
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(9)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(17)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 71
gacggccnnc cggacnngac nnnacgnnna gccgccngcn cacan 45
<210> 72
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(12)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(25)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (29)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (32)..(33)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (37)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (43)..(43)
<223> n是NapdU
<400> 72
gngcnaggac nngacnnnaa cgnnnagcng cnnacangga acnc 44
<210> 73
<211> 43
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(15)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(20)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(26)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (33)..(33)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<400> 73
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(14)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(19)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(26)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (31)..(31)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (34)..(34)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (43)..(43)
<223> n是NapdU
<400> 74
gncgccncgg acnngcnnna agannnagcc ngcngcaaca can 43
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<211> 43
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<213> 人工序列
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<223> 合成
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<221> 尚未归类的特征
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<221> 尚未归类的特征
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<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<221> 尚未归类的特征
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<223> 合成
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<220>
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<220>
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<223> n是NapdU
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<221> 尚未归类的特征
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<223> 合成
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<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(9)
<223> n是NapdU
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<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(15)
<223> n是NapdU
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<223> 合成
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<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(7)
<223> n是NapdU
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<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<212> DNA
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<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(3)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<221> 尚未归类的特征
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<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<221> 尚未归类的特征
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
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<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成
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<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
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<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
<221> 尚未归类的特征
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<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<400> 91
ccctgcgccn ncggacnngc nnnaagnnna gccgcnng 38
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(36)
<223> n是NapdU
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
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<212> DNA
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<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<400> 95
ccctgcgccn ncggacnngc nnnaagnnna 30
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<212> DNA
<213> 人工序列
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<223> 合成
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<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<221> 尚未归类的特征
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<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (32)..(32)
<223> n是NapdU
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
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<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<400> 97
ccctgcgccn ncggacnngc nnnaagnnna gcc 33
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<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(3)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(15)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是NapdU
<400> 98
cnncggacnn gcnnnaagnn nagccg 26
<210> 99
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(1)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(19)
<223> n是NapdU
<400> 99
ncggacnngc nnnaagnnna gccg 24
<210> 100
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(17)
<223> n是NapdU
<400> 100
ggacnngcnn naagnnnagc cg 22
<210> 101
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(17)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(25)
<223> n是NapdU
<400> 101
ggacnngcnn naagnnnagc cgcnng 26
<210> 102
<211> 30
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(17)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(25)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (28)..(28)
<223> n是NapdU
<400> 102
ggacnngcnn naagnnnagc cgcnngcnca 30
<210> 103
<211> 24
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(17)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(24)
<223> n是NapdU
<400> 103
ggacnngcnn naagnnnagc cgcn 24
<210> 104
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 104
gacnngcnnn aagnnnagcc g 21
<210> 105
<211> 17
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(3)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(14)
<223> n是NapdU
<400> 105
cnngcnnnan gnnnagc 17
<210> 106
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 106
gacnngannn acgnnnagc 19
<210> 107
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 107
gacnngannn aagnnnagc 19
<210> 108
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 108
gacnngcnnn aagnnnagc 19
<210> 109
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 109
gacnngcnnn acgnnnagc 19
<210> 110
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(18)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(20)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(22)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(23)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(24)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(26)
<223> 可能存在或可能不存在
<400> 110
rwmccnngmm nnnaacmcrw nngnasgc 28
<210> 111
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(18)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(20)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(22)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(23)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(24)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(26)
<223> 可能存在或可能不存在
<400> 111
rwaccnngmm nnnaacmcrw nngnasgc 28
<210> 112
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(18)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(20)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(22)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(23)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(24)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(26)
<223> 可能存在或可能不存在
<400> 112
rwmccnngmm nnnaacmcgw nngnasgc 28
<210> 113
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(11)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(12)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(18)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(23)
<223> 可能存在或可能不存在
<400> 113
rmcnngmmnn naacmcrwnn nasgc 25
<210> 114
<211> 8
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(3)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(8)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<400> 114
cnngmnnn 8
<210> 115
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(3)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<400> 115
nnnagc 6
<210> 116
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(3)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(8)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(13)
<223> n如果存在是a、c、g、t或u；至多3个核苷酸可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<400> 116
cnngmnnnnn nnnnnnagc 19
<210> 117
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(16)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (25)..(27)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (32)..(32)
<223> n是NapdU
<400> 117
ctgtgcgnac ngacnngann nacgnnnagc gngccgaggc cacaa 45
<210> 118
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 示例性成熟人GDF11蛋白
<400> 118
Leu Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Ser Glu Ser Arg Cys Cys Arg
1 5 10 15
Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile
20 25 30
Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Gln Cys Glu Tyr
35 40 45
Met Phe Met Gln Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val Gln Gln Ala Asn
50 55 60
Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro
65 70 75 80
Ile Asn Met Leu Tyr Phe Asn Asp Lys Gln Gln Ile Ile Tyr Gly Lys
85 90 95
Ile Pro Gly Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
100 105
<210> 119
<211> 108
<212> PRT
<213> 智人
<220>
<221> 尚未归类的特征
<223> 示例性成熟人GDF8蛋白
<400> 119
Phe Gly Leu Asp Cys Asp Glu His Ser Thr Glu Ser Arg Cys Cys Arg
1 5 10 15
Tyr Pro Leu Thr Val Asp Phe Glu Ala Phe Gly Trp Asp Trp Ile Ile
20 25 30
Ala Pro Lys Arg Tyr Lys Ala Asn Tyr Cys Ser Gly Glu Cys Glu Phe
35 40 45
Val Phe Leu Gln Lys Tyr Pro His Thr His Leu Val His Gln Ala Asn
50 55 60
Pro Arg Gly Ser Ala Gly Pro Cys Cys Thr Pro Thr Lys Met Ser Pro
65 70 75 80
Ile Asn Met Leu Tyr Phe Asn Gly Lys Glu Gln Ile Ile Tyr Gly Lys
85 90 95
Ile Pro Ala Met Val Val Asp Arg Cys Gly Cys Ser
100 105
<210> 120
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(25)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (28)..(30)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (34)..(36)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (44)..(44)
<223> n是NapdU
<400> 120
ctgtgacnaa ngngaccgga gacnngcnnn acgnnnagcg accngcacaa 50
<210> 121
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(12)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (34)..(34)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 121
ctgtgangcc gnggacnngc nnnacgnnna gccncgcggg gagcncacaa 50
<210> 122
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(28)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (32)..(34)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (38)..(38)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (43)..(43)
<223> n是NapdU
<400> 122
ctgtgagagg aaanacgcgc cnngannnac gnnnagcngc ganaacacaa 50
<210> 123
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
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<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(17)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
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<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
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<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
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<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
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<221> 尚未归类的特征
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<220>
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<221> 尚未归类的特征
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<220>
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<223> n是NapdU
<220>
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<223> n是NapdU
<220>
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<223> n是NapdU
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(16)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (25)..(27)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (33)..(33)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (44)..(44)
<223> n是NapdU
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ctgtgnnagg ngccnngcnn nacgnnnagc ccnacgaaac gccngcacaa 50
<210> 128
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
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<220>
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (43)..(43)
<223> n是NapdU
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<210> 129
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(28)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (39)..(39)
<223> n是NapdU
<400> 129
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<210> 130
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<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(19)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
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<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (28)..(30)
<223> n是NapdU
<400> 130
ctgtgncnag gagcggcnng cnnnacgnnn agacggaccc cacgacacaa 50
<210> 131
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(26)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (30)..(32)
<223> n是NapdU
<400> 131
ctgtgagngn accncgcgcn ngannnacgn nnaggcgagg caggccacaa 50
<210> 132
<211> 45
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(15)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (29)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (37)..(37)
<223> n是NapdU
<400> 132
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<210> 133
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(19)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (28)..(30)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(41)
<223> n是NapdU
<400> 133
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<210> 134
<211> 52
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(26)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (30)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (42)..(43)
<223> n是NapdU
<400> 134
ctgtgnccac ncagccgacn ngannnacgn nnagcggcac cnnacaccac aa 52
<210> 135
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(16)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (25)..(27)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (37)..(38)
<223> n是NapdU
<400> 135
ctgtgcgnac ngacnngann nacgnnnagc ggcaccnnac accacaa 47
<210> 136
<211> 51
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(8)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(16)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (25)..(28)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (34)..(34)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (38)..(38)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (41)..(42)
<223> n是NapdU
<400> 136
ctgtgcgnac ngacnngann nacgnnnnag cgangcangc nngagccaca a 51
<210> 137
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (13)..(13)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(26)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (30)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 137
ctgtgcnaag acngcggacn ngannnaggn nnagccgcaa gaagncacaa 50
<210> 138
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 138
ccctgcgccn ncggacnnga nnnaagnnna gccgcnngcn cacancacaa 50
<210> 139
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 139
ccctgcgccn ncggacnngg nnnaagnnna gccgcnngcn cacancacaa 50
<210> 140
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (10)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (17)..(18)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(23)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (27)..(29)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (36)..(37)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (40)..(40)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (45)..(45)
<223> n是NapdU
<400> 140
ccctgcgccn ncggacnngc nnnaggnnna gccgcnngcn cacancacaa 50
<210> 141
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(2)
<223> n是a、g或c
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<400> 141
nncnngrnnn amgnnnags 19
<210> 142
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 142
gccnngannn acgnnnagc 19
<210> 143
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 143
cacnngannn acgnnnagg 19
<210> 144
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 144
gacnnggnnn acgnnnagc 19
<210> 145
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 145
gccnngcnnn acgnnnagc 19
<210> 146
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 146
gcanngannn acgnnnagc 19
<210> 147
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 147
ggcnngcnnn acgnnnaga 19
<210> 148
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 148
cgcnngannn aagnnnagg 19
<210> 149
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 149
aacnngannn aagnnnagg 19
<210> 150
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 150
gacnngannn aggnnnagc 19
<210> 151
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(18)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(20)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(22)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(23)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(24)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(26)
<223> 可能存在或可能不存在
<400> 151
rwmccnngmm nnnaacmcrw nngnasgs 28
<210> 152
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(18)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(20)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(22)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(23)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(24)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(26)
<223> 可能存在或可能不存在
<400> 152
rwaccnngmm nnnaacmcrw nngnasgs 28
<210> 153
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(2)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(4)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(7)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(13)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(18)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(20)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (21)..(22)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(23)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(24)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(24)
<223> n是a、c、g或t
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (26)..(26)
<223> 可能存在或可能不存在
<400> 153
rwmccnngmm nnnaacmcgw nngnasgs 28
<210> 154
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (7)..(7)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(11)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (12)..(12)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(14)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (16)..(16)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(18)
<223> 可能存在或可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (19)..(21)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (23)..(23)
<223> 可能存在或可能不存在
<400> 154
rmcnngmmnn naacmcrwnn nasgs 25
<210> 155
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (1)..(3)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<400> 155
nnnagg 6
<210> 156
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (4)..(5)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (8)..(10)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是NapdU
<400> 156
gacnngcnnn aagnnnagcc 20
<210> 157
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (5)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (15)..(17)
<223> n是NapdU
<400> 157
ggacnngcnn naagnnnagc c 21
<210> 158
<211> 48
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(9)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (18)..(19)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (22)..(24)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (28)..(30)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (35)..(35)
<223> n是NapdU
<400> 158
ctgtggagnc ncccgacnng annnacgnnn agcgngcgga ggccacaa 48
<210> 159
<211> 50
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(6)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (11)..(11)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (20)..(21)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (24)..(26)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (30)..(32)
<223> n是NapdU
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (37)..(37)
<223> n是NapdU
<400> 159
ctgtgnccac ncagccgacn ngannnacgn nnagcgngcg gaggccacaa 50
<210> 160
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列
<220>
<223> 合成
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (2)..(3)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (6)..(8)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (9)..(13)
<223> n如果存在是a、c、g、t或u；至多3个核苷酸可能不存在
<220>
<221> 尚未归类的特征
<222> (14)..(16)
<223> n是C-5修饰的嘧啶
<400> 160
cnngmnnnnn nnnnnnagg 19

Claims (58)

1.一种结合GDF11的适体，其中所述适体的基序如序列5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO:110)或5'-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGS-3’(SEQ IDNO:151)所示，其中：
每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶；
R是A或G：
每个W独立地且每次出现时是A、T或U；
每个M独立地且每次出现时是A或C；
每个S独立地且每次出现时是G或C；
每个n独立地且每次出现时是0或1；以及
每个m独立地且每次出现时是0或1。
2.如权利要求1所述的适体，其中所述适体以小于10nM的亲和力结合GDF11，其中在相同条件下所述适体以比对GDF11的所述亲和力弱至少10倍的亲和力结合GDF8或不结合GDF8。
3.如权利要求2所述的适体，其中所述适体以比对GDF11的所述亲和力弱至少20倍的亲和力结合GDF8。
4.如权利要求2所述的适体，其中所述适体以大于50nM的亲和力结合GDF8。
5.如权利要求1所述的适体，其中所述适体以小于8nM的亲和力结合GDF11。
6.如权利要求1所述的适体，其中所述适体以小于1nM的亲和力结合GDF11。
7.如权利要求1所述的适体，其中所述适体不结合GDF8。
8.如权利要求2所述的适体，其中使用包括聚阴离子抑制剂的结合测定来测定亲和力。
9.如权利要求8所述的适体，其中所述聚阴离子抑制剂选自硫酸葡聚糖、肝素、Z-嵌段、聚-dI/dC、超声处理或剪接的鲑鱼精子DNA、小牛胸腺DNA和dNTP。
10.如权利要求1所述的适体，其中所述适体的基序如选自以下的序列所示：
a)5′-RWnACnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO：111)；
b)5′-RWnACnCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPGnPASnGS-3’(SEQ ID NO：152)；
c)5′-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmGWnPPGnPASnGC-3’(SEQ ID NO：112)；
d)5′-RWnMCnCPPGMmMPPPAnACnMCmGWnPPGnPASnGS-3’(SEQ ID NO：153)；
e)5′-RMCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPPASnGC-3’(SEQ ID NO：113)；以及
f)RMCPPGMmMPPPAnACnMCmRWnPPPASnGS-3’(SEQ ID NO：154)。
11.如权利要求1至10中任一项所述的适体，其中如果R是G，则第一W是A，并且其中如果R是A，则所述第一W是C。
12.如权利要求1至10中任一项所述的适体，其中至少1个n是0。
13.如权利要求1至10中任一项所述的适体，其中至少2个n是0。
14.如权利要求1至10中任一项所述的适体，其中每个n是0。
15.如权利要求1至10中任一项所述的适体，其中至少1个n是1。
16.如权利要求1至10中任一项所述的适体，其中至少1个m是0。
17.如权利要求1至10中任一项所述的适体，其中至少1个m是1。
18.如权利要求1所述的适体，其中所述适体的基序如序列5’-CPPGMPPP-3’(SEQ IDNO:114)所示，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶，并且其中M是C或A。
19.如权利要求1所述的适体，其中所述适体的基序如序列5’-PPPAGC-3’(SEQ ID NO:115)或5’-PPPAGG-3’(SEQ ID NO:155)所示，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶。
20.如权利要求1所述的适体，其中所述适体的基序如序列5’-CPPGMPPPNxPPPAGC-3’(SEQ ID NO:160)或5’-CPPGMPPPNxPPPAGG-3’(SEQ ID NO:116)所示，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶，其中x是2、3、4或5，其中M是C或A，并且其中每个N独立地且在每次出现时选自A、C、G、T和U。
21.如权利要求20所述的适体，其中x是3或4。
22.如权利要求20所述的适体，其中Nx如序列5’-AAG-3’或5’-ACG-3’或5’-AGG-3’所示。
23.如权利要求1所述的适体，其中所述适体的基序如序列5’-NNCPPGRPPPAMGPPPAGS-3’(SEQ ID NO:141)所示，其中每个P独立地且每次出现时是C-5修饰的嘧啶，R是A或G；每个N独立地且每次出现时是A、G或C；M是A或C；并且S是G或C。
24.如权利要求1至10和18至23中任一项所述的适体，其中每个P独立地且在每次出现时选自：
5-(N-苄基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BndU)，
5-(N-苄基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-苄基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-苯乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(PEdU)，
5-(N-苯硫基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(ThdU)，
5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(iBudU)，
5-(N-酪氨酰基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(TyrdU)，
5-(N-3,4-亚甲基二氧基苄基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(MBndU)，
5-(N-4-氟苄基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(FBndU)，
5-(N-3-苯基丙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(PPdU)，
5-(N-咪唑基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(ImdU)，
5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-异丁基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(TrpdU)，
5-(N-R-苏氨酰基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(ThrdU)，
5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-色氨基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-[1-(3-三甲基铵)丙基]甲酰胺)-2'-脱氧尿苷氯化物，
5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)，
5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-[1-(2,3-二羟丙基)]甲酰胺)-2'-脱氧尿苷)，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NapdU)，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NEdU)，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NEdU)，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BFdU)，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BTdU)，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，以及
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2’-氟尿苷。
25.如权利要求1至10和18至23中任一项所述的适体，其中每个P独立地且在每次出现时选自：
5-(N-1-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)，
5-(N-1-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-1-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NapdU)，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NEdU)，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-1-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(2NEdU)，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-2-萘基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BFdU)，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，
5-(N-3-苯并呋喃基乙基甲酰胺)-2'-氟尿苷，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(BTdU)，
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷，以及
5-(N-3-苯并苯硫基乙基甲酰胺)-2’-氟尿苷。
26.如权利要求1至10和18至23中任一项所述的适体，其中至少1个P选自5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)、5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷和5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷。
27.如权利要求1至10和18至23中任一项所述的适体，其中每个P独立地选自5-(N-萘基甲基甲酰胺)-2'-脱氧尿苷(NapdU)、5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-O-甲基尿苷和5-(N-2-萘基甲基甲酰胺)-2'-氟尿苷。
28.如权利要求1至9中任一项所述的适体，其中所述适体如选自SEQ ID NO:12、13、15至109以及117至140的序列所示。
29.如权利要求1至9中任一项所述的适体，其中所述适体如选自SEQ ID NO:12、15、26、105至109以及142至150的序列所示。
30.如权利要求1至10和18至23中任一项所述的适体，其中所述适体由18至100个核苷酸组成，其中每个核苷酸可独立地是修饰的或未修饰的核苷酸。
31.如权利要求1至10和18至23中任一项所述的适体，其中所述适体由18至75个核苷酸组成，其中每个核苷酸可独立地是修饰的或未修饰的核苷酸。
32.如权利要求1至10和18至23中任一项所述的适体，其中所述适体由18至50个核苷酸组成，其中每个核苷酸可独立地是修饰的或未修饰的核苷酸。
33.如权利要求1至10和18至23中任一项所述的适体，其中所述适体包含可检测的标记。
34.如权利要求1至10和18至23中任一项所述的适体，其中GDF11是人GDF11并且GDF8是人GDF8。
35.如权利要求34所述的适体，其中GDF11是包含SEQ ID NO:118的序列的成熟人GDF11，并且GDF8是包含SEQ ID NO:119的序列的成熟人GDF8。
36.如权利要求1至35中任一项所述的适体制造用于检测包含蛋白质的样品中的GDF11的试剂或试剂盒的用途。
37.如权利要求36所述的用途，其中所述适体以比对GDF11的亲和力弱至少10倍的亲和力结合GDF8或不结合GDF8。
38.如权利要求1至35中任一项所述的适体制造用于确定包含蛋白质的样品是否包含GDF11的试剂或试剂盒的用途。
39.如权利要求38所述的用途，其中所述样品包含GDF8。
40.如权利要求38所述的用途，其中所述确定包括使所述样品与所述适体在严格条件下接触。
41.如权利要求40所述的用途，其中所述严格条件包括聚阴离子抑制剂。
42.如权利要求41所述的用途，其中所述聚阴离子抑制剂选自硫酸葡聚糖、肝素、Z-嵌段、聚-dI/dC、超声处理或剪接的鲑鱼精子DNA、小牛胸腺DNA和dNTP。
43.如权利要求38所述的用途，其中所述样品是来自人的样品。
44.如权利要求43所述的用途，其中所述样品选自血液、血清、血浆、唾液、尿液和组织样品。
45.如权利要求44所述的用途，其中所述组织样品选自心肌组织、骨骼肌组织、胰腺组织、软骨组织和神经组织。
46.如权利要求38所述的用途，其中所述蛋白质已与所述样品的至少一种其它组分分离。
47.如权利要求38所述的用途，其中所述蛋白质未与所述样品的其它组分分离。
48.一种检测样品中的GDF11的非诊断目的的方法，所述方法包括使来自所述样品的蛋白质与如权利要求1至35中任一项所述的适体接触。
49.一种确定样品是否包含GDF11的非诊断目的的方法，所述方法包括使来自所述样品的蛋白质与如权利要求1至35中任一项所述的适体接触。
50.一种组合物，其包含如权利要求1至35中任一项所述的适体和来自样品的蛋白质。
51.如权利要求50所述的组合物，其中所述样品包含GDF8。
52.如权利要求50所述的组合物，其包含聚阴离子抑制剂。
53.如权利要求52所述的组合物，其中所述聚阴离子抑制剂选自硫酸葡聚糖、肝素、Z-嵌段、聚-dI/dC、超声处理或剪接的鲑鱼精子DNA、小牛胸腺DNA和dNTP。
54.如权利要求50所述的组合物，其中所述样品是来自人的样品。
55.如权利要求54所述的组合物，其中所述样品选自血液、血清、血浆、唾液、尿液和组织样品。
56.如权利要求55所述的组合物，其中所述组织样品选自心肌组织、骨骼肌组织、胰腺组织、软骨组织和神经组织。
57.如权利要求50所述的组合物，其中所述蛋白质已与所述样品的至少一种其它组分分离。
58.如权利要求50所述的组合物，其中所述蛋白质未与所述样品的其它组分分离。
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