CN107058311B - 改善猪肉质的myh4基因分子标记及在猪遗传改良中的应用 - Google Patents
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Abstract
本申请涉及改善猪肉质的MYH4基因分子标记及在猪遗传改良中的应用，包括如下至少一种：(I)SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点的核苷酸Y；(II)SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点的核苷酸Y，(III)与SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2具有90％以上的一致性的核苷酸序列III上的SNP标记，与SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点的SNP标记具有一致性；其中，所述核苷酸序列III能够在所述猪中翻译出与如SEQ ID No.3具有相同功能蛋白质；(VI)与(I)至(III)中的至少一种中SNP的连锁不平衡程度r2≥0.8的SNP标记；所述Y选自C或T。
Description
技术领域
本申请涉及一种用于测定和/或遗传改良猪肉质性状的SNP标记。
背景技术
随着人们生活水平的不断提高，对肉品质的要求越来越高。由于高肌内脂肪含量而形成的“雪花肉”是肉中精品。肌内脂肪含量与猪肉的风味和食用价值密切相关，它影响猪肉的嫩度和多汁性。肌内脂肪含量越高，肉的多汁性、嫩度、香味及总体可接受性越高。因此，研究猪高肌内脂肪含量形成的遗传学基础，对改善猪肉品质及生产有利于人体健康的优质肉具有重要意义。
发明内容
申请人利用大规模莱芜猪群体，测定了覆盖莱芜猪全部血缘316头个体的背最长肌肌内脂肪含量，通过全基因组关联(GWAS)分析检测到了12号染色体上影响猪肌内脂肪含量的主效基因位点(QTL)，初步定位的区间大小为650kb。通过增加QTL区间内的SNP标记密度，利用单倍型分析和LDLA分析，将QTL区间缩小到525.99kb。对该区域开展重测序，多态位点的搜寻、鉴别及其与猪肌内脂肪含量相关性研究，基因表达分析及eQTL定位，多个群体的验证分析等分离到影响肌内脂肪含量等猪肉质性状的因果基因MYH4，以建立高效准确的基因育种技术开展猪肌内脂肪含量等猪肉质性状的选育工作。
因此，本申请之一提供了一种猪的SNP标记，所述SNP标记包括如下SNP标记中的至少一种：
(I)核苷酸序列I上的SNP标记，为SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点的核苷酸Y，所述Y选自C或T；SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点对应于10.2版本国际猪基因组的12号染色体上的从5’端起的第58244116位点；
(II)核苷酸序列II上的SNP标记，为SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点的核苷酸Y，所述Y选自C或T；SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点对应于10.2版本国际猪基因组的12号染色体上的从5’端起的第58244116位点；
(III)与SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2所示的核苷酸序列具有90％以上的一致性的核苷酸序列III上的SNP标记，与SEQ ID No.1所示的核苷酸序列上的从5’端起的第11031位点的SNP标记具有一致性；其中，所述核苷酸序列III能够在所述猪中翻译出与如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列具有相同功能蛋白质；
(VI)核苷酸序列VI上的SNP标记，其为与(I)至(III)中的至少一种SNP的连锁不平衡程度r2≥0.8的SNP标记。
上述核苷酸序列I如SEQ ID No.1所示；上述核苷酸序列II如SEQ ID No.2所示。
对于上述(III)的情况，本领域技术人员容易知道，生物体内的DNA序列具有自然突变或诱发突变的特点，因此，不同的猪品系、不同的猪品种，甚至是不同的猪个体内的DNA序列可能并不完全相同，而可能存在碱基颠换、转换、移码、缺失和插入的情况。当在其他猪品系、猪品种或猪个体中的对应于10.2版本国际猪基因组的12号染色体上MYH4基因中的SNP标记位点以外的碱基发生碱基颠换和/或转换时，不会影响所述SNP标记的位置；但是当在其他猪品系、猪品种或猪个体中的对应于10.2版本国际猪基因组的12号染色体上MYH4基因中的SNP标记位点以外的碱基发生移码、缺失和插入中的至少一种情况时，就可能导致所述SNP标记的位置，此时，可通过与所述SNP标记位点相邻的一个或多个碱基序列来确定所述SNP标记在这种情况下所处的位置。
本申请之二提供了一种核酸序列，所述核酸序列为包含如本申请之一所述的SNP标记的核酸序列，所述核酸序列选自DNA序列、cDNA序列和RNA序列中的至少一种。
所述核酸序列位于10.2版本国际猪基因组的12号染色体上。举例来说，所述核酸序列只要包括所述的SNP标记，不论其长度是多少bp，例如其长度可以是5bp、6bp、7bp、8bp、9bp、10bp、15bp、20bp、30bp、50bp、80bp、100bp、120bp、150bp、180bp、200bp、250bp、300bp、400bp、500bp、600bp、700bp、800bp、1000bp、1200bp、1500bp、2000bp等等，均是本申请所要求保护的核酸序列，但所述核苷酸序列并不限于所列举的长度。另外，所述SNP标记一般位于所选定的所述的核酸序列的中心位置或比较靠近中心的位置，例如，在20bp的选定片段中，所述SNP标记一般在这个20bp的DNA片段中的第7-14位中的一个位置；在1500bp的DNA片段中，所述SNP标记所处的位置的选择余地大大增大，其可以是在第100-1400位中的一个位置，优选在300-1200位中的一个位置，更优选在500-700位中的一个位置，这样设计的目的是有利于更加准确的检测所述的SNP标记；但是，在检测技术特别灵敏和/或特异性非常强的情况下，所述SNP标记也可以靠近所选定的核酸序列的两端中的一端，甚至是位于第一位或者末位。
在一个具体实施方式中，所述核酸序列具有5bp至26560bp。此时，所述核酸序列可以包括如SEQ ID No.1所示的全部核苷酸序列。
在一个具体实施方式中，所述核酸序列具有5bp至10000bp。此时，所述核酸序列可以为如SEQ ID No.1所示的部分核苷酸序列。所述核酸序列也可以为如SEQ ID No.2所示的部分核苷酸序列
在一个具体实施方式中，所述核酸序列具有5bp至5928bp。此时，所述核酸序列可以为如SEQ ID No.1所示的部分核苷酸序列。所述核酸序列也可以为如SEQ ID No.2所示的部分核苷酸序列。
在一个具体实施方式中，所述核酸序列选自SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2。
在一个具体实施方式中，所述核酸序列具有5bp至1000bp。此时，所述核酸序列可以为如SEQ ID No.1所示的部分核苷酸序列。所述核酸序列也可以为如SEQ ID No.2所示的部分核苷酸序列。
在一个具体实施方式中，所述核酸序列具有5bp至500bp。此时，所述核酸序列可以为如SEQ ID No.1所示的部分核苷酸序列。所述核酸序列也可以为如SEQ ID No.2所示的部分核苷酸序列。
在一个具体实施方式中，所述核酸序列具有5bp至300bp。此时，所述核酸序列可以为如SEQ ID No.1所示的部分核苷酸序列。所述核酸序列也可以为如SEQ ID No.2所示的部分核苷酸序列。
本申请之三提供了一种氨基酸序列，所述氨基酸序列由包含如本申请之一所述SNP标记的核酸序列编码得到，与所述SNP标记相对应的氨基酸O，所述O选自丙氨酸或缬氨酸；且当所述SNP标记为T时，其对应的氨基酸为缬氨酸；当所述SNP标记为C时，其对应的氨基酸为丙氨酸；优选所述核酸序列为能够在所述猪中翻译出与如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列具有相同功能蛋白质的核酸序列；优选所述氨基酸序列为SEQ ID No.3；其中，在如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列，氨基酸O位于第576位。
本申请之四提供了如本申请之一所述的SNP标记、本申请之二所述的核酸序列和如本申请之三所述的氨基酸序列中至少一种在测定和/或遗传改良猪肉质性状中的应用，所述猪肉质性状包括肌内脂肪含量、大理石纹、肌肉红度、肌肉黄度、肌肉亮度、肌肉纤维类型和水分含量中的至少一种。利用本申请之一(VI)的分子标记中的至少一种来检测猪肉质性状优劣时也能达到80％及以上的准确率，这些分子标记都是与例如(I)的因果突变位点相关的。
在一个具体实施方式中，遗传改良猪肉质性状的种猪选自莱芜猪、二花脸、梅山猪、陆川猪、民猪、米猪、淮猪、河套大耳猪、玉山黑猪、滇南小耳猪、马身猪、藏猪、八眉猪、蓝塘猪中的至少一种。
本申请之五提供了一种猪的遗传改良的方法，所述方法包括：确定种猪核心群中的种猪的如本申请之一所述的SNP标记，并根据所述SNP标记做出相应的选择：
对于(I)，在所述种猪核心群中选择在所述SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点为TT和TC基因型的种猪个体，淘汰在该位点为CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；优选在所述SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点为TT基因型的种猪个体，淘汰在该位点为TC和CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；
对于(II)，在所述种猪核心群中选择在所述SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点为TT和TC基因型的种猪个体，淘汰在该位点为CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；优选在所述SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点为TT基因型的种猪个体，淘汰在该位点为TC和CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；
对于(III)，在所述种猪核心群中选择在所述核苷酸序列III上的SNP标记位点为TT和TC基因型的种猪个体，淘汰在该位点为CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；优选在所述核苷酸序列III上的SNP标记位点为TT基因型的种猪个体，淘汰在该位点为TC和CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；
对于(VI)，在所述种猪核心群中选择在所述核苷酸序列VI上的SNP标记位点与前述(I)至(III)中的至少一种具有一致基因型的种猪个体，淘汰在该位点与前述(I)至(III)中的至少一种不具有一致基因型的种猪个体。
在一个具体实施方式中，利用分析所述种猪的核酸序列来确定所述种猪的如本申请之一所述的SNP标记，其中所述核酸序列选自如本申请之二所述的核酸序列；和/或利用分析所述种猪的氨基酸序列来确定所述种猪的如本申请之一所述的SNP标记，其中所述氨基酸序列选自如本申请之三所述的氨基酸序列。例如，可以通过高保真的PCR扩增，及之后的测序分析来确定通过PCR扩增出的核酸序列中的所述SNP标记。使用的引物对可以如SEQID No.4(5’-CCTAGAAATGCTTTTGGTAAGTG-3’)和SEQ ID No.5(5’-TCAGAGTTGGATTTTCCTATGCC-3)所示。或分析所述种猪的氨基酸序列来确定其属于本申请之三所述的氨基酸序列的哪一种，并通过该种猪的氨基酸序列来确定所述种猪的如本申请之一所述的SNP标记。
本申请之六提供了一种确定猪肉质性状优劣的方法，所述方法包括：确定所述猪的如本申请之一所述的SNP标记，并根据所述SNP标记确定所述猪肉质性状：
对于(I)，所述猪肉质性状从优到劣，以所述SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点的基因型排序依次为：TT基因型、TC基因型和CC基因型；
对于(II)，所述猪肉质性状从优到劣，以所述SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点的基因型排序依次为：TT基因型、TC基因型和CC基因型；
对于(III)，所述猪肉质性状从优到劣，所述核苷酸序列III上的所述SNP基因型排序依次为：TT基因型、TC基因型和CC基因型；
对于(VI)，所述猪肉质性状从优到劣，所述核苷酸序列VI上的所述SNP基因型排序与(I)至(III)中的至少一种基因型具有一致性；
所述猪肉质性状包括肌内脂肪含量、大理石纹、肌肉红度、肌肉黄度、肌肉亮度、肌肉纤维类型和水分含量中的至少一种，且肌内脂肪含量更高者为优，大理石纹评分更高者为优，肌肉红度数值更高者为优，肌肉黄度数值更高者为优，肌肉亮度数值更高者为优；I型和IIa型肌肉纤维更多者为优；水分含量更低者为优。
优选地，在一个具体实施方式中，利用分析所述猪的核酸序列来确定所述猪的如本申请之一所述的SNP标记，其中所述核酸序列选自如本申请之二所述的核酸序列。
本申请之七提供了一种改善猪肉品质的猪新品系和/或猪新品种建立的方法，其包括如下步骤：对于如本申请之一所述SNP标记的基因型为CC或TC的猪，通过定点突变将其中的CC基因型或TC基因型突变为TT基因型。
优选地，对于(I)，将SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点的核苷酸C突变为T；对于(II)，将SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点的核苷酸C突变为T；对于(III)，将核苷酸序列III上的SNP标记位点的核苷酸C突变为T；对于(VI)，将核苷酸序列VI上的SNP标记位点的核苷酸突变为与前述(I)至(III)中的至少一种核苷酸突变具有一致性的核苷酸。
优选地，利用转基因的方法或基因编辑的方法进行突变。
更优选地，利用CRISPR/Cas9的基因编辑方法进行突变。
在一个具体实施方式中，通过对所述猪的体细胞进行定点编辑突变后，通过克隆获得目标猪肉质性状的猪新品系和/或猪新品种。
此外，常用的检测SNP标记的方法包括：1)基于杂交方法，其至少分为a)利用△Tm法，b)杂交加荧光探针的方法；2)基于酶的方法，其至少分为a)DNA聚合酶法，例如利用DNA聚合酶进行PCR扩增，b)连接酶法，c)限制性内切酶法，如寻找因果突变位点周围的限制性酶切位点进行酶切扩增，从而获知因果突变位点基因型；d)外切酶FEN法，e)RNase H法；3)电泳法，其至少分为SSCP单链构象多态性和DGGE/TGGE变性梯度凝胶电泳；4)直接测序法。这些方法都可以用来检测本申请的SNP标记。
本申请的有益效果：
猪肉质性状为重要的经济性状，而肌内脂肪性状又是肉质性状的重要指标。本研究所鉴别的影响肌内脂肪含量的因果突变位点，可以直接应用于含该因果突变位点的中国地方猪种肉质性状的遗传改良和开发利用。而对不含该因果突变位点的杜长大商品猪等，可以采用基因编辑技术，构建新的品系解决商品猪肉质较差的现状。在追求优良猪肉品质的今天，具有重大的商业价值，能产生巨大的经济效益。
附图说明
图1显示了莱芜猪肌内脂肪含量的全基因组关联(GWAS)分析图；其中：横坐标表示猪的染色体编号，纵坐标表示-logP值。
图2显示了莱芜猪QTL精细定位及单倍型共享分析图；
(A)莱芜猪IMF QTL区域内关联性分析。最高点用红色表示，与最高点不同的LD值区域用不同颜色表示，灰色线标注的区域是根据LOD值下降2和r2≥0.8确定的525.99-kb置信区间；
(B)置信区间内含两个明显的单倍型，该共享单倍型含8个SNPs，共128.15kb；
(C)单倍型1的IMF含量极显著高于单倍型2，表明单倍型1对应于Q；
(D)红框标注的为128.15kb区域内的基因。
图3显示了莱芜猪QTT及eQTL定位结果；
(A)IMF含量分布图(校正性别和批次的值)，T代表高IMF含量；
(B)MYH4基因表达与IMF含量显著相关。X轴代表MYH4的表达量，Y轴代表IMF含量；
(C)莱芜猪区域eQTL定位结果。X轴代表SNP的位置，Y轴代表–log10(P值)，最高点用红色表示；
(D)C代表MYH4基因表达量高，Y轴代表校正性别和批次后的MYH4表达量。
图4显示了莱芜猪不同基因型个体背最长肌肌纤维类型分析。
具体实施方式
以下通过优选的实施例的形式对本申请的上述内容再作进一步的详细说明，但不构成对本申请的限制。
本申请中的嵌合家系是指利用4个表型差异显著的欧美猪种(皮特兰，杜洛克，长白和大白)与4个表型显著差异的亚洲(中国)种猪(巴马香猪，莱芜猪，藏猪和二花脸猪)通过多世代随机交配产生的家猪嵌合群体。
除非特别说明，文中表示突变的“>”是指前后两个单核苷酸互变，例如A>C或C>A均是指该位点上A与C互相突变。
针对种猪核心群个体，利用上述的PCR扩增鉴别MYH4的g.58244116C>T突变，选择有利的等位基因型对个体留种，群体继代选育后提高肌内脂肪含量，大理石纹，肌肉的红度、黄度和亮度，减少水分含量，以此改善肉质。
实施例
1.实验动物
本申请使用的实验猪群体为莱芜猪。莱芜猪是中国地方猪种，原产地为山东省莱芜市。本申请使用以12头莱芜公猪和45头莱芜母猪交配获得的316头后代为实验动物，在300±5日龄进行屠宰测定。
2.实验方法
在猪屠宰后取11至14肋骨间背最长肌，用Minolta色度仪CM-2600d/2500d测定肌肉亮度(L*)、肌肉红度(a*)和肌肉黄度(b*)；用美国国家猪生产联合会(NPPC)制作的主观评分板判定猪肉的颜色(评分板共有6个值，分别为1-6；其中1＝苍白，6＝暗黑)和猪肉的大理石纹(评分板共有10个值，分别为1-10；其中1＝稀少，10＝极丰富)；用常规烘箱烘干法和索氏萃取法分别测定肉样的水分和肌内脂肪(IMF)含量；利用ATP酶法进行肌纤维染色。
3.猪全基因组60K SNP判型
采集上述莱芜猪每头个体一小块耳样，用标准苯酚-氯仿法提取全基因组DNA，经Nanodrop-ND1000分光光度计检测浓度和质量后统一稀释至50ng/μl，在IlluminaBeadstation平台上根据标准流程进行猪全基因组60K SNP芯片(Illumina，美国)基因型判定。利用R语言GenABEL包中checkmarker对所有样本60K芯片扫描分型数据进行质量控制，剔除检出个体率低于90％、家系孟德尔错误率高于0.1、最小等位基因频率小于0.01，且哈代-温伯格平衡显著性水平高于10-6的SNP，最终得到49452个SNP的有效基因型数据。
4.全基因组关联(GWAS)分析
为了消除群体层化效应，本申请采用线性混合模型单点回归分析并结合R程序中的GenABEL软件包进行GWAS分析，分析模型中利用个体间基因组的相似度校正层化效应。基因组显著水平采用保守的Bonferroni校正方法确定，即基因组显著水平阈值为1.01×10-6(0.05/49452)。
GWAS分析结果如图1所示。从图中可知，在12号染色体鉴别到极显著影响肌内脂肪含量的基因位点，关联最强SNP为ALGA0067072(P＝1.75×10-12)，其位置对应于国际猪基因组参考序列(Sscrofa genome Assembly 10.2版本，简称参考序列)12号染色体的57.83Mb处。通过LOD(似然函数比值的对数)值下降2的方法，将莱芜猪群体的QTL置信区间确定为57.83-58.48Mb，即猪的12号染色体(SSC12)上影响肌内脂肪含量的主效基因定位在此650kb长的染色体区域内。
5.精细定位
为了进一步缩小QTL置信区间，申请人根据6头莱芜猪重测序获得的DNA序列与参考序列比对，在QTL区域选择了127个SNP进行质谱分型，使区域内标记密度达到了每10Kb含1个判型SNP。对得到的质谱分型结果进行质控后和60K质控后的数据进行合并，用于后续分析。
重新对增加标记密度后的基因型与IMF进行全基因组关联分析，结果表明与IMF关联最强SNP为rs49，位于12号染色体58.36Mb处，P值为4.81×10-15。最强关联SNP rs49解释的表型变异为34.7％，根据关联最强SNP LOD下降2和r2≥0.8确定的QTL置信区间为525.99kb(图2A)。即猪的12号染色体(SSC12)上影响肌内脂肪含量的主效基因精细定位在此525.99kb长的染色体区域内。
6.单倍型分析
针对这525.99Kb的QTL区域，本申请在316头莱芜猪中开展了单倍型共享分析。结果如图2B所示，结果表明，大部分个体共享了两种单倍型中的其中之一。该单倍型区域大小为128.15Kb，包含了8个SNP。我们计算了两种单倍型校正后的IMF表型值和所有316头莱芜猪校正后的平均表型值，结果如图2C，单倍型1、单倍型2和所有316头莱芜猪的平均IMF表型值分别为：11.80％±0.24％、7.01％±0.30％和8.74％±0.36％。携带单倍型1单倍型的莱芜猪肌内脂肪含量极显著高于携带单倍型2单倍型的莱芜猪，因此单倍型1对应的QTL基因型应该为Q，而单倍型2则为q。这128.15Kb的单倍型区域仅仅只有MYH4这一个基因(图2D)，由此确定肌球蛋白重链4(myosin heavy chain 4,MYH4)是一个强候选基因。
7.目标区域重测序
根据Ensembl网站(http://asia.ensembl.org/index.html)上目标区域约526kb的猪基因组序列，用Primer3.0在线软件(http://frodo.wi.mit.edu/)设计引物(SEQ IDNo.6至SEQ ID No.121)，对实验莱芜猪群体中携带不同QTL基因型的25个个体进行重测序。重测序1使用L001-FP和L001-RP引物对，测序获得的片段大小为10259bp；重测序2使用L003-FP和L003-RP引物对，测序获得的片段大小为7947bp；重测序3使用L004-FP和L004-RP引物对，测序获得的片段大小为11606bp；重测序4使用L006-FP和L006-RP引物对，测序获得的片段大小为11898bp；重测序5使用L011-FP和L011-RP引物对，测序获得的片段大小为9824bp；重测序6使用L013-FP和L013-RP引物对，测序获得的片段大小为9847bp；重测序7使用L014-FP和L014-RP引物对，测序获得的片段大小为13314bp；重测序8使用L016-FP和L016-RP引物对，测序获得的片段大小为9993bp；重测序9使用L017-FP和L017-RP引物对，测序获得的片段大小为10776bp；重测序10使用L019-FP和L019-RP引物对，测序获得的片段大小为10337bp；重测序11使用L020-FP和L020-RP引物对，测序获得的片段大小为10370bp；重测序12使用L021-FP和L021-RP引物对，测序获得的片段大小为10367bp；重测序13使用L023-FP和L023-RP引物对，测序获得的片段大小为9702bp；重测序14使用L024-FP和L024-RP引物对，测序获得的片段大小为9355bp；重测序15使用L025-FP和L025-RP引物对，测序获得的片段大小为10254bp；重测序16使用L028-FP和L028-RP引物对，测序获得的片段大小为13586bp；重测序17使用L030-FP和L030-RP引物对，测序获得的片段大小为11005bp；重测序18使用L031-FP和L031-RP引物对，测序获得的片段大小为9096bp；重测序19使用L034-FP和L034-RP引物对，测序获得的片段大小为10106bp；重测序20使用L038-FP和L038-RP引物对，测序获得的片段大小为10173bp；重测序21使用L043-FP和L043-RP引物对，测序获得的片段大小为12841bp；重测序22使用L044-FP和L044-RP引物对，测序获得的片段大小为10088bp；重测序23使用L045-FP和L045-RP引物对，测序获得的片段大小为10077p；重测序24使用L046-FP和L046-RP引物对，测序获得的片段大小为10040bpp；重测序25使用L047-FP和L047-RP引物对，测序获得的片段大小为13038bp；重测序26使用L048-FP和L048-RP引物对，测序获得的片段大小为10351bp；重测序27使用L049-FP和L049-RP引物对，测序获得的片段大小为6681bp；重测序28使用L050-FP和L050-RP引物对，测序获得的片段大小为8390bp；重测序29使用L051-FP和L051-RP引物对，测序获得的片段大小为7812bp；重测序30使用L053-FP和L053-RP引物对，测序获得的片段大小为9509bp；重测序31使用L055-FP和L055-RP引物对，测序获得的片段大小为8134bp；重测序32使用L056-FP和L056-RP引物对，测序获得的片段大小为7412bp；重测序33使用L058-FP和L058-RP引物对，测序获得的片段大小为6522bp；重测序34使用L059-FP和L059-RP引物对，测序获得的片段大小为6572bp；重测序35使用L060-FP和L060-RP引物对，测序获得的片段大小为7739bp；重测序36使用L065-FP和L065-RP引物对，测序获得的片段大小为8491bp；重测序37使用L069-FP和L069-RP引物对，测序获得的片段大小为13025bp；重测序38使用L070-FP和L070-RP引物对，测序获得的片段大小为10290bp；重测序39使用L071-FP和L071-RP引物对，测序获得的片段大小为10744bp；重测序40使用L073-FP和L073-RP引物对，测序获得的片段大小为7643bp；重测序41使用L075-FP和L075-RP引物对，测序获得的片段大小为9272bp；重测序42使用L077-FP和L077-RP引物对，测序获得的片段大小为6185bp；重测序43使用L078-FP和L078-RP引物对，测序获得的片段大小为8879bp；重测序44使用L080-FP和L080-RP引物对，测序获得的片段大小为9506bp；重测序45使用L082-FP和L082-RP引物对，测序获得的片段大小为9159bp；重测序46使用L084-FP和L084-RP引物对，测序获得的片段大小为10053bp；重测序47使用L086-FP和L086-RP引物对，测序获得的片段大小为8675bp；重测序48使用L087-FP和L087-RP引物对，测序获得的片段大小为6329bp；重测序49使用L088-FP和L088-RP引物对，测序获得的片段大小为10548bp；重测序50使用L089-FP和L089-RP引物对，测序获得的片段大小为11651bp；重测序51使用L090-FP和L090-RP引物对，测序获得的片段大小为5421bp；重测序52使用L091-FP和L091-RP引物对，测序获得的片段大小为11376bp；重测序53使用L092-FP和L092-RP引物对，测序获得的片段大小为10603bp；重测序54使用L093-FP和L093-RP引物对，测序获得的片段大小为8701bp；重测序55使用L094-FP和L094-RP引物对，测序获得的片段大小为7599bp；重测序56使用L095-FP和L095-RP引物对，测序获得的片段大小为6061bp；重测序57使用L096-FP和L096-RP引物对，测序获得的片段大小为10897bp；重测序58使用L097-FP和L097-RP引物对，测序获得的片段大小为10868bp。
50μL的聚合酶链式反应(PCR)反应体系中，包括100ng猪基因组DNA，2.5mM MgCl2，0.4mM dNTP，使用上述设计的58对正反向引物各20pmol，2.5单位DNA聚合酶(La Taq酶)及1×La PCR buffer(缓冲液)(Takara公司)。PCR扩增条件为：94℃2min；98℃10s，68℃8min，30个循环；最后在72℃延伸10min。PCR扩增产物均匀混合后，委托诺禾致源公司进行测序和de nove组装，未测通的序列采用sanger测序，最终分析得到131个完全符合QTL基因型的SNP。在这131个SNP中，有7个SNP在本申请精细定位第一阶段已经分型，我们对剩下的124个SNP在316头莱芜猪中进行质谱分型，得到的基因分型数据整合至前面已有的基因型数据中，然后与肌内脂肪含量进行关联分析。结果表明12号染色体上影响肌内脂肪含量的最强SNP位点为g.58244116C>T(P＝2.86×10-16)，其位置对应于国际猪基因组参考序列(Sscrofa genome Assembly 10.2版本)12号染色体的58.24Mb处。
8.因果基因MYH4的确定
8.1目标区域内候选基因
在上述525.99kb区域内包含了9个功能基因，分别是MYH13、MYH1、SCO1、ADPRM、TMEM220、MYH3、MYH2、MYH4和SHISA6。
8.2候选基因表达量与肌内脂肪含量的关联分析(QTT)及表达QTL(eQTL)定位
从135头莱芜猪背最长肌中提取总RNA，采用qRT-PCR技术检测肌细胞中上述9个候选基因的表达量，分析各基因的表达量与肌内脂肪含量的关联性。结果如图3所示，表明在上述9个候选基因中，MYH4基因的RNA转录水平与肌内脂肪含量之间有最强的相关性，相关系数为-0.39(P＝3.53×10-6)，因此确定MYH4是影响猪肌内脂肪含量的因果基因。结合135个个体的所有SNP基因型分型数据，通过关联分析发现与肌内脂肪含量关联性最强的SNP(g.58244116C>T)也是影响MYH4基因表达最强的SNP。基于以上结果，申请人确定g.58244116C>T位点是影响猪肌内脂肪含量的因果突变位点。
9.因果突变位点g.58244116C>T在不同猪群体中的验证分析
为了进一步验证g.58244116C>T为因果突变位点，即为了进一步验证g.58244116C>T的因果突变在不同的猪群体中具有广泛性，本实验室采集了419头鲁莱猪、821头嵌合家系F6群体和77头玉山黑猪×杜洛克群体的肌肉样，按照上面的方法进行DNA的提取和肌内脂肪表型的测定。对于鲁莱猪群体和嵌合家系F6群体，对莱芜猪中所有符合QTL基因型的131个SNP用质谱分型，而玉山猪×杜洛克群体则只检测了g.58244116C>T及周边几个位点的基因型。结果显示，在三个群体中g.58244116C>T均是关联最强位点(表1)。这进一步佐证了g.58244116C>T是影响肌内脂肪含量的因果突变位点。因此，申请人进一步确证g.58244116C>T是影响肌内脂肪含量的因果突变。
表1.g.58244116C>T与不同群体肌内脂肪含量的关联分析
10.MYH4基因及其因果突变位点g.58244116C>T对莱芜猪肉质性状的影响分析
利用中国地方猪种(莱芜猪群体)为实验动物。316头莱芜猪饲养到300日龄后屠宰，分别测定每个个体的肉质性状。采用PCR扩增和测序对这316头莱芜猪个体开展g.58244116C>T位点的基因型判定。然后利用GenABEL软件进行基因型对表型的影响效应分析。结果表明在莱芜群体中，g.58244116C>T位点与肌内脂肪含量表型呈极显著相关性：TT基因型个体比CC基因型个体平均肌内脂肪含量值高6.5％。这说明该位点的效应与QTL导致肌内脂肪含量升高的效应相符。
申请人进一步分析了g.58244116C>T位点对莱芜猪的其它指标的影响。结果如表2所示，发现TT型个体背最长肌的大理石纹，肌肉的红度、黄度和亮度均比CC型个体提高，且肌肉的水分含量降低。而对于脂肪沉积和生长等其他性状，并未检测到显著相关(P>0.05)。因此，g.58244116C>T的T(即Q)等位基因对大理石纹，肌肉的红度、黄度、亮度和水分含量等多个肉质指标有显著影响，但不影响脂肪沉积和生长等其他性状。
表2.g.58244116C>T突变位点对肉质性状的影响效应。
注：表型数据用lsmeans方法计算。
11.MYH4基因及其因果突变位点g.58244116C>T显著提高鲁莱猪、嵌合家系F6和玉山黑猪×杜洛克猪肌内脂肪含量
利用鲁莱猪、嵌合家系F6和玉山黑猪×杜洛克群体为实验动物。采集了419头鲁莱猪、821头嵌合家系F6和77头玉山黑猪×杜洛克猪，分别测定每个个体的肌内脂肪含量。采用PCR扩增对这419头鲁莱猪、821头嵌合家系F6和77头玉山黑猪×杜洛克猪开展g.58244116C>T位点的基因型判定。然后利用GenABEL软件进行基因型对表型的影响效应分析。结果表明在三个猪群体中，g.58244116C>T位点与肌内脂肪含量呈极显著相关性(见表1)。在鲁莱群体中，TT基因型个体比CC基因型个体平均肌内脂肪含量值高5.73％；在嵌合家系F6群体中，TT基因型个体比CC基因型个体平均肌内脂肪含量值高2.22％；在玉山黑猪×杜洛克猪群体中，CT基因型个体比CC基因型个体平均肌内脂肪含量值高1.79％。这说明该位点的效应与莱芜群体QTL导致肌内脂肪含量升高的效应相符。
12.MYH4基因及其因果突变位点g.58244116C>T影响背最长肌肌纤维类型
基于g.58244116C>T基因型，我们选择了6头TT和5头CC基因型的莱芜猪背最长肌进行肌纤维染色(ATP酶法)。结果如图4所示，肌纤维类型分析发现TT型莱芜猪中I型肌纤维和IIA型肌纤维显著高于CC型个体，而IIB型肌纤维则比CC型莱芜猪显著减少。这表明，g.58244116C>T不仅增加肌内脂肪含量还影响肌纤维类型，该突变会导致背最长肌中的ⅡB型肌纤维显著减少，而I型肌纤维和IIA型肌纤维显著增加。
13.连锁不平衡分析
申请人利用R语言中的LD heatmap软件包计算莱芜猪群体中不同标记之间的连锁不平衡程度(r2)。以r2≥0.8为阈值，获得MYH4基因的突变位点g.58244116C>T周边的SNP标记。同时，GWAS分析证实r2≥0.8的所有分子标记均与肌内脂肪含量达到基因组显著水平以上的相关，而且它们与表型相关程度的高低取决于它们与基因因果突变位点g.58244116C>T紧密连锁的程度。由此可知，与MYH4的突变位点g.58244116C>T连锁程度r2≥0.8的分子标记也可以作为有效的肉质育种分子标记。
与主效编码基因MYH4的因果突变位点g.58244116C>T紧密连锁程度r2≥0.8(即分子标记在群体遗传学上趋于共分离的状态)的分子标记，均与大理石纹，肌肉的红度、黄度、亮度和水分含量等肉质性状显著关联，所以MYH4及其凡是与MYH4因果突变g.58244116C>T位点紧密连锁r2≥0.8的分子标记都可作为种猪肉质性状遗传改良的分子标记，均应在本专利保护的范围之内。
虽然本申请已经参照其优选地具体实施方式进行了描述，但是本领域的技术人员应该理解在没有脱离本申请的真正的精神和范围的情况下，可以进行的各种改变。例如，可以对本申请的主体、精神和范围进行多种改变以适应特定的情形、材料、材料组合物或方法步骤。所有的这些改变均包括在本申请明的权利要求的范围内。并且利用上述揭示的技术内容做出些许的变动或修饰均等同于等效实施案例，均属于技术方案范围内。
LHA1760245 核 苷 酸 序 列 表
<110> 江西农业大学
<120> 改善猪肉质的MYH4基因分子标记及在猪遗传改良中的应用
<130> LHA1760245
<160> 121
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 26554
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 1
TGGTAACATA AGAGGTAAGA GTAATTTATT ATTACACTCT CAAGAACAGG GAGATGTCTA 60
TACTGCTAAG TCTTAAAGAA CTCCCGTCTC ATCTTCTAGT TTAGCACTGG GAATACGATA 120
CCAAAAGGAG TTCTCCTATA AAAATGGCAT CTCATACAAT TTTGACTTTT CAGACCTCTT 180
AACCACACAA AATCTAGTGA CTCTTCTCTT TCACATGTTG TGAGAACTTC AGAAAGACTG 240
CAAGGATCAC ACGTAATATT TAATAAGAAC TATTACTGCA ACTTAACCAA TGTGGATATA 300
TCAGAGAGAC TGAGTGATAA AATCAACACT GTTGATCTGA AAGTCAAAAT CTCCAGGTGT 360
CAATCCAGGC TTTTCACCGA CTGTGGTTGC CTGGGTCCAG CCAGTTGGCT TTTATGTATC 420
TTGAAGTACA GTGTGTTGCA GTGGAATAGC ACTGTACCTA GAGTGAGGAG AACAGGGCTC 480
ATTCCCCAGC ACTACCACTT CCACCTCTGC AACACTCAAT GACCCTTCTG GGCCTTAGTT 540
TCCTCATCAG TCAAGTGAGG AGGCTGAATT CTATTTGACT ACTAAGCTTC CTCCGGCTCT 600
TATAATCTAG GATCTAAGTC AGTGGTGTTC AAGGGCTCTT CCATGGGATC AAAATATTTA 660
AAAGACTTCA CCCAACTCCA CATGTTGGGA CCTGTACTTT TACCGTTATG TCAGGAATAT 720
ACATGATGAT GAAAGCCTTC TATACATTTA ATAGTTATTT TGGGAGTTCC CACTGTGCTG 780
CAGTGGGTTA ATAATTTGAC TGCAGCAGCT CAGGTATCTG TGGAGGCACG TGTCTGATCC 840
CCCACCCAGT GCAATGGCTT CAAGGATCTG GCTTTCCTGC AGCATAGATC ACAGCTGCAA 900
CTTGGATTCA GTACCTGGCC TGGGAACTTC CATATACTAT GGGTGCAGCC ATAAAAATAA 960
ATAAATAAAT AAATAAATAA TAACAATTAT TTTGAACACA TTTATAGTTA ATACAGTAGC 1020
TATATTCATC ACAAGAAGAG AAAGCATGGT TTGGGAATGT TGTTTGAACT CAAAGCTATT 1080
ATCACTGTCC AAATGGACTC AATGACGCTG AGGAACCTTG GGGGTTTGTG ACCCACAAGT 1140
TAGGAGATGA CTGATCTCAG ACATGAGATG GGAAGAGCAG TGTCTTTTCT GTGCTTTGTG 1200
GATACACTGT ACCGTAGTAA TCGCTACAAG GTAGTATGCT CTTAATTCAA AATTGTCAGG 1260
TATAAAAACA AACACAGAAA CAAAAAAATA GCATTTCGGG TGGGGCACCT ACAACTGAGT 1320
GAGAATGGAA TCTCTGTGTG TTTTAATCTC CAGACTGTAA CAACATCTAT AGCTAAGACT 1380
GTTGTTGATG GATTGTTTTA TAGCAACTGT CATTCTTTAA TCCCCACTTT TCCTTCTGCA 1440
TAATGTTTGC ACCTGCCATT TGCTAAGACA GTCATACAGT CAGGAGGGAA AGTTTGTCTT 1500
GTGTAGATGA AGGTTGAGCT TTTCAAAGCT ATCAAAAATG CCTTTGCCTT TTAGATGGCC 1560
ATTTTTTCTC TCATAAGCCA AATAATTATT TTTAACAACT ACCTTATATT AACATTTGGT 1620
GTTATATCTC TTGGTGAATA GTTGAAAGAC CCTCATAATA AATTATTACT CTGGGGGGTT 1680
TTTTTGGCTT GTTACCAAGA CTTAGCATTG CCTTAATTCC AAAATCTCTT TTAACGTTCC 1740
CCTTTTGGCA CAAGAGATTT CAGCTGTCAT TTAACAGAGC TAACTGCAGA GAAATGAGAG 1800
CTACAGGGTG AAGGTTCTTC CTCCCACATA AATTCCACAG GCTTCTTTTG TTTCCATCCA 1860
GAAAAAGAAA AGAGACAGAA ATGTAAGGGT TTATTACATG CATGTGAGCC ATTGTCCTGT 1920
GTGAATAGGT ATGTTTTTCT CTGTTGGCAT GTTAGATTGG TTGGGTCTGT CCTTTGCTCT 1980
CAGGCAATGA GTTACTTGGG CAAGGGACAG GATCTCTTCT ATATTAGGTA TGATATTTAG 2040
CGGATGTAAT ACTTGTGATT TTAAATGTTA CAGAGATACA GTATGTGGCA AACTCCCTAT 2100
TATTCTAAAT TGAGAGGAAG TTTAATCCTG ATGACTCAAG ACCAAAACTT CTTCTGAAAG 2160
CCTACAAAAG GTTGAGGCTG TTGGTGTCGC CGCTGTTGGC AACCAACACA TGGCTTTCCA 2220
CCTTCTTTTA ACTCTGGTCA CTCATCCAGG CAAGATAACT TATTCTCTCT CTCTCTCTTT 2280
TGTTTTGTTT TGTTTTGTTT TGTTTTTGGG GGGATTTGGG GGGTTTTTTG TTTGTTTTTT 2340
GGGTTTTTTT GTCTTTTTAG GGCCACATCC ATGGCATCTG GAAGTTCCCA GGATAGGGGT 2400
CAAATCAAAG CTGTAGCCAC TGACCTATGC CACAGTCACA GCAATACCAG ATCTGAGCAG 2460
CGTCTGTGAC CCACACCACA GTTCATGGCA ATGCCAGATC CTTAACCCAC TGAGTGAGGC 2520
CAGGGATCAA ACCTGAGTCC TCGTGGATTC TAGTCAGGTT TGTTACCATT AAATGATAAC 2580
AAGAACTCCA AGAGGACTTA TTTTCTCATA ATTAATTTGT CAGTGGGGAA ATTTTTTAAA 2640
GTTAATTTTG GCTTGAAACT TTATATTGGC TATCCATTGC AAAAGAAATA TTTAGAGGAC 2700
TGGTATTTAA AAAAAAAAAA AAGAGGAAGG GGAAGATATA TATATATTTA GACTTACATA 2760
TGTATTAAGG TATAAGAGAT ATAGATATAA ATATACCTAA AATAATAAGA ATCAGGTAAA 2820
AACAGCCAGT ATGCTGAAAT ACACCTTAAA AAGAAAATTA TAGACCAAAA ATACACAATC 2880
ACTATGAAAT TTTATTAAGA ATTCAAATGC TGTTTTTCTC CAAGAATCTT TTGAAGTTAT 2940
CTTTTGCTTA AACTACTGAC TTTCACAAAT TTTAAGAACA GATTTTTAAA AGTCTCAGTT 3000
TTGACATAAG ACAAAATCCT ATCCTGCATT TTCAGTTTTC ACTTTTTTTT GCTTTTCCTT 3060
TTATTTACCT AATACTCTTA TTTGTGCTTA TCAAATGTTT TCAACTCGGA CTTCTGTCTG 3120
GAAAAAAAAA GATTCACCTA TTCGTACATT CAATTTTAAT AATTTTTACT TTCAATTAAT 3180
AAATCCAATT TTAATAATTT GAGGCAGGAG GAAAATTGGC CTGCATATTT GAGTTTTTTA 3240
AATAAGTTCA TTTAGGAGTT CCCACTGTGG TGTAATGAAT TAAGGATCTG ATGTTGTCAC 3300
TACAGCAGCT GGGGTTGCTG CTGTGGCACA GGTTCGATCC CTGGCCCGGG ACTTCCACAT 3360
GCCATGGTTG TAGCCCAAAA AATAGAAATT AAAAAAAAAA AAAAAAGGTT CATTAAGATT 3420
GTAGAGCCAT TGGAAACAGT TATTTACATT TTTTTATAAT CATAACGTCC AAAAAAAAGG 3480
CAGGGGGATG GGAAAAGAAA AGGGAAAAAA AAGCGAGGCG AAAAAAAGAT TCTGGACACA 3540
TTTAGGATGT TGCTATTTCA AATGTCAACT CCGTACTTTT CAACTAAGGC TGATAATTTA 3600
GAGGATGGAA AGGAGGCTTA AATGTCACGG ATATTAAGCC ACTACGATAA GACTTTCAAA 3660
TCAATGGTGT GCTCTAAGAG TACCCTGACA CAGTACAGAG GTCTGAATCC TAAAGCTAGA 3720
GTAAGCAATA GACATGGCCA CGGACTGAAA GGCAACAGGA CAAGGTCCCT CCGCACCCTG 3780
GCTCACCCAG CTCTGTCTCT CCCTCTAGGT ACATCTAGTG CCCTGCTGCC ATCAATAACC 3840
CGCAGCCATG AGTTCCGACC AGGAAATGGC TATTTTTGGG GAGGCTGCTC CTTACCTCCG 3900
AAAGTCTGAA AAGGAGCGCA TTGAGGCCCA GAATAAACCT TTTGATGCCA AAACGTCAGT 3960
CTTTGTGGCG GAGCCCAAGG AATCCTTTGT CAAAGGGACT GTCCAGAGCA GAGAAGGAGG 4020
GAAAGTGACA GTGAAGACGG AAGCAGGGGC GGTGAGTAGA GCCCCAGAAG CCGATCACAT 4080
TCTACTGAGT GTTTCTGTCT GGCCACTCGA CTGACATCAA TGCTTATCTT TCCTGTTTCC 4140
CAGACTTTGA CAGTGAAAGA AGACCAGGTG TTCCCCATGA ACCCTCCCAA ATTTGACAAG 4200
ATCGAGGACA TGGCCATGAT GACCCACCTG CACGAGCCCG CTGTGCTGTA CAACCTCAAA 4260
GAGCGTTACG CAGCCTGGAT GATCTACGTG AGTTCATCCC CGTGGCCTTC CGCTCATGCG 4320
GGTCGTTCAT GTTTGGAAAA ACAGAACGTT ACTGAGATCC CCAGCAAATA ATTCTACGCC 4380
CTTTTGTTTC TTTATGGTAC AGACCTACTC GGGCCTCTTC TGTGTCACCG TCAACCCCTA 4440
CAAGTGGCTG CCGGTGTACA ACGCCGAGGT GGTGACGGCC TACAGAGGCA AAAAGCGCCA 4500
GGAGGCCCCG CCCCACATCT TCTCCATCTC CGACAACGCC TATCAGTTCA TGCTGACTGG 4560
TGAGTGGCCC AACCATGGTT CATACAAATT ATTTTGCCAC CTATAATCCC AAAATGTTAA 4620
CGCTAAAACA ATCCTCAGGA GTCATCAGAT CCCACCACCT GGTTGCACAG AAGAGGTGAC 4680
TTAAAGCACA GAGAGGAAGA CACTGGTAAT GGGGACAAAG ACTCAGTTCT CTTGGTTCCA 4740
GATCCACAAC CTGACTAGGC CACGCTACTG TTCCATCCCT CTTACGTTTG ACTGATTATA 4800
GTCTCCTGGC TTGGAATACA TGATTTATCT TAAATATTTA AGTAACAAAA GATTGAGTAA 4860
CTGCTGAGTA GTATTGTCTA ATAGAAATGA AAAATGTGTA CTCAATCCTT TTTTTTTAAT 4920
CTAAGTTGCT TGCTGATTAT GGATAGATGT TTTTAGAGGT ATCGTTACCT TGTTAAAGCC 4980
ATCAAAACTA ATTTAAGATG TGACATTGTC TCTCTGAATG AAGATAGTAT TTGAGGGACT 5040
ACATTGTCCT AATGTATTGC CCCCTTTAAA AGGACTTTAT TCTGATTGAG GTATGCGCTT 5100
TCATCTGATA TTTCTTTGTC CCAGTGGCAT ACTTTTCAGA GGCTGATGAG AGTTAGGGTT 5160
TCAGTATGTG GCCATGAGAT AGAGGGTGTG TGTGTGTGTG TGTGTGTGTG TGTGTGTGTG 5220
TGTGTTGAAT TAATCCATTT AGAAACTGAA TCTCAACCTT GGCTTGATTA ACAATGTTTT 5280
AGTCTATGAA ATACAATCCA AATCCTTAGT ACGTTAGGCA CATTTCAGTT AAACGTATTC 5340
ATCAGCAGAC AGTAGGTTCC TGAAATCTAG AGATGAAAAC TATGGAATGT GTCTGGTTGT 5400
AGACAGTACT CTTTATTTTA AACCAGAAGG ACACACTTGC CGGGGACCTT AAGAAGTTTA 5460
GGACACAACA ACATTTTATG CTTCTTTCCC CAACCTAAGA GGCATAAGAA TAATACTATA 5520
TGAAATTTTA AATAATATAT TGAAAAACAC CATTGAACAT GACACTTACA CTCAAAGCCC 5580
CCAGCAATTT CATGTCGAAA GCTTGTGTAA CTGATAATAT GCTAAATGTC CACTGTTTTT 5640
CTTCTAGATC GGGAGAATCA GTCTATCTTA ATCACGTATG TATTATTCCG ATAGTTGCTC 5700
CTATTTTACT CTCACCAGGA AAATGACAGA CCAAAAGAAG AAATTAGTTC ATGCCTCCAT 5760
ACTACGGCAA TGGCATAACT GGCTTGAATT AAATGTTGCT ATCCCCAATT GAAGGTTTGG 5820
ATTGCATCTG AATGTAAAGT AACAATGCCC AAATTTAGAT CGTTTCCTAG TCCAGTTGTA 5880
AAAGTTCCAG AACGTCCTGG GAAGGTAGAG AGGTAAAACA CCAGGTACCA CAGAGCCAGA 5940
ATCCAGTACT GAGCAGGGAG CAGACACACC TTCTGAAATC TGGGCAGTCT GGGCCGTGTT 6000
ACCAATGGTT CATTCCCAAG GCCTATCCAA GGAACATCTG TTCCTTTAAA GACCTAATGT 6060
GGGAATGACT TTAGTCTAAG GAAGCTGAAG AACACTTGTC TTATTTCAGA GGCTCTTTAC 6120
TAACTACACA CAAATTACTA AAAATTTACA ACATAGTGGC TGAGGAGCTG CTTCTGGGAC 6180
TCCTCAAACC CTGGCTTCAG CACCTAGAAG AGAGGCTGGT ATATTTTAAG CACTCAAGAA 6240
ATATGTGCCA TATGATTACC GAATGAATGC TTCAGCTTAC TGCAAAACAA CAGTACTAGC 6300
ATGAGCTAAA TGTAGGCCGC AGAGAAAGTT CGAGGACACT CTGACAAAGA CACATAAAGA 6360
ACAGACATAT GAGACGGTAA ATGCAGATGG AGGAAGTCAC TCGTCACAGA GCTAAATTCC 6420
TTACACATAT TTCATCACTG TTTCACAGCG GAGAATCCGG GGCAGGAAAG ACTGTGAACA 6480
CGAAGCGTGT CATCCAGTAC TTTGCCACAA TCGCCGTCAC TGGGGAGAAG AAGAAGGAGG 6540
AACCTACTCC TGGCAAAATG CAGGTGGGTC GGGTTGCCGG GATCAGGAGC CCAGCTCGGC 6600
CTGGGCTCTC CGGGGAGAAA CTCCTGGAGC CCCACAGGTG AGCACTGCTC TCGCCCTTCT 6660
CGGCAGGGGA CTCTGGAAGA TCAGATCATC AGTGCCAACC CCCTGCTCGA GGCCTTTGGC 6720
AACGCCAAGA CCGTGAGGAA CGACAACTCC TCTCGCTTTG TAAGTCTCCT GCACACGGAA 6780
GGGTCTTCTC GGCCCTCGGG TGCCAGAGAA GCCTGTCTGA GTTATCATCT CAGTCTCTTC 6840
TCCCTCGTGC GCTTCCAGTT TGGTTTCTGA CATCACTGTT TCTCACGTGC AAGGGTAAAT 6900
TCATCAGGAT CCACTTCGGT ACCACTGGGA AGCTGGCTTC TGCTGACATC GAAACATGTG 6960
AGTAACAGGA CTGCCTCCAC AGAATCCAAG AATGACAAAT GATGGTGGGG AGGAACATTC 7020
TACAGCTCCC GCTGAGCCTG GGCCCTGTGG AACCCCCGTC TGCTGCCAAA CACGCCTGCG 7080
GTTAATGCCA GGCTCAACCA CCGCCCAGCG TGTGCTGTCC CCACTTCAGC ATGAGCTAAC 7140
TGTTCTGCAG AAACTGTCAG GAGTTGCTGG CCTTGCCTCA AGTATGCCAG CCTCAGAAAA 7200
CAATTTCAAG AGTTTCTAAG AAAAATCTAA GGCGAGGGGT AATTAAGCTC CCTAAGGGTT 7260
GAGGGTCTAT CATTTCTTCC CAGTGTGAGC CTTGATAAAC GTGGCTCTTA GCCACCCCTC 7320
TCTTATAAAG TAAACAAGAG ACCCTGCCTG GGGAGGAACA GGCTATCAAG AACCAGGTAT 7380
ACGCCAGTGT CAAGGATATG CTGTACGGTG TGAAAAAGCC TTGAGCCCCG CAGCTGCAGT 7440
TTCCCTCCAG AGGTGGTAAG AGCAACCCCA GTGGTCTCCG CAGAGACACA CTATGACTAC 7500
CTCATGGGAT CACTCACCTG GAATCGCAAG GGGCCAAAGA GATTTAGCTC ATAACCCCCA 7560
ACTGCCAAAA TCACTCCAGG AACTTTACGA CCTTTCTCTC CAATCATTGT CCGCTTGCCC 7620
TGGCAGATCT TCTAGAGAAG TCTAGAGTCA CTTTCCAGCT AAAGGCAGAA AGAAGCTACC 7680
ACATTTTTTA TCAGATCATG TCTAACAAGA AGCCAGAGCT CATTGGTAAG AAGGAGTTTC 7740
AATGTGTAAG CTAGAAGCTA ATTGTTTTAT TAGCACCTTC TGACGTAAAA CACATACCCC 7800
GAACTCTGTG TCCCCAGAAA TGCTCCTGAT CACCACCAAC CCATATGACT ACACCTTCGT 7860
CAGTCAAGGG GAGATCACTG TCCCCAGCAT TGATGACCAA GAGGAGCTGA TGGCCACAGA 7920
TGTAAGTGTT TTAAGCACAA TTCGTTGGGT ATGGAAATGA CCGTGACGAA CCGCTGTCGG 7980
TGCTATTAAG GACACAGGAT AAATTCTCCT CAGTAAGTTA GCATCGGCTG CCCTAACCTT 8040
TGTCCTCTCA CCTCTCCTGG TAGAGTGCCA TTGAAATCCT GGGCTTCACT TCTGACGAAA 8100
GGGTGTCCAT CTACAAGCTC ACAGGGGCGG TAATGCACTA TGGAAACTTG AAATTCAAGC 8160
AAAAGCAACG CGAGGAGCAA GCAGAGCCAG ATGGCACAGA AGGTACCAAA CGAACCGCCA 8220
AGGTGGTTAA ATGAGAGACT ATNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN 8280
NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN 8340
NNAGGAGTGG GGGGCCACAC ACAGCAGGTC ACACTGGATA CCTGAATTGT GTCTCCGCAG 8400
TTGCTGACAA GGCTGCCTAC CTCCAGGGTC TGAACTCTGC TGACCTGCTC AAAGCCCTCT 8460
GCTACCCCAG GGTCAAGGTC GGCAATGAGT TTGTCACCAA AGGCCAGACT GTCCAGCAGG 8520
CAAGTACATG GCTCTACGAA CCACAGACAT CTCAGGGTTT CAGTACCTGT CTGTAATAAC 8580
AGCAACAATT ACTATTCTAT CTATGAAGGT GTACAATGCG GTGGGTGCTC TGGCCAAAGC 8640
CGTCTACGAT AAGATGTTCC TGTGGATGGT CACTCGCATC AACCAGCAGC TGGACACCAA 8700
GCAGCCCAGG CAGTACTTCA TCGGGGTCTT GGACATCGCC GGCTTTGAGA TCTTTGATGT 8760
GAGTTAGCAG ACACCGCAGG AGGAAAGCTT ACAAATCCCA CTGCCGCCTT CAGTGCTAGG 8820
AAGGGTCTAT GCAGGGTAAC CAAATCGACA CCTGAAAGAA GATCCAAAGT CCATGGCAGG 8880
GCATCAACTC TGGCATGAGA CAGACCTGGC CTCAGACTCC ACCTGCCAAT TCCTACCTGG 8940
GAACCTGGAT AATGGACATA GTATCTGACC CACCATGGAG CAAATCCCAC TATGACCCGG 9000
ATGGAAAGCT CCTAGCCCTC CAGATAACAC ACACTCCCTT CTGAGAGCTT CCTGCCACTA 9060
CAAGGTTTCT CAATTTCAAG ACCGAGGAAC AGTCCCCAAG CACATAGTCA GCACCCAGGA 9120
CATGACAGAG AAGGGGGTGA GGGAAGCAGT GGCAACAAAA GGCACTGGGG AAGGCCAGGA 9180
CCACTTCAAA GAAAGGGTTT GAGATTCCTA CCTGCCCTGC CGCGTCCAGG GGCCGAGGAG 9240
GCAAATGGCA TTGGAAAGAC ACTCAAATTC AACACCTCCC ATGCAGCTTA GGAACGAGGT 9300
TCCCGAGGGC CTCTCCCTGA CCGCAGTGGC TCAGGTGTGT CTGATCCAAA GGTCCCAGTT 9360
CTACACCTCT GTCTGTGAGT GCACTGATGG ACACTGCATG AGATCTTCTC AGTGTAGGGA 9420
CAAGAGCACT TTCACAAAGT CCCAAGCCCG CACACAACAC AAAGAATACT CTTGCACCCA 9480
AGCAGCCACA GGAAGAGTCA ACCACACCCT TTCAAGTAAG AGAGCTAAGC ACAGTGCACA 9540
CTTGTGACTT CCCTGAGAGT TTTTAAACAA CAATTTAACT GACATGTAAC TCACACAGGA 9600
CAGTGCATCT AGTTTCATAC GGAGTTCGAC CGGTTTGGGT ATATCCCAGA CATGTGCAAC 9660
TCTCACGACA ACAGCCTTGA GAACATTTTC TTCATTCCCC CCACAAGAAA AGCCTCCCCG 9720
GCAAGCAGTC AGGCCCCATT TCCTGCTCGC CCCGCCCCTG GAAACCACGC ATCTGCTCTC 9780
TGTCTTCACT CTGAGCTGCC TCTTCTGGAC AGGTCCTAGA AATGGAATCA TACAGCACCC 9840
AGGCCTTTGA ACCTGGCTCC TTTCACTCAG CCGAATGTTT GCGAGCTTCA CCCCTGCTAT 9900
AGAACCTCTT TGGCTTCCGT GTACGCTGAC AGCGCTCTCG GTCAAGAGGG TTCCCAGTGG 9960
TGTTCATATG CAGGTGGCAG TTAGGCTCAC CGAGCAAGAA AAGCCCCTTT CAAACAGAAG 10020
CTGTCATCAC AAGGCCAATG TTTTTGTGTG TCTCTTCTGC TTATTCAGTT CAACAGCCTG 10080
GAGCAGCTGT GCATCAACTT CACCAACGAG AAACTGCAAC AGTTTTTCAA CCACCACATG 10140
TTCGTGCTGG AGCAGGAGGA GTACAAGAAG GAAGGCATCG AGTGGGAGTT CATCGACTTC 10200
GGGATGGACC TGGCCGCCTG CATCGAGCTC ATCGAGAAGG TTCGTTCCCT TCTTCAGGCC 10260
ACAGATCATA CTTCTCACCA GCATTTCAAA GAAAATCGCA AAACCGGCTA GATACTATAG 10320
CAATATCAAA TAAAACAGAA AAAAATACCT TGTATAAAAA TCAGGAAAAG TCCATGTTTT 10380
GCCAACGCTG AGGTAGGCAT TCTGGGGAAA GGAGATCGAA TCTTTATTCG AGAGACCAAA 10440
ATTCTCCATT TCTCCACATT CTGCAACGCA AGCCTTATAC AAAAACCATC CTTCCTAAGA 10500
AAAGAGGTGT GAGGAGAGCA TGTTTTACTT CTTATTCTTG GTCAGCCTTG GATTCAGTAC 10560
TGCTGCTATG TCAAACCAGG ATTTCTAGTA CTTTAGAGCA GGCTCTCAGA TGTGCCCAAG 10620
ACTTGCCACA AGTCCTCAGT ACAACTGCAC ATTTCCCTAA TCTCACTCCT AGAAATGCTT 10680
TTGGTAAGTG TGGGGTGTTA AGGCCAACAC CAGACCTGGG TCCTGATGGG ACTTGACACA 10740
TACCTGTACT TTAACAACTT CTGACCGAAG AAATCAGTTT CCACTAAGTC TAGAGAAGTA 10800
AAGGACGCAC TTACTTCAGT AGGACCATAA TGCTACCCGT TGTTTCTCAA GGAGGACACA 10860
TTCGACTGAC ATGTTTCCTT CATGCTTCCA GCCCATGGGC ATCTTCTCCA TCCTGGAGGA 10920
GGAGTGCATG TTCCCCAAGG CCACAGACAC CTCCTTCAAG AACAAGCTCT ATGAACAGCA 10980
TCTTGGAAAG TCCAACAATT TCCAGAAGCC CAAGCCTGCC AAAGGCAAGG YCGAGGCCCA 11040
CTTCTCCCTG ATCCACTATG CAGGCACCGT GGACTACAAC ATTACTGGCT GGCTGGACAA 11100
GAACAAGGAC CCCCTGAATG AGACGGTGGT CGGGCTGTAC CAGAAGTCTT CCGTGAAGAC 11160
TCTGGCTTTC CTCTTTGCTG AGAGACAGAG TTCTGAAGGT CATTTTTAAT ATCATTAATA 11220
TATTTCTAGA TTCATAAAAT AGAAATATAC TGCTTATCAG AGATAGGCAT AGGAAAATCC 11280
AACTCTGAAA GTCCTGGCCA ATACTAAGCT AAAAGAAAAC TGTAAATGTG ATAAAGAGTT 11340
AAGACCACAG ACTTCCAATG AGAAAACTG ACACTATGGA TCCTTTTTTCC ATTGCCTCAT 11400
TTCACCAATG ATGAAGCAGT GGCTCAGAGA ACTCATTCAG GTCATTTATA CCATTTAACA 11460
GTATGGTCTT TCAAGGACCC AGGTAAGCTC GAAATGAGGA AATCTTTTGC CAGAGCCCTA 11520
CAGTTTGAGA AACTGAAGTT CTAGTCTCTT AAGACCTCTT AGACCAGATG TGTAAGTAAG 11580
AGGATAAAAG CATAGGCAAA GAGGAAACAG GACTTCTTTG CACGTTGCCA AAGACTCACC 11640
TACCTGAGAC CCAGCACGCA ATTCTGCCTG TTCTCCAGGA AATGTGTGTA CTAATGAGGC 11700
ATGACTACTC TTTCTCCTGG GACAGACTTT GTCAATTTGG AGTAGATGTA TCCCATCTCT 11760
TCCCCACACC TACCCTTTTC ACCACAGTTC TACCATTGCT GCTCTTATCC TACATGCCTA 11820
CTAGGTGAGC CAGTGCATAC ATTTTCTTAA TCTACAGTGG AAGCAGAAAA GACATGGAAA 11880
GAATAGGAAT GACACAAATC AAAGAGTGCA AATTTAAATT CCAAAGGGAA TTTTGCCACT 11940
CCTGATGTCT ATGGATAGTG CTTAAAAGGC TACTGCAAAT AATTTTAATT TTTCTATTTT 12000
ATTTTTCAGA GGGTGGTACA AAGAAAGGTG GCAAGAAGAA GGGTTCTTCT TTCCAGACCG 12060
TGTCAGCTCT TTTCAGGGTA CAGTCTATTC TTAAATTCCA AAGGATTACT TTTGTAAAAA 12120
GAATTGTCAT AAATTTTTTA AAAATTCTTT TAAAAATATA CAGTGAGGGA GTTCCCGTCG 12180
TGGCGCAGTG GTTAATGAAT CTGACTAGGA ACCATGAGGT TGCGGGTTCA ATCCCTGGCC 12240
TCGCTCAGTG GGTTAAGGAT CCGGCGTTGC CATGAGTTGT GGTGTAGGCT GCAGACATGG 12300
CTTGGATCCC GTGTTGCTGT GGCTCTGGCG TAGGCCAGCG GCTACGGCTC CGATTAGACC 12360
CCTAGCCTGG GAATCTCCAT ATGCCACGGG AGTGGCCTTA GAAAAGGCAA AAAGACAAAG 12420
AAAAAAAAAA ATATATATAT ATATACACAC ATATATATAT ATGATGAAAT TGAAGTAGTG 12480
ATACATTAAA AGTAAAAAAA TATGAAAAAT TCCTTAGGAA AAATTTAACA AAAAGAAGAT 12540
CCACAGTGTG TTTCTTCACA TCAACCTTTA TGATAAATGA ACCACCTGCC CTTTAAGCCC 12600
CAAATCTAAA AGATCTGGCA CTAGGCAAAT TTCACATGAA ATCAAACCCT GTAGTTAGTT 12660
ACCTCTACTT TGTATAACCA AAGCCTGAAT ACAAATGTTC TCTGACTGGC AGAGCTGGAG 12720
AAAAATAAAC TAAAGTTGGC TGGTTTTGTG CAATCCGTAA TTTCCTATTT TACTCCACGT 12780
GTATGATCTC TTGGACATCA TGACTTCTTC TTCAGTTTGA CAGCTCATTA AAATATAAAA 12840
TAGAGTCACA TTAACTACAG ATCATTGATA AGGACTCTCA TGTAGATGCA ACTAGAAATT 12900
ATTTTAAAAC TTTTCACATG GCTCCACAGG AGAATCTGAA CAAGCTGATG ACCAACCTGA 12960
GGAGCACCCA CCCTCACTTT GTGCGCTGCA TCATCCCCAA TGAGACCAAA ACTCCTGGTG 13020
AGACACTGCT GATCTCCACA TAAGACGCCA GCGTGACTTC TCATTAGACT AGTATATGGA 13080
AAACATGTCT TTGTTCTTCA GGGGCCATGG AGCACGAACT CGTCCTGCAC CAGCTGAGGT 13140
GTAACGGCGT GCTGGAGGGC ATCCGCATCT GCAGGAAGGG CTTCCCAAGC AGAATCCTTT 13200
ATGCAGACTT CAAACAGAGG TTTCTATCTC ATTATTTTTC CCTTTCAATG TGTTGCATTA 13260
TAGAAAAATT GCCACATAGT TCAAACATTT TTTAAACTTT TCCTTGAAAA ATGAACTGCA 13320
ATCATTTAAA AGGTAATCAT AAAAGAAAGA AGGCTTGGTT AAATATATAC CATAAATTTT 13380
CATATTGTCT CAAGTTTTAG AAAAGCATTT TTTTGGGGGG GGCGGTCTTT TGAGGGCCGC 13440
ACCTGCAGAG CACATGGAGG TTCCCAGGCT AGGGGTCAAA TCGGGGCTGT AACTGCCAGC 13500
CTACACCACA GCCACAGCAA TGCGGGATCC AAGCCGCGTC TGTGACCTAC ACCACAGCTC 13560
ATGGCAACAC CAGATCTTTA GTCCACTGAG CAAGGCCAGG GATGGAACCC ATGTCCTCAT 13620
GGATACTAAT CGGGCTTCTT AACCACTGAG CCGTGATGGG AATTCCGGCA TTGATTGTTT 13680
TAATGGATTT TTTTTTTCTC CCCAACTCAA GCTATCATTT TTTTTCATGG CAGCTACCAA 13740
GAGTACCACG TTTTTCTTCA GTGAAAAAAA CTATTTTTTA TTCTTTTCAT CTGACAGATA 13800
CAAGGTTCTA AATGCAAGTG CCATCCCTGA GGGTCAGTTC ATTGACAGCA AGAAGGCTTC 13860
GGAGAAACTT CTAGGGTCTA TTGATATTGA CCACACCCAG TACAAATTTG GTCACACCAA 13920
GGTACCACCA ACCCTGATTT CTATCTATCA TATTTCATCA CTTTTGGGCT GTCTTACGAG 13980
CAGAAATAAC ACATTTAACA TGTTCTTTTG AAAGGTTTTC TTTAAGGCCG GCCTGTTGGG 14040
AACTCTAGAG GAGATGCGAG ATGAAAAGCT AGCTCAACTC ATCACACGCA CTCAAGCCAT 14100
GTGCAGAGGG TTCCTGATGA GGGTGGAGTT TAGGAAGATG ATGGAGAGGA GGTGAGGAAC 14160
CAAGTACAAG TCCTGTTTCT CCACATTTTC TTAGTTGAAT CCACTGCCGT TATTACTTTT 14220
GTGGATGGAT GTTCACTTTC CACATTCTTC TTCACTTGCA TCTTCTTTTC TTCCTACAGA 14280
GAGTCCATCT TCTGCATCCA GTACAATATC CGTGCCTTCA TGAATGTGAA GCACTGGCCT 14340
TGGATGAAGC TGTATTTCAA GATCAAGCCC CTCCTCAAGA GCGCAGAGAC AGAGAAGGAG 14400
ATGGCCAACA TGAAGGAAGA ATTTGAGAAG ACCAAAGAAG ACCTGGCTAA GTCAGAGGCA 14460
AAAAGGAAAG AACTTGAAGA GAAAATGGTA GCTCTGATGC AAGAGAAAAA TGACTTACAA 14520
CTCCAAGTTC AAGCTGTGAG TATCACACAC TGTACAGTTC AGTCACATGT CACCCAATCA 14580
CTGATTGGGT ATGCGAATTT TTTTAAACTT AATGTTTAGA AGTAAATGGC TTCCACTTAA 14640
ATATATGTCA TAATTGTCTA CCTTTCAAAA ATACTAAGAC TCAGACCTAA AGAACAGATG 14700
AGAAGTCACA AATTATGCCA CATATGTTCC ACGCACATTC AGACATAGTA CATTCATCAG 14760
TGAGCAAAGT TAAAAAAAAT CATAAACATT TTCCTTTTTT TATAGAACCC TTAGATTATA 14820
TTGTTCTCTC CTCAATACAT ATTTCTTGTG CATAAAATTG AAGTCATGCT GTTTGTACTA 14880
GGGCAGAAAA AAGGCTAAAT TAAGCCCCCC TCAAATGTGA GAAAACTGAC TCCTAGAAGG 14940
AATAAGTGAC TTTTCCAAAG TAGCAAAGGT GTAGATTTTG CCAAGGGGTG AATTTTACTG 15000
ATTTGACCTT CCACACACAT GGATATTTAG AGAAAATCCA CCTTTGTACT TAAAAAGTAG 15060
ATTTCAATTA CTGACATTCT GTCCATTTAA TTTTAAAAGT TGGCAAGTTA ATTGGCACAT 15120
GTGTTGACCA AAGTGATTGG GTCATTAAAG TTTCCTCCTT TTCATAAATT GTTGTGTATT 15180
TGCAGATGTA ACTTAAGCAA ATAAAAATGT TTAATTTCCA CCTTTAGGAA GCAGATGGCT 15240
TGGCTGATGC AGAGGAAAGA TGTGACCAGC TGATCAAAAC CAAAATCCAG CTGGAGGCCA 15300
AAATCAAGGA GGTGACTGAG AGAGCTGAGG ATGAGGAAGA GATCAATGCC GAGCTGACGG 15360
CCAAGAAGAG GAAACTGGAG GATGAGTGCT CAGAACTGAA GAAAGACATC GATGACCTTG 15420
AGCTGACACT GGCCAAGGTT GAAAAGGAGA AACATGCCAC AGAGAACAAG GTACAAATCT 15480
CTTTTAGAGT ATTTACAAGT GCTACCTTGT TACTGGTGTA TTTTAACTGA AAGTTTAATT 15540
CTAAAATTAC TGAATATGAG GAGTTCCCGT CGTGGCGCAG TGGTTAACGA ATCCGACTAG 15600
GAACCATGAG GTTGCGGGTT CGGTCCCTGC CCTTGCTCAG TGGGTTAACG ATCCGGCATT 15660
GCCGTGAGCT GTGGTGTAGG TTGCAGACAC GGCTCGGATC CCGAGTTGCT GTGGCTCTGG 15720
CGTAGGCCGG TGGCTATAGC TCCGATTCAA CCCCTAGCCT GGGAACCTCC ATATGCCGCA 15780
GGAGCGGCCC AAGAAATAGC AACAACAAGA ACAACAACAA AAGACAAAAA GACAAAAAGA 15840
CAAAATAAAT AAATAAATAA ATAAAAATAA AATTACTGAA TATGAAAAGA AAATGCTGCT 15900
ATAATTATGT CATCTCTTTA GTCCTCACCA TTTCTAGCTA TTTGCCTTGA CCTTTATTTC 15960
CCATATTTCT CAGCTTTGTA AGCCTAGGTT AGCTTCTGGT TCCCATTTTT CTTTTCTTTT 16020
TCTTTCTTTT TTTTTCTTAG GGTTGCACCC TTGGCACATG GAAGTACCCA TGCTAGGGGT 16080
TGAATCAGAG CTGTAGCTGC CAGCCTATAC CGTAGCCACA GCAAAGCAGG ATCCGAGACA 16140
CGTCTGTGGT CTACACCACA GCTCACAGTA ACACAGGATC CTTAACCCAC TGAGTGAGGC 16200
CAGAGATCAA ACTGGCATCC TCAGAGATGC TAGTTGGGTT CATTACTGCT GAGCCACAAT 16260
GAGAACTCCC CTAGTTTCCA TTTTTCATCT CAAACTGACA TTATCCTAAG ACTGTTACCA 16320
CGTTTTTTAT CAAAACAACA GGATGTCATT AACATTCCGG TACTTTATTT AAAGGTGAAA 16380
AACCTCACGG AAGAGATGGC AGGCCTTGAT GAAAACATTG CAAAGCTGAC CAAGGAGAAG 16440
AAGGCCCTCC AGGAGGCCCA CCAGCAGACC CTGGATGACC TGCAGGCAGA AGAGGACAAA 16500
GTCAACACCC TGACCAAAGC TAAAACCAAG CTAGAGCAGC AAGTGGATGA CGTAAGTCTA 16560
GGATTATCAA GGAAATTATT TTCTTCAAAA GGAAGCTAAG CATCCCTTTT GACTCAGCAT 16620
TATTTCTATT TAGCTTGAAG CCTCCTTGGA GCAAGAAAAG AAACTTCGCA TGGACCTAGA 16680
GAGAGCCAAG AGGAAACTGG AAGGTGACCT CAAGTTGGGA CAAGAATCCA CAATGCATAT 16740
AGAAAATGAC CAACAGCAAC TTGATGTAGA ACTCCAAAAG TAAGGATGAT AGAATTCCAC 16800
TGTTACCTGC TTAATGTCTG GATCTCAACA TATTACTCAC GGCCATGGGA GATTAAAAAA 16860
AAGGGAATTC TGACTTCGTC TTTATGACAT GGCANNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN 16920
NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN 16980
NNNNNNNNNN NNNNCAAAGT CACCTCCTGA CCAAAGCTAA ACCCAGGTAG AGCAGCAAGT 17040
GGATGACGTA AGTCTAGGAT TATCAAGGAA ATTATTTTCT TCAAAAGGAA GTTAAGCATC 17100
CCTTTTGACT CAGCATTATT TCTATTTAGC TTGAAGGGTC CTTGGAGCAA GAAAAGAAAC 17160
TTCGCATGGA CCTAGAGAGA GCCAAGAGGA AACTGGAAGG TGACCTCAAG TTGGCACAAG 17220
AATCCACAAT GGATATAGAA AATGACAAAC AGCAACTTGA TGAGAAACTC AAAAAGTAAG 17280
GATGATAGAA TTCCACTGTA ACCTGCTTAT TGTCTGGATC TCAAACATAT TACTTCACGG 17340
CACATGGAAA AAAAAACAAA GAGTGACATT TCTGACTTCC GTACTTAATG ACAATGGCAC 17400
ATCATTGACA TATAAAACAT GCGCTCTGCA TGGCCTCCCC CATCAGCCGT ATACAGACGT 17460
TCAATTACAC ACAGAAAAGC AGACTGGTAA GAGGATGGAC TGTGAGCCAG TGTGTTGCTC 17520
TCCTAACAGG AAGGAGTTTG AAATGAGCAA TCTGCAAAGC AAGATTGAAG ATGAACAGGC 17580
CCTTGCAATG CAGCTGCAGA AGAAGATCAA GGAGTTACAG GTAAGGACAG GACTTCCATC 17640
AATCTCATTC AACATGACCA AATTACTAAC ACAAGGAAGC TACTCACTGG GAATTCCTGC 17700
TGTGGCACAG TGGGTTAAGA ATCTGGCACT GCCATAGCTA TGGTATGGGT CACAGCTCGG 17760
GCTGAGATTC AGATTCAATT CCTAGCCTGG GAATTTCCAT ATGCCTTGTG TGTGGCTAAA 17820
AAAGAAGAGG AAAGAAGCTA CTAAGTGTGG GTTTTCCCTA CTGCCAGGCC CGTACTGAGG 17880
AGCTGGAGGA AGAGATCGAG GCAGAGCGGG CCTCCAGGGC CAAAGCAGAG AAGCAGCGCT 17940
CCGACCTCTC CCGGGAACTG GAGGAGATCA GCGAGAGGCT GGAAGAAGCT GGCGGGGCGA 18000
CGTCAGCCCA GATTGAGATG AACAAGAAGC GCGAGGCTGA GTTCCAGAAG ATGCGCCGGG 18060
ACCTGGAGGA GGCCACCCTG CAGCACGAGG CCACGGCAGC TGCTCTTAGG AAGAAGCACG 18120
CAGACAGCGT GGCCGAGCTG GGGGAGCAGA TCGACAACCT GCAGAGGGTC AAGCAGAAGC 18180
TGGAGAAGGA GAAGAGCGAG CTGAAGATGG AAATTGATGA CCTTGCTAGC AACATGGAGA 18240
CCGTCTCCAA AGCCAAGGTC TGTATTCACT TGTCCCCTTT CATCCATATT TTCAACAACT 18300
CAAAATGACT GAGTTTCTAC ATGACTGGAC CTATCTAACT GCACAAACTT TAAATGTTAT 18360
CTCAAACTTT AAAATTATTC TTAACGGGCA TCATTATATT GAACTGCATC ATTTCAGTTT 18420
TCATATTTTC TTGGCAGAAA TCATTTTAAA CTTCATAACT ATTACCATGA CAGAATGCAA 18480
TTACAGAAAA AAAACCTTTA AAAAAAACCA TACTCTACAT GATGCAGAAT TTTGATGATA 18540
CTCTTTCCAG TTTTCCAAAA AAAAATAATC TCATTTTCAC CATAATTTAT TTATTCATTT 18600
AGCTAAAATT ATGGGTGGGC CCTCCATTCA AAGTACTGCA CATAGCTTTG AAGTAAAAAG 18660
CAAGGTAAAT ACAATTCAGC CTCTTTCCAC AAGAAGTTAC AGATCTCCAA ACCCGAGACT 18720
TGCAAAGAGG AGTGTACCAT CTTCTCCTGT TGTCACCTTC TCACCACAGG GAAACCTGGA 18780
AAAAATGTGC CGCACACTGG AAGACCAGCT CAGCGAAGTG AAGACAAAGG AGGAGGAGCA 18840
TCAGCGCCTA ATCAATGAAC TGTCAGCCCA GAAGGCACGT TTACAGACAG AATCAGGTCC 18900
GTAAATGTGC AGGCGTGAGG GATGAACTGT GAGCCTCCAC CCTTGCAGGC CTGTCAAACA 18960
CCGATCATTT CTTTGGCCAT GTACGCCTGT TTATTACTGA TCTGTTATGC CTTCATCTTT 19020
TTATTGTGAG ATTGTAGAAT GATTATAAGC CATAATTGGG GGGAAAAAAA AACTAACCTC 19080
CATAGGCGGA GAATATTTTT GTTGCCTCGG CATTACTCAA AAGCCCCAAA TCCTGAAATT 19140
ATCAAAGAAA GCTCCTAAAT TTTTGAAAAA ACAAACAAAA AAACAAGAAG TAAACATCTC 19200
AGTAGCATCA AAACTCCTGA GTTATTCTCC TCGTCATGTG AAATGAGAGT TCTAATGTTA 19260
TTCCATCCTC TAAGTTATTA TTCACCTAGA CAACACAACT AAATCACTGT GTTTTGTCTC 19320
TCACAGGTGA ATTTTCACGA CAGCTAGATG AGAAGGAAGC TCTGGTGTCT CAGCTATCCC 19380
GAGGCAAACA AGCATTTACA CAACAGATTG AGGAGTTAAA GAGGCAGCTA GAAGAGGAGA 19440
CTAAGGTGAG GATTCTCCAG CTGATACTTT CAATCACTTG ACCTCTGCAG CATCACACAC 19500
TACTGAACTT CATATGCAGA GTGTCAATGA TCAGAACGTA AACTTACACT GCACACTTTT 19560
TGGTTGGTCC AGGCCAAGAG TGCCCTGGCC CATGCTGTGC AGTCCTCCCG CCACGACTGT 19620
GACCTGCTAC GGGAACAGTA TGAGGAGGAG CAGGAAGCCA AGGCCGAACT GCAGAGGGCA 19680
ATGTCCAAGG CCAACAGCGA GGTTGCCCAG TGGAGGACCA AATACGAGAC GGACGCCATC 19740
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CCAAAATGCA TTAATAAGTA TCAGCATACT TTTTATGAAT TAAGAGGAAT TAATTTTCTT 20040
TAATATAAGG AAAAATAGAG ACACTGAGAC TATCCAGTAC ATTTTTATGA ATACTATAAT 20100
TATCCATAGT CAGTTTATCC TTACCTGGAG CATGAGAAGT TCACAATAAG ACTATCACAC 20160
CCTGTTGTCA TCTAACTAAC AACCAGTACC AATGAACTCA TACACTGGTC ATACATACTG 20220
TTTGTGGAAT AAAACTCACA GGGGTTACAC ATGGAAGGGA AATAACTCTC ATATTTCCAG 20280
TGAAGGAACT TTCCCTAAAT TGATCTCAGT AGTTGCTAAG ATTAAACAGG ACAATAGGGT 20340
TTGGCAAGCT TTTGCAGAGG GAGGGAGCAT CCGAGAAAAG ACCGTGGGCT GGTGAAGGGA 20400
GCAGTGAGAC TTTAGGGGAT ACCTGGGAAG AGTAAATATT ATCTGGGGTG ACCAAACCCA 20460
AAAAGTTACT AATTTTACGA CACTGAACAT GTCACCCTGG GCCAAAGTTC CCTCTCTTGT 20520
CGAGAGGACC ACACCAGAAG ATGAACAAGG ACCCTATTCA ATGGGAAAAT GCTTTAGTGA 20580
TGTGCATCCA GCTCATGGGT ATCACTTCCT CTTCACCCTC ACATACTCAA CCCACCAAAG 20640
GGCTTCTTCA GAATCTTTGT GCCCCCACCT CTACCACCAA ACACACCAAA AAACGGACTC 20700
ATAAATATGT CTGCCAATCC CCAAGATAAA GGAGAATTCA CTAGAAAACG GAATGCTAAC 20760
ACAGATAAAA TAGGTACTGA GAAAATATTT TAGAAAATCA TTACTTGTGG ACAAAGGAGC 20820
AAAAAATCTT GGGGAGGAGT TCCCTTGGTG GCTCAGTGGT TAACAAACCC GACTAGTATC 20880
CATGAGGATG CATGTTTGAT CCCTGGACTT GCTCAGTGGG TTAAGGATCC AGCGCTGCTG 20940
TGGCTGTGGC ATAAGCTGGC AGCTGCAGCT CCGATTCAAC CCCTAGTCTG GGAACTGTCA 21000
CATGCTGAGA CTGCAGCCCT AAAAAAGCAA AAAACAAAAA AAAATCTTGG GGAAAATATG 21060
CTAGTCAACA GCTTTGTAAA GTTCACTACA GTAATTCTGA CTCTGCTCTT GGTCACTCAC 21120
GCTGACCAAC TTTTCAGGAA GAAGCTGGCC CAGCGTCTGC AGGATGCTGA GGAACACGTA 21180
GAAGCTGTGA ATGCCAAGTG CGCCTCCCTT GAGAAGACCA AGCAGCGGCT CCAGAATGAG 21240
GTCGAGGACC TCATGCTTGA TGTGGAGAGG TCCAATGCTG CCTGTGCGGC TCTGGATAAG 21300
AAGCAGAGGA ACTTTGACAA GGTACCTCAC TGTGCCCAGA TTCTTAGAGG GAAGCTGACA 21360
TGACTCTTGG CTACAGAGGC TTAGTTTTGA CGTACTTCCA GATCCTAGCA GAGTGGAAAC 21420
ATAAGTATGA GGAAACTCAG GCTGAACTTG AGGCCTCCCA GAAGGAGTCC CGTTCTCTCA 21480
GCACTGAGCT GTTCAAGGTG AAGAATGCCT ACGAGGAATC CCTGGACCAA CTGGAAACTC 21540
TGAAGCGGGA GAATAAGAAC TTGCAGCGTG AGTCTTTGTA ATCTTTCTAT TTCAAAAATG 21600
GTAGGCAGGT ATCTTTTCCA TTTTTCCTTT TTCTCAACTG GACTTGGTAT TTTATTATTA 21660
AACTATAGAG GAGATTTCTG ACCTGACTGA GCAAATTGCA GAGGGAGGAA AGCATATCCA 21720
TGAATTGGAG AAAGTGAAGA AACAAATAGA GCAAGAGAAG AGTGAACTAC AGGCTGCCCT 21780
AGAGGAAGCA GAGGTACATG TTTTGTTCAC TCACCTATGC ATTATAAATA AATTGAAAAA 21840
TGAATAGCAA CCGAGACTGA CTGTGTTGCA AACTTCCGGG GTAAGTCATG CTCATGCTAT 21900
TCAGTGAGAA ATACTGAACT GTATCTTGCG AAGAACTAAT AGGCTAAACG AAGATGTGTG 21960
AAAGTTTGAG ATTTTCTAAT GCTTTCTTGA AGGAATCATC ACTCAGTGCC CCTCAAAAAA 22020
ACTCTTTAGA TAACTGAAAT GTTTTTTTTT AAAGGCATCT CTAGAACATG AAGAAGGCAA 22080
AATCCTTCGC ATCCAACTTG AGTTAAATCA GGTGAAATCT GAGATTGACC GTAAAATTGC 22140
TGAGAAAGAT GAGGAAATCG ATCAGATGAA GAGGAACCAC ATTAGAGTGG TAGAGTCCAT 22200
GCAGAGCACG CTGGATGCTG AGATCAGGAG CAGGAATGAT GCCCTGAGGA TCAAGAAGAA 22260
GATGGAGGGA GACCTCAATG AAATGGAAAT CCAGCTGAAC CACGCCAACC GCCAAGCTAC 22320
TGAGGCAATA AGGAATCTTA GAAACACACA AGGAGTACTG AAGGTACCTC GAGATAAACA 22380
AACACGATGT TATACAGTCT GGGAGTAATT TTATCACTCA AATTTTAATA TTTTAGGAGG 22440
ACTATATGCC ACAAATAATC TAAATATATT ATAATCAGTG GAAAATATTA TGTATGCAGC 22500
TGAAAAATAA ACTCTTGAAA GCCCAGACAG AAAGGACAGA CTCTAAAGGA CAGAATTTAC 22560
TTTGCTATCT GAAAAGATGA CAAAGTAATG AGAGGTGGGA AGCAGGGGAA GTGATGAAAA 22620
AGTTTAGCTA CATGCCACTG CACAAATCAC TGCATGTATG TGGACTGCAC GTGTTTATTA 22680
TATATAAATA TATAATGTGT ATATCTGCAT TTGTTTAATA TATATAAAAT AACACTATTA 22740
AATTAGCTCA TCTCTAAGAA TTCTTTCCTG ATCAAAACCT TTGTAGCTTT AGTCATGGCA 22800
TTATTTTTAT GACTCGGGAT CTAAAATAAT ATAACATCAT GTTTCTGGGT AGAACTGCTA 22860
CCCAAGGCTA CAAAGAATTT GTCAGTAAAG GGACTTGCAC ATTTTTCCTA CCTAATCATA 22920
CTCTCAGTTA TTAAGATCCG TTTGCATGCA TGACCCGAAA TTTGTATTTG CTTTGGATCA 22980
TGAGTAAGAG TCATTTTCTC TTTCCACGTA GGACACTCAG CTCCATTTGG ATGATGCCAT 23040
CAGAGGCCAG GATGACCTTA AAGAACAACT GGCCATGGTG GAACGCAGAG CCAACCTGAT 23100
GCAGGCTGAG ATTGAAGAGC TGAGGGCATC GCTGGAGCAG ACAGAGAGGA GCAGGAGAGT 23160
GGCAGAGCAA GAGCTTCTGG ATGCCAGTGA GCGTGTGCAG CTCTTACACA CACAGGTGAG 23220
GTTTGGGACT ATGGCTGAGA AAACGCACTC CCTGAAGCTG AAGACAACTG GAGAGGATAA 23280
GCTTGTTATT CACTAAGGGG CAACCTTGGC AACTGTTCCT CCCAGGAGTT CTGGAAAATG 23340
TGCATCAGCA AATATGCACA AGGGTCCAGC TGGTTCACAA GTATATTTAT GGGCTGGCAT 23400
AAGCATGGTG ATTTGAAATA ACTTACAGTT CTAGAAATTT TTGTTTACAA GGCATATAAG 23460
ACCTCCTACT AATAATCTTA TTTACAGTAT CAGTAGCCAT CTCATCTTGT AACTCCAAGC 23520
TGAAAAGAGA TAAATAAATC AAATGCATGA AGGCCATCAA TGTTACCAGC AGCATTTGTT 23580
ATTTGTAATA GATTTGTTAA ACCAATGATG ATATATCCTC ACAATTGCTC ATAAGCAGCC 23640
ATTGTAATAT TTATACATTT GTTGCCATGG AAAGATACTC ACAATTAAGT TAAAAAAAAA 23700
GCACCTTAAA AATAATATAG AAAACATGAA CCTTTTTGTT AAAAATATAC AGGAAACATC 23760
CAGAAGTATA AACAAAAGTA TTATCAATGG TTATCTCTGG GTAGTGAGAG TACAGTAATT 23820
ATTCTTATAC CTTTTATTGC TATTACGTCT GTTATACTAC TTTTTTTACA ATAAGCATAT 23880
ATTATTATAC ACCTTTGAAG TTGCTATATA TGGAAATAGC CATCATGAAA AAGTTAAAAT 23940
TACATACTAC GAAATAATTT TTTTTTTTGG TCATTTTGCC ATTTCTTAGG CCACTCCTGC 24000
AGCAGATGGA GTTTCCCAGG CTAGGGGTCA AATCAGAGCT GTAGCCACCA GCCTATGCCA 24060
GAGCCACAGC AACGTGGGAT CCGAACCGCG TCTGCAACCT ACACCACAGC TCACGGCAAC 24120
GCTGGATCCT TTAACCCACT GAGCAAGGCC AGGGACCAAA CCTACAACCT CATGGTTCCT 24180
AGTCGGATTC GTTAACCACT GCGCCACGAC GAGAACTCCC GAAATAATTT TAAAATCAAG 24240
TTAAAATGCA GCATTTTTCT TACTCATTAT TAGTATCCTT GAATTTATTA AATATTTCAA 24300
ATACTGTCAA CTTTCCAAAA ACGTAAGAGA TTCATGGTTC ATTTTTGTAC CAGTAATGAT 24360
ACTGTTTATC CATATAGAGT CAACAAATGT GAATAAACAA CTAAAAATGA ATAATCCACT 24420
TGCCATGAGC TGTGTGGTGC TACATGGAGC ACCTCAGATT CTTTCTTGAG GCAGTGGTTG 24480
TACTTTATAC CTACAGGCAG CCACTCCTAA TAGTCGAGTA TGTTTGTTAT CAAAACTAAT 24540
TTTCATCTGG AAGAATTTAA GAGTATTAAA TTCTTAATTA AATTCTAAAT TAAGAGTATT 24600
TAAGAGTACT TATTAACAGA CATAATAAGT CATAAACTTA GAATCAACTT TTGATTTGGT 24660
TTTGATTCTG AATATATATT ATGATCAATA ATTTATAACT CAGTAAACTA GTACAAGTGA 24720
CAATGCAAAT AGTTATAATT AACTAATATT TTCTTCTTTT TTTTGGTTAA TTTGAAACAG 24780
AACACCAGCC TGATCAACAC CAAGAAGAAG CTGGAGACAG ACATCTCCCA AATCCAGGGA 24840
GAGATGGAGG ACATTGTCCA GGAAGCTCGC AACGCAGAAG AGAAGGCCAA GAAGGCCATC 24900
ACTGATGTGA GCAGAGGGCC ATGCACGGGT GGTCAGGCTA CAGTCCCGAT GGGCTACTCA 24960
GCTCCCTCAA CTGATTTCAN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN 25020
NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNN NNNNNNNNNG 25080
TAAAGGACCT GCAGCACCGC CTGGACGAGG CAGAACAGTT GGCCCTGAAG GGCGGGAAGA 25140
AGCAGATCCA GAAGCTGGAG GCCAGGGTGG GTCTCCACTA CTTCATTCCA TTCCCAGCCT 25200
GTGCCTGTCG CTGGTTACAG CCAAGTCGCT AAACATCTTT GTCCTCCTCC AGGTGAGGGA 25260
GCTTGAAAAT GAGGTTGAAA ATGAACAGAA GCGCAATGTT GAGGCTGTCA AGGGTCTTCG 25320
GAAACATGAG AGAAGAGTGA AGGAACTCAC TTACCAGGTA ACCAGCCTTT CCATATAATT 25380
CACTTTCAAG AAAATAATGA GCTGTTCTTG AATAGTGACA CTATCTATTT GCTACCTCTT 25440
TCGTTCCAGA CTGAGGAGGA CCGAAAGAAT GTTCTCAGGC TGCAGGACTT GGTGGACAAA 25500
CTACAATCCA AAGTTAAAGC TTACAAGAGA CAAGCGGAAG AGGCGGTGAG TACCTCCACA 25560
GGGAGAGAGA TGGGCTCAGG AGACTAAAGT TCACAGAATT TAAGAGGCTA TCGTTAAGGC 25620
AGGGAAAGTG GGAATACAAA ATTAGGGTTG AAAATGAATA TTGATTTAGA ATGAAAAAAA 25680
TCTTACCACT AATTACTGCA GCCTTAGAGA TTCAGGCTCT TTCCTTCTGT TACCTCTTTA 25740
AGCAGTTTTC CAGACACGGG AGAAGAGAAT GCTTCTTGTT TACAACACAC TCTCCTCTGT 25800
CTAGAACACT CTACACTCCC AGCAATCCCC AGCCATGCAA ATGAGGGCTC TGACCTCTAA 25860
GCCTAAACTT CATGATGAAT CCACTCCAGA ATATTTTTTT TTTTCATTTG GCTAAAATAA 25920
ACTTTCTCAT CCTGTTAATT CTAAAACCTT CCAAAAAGTC CTCTGCACAC AATACAACCA 25980
CAGTGCCTAC TTTTTAAATT TTGTTTCAGA GAAACAAGGT TGATTCAGAT TCCTGCTACT 26040
TTGATCTCCC TGTTGTCATA GTAGCATTAA GTGTGCCAGG AAGAGAGTCA AGTGAGAGAG 26100
ACTGAACAGG GGTGTGAGTC CACCAACACA AAGGCGAATA TGTGGGATGC TCTGCCCCAA 26160
ACAGGTGCAT CATCAAAGAA TAGACCCTTT TCCTTCCTCA CTCATGAAGA AAATCCCGTG 26220
GCTGCTTCGA GCAACAAAGT CAGTAAGAAT CAAAAAACAT CAAATTTTCT TGTTCTCTCA 26280
AATGCCTTTC TTTCCTCAGG AGGAACAATC CAACGTCAAC CTCTCCAAGT TCCGCAAGCT 26340
CCAGCACGAG CTGGAGGAGG CCGAGGAACG GGCTGACATT GCCGAGTCCC AGGTCAACAA 26440
GCTGCGGGTC AAGAGTCGGG AGGTTCACAC AAAAGTCATA AGTGAAGAGT AATTCATCTA 26500
AATGCACAAA AGTGACCAAA GAAATGCACA AAATGTGAAA ATCTTTGTCA CTGT 26554；
<210> 2
<211> 5929
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 2
TGGTAACATA AGAGGTACAT CTAGTGCCCT GCTGCCATCA ATAACCCGCA GCCATGAGTT 60
CCGACCAGGA AATGGCTATT TTTGGGGAGG CTGCTCCTTA CCTCCGAAAG TCTGAAAAGG 120
AGCGCATTGA GGCCCAGAAT AAACCTTTTG ATGCCAAAAC GTCAGTCTTT GTGGCGGAGC 180
CCAAGGAATC CTTTGTCAAA GGGACTGTCC AGAGCAGAGA AGGAGGGAAA GTGACAGTGA 240
AGACGGAAGC AGGGGCGACT TTGACAGTGA AAGAAGACCA GGTGTTCCCC ATGAACCCTC 300
CCAAATTTGA CAAGATCGAG GACATGGCCA TGATGACCCA CCTGCACGAG CCCGCTGTGC 360
TGTACAACCT CAAAGAGCGT TACGCAGCCT GGATGATCTA CACCTACTCG GGCCTCTTCT 420
GTGTCACCGT CAACCCCTAC AAGTGGCTGC CGGTGTACAA CGCCGAGGTG GTGACGGCCT 480
ACAGAGGCAA AAAGCGCCAG GAGGCCCCGC CCCACATCTT CTCCATCTCC GACAACGCCT 540
ATCAGTTCAT GCTGACTGAT CGGGAGAATC AGTCTATCTT AATCACCGGA GAATCCGGGG 600
CAGGAAAGAC TGTGAACACG AAGCGTGTCA TCCAGTACTT TGCCACAATC GCCGTCACTG 660
GGGAGAAGAA GAAGGAGGAA CCTACTCCTG GCAAAATGCA GGGGACTCTG GAAGATCAGA 720
TCATCAGTGC CAACCCCCTG CTCGAGGCCT TTGGCAACGC CAAGACCGTG AGGAACGACA 780
ACTCCTCTCG CTTTGGTAAA TTCATCAGGA TCCACTTCGG TACCACTGGG AAGCTGGCTT 840
CTGCTGACAT CGAAACATAT CTTCTAGAGA AGTCTAGAGT CACTTTCCAG CTAAAGGCAG 900
AAAGAAGCTA CCACATTTTT TATCAGATCA TGTCTAACAA GAAGCCAGAG CTCATTGAAA 960
TGCTCCTGAT CACCACCAAC CCATATGACT ACGCCTTCGT CAGTCAAGGG GAGATCACTG 1020
TCCCCAGCAT TGATGACCAA GAGGAGCTGA TGGCCACAGA TAGTGCCATT GAAATCCTGG 1080
GCTTCACTTC TGACGAAAGG GTGTCCATCT ACAAGCTCAC AGGGGCGGTA ATGCACTATG 1140
GAAACTTGAA ATTCAAGCAA AAGCAACGCG AGGAGCAAGC AGAGCCAGAT GGCACAGAAG 1200
TTGCTGACAA GGCTGCCTAC CTCCAGGGTC TGAACTCTGC TGACCTGCTC AAAGCCCTCT 1260
GCTACCCCAG GGTCAAGGTC GGCAATGAGT TTGTCACCAA AGGCCAGACT GTCCAGCAGG 1320
TGTACAATGC GGTGGGTGCT CTGGCCAAAG CCGTCTACGA TAAGATGTTC CTGTGGATGG 1380
TCACTCGCAT CAACCAGCAG CTGGACACCA AGCAGCCCAG GCAGTACTTC ATCGGGGTCT 1440
TGGACATCGC CGGCTTTGAG ATCTTTGATT TCAACAGCCT GGAGCAGCTG TGCATCAACT 1500
TCACCAACGA GAAACTGCAA CAGTTTTTCA ACCACCACAT GTTCGTGCTG GAGCAGGAGG 1560
AGTACAAGAA GGAAGGCATC GAGTGGGAGT TCATCGACTT CGGGATGGAC CTGGCCGCCT 1620
GCATCGAGCT CATCGAGAAG CCCATGGGCA TCTTCTCCAT CCTGGAGGAG GAGTGCATGT 1680
TCCCCAAGGC CACAGACACC TCCTTCAAGA ACAAGCTCTA TGAACAGCAT CTTGGAAAGT 1740
CCAACAATTT CCAGAAGCCC AAGCCTGCCA AAGGCAAGGY CGAGGCCCAC TTCTCCCTGA 1800
TCCACTATGC AGGCACCGTG GACTACAACA TTACTGGCTG GCTGGACAAG AACAAGGACC 1860
CCCTGAATGA GACGGTGGTC GGGCTGTACC AGAAGTCTTC CGTGAAGACT CTGGCTTTCC 1920
TCTTTGCTGA GAGACAGAGT TCTGAAGAGG GTGGTACAAA GAAAGGTGGC AAGAAGAAGG 1980
GTTCTTCTTT CCAGACCGTG TCAGCTCTTT TCAGGGAGAA TCTGAACAAG CTGATGACCA 2040
ACCTGAGGAG CACCCACCCT CACTTTGTGC GCTGCATCAT CCCCAATGAG ACCAAAACTC 2100
CTGGGGCCAT GGAGCACGAA CTCGTCCTGC ACCAGCTGAG GTGTAACGGC GTGCTGGAGG 2160
GCATCCGCAT CTGCAGGAAG GGCTTCCCAA GCAGAATCCT TTATGCAGAC TTCAAACAGA 2220
GATACAAGGT TCTAAATGCA AGTGCCATCC CTGAGGGTCA GTTCATTGAC AGCAAGAAGG 2280
CTTCGGAGAA ACTTCTAGGG TCTATTGATA TTGACCACAC CCAGTACAAA TTTGGTCACA 2340
CCAAGGTTTT CTTTAAGGCC GGCCTGTTGG GAACTCTAGA GGAGATGCGA GATGAAAAGC 2400
TAGCTCAACT CATCACACGC ACTCAAGCCA TGTGCAGAGG GTTCCTGATG AGGGTGGAAT 2460
TTAGGAAGAT GATGGAGAGG AGAGAGTCCA TCTTCTGCAT CCAGTACAAT ATCCGTGCCT 2520
TCATGAATGT GAAGCACTGG CCTTGGATGA AGCTGTATTT CAAGATCAAG CCCCTCCTCA 2580
AGAGCGCAGA GACAGAGAAG GAGATGGCCA ACATGAAGGA AGAATTTGAG AAGACCAAAG 2640
AAGACCTGGC TAAGTCAGAG GCAAAAAGGA AAGAACTTGA AGAGAAAATG GTAGCTCTGA 2700
TGCAAGAGAA AAATGACTTA CAACTCCAAG TTCAAGCTGA AGCAGATGGC TTGGCTGATG 2760
CAGAGGAAAG ATGTGACCAG CTGATCAAAA CCAAAATCCA GCTGGAGGCC AAAATCAAGG 2820
AGGTGACTGA GAGAGCTGAG GATGAGGAAG AGATCAATGC CGAGCTGACG GCCAAGAAGA 2880
GGAAACTGGA GGATGAGTGC TCAGAACTGA AGAAAGACAT CGATGACCTT GAGCTGACAC 2940
TGGCCAAGGT TGAAAAGGAG AAACATGCCA CAGAGAACAA GGTGAAAAAC CTCACGGAAG 3000
AGATGGCAGG CCTTGATGAA AACATTGCAA AGCTGACCAA GGAGAAGAAG GCCCTCCAGG 3060
AGGCCCACCA GCAGACCCTG GATGACCTGC AGGCAGAAGA GGACAAAGTC AACACCCTGA 3120
CCAAAGCTAA AACCAAGCTA GAGCAGCAAG TGGATGACCT TGAAGGGTCC TTGGAGCAAG 3180
AAAAGAAACT TCGCATGGAC CTAGAGAGAG CCAAGAGGAA ACTGGAAGGT GACCTCAAGT 3240
TGGCACAAGA ATCCACAATG GATATAGAAA ATGACAAACA GCAACTTGAT GAGAAACTCA 3300
AAAAGAAGGA GTTTGAAATG AGCAATCTGC AAAGCAAGAT TGAAGATGAA CAGGCCCTTG 3360
CAATGCAGCT GCAGAAGAAG ATCAAGGAGT TACAGGCCCG TACTGAGGAG CTGGAGGAAG 3420
AGATCGAGGC AGAGCGGGCC TCCAGGGCCA AAGCAGAGAA GCAGCGCTCC GACCTCTCCC 3480
GGGAACTGGA GGAGATCAGC GAGAGGCTGG AAGAAGCTGG CGGGGCGACG TCAGCCCAGA 3540
TTGAGATGAA CAAGAAGCGC GAGGCTGAGT TCCAGAAGAT GCGCCGGGAC CTGGAGGAGG 3600
CCACCCTGCA GCACGAGGCC ACGGCAGCTG CTCTTAGGAA GAAGCACGCA GACAGCGTGG 3660
CCGAGCTGGG GGAGCAGATC GACAACCTGC AGAGGGTCAA GCAGAAGCTG GAGAAGGAGA 3720
AGAGCGAGCT GAAGATGGAA ATTGATGACC TTGCTAGCAA CATGGAGACC GTCTCCAAAG 3780
CCAAGGGAAA CCTGGAAAAA ATGTGCCGCA CACTGGAAGA CCAGCTCAGC GAAGTGAAGA 3840
CAAAGGAGGA GGAGCATCAG CGCCTAATCA ATGAACTGTC AGCCCAGAAG GCACGTTTAC 3900
AGACAGAATC AGGTGAATTT TCACGACAGC TAGATGAGAA GGAAGCTCTG GTGTCTCAGC 3960
TATCCCGAGG CAAACAAGCA TTTACACAAC AGATTGAGGA GTTAAAGAGG CAGCTAGAAG 4020
AGGAGACTAA GGCCAAGAGT GCCCTGGCCC ATGCTGTGCA GTCCTCCCGC CACGACTGTG 4080
ACCTGCTACG GGAACAGTAT GAGGAGGAGC AGGAAGCCAA GGCCGAACTG CAGAGGGCAA 4140
TGTCCAAGGC CAACAGCGAG GTTGCCCAGT GGAGGACCAA ATACGAGACG GACGCCATCC 4200
AGCGCACCGA GGAGCTGGAG GAGGCCAAGA AGAAGCTGGC CCAGCGTCTG CAGGATGCTG 4260
AGGAACACGT AGAAGCTGTG AATGCCAAGT GCGCCTCCCT TGAGAAGACC AAGCAGCGGC 4320
TCCAGAATGA GGTCGAGGAC CTCATGCTTG ATGTGGAGAG GTCCAATGCT GCCTGTGCGG 4380
CTCTGGATAA GAAGCAGAGG AACTTTGACA AGATCCTAGC AGAGTGGAAA CATAAGTATG 4440
AGGAAACTCA GGCTGAACTT GAGGCCTCCC AGAAGGAGTC CCGTTCTCTC AGCACTGAGC 4500
TGTTCAAGGT GAAGAATGCC TACGAGGAAT CCCTGGACCA ACTGGAAACT CTGAAGCGGG 4560
AGAATAAGAA CTTGCAGCAG GAGATTTCTG ACCTGACTGA GCAAATTGCA GAGGGAGGAA 4620
AGCATATCCA TGAATTGGAG AAAGTGAAGA AACAAATAGA GCAAGAGAAG AGTGAACTAC 4680
AGGCTGCCCT AGAGGAAGC AGAGGCATCT CTAGAACATG AAGAAGGCAA AATCCTTCGCA 4740
TCCAACTTGA GTTAAATCAG GTGAAATCTG AGATTGACCG TAAAATTGCT GAGAAAGATG 4800
AGGAAATCGA TCAGATGAAG AGGAACCACA TTAGAGTGGT AGAGTCCATG CAGAGCACGC 4860
TGGATGCTGA GATCAGGAGC AGGAATGATG CCCTGAGGAT CAAGAAGAAG ATGGAGGGAG 4920
ACCTCAATGA AATGGAAATC CAGCTGAACC ACGCCAACCG CCAAGCTACT GAGGCAATAA 4980
GGAATCTTAG AAACACACAA GGAGTACTGA AGGACACTCA GCTCCATTTG GATGATGCCA 5040
TCAGAGGCCA GGATGACCTT AAAGAACAAC TGGCCATGGT GGAACGCAGA GCCAACCTGA 5100
TGCAGGCTGA GATTGAAGAG CTGAGGGCAT CGCTGGAGCA GACAGAGAGG AGCAGGAGAG 5160
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CCAGCCTGAT CAACACCAAG AAGAAGCTGG AGACAGACAT CTCCCAAATC CAGGGAGAGA 5280
TGGAGGACAT TGTCCAGGAA GCTCGCAACG CAGAAGAGAA GGCCAAGAAG GCCATCACTG 5340
ATGCAGCCAT GATGGCCGAG GAGCTGAAGA AGGAGCAGGA CACCAGCGCC CACCTGGAGC 5400
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AGCTTGAAAA TGAGGTTGAA AATGAACAGA AGCGCAATGT TGAGGCTGTC AAGGGTCTTC 5580
GGAAACATGA GAGAAGAGTG AAGGAACTCA CTTACCAGAC TGAGGAGGAC CGAAAGAATG 5640
TTCTCAGGCT GCAGGACTTG GTGGACAAAC TACAATCCAA AGTTAAAGCT TACAAGAGAC 5700
AAGCGGAAGA GGCGGAGGAA CAATCCAACG TCAACCTCTC CAAGTTCCGC AAGCTCCAGC 5760
ACGAGCTGGA GGAGGCCGAG GAACGGGCTG ACATTGCCGA GTCCCAGGTC AACAAGCTGC 5820
GGGTCAAGAG TCGGGAGGTT CACACAAAAG TCATAAGTGA AGAGTAATTC ATCTAAATGC 5880
ACAAAAGTGA CCAAAGAAAT GCACAAAATG TGAAAATCTT TGTCACTGT 5929；
<210>3
<211> 1937
<212> PRT
<213>猪（Sus Scrofa）
<400> 3
MSSDQEMAIFGEAAPYLRKSEKERIEAQNKPFDAKTSVFVAEPKESFVKGTVQSREGGKVTVKTEAGATLTVKEDQVFPMNPPKFDKIEDMAMMTHLHEPAVLYNLKERYAAWMIYTYSGLFCVTVNPYKWLPVYNAEVVTAYRGKKRQEAPPHIFSISDNAYQFMLTDRENQSILITGESGAGKTVNTKRVIQYFATIAVTGEKKKEEPTPGKMQGTLEDQIISANPLLEAFGNAKTVRNDNSSRFGKFIRIHFGTTGKLASADIETYLLEKSRVTFQLKAERSYHIFYQIMSNKKPELIEMLLITTNPYDYAFVSQGEITVPSIDDQEELMATDSAIEILGFTSDERVSIYKLTGAVMHYGNLKFKQKQREEQAEPDGTEVADKAAYLQGLNSADLLKALCYPRVKVGNEFVTKGQTVQQVYNAVGALAKAVYDKMFLWMVTRINQQLDTKQPRQYFIGVLDIAGFEIFDFNSLEQLCINFTNEKLQQFFNHHMFVLEQEEYKKEGIEWEFIDFGMDLAACIELIEKPMGIFSILEEECMFPKATDTSFKNKLYEQHLGKSNNFQKPKPAKGKOEAHFSLIHYAGTVDYNITGWLDKNKDPLNETVVGLYQKSSVKTLAFLFAERQSSEEGGTKKGGKKKGSSFQTVSALFRENLNKLMTNLRSTHPHFVRCIIPNETKTPGAMEHELVLHQLRCNGVLEGIRICRKGFPSRILYADFKQRYKVLNASAIPEGQFIDSKKASEKLLGSIDIDHTQYKFGHTKVFFKAGLLGTLEEMRDEKLAQLITRTQAMCRGFLMRVEFRKMMERRESIFCIQYNIRAFMNVKHWPWMKLYFKIKPLLKSAETEKEMANMKEEFEKTKEDLAKSEAKRKELEEKMVALMQEKNDLQLQVQAEADGLADAEERCDQLIKTKIQLEAKIKEVTERAEDEEEINAELTAKKRKLEDECSELKKDIDDLELTLAKVEKEKHATENKVKNLTEEMAGLDENIAKLTKEKKALQEAHQQTLDDLQAEEDKVNTLTKAKTKLEQQVDDLEGSLEQEKKLRMDLERAKRKLEGDLKLAQESTMDIENDKQQLDEKLKKKEFEMSNLQSKIEDEQALAMQLQKKIKELQARTEELEEEIEAERASRAKAEKQRSDLSRELEEISERLEEAGGATSAQIEMNKKREAEFQKMRRDLEEATLQHEATAAALRKKHADSVAELGEQIDNLQRVKQKLEKEKSELKMEIDDLASNMETVSKAKGNLEKMCRTLEDQLSEVKTKEEEHQRLINELSAQKARLQTESGEFSRQLDEKEALVSQLSRGKQAFTQQIEELKRQLEEETKAKSALAHAVQSSRHDCDLLREQYEEEQEAKAELQRAMSKANSEVAQWRTKYETDAIQRTEELEEAKKKLAQRLQDAEEHVEAVNAKCASLEKTKQRLQNEVEDLMLDVERSNAACAALDKKQRNFDKILAEWKHKYEETQAELEASQKESRSLSTELFKVKNAYEESLDQLETLKRENKNLQQEISDLTEQIAEGGKHIHELEKVKKQIEQEKSELQAALEEAEASLEHEEGKILRIQLELNQVKSEIDRKIAEKDEEIDQMKRNHIRVVESMQSTLDAEIRSRNDALRIKKKMEGDLNEMEIQLNHANRQATEAIRNLRNTQGVLKDTQLHLDDAIRGQDDLKEQLAMVERRANLMQAEIEELRASLEQTERSRRVAEQELLDASERVQLLHTQNTSLINTKKKLETDISQIQGEMEDIVQEARNAEEKAKKAITDAAMMAEELKKEQDTSAHLERMKKNMEQTVKDLQHRLDEAEQLALKGGKKQIQKLEARVRELENEVENEQKRNVEAVKGLRKHERRVKELTYQTEEDRKNVLRLQDLVDKLQSKVKAYKRQAEEAEEQSNVNLSKFRKLQHELEEAEERADIAESQVNKLRVKSREVHTKVISEE；
<210> 4
<211> 23
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 4
CCTAGAAATGCTTTTGGTAAGTG；
<210> 5
<211> 23
<212> DNA
<213>人工序列
<400> 5
TCAGAGTTGGATTTTCCTATGCC；
<210> 6
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223>L001-FP
<400> 6
TGCTACAGGAATCAGAAAGGAAACAAC；
<210> 7
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L001-RP
<400> 7
AGGCTCAAGGGTAAAAGGTTAGGAAAG；
<210> 8
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L003-FP
<400> 8
TGGAGAAGGAGAAGAGTGAGATGAAGA；
<210> 9
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223>L003-RP
<400> 9
AGAGCAGAGAAGAAGGCAAGGATAAAA；
<210> 10
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L004-FP
<400> 10
GTTGACCTGATTTTGTTGTTGTCTTCC；
<210> 11
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223>L004-RP
<400> 11
ACCTTGCCTCTCTCTTGGTTTATTCAC；
<210> 12
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223>L006-FP
<400> 12
GCACCTTTTATTCACTCAGCATCTCTC；
<210> 13
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223>L006-RP
<400> 13
ACTGGTATCTCTTTCGCCATCTGTTCT；
<210> 14
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223>L011-FP
<400> 14
GTGTGGAGAAGGGATTTAGAAGTGTGA；
<210> 15
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L011-RP
<400> 15
TTATGTTGTCTTTCAGTAGCAGCACCA；
<210> 16
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L013-FP
<400> 16
GAAGAAGGTTGTCTGAGGGAGGATAAA；
<210> 17
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L013-RP
<400> 17
AGAAGGAAAAGGCTGGAAGTAAAAAGC；
<210> 18
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L014-FP
<400> 18
CTTCCTCTCCCAGTCTCTTTGTTCTTC；
<210> 19
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L014-RP
<400> 19
TTGGCTGTTCCTATGTTCTTGCTGTAT；
<210> 20
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L016-FP
<400> 20
GTGCTCGTCTTTTTCTTCTGACAACAT；
<210> 21
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L016-RP
<400> 21
AGCGTGGTTCTATTTCCCCATACTAAA；
<210> 22
<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L017-FP
<400> 22
CTTCTTGGTGTCTTGCCTTGAACTTT；
<210> 23
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L017-RP
<400> 23
GCTCTCTGTCTTTTGTGCTTACTCTGC；
<210> 24
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L019-FP
<400> 24
ATGGTGGTGGAAGAAGAGGATAAATGT；
<210> 25
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L019-RP
<400> 25
AGAGAGAGAAAGCGAAAGAAAGGTCAG；
<210> 26
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L020-FP
<400> 26
CATTTCTTGTTCCCAGGTGATGTTTAC；
<210> 27
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L020-RP
<400> 27
GACAGTTTCTCAGGTTTTCCTTGCTTT；
<210> 28
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L021-FP
<400> 28
CTCCTTCCTTCCATTGTGTCTTTCTTT；
<210> 29
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L021-RP
<400> 29
TTATTCTCAAATCCTCCCCGACTCTAA；
<210> 30
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L023-FP
<400> 30
TACAGAAGCAGGTCACAAAGGTAGGAA；
<210> 31
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L023-RP
<400> 31
ACTGGGGTAGGAAGGGACATTATTTTT；
<210> 32
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L024-FP
<400> 32
GTCAGAAGTAAAGGCAGGATGTGTTTG；
<210> 33
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L024-RP
<400> 33
TGGAGGTGGTAAGAAGTTAGTGGGAAA；
<210> 34
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L025-FP
<400> 34
ACTCTCTCTGGGGTTCTTTTGTTTTTG；
<210> 35
<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L025-RP
<400> 35
GCTCTCCTCACACTTTGTTTTCCACT；
<210> 36
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L028-FP
<400> 36
AGTGTGGAAGGTGAACTAAACAGGTGA；
<210> 37
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L028-RP
<400> 37
ACATAACAAGCAACAATGAAGGGTAGC；
<210> 38
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L030-FP
<400> 38
GTGCCTTCTGTGTGGTTATGGAGATAC；
<210> 39
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L030-RP
<400> 39
ACCTAATGCTTGCTGAGTGAATGAAAG；
<210> 40
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L031-FP
<400> 40
AACACTGGAATAAAGAAAGCAGCACAC；
<210> 41
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L031-RP
<400> 41
GGGGAGGCATAAATAACAATAACAGGA；
<210> 42
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L034-FP
<400> 42
TAACACTCACACAGACCCCTAACCAGT；
<210> 43
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L034-RP
<400> 43
GCATACGATACAATGGAAAACCTAACG；
<210> 44
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L038-FP
<400> 44
TGGAGAAGGAGAAGAGTGAGATGAAGA；
<210> 45
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L038-RP
<400> 45
ACTAATGAAGCAAGTGAGAGCCAAAGA；
<210> 46
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L043-FP
<400> 46
GGGAATGGAGATACGAAATAGGAACAC；
<210> 47
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L043-RP
<400> 47
GAGCCAGAAAGACAAAGACAAATACCA；
<210> 48
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L044-FP
<400> 48
AGTGGGAACTCAGCATTTTTGACCTAT；
<210> 49
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L044-RP
<400> 49
CTGGGGTTGTCTCTCTCTCTCTCTTTT；
<210> 50
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L045-FP
<400> 50
GCTTACCTCTGTTTACCCCATTTTCTG；
<210> 51
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L045-RP
<400> 51
CACTCATCTCTGCCTTTTCTCACAAGT；
<210> 52
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L046-FP
<400> 52
CTGAAGGTGCCAGATAGAGTGGTTAGA；
<210> 53
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L046-RP
<400> 53
AATCAACAAAAGGGGAGGGTTTAGAAG；
<210> 54
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L047-FP
<400> 54
GTCTTTCTCCGTCTGGGTTATTCACTT；
<210> 55
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L047-RP
<400> 55
GGGTCACTTTCATTGCTCACATTCTAT；
<210> 56
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L048-FP
<400> 56
TCTGCTCCCATCCTTTCTTCTATCTCT；
<210> 57
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L048-RP
<400> 57
GCTTTGCTCTAACTCTTCCCTGCTAAT；
<210> 58
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L049-FP
<400> 58
TTAGAATCCACTTTGGCACTACAGGAA；
<210> 59
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L049-RP
<400> 59
ACATTTTGTCTCTGCTTTACTCACTGG；
<210> 60
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L050-FP
<400> 60
GAGCACACAAATAAGCAAATAGGCAAG；
<210> 61
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L050-RP
<400> 61
CCACTTTTAGGAGATGAGAGGAGAGGA；
<210> 62
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L051-FP
<400> 62
TAGAAGAGGTGAGACAGGAGCACAGAT；
<210> 63
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L051-RP
<400> 63
AGAGTTTTTGTAGGAGGGAGAGGAACA；
<210> 64
<211> 25
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L053-FP
<400> 64
ACAGAGGGAGAGGCACTAAAACACC；
<210> 65
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L053-RP
<400> 65
CTTGCTGAGGTTGGGAAAGAGAGATAG；
<210> 66
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L055-FP
<400> 66
CTAAAGACAAACCACAGTTGGGATGAG；
<210> 67
<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L055-RP
<400> 67
GAGAGGGTGAGGAGAGAGAGAGGAGT；
<210> 68
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L056-FP
<400> 68
AGTTACACGAAAACATAAGGGCTGGAT；
<210> 69
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L056-RP
<400> 69
AGAGGAACAGACAGAGGGAGGAAGAGT；
<210> 70
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L058-FP
<400> 70
CAGAGGTATTCACAGGCATAAGACAGG；
<210> 71
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L058-RP
<400> 71
GGGGAGAACATCAAAGAAGCAGAGTAT；
<210> 72
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L059-FP
<400> 72
ATGCCTTTTCTTCAGTCTCTGTGTGTT；
<210> 73
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L059-RP
<400> 73
CATCTGTGTCCTTTGTCTGGTCCTTTA；
<210> 74
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L060-FP
<400> 74
GAAGTCGGTTTATCCTTTTCCTACAGC；
<210> 75
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L060-RP
<400> 75
AGTGGTGGTGGCTCTTATTTTCATCTC；
<210> 76
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L065-FP
<400> 76
GTCCAATCAACCCAAGTCTCACCTCTT；
<210> 77
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L065-RP
<400> 77
ATCTACTAACCCCCAACTCCCAAACCT；
<210> 78
<211> 28
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L069-FP
<400> 78
AACTCGTAGAAGCGAAGAGCAAAATGGT；
<210> 79
<211> 28
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L069-RP
<400> 79
TCACATAACAAGGAATCTGGAGGTAGGC；
<210> 80
<211> 28
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L070-FP
<400> 80
AGGATACAGGGAATCAAAGGGTTTAGCA；
<210> 81
<211> 28
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L070-RP
<400> 81
GGAGACACACGAAGAGACAGAAGACAAA；
<210> 82
<211> 25
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L071-FP
<400> 82
ACGCCAACTAAAGGTCAAAAGCAAG；
<210> 83
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L071-RP
<400> 83
AGAAGAGAAGGCTGATTACAAGGGAAG；
<210> 84
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L073-FP
<400> 84
TAGCCTCGCACCATCCTACAGATAAGT；
<210> 85
<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L073-RP
<400> 85
GACAATACCCATTTCACCCTTGCTTT；
<210> 86
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L075-FP
<400> 86
GCACCTAAAATCCTTTGGCTATGGTTA；
<210> 87
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L075-RP
<400> 87
GGGCTTCACTGCTCTACCTACACCTAC；
<210> 88
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L077-FP
<400> 88
AGACTACCTTGACTGCTCCCACTACAA；
<210> 89
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L077-RP
<400> 89
GCTACTGTCCCTTTCTTTTGGTCCTTT；
<210> 90
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L078-FP
<400> 90
TGACTTGCTCTATGCTTTCTGCCTTTA；
<210> 91
<211> 25
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L078-RP
<400> 91
CTGAATCTAACCTCCCTGGTGTCTG；
<210> 92
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L080-FP
<400> 92
ATGAACTCTGAACTTTGACCTTTGTGG；
<210> 93
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L080-RP
<400> 93
GTTGTTACTGTTTTGGGGCTTTTATGG；
<210> 94
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L082-FP
<400> 94
TGTGATGATAGATTGAGGCTACTGCTG；
<210> 95
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L082-RP
<400> 95
CCACTTTTAGGAGATGAGAGGAGAGGA；
<210> 96
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L084-FP
<400> 96
GGCGATTTCCCTCTCAACTATCTCTTT；
<210> 97
<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L084-RP
<400> 97
TCCTGAATAATGTCCTCCATCTCTCC；
<210> 98
<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L086-FP
<400> 98
GTAATGGGCTGACTCCTTTTGTTTTG；
<210> 99
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L086-RP
<400> 99
TACTTGTGTCCCTCTTCCACCTCCTAC；
<210> 100
<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L087-FP
<400> 100
ATGTTCTCCTGGTGCCTGCTCTAAAT；
<210> 101
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L087-RP
<400> 101
GTGTGAAGGGGTATCTCATTGTGGTTT；
<210> 102
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L088-FP
<400> 102
TTGGCTTGTGCTGTAGTTTTCTTCTTC；
<210> 103
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L088-RP
<400> 103
ATGGTTCTTCTTCTGGTTTTCCTTGAG；
<210> 104
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L089-FP
<400> 104
AAAGGTGGGAAGGAGGTAAGTATGGTT；
<210> 105
<211> 25
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L089-RP
<400> 105
AATCAGCGTAGGTCAGTGGTTTTCA；
<210> 106
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L090-FP
<400> 106
TTTTCTCTCTCCTTATCCTTTCCATCG；
<210> 107
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L090-RP
<400> 107
GCCCATTCTTATTCCACTTTATGTCTG；
<210> 108
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L091-FP
<400> 108
TGCTATTCACTCTTCCCTAAATCTCCA；
<210> 109
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L091-RP
<400> 109
CCTTTGTCCTTATCAATCCGTCTTCTT；
<210> 110
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L092-FP
<400> 110
CACTAACACCTACTGAAATGGCGAAAA；
<210> 111
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L092-RP
<400> 111
ACCAGACCACCAGAGAACTACCAGATT；
<210> 112
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L093-FP
<400> 112
TAGGGCAAAGGACACATAAACTGAAAG；
<210> 113
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L093-RP
<400> 113
AGGAAGGAAAGACACAGGAAAATAAGG；
<210> 114
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L094-FP
<400> 114
AGAAGGAGGGAAAGTGACAGTGAAGAC；
<210> 115
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L094-RP
<400> 115
TCAACAGAGGAATGGATAAAGATGTGG；
<210> 116
<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L095-FP
<400> 116
GAACAGTCATCATCTCCCAGCAAGTA；
<210> 117
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L095-RP
<400> 117
AGTCTTTGTCCCCATTACCAGTGTCTT；
<210> 118
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L096-FP
<400> 118
CTACCTACTTCCATCCCCTGCTAATGT；
<210> 119
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L096-RP
<400> 119
TCTGCTTCCATACCTCTTTTTCCACTT；
<210> 120
<211> 27
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L097-FP
<400> 120
GGCATCCTTGTCTTTTTCCAGATTTAG；
<210> 121
<211> 26
<212> DNA
<213>人工序列
<223> L097-RP
<400> 121
GCTCACAGTCCATCCTCTTACCAGTC。
Claims (15)
1.一种猪的SNP标记，所述SNP标记为如下SNP标记中的至少一种：
(I)SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点的核苷酸Y，所述Y选自C或T；SEQ IDNo.1上的从5’端起的第11031位点对应于10.2版本国际猪基因组的12号染色体上的从5’端起的第58244116位点；
(II)SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点的核苷酸Y，所述Y选自C或T；SEQ IDNo.2上的从5’端起的第1780位点对应于10.2版本国际猪基因组的12号染色体上的从5’端起的第58244116位点。
2.如权利要求1所述的SNP标记在测定和/或遗传改良猪肉质性状中的应用，所述猪肉质性状包括肌内脂肪含量、大理石纹、肌肉红度、肌肉黄度、肌肉亮度、肌肉纤维类型和水分含量中的至少一种。
3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，遗传改良猪肉质性状的种猪选自莱芜猪、二花脸、梅山猪、陆川猪、民猪、米猪、淮猪、河套大耳猪、玉山黑猪、滇南小耳猪、马身猪、藏猪、八眉猪、蓝塘猪中的至少一种。
4.一种猪的遗传改良的方法，所述方法包括：确定种猪核心群中的种猪的如权利要求1所述的SNP标记，并根据所述SNP标记做出相应的选择：
对于(I)，在所述种猪核心群中选择在所述SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点为TT和TC基因型的种猪个体，淘汰在该位点为CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；
对于(II)，在所述种猪核心群中选择在所述SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点为TT和TC基因型的种猪个体，淘汰在该位点为CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；
对于(III)，在所述种猪核心群中选择在所述SNP标记位点与前述(I)和/或(II)具有一致基因型的种猪个体，淘汰在该位点与前述(I)和/或(II)不具有一致基因型的种猪个体。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，对于(I)，在所述种猪核心群中选择在在所述SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点为TT基因型的种猪个体，淘汰在该位点为TC和CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率；
对于(II)，在所述种猪核心群中选择在所述SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点为TT基因型的种猪个体，淘汰在该位点为TC和CC基因型的种猪个体，以逐代提高该位点的等位基因T的频率。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，利用分析所述种猪的核酸序列来确定所述种猪的如权利要求1所述的SNP标记，其中所述核酸序列选自包含如权利要求1所述的SNP标记的核酸序列，所述核酸序列选自DNA序列、cDNA序列和RNA序列中的至少一种；和/或
利用分析所述种猪的氨基酸序列来确定所述种猪的如权利要求1所述的SNP标记，其中所述氨基酸序列选自由包含如权利要求1所述SNP标记的核酸序列编码得到，与所述SNP标记相对应的氨基酸O，所述O选自丙氨酸或缬氨酸；且当所述SNP标记为T时，其对应的氨基酸为缬氨酸；当所述SNP标记为C时，其对应的氨基酸为丙氨酸。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，利用分析所述种猪的核酸序列来确定所述种猪的如权利要求1所述的SNP标记时，所述核酸序列选自SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，利用分析所述种猪的氨基酸序列来确定所述种猪的如权利要求1所述的SNP标记时，所述核酸序列为能够在所述猪中翻译为如SEQ IDNo.3所示的氨基酸序列；其中，在如SEQ ID No.3所示的氨基酸序列，氨基酸O位于第576位。
9.一种确定猪肉质性状优劣的方法，所述方法包括：确定所述猪的如权利要求1所述的SNP标记，并根据所述SNP标记确定所述猪肉质性状：
对于(I)，所述猪肉质性状从优到劣，以所述SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点的基因型排序依次为：TT基因型、TC基因型和CC基因型；
对于(II)，所述猪肉质性状从优到劣，以所述SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点的基因型排序依次为：TT基因型、TC基因型和CC基因型；
对于(III)，所述猪肉质性状从优到劣，所述SNP基因型排序与(I)和/或(II)中的基因型具有一致性；
所述猪肉质性状包括肌内脂肪含量、大理石纹、肌肉红度、肌肉黄度、肌肉亮度、肌肉纤维类型和水分含量中的至少一种，且肌内脂肪含量更高者为优，大理石纹评分更高者为优，肌肉红度数值更高者为优，肌肉黄度数值更高者为优，肌肉亮度数值更高者为优；I型和/或IIa型肌纤维类型更多者为优；水分含量更低者为优。
10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，利用分析所述猪的核酸序列来确定所述猪的如权利要求1所述的SNP标记，其中所述核酸序列选自包含如权利要求1所述的SNP标记的核酸序列，所述核酸序列选自DNA序列、cDNA序列和RNA序列中的至少一种。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述核酸序列选自SEQ ID No.1和/或SEQ ID No.2。
12.一种改善猪肉品质的猪新品系和/或猪新品种建立的方法，其包括如下步骤：对于如权利要求1所述SNP标记的基因型为CC或TC的猪，通过定点突变将其中的CC基因型或TC基因型突变为TT基因型。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，对于(I)，将SEQ ID No.1上的从5’端起的第11031位点的核苷酸C突变为T；
对于(II)，将SEQ ID No.2上的从5’端起的第1780位点的核苷酸C突变为T；
对于(III)，将所述SNP标记位点的核苷酸突变为与前述(I)和/或(II)中的核苷酸突变具有一致性的核苷酸。
14.根据权利要求12或13所述的方法，其特征在于，利用转基因的方法或基因编辑的方法进行突变。
15.根据权利要求14所述的方法，其特征在于，利用CRISPR/Cas9的基因编辑方法进行突变。
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